钙蛋白酶调节剂及其治疗用途
文献发布时间：2023-06-19 09:29:07
技术领域
本发明涉及化学和医学领域。更具体地，本发明涉及作为小分子钙蛋白酶调节剂的非大环α-酮酰胺化合物、组合物、其制备方法及其作为治疗剂的用途。
背景技术
在发达国家，纤维化疾病估计占死亡人数的45％，但这些疾病的治疗方法的开发仍处于初期阶段。目前针对纤维化疾病，例如特发性肺纤维化、肾纤维化、系统性硬化和肝硬化的治疗物数量很少，并且仅缓解纤维化的一些症状，但却不能治疗根本原因。
尽管目前对引起这些病况的不同病因学理解有限，但在纤维化疾病中受影响的器官的表型具有相似性，这强烈支持存在共同的致病途径。目前，人们认识到纤维化疾病的主要驱动因素是高转化生长因子-β(TGFβ)信号传导途径，其可以促进正常功能细胞向纤维化促进细胞的转化。这些转化后的细胞被称为“肌成纤维细胞”，它们可以分泌大量的细胞外基质蛋白和基质降解酶，导致瘢痕组织的形成和最终的器官衰竭。该细胞过程是转化性的并且被称为“肌成纤维细胞分化”(其包括上皮-间质转化(EpMT)及其变形，如内皮-间质转化(EnMT)和成纤维细胞-肌成纤维细胞转化(FMT))。该过程是治疗纤维化疾病的主要靶标。还显示肌成纤维细胞分化发生在长期暴露于高TGFβ的癌细胞内，导致静止的上皮细胞变得有活动性、侵袭性和转移性。因此，在癌症的背景下，已经证明该信号传导与耐药性的获得、免疫系统逃避和干细胞特性的发展相关联。
尽管肌成纤维细胞分化抑制药物有巨大的潜力并且为开发有效治疗进行了众多尝试，但迄今为止收集的数据尚未转化为实际治疗。这部分是由于缺乏理想的靶蛋白。靶向肌成纤维细胞分化过程的初始策略集中于通过各种方法近端抑制TGFβ信号传导途径，这些方法包括靶向配体激活剂(例如α-v整联蛋白)、配体-受体相互作用(例如，使用中和抗体)或TGFβ受体激酶活性(例如，阻断信号转导的小分子化合物药物)。不幸的是，TGFβ是具有许多生理功能的多效细胞因子，使得TGFβ信号传导的整体抑制也与严重的副作用相关。另外，目前的数据表明，这种近端抑制可能易受病理解决方案策略的影响(即，由于冗余或补偿)，这将限制这些药物的效用。进一步复杂化的问题是，在癌症中，TGFβ信号传导在早期作为抗肿瘤生长抑制剂起作用，但随后变成肿瘤促进剂，并且是如此强烈需要选择性抑制信号传导的致病因子的另一个原因。鉴于这些固有的局限性，目前的治疗策略已经重新关注TGFβ信号传导中关键远端事件的识别和抑制，这理论上优先靶向TGFβ信号传导的病理功能，而非生理功能。
发明内容
一种化合物，其具有式(I)的结构：
或其药学上可接受的盐，其中：
A
A
A
当A
A
A
A
A
当A
A
R独立地选自–H、卤素、任选取代的C
R
R
每个n独立地选择为0至3的整数。
本文公开的其他实施方案包括一种药物组合物，其包含治疗有效量的本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂。
本文公开的其他实施方案包括一种治疗至少部分地由CAPN1、CAPN2或CAP9或其组合的生理作用介导的疾病和病况的方法，其包括向有此需要的受试者施用本文公开的化合物。
在一些实施方案中，本文公开的化合物是以下之一的特异性抑制剂：CAPN1、CAPN2或CAPN9。
在一些实施方案中，本文公开的化合物是以下之一的选择性抑制剂：CAPN1、CAPN2或CAPN9。
在一些实施方案中，本文公开的化合物是以下之一的选择性抑制剂：CAPN1和CAPN2，或CAPN1和CAPN9，或CAPN2和CAPN9。
在一些实施方案中，本文公开的化合物是CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的有效抑制剂。
在一些实施方案中，本文公开的非大环α-酮酰胺化合物在治疗由纤维化或炎症引起的一系列病况，并且特别包括与肌成纤维细胞分化相关的那些病况中广泛有效。因此，本文公开的化合物是用于多种疾病或病况的活性治疗剂，所述疾病或病况包括或产生包括但不限于以下的症状：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病或病症。在其他实施方案中，本文公开的化合物可用于代谢和反应动力学研究、检测和成像技术以及放射性治疗。
在一些实施方案中，本文公开的化合物用于治疗疾病或病况或在受试者中产生包括但不限于以下症状的疾病或病况：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病。
在某些实施方案中，提供了用于减轻或改善至少部分地受钙蛋白酶1(CAPN1)、钙蛋白酶2(CAPN2)和/或钙蛋白酶9(CAPN9)的酶活性影响，或至少部分地由CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的酶活性介导的病况或病症的方法，其中所述病况包括或产生的症状包括：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和/或类风湿性关节炎。
在一些实施方案中，本发明的方法、化合物和/或组合物用于预防性治疗。
在一些实施方案中，抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的化合物在人类疾病的动物模型中显示功效。具体地，用本文公开的化合物对小鼠、兔和其它哺乳动物受试者进行体内治疗确定了这些化合物作为治疗剂来调节人体中的CAPN1、CAPN2和/或CAPN9活性，从而改善相应的医学病况的用途。
一些实施方案提供了用来抑制肌成纤维细胞分化的化合物、药物组合物和方法。一些实施方案提供了用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9或这些酶活性的组合(例如CAPN1和CAPN2，或CAPN1和CAPN9，或CAPN2和CAPN9)的化合物、药物组合物和方法。一些实施方案提供了通过抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9或这些酶活性的组合来治疗疾病和病症的方法。
具体实施方式
在一些实施方案中，提供了非大环α-酮酰胺的化合物，其充当钙蛋白酶调节剂。这些化合物的各种实施方案包括具有如上所述的式I结构的化合物或其药学上可接受的盐。式I的结构涵盖所有立体异构体和外消旋混合物，包括以下结构及其混合物：
在式(I)化合物的一些实施方案中：
A
A
A
A
A
R独立地选自–H、卤素、任选取代的C
R
式(I)化合物的一些实施方案包括如下化合物，其中当A
式(I)化合物的一些实施方案包括如下化合物，其中当A
式(I)的化合物的一些实施方案包括具有式(I-a)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A、B和D各自独立地选自由以下组成的组：C(R
在式(I-a)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；A、B和D独立地选自由以下组成的组：CH和N。在一些实施方案中，A是N，B是CH，并且D是CH。在一些实施方案中，A是CH，B是N，并且D是CH。在一些实施方案中，A是N，B是N，并且D是N。
式(I)的化合物的一些实施方案包括具有式(I-b)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
A、B和D各自独立地选自由以下组成的组：C(R
在式(I-b)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；A、B和D独立地选自由以下组成的组：CH和N。
式(I)的化合物的一些实施方案包括具有式(I-c)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
Y选自由以下组成的组：NR
在式(I-c)的化合物的一些实施方案中，Z是N，Y是NR
在式(I-c)的化合物的一些实施方案中，R
在式(I-c)的化合物的一些实施方案中，Z是N，Y是O，并且X是C(R
在式(I-c)的化合物的一些实施方案中，Z是C(R
在式(I-c)的化合物的一些实施方案中，Z是N，Y是S，并且X是N。在式(I-c)的化合物的一些实施方案中，Z是N，Y是O，并且X是N。
式(I)的化合物的一些实施方案包括具有式(I-d)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
Y选自由以下组成的组：NR
在式(I-d)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；X和Z独立地选自由以下组成的组：CH和N。在式(I-d)的化合物的一些实施方案中，Y是NR
式(I)的化合物的一些实施方案包括具有式(I-e)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
Y选自由以下组成的组：NR
在式(I-e)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；X和Z独立地选自由以下组成的组：CH和N。在式(I-e)的化合物的一些实施方案中，X是CH，Z是N，并且Y是NR
在式(I-e)的化合物的一些实施方案中，X是N，Z是C(R
在式(I-e)的化合物的一些实施方案中，其中R
在式(I-e)的化合物的一些实施方案中，X是N，Z是C(R
在式(II)的化合物的一些实施方案中，
或其药学上可接受的盐，其中：
A
A
A
当A
Y选自由以下组成的组：NR
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R
R
R
-C(F)＝CHCH
R
每个R、R
R
每个n独立地选择为0至3的整数；并且其中化合物不选自由以下组成的组：
在式(II)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；Z是N，Y是NR
在式(II)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(II)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(II)的化合物的一些实施方案中，R
在式(III)的化合物的一些实施方案中，
或其药学上可接受的盐，其中：
A
A
A
当A
Y选自由以下组成的组：NR
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R
R
R
-C(F)＝CHCH
R
每个R、R
R
每个n独立地选择为0至3的整数；并且其中化合物不选自由以下组成的组：
在式(III)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；Z是N，Y是NR
在式(III)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(III)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(III)的化合物的一些实施方案中，R
在式(IV)的化合物的一些实施方案中：
或其药学上可接受的盐，其中：
A
A
A
当A
Y选自由以下组成的组：NR
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R
R
R
-C(F)＝CHCH
R
每个R、R
R
每个n独立地选择为0至3的整数。
在式(IV)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；X和Z独立地选自由以下组成的组：C(R
在式(IV)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(IV)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(IV)的化合物的一些实施方案中，R
在式(V)的化合物的一些实施方案中：
或其药学上可接受的盐，其中：
A
A
A
当A
Y选自由以下组成的组：NR
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R
J选自由以下组成的组：O和S；
每个R
R
R
-C(F)＝CHCH
R
每个R、R
R
每个n独立地选择为0至3的整数。
在式(V)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；X和Z独立地选自由以下组成的组：C(R
在式(V)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(V)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；R
在式(V)的化合物的一些实施方案中，R
在式(VI)的化合物的一些实施方案中：
或其药学上可接受的盐，其中：
A
A
A
当A
A
A
A
A
A
当A
R
每个R、R
R
式(VI)的化合物的一些实施方案包括具有式(VI-a)的结构的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
Y选自由以下组成的组：NR
X和Z各自独立地选自由以下组成的组：C(R
每个R
R
在式(VI-a)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；Z是N，Y是NR
在式(VI-a)的化合物的一些实施方案中，R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的化合物或其药学上可接受的盐的一些实施方案中；A
并且A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(V)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(V)和(VI-a)的一些实施方案中，其中A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中A
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，其中R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，R
在式(I)、(I-a)、(I-b)、(I-c)、(I-d)、(I-e)、(II)、(III)、(IV)、(V)、(VI)和(VI-a)的一些实施方案中，R
在式(I)的一些实施方案中，A
在式(I)的一些实施方案中，A
一些实施方案包括选自以下的化合物：化合物38、40、41、42、60、64、65、67、72、74、106、107、108及其药学上可接受的盐，如本文所述的化合物。
一些实施方案包括选自以下的化合物：化合物15、19-21、23-24、26、28、36、46、52、55、57、79及其药学上可接受的盐，如本文所述的化合物。
一些实施方案包括选自以下的化合物：化合物78、81、84、90、92、98及其药学上可接受的盐，如本文所述的化合物。
一些实施方案包括选自以下的化合物：化合物109、110、111、113及其药学上可接受的盐，如本文所述的化合物。
一些实施方案包括选自以下的化合物：化合物1-14、16-18、22、25、27、29-35、37、39、45、47-51、53-54、58-59、61-63、68-71、73、75-77、80、82-83、85-88、89、91、93-97、99-104、112、112、115及其药学上可接受的盐。各种实施方案包括上述化合物的S-对映异构体、R-对映异构体或外消旋物。
适用于本文所述并可通过使用本文所述方法制备的其他化合物列于表1中。
表1
当本文公开的化合物具有至少一个手性中心时，它们可以作为单独的对映异构体和非对映异构体存在，或作为这些异构体的混合物存在，包括外消旋体。通过应用本领域技术人员熟知的各种方法来完成单个异构体的分离或单个异构体的选择性合成。除非另有说明，否则所有这些异构体及其混合物都包括在本文公开的化合物的范围内。此外，本文公开的化合物可以以一种或多种结晶或无定形形式存在。除非另有说明，否则所有这些形式都包括在本文公开的化合物的范围内，包括任意多晶型。此外，本文公开的一些化合物可与水形成溶剂化物(即水合物)或与普通有机溶剂形成溶剂化物。除非另有说明，否则这些溶剂化物包括在本文公开的化合物的范围内。
本领域技术人员将认识到，本文所描述的一些结构可以是化合物的共振形式或互变异构体，其可以由其他化学结构相称地表示，即使在动力学上也是如此；技术人员认识到这些结构可能仅代表这种(些)化合物样品的很小一部分。这些化合物被认为在所描述的结构的范围内，尽管这种共振形式或互变异构体在本文中未表示。
同位素可存在于所述化合物中。化合物结构中表示的每种化学元素均可包括所述元素的任意同位素。同位素可以是碳、氯、氟、氢、碘、氮、氧、磷、硫和锝的同位素，包括
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。所有专利、申请、公开申请和其他公开均通过引用整体并入。当本文中术语存在多个定义时，除非另有说明，否则以本节中的定义为准。
“前药”是指在体内转化为母体药物的药剂。前药通常是有用的，因为在某些情况下，它们可能比母体药物更容易施用。例如，它们可以通过口服施用而生物利用，而母体药物则不能。与母体药物相比，前药在药物组合物中还可以具有提高的溶解度。前药的一个实例(但不限于此)是作为酯(“前药”)施用以促进跨细胞膜传递(其中水溶性对移动性是有害的)的化合物，但随后该化合物在进入细胞后代谢水解成羧酸(活性物质)，在细胞中水溶性是有益的。前药的另一个实例可以是与酸基团键合的短肽(聚氨基酸)，其中肽被代谢以使活性部分显现。用于选择和制备合适的前药衍生物的常规方法描述于例如Design ofProdrugs,(H.Bundgaard编辑,Elsevier,1985)中，其通过引用整体并入本文。
术语“前药酯”是指通过添加任何几种在生理条件下水解的酯形成基团而形成的本文公开的化合物的衍生物。前药酯基团的实例包括新戊酰氧基甲基(pivoyloxymethyl)、乙酰氧基甲基、邻苯二甲酰基、茚满基和甲氧基甲基，以及本领域已知的其它这种基团，包括(5-R-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)甲基((5-R-2-oxo-1,3-dioxolen-4-yl)methyl)基团。前药酯基团的其他实例可见于例如T.Higuchi和V.Stella，"Pro-drugs as NovelDelivery Systems",Vol.14,A.C.S.Symposium Series,American Chemical Society(1975)；和"Bioreversible Carriers in Drug Design:Theory and Application",E.B.Roche编辑,Pergamon Press:New York,14-21(1987)(提供可用作含有羧基基团的化合物的前药的酯的实例)。上述每篇参考文献都通过引用整体并入本文。
本文公开的化合物的“代谢物”包括在将化合物引入生物环境中时产生的活性物质。
“溶剂化物”是指通过溶剂和本文所述的化合物、其代谢物或盐的相互作用而形成的化合物。合适的溶剂化物是药学上可接受的溶剂化物，包括水合物。
术语“药学上可接受的盐”是指保留了在生物学上或其他方面不适合用于药物的化合物的生物有效性和性质的盐。在许多情况下，由于存在氨基和/或羧基基团或与其类似的基团，本文的化合物能够形成酸和/或碱盐。可以用无机酸和有机酸形成药学上可接受的酸加成盐。可以衍生盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。可以衍生盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。可以用无机碱和有机碱形成药学上可接受的碱加成盐。可以衍生盐的无机碱包括例如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝等；特别优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。可以衍生盐的有机碱包括例如伯胺、仲胺和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺、碱性离子交换树脂等，特别是例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。许多这种盐是本领域已知的，如1987年9月11日公开的Johnston等人的WO 87/05297(通过引用整体并入本文)中所述。
如本文所用，“C
如本文所用，术语“卤素”或“卤代”是指元素周期表第7列的放射稳定性原子中的任意一种，例如氟、氯、溴或碘，其中氟和氯是优选的。
如本文所用，“烷基”是指完全饱和的(即，不含双键或三键)直链或支链烃链。烷基可具有1至20个碳原子(无论何时在本文中出现，数值范围如“1至20”是指给定范围内的每个整数；例如，“1至20个碳原子”意指烷基基团可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等组成，直至并包括20个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“烷基”的出现)。烷基基团也可以是具有1至9个碳原子的中等大小的烷基。烷基也可以是具有1至4个碳原子的低级烷基。该化合物的烷基基团可以被指定为“C
如本文所用，“卤代烷基”是指在链中具有1至12个碳原子的、一个或多个氢被卤素取代的直链或支链烷基基团。卤代烷基基团的实例包括但不限于-CF
如本文所用，“烷氧基”是指式-OR，其中R是如上定义的烷基，例如“C
如本文所用，“聚乙二醇”是指式
如本文所用，“杂烷基”是指在链骨架中含有一个或多个杂原子(即除碳以外的元素，包括但不限于氮、氧和硫)的直链或支链烃链。杂烷基基团可具有1指20个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中未指定数值范围的术语“杂烷基”的出现。杂烷基基团也可以是具有1至9个碳原子的中等大小的杂烷基。杂烷基基团也可以是具有1至4个碳原子的低级杂烷基。在各种实施方案中，杂烷基可具有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1或2个杂原子或1个杂原子。化合物的杂烷基基团可以被指定为“C
术语“芳族”是指具有共轭π电子系统的环或环系统，并且包括碳环芳族(例如苯基)和杂环芳族基团(例如吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(即，共享相邻原子对的环)基团，条件是整个环系统是芳族的。
如本文所用，“芳基”是指在环骨架中仅含有碳的芳环或环系统(即，共享两个相邻碳原子的两个或多个稠环)。当芳基是环系统时，该系统中的每个环都是芳族的。芳基基团可具有6至18个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“芳基”的出现。在一些实施方案中，芳基基团具有6至10个碳原子。芳基基团可以被指定为“C
如本文所用，“芳氧基”和“芳硫基”是指RO-和RS-，其中R是如上定义的芳基，例如“C
“芳烷基”或“芳基烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的芳基，例如“C
如本文所用，“杂芳基”是指在环骨架中含有一个或多个杂原子(即除碳以外的元素，包括但不限于氮、氧和硫)的芳族环或环系统(即，共享两个相邻原子的两个或多个稠合环)。当杂芳基是环系统时，该系统中的每个环都是芳族的。杂芳基基团可具有5至18个环成员(即，构成环骨架的原子数，包括碳原子和杂原子)，但本发明的定义也涵盖其中未指定数值范围的术语“杂芳基”的出现。在一些实施方案中，杂芳基基团具有5至10个环成员或5至7个环成员。杂芳基基团可以被指定为“5至7元杂芳基”、“5至10元杂芳基”或类似的名称。在各种实施方案中，杂芳基含有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。例如，在各种实施方案中，杂芳基含有1至4个氮原子、1至3个氮原子、1至2个氮原子、2个氮原子和1个硫原子或氧原子、1个氮原子和1个硫原子或氧原子或1个硫原子或氧原子。杂芳基环的实例包括但不限于呋喃基、噻吩基、酞嗪基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、吲哚基、异吲哚基和苯并噻吩基。
“杂芳烷基”或“杂芳基烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的杂芳基基团。实例包括但不限于2-噻吩基甲基、3-噻吩基甲基、呋喃基甲基、噻吩基乙基、吡咯基烷基、吡啶基烷基、异噁唑基烷基(isoxazollylalkyl)和咪唑基烷基。在某些情况下，亚烷基基团是低级亚烷基基团(即C
如本文所用，“碳环基”是指在环系统骨架中仅含有碳原子的非芳族环状环或环系统。当碳环基是环系统时，两个或多个环可以以稠合、桥接或螺连接的方式连接在一起。碳环基可具有任意饱和度，条件是环系统中的至少一个环不是芳族的。因此，碳环基包括环烷基、环烯基和环炔基。碳环基基团可具有3至20个碳原子，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“碳环基”的出现。碳环基基团还可以是具有3至10个碳原子的中等大小的碳环基。碳环基基团也可以是具有3至6个碳原子的碳环基。碳环基基团可以被指定为“C
“(碳环基)烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的碳环基，例如“C
如本文所用，“环烷基”是指完全饱和的碳环基环或环系统。实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
如本文所用，“环烯基”是指具有至少一个双键的碳环基环或环系统，其中环系统中没有环是芳族的。一个实例是环己烯基。
如本文所用，“杂环基”是指在环骨架中含有至少一个杂原子的非芳族环状环或环系统。杂环基可以以稠合、桥接或螺连接的方式连接在一起。杂环基可具有任意饱和度，条件是环系统中的至少一个环不是芳族的。(多个)杂原子可以存在于环系统中的非芳族环或芳族环中。杂环基基团可具有3至20个环成员(即，构成环骨架的原子数，包括碳原子和杂原子)，但本发明的定义也涵盖其中没有指定数值范围的术语“杂环基”的出现。杂环基基团也可以是具有3至10个环成员的中等大小的杂环基。杂环基基团也可以是具有3至6个环成员的杂环基。杂环基可以被指定为“3-6元杂环基”或类似的名称。
在各种实施方案中，杂环基含有1至4个杂原子、1至3个杂原子、1至2个杂原子或1个杂原子。例如，在各种实施方案中，杂环基含有1至4个氮原子、1至3个氮原子、1至2个氮原子、2个氮原子和1个硫原子或氧原子、1个氮原子和1个硫原子或氧原子、或1硫原子或氧原子。在优选的六元单环杂环基中，(多个)杂原子选自O、N或S中的一个至三个，在优选的五元单环杂环基中，(多个)杂原子选自从O、N或S选择的一个或两个杂原子。杂环基的实例包括但不限于，氮杂基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、二氧杂环戊烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、吗啉基、环氧乙烷基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、哌啶基、哌嗪基、二氧代哌嗪基、吡咯烷基、吡咯烷酮基(pyrrolidonyl)、吡咯烷酮基(pyrrolidionyl)、4-哌啶基、吡唑啉基、吡唑烷基、1,3-二氧杂环己烯基(dioxinyl)、1,3-二噁烷基、1,4-二氧杂环己烯基(dioxinyl)、1,4-二噁烷基、1,3-氧硫杂环己烷基(1,3-oxathianyl)、1,4-氧硫杂环己烯基(1,4-oxathiinyl)、1,4-氧硫杂环己烷基、2H-1,2-噁嗪基、三噁烷基、六氢-1,3,5-三嗪基、1,3-二氧杂环戊烯基(1,3-dioxolyl)、1,3-二氧杂环戊烷基(1,3-dioxolanyl)、1,3-二硫杂环戊烯基(1,3-dithiolyl)、1,3-二硫杂环戊烷基(1,3-dithiolanyl)、异噁唑啉基、异噁唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、噁唑烷酮基、噻唑啉基、噻唑烷基、1,3-氧硫杂环戊烷基、二氢吲哚基、异吲哚啉基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、四氢-1,4-噻嗪基、硫代吗啉基、二氢苯并呋喃基、苯并咪唑烷基和四氢喹啉。
“(杂环基)烷基”是通过亚烷基基团作为取代基连接的杂环基基团。实例包括但不限于咪唑啉基甲基和吲哚基乙基。
如本文所用，“酰基”是指-C(＝O)R，其中R是如本文所定义的氢、C
“O-羧基”基团是指“-OC(＝O)R”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C
“C-羧基”基团是指“-C(＝O)OR”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C
“氰基”基团是指“-CN”基团。
“氰酰基”基团是指“-OCN”基团。
“异氰酰基”基团是指“-NCO”基团。
“硫氰酰基”基团是指“-SCN”基团。
“异硫氰酰基”基团是指“-NCS”基团。
“亚磺酰基”基团是指“-S(＝O)R”基团，其中R选自如本文所定义的氢、C
“磺酰基”基团是指“-SO
“S-磺酰氨基”基团是指“-SO
“N-磺酰氨基”基团是指“-N(R
“O-氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝O)NR
“N-氨基甲酰基”基团是指“-N(R
“O-硫代氨基甲酰基”基团是指“-OC(＝S)NR
“N-硫代氨基甲酰基”基团是指“-N(R
“C-酰氨基”基团是指“-C(＝O)NR
“N-酰氨基”基团是指“-N(R
“氨基”基团是指“-NR
“氨基烷基”基团是指通过亚烷基基团连接的氨基基团。
“烷氧基烷基”基团是指通过亚烷基基团连接的烷氧基基团，例如“C
如本文所用，“天然氨基酸侧链”是指天然存在的氨基酸的侧链取代基。天然存在的氨基酸具有与α-碳连接的取代基。天然存在的氨基酸包括精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。
如本文所用，“非天然氨基酸侧链”是指非天然存在的氨基酸的侧链取代基。非天然氨基酸包括β-氨基酸(β
如本文所用，取代的基团衍生自未取代的母体基团，其中已经存在一个或多个氢原子替换为另一个原子或基团。除非另有说明，否则当基团被认为是“取代的”时，意指该基团被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：C
在一些实施方案中，(多个)取代的基团被一个或多个取代基取代，所述取代基各自独立地选自C
应理解，取决于上下文，某些基团命名规则可包括单-基团或二-基团。例如，当取代基需要与分子其余部分的两个连接点时，应理解取代基是二-基团。例如，被鉴定为需要两个连接点的烷基的取代基包括二-基团，例如–CH
当两个R基团被称为“与它们所连接的原子一起”形成环(例如，碳环基、杂环基、芳基或杂芳基环)时，意指该原子和两个R基团的集合单元是所述环。当单独采用时，环不受每个R基团的定义的限制。例如，当存在以下子结构：
并且R
其中环A是含有所示氮的杂环基环。
类似地，当两个“相邻”R基团被称为“与它们所连接的原子一起”形成环时，意指该原子、中间键和两个R基团的集合单元是所述环。例如，当存在以下子结构：
并且R
其中A是芳基环或含有所示双键的碳环基。
无论何处将取代基描述为二-基团(即，具有与分子其余部分的两个连接点)，应理解，除非另有说明，否则取代基可以以任意方向构型连接。因此，例如，被描述为-AE-或
如本文所用，子结构：
如本文所用，化学基团的“等排体(isostere)”是表现出相同或相似性质的其他化学基团。例如，四唑是羧酸的等排体，因为它模仿羧酸的性质，即使它们都具有非常不同的分子式。四唑是羧酸的许多可能的等排替代物之一。预期的其他羧酸等排体包括-SO
还预期当将化学取代基加入到羧酸等排体中时，该化合物保留羧酸等排体的性质。预期当羧酸等排体任选地被一个或多个选自如上定义的R的部分取代时，那么对取代和取代位置进行选择使得它不消除该化合物的羧酸等排性质。类似地，还预期在碳环或杂环羧酸等排体上放置一个或多个R取代基不是在一个或多个维持化合物的羧酸等排性质或化合物的羧酸等排性质不可或缺的原子上的取代，如果这样的取代基会破坏化合物的羧酸等排性质的话。
还考虑了在本说明书中未具体举例说明的其他羧酸等排体。
术语“试剂”或“测试剂”包括任意物质、分子、元素、化合物、实体或其组合。它包括但不限于例如蛋白质、多肽、肽或模拟物、有机小分子、多糖、多核苷酸等。它可以是天然产物、合成化合物或化学化合物或两种以上的物质的组合。除非另有说明，否则术语“试剂”、“物质”和“化合物”在本文中可互换使用。
本文使用的术语“类似物”是指在结构上类似于参照分子的分子，但已经通过用替代取代基取代参照分子的特定取代基而以靶向和受控方式对其进行了修饰。与参照分子相比，本领域技术人员可以预期类似物表现出相同、相似或改善的效用。为了找到具有改善特征(例如对靶分子的结合亲和力更高)的已知化合物的变体而进行的类似物的合成和筛选是药物化学中众所周知的方法。
术语“哺乳动物”以其通常的生物学意义使用。因此，它具体包括但不限于灵长类动物，包括猿类(黑猩猩、猿、猴)和人类、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、大鼠和小鼠，但也包括许多其他种类。
术语“微生物感染”是指通过病原微生物侵入宿主生物，无论该生物是脊椎动物、无脊椎动物、鱼、植物、鸟或哺乳动物。这包括通常存在于哺乳动物或其他生物的体内或体表上的微生物的过度生长。更一般地，微生物感染可以是(多个)微生物群体的存在对宿主哺乳动物而言是有害的任意情况。因此，当哺乳动物的体内或体表上存在过量的微生物群体时，或者当(多个)微生物群体的存在的影响破坏哺乳动物的细胞或其他组织时，哺乳动物正在“经受”微生物感染。具体地，该描述适用于细菌感染。注意，优选实施方案的化合物还可用于治疗细胞培养物或其他培养基或无生命的表面或物体的微生物生长或污染，并且除非在权利要求中明确说明，否则本文中的任何内容都不应将优选实施方案仅限于治疗高等生物。
术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任意和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分均不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。另外，可以包括例如本领域常用的各种佐剂。例如，在Gilman等人(编辑)(1990)；Goodman和Gilman的：The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版，Pergamon Press(其全部内容通过引用并入本文)中描述了在药物组合物中包含各种组分的考虑因素。
如本文所用，“受试者”是指人或非人哺乳动物例如狗、猫、小鼠、大鼠、牛、绵羊、猪、山羊、非人灵长类动物或鸟类例如鸡以及任意其他脊椎动物或无脊椎动物。
如本文所用，“有效量”或“治疗有效量”是指有效缓解(至一定程度)疾病或病况的一种或多种症状，或降低疾病或病况的一种或多种症状的发作的可能性(包括治愈疾病或病况)的治疗剂的量。“治愈”意指疾病或病况的症状被消除；然而，即使在治愈后，也可能存在某些长期或永久的影响(例如大量组织损伤)。
如本文所用，“治疗”(“treat”、“treatment”或“treating”)是指施用药物组合物用于预防和/或治疗目的。术语“预防性治疗”是指对尚未表现出疾病或病况的症状，但对特定疾病或病况易感或有患病风险的受试者进行治疗，由此该治疗降低患者发展疾病或病况的可能性。术语“治疗性治疗”是指施用治疗给
本文公开的化合物可以通过下述方法或通过修改这些方法来合成。修改方法的方式包括本领域技术人员已知的温度、溶剂、试剂等。通常，在制备本文公开的化合物的任意方法中，可能必需和/或需要保护任意有关分子上的敏感或反应性基团。这可以通过常规保护基团的方式来实现，例如Protective Groups in Organic Chemistry(编辑J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973)；和P.G.M.Green,T.W.Wutts,Protecting Groups inOrganic Synthesis(第3版)Wiley,New York(1999)(都通过引用整体并入本文)中所述的那些。可以使用本领域已知的方法在方便的后续阶段除去保护基团。可用于合成适用化合物的合成化学转化是本领域已知的，包括例如，在R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations,VCH Publishers,1989或L.Paquette,编辑,Encyclopedia of Reagentsfor Organic Synthesis,John Wiley and Sons,1995(都通过引用整体并入本文)中描述的那些。本文示出和描述的路线仅是说明性的，并不意图也不应被解释为以任何方式限制权利要求的范围。本领域技术人员将能够辨认所公开的合成的修改并基于本文的公开内容设计替代路线；所有这些修改和替代路线都在权利要求的范围内。
在以下方案中，选择氧原子的保护基团是因为它们与必需的合成步骤具有相容性并且引入和去保护步骤与总体合成方案具有相容性(P.G.M.Green,T.W.Wutts,ProtectingGroups in Organic Synthesis(第3版)Wiley,New York(1999))。
如果本技术的化合物含有一个或多个手性中心，则这些化合物可以作为纯立体异构体制备或分离，即作为单独的对映异构体或d(1)立体异构体，或作为富含立体异构体的混合物。除非另有说明，否则所有这些立体异构体(和富集的混合物)都包括在本技术的范围内。纯立体异构体(或富集的混合物)可使用例如本领域熟知的光学活性起始物料或立体选择性试剂制备。或者，这些化合物的外消旋混合物可以例如使用手性柱色谱法、手性拆分剂等分离。
用于下列反应的起始物料通常是已知化合物，或者可以通过已知方法或其明显的修改方法制备。例如，许多起始物料可从商业供应商获得，供应商例如Aldrich ChemicalCo.(Milwaukee,Wisconsin,USA)、Bachem(Torrance,California,USA)、Emka-Chemce或Sigma(St.Louis,Missouri,USA)。其他可以通过标准参考文献中描述的方法或其明显的修改方法来制备，标准参考文献例如Fieser and Fieser's Reagents for OrganicSynthesis,第1-15卷(John Wiley和Sons，1991)、Rodd's Chemistry of CarbonCompounds,第1-5卷和增刊(Elsevier Science Publishers,1989)、Organic Reactions,第1-40卷(John Wiley和Sons,1991)、March's Advanced Organic Chemistry(John Wiley和Sons，第5版，2001)和Larock's Comprehensive Organic Transformations(VCHPublishers Inc.,1989)。
在一个实施方案中，该方法包括在酸性条件下使适当取代的中间体(VI-a)与腈基反应，然后用碱处理，以得到钠盐(VI-b)。在碱性条件下用BOC-酸酐处理该中间体，得到BOC-衍生物(VI)，将其进行酯化条件，得到中间体(VII)。在酸性条件下水解酯中间体，得到胺(VIII)。(方案1)。将胺(VIII)与羧酸(IX)进行酰胺偶联条件，得到相应的加合物(X)。将所得的加合物(X)用DMP氧化(用高价碘)或通过氧化剂例如PCC(氯铬酸吡啶鎓)进行氧化条件，以生成β-酮酸酯产物(I)。或者，使用EDC和二氯乙酸或使用IBX作为氧化剂使加合物(X)进行氧化条件，以生成β-酮酸酯产物(I)。另外，在酸性条件下水解中间体(I)，以生成羧酸(XI)。本领域技术人员将再次认识到，在本公开的范围内存在许多其他氧化条件和试剂用以氧化羟基。该合成路线大致示于方案2中。
方案2：
在一个实施方案中，该方法包括使适当取代的中间体(XII)在suzuki偶联条件下与取代的硼酸酯中间体(XIII)反应，得到产物，将其水解得到酸(XIV)。将该酸与中间体(XV)偶联，然后用DMP氧化(用高价碘)或通过氧化剂例如PCC(氯铬酸吡啶鎓)进行氧化条件，以生成β-酮酰胺产物(II-a)。该合成路线大致示于方案3中。
或者，使用NCS对中间体(XVI)进行氯化，然后将酯水解以生成中间体(XVII)。将中间体(XVII)与中间体(XV)偶联，然后用DMP氧化(用高价碘)或通过氧化剂例如PCC(氯铬酸吡啶鎓)进行氧化条件，以产生氯呋喃取代的β-酮酰胺产物(XVIII)。该合成路线大致示于方案4中。
提供以上实施例方案用于指导读者，并共同代表制备本文所涵盖的化合物的实例方法。此外，根据以下反应方案和实施例，本领域普通技术人员将容易想到制备本文所述化合物的其他方法。除非另有说明，否则所有可变因素如上所定义。
一些实施方案提供了在：(i)代谢研究(优选用
同位素标记的化合物及其实施方案的前药通常可以通过进行方案或实施例和下述制备方法中公开的方法，通过用容易获得的同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。对于PET，特别优选
如下面的方案中所示合成
或者，如方案6中所示合成
化合物以治疗有效剂量施用。虽然人体剂量水平尚未针对本文所述化合物进行优化，但通常，每日剂量可为约0.25mg/kg至约120mg/kg或更高体重，约0.5mg/kg或更低至约70mg/kg，约1.0mg/kg至约50mg/kg体重，或约1.5mg/kg至约10mg/kg体重。因此，对于向70kg的人施用，剂量范围为约17mg/天至约8000mg/天，约35mg/天或更低至约7000mg/天或更高，约70mg/天至约6000mg/天，约100mg/天至约5000mg/天，或约200mg至约3000mg/天。当然，施用的活性化合物的量取决于受治疗者和所治疗的疾病状态、痛苦的严重程度、施用方式和时间表以及处方医师的判断。
本文公开的化合物或其药学上可接受的盐的施用可以通过用于具有类似用途的药剂的任意可接受的施用方式，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、局部、透皮、腹膜内、肌肉内、肺内、阴道、直肠或眼内。口服和肠胃外施用通常用于治疗优选实施方案的受试者的适应症。
可以将如上所述有用的化合物配制成用于治疗这些病况的药物组合物。使用标准药物制剂技术，例如Remington的The Science and Practice of Pharmacy,21st Ed.,Lippincott Williams&Wilkins(2005)(通过引用整体并入本文)中公开的那些技术。因此，一些实施方案包括药物组合物，其包括：(a)安全且治疗有效量的本文所述化合物(包括其对映异构体、非对映异构体、互变异构体、多晶型物和溶剂化物)，或其药学上可接受的盐；和(b)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。
除了如上所述有用的所选化合物之外，一些实施方案还包括含有药学上可接受的载体的组合物。术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任意和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。这些介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分均不相容，否则考虑其在治疗组合物中的用途。另外，可以包括例如本领域常用的各种佐剂。例如，在Gilman等人(编辑)(1990)；Goodman和Gilman’s：The Pharmacological Basis of Therapeutics，第8版，Pergamon Press(其全部内容通过引用并入本文)中描述了在药物组合物中包含各种组分的考虑因素。
可用作药学上可接受的载体或其组分的物质的一些实例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；粉末黄蓍草；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如TWEENS；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；和磷酸盐缓冲溶液。
与主题化合物联合使用的药学上可接受的载体的选择基本上由化合物的施用方式决定。
本文所述的组合物优选以单位剂型提供。如本文所用，“单位剂型”是含有一定量的化合物的组合物，其适于根据良好的医学实践以单一剂量施用给动物，优选哺乳动物受试者。然而，单一剂型或单位剂型的制备并不意味着每天或每疗程施用一次该剂型。预期此类剂型每天施用一次、两次、三次或更多次，并且可以在一段时间内(例如，约30分钟至约2-6小时)作为输注施用，或作为连续输注施用，并且可以在一个疗程中施用不止一次，尽管没有特别排除单次施用。技术人员将认识到该制剂没有特别考虑整个疗程，并且这些决定留给治疗领域而非制剂领域的技术人员。
如上所述有用的组合物可以是多种合适形式中的任意一种，用于多种施用途径，例如口服、鼻腔、直肠、局部(包括透皮)、眼、脑内、颅内、鞘内、动脉内、静脉内、肌肉内或其他肠道外施用途径。技术人员将理解，口服和鼻腔组合物包含通过吸入施用的组合物，并使用可用的方法制备。根据所需的特定施用途径，可以使用本领域熟知的多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括，例如，固体或液体填充剂、稀释剂、助溶剂、表面活性剂和包封物质。可以包括基本上不干扰化合物的抑制活性的任选的药学活性物质。与化合物一起使用的载体的量足以提供每单位剂量化合物施用的物质的实际量。用于制备可用于本文所述方法的剂型的技术和组合物描述于以下参考文献中，所有文献均通过引用并入本文：Modern Pharmaceutics,第4版.,第9章和第10章(Banker&Rhodes,编辑,2002)；Lieberman等人,Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets(1989)；和Ansel,Introductionto Pharmaceutical Dosage Forms第8版(2004)。
可以使用多种口服剂型，包括片剂、胶囊、颗粒和散装粉末等固体形式。片剂可以是压片、片剂研磨剂、肠溶衣、糖衣、薄膜包衣或多重压片，其含有合适的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂、流动诱导剂和熔化剂。液体口服剂型包括水溶液、乳液、悬浮液、由非泡腾颗粒重构的溶液和/或悬浮液、以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂，其含有合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、熔化剂、着色剂和调味剂。
适于制备用于口服施用的单位剂型的药学上可接受的载体是本领域熟知的。片剂通常包含常规的药学上相容的佐剂作为惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素；粘合剂，如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂，如淀粉、海藻酸和交联羧甲基纤维素；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。诸如二氧化硅的助流剂可用于改善粉末混合物的流动特性。可以添加着色剂，例如FD&C染料，用于外观。甜味剂和调味剂，例如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果调味剂，是可咀嚼片剂的有用佐剂。胶囊通常包含一种或多种上文公开的固体稀释剂。载体组分的选择取决于并不重要的次要考虑因素如味道、成本和货架稳定性，并且可以由本领域技术人员容易地制造。
口服组合物还包括液体溶液、乳液、悬浮液等。适用于制备此类组合物的药学上可接受的载体是本领域熟知的。用于糖浆、酏剂、乳液和悬浮液的载体的典型组分包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨糖醇和水。对于悬浮液，典型的悬浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、黄蓍胶和海藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨醇酯80；和典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。口服液体组合物还可含有一种或多种组分，例如上面公开的甜味剂、调味剂和着色剂。
此类组合物还可以通过常规方法包衣，通常使用pH或时间依赖性包衣，使得主题化合物在胃肠道中在期望的局部施用附近释放，或在不同时间释放以使所期望的作用延长。此类剂型通常包括但不限于醋酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、Eudragit包衣、蜡和虫胶中的一种或多种。
本文所述的组合物可任选地包含其他药物活性物质。
用于实现主题化合物的全身递送的其他组合物包括舌下、口腔和鼻腔剂型。此类组合物通常包含一种或多种可溶性填充物质，例如蔗糖、山梨糖醇和甘露醇；和粘合剂，如阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。还可包括上文公开的助流剂、润滑剂、甜味剂、着色剂、抗氧化剂和调味剂。
配制用于局部眼科使用的液体组合物，使其可以向眼睛局部施用。应尽可能地使舒适度最大化，但是有时制剂考虑因素(例如药物稳定性)可能迫使低于最佳舒适度。在不能使舒适度最大化的情况下，应该配制液体使得液体对于患者的局部眼科使用是可耐受的。另外，眼科上可接受的液体应该包装成一次性使用或者含有防腐剂以防止多次使用间的污染。
对于眼科应用，通常使用生理盐水溶液作为主要溶媒来制备溶液或药物。眼科溶液应优选用适当的缓冲系统保持在舒适的pH值。制剂还可含有常规的药学上可接受的防腐剂、稳定剂和表面活性剂。
可用于本文公开的药物组合物的防腐剂包括但不限于苯扎氯铵、PHMB、氯丁醇、硫柳汞、苯基汞、乙酸盐和硝酸苯汞。有用的表面活性剂是例如吐温80。类似地，多种有用的溶媒可用于本文公开的眼用制剂中。这些溶媒包括但不限于聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素和纯净水。
可以根据需要或方便添加张力调节剂。它们包括但不限于盐特别是氯化钠、氯化钾、甘露醇和甘油，或任意其它合适的眼科上可接受的张力调节剂。
可以使用多种缓冲剂和手段来调节pH，只要所得制剂是眼科上可接受的即可。对于许多组合物，pH将在4和9之间。因此，缓冲剂包括乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。根据需要，可以使用酸或碱来调节这些制剂的pH。
以类似的方式，眼科上可接受的抗氧化剂包括但不限于偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、乙酰半胱氨酸、丁基化羟基苯甲醚和丁基化羟基甲苯。
可以包括在眼科制剂中的其他赋形剂组分是螯合剂。有用的螯合剂是依地酸二钠，但也可以使用其它螯合剂替代依地酸二钠或与其结合使用。
对于局部使用，使用含有本文公开的化合物的乳膏、软膏、凝胶、溶液或悬浮液等。局部制剂通常可以包含药物载体、共溶剂、乳化剂、渗透增强剂、防腐剂体系和润肤剂。
对于静脉内施用，可以将本文所述的化合物和组合物溶解或分散在药学上可接受的稀释剂中，例如盐水或右旋糖溶液。可包含合适的赋形剂以达到所需的pH，包括但不限于NaOH、碳酸钠、乙酸钠、HCl和柠檬酸。在各种实施方案中，最终组合物的pH范围为2至8，或优选4至7。抗氧化剂赋形剂可包括亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、甲醛钠、次硫酸盐(sulfoxylate)、硫脲和EDTA。在最终静脉内组合物中可见的合适赋形剂的其他非限制性实例可包括磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸、酒石酸、明胶和碳水化合物如右旋糖、甘露糖醇和葡聚糖。其他可接受的赋形剂描述于Powell等人，Compendium of Excipients for ParenteralFormulations,PDA J Pharm Sci and Tech 1998,52 238-311and Nema et al.,Excipients and Their Role in Approved Injectable Products:Current Usage andFuture Directions,PDA J Pharm Sci and Tech2011,65 287-332(均通过引用整体并入本文)。还可以包括抗微生物剂以获得抑制细菌或抑制真菌的溶液，包括但不限于硝酸苯汞、硫柳汞、苄索氯铵、苯扎氯铵、苯酚、甲酚和氯丁醇。
用于静脉内施用的组合物可以以一种或多种固体的形式提供给护理人员，在施用前不久用合适的稀释剂如无菌水、盐水或右旋糖使该固体在水中重构。在其他实施方案中，组合物以溶液形式提供，准备肠胃外施用。在其他实施方案中，组合物以溶液提供，该溶液在施用前进一步被稀释。在包括施用本文所述化合物和另一种药剂的组合的实施方案中，该组合可以作为混合物提供给护理人员，或者护理人员可以在施用前将这两种药剂混合，或者这两种药剂可以分开施用。
本文所述活性化合物的实际剂量取决于具体化合物和待治疗的病况；适当剂量的选择完全在技术人员的知识范围内。
如果需要，本文所述的化合物和组合物可以存在于包装或分配器装置中，其含有一个或多个含有活性成分的单位剂型。这种包装或装置可以例如包括金属或塑料箔如泡罩包装或玻璃以及橡胶塞如小瓶。包装或分配器装置可附有施用说明。将本文所述的化合物和组合物配制在相容性药物载体中，也可以制备、置于合适的容器中，并标记用于治疗指定的病况。
制剂中化合物的量可以在本领域技术人员使用的全部范围内变化。通常，以重量百分比(wt％)为基础，基于总制剂，制剂将包含约0.01 99.99wt％的本技术的化合物，余量为一种或多种合适的药物赋形剂。优选地，化合物的存在水平为约1 80wt％。代表性的药物制剂描述如下。
以下是含有式I化合物的代表性药物制剂。
使以下成分紧密混合并压制成单刻痕片剂。
使以下成分紧密混合并装入硬壳明胶胶囊中。
将以下成分混合以形成用于口服施用的悬浮液。
将以下成分混合以形成可注射制剂。
通过将本技术的化合物与
本文公开的化合物或其互变异构体和/或其药学上可接受的盐可有效地充当CAPN1、CAPN2和/或CAPN9抑制剂，并且治疗至少部分地受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的病况。一些实施方案提供了药物组合物，其包含一种或多种本文公开的化合物和药学上可接受赋形剂。一些实施方案提供了用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗纤维化疾病的方法。
在一些实施方案中，受试者是人。
另外的实施方案包括向有此需要的受试者施用化合物的组合。组合可包括本文所述的化合物、组合物、药物组合物和另外的药物。
一些实施方案包括与另外的药物共同施用本文所述的化合物、组合物和/或药物组合物。“共同施用”是指可以在患者的血流中同时发现两种或更多种药剂，而不管它们实际上何时或如何施用。在一个实施方案中，该药剂同时施用。在一个这样的实施方案中，组合施用是通过将药剂合并在单一剂型中来完成的。在另一个实施方案中，相继施用药剂。在一个实施方案中，药剂通过相同途径例如口服施用。在另一个实施方案中，药剂通过不同途径施用，例如一种口服施用和另一种i.v.施用。
一些实施方案包括本文所述的化合物、组合物或药物组合物与批准用于治疗与纤维化或肌成纤维细胞分化有关的疾病或病况的任意其他药物化合物的组合。
一些实施方案提供了用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的方法和/或用有效量的一种或多种本文公开的化合物来治疗至少部分地受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法。
本文公开的化合物可用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9酶和/或治疗与纤维化或肌成纤维细胞分化有关的病症。
一些实施方案提供了用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的方法，该方法包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物或包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分地受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物或包含药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
一些实施方案提供了用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的方法，其中该方法包括使细胞与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。在一些实施方案中，用于抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的方法在体外或体内进行。
钙蛋白酶也在除神经元、小胶质细胞和入侵巨噬细胞之外的细胞中表达。特别地，它们在骨骼肌中是重要的，并且本文中对钙蛋白酶的抑制也指在这些细胞中的抑制。
一些实施方案提供了一种与钙蛋白酶抑素(CAST)竞争性结合的方法，该方法包括使本文公开的化合物与存在于受试者体内的CAPN1、CAPN2和/或CAPN9酶接触。在这种方法中，该化合物特异性地抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的一种或多种酶至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少150倍、至少200倍、至少400倍或至少500倍。
一些实施方案提供了在CAPN2和CAPN9存在下选择性抑制CAPN1的方法，其包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了在CAPN1和CAPN9存在下选择性抑制CAPN2的方法，其包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了在CAPN2和CAPN1存在下选择性抑制CAPN9的方法，其包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了在CAPN9的存在下选择性抑制CAPN1和CAPN2的方法，其包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了在CAPN2的存在下选择性抑制CAPN1和CAPN9的方法，其包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了在CAPN1的存在下选择性抑制CAPN2和CAPN9的方法，其包括使细胞(包括神经元/小胶质细胞/侵入巨噬细胞)与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的一种或多种特异性抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的化合物，所述化合物或包含一种或多种本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的一种或多种特异性抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的化合物，所述化合物选自本文公开的化合物或包含一种或多种本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的一种或多种选择性抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的化合物，所述化合物选自本文公开的化合物或包含一种或多种本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，该方法包括向受试者施用有效量的一种或多种选择性抑制CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的化合物，所述化合物选自本文公开的化合物或包含一种或多种本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：5的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：10的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：20的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：50的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：100的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：200的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：250的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：500的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：5的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：10的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：20的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：50的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：100的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：200的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：250的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：500的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：5的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：10的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：20的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：50的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：100的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：200的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：250的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：500的比例特异性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：5的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：10的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：20的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：50的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：100的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：200的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：250的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于治疗至少部分受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的一种或多种化合物，所述化合物以至少1：1：500的比例选择性抑制选自由CAPN1、CAPN2和CAPN9组成的组的两种以上的酶。
一些实施方案提供了用于预防性治疗或治疗患有纤维变性病症的受试者的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物。
一些实施方案提供了用于预防性治疗或治疗患有受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的病症的受试者的方法，其中所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物。
一些实施方案提供了用于抑制肌成纤维细胞分化(例如，上皮/内皮-间质转化(EpMT/EnMT))的方法，其中该方法包括使细胞与有效量的一种或多种本文公开的化合物接触。在一个方面，该用于抑制肌成纤维细胞分化(例如，上皮/内皮-间质转化(EpMT/EnMT))的方法在体外或体内进行。
一些实施方案提供了用于治疗选自由以下组成的组的疾病或病况，或产生选自由以下组成的组的症状的疾病或病况的方法：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病，其中该方法包括向有此需要的受试者施用有效量的一种或多种本文公开的化合物。
一些实施方案提供了用于治疗肝纤维化的方法。
一些实施方案提供了用于治疗心肌纤维化的方法。
一些实施方案提供了用于治疗类风湿性关节炎疾病中的纤维化的方法。
一些实施方案提供了用于治疗受CAPN1、CAPN2和/或CAPN9影响的病况的方法，其对于受试者而言适用于治疗和预防背景两者。两种方法均包括向有此需要的受试者施用一种或多种本文公开的化合物。
一些实施方案提供了用于治疗僵硬皮肤综合症的方法。
优选的实施方案包括本文所述的化合物、组合物或药物组合物与其他CAPN1、CAPN2和/或CAPN9抑制剂，例如抗CAPN1、CAPN2和/或CAPN9抗体或抗体片段，CAPN1、CAPN2和/或CAPN9反义iRNA，或其他小分子CAPN1、CAPN2和/或CAPN9抑制剂的组合。
一些实施方案包括本文所述的化合物、组合物或药物组合物的组合以抑制肌成纤维细胞分化(例如，上皮/内皮-间质转化(EpMT/EnMT))。
一些实施方案包括这些化合物(它们是一种或多种(或全部三种)CAPN1、CAPN2和/或CAPN9的抑制剂)中的一种或多种的组合或者这些化合物中的一种或多种的组合与其它TGFβ信号传导抑制剂的组合，其可用于治疗或预防或减轻包括以下的纤维化、硬化或炎症后疾病或病症的症状：肝纤维化、肾纤维化、肺纤维化、过敏性肺炎、间质纤维化、系统性硬皮病、黄斑变性、胰腺纤维化、脾纤维化、心肌纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎。
一些实施方案包括本文所述的化合物、组合物和/或药物组合物与另外的药剂的组合，另外的药剂例如抗炎药包括糖皮质激素、镇痛药(例如布洛芬)、阿司匹林和调节Th2-免疫应答的药剂、免疫抑制剂包括甲氨蝶呤、霉酚酸酯、环磷酰胺、环孢菌素、沙利度胺(thalidomide)、泊马度胺(pomalidomide)、来氟米特(leflunomide)、羟氯喹、硫唑嘌呤、可溶性牛软骨、血管扩张剂包括内皮素受体拮抗剂、前列环素类似物、硝苯地平(nifedipine)和西地那非(sildenafil)、IL-6受体拮抗剂、选择性和非选择性酪氨酸激酶抑制剂、Wnt通路调节剂、PPAR激活剂、半胱天冬酶-3抑制剂、LPA受体拮抗剂、B细胞耗竭剂、CCR
在一些实施方案中，化合物和包含本文所述化合物的组合物可用于治疗由纤维化或炎症引起的许多病况，并且特别包括与肌成纤维细胞分化相关的那些病况。实例病况包括肝纤维化(酒精性、病毒性、自身免疫性、代谢性和遗传性慢性疾病)、肾纤维化(例如由慢性炎症、感染或II型糖尿病引起)、肺纤维化(特发性或由环境损害(包括有毒颗粒)、结节病、石棉沉滞症、过敏性肺炎、细菌感染(包括肺结核)、药物等引起)、间质纤维化、系统性硬皮病(其中许多器官变成纤维化的自身免疫性疾病)、黄斑变性(眼部纤维化疾病)、胰腺纤维化(由例如酒精滥用和胰腺的慢性炎症性疾病引起)、脾纤维化(由镰状细胞性贫血、其他血液疾病引起)、心肌纤维化(由感染、炎症和肥大引起)、纵隔纤维化、骨髓纤维化、心内膜心肌纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、手术纤维化并发症、慢性移植物血管病变和/或移植器官慢性排斥反应、缺血再灌注损伤相关纤维化、注射纤维化、肝硬化、弥漫性实质性肺病、输精管切除术后疼痛综合征和类风湿性关节炎疾病或病症。
为了进一步说明本发明，包括了以下实施例。当然，这些实施例不应被解释为具体限制本发明。在权利要求范围内的这些实施例的变化在本领域技术人员的知识范围内，并且被认为落入本文所述和要求保护的本发明的范围内。读者将认识到，具备本公开内容的技术人员和本领域技术人员能够在没有详尽实施例的情况下制备和使用本发明。以下实施例将进一步描述本发明，并且仅用于说明的目的，不应视为限制。
实施例
对于本领域技术人员显而易见的是，制备前体的方法和与本文要求保护的化合物相关的官能团通常在文献中描述。在这些反应中，还可以使用本领域普通技术人员已知的变体，但这些变体没有更详细地提及。被给予文献和本公开内容的本领域技术人员可以很好地制备任意化合物。
应该认识到，有机化学领域的技术人员可以在没有进一步指导的情况下容易地进行操作，也就是说，进行这些操作完全在本领域技术人员的范围和实践范围内。这些包括将羰基化合物还原成它们相应的醇、氧化、酰化、(亲电和亲核)芳族取代、醚化、酯化和皂化等。这些操作在标准文件中有讨论，例如March Advanced Organic Chemistry(Wiley),Carey and Sundberg,Advanced Organic Chemistry(通过引用整体并入本文)等。除非另有说明，否则本发明的所有中间体化合物无需进一步纯化即可使用。
本领域技术人员将容易理解，当在分子中掩蔽或保护其他官能团时，某些反应能够最佳地进行，从而避免任何不希望的副反应和/或增加反应的收率。本领域技术人员通常利用保护基团来实现这种收率增加或避免不希望的反应。这些反应可在文献中找到，并且也在本领域技术人员的范围内。许多这些操作的实例可以在例如T.Greene和P.WutsProtecting Groups in Organic Synthesis,第4版,John Wiley&Sons(2007)中找到，其通过引用整体并入本文。
提供了以下实施例方案用于指导读者，并且代表制备本文示例的化合物的优选方法。这些方法不是限制性的，并且显然可以采用其他途径来制备这些化合物。这些方法具体包括基于固相的化学，包括组合化学。本领域技术人员完全具备通过文献和本公开内容给出的那些方法制备这些化合物的方法。下面描述的合成方案中使用的化合物编号仅适用于那些特定方案，并且不应将其解释为本申请其他部分中的相同编号或与之混淆。
本文使用的商标仅是示例，并且反映了在本发明时使用的示例性材料。技术人员将认识到，预期在批次、制造过程等中存在变化。因此，实施例和其中使用的商标是非限制性的，并且它们不旨在限制，而仅仅是本领域技术人员如何选择执行本发明的一个或多个实施方案的示例。
以下缩写具有指示的含义：
DCM ＝二氯甲烷
DIEA ＝N,N-二异丙基乙胺
DIPEA ＝N,N-二异丙基乙胺
DMF ＝N,N-二甲基甲酰胺
DMP ＝戴斯-马丁试剂(Dess Martin Periodinane)
DNs ＝二硝基磺酰基
ESBL ＝超广谱β-内酰胺酶
EtOAc ＝乙酸乙酯
EA ＝乙酸乙酯
FCC ＝快速柱色谱
HATU ＝2-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐
MeCN ＝乙腈
NMR ＝核磁共振
PE ＝石油醚
Prep ＝制备型
Py ＝吡啶
Sat. ＝饱和水溶液
TBDMSCl ＝叔丁基二甲基甲硅烷基氯
TBS ＝叔丁基二甲基甲硅烷基
TFA ＝三氟乙酸
THF ＝四氢呋喃
TLC ＝薄层色谱
提供以下实施例方案用于指导读者，并共同代表制备本文提供的化合物的实例方法。此外，根据以下反应方案和实施例，本领域普通技术人员将容易明白制备本文所述化合物的其他方法。除非另有说明，否则所有变体如上所定义。
实施例1
化合物1、12、14、18、22、28、54、94、99、100、101和102N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹啉-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1)
在N
向化合物1A(0.48g，1.71mmol)在MeOH(10mL)中的溶液中添加NaOH(341mg，8.53mmol)在H
向化合物1B(210mg，829.20μmol)、中间体1D(230mg，997.01μmol，HCl)在DMF(6mL)中的混合物中添加DIEA(4.13mmol，720μL)，然后添加HBTU(377mg，994.09μmol)。将混合物在25℃下搅拌1.5h。将反应混合物加入H
向化合物1C(0.19g，442.41umol)在DMSO(10mL)和DCM(60mL)中的溶液中加入DMP(751mg，1.77mmol)，将混合物在25℃下搅拌1.5h。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，然后用饱和Na
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2,3-二甲氧基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(12)
如实施例1中所述，分别使用相应的硼酸或硼酸酯分别制备化合物12、14、18、22、28、54、94、99、100、101和102。获得化合物12(88mg，收率：66.5％)，为浅黄色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(14)
获得化合物14(90mg，收率：53.7％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(18)
获得化合物18(80mg，收率：54.7％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(异喹啉-8-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(22)
获得化合物22(90mg，收率：53.1％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-甲基呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(28)
获得化合物28(170mg，收率：85.5％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(异喹啉-8-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(54)
获得化合物54(15mg，收率：14.5％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-(二氟甲基)-4-(1H-吲唑-7-基)噁唑-5-甲酰胺(94)
使中间体衍生物7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑和1-(二氟甲基)-3-碘-1H-吡唑-4-羧酸乙酯经受如化合物12所述的条件，得到化合物94。获得化合物94(63mg，收率：40.9％)，为浅黄色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-甲基-2H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(99)
使中间体衍生物(2-甲基-2H-吲唑-7-基)硼酸和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯经受如化合物12所述的条件，得到化合物99。获得化合物99(70mg，收率：23.4％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1-异丙基-1H-吲唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(100)
使中间体衍生物1-异丙基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吲唑和1-(二氟甲基)-3-碘-1H-吡唑-4-羧酸乙酯经受如化合物12所述的条件，得到化合物100。获得化合物100(60mg，收率：48.41％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+H)
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[b]噻吩-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(101)
获得化合物101(50mg，收率：11.58％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[b]噻吩-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(102)
获得化合物102(100mg，收率：71.0％)，为白色固体：
实施例2
化合物4,10,13,25,37,49和63N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(异喹啉-1-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(3)
向3-碘-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(20g，75.18mmol)在DMF(100mL)中的溶液中添加2-氯-2,2-二氟乙酸钠(22.92g，150.36mmol)和Cs
在N
向化合物4B(80mg，252.14μmol)在MeOH(10mL)和H
向化合物4C(64mg，221.27μmol)和中间体1D(56mg，242.75μmol，HCl)在DMF(10mL)中的溶液中加入HBTU(101mg，266.32μmol)，然后加入DIEA(114mg，882.06μmol，153.64μL)，并在25℃搅拌2小时。将反应混合物用水(40mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取，将有机层浓缩，得到残余物。将残余物在PE：EA(10：1，20mL)中研磨，并通过过滤收集。得到化合物4D(80mg，收率：76.8％)，为淡黄色固体。
向化合物4D(80mg，171.88μmol)在DMSO(10mL)和DCM(50mL)中的溶液中添加DMP(292mg，688.45μmol)。将混合物在25℃下搅拌3小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，用饱和NaHCO
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(异喹啉-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(10)
如实施例2中所述，分别使用相应的羧酸制备化合物10、13、25、37、49和63。使用3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯获得化合物10(55mg，收率：61.2％)，为淡黄色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹喔啉-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(13)
使用3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯获得化合物13(20mg，收率：76.2％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(喹喔啉-2-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(25)
获得化合物25(20mg，收率：52.2％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(6,7-二甲氧基喹啉-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(37)
获得化合物37(15mg，收率：47.2％)，为浅黄色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(喹唑啉-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(49)
使用3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯获得化合物49(62mg，收率：61.3％)，为白色固体：
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(喹唑啉-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(63)
获得化合物63(28mg，收率：73.3％)，为浅黄色固体：
实施例3
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(哌嗪-1-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺盐酸盐(2)
在N
如实施例1所示，将化合物2A转化为化合物2D。获得化合物2D(0.10g，收率：72.2％)，为黄色固体。
向化合物2D(100mg，206.38μmol)在EtOAc(2mL)中的溶液中加入HCl/EtOAc(4M,4mL)，将混合物在25℃下搅拌4h。将反应混合物浓缩，得到残余物。将残余物在CH
实施例4
化合物6-7
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噻唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(7)
向7-溴苯并[d]噻唑(900mg，4.2mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液中加入KOAc(843mg，8.5mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二噁硼烷)(1.07g，4.2mmol)、Pd(dppf)Cl
使用实施例1中所述的方法，将化合物6A转化为化合物6。获得化合物6(50mg，收率：33％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噻唑-7-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(7)
使用实施例1中所述的方法，将化合物6A和4A转化为化合物7。获得化合物7(60mg，收率：51.6％)，为黄色固体。
实施例5
化合物32、62、69和61
将K
得到异构体1(化合物32A，R
得到异构体2(化合物32B，R
将KOAc(1.12g，11.37mmol)添加至化合物32A(1.2g，5.69mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二噁硼烷)(2.17g，8.53mmol)在DMF(25mL)中的混合物中，然后添加Pd(dppf)Cl
将KOAc(1.2g，12.3mmol)添加至化合物32B(1.3g，6.2mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二噁硼烷)(2.4g，9.3mmol)在DMF(20mL)中的混合物中。将氮气鼓泡通过混合物。然后加入Pd(dppf)Cl
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(32)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32C和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物32。获得化合物32(60mg，收率：60.0％)，为浅黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(62)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32C和中间体4A转化为化合物62。获得化合物62(96mg，收率：48.9％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-甲基-2H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(69)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32D和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物69。获得化合物69(230mg，收率：69.7％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(61)
使用实施例1中所述的方法，将化合物32D和中间体4A转化为化合物61。获得化合物61(250mg，收率：85.9％)，为浅黄色固体。
实施例6
化合物33-34、77
将K
得到异构体1(化合物33A，R
得到异构体2(化合物33B，R
将KOAc(1.35g，13.74mmol)添加至化合物33A(1.45g，6.87mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二噁硼烷)(2.62g，10.31mmol)在DMF(25mL)中的混合物中。向混合物中通入氮气，并加入Pd(dppf)Cl
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(1-甲基-1H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(33)
使用实施例1中所述的方法，将化合物33C和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物33。获得化合物33(70mg，收率：43.6％)，为浅黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(1-甲基-1H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(34)
使用实施例1中所述的方法，将化合物33C和中间体4A转化为化合物34。获得化合物34(30mg，收率：27.0％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-甲基-2H-吲唑-7-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(77)
使用实施例1中所述的方法，将2-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-2H-吲唑(使用与33C相同的方法由中间体33B制备)和中间体4A转化为化合物77。获得化合物77(30mg，收率：42.6％)，为白色固体。
实施例7
化合物17、31、51、70、24、26和55
向3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(1g，3.57mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加NaOH(714mg，17.85mmol)在H
向化合物17A(0.85g，3.37mmol)和中间体1D(856mg，3.71mmol，HCl)在DMF(20mL)中的溶液中加入HBTU(1.53g，4.05mmol)和DIEA(13.49mmol，2.35mL)，将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物在0℃下用水(50mL)稀释，形成沉淀，并将固体过滤并真空干燥。残余物无需进一步纯化即可用于下一步。获得化合物17B(1.2g，收率：83.0％)，为白色固体。
向化合物17B(1.2g，2.80mmol)和(3-甲氧基羰基苯基)硼酸(756mg，4.20mmol)在二噁烷(30mL)和H
向化合物17C(120mg，274.94μmol)在MeOH(3mL)中的溶液中加入CH
向化合物17D(60mg，137.78μmol)在DMSO(3mL)和DCM(50mL)中的溶液中加入DMP(234mg，551.12μmol)，将混合物在25℃搅拌1h。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，并通过添加Na
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噁唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(31)
使用实施例1中所述的方法，将7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(使用与33C相同的方法由7-溴苯并[d]噁唑制备)和中间体17B转化为化合物31。获得化合物31(60mg，收率：60.2％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噻唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(51)
使用实施例1中所述的方法，将化合物苯并[d]噻唑-4-基硼酸(使用与33C相同的方法由4-溴苯并[d]噻唑制备)和中间体17B转化为化合物51。获得化合物51(75mg，收率：69.6％)，为浅黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噻唑-4-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(70)
使用实施例1中所述的方法，将化合物苯并[d]噻唑-4-基硼酸(使用与33C相同的方法由4-溴苯并[d]噻唑制备)和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物70。获得化合物70(50mg，收率：48.5％)，为浅黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(24)
使用实施例1中所述的方法，将化合物2-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物24。获得化合物24(140mg，收率：79.8％)，为浅黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-甲基呋喃-3-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(26)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基呋喃-3-基)-1,3,2-二噁硼烷和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物26。获得化合物26(128mg，收率：95.87％)，为浅黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(55)
使用实施例1中所述的方法，将化合物2-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷和中间体17B转化为化合物55。获得化合物55(22mg，收率：26.5％)，为白色固体。
实施例8
化合物68和71
合并三(三氟甲磺酸钇)(249mg，0.5mmol)和原甲酸三乙酯(15mL，93.1mmol)。向该混合物中加入2-氨基-3-溴苯酚(1.8g，9.31mmol)在DMSO(20mL)和吡啶(1.5mL，18.6mmol)中的溶液。将反应混合物在加热块中于60℃搅拌18h。向混合物中加入H
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噁唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(68)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑(68B)(使用与33C相同的方法由68A制备)和中间体17B转化为化合物68。获得化合物68(10mg，收率：6.7％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(苯并[d]噁唑-4-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(71)
使用实施例1中所述的方法，将化合物68B和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物71。获得化合物71(124mg，收率：77.99％)，为浅黄色固体。
实施例9
化合物35和50
将TEA(1.5mL，10.64mmol)添加至2-氨基-3-溴苯酚(1g，5.32mmol)和CDI(1.72g，10.64mmol)的THF(20mL)混合物中。将混合物在60℃下搅拌18小时。将反应混合物蒸发，并用二氯甲烷(60mL)稀释。有机层用1M盐酸(2×30mL)和水(30mL)洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到化合物35A(1.1g，收率96.64％)，为红色固体，将其直接用于下一步。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-甲基-3-(2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(35)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(35B)(使用与33C相同的方法由35A制备)和中间体17B转化为化合物35。获得化合物35(18mg，收率：29.62％)，为黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-1-(二氟甲基)-3-(2-氧代-2,3-二氢苯并[d]噁唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(50)
使用实施例1中所述的方法，将化合物35B和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物50。获得化合物50(20mg，收率：22.8％)，为白色固体。
实施例10
化合物16
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1H-吲唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(16)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吲唑(16A)(使用与33C相同的方法由4-溴-1H-吲唑制备)和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物16。获得化合物16(60mg，收率：77.4％)，为白色固体。
实施例11
化合物39
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1H-吲唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(39)
在0℃下，向7-溴-1H-吲唑(1g，5.1mmol)在THF(15mL)中的混合物中添加NaH(406mg，10.2mmol，纯度60％)。将混合物在0℃下搅拌1h，然后加入SEM-Cl(1.35mL，7.62mmol)。添加后，使反应温度缓慢升至室温(22℃)，并将混合物在22℃搅拌15h。通过添加饱和NH
使用实施例1中所述的方法，将化合物7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-吲唑(39B)(使用与33C相同的方法由39A制备)和3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物39F。获得化合物39F(203mg，收率：70.49％)，为黄色固体。
将HCl/EtOAc(4M，4mL)加入到化合物39F(160mg，0.3mmol)的混合物中。将混合物在30℃下搅拌3h。将混合物过滤，并将滤饼真空浓缩。得到化合物39(66mg，54.1％收率)，为白色固体。
实施例12
化合物9、47和48
向3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(4g，14.28mmol)和1H-苯并[d]咪唑(2g，16.93mmol)在DMF(40mL)中的溶液中添加Cs
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(9)
使用实施例1中所述的方法，将化合物49A和中间体1D转化为化合物9。获得化合物9(70mg，收率：46.85％)，为白色固体。
将4-氟苯-1,2-二胺(1g，7.93mmol)和HCOOH(10mL)的混合物在90℃下搅拌2h。用5N NaOH将溶液的pH调节至约7。用EtOAc(50mLx3)萃取混合物。收集有机物，用Na
使3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯和中间体47A经历与中间体9A相同的反应条件，该反应产生产物47B和48A。产物通过制备型HPLC(HCl)纯化，得到400mg褐色固体混合物，将其通过SFC(柱：AD(250mm*30mm，5um)；流动相：[0.1％NH
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(6-氟-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(47)
使用实施例1中所述的方法，将化合物47B和中间体1D转化为化合物47。获得化合物47(50mg，收率：48.0％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(5-氟-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(48)
使用实施例1中所述的方法，将化合物48A和中间体1D转化为化合物48。获得化合物48(40mg，收率：28.2％)，为白色固体。
实施例13
化合物20和21
向2-(呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷(1g，5.15mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入NCS(723mg，5.41mmol)。将混合物在25℃下搅拌4h。所得溶液用10％Na
在N
化合物20C:
化合物21A:
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2-氯呋喃-3-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(20)
使用实施例1中所述的方法，将化合物20C转化为化合物20。获得化合物20(90mg，收率：70.6％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(5-氯呋喃-3-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(21)
使用实施例1中所述的方法，将化合物21A转化为化合物20。获得化合物21(30mg，收率：65.7％)，为白色固体。
实施例14
化合物36
向2-(呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷(1g，5.10mmol)在DMF(15mL)中的溶液中加入NCS(1.50g，11.21mmol)。将混合物在100℃下搅拌2小时。所得溶液用10％Na
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2,5-二氯呋喃-3-基)-1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(36)
使用实施例1中所述的方法，将化合物36A和中间体70A(使用与17B相同的方法由4A制备)转化为化合物36。获得化合物36(100mg，收率：71.7％)，为白色固体。
实施例15
化合物19和15
在氮气下，向2-(呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷(500mg，1.79mmol)和3-呋喃基硼酸(250mg，2.23mmol)在二噁烷(20mL)和水(1mL)中的溶液中加入K
向化合物19A(100mg，454.08μmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(68mg，509.24μmol)。将混合物在25℃下搅拌2h。将反应用H
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2-氯呋喃-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(19)
使用实施例1中所述的方法，将化合物19B转化为化合物19。获得化合物19(40mg，收率：35.0％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2,5-二氯呋喃-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(15)
向化合物19A(50mg，227.04μmol)的DMF(2mL)溶液中加入NCS(68mg，509.24μmol)。将混合物在100℃下搅拌1.5h。将反应用H
使用实施例1中所述的方法，将化合物15A转化为化合物15。获得化合物15(35mg，收率：47.2％)，为白色固体。
实施例16
化合物23、3、46、52和79
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(23)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-溴-1,2,5-噻二唑-3-羧酸甲酯和2-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷转化为化合物23。获得化合物23(110mg，收率：65.02％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(4-氟苯基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(3)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-溴-1,2,5-噻二唑-3-羧酸甲酯和(4-氟苯基)硼酸转化为化合物3。获得化合物3(235mg，收率：68.1％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-甲基呋喃-3-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(46)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-氯-1,2,5-噻二唑-3-羧酸乙酯和4,4,5,5-四甲基-2-(2-甲基呋喃-3-基)-1,3,2-二噁硼烷转化为化合物46。获得化合物46(45mg，收率：42.84％)，为浅黄色固体。
向4-氯-1,2,5-噻二唑-3-羧酸乙酯(3.0g，15.57mmol)在二噁烷(50mL)和H
向化合物52A(1.5g，6.69mmol)的DMF(20mL)溶液中加入NCS(1.0g，7.49mmol)。将混合物在25℃下搅拌16小时。将反应用H
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(5-氯呋喃-3-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(52)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(5-氯呋喃-3-基)-1,2,5-噻二唑-3-羧酸乙酯(52C)转化为化合物52。获得化合物52(60mg，收率：62.8％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氯呋喃-3-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(79)
使用实施例1中所述的方法，将化合物4-(2-氯呋喃-3-基)-1,2,5-噻二唑-3-羧酸乙酯(52B)转化为化合物79。获得化合物52(50mg，收率：52.3％)，为浅黄色固体。
实施例17
化合物85-86、57和82
N-(1-(噁唑-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(85)
在0℃下在N
在氮气下用BH
将化合物85B(170mg，533.97μmol)在EtOAc(5mL)中的混合物与HCl/EtOAc(4M，10mL)混合，并在室温(5-15℃)下搅拌1h。减压除去溶剂，得到化合物85C(150mg，粗品，HCl)，为白色固体。该产物直接用于下一步。
将4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-羧酸(121.4mg，588.9μmol)、化合物85C(150mg，588.90μmol，HCl)、DIEA(0.3mL，1.77mmol)和HBTU(245.67mg，647.79μmol)在DMF(10mL)中的混合物在5-15℃下搅拌3h。将反应用H
向化合物85D(50mg，123.01μmol)在DCM(20mL)中的混合物中，添加DMP(156.5mg，369.04μmol)，并在室温(5-15℃)下搅拌。1.5小时后，添加DMP(100mg)，并将反应在30℃下搅拌过夜(16h)。将反应用DCM(20mL)稀释，用饱和Na
N-(1-(苯并[d]噁唑-2-基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(86)
在-10℃下，向1,3-苯并噁唑(573.4mg，4.81mmol)在THF(20mL)中的溶液中添加i-PrMgCl(2.0M，1.60mL)，将反应混合物在-10℃下搅拌1小时。以在THF(20mL)中的溶液的形式加入化合物85A(400mg，1.60mmol)，并将反应混合物在-10℃下搅拌2h，然后在5-15℃下搅拌12h。将反应浓缩，并将残余物用EtOAc(60mL)稀释，用盐水(30mL×2)洗涤，浓缩，得到残余物。将残余物用EtOAc(100mL)稀释，并用盐水(30mL×3)洗涤，浓缩，得到粗产物。粗产物通过硅胶柱色谱法纯化(PE：EA＝1：0至5：1)，得到化合物86A(270mg，收率：45％)，为黄色油状物。
使用关于化合物85所述的方法，将化合物86A转化为化合物86。获得化合物86(180mg，收率：78.53％)，为白色固体。
N-(1-(噁唑-2-基氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(57)
使用关于化合物85所述的条件，将(叔丁氧基羰基)苯基丙氨酸和噁唑-2-胺偶联，得到中间体57A，将其转化为化合物57。获得化合物57(35mg，收率：11.2％)，为白色固体。
N-(1-氰基-2-苯基乙基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(82)
向2-苯基乙醛(3g，24.97mmol，1.95mL)在MeOH(70mL)中的搅拌溶液中添加NH
使用关于化合物85所述的条件，将化合物82A与4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-羧酸偶联，得到化合物82。获得化合物82(130mg，收率：40.1％)，为白色固体。
实施例18
化合物41、40、38、67、40、65、42、64、74、72、106和107
向(1-氰基-1-羟基-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(27g，97.7mmol)在二噁烷(150mL)中的混合物中加入HCl(6N，360mL)。将混合物在100℃下搅拌12h。使水解反应冷却至室温，然后真空浓缩至120mL。将水相用NaOH(固体)碱化直至pH～11-12。碱化的水相无需纯化即可用于下一步。
向碱化的化合物41A(97.7mmol)在H
向化合物41B(11g，37.3mmol)在DMF(80mL)中的混合物中加入K
向化合物41C(4g，12.9mmol)在EtOAc(10mL)中的混合物中加入HCl/EtOAc(4M，40mL)。将混合物在25℃下搅拌3h。将混合物真空浓缩。将残余物用EA(20mL)研磨。收集固体并真空干燥，得到化合物41D(2.68g，84.3％收率，HCl)，为白色固体。
3-(1-环丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸甲酯(41)
和
3-(1-环丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(60)
向1-环丙基-3-苯基-1H-吡唑-4-羧酸(0.3g，1.3mmol)和中间体41D(387.5mg，1.6mmol，HCl)在DMF(10mL)中的混合物中加入HBTU(500mg，1.3mmol)和DIEA(750μL，4.31mmol)。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物浓缩，然后用H
向化合物41E(0.54g，1.3mmol)在DCM(50mL)中的混合物中添加DMP(1.6g，3.9mmol)。将混合物在25℃下搅拌50min。将反应用DCM(20mL)稀释，并用40mL饱和Na
向化合物41(0.15g，359.3μmol)在AcOH(2mL)中的混合物中一次性加入HCl(12M，2mL)。将混合物在40℃下搅拌1h。将混合物用H
2-氧代-4-苯基-3-(4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺基)丁酸甲酯(38)
和
2-氧代-4-苯基-3-(4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺基)丁酸(67)
使用与化合物41相同的方法，由4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-羧酸和中间体41D制备化合物38。得到化合物38(0.440g，收率：88.4％)，为白色固体，其无需纯化即可用于下一步。
使用与化合物60相同的方法，由化合物38制备化合物67。得到化合物67(0.123g，收率82.89％)，为白色固体。
2-氧代-3-(4-(2-氧代-2,3-二氢苯并[D]噁唑-4-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺基)-4-苯基丁酸(106)
使用与化合物41相同的方法，由4-溴-1,2,5-噻二唑-3-羧酸和中间体41D制备化合物106A。得到化合物106A(0.640g，收率：33.42％)，为白色固体，其无需纯化即可用于下一步。MS(ESI)m/z(M+H)
向化合物106A(540mg，1.35mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)苯并[d]噁唑-2(3H)-酮(422.69mg，1.62mmol)在二噁烷(30mL)和H
在0℃下，向化合物106B(490mg，1.11mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中滴加SOCl
使用与化合物106相同的方法，由化合物106C制备化合物106。得到化合物106(0.040g，收率37.49％)，为白色固体。
3-(4-(2,2-二氟苯并[D][1,3]二氧代L-4-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(107)
将2,2-二氟-1,3-苯并二噁唑(3g，18.98mmol)溶解在THF(60mL)中，并将所得溶液冷却至-78℃。逐滴加入仲丁基锂(1.3M，15mL)，并将反应混合物在-78℃搅拌1.5h。加入硼酸三甲酯(2.44mL，21.63mmol)，并将混合物缓慢温热至-30℃保持1h。将反应混合物用2NHCl溶液淬灭，调节至pH～2-3，并用H
在N
在0℃下，向化合物107B(726mg，2.31mmol)在THF(6mL)和H
使用与化合物67相同的方法，由化合物107C制备化合物107。得到化合物107(0.014g，收率15.12％)，为白色固体。
3-(3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸甲酯(40)
和
3-(3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(65)
使用与化合物41相同的方法，由3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸和中间体41D制备化合物40。得到化合物40(0.520g，收率：87.1％)，为黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。
使用与化合物60相同的方法，由化合物40制备化合物65。得到化合物65(60mg，收率40.5％)，为白色固体。
3-(4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸甲酯(42)
和
3-(4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(64)
使用与化合物41相同的方法，由4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体41D制备化合物42。得到化合物42(0.290g，收率：67.0％)，为淡黄色固体，其无需纯化即可用于下一步。
使用与化合物60相同的方法，由化合物42制备化合物64。得到化合物64(40mg，收率50.4％)，为白色固体。
甲基-3-(3-(3-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸酯(74)
和
3-(3-(3-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(72)
使用与化合物41相同的方法，由4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体41D制备化合物74。得到化合物74(0.150g，收率75.3％)，为淡黄色固体，
使用与化合物60相同的方法，由化合物74制备化合物72。得到化合物72(50mg，收率64.7％)，为白色固体。
实施例19
化合物58、75、76、73、78、81、84、88、90、91、92、98、105和108
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-甲基-4-(萘-1-基)噁唑-5-甲酰胺(58)
(烧瓶A)向1-萘甲酸(25g，145.2mmol)在CH
向化合物58A(18g，74.3mmol，1当量)在EtOH(150mL)中的混合物中一次性加入NH
向化合物58B(3g，12.4mmol)在甲苯(20mL)中的搅拌溶液中加入吡啶(10mL，124.3mmol)，并将混合物反应冷却至0℃。逐滴加入乙酰氯(6.7mL，93.3mmol)，并将混合物在0℃在氮气氛下搅拌6h。通过LCMS监测到了化合物58B，因此向反应混合物中加入额外的乙酰氯(20mL，279.8mmol)，并将混合物在氮气气氛下于0℃搅拌12h。将反应用盐水(30ml)淬灭，用EA(50ml×3)萃取，经Na
向化合物58C(0.5g，1.8mmol)在2,2,2-三氟乙醇(15mL)中的搅拌溶液中加入[双(三氟乙酰氧基)碘]苯(986.6mg，2.3mmol)。将混合物在25℃下搅拌30分钟。将反应用饱和NaHCO
水解化合物58D，得到中间体58E，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物58。得到化合物58(0.140g，收率64.8％)，为黄色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氟-3-甲氧基苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(75)
使用与化合物58所述相同的方法，由2-氟-3-甲氧基苯甲酸制备化合物75，得到化合物75。得到化合物75(0.160g，收率53.6％)，为黄色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2,6-二氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(76)
使用与化合物58所述相同的方法，由2,6-二氟苯甲酸制备化合物76，得到化合物76。得到化合物76(0.153g，收率53.8％)，为黄色固体，
N-(4-氨基-1-(4-氟苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(73)
使用与实施例1所述相同的方法，由4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体73A制备化合物73，得到化合物73。得到化合物73(0.160g，收率73.08％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(78)
使用与化合物58所述相同的方法，由4-(2,5-二甲基呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-羧酸和中间体1D制备化合物78，得到化合物78。得到化合物78(65mg，收率40.9％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2,5-二氯呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(81)
使用与化合物58D所述相同的方法，由呋喃-3-羧酸制备化合物81A，得到81A。得到化合物81A(1.28g，收率64.2％)，为白色固体，
向化合物81A(300mg，1.36mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(580mg，4.34mmol)。将混合物在100℃下搅拌6小时。将反应用H
水解化合物81B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物81。得到化合物81(68mg，收率88.3％)，为淡黄色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-甲基-4-(2-甲基呋喃-3-基)噁唑-5-甲酰胺(84)
使用与化合物58所述相同的方法，由2-甲基呋喃-3-羧酸经由中间体84A和84B制备化合物84，得到化合物84。得到化合物84(60mg，收率37.52％)，为白色固体。MS(ESI)m/z(M+1)
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(苯并[b]噻吩-4-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(88)
使用与化合物58所述相同的方法，由苯并[b]噻吩-4-羧酸经由中间体88A和88B制备化合物88，得到化合物88。得到化合物88(110mg，收率92.6％)，为黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氯呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(90)
向化合物90A(400mg，1.81mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(266mg，1.99mmol)。将混合物在15℃下搅拌16h。然后将混合物在25℃下搅拌16h。将反应用H
水解化合物90B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物90。得到化合物90(90mg，收率51.8％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(苯并[b]噻吩-7-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(91)
使用与化合物58所述相同的方法，由苯并[b]噻吩-7-羧酸经由中间体91A和91B制备化合物91，得到化合物91。得到化合物91(15mg，收率49.6％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(5-氯呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(92)
向化合物90A(400mg，1.81mmol)的DMF(3mL)溶液中加入NCS(266mg，1.99mmol)。将混合物在15℃下搅拌16h。然后将混合物在25℃下搅拌16h。将反应用H
水解化合物92B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物92。得到化合物92(45mg，收率61.3％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(5-氯-2-甲基呋喃-3-基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(98)
向化合物98A(100mg，0.42mmol)的DMF(5mL)溶液中加入NCS(57mg，0.42mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h。将混合物用H
水解化合物98B，得到中间体酸，使用与实施例1中所述相同的方法，使其与中间体1D反应，得到化合物98。得到化合物98(80mg，收率40.15％)，为淡黄色固体，MS(ESI)m/z(M+1)
2-(5-(乙氧基羰基)-2-甲基噁唑-4-基)-N,N,N-三甲基苯甲铵(105)
使2-硝基苯甲酸经历化合物58所述的条件，得到化合物105A。得到化合物105A(480mg，60.4％收率)，为黄色油状物。
向化合物105A(200mg，724.00μmol)在EtOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(45mg，72.40μmol，10％纯度)和NH
向化合物105B(120mg，487.29μmol)和MeI(2.77g，19.49mmol，1.21mL)的丙酮(3mL)溶液中加入K
3-(4-(2,6-二氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺基)-2-氧代-4-苯基丁酸(108)
使用与化合物58所述相同的方法，由2,6-二氟苯甲酸制备化合物108，得到化合物108。得到化合物108(0.025g，收率25.17％)，为白色固体，
实施例20
化合物80、83、87、89、95、96、97和115
N-(4-氨基-1-(2-氟苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(80)
向2-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸(5.77g，31.50mmol)在二噁烷(45mL)中的溶液中加入NaOH(1.95g，48.82mmol)的H
向化合物80A(8.58g，30.29mmol)和N-甲氧基甲胺(4.14g，42.41mmol，HCl)、HOBt(4.50g，33.32mmol)在CHCl
在0℃和N
在0℃下，向化合物80C(2g，7.48mmol)和CsF(568mg，3.74mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中滴加三甲基甲硅烷基甲腈(890.76mg，8.98mmol，1.12mL)。将混合物温热至20℃并搅拌5h。将反应混合物浓缩，然后用H
向化合物80D(530mg，1.80mmol)在DMSO(10mL)中的溶液中滴加K
向化合物80E(1.39g，4.45mmol)的EtOAc(15mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M，15mL)。将混合物在25℃下搅拌2小时。过滤沉淀物，并将滤饼用EA(20mL)洗涤。将固体减压干燥。得到化合物80F(933mg，收率：84.3％，HCl)，为淡黄色固体。
使用与中间体58E和1D相同的条件，将化合物80F和4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后使用实施例1中所述的步骤得到化合物80。得到化合物80(95mg，收率60.7％)，为白色固体，
N-(4-氨基-1-(2-氯苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(83)
将化合物2-氨基-3-(2-氯苯基)丙酸转化为中间体83F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物83。得到化合物83(120mg，收率36％)，为白色固体，
N-(4-氨基-1-(3-氟苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(87)
将化合物2-氨基-3-(3-氟苯基)丙酸转化为中间体87F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物87。得到化合物87(160mg，收率55％)，为淡黄色固体，
N-(4-氨基-1-(3-氯苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(89)
将化合物2-氨基-3-(3-氯苯基)丙酸转化为中间体89F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物89。得到化合物89(70mg，收率31.5％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-(4-(三氟甲基)苯基)丁烷-2-基)-3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(95)
将化合物2-氨基-3-(4-(三氟甲基)苯基)丙酸转化为中间体95F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物95。得到化合物96(70mg，收率55.13％)，为淡黄色固体。
N-(4-氨基-1-(4-氯苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-甲酰胺(96)
将化合物2-氨基-3-(4-氯苯基)丙酸转化为中间体96F，然后使用与化合物80相同的条件，使其与4-(2-氟苯基)-2-甲基噁唑-5-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物96。得到化合物96(120mg，收率77％)，为白色固体。
N-(4-氨基-1-(4-氯苯基)-3,4-二氧代丁烷-2-基)-3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(97)
使用与化合物80相同的条件，将化合物3-氨基-4-(4-氯苯基)-2-羟基丁酰胺与3-(2-氟苯基)-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物97。得到化合物97(120mg，收率65.3％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-(2-氧代吲哚啉-4-基)-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(115)
将4-溴吲哚啉-2-酮(500.0mg，2.36mmol)、B
将4-氯-1,2,5-噻二唑-3-羧酸乙酯(446.0mg，2.32mmol)、化合物115A(600.0mg，2.32mmol)、钯；三叔丁基膦(118.3mg，231.56μmol)、Cs
向化合物115B(480.0mg，1.66mmol)在THF(10mL)和MeOH(10mL)中的溶液中加入LiOH.H
使用与化合物80相同的条件，将化合物115C与中间体80F偶联，然后进一步使用实施例1中所述的方法，得到化合物115。得到化合物115(30mg，收率34.3％；91.1％纯度)，为白色固体。
实施例21
化合物5和8
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-(苯并[d][1,3]二氧代L-4-基)异噁唑-4-甲酰胺(5)
烧瓶1：向苯并[d][1,3]二噁唑-4-羧酸(2g，12.04mmol)的CH
烧瓶2：在15分钟内，向丙二酸单乙酯钾盐(2.70g，15.89mmol)在CH
将化合物5A(1.1g，4.66mmol)和DMFDMA(2.47mL，18.63mmol)在DMF(15mL)中的混合物在80℃下搅拌3h。将混合物真空浓缩，得到化合物5B(1.2g，88.5％收率)，为棕色油，其无需纯化即可用于下一步。
向化合物5B(1.20g，4.12mmol)和盐酸羟胺(573mg，8.24mmol)在MeOH(7mL)和MTBE(7mL)中的混合物中添加NaOAc(676mg，8.24mmol)。将混合物在25℃下搅拌17h。向混合物中添加饱和NH
向化合物5C(244mg，0.93mmol)在AcOH(5mL)中的混合物中加入HCl(12M，5mL)。将混合物在118℃搅拌4.5h。将混合物在真空下浓缩。向混合物中添加H
使用与中间体58E和1D相同的条件，将化合物5D和中间体1D偶联，然后使用实施例1中所述的步骤得到化合物5。得到化合物5(40mg，收率20.8％)，为淡黄色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-(2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧代L-4-基)异噁唑-4-甲酰胺(8)
使用关于化合物5所述的方法，将化合物2,2-二氟苯并[d][1,3]二噁唑-4-羧酸转化为中间体8D，然后使用化合物58中所述的方法，将中间体8D与中间体1D偶联，得到化合物8。得到化合物8(60mg，收率54％)，为白色固体。
实施例22
化合物11、27、30、29、45和59
向2-氯喹唑啉(1g，6.08mmol)和K
向化合物11A(490mg，3.06mmol)和2,4-二氧戊酸乙酯(484mg，3.06mmol)的溶液中加入HOAc(5mL)。将混合物在100℃下搅拌16h。将混合物浓缩，用EA(25mL)稀释并过滤。有机层用NaHCO
化合物11B:
化合物11C:
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-甲基-1-(喹唑啉-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(11)
使化合物11B经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物11。得到化合物11(45mg，收率41.4％)，为淡黄色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-甲基-1-(喹唑啉-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(27)
使化合物11C经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物27。得到化合物27(28mg，收率77.1％)，为淡黄色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-甲基-1-(5-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(30)
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-5-苯基嘧啶制备化合物30B。然后，使化合物30B经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物30。得到化合物30(130mg，收率82.9％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-甲基-1-(5-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(29)
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-5-苯基嘧啶制备化合物30C。然后，使化合物30C经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物29。得到化合物29(50mg，收率33.8％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-甲基-1-(4-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(45)
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-4-苯基嘧啶制备化合物45B。然后，使化合物45B经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物45。得到化合物45(110mg，收率73.5％)，为白色固体，
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-5-甲基-1-(4-苯基嘧啶-2-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(59)
使用关于化合物11所述的方法，由2-氯-4-苯基嘧啶制备化合物45C。然后，使化合物45C经历如实施例19中所述的用于将中间体58D转化为化合物58的程序，得到化合物59。得到化合物59(25mg，收率11.9％)，为黄色固体，
实施例23
化合物43-44
[甲基4-(4-((7,9-二氧代-6,10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-λ
在N
在0℃下，向TsOH·H
向化合物43B(900mg，2.60mmol)在AcOH(15mL)中的溶液中加入过硼酸钠四水合物(4g，26.00mmol)，将混合物在50℃下搅拌10h。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，过滤，将滤液用水(100mL)稀释，并用DCM(40mL×2)萃取三次。合并的有机萃取物用Na
向化合物43C(590mg，1.27mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中加入Na
3-(4-((7,9-二氧代-6,10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-λ
使用关于化合物43所述的方法，将化合物3-碘-1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸乙酯转化为化合物44。得到化合物44(120mg，收率57.5％)，为淡黄色固体，
实施例24
化合物56和66
乙基-4-(4-((7,9-二氧代-6,10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-
(烧瓶A)向4-碘苯甲酸(25g，100.80mmol)的CH
向化合物56A(31.5g，99.02mmol)在EtOH(300mL)中的溶液中添加NH
在0℃下，向化合物56B(2g，6.31mmol)的DCE(20mL)溶液中分批加入PhI(OAc)
将化合物56C(220mg，586.42μmol)在AcOH(2mL)和DCE(1mL)中的溶液在90℃搅拌1h。真空除去溶剂。将残余物溶于EtOAc(30mL)，用饱和NaHCO
向化合物56D(0.4g，1.12mmol)的CHCl
乙基-4-(2-((7,9-二氧代-6,10-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基亚基)-
使用与合成中间体58D所述的相同步骤，将化合物2-碘苯甲酸转化为中间体66D。此外，使用与化合物56所述的相同条件，用6,10-二氧杂螺[4.5]癸烷-7,9-二酮处理中间体66D，得到最终化合物66。得到化合物66(90mg，收率15.3％)，为白色固体，
实施例25
化合物103、114和112
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(1-异丙基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(103)
将1-溴-3-氟-2-硝基苯(4.5g，20.45mmol)和异丙胺(1.21g，20.45mmol)的EtOH(20mL)溶液在50℃下搅拌48小时。真空除去溶剂。残余物通过柱纯化(PE：EA＝10∶1)，得到化合物103A(5g，收率：94.34％)，为棕色油状物。
向化合物103A(5g，19.30mmol)的AcOH(60mL)溶液中添加Fe(5.39g，96.49mmol)。将混合物在60℃下搅拌1h。真空除去溶剂。将残余物用饱和NaHCO
向化合物103B(4.4g，19.20mmol)在THF(60mL)中的溶液中加入TEA(5.4mL，38.41mmol)、CDI(6.23g，38.41mmol)。将混合物在20℃下搅拌12h。将混合物用H
向化合物103C(400mg，1.57mmol)和4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二噁硼烷)(B
使用实施例1中所述的方法，将化合物103D和中间体103E转化为化合物103。获得化合物103(70mg，收率：64.6％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(3-异丙基-2-氧代-2,3-二氢苯并[D]噁唑-7-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(114)
向2-氨基-6-溴苯酚(3g，15mmol)的THF(20mL)溶液中加入CDI(5.2g，32mmol)、TEA(4.5mL，32mmol)。然后将混合物在60℃下搅拌18h。将反应减压浓缩以除去溶剂。向反应中加入H
在0℃下，向化合物114A(1.2g，5mmol)的DMF(20mL)溶液中加入Cs
使用实施例1中所述的方法，将化合物103E和中间体114C转化为化合物114。获得化合物114(78mg，收率：77.55％)，为白色固体。
N-(4-氨基-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-3-(2,2-二甲基苯并[D][1,3]二氧代L-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺(112)
向3-溴苯-1,2-二醇(2g，10.58mmol)、丙酮(1mL，12.70mmol)在甲苯(11mL)的冷(0℃)溶液中滴加PCl3(581mg，4.23)，然后将混合物在80℃下搅拌48h。将混合物用H
向化合物112A(300mg，1.31mmol)和B
使用实施例1中所述的方法，将化合物103E和中间体112B转化为化合物114。获得化合物112(41mg，收率：74.51％)，为浅黄色固体。
实施例26
化合物93和104
N-(1-氧代-3-苯基-1-(1H-四唑-5-基)丙烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(93)
向(1-氰基-1-羟基-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，3.62mmol)在DCM(15mL)中的溶液中添加吡啶(6.19mmol，0.5mL)，然后逐滴加入乙酰氯(5.61mmol，0.4mL)，将混合物在10℃下搅拌20h。反应混合物用DCM(20mL)和水(50mL)稀释，水相用DCM(20mL×2)萃取，有机层用1N HCl(30mL)、饱和NaHCO
向化合物93A(500mg，1.57mmol)、Et
向化合物93B(400mg，1.11mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入K
向化合物93C(420mg，1.32mmol)的EA(3mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M，3mL)，将混合物在15℃下搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到残余物。将残余物在EA(3mL)和PE(20mL)中研磨，过滤并真空干燥。获得化合物93D(300mg，收率：89.2％，HCl)，为浅黄色固体。
使用实施例17中所述的方法，将化合物93D和4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-羧酸转化为化合物93。获得化合物93(15mg，收率：37.7％)，为白色固体。
N-(1-氧代-3-苯基-1-(1H-1,2,4-三唑-3-基)丙烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(104)
在0℃下，向(1-氰基-1-羟基-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.81mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入咪唑(246mg，3.62mmol)和TBDMSiCl(2.90mmol，0.35mL)。将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用EA(200mL)稀释，用盐水(200mL)洗涤，经Na
在0℃下，向化合物104A(450mg，1.15mmol)和K
将化合物104B(400mg，978.94μmol)在1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(75.28mmol，10mL)中的溶液在30℃下搅拌1h。将反应混合物在冰水上用水(50mL)稀释，用EA(20mL×3)萃取，将有机层用盐水(30mL×2)洗涤，经Na
向化合物104C(410mg，884.22μmol)在CH
向化合物104D(400mg，924.58μmol)的EA(3mL)溶液中加入HCl/EtOAc(4M,4.62mL)，将混合物在15℃下搅拌2h。将反应混合物浓缩，得到残余物。得到化合物104E(350mg，粗品，HCl)，为黄色固体，其无需进一步纯化即可用于下一步。MS(ESI)m/z(M+H)
使用实施例17中的肽偶联条件，将化合物104E和4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-羧酸偶联，然后使用TBAF脱保护，然后使用实施例17的方法氧化，得到化合物104。获得化合物104(40mg，收率：53.5％)，为白色固体。
实施例27
化合物113、110和109
N-(4-(甲氧基氨基)-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-(3-苯基-1H-吡唑-1-基)烟酰胺(113)
向2-氯烟酸乙酯(2g，10.78mmol)和3-苯基-1H-吡唑(2.33g，16.16mmol)在DMF(30mL)中的溶液中加入K
向化合物113A(1g，3.41mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入NaOH(410mg，10.25mmol)的H
向化合物113B(250mg，942μmol)的DMF(10mL)溶液中添加中间体41D(280mg，1mmol，HCl)、HBTU(428mg，1mmol)、DIEA(500μL，2mmol)。然后将混合物在15℃下搅拌6h。将反应减压浓缩以除去溶剂。向反应中加入H
向化合物113C(300mg，657μmol)在MeOH(10mL)中的溶液中加入LiOH.H
向化合物113D(220mg，497.21μmol)和O-甲基羟胺(330mg，3.95mmol，HCl)在DMF(5mL)和DCM(15mL)中的溶液中加入EDCI(760mg，3.96mmol)、HOBt(540mg，4.00mmol)和TEA(4.96mmol，0.69mL)，将混合物在30℃搅拌20h。将反应混合物浓缩以除去溶剂，然后用水(80mL)稀释，用EA(30mL×3)萃取，有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，经Na
向化合物113E(60mg，127.25μmol)在DMSO(3mL)和DCM(40mL)中的混合物中添加DMP(170mg，400.81μmol)，将混合物在20℃下搅拌2h。将反应混合物用Na
N-(4-(甲氧基氨基)-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-2-(3-苯基-1H-吡唑-1-基)烟酰胺(110)
将3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-羟基-4-苯基丁酸(600mg，2.03mmol)、O-甲基羟基l胺(340mg，4.07mmol，HCl)、EDCI(900mg，4.69mmol)、DIEA(1.11g，8.61mmol，1.50mL)和HOBt(300mg，2.22mmol)在DMF(10mL)中的混合物脱气并用N
向化合物110A(800mg，2.47mmol)在EA(8mL)中的溶液中添加HCl/EtOAc(4M，8mL)。将混合物在20℃下搅拌1.5h。将反应浓缩，得到残余物。将残余物在EA：MTBE＝1：1(20mL)中研磨，过滤，获得滤饼。得到化合物110B(550mg，收率：85.5％，HCl)，为白色固体，
向4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-羧酸(200mg，969.83μmol)和化合物110B(300mg，1.15mmol，HCl)在DMF(10mL)中的溶液中添加HBTU(440mg，1.16mmol)和DIEA(593.60mg，4.59mmol，0.8mL)。将混合物在20℃下搅拌1h。将反应混合物用H
向化合物110C(150mg，363.67μmol)在DCM(30mL)和DMSO(3mL)中的溶液中添加DMP(500mg，1.18mmol，364.96μL)。将混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用DCM(20mL)稀释，用饱和NaHCO
N-(4-(2,2-二甲基肼基)-3,4-二氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(109)
在-40℃下，向化合物67(150mg，393.28μmol)在THF(3mL)中的溶液中加入4-甲基吗啉(59.67mg，589.92μmol，64.86μL)、碳酰氯异丁酯(59.09mg，432.61μmol，56.81μL)。将混合物在-40℃下搅拌30min。在-40℃下，添加1,1-二甲基肼(79.20mg，1.32mmol，0.1mL)在THF(3mL)中的溶液。将混合物在-40℃下搅拌1.5h。将反应混合物用H
实施例28
化合物111
N-(4-羟基-3-氧代-1-苯基丁烷-2-基)-4-苯基-1,2,5-噻二唑-3-甲酰胺(111)
向(1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(8.3g，33.29mmol)在MeOH(200mL)中的溶液中添加TMSCN(66.59mmol，8.33mL)和CsF(2.53g，16.65mmol)。将混合物在25℃下搅拌0.5小时。将混合物浓缩并用EA(200mL)稀释，用H
在0℃下，向化合物111A(9.4g，34.02mmol)在DMF(100mL)中的溶液中添加咪唑(4.63g，68.03mmol)和TBDMSCl(8.20g，54.43mmol)。将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物浓缩并用EA(200mL)稀释，用H
向化合物111B(7g，17.92mmol)在H
向化合物111C(3g，7.62mmol)在DCM(200mL)中的溶液中加入DBU(19.06mmol，2.87mL)。将混合物在20℃下搅拌3h。将合并的混合物用H
向化合物111D(350.0mg，889.25μmol)在EA(5mL)中的溶液中加入HCl/EtOAc(4M，4.45mL)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。将混合物浓缩。将粗产物与EA(10mL)一起研磨，将滤饼真空干燥。获得化合物111E(160.0mg，粗品，HCl)，为白色固体。粗产物直接用于下一步。
向化合物111F(300.0mg，1.45mmol)在DCM(10mL)和THF(10mL)中的溶液中加入1-羟基吡咯烷-2,5-二酮(184.2mg，1.60mmol)和EDCI(334.6mg，1.75mmol)。将混合物在25℃下搅拌2小时。将混合物浓缩，用EA(20mL)稀释，用HCl(1M，20mL)、饱和NaHCO
向化合物111G(80.0mg，263.77μmol)在DME(10mL)中的溶液中添加DIEA(791.31μmol，140μL)和3-氨基-1-羟基-4-苯基-丁烷-2-酮(111E)(56.9mg，263.77μmol，HCl)。将混合物在25℃下搅拌1小时。将混合物浓缩。残余物通过制备型HPLC纯化(碱性条件)。得到化合物111(15.0mg，15.3％收率)，为白色固体。
生物数据
实施例29
通过连续荧光测定法来评估钙蛋白酶1、2和9的活性及其抑制。对SensoLyte520钙蛋白酶底物(Anaspec Inc)进行了优化用于检测钙蛋白酶活性。该底物包含内部淬火的5-FAM/QXLTM 520FRET对。钙蛋白酶1、2和9将FRET底物切割成两个独立的片段，导致5-FAM荧光增加，其与钙蛋白酶活性成正比。
测定通常使用如下自动化液体处理在黑色384孔板中设置。钙蛋白酶测定碱性缓冲液通常含有50mM Tris，pH 7.5、100mM NaCl和1mM DTT。将抑制剂在DMSO中连续稀释，并用于在上述缓冲液中与钙蛋白酶一起建立2x混合物。在环境温度(25℃)孵育后，通过在相同缓冲液中加入荧光肽底物和CaCl
通过使用细胞渗透性和前荧光钙蛋白酶底物Suc-LLVY-AMC(Sigma-Aldrich Inc)的均相荧光测定法来评估SH-SY5Y细胞中的钙蛋白酶活性及其抑制。在细胞内钙蛋白酶切割Suc-LLVY-AMC后，荧光氨基-甲基-香豆素(AMC)被释放到培养基中，导致荧光信号的连续增加，其与细胞内钙蛋白酶活性成正比。
测定通常通过如下方法设置：在含有1％血清的RPMI-1640中以40k/孔在黑色384孔板中接种SH-SY5Y细胞，然后37℃过夜孵育。第二天早上，将细胞与连续稀释的化合物一起预孵育30分钟，然后加入100μM的Suc-LLVY-AMC底物。使用FLIPR Tetra平板读数器(Molecular Devices Inc)监测AMC荧光的连续增加，并测量斜率以报告钙蛋白酶活性。通常将剂量响应曲线(速率对log抑制剂浓度)拟合为4参数逻辑函数以提取IC50值。
还通过基于蛋白质印迹的测定法来评估SH-SY5Y细胞中的钙蛋白酶活性及其抑制，该基于蛋白质印迹的测定法测量非红细胞血影蛋白(SBDP-150)的α链的钙蛋白酶特异性分解产物。添加钙离子载体A23187用于诱导钙蛋白酶活性和SBDP-150形成。
这些测定通常通过如下方法设置：在含有10％血清的DMEM中以150k/孔在96孔板中接种SH-SY5Y细胞，然后37℃孵育24小时。然后将细胞与连续稀释的化合物一起预孵育60分钟，然后加入25μM A23187并进一步孵育90分钟。在RIPA缓冲液中提取总细胞蛋白，在凝胶上样缓冲液中煮沸并在SDS-PAGE凝胶上电泳。通过蛋白质印迹(干转移)处理凝胶以定量SBDP-150(AA6抗体，Enzo Inc)和GAPDH或HSP90(作为上样对照)。将标准化的SBDP-150水平对log抑制剂浓度作图，得到剂量响应曲线，通常将其拟合为4参数逻辑函数以提取IC50值。
钙蛋白酶抑制
表2.钙蛋白酶抑制测定
A栏：人钙蛋白酶1/NS1 IC50
B栏：人钙蛋白酶2/NS1 IC50
C栏：人钙蛋白酶9/NS1 IC50
D栏：SH-SY5Y Spectrin IC50
E栏：SH-SY5Y+AMC IC50
A：<3μM；
B：3-10μM；
C：>10μM；
D：<10μM；
E：10-25μM；
F：>25μM
ND：未测定
四氯化碳诱导的肝纤维化是用于评估新型抗纤维化疗法广泛使用和接受的模型。在Lee,J Clin Invest,1995和Tsukamoto,Semin Liver Dis,1990中描述了通过四氯化碳施用来诱导肝纤维化的方法。简言之，通过每周两次持续4周腹膜内注射施用1mg/kg四氯化碳(Sigma Aldrich，在玉米油或橄榄油中1:7稀释)攻击雄性C57BL/6小鼠。在第28天对小鼠实施安乐死。在另一种实施方案中，通过每周三次持续8-12周腹膜内注射向Wistar大鼠施用四氯化碳。在研究开始后8-12，在实验结束时对大鼠实施安乐死。
在整个研究的几个时间点和研究结束时，通过心脏穿刺收集血液并将其加工成血清，用于评估肝酶(包括ALT、AST、ALP等)。收集所有动物的肝组织并通过浸入10％中性缓冲福尔马林中固定、处理、石蜡包埋、切片、封片，并使用标准组织学方法用Masson'sTrichrome(Tri)或Picrosirius Red(PSR)染色以评估纤维化严重程度。
在测试开始前，雌性C57BL/6小鼠(Harlan，4-6周龄)将自由获取食物和水，并使其适应环境至少7天。适应后，将小鼠麻醉并进行单侧输尿管梗阻(UUO)手术或对左肾进行假手术。简而言之，进行纵向左上切口以使左肾暴露。定位肾动脉并在动脉和输尿管之间穿过6/0丝线。将线绕在输尿管周围并打结3次，确保输尿管完全结扎。将肾脏放回至腹部，缝合腹部肌肉并将皮肤缝合。在UUO手术后4、8、14、21或28天对所有动物实施安乐死。处死后，通过心脏穿刺收集血液，收集肾脏，并将一半肾脏在-80℃冷冻，另一半在10％中性缓冲福尔马林中固定，用于肾脏纤维化的组织病理学评估。
将博来霉素(Calbiochem，Billerica MA)以10μg/ml溶解于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，并通过过滤灭菌。在异氟醚麻醉下(5％在100％O
为了评估体外EMT，使NMuMG细胞(ATCC)在10％血清(胎牛血清)生长培养基(Dubecco's Modified Eagles培养基，补充有10μg/mL胰岛素)中生长至汇合，然后在0.5％血清培养基+/-药物抑制剂中饥饿24小时。然后用0.5％血清培养基中的重组人TGFb1(R&DSystems 5ng/mL)+/-药物抑制剂处理细胞。对于大于24小时的时间点，上述培养基每24小时更新一次。通过蛋白质印迹分析细胞裂解物的aSMA蛋白质表达。
Miettinen等人(1994).“TGF-beta induced transdifferentiation of mammaryepithelial cells to mesenchymal cells:involvement of type I receptors.”J CellBiol 127(6Pt 2):2021-36。
Lamouille等人(2014).“Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymaltransition.”Nat Rev Mol Cell Biol 15(3):178-96。
为了评估体外FMT，使正常人肺成纤维细胞(NHLF)细胞(Lonza)在成纤维细胞生长培养基-2(Lonza CC-3131/含CC-4126子弹试剂盒)中生长，然后在无血清/生长因子的成纤维细胞基础培养基-2(Lonza CC-3131)+/-药物抑制剂中饥饿24小时。然后用TGFb1(5ng/mL)成纤维细胞基础培养基+/-药物抑制剂处理细胞。通过蛋白质印迹分析细胞裂解物的aSMA蛋白质表达。
进一步的细节可见于Pegorier等人(2010).“Bone Morphogenetic Protein(BMP)-4and BMP-7regulate differentially Transforming Growth Factor(TGF)-B1 innormal human lung fibroblasts(NHLF)”Respir Res 11:85，其通过引用整体并入本文。
评估了用优选实施方案的化合物相比用安慰剂治疗特发性肺纤维化(IPF)患者的疗效，和用优选实施方案的化合物相比用安慰剂治疗IPF患者的安全性。主要结果变量是预测的用力肺活量(forced vital capacity，FVC)自基线至第52周的百分比绝对变化。其他可能的终点包括但不限于：死亡率、无进展生存率、FVC下降率的变化、SpO2的变化以及生物标志物(HRCT图像分析；疾病活动的分子和细胞标志物)的变化。次要结果测量包括：重要的IPF相关事件的综合结果；无进展生存率；任何原因造成的死亡率；IPF造成的死亡率；预测的FVC自基线至第52周的百分比绝对变化的分类评估；呼吸急促自基线至第52周的变化；预测的血红蛋白(Hb)校正的肺一氧化碳扩散能力(DLco)自基线至第52周的百分比变化；在6分钟步行测试(6MWT)期间的氧饱和度自基线至第52周的变化；高分辨率计算机断层扫描(HRCT)评估自基线至第52周的变化；在6MWT中行走的距离自基线至第52周的变化。符合此项研究资格的患者包括但不限于：那些满足以下入选标准的患者：IPF的诊断；40至80岁；FVC≥50％预测值；DLco≧35％预测值；FVC或DLco≤90％预测值；过去一年没有改善；1秒钟用力呼气量(FEV1)与FVC之比为0.80或更高；能够在6分钟内行走150米并保持饱和度≥83％，同时补充氧气不超过6升/分钟。如果患者满足以下任何标准，则将其从本研究中剔除：不能进行肺功能检查；有证据表明有严重阻塞性肺病或气道高反应性；在研究者的临床意见中，预计患者在随机化后52周内需要并有资格进行肺移植；活动性感染；肝病；癌症或其他可能在2年内导致死亡的疾病；糖尿病；怀孕或哺乳期；药物滥用；有长QT综合征个人史或家族史；其他IPF治疗；无法服用研究药物；从其他IPF试验退出。给患者口服给予安慰剂或一定量的优选实施方案的化合物(1mg/天-1000mg/天)。主要结果变量是预测FVC自基线至第52周的百分比绝对变化。患者将从随机化时间开始接受盲法研究治疗，直到最后一名随机患者接受治疗52周。在治疗期间定期进行物理和临床实验室评估，例如第2、4、8、13、26、39和52周。将在治疗期间定期评估肺功能、运动耐受性和呼吸短促，例如在第13、26、39和52周。数据监测委员会(DMC)将定期审查安全性和有效性数据，以确保患者安全。
评估了用优选实施方案的化合物相比用安慰剂治疗系统性硬化症(SSc)患者的疗效，和用优选实施方案的化合物相比用安慰剂治疗SSc患者的安全性。主要结果变量是改良Rodnan皮肤评分(mRSS)自基线至第48周的绝对变化。其他可能的终点包括但不限于：死亡率、有治疗紧急不良事件(AE)和严重不良事件(SAE)的患者百分比、疾病进展的综合测量以及生物标志物(疾病活动的分子和细胞标志物，如C-反应蛋白)的变化。次要结果测量包括但不限于：硬皮病健康评估问卷(SHAQ)评分；健康评估问卷残疾指数(HAQ-DI)；慢性病治疗功能评估-疲劳(Functional Assessment of Chronic Illness Therapy-Fatigue，FACIT)评分；通过标准化量表测量的瘙痒严重程度，如5-D瘙痒量表；圣乔治呼吸问卷(St.George’s Respiratory Questionnaire，SGRQ)评分；关节压痛指数28(TCJ28)；肺功能参数；标准生命体征(包括血压、心率和体温)；心电图测量(ECG)；实验室测试(临床化学、血液学和尿液分析)；药代动力学(PK)测量。此外包括在这些测量中的临床和生物标记样品，例如皮肤活组织检查和血液(或血清和/或血浆)也将在开始治疗之前收集。此外，符合本研究资格的患者包括但不限于满足以下标准的患者：至少18岁的患者；根据美国风湿病学会(ACR)和欧洲抗风湿病联盟(EULAR)标准诊断为SSc，符合活动性疾病的标准，总病程小于或等于60个月；10≤mRSS≤35。如果患者满足以下任何标准，则将其从本研究中剔除：筛查前8周内进行大手术；硬皮病局限于肘部或膝盖远端区域；除SSc外的风湿性自身免疫性疾病；在筛选后4周内使用任何研究、生物或免疫抑制疗法，包括关节内或肠道外皮质类固醇。给患者口服给予安慰剂或一定量的优选实施方案的化合物(1mg/天-1000mg/天)。主要结果变量是mRSS\自基线至第48周的绝对变化。患者将从随机化时间开始接受盲法研究治疗，直到最后一名随机患者接受治疗48周。在治疗期间定期进行物理和临床实验室评估，例如第2、4、8、12、24、36和48周。临床和生物标志物样品也将在第48周收集。数据监测委员会(DMC)将定期审查安全性和有效性数据，以确保患者安全。
虽然已经说明并描述了一些实施方案，但是本领域普通技术人员在阅读前述说明书后，可以对本文所述的本技术的化合物或其盐、药物组合物、衍生物、前药、代谢物、互变异构体或外消旋混合物进行改变、等同替换和其他类型的变化。上面描述的每个方面和实施方案也可以包括或结合关于任何或所有其他方面和实施方案公开的这些变化或方面。
本技术也不限于本文描述的特定方面，它们旨在作为本技术的各个方面的单个说明。在不脱离本技术的精神和范围的情况下，可以对本技术进行许多修改和变化，这对本领域技术人员来说是显而易见的。除了本文列举的那些之外，本技术范围内的功能等同方法对于本领域技术人员而言从前面的描述中是显而易见的。这些修改和变化旨在落入所附权利要求的范围内。应理解，本技术不限于特定的方法、试剂、化合物、组合物、标记的化合物或生物系统，它们当然可以变化。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定方面的目的，而不是限制性的。因此，本说明书仅被认为是示例性的，本技术的广度、范围和精神仅由所附权利要求、其中的定义及其任何等同物表示。
本文说明性描述的实施方案可适当地在缺少本文未具体公开的任何要素、一种或多种限制的情况下实施。因此，例如，术语“包括”、“包含”、“含有”(“comprising”、“including”、“containing”)等应当被广泛地理解而不受限制。另外，本文使用的术语和表达已被用作描述的术语而非限制的术语，并且无意使用这些术语和表达来排除所示和所述特征或其部分的任何等同物，但是我们认识到，在要求保护的技术的范围内可以进行多种修改。另外，短语“基本上由......组成”将被理解为包括具体叙述的那些元素和那些不会实质上影响所要求保护的技术的基本特征和新颖特征的那些另外的元素。短语“由......组成”不包括未指定的任何元素。
此外，在根据马库什群组描述本公开的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本公开也因此以马库什群组的任意个体成员或成员子群的形式描述。落入一般公开内容的每个较窄种类和亚属群组也构成本技术的一部分。这包括本技术的一般描述，附带条件或否定限制从该属中去除任意主题，无论是否在本文中具体叙述了所删除的材料。
本说明书中提及的所有公开、专利申请、授权专利和其他文献(例如，期刊、文章和/或教科书)均通过引用并入本文，如同每个单独的公开、专利申请、授权专利或其他文献被具体地、单独地指出而通过引用整体并入。通过引用并入的文本中所包含的定义被排除至它们与本公开中的定义相矛盾的程度。
在以下权利要求中阐述了其他实施方案，以及这些权利要求所赋予的等同物的全部范围。
尽管已经参考优选实施方案和各种替换实施方案具体示出和描述了本发明，但是相关领域的技术人员将理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在形式和细节上进行各种改变。
出于所有目的，在本说明书的主体内引用的所有参考文献、授权专利和专利申请均通过引用整体并入本文。
尽管已经参考实施方案和实施例描述了本发明，但是应该理解，在不脱离本发明的精神的情况下，可以进行许多和各种修改。因此，本发明仅受以下权利要求的限制。
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