一种从贝类血液中提取贝类DNA的方法

技术领域

本发明涉及DNA提取领域，具体为一种从贝类血液中提取贝类DNA的方法。

背景技术

贝类养殖业在供应优质蛋白质、提高渔民收入、改善近海环境等方面发挥了重要的作用。与此同时贝类养殖也面临着资源衰竭的问题，越来越多的学者通过分子生物学技术获取贝类DNA并研究其遗传信息，用分子辅助育种的方法达到改善贝类品质，选育贝类抗逆新品的目的，解决贝类资源枯竭的问题。但是，传统的取样方法多集中于伤害性取样或非伤害性取样，如直接解剖、用扩口器开壳等，对贝类造成较强的机械损伤甚至致死，不利于贝类后期保种、遗传育种及贝类资源的保护尤其是对濒危珍稀贝类。为此一种从贝类血液中提取贝类DNA的方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的缺陷，提供一种从贝类血液中提取贝类DNA的方法，以解决上述背景技术提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种从贝类血液中提取贝类DNA的方法，具体步骤如下：

步骤一：采集贝类血液及前处理；在贝类厚闭壳肌处开一小孔，用一次性无菌注射器抽取贝类血液；将采集的血液移至1.5mL离心管，混匀离心后取上清液。

步骤二：DNA提取；

S21：将步骤一中提取的血液放入1.5mL离心管中，加入600μL裂解液和10μL蛋白酶K，取2个15mL离心管，每个分别加入10mL裂解液和10μL蛋白酶K，用枪头混匀，每个样品加610混合液，放入55℃消化一夜；

S22：将氯仿和苯酚分别加入2个10mL大离心管里，每个样品分别加入300μL苯酚和氯仿；

S23：来回颠倒混匀，离心后紧贴液面吸取上清液500μL，加入1mL无水乙醇进行沉淀；

S24：将样品充分混匀，发现有絮状物后进行离心；

S25：倒掉废液，加500μL 70％酒精，来回颠倒混匀，离心后倒掉废液，开盖晾干10min，室温溶解。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤一中的小孔直径为0.3-0.4mm。

作为本发明的一种优选技术方案，所述步骤一中离心转速为800r/min；时间为3min。

作为本发明的一种优选技术方案，所述S23和S24中的离心转速均为1200r/min；时间为10min。

作为本发明的一种优选技术方案，所述S25中的离心转速为1200r/min；时间为5min。

本发明的有益效果是：本发明主要为解决贝类育种过程中由于养殖条件或其他问题造成的贝类亲本死亡从而丢失样本的问题；传统方法提取贝类DNA需进行破坏性取样，使得对同一个贝类只能在其一个生长阶段进行取样，本发明可以对贝类在不同生长阶段进行血液样本的抽取，可以在不同阶段提取DNA，在贝类全基因选择育种等方面具有重要的研究意义和实用价值。

本发明与传统方法相比，实验材料更易获得，且可以多次重复取血(取安全抽血量不会影响贝类之后的生长发育)；与传统用动物组织取样相比减少了磨样的过程，使得提取DNA的效率大大提升，可以提升约40％；用血液提取DNA可以保障动物，不需要进行破坏性取样。

附图说明

图1为本发明方法的流程图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易被本领域人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。

实施例：请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种从贝类血液中提取贝类DNA的方法，具体步骤如下：

步骤一：采集贝类血液及前处理；在贝类厚闭壳肌处开一0.3-0.4mm小孔，用一次性无菌注射器抽取贝类血液；将采集的血液移至1.5mL离心管，混匀后800r/min离心3min，取上清液；

步骤二：DNA提取；

S21：将步骤一中提取的血液放入1.5mL离心管中，加入600μL裂解液和10μL蛋白酶K，取2个15mL离心管，每个分别加入10mL裂解液和10μL蛋白酶K，用枪头混匀，每个样品加610混合液，放入55℃消化一夜；

S22：将氯仿和苯酚分别加入2个10mL大离心管里，每个样品分别加入300μL苯酚和氯仿；

S23：来回颠倒混匀，1200r/min离心10min；紧贴液面吸取上清液500μL，加入1mL无水乙醇进行沉淀；

S24：将样品充分混匀，发现有絮状物，1200r/min离心10min；

S25：倒掉废液，加500μL 70％酒精，来回颠倒混匀，1200r/min离心5min倒掉废液，开盖晾干10min；室温溶解。

本发明主要为解决贝类育种过程中由于养殖条件或其他问题造成的贝类亲本死亡从而丢失样本的问题；传统方法提取贝类DNA需进行破坏性取样，使得对同一个贝类只能在其一个生长阶段进行取样，本发明可以对贝类在不同生长阶段进行血液样本的抽取，可以在不同阶段提取DNA，在贝类全基因选择育种等方面具有重要的研究意义和实用价值。

本发明与传统方法相比，实验材料更易获得，且可以多次重复取血(取安全抽血量不会影响贝类之后的生长发育)；与传统用动物组织取样相比减少了磨样的过程，使得提取DNA的效率大大提升，可以提升约40％；用血液提取DNA可以保障动物，不需要进行破坏性取样。

上实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。