苯并异噁唑化合物

技术领域

本发明涉及苯并异噁唑化合物。

背景技术

在内脏器官等由于某些原因而受到入侵或损伤时，作为其修复或防御机制，细胞外基质在内脏器官内过量蓄积，导致内脏器官或组织发生纤维化。细胞外基质是指包围组织细胞的物质，主要有胶原蛋白、弹性蛋白等纤维性蛋白质、蛋白聚糖等复合糖质和纤维黏连蛋白、层黏连蛋白等糖蛋白质等。如果由于入侵或损伤而造成的内脏器官等的障碍的程度轻微，那么内脏器官等能够恢复正常，也不会残留修复瘢痕。但在由于入侵或损伤而造成的内脏器官等的障碍的程度强的情况或持续的情况下，修复瘢痕的纤维化会对内脏器官等的本来的功能造成损害。并且，以此为原因，形成发生新的纤维化的恶性循环。最终会发生内脏器官等的功能不全，最差的情况会导致死亡。

TRP(瞬时受体电位，Transient receptor potential)基因在1989年被鉴定为果蝇的光受体应答突变株的根源基因。根据随后的研究，在哺乳类中也发现大量的与被TRP基因编码的蛋白质具有同源性的蛋白质，这些蛋白质在细胞膜中基本上起到阳离子通道的功能。TRP通道形成巨大的具有功能多样的超基因家族，可以分成TRPA、TRPV、TRPM、TRPC等组。TRPC(TRP classic或TRP canonical)组可以进一步分成TRPC1～C7亚组。

已知TRPC3缺损小鼠对于压力负荷诱导型心脏纤维化表现出抵抗性，并且通过给予作为TRPC3通道抑制剂的Pyr3，能够有效地抑制小鼠的压力负荷诱导型心脏纤维化(非专利文献1、2)。并且，TRPC6缺损小鼠对于博来霉素诱导肺纤维化和单侧尿管堵塞引起的肾间质纤维化表现出抵抗性(非专利文献3、4)，通过给予作为TRPC3和TRPC6通道的抑制剂的Pyr2(BTP2)，能够抑制由于小鼠单侧尿管堵塞而引起的肾间质纤维化。

因此，对于TRPC3通道或TRPC6通道的活性进行调节(以下有时称为TRPC3调节、TRPC6调节)或抑制(以下有时称为TRPC3抑制、TRPC6抑制)，作为肺、心脏、肾脏或肝脏等内脏器官、组织的纤维化抑制剂是有用的(非专利文献1～5)，并且，认为对肌萎缩侧索硬化症(ALS)、肌肉萎缩症、溃疡性大肠炎、克罗恩病、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、威廉斯氏综合征等神经变性疾病、肌肉变性疾病、炎症性疾病等也是有效的(非专利文献6～12)。

作为表现出TRPC3和/或TRPC6抑制作用的化合物，报道了Pyr2(BTP2)、Pyr3、Pyr4、GSK2332255B、GSK2833503A、SAR7334等(非专利文献13～18)。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Numaga-Tomita,T.et al.TRPC3-GEF-H1 axis mediates pressureoverload-induced cardiac fibrosis.Sci.Rep.6,39383；doi:10.1038/srep39383(2016).

非专利文献2：Kitajima,N.et al.TRPC3 positively regulates reactiveoxygen species driving maladaptive cardiac remodeling.Sci.Rep.6,37001(2016).

非专利文献3：Y.-L.Wu et al.,Inhibition of TRPC6 channels amelioratesrenal fibrosis and contributes to renal protection by soluble klotho,,KidneyInt.2017Apr；91(4):830-841.

非专利文献4：K.Hofmann et al.,Classical transient receptor potential 6(TRPC6)channels support myofibroblast differentiation and development ofexperimental pulmonary fibrosis,Biochimicaet Biophysica Acta,2017；1863:560-568.

非专利文献5：Y.Saliba et al.,Evidence of a Role for FibroblastTransient Receptor Potential Canonical 3Ca Channel in Renal Fibrosis,J Am SocNephrol.,2015；26:1855-1876.

非专利文献6：K.Seoa et al.,Combined TRPC3 and TRPC6 blockade byselective small-molecule or genetic deletion inhibits pathological cardiachypertrophy,Proc.Nat.Acad.Sci.,2014；111:1551-1556.

非专利文献7：T.Shimauchi et al.,TRPC3-Nox2 complex mediatesdoxorubicin-induced myocardial atrophy.JCI Insight.2017；2(15).pii:93358.

非专利文献8：K.Smedlund et al.,Early steatohepatitis in hyperlipidemicmice with endothelial-specific gain of TRPC3 function precedes changes inaortic atherosclerosis,Physiol Genomics.,2016；48:644-649.

非专利文献9：L.H.Kurahara et al.,Intestinal Fibroblast/MyofibroblastTRP Channels in Inflammatory Bowel Disease,"New Insights into InflammatoryBowel Disease",book edited by Samuel Huber,2016,InTech.

非专利文献10：L.H.Kurahara et al.,Significant contribution ofTRPC6channelmediated Ca2+influx to the pathogenesis of Crohn’s diseasefibrotic stenosis,J.Smooth Muscle Res.,2016；52:78-92.

非专利文献11：E.Letavernier et al.,Williams-Beuren syndromehypercalcemia:is TRPC3 a novel mediator in calcium homeostasis？,Pediatrics.2012；129:e1626-30.

非专利文献12：P.Douglas et al.,Calcium influx is sufficient to inducemuscular dystrophy through a TRPC-dependent mechanism,Proc.Nat.Acad.Sci.,2009；106:19023-19028.

非专利文献13：S.Kiyonakaet al.,Selective and direct inhibition ofTRPC3 channels underlies biological activities of apyrazole compound,Proc.Nat.Acad.Sci.,2009；106:5400-5405.

非专利文献14：T.Maier et al.,Discovery and pharmacologicalcharacterization of a novel potent inhibitor of diacylglycerol-sensitive TRPCcation channels,Br.J.Pharmacol.,2015；172:3650-3660.

非专利文献15：D.G.Washburn et al.,The discovery of potent blockers ofthe canonical transient receptor channels,TRPC3 and TRPC6,based on ananilino-thiazole pharmacophore,Bioorg.Med.Chem.Lett.,2013；23:4979-4984.

非专利文献16：C.Qu et al.,Pyrazolopyrimidines as Potent Stimulatorsfor Transient Receptor Potential Canonical 3/6/7Channels,J.Med.Chem.,2017；60:4680-4692.

非专利文献17：G.Guedes et al.,Intensified Microwave-Assisted N-Acylation Procedure-Synthesis and Activity Evaluation of TRPC3ChannelAgonists with a 1,3-Dihydro-2H-benzo[d]imidazol-2-one Core,Synlett.2017；28:695-700.

非专利文献18：S.Sawamuraet al.,Screening of Transient ReceptorPotential Canonical Channel Activators Identifies Novel NeurotrophicPiperazine Compounds,Mol Pharmacol.,2016；89:348-363.

发明内容

发明要解决的技术问题

本发明的目的在于提供调节或抑制TRPC通道、特别是TRPC3通道、TRPC6通道或者TRPC3通道与TRPC6通道两者(在本说明书中有时将它们统称为TRPC3和/或TRPC6通道)的活性的化合物等、及其用途。

用于解决技术问题的技术手段

为了解决上述技术问题，本发明的发明人进行了深入研究，结果发现后述的通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药(以下有时将它们统称为本发明化合物等)能够解决上述技术问题，从而完成了本发明。代表性的本发明如下所述。

项1.一种以下通式(1)所示的化合物、其盐或其前药，

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

X为氧原子或硫原子，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

项2.如项1所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1)中，B为可以被取代的单环的芳基或者可以被取代的单环或双环的含氮杂芳基。

项3.如项1或2所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1)中，A为可以被选自下列A－1)～A－16)中的至少1种基团取代的苯环，

A－1)卤素、

A－2)羟基、

A－3)硝基、

A－4)氰基、

A－5)羧基、

A－6)可以被取代的氨基、

A－7)可以被取代的环状氨基、

A－8)可以被取代的低级烷基、

A－9)可以被取代的低级烷氧基、

A－10)低级烷氧基羰基、

A－11)低级烷基磺酰基、

A－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

A－13)可以被取代的环状氨基羰基、

A－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

A－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

A－16)四唑基。

项4.如项1～3中任一项所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1)中，B为单环的芳基或者单环或双环的杂芳基，单环的芳基可以被选自下列B－1)～B－16)中的至少1种基团取代，单环或双环的杂芳基可以被选自下列B－1)～B－17)中的至少1种基团取代，

B－1)卤素、

B－2)羟基、

B－3)硝基、

B－4)氰基、

B－5)羧基、

B－6)可以被取代的氨基、

B－7)可以被取代的环状氨基、

B－8)可以被取代的低级烷基、

B－9)可以被取代的低级烷氧基、

B－10)低级烷氧基羰基、

B－11)低级烷基磺酰基、

B－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

B－13)可以被取代的环状氨基羰基、

B－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

B－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

B－16)四唑基、

B－17)氧代基。

项5.如项1～4中任一项所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1)中，苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的4位被取代。

项6.如项1～3中任一项所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1)中，B为被取代的吡啶基或被取代的苯基，与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的至少邻位的碳原子被取代。

项7.如项1～4中任一项所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1)中，A为可以被选自卤素、低级烷氧基和可以被卤素取代的低级烷基中的至少1种基团取代的苯环，B为吡啶基或苯基，可以分别被选自下列B－1)、B－5)、B－8)、B－10)、B－12)和B－13)中的至少1种基团取代，

B－1)卤素、

B－5)羧基、

B－8)可以被取代的低级烷基、

B－10)低级烷氧基羰基、

B－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

B－13)可以被取代的环状氨基羰基，

R

或者(R

项8.如项1～4和7中任一项所述的化合物、其盐或其前药，其为通式(1A)所示的化合物，

[式中，

Z为氮原子或CH，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

R

R

项9.如项8所述的化合物、其盐或其前药，在通式(1A)中，R

项10.如项1～4中任一项所述的化合物、其盐或其前药，化合物为化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物191、化合物221、化合物281、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391或化合物401。

项11.一种以下通式(2)所示的化合物、其盐或其前药，

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

项12.一种医药组合物，其含有项1～11中任一项所述的化合物、其盐或其前药。

项13.如项12所述的医药组合物，其为TRPC3和/或TRPC6相关疾病的预防和/或治疗剂。

项14.如项13所述的医药组合物，TRPC3和/或TRPC6相关疾病为纤维症、心脏肥大、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、肌肉萎缩症、溃疡性大肠炎、克罗恩病、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、威廉斯氏综合征、慢性肾病或阿尔茨海默病。

项15.一种TRPC3和/或TRPC6调节或抑制剂，其含有项1～11中任一项所述的化合物、其盐或其前药。

发明效果

本发明所公开的化合物等具有对TRPC通道、例如TRPC3和/或TRPC6通道、优选TRPC6通道的活性进行调节或抑制的活性，因此，能够有效地用于TRPC相关疾病、例如由TRPC3通道的活性引发的疾病、由TRPC6通道的活性引发的疾病、或者由TRPC3通道的活性和TRPC6通道的活性两者引发的疾病(在本说明书中，有时将它们统称为TRPC3和/或TRPC6相关疾病)、特别是纤维症的预防和/或治疗。

附图说明

图1是表示试验例1中得到的、TRPC6表达细胞内的钙离子浓度变化的测定结果的图表。横轴为时间(秒)，纵轴为细胞内钙离子浓度([Ca

图2是表示试验例1中得到的、TRPC3表达细胞内的钙离子浓度变化的测定结果的图表。横轴为时间(秒)，纵轴为细胞内钙离子浓度([Ca

图3是表示试验例2中得到的、TRPC6表达细胞内的钙离子增加量的图表。纵轴的单位是“％”。

图4是表示试验例3中得到的、TRPC6表达细胞内的钙离子增加量的图表。纵轴的单位是“％”。

图5是表示试验例4中得到的、TRPC6表达细胞的电生理评价的图表。本图中，左侧的图表的纵轴为电流(nA)，横轴为时间(秒)。另外，右侧的图表中的a、b分别表示左侧的图表中的a、b时刻的电流－电压特性曲线。

图6是表示试验例5的免疫印迹的结果的照片。

图7是表示在试验例6中使用皮肤成纤维细胞得到的由免疫荧光染色法实现的α-SMA表达的图表。图表的纵轴为荧光强度(/像素)。

图8是表示在试验例6中使用心脏成纤维细胞得到的由免疫荧光染色法实现的α-SMA表达的图表。图表的纵轴为荧光强度(/像素)。

具体实施方式

本发明的一个实施方式是下述通式(1)所示的化合物、其盐或其前药。

通式(1)：

[式中，

A为可以被取代的苯环，

B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基，

X为氧原子或硫原子，

Y为氮原子或碳原子，

在

R

p为0、1或2，

或者(R

在本发明中，作为“可以被取代的苯环”的取代基，例如可以列举卤素；羟基；硝基；氰基；羧基；可以被取代的氨基；可以被取代的环状氨基；可以被取代的低级烷基；可以被取代的低级烷氧基；低级烷氧基羰基；低级烷基磺酰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；可以被取代的环状氨基羰基；可以被低级烷基取代的氨磺酰基；可以被取代的环状氨基磺酰基；四唑基等。取代基为单独1种或2种以上均可。

在本发明中，作为“芳基”，例如可以列举单环或双环的芳基，具体可以列举苯基、萘基等。

在本发明中，“可以被取代的芳基”中的芳基的定义如上。作为可以被取代的芳基的取代基，例如可以列举卤素；羟基；硝基；氰基；羧基；可以被取代的氨基；可以被取代的环状氨基；可以被取代的低级烷基；可以被取代的低级烷氧基；低级烷氧基羰基；低级烷基磺酰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；可以被取代的环状氨基羰基；可以被低级烷基取代的氨磺酰基；可以被取代的环状氨基磺酰基；四唑基；氧代基等。取代基为单独1种或2种以上均可。

在本发明中，“氧代基”是由“＝O”表示的基团。

在本发明中，作为“杂芳基”，例如可以列举单环或双环的含氮杂芳基，具体可以列举在环上包含1个以上(例如1～3个、1或2个、1个)氮原子、还可以包含1个以上(例如1～3个、1或2个、1个)作为其他杂原子的硫原子或氧原子的单环或双环的含氮杂芳基。作为具体的杂芳基，可以列举吡咯基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、呋咱基(furazanyl)、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、异苯并噻吩基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、酞嗪基、蝶啶基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、苯并呋咱基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、异噁唑并[4,5－d]哒嗪基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基等。优选为单环的含氮杂芳基或苯并咪唑基。

在本发明中，“可以被取代的杂芳基”中的杂芳基的定义如上。作为可以被取代的杂芳基的取代基，例如可以列举卤素；羟基；硝基；氰基；羧基；可以被取代的氨基；可以被取代的环状氨基；可以被取代的低级烷基；可以被取代的低级烷氧基；低级烷氧基羰基；低级烷基磺酰基；可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基；可以被取代的环状氨基羰基；可以被低级烷基取代的氨磺酰基；可以被取代的环状氨基磺酰基；四唑基；氧代基等。取代基为单独1种或2种以上均可。

在本发明中，作为“低级烷基”例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基，优选为C1～C6烷基、更优选为C1～C4烷基、特别优选为C1～C3烷基。具体而言，作为直链状或支链状的低级烷基，可以列举甲基、乙基、1－丙基、2－丙基、1－丁基、2－丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、新戊基、正己基、异己基、3－甲基戊基等，作为包含环状结构的低级烷基，可以列举环丙基、环丙基甲基、环丁基、环丁基甲基、环戊基、环戊基甲基、环己基、环己基甲基、环己基乙基等。优选列举甲基、乙基、2－丙基、叔丁基、环丙基等。

在本发明中，作为“卤素”，可以列举氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等，优选列举氟原子、氯原子。

在本发明中，“可以被取代的氨基”是指可以被取代的非环状氨基，作为其取代基，可以列举低级烷基(例如甲基、乙基、丙基等)、C1～C8酰基(例如乙酰基、丙酰基等)、芳基(例如苯基等)或杂芳基。取代基为单独1种或2种以上均可。作为优选的可以被取代的氨基，例如可以列举氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基、二乙基氨基、环己基氨基、乙酰基氨基、苯甲酰基氨基、苯基氨基等。

在本发明中，“环状氨基”例如是成环原子具有氮原子、还可以包含1个以上(例如1～3个、1或2个、1个)氧原子的5～7元的环状氨基，例如可以列举吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基等，优选列举吡咯烷基、吗啉基等。

在本发明中，“可以被取代的环状氨基”中的环状氨基的定义如上。作为环状氨基的取代基，例如可以列举低级烷基、低级烷氧基、氨基、羟基、硝基、氰基、羧基、氧代基等。环状氨基可以被选自上述取代基中的至少1种基团取代。作为取代基的数量，例如可以列举0、1个、2个、3个，优选0、1个、2个。作为可以被取代的环状氨基，具体可以列举吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、4－甲基哌啶基、吗啉基、2－吡咯烷酮基等，优选列举吡咯烷基、吗啉基等。

在本发明中，“可以被取代的低级烷基”中的低级烷基的定义如上。作为低级烷基的取代基，例如可以列举羟基；氨基；C1～C8烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、叔丁基氨基等)；C1～C8烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基等)；卤素(例如氟原子、氯原子、溴原子等)；卤代C1～C8烷氧基(例如三氟甲氧基等)；脂肪族杂环基(例如吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、4－甲基－1－哌嗪基等)；芳基(例如苯基、1－萘基等)；杂芳基(例如吡啶基、噻吩基、呋喃基等)；羧基；C1～C8烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、1－丙氧基羰基、2－丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等)；可以被低级烷基取代的氨基甲酰基(例如氨基甲酰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基等)；环状氨基羰基(例如吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、吗啉基羰基等)等。作为优选的取代基，可以列举甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基羰基、羟基、氟原子、氯原子、三氯甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、吗啉基羰基、苯基、吡啶基等。可以被取代的低级烷基可以被选自上述取代基中的至少1种基团取代，作为取代基的数量，例如可以列举0、1个、2个、3个，优选0、1个、2个。

在本发明中，“被卤素取代的低级烷基”意指烷基的氢全部被卤素取代。被卤素取代的低级烷基中的卤素和低级烷基的定义如上。优选取代烷基的卤素为同种卤素。作为被卤素取代的低级烷基，优选三氯甲基或三氟甲基，更优选三氟甲基。

在本发明中，作为“低级烷氧基”，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷氧基，优选C1～C6烷氧基、更优选C1～C4烷氧基、特别优选C1～C3烷氧基。具体而言，作为直链状或支链状的烷氧基，可以列举甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、1－丁氧基、2－丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己氧基、异己氧基、3－甲基戊氧基等。作为包含环状结构的烷氧基，可以列举环丙氧基、环丙基甲氧基、环丁氧基、环丁基甲氧基、环戊氧基、环戊基甲氧基、环己氧基、环己基甲氧基、环己基乙氧基等。优选列举甲氧基、乙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基、环丙氧基等。

在本发明中，“可以被取代的低级烷氧基”中的低级烷氧基的定义如上。作为低级烷氧基的取代基，例如可以列举羟基；氨基；C1～C8烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、叔丁基氨基等)；C1～C8烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、1－丙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基等)；卤素(例如氟原子、氯原子、溴原子等)；卤代C1～C8烷氧基(例如三氟甲氧基等)；脂肪族杂环基(例如吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、4－甲基－1－哌嗪基等)；芳基(例如苯基、1－萘基等)；杂芳基(例如吡啶基、噻吩基、呋喃基等)；羧基；C1～C8烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、1－丙氧基羰基、2－丙氧基羰基、叔丁氧基羰基等)；可以被低级烷基取代的氨基甲酰基(例如氨基甲酰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基等)；环状氨基羰基(例如吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、吗啉基羰基等)等。作为优选的取代基，可以列举甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、甲氧基、乙氧基、2－丙氧基、叔丁氧基羰基、羟基、氟原子、氯原子、三氟、吗啉基、哌啶基、吡咯烷基、羧基、甲氧基羰基、吗啉基羰基、苯基、吡啶基等。可以被取代的低级烷氧基可以被选自上述取代基中的至少1种基团取代，作为取代基的数量，例如可以列举0、1个、2个、3个，优选0、1个、2个。

在本发明中，“低级烷氧基羰基”中的低级烷氧基的定义如上。低级烷氧基羰基是羰基上键合有上述的低级烷氧基的基团。作为低级烷氧基羰基，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷氧基羰基。具体而言，作为直链状或支链状的烷氧基羰基，可以列举甲氧基羰基、乙氧基羰基、1－丙氧基羰基、2－丙氧基羰基、1－丁氧基羰基、2－丁氧基羰基、异丁氧基羰基、叔丁氧基羰基等。作为包含环状结构的C1～C8烷氧基羰基，可以列举环丙氧基羰基、环丙基甲氧基羰基、环丁氧基羰基、环丁基甲氧基羰基、环戊氧基羰基、环戊基甲氧基羰基、环己氧基羰基、环己基甲氧基羰基、环己基乙氧基羰基等。作为优选的低级烷氧基羰基，可以列举甲氧基羰基、乙氧基羰基、2－丙氧基羰基、环丙氧基羰基等。

在本发明中，“低级烷基磺酰基”中的低级烷基的定义如上。低级烷基磺酰基是磺酰基上键合有上述的低级烷基的基团。作为低级烷基磺酰基，例如可以列举直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基等，具体而言，作为直链状或支链状的烷基磺酰基，可以列举甲磺酰基、乙磺酰基、1－丙基磺酰基、2－丙基磺酰基、1－丁基磺酰基、2－丁基磺酰基、异丁基磺酰基、叔丁基磺酰基等。作为包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基，可以列举环丙基磺酰基、环丙基甲基磺酰基、环丁基磺酰基、环丁基甲基磺酰基、环戊基磺酰基、环戊基甲基磺酰基、环己基磺酰基、环己基甲基磺酰基、环己基乙基磺酰基等。优选列举甲磺酰基、乙磺酰基、2－丙磺酰基、环丙磺酰基等。

在本发明中，在“可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基”中，低级烷基和低级烷基磺酰基的定义如上。可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基包括“可以被低级烷基取代的氨基甲酰基”和“可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基”。

“可以被低级烷基取代的氨基甲酰基”是氨基甲酰基上可以键合有1个或2个上述低级烷基的基团。在键合有2个低级烷基的情况下，该低级烷基可以相同也可以不同。作为可以被低级烷基取代的氨基甲酰基，例如可以列举氨基甲酰基、或者被直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基取代的氨基羰基等。作为可以被低级烷基取代的氨基甲酰基，具体可以列举氨基甲酰基、甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、丙基氨基羰基、2－丙基氨基羰基、二甲基氨基羰基、二乙基氨基羰基、乙基甲基氨基羰基、甲基丙基氨基羰基、二环己基氨基羰基等。

“可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基”是氨基甲酰基上可以键合有1个或2个上述低级烷基磺酰基的基团。在键合有2个低级烷基磺酰基的情况下，该低级烷基磺酰基可以相同也可以不同。作为可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基，例如可以列举氨基甲酰基、或者被直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基取代的氨基羰基等。作为直链状或支链状的C1～C8烷基磺酰基氨基羰基，例如可以列举甲磺酰基氨基羰基、乙磺酰基氨基羰基、1－丙基磺酰基氨基羰基、2－丙基磺酰基氨基羰基、1－丁基磺酰基氨基羰基、2－丁基磺酰基氨基羰基、异丁基磺酰基氨基羰基、叔丁基磺酰基氨基羰基等。作为包含环状结构的C1～C8烷基磺酰基氨基羰基，例如可以列举环丙基磺酰基氨基羰基、环丙基甲基磺酰基氨基羰基、环丁基磺酰基氨基羰基、环丁基甲基磺酰基氨基羰基、环戊基磺酰基氨基羰基、环戊基甲基磺酰基氨基羰基、环己基磺酰基氨基羰基、环己基甲基磺酰基氨基羰基、环己基乙基磺酰基氨基羰基等。作为优选的可以被低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基，可以列举氨基甲酰基、甲磺酰基氨基羰基、乙磺酰基氨基羰基、2－丙基磺酰基氨基羰基、环丙基磺酰基氨基羰基等。

在本发明中，“可以被取代的环状氨基羰基”中的可以被取代的环状氨基的定义如上。可以被取代的环状氨基羰基是羰基上键合有上述的可以被取代的环状氨基的基团。作为可以被取代的环状氨基羰基，具体可以列举吡咯烷基羰基、哌啶基羰基、哌嗪基羰基、4－甲基哌啶基、吗啉基羰基、2－吡咯烷酮基羰基等，优选列举吡咯烷基羰基、吗啉基羰基等。

在本发明中，“可以被低级烷基取代的氨磺酰基”中的低级烷基的定义如上。可以被低级烷基取代的氨磺酰基是氨磺酰基上可以键合有1个或2个上述低级烷基的基团。在键合有2个低级烷基时，该低级烷基可以相同也可以不同。作为可以被低级烷基取代的氨磺酰基，例如可以列举氨磺酰基；被直链状、支链状或包含环状结构的C1～C8烷基取代的氨基磺酰基等。具体可以列举氨磺酰基、甲基氨基磺酰基、乙基氨基磺酰基、丙基氨基磺酰基、2－丙基氨基磺酰基、二甲基氨基磺酰基、二乙基氨基磺酰基、乙基甲基氨基磺酰基、甲基丙基氨基磺酰基、二环己基氨基磺酰基等。

在本发明中，“可以被取代的环状氨基磺酰基”中的可以被取代的环状氨基的定义如上。可以被取代的环状氨基磺酰基是在磺酰基上键合有上述的可以被取代的环状氨基的基团。作为可以被取代的环状氨基磺酰基，具体可以列举吡咯烷基磺酰基、哌啶基磺酰基、哌嗪基磺酰基、4－甲基哌啶基磺酰基、吗啉基磺酰基、4－哌啶酮基磺酰基等，优选列举吡咯烷基磺酰基、吗啉基磺酰基等。

在本发明中，

在通式(1)所示的化合物中，A为可以被取代的苯环。A的取代基例如包含选自下述A－1)～A－16)中的至少1种，在存在多个取代基时，彼此可以相同也可以不同。

A－1)卤素、

A－2)羟基、

A－3)硝基、

A－4)氰基、

A－5)羧基、

A－6)可以被取代的氨基、

A－7)可以被取代的环状氨基、

A－8)可以被取代的低级烷基、

A－9)可以被取代的低级烷氧基、

A－10)低级烷氧基羰基、

A－11)低级烷基磺酰基、

A－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

A－13)可以被取代的环状氨基羰基、

A－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

A－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

A－16)四唑基。

A中的取代基的数量例如为0～5个、0～4个、0～3个，优选0、1或2个，更优选0或1个。在存在多个取代基时，彼此可以相同也可以不同。

作为A的取代基的其他例，可以列举选自上述A－1和A－3～A－16中的至少1种、选自从上述A－1和A－3～A－16中除去甲氧基的基团中的至少1种等。

优选的A的取代基为选自卤素、低级烷氧基和可以被卤素取代的低级烷基中的至少1种，更优选选自卤素、甲氧基、乙氧基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟乙基、二氟乙基和三氟乙基中的至少1种，特别优选选自氯原子、氟原子和三氟甲基中的至少1种。

在通式(1)所示的化合物中，A的取代基可以与苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的4位、5位、6位和7位的任意碳原子键合，优选与4位、5位和6位的碳原子的至少1个、更优选4位和/或5位的碳原子、特别优选4位的碳原子键合。其中，在本发明中，构成苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的原子的位置序号如下。

[式中，A和X同上。]

在通式(1)所示的化合物中，特别优选的A是在苯并异噁唑或苯并异噻唑骨架的4位的碳原子上键合有卤素、低级烷氧基或可以被卤素取代的低级烷基、并且5、6和7位的碳原子未被取代的苯环。

在通式(1)所示的化合物中，B为可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基。可以被取代的芳基或可以被取代的杂芳基的定义如上。作为芳基，例如可以列举苯基或萘基，优选苯基。作为杂芳基，优选作为成环原子不含其他杂原子的单环的含氮杂芳基或苯并咪唑基。作为成环原子不含其他杂原子的单环的含氮杂芳基，优选作为成环杂原子包含1个氮原子的5元或6元的杂芳基，例如可以列举吡咯基、吡啶基，优选吡啶基，更优选2－吡啶基。作为苯并咪唑基，优选苯并咪唑－3－基。

在B为单环的芳基的情况下，B可以被选自下述B－1)～B－16)中的至少1种基团取代。在B为单环或双环的杂芳基的情况下，B可以被选自下述B－1)～B－17)中的至少1种基团取代。

B－1)卤素、

B－2)羟基、

B－3)硝基、

B－4)氰基、

B－5)羧基、

B－6)可以被取代的氨基、

B－7)可以被取代的环状氨基、

B－8)可以被取代的低级烷基、

B－9)可以被取代的低级烷氧基、

B－10)低级烷氧基羰基、

B－11)低级烷基磺酰基、

B－12)可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基、

B－13)可以被取代的环状氨基羰基、

B－14)可以被低级烷基取代的氨磺酰基、

B－15)可以被取代的环状氨基磺酰基、

B－16)四唑基、

B－17)氧代基。

B中的取代基的数量例如为0或至少1个、0～5个、0～4个，优选0～3个，更优选0、1或2个。在存在多个取代基时，彼此可以相同也可以不同。

作为B的取代基，优选列举选自卤素、羧基、可以被取代的低级烷基、低级烷氧基羰基、可以被低级烷基或低级烷基磺酰基取代的氨基甲酰基和可以被取代的环状氨基羰基中的至少1种，具体可以列举选自卤素、羧基、甲基、乙基、1－丙基、2－丙基、羟甲基、羧甲基、三氯甲基、三氟甲基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、甲基氨基羰基、二甲基氨基羰基、乙基甲基氨基羰基、甲磺酰基氨基羰基、吡咯烷基羰基和吗啉基羰基中的至少1种。另外，B为芳基时的取代基可以列举从这些基团中除去氧代基的基团中的至少1种。

作为B的取代基，更优选列举选自卤素、羧基、低级烷基、被卤素取代的低级烷基、低级烷氧基羰基和可以被低级烷基取代的氨基甲酰基中的至少1种，具体可以列举选自卤素、羧基、甲基、乙基、三氯甲基、三氟甲基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、单甲基氨基羰基和二甲基氨基羰基中的至少1种。

作为B的取代基，特别优选列举选自氯原子、氟原子、甲基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、甲基氨基羰基和二甲基氨基羰基中的至少1种。

在通式(1)所示的化合物中，在Y为氮原子时，B优选为可以被取代的苯基或可以被取代的吡啶基，在Y为碳原子时，B优选为可以被取代的苯基、可以被取代的吡啶基或2－氧代基苯并咪唑－3－基。

在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的邻位的碳原子的1或2个、优选1个被取代。与该邻位的碳原子键合的取代基只要是上述的B的取代基即可，优选为卤素，更优选为氯原子或氟原子，更进一步优选为氯原子。

另外，在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的对位的碳原子未被取代或被羧基取代。

另外，在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的间位的全部碳原子不被取代。

在通式(1)所示的化合物中，在B为被取代的吡啶基或被取代的苯基时，更优选与Y键合的吡啶或苯环上的碳原子的邻位的碳原子的1个或2个、优选1个被氯原子或氟原子取代，间位的碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或者被羧基、甲氧基羰基或乙氧基羰基取代。

在Y为氮原子且B为被取代的2－吡啶基时，特别优选与Y键合的吡啶环上的碳原子的邻位的1个碳原子被氯原子或氟原子取代，间位的全部碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或被羧基取代。

在为Y氮原子且B为被取代的苯基时，特别优选与Y键合的苯环上的碳原子的邻位的1个碳原子被氯原子或氟原子取代，构成该苯基的其他的全部碳原子不被取代。

在Y为碳原子且B为被取代的2－吡啶基时，特别优选与Y键合的吡啶环上的碳原子的邻位的1个碳原子被氯原子或氟原子取代，间位的全部碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或者被羧基、甲氧基羰基或乙氧基羰基取代。

在Y为碳原子且B为被取代的苯基时，特别优选与Y键合的苯环上的碳原子的邻位的1个碳原子被氯原子或氟原子取代，间位的全部碳原子不被取代，对位的碳原子不被取代或者被羧基、甲氧基羰基或乙氧基羰基取代。

在通式(1)所示的化合物中，X为氧原子或硫原子，优选为氧原子。

在通式(1)所示的化合物中，Y为氮原子或碳原子，优选为氮原子。

在通式(1)所示的化合物中，Y为氮原子或碳原子，优选为氮原子。

在通式(1)所示的化合物中，R

在R

在2个R

在2个R

作为2个R

[式中，Y和

2个R

作为饱和稠杂环，例如可以列举吡嗪环或哌啶环与环戊烷环或环己烷环的稠合环。作为饱和稠杂环的具体例，可以列举八氢环戊吡啶、八氢环戊吡嗪、十氢喹啉、十氢喹喔啉等。

优选的R

在通式(1)所示的化合物中，p为0、1或2。

在通式(1)所示的化合物中，(R

在通式(1)所示的化合物、其盐或其前药中，优选下述通式(1A)所示的化合物、其盐或其前药，它们也包括在本发明中。

[式中，

Z为氮原子或CH。

Y为氮原子或碳原子。

在

R

p为0、1或2。

或者(R

R

R

在通式(1A)所示的化合物中，Z为氮原子或CH。在Y为氮原子时，Z优选为氮原子。

在通式(1A)所示的化合物中，Y为氮原子或碳原子。

在通式(1A)所示的化合物中，R

作为R

2个R

通式(1A)中的含有Y的环被R

[式中，＊表示与异苯并噁唑的3位的碳原子键合的一侧，R

作为R

在通式(1A)中，(R

在通式(1A)所示的化合物中，R

在通式(1A)所示的化合物中，R

R

本发明的通式(1)所示的化合物、其盐或其前药的具体例例如包括化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物051、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物181、化合物191、化合物201、化合物211、化合物221、化合物231、化合物241、化合物251、化合物261、化合物271、化合物281、化合物291、化合物301、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391或化合物401，优选包括下列化合物、其盐或其前药。

作为本发明的通式(1)所示的化合物、其盐或其前药，更优选化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物191、化合物221、化合物281、化合物311、化合物321、化合物331、化合物341、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381、化合物391或者化合物401、其盐、或其前药，更优选化合物011、化合物021、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071、化合物081、化合物091、化合物101、化合物111、化合物121、化合物131、化合物141、化合物151、化合物161、化合物171、化合物191、化合物321、化合物351、化合物361、化合物371、化合物381或者化合物401、其盐、或其前药，特别优选化合物011、化合物031、化合物041、化合物061、化合物071或化合物191、化合物361、化合物371、化合物381或者化合物401、其盐、或其前药。

本发明还包括下述通式(2)所示的化合物、其盐或其前药。该化合物、其盐或其前药具有调节或抑制TRPC通道、例如TRPC3和/或TRPC6通道、优选TRPC6通道活性的活性。并且，该化合物或其盐还能够成为通式(1)所示的化合物的中间体化合物。

[式中，A、B、Y、R

通式(2)所示的化合物中的A、B、Y、R

另外，通式(2)中，氮原子与羟基之间的键由波浪线、即以下所示的线表示，由此表示通式(2)所示的化合物可以为由于其部分结构“＞C＝N－OH”而存在的几何异构体的E体、Z体以及它们的混合物的任意种。这在由波浪线表示的通式(2)以外的化合物中也是同样的。

通式(2)所示的化合物、其盐或其前药中，优选下述通式(2A)所示的化合物、其盐或其前药，它们也包括在本发明中。

[式中，Z、Y、R

通式(2A)所示的化合物中的Z、Y、R

通式(2)所示的化合物、其盐或其前药中，优选下述通式(2B)所示的化合物、其盐或其前药，它们也包括在本发明中。另外，下述通式(2B)所示的化合物或其盐作为制造通式(1)所示的化合物的中间体化合物是优选的。

[式中，A、B、Y、R

G

通式(2B)所示的化合物中的A、B、Y、R

作为G

G

作为G

作为G

优选的G

本发明的通式(2)所示的化合物、其盐或其前药例如包括下列化合物、其盐或其前药。

作为本发明的通式(2)所示的化合物、其盐或其前药，优选化合物062、化合物202、化合物362或者化合物372、其盐、或其前药，更优选化合物202的(E)异构体、化合物362的(E)异构体、化合物362的(Z)异构体或者化合物372的(Z)异构体、其盐或其前药。

本发明的化合物等例如可以通过将以下详细阐述的制造法1～3、以此为基准的方法、公知的方法等适当变更、组合等制造。用作原料化合物的化合物分别可以以盐的形态使用。但以下所示的方法仅仅是例示，基于熟悉有机合成的工作人员的知识，也可以适当利用其他的方法制造。另外，在将非市售品的1,2－苯并异噻唑或其衍生物或者1,2－苯并异噁唑或其衍生物用作原料化合物时，可以参考以下出版物中记载的方法制造供应。

Advances in heterocyclic chemistry,Heterocyclic Chemistry in the 21stCentury:A Tribute to Alan Katritzky,Elsevier,Cambridge(2017)。R.A.Shastri,Review on Synthesis of 3-Substituted 1,2-Benzisoxazole Derivatives,Chem.Sci.Trans.,2016:5；8-20。

在制造的各反应中，可以根据需要对官能团进行保护。保护基及其保护和脱保护的技术可以适当应用公知的方法，例如T.W.Greene and P.G.M.Wuts,“Protective Groupsin Organic Synthesis”,3

[制造法1]

在一个实施方式中，通式(1)所示的化合物可以按照下述的反应工序式－1所示的合成方案制造。即，通式(1)所示的化合物能够由通式(3)所示的化合物和通式(4)所示的化合物制造。

反应工序式－1

[式中，A、B、Y、R

G

在反应工序式－1中，A、B、Y、R

作为G

G

作为G

作为G

优选的G

通式(3)所示的化合物与通式(4)所示的化合物的反应例如可以在不活泼溶剂中、在存在或不存在碱的条件下进行。还可以根据需要进一步在反应体系内添加活化剂。通式(3)所示的化合物和通式(4)所示的化合物是公知的化合物，可以按照公知的方法制造。

作为不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举：氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选1～5摩尔、更优选1～2摩尔。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，通式(3)所示的化合物的使用量通常为0.2摩尔以上、优选0.2～2摩尔、更优选0.2～1.5摩尔。

反应温度通常为－50℃～180℃、优选－30℃～180℃、更优选－10℃～180℃。为了促进反应，可以使用微波，作为此时的反应温度，例如为80℃～180℃、优选100℃～180℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选10分钟～24小时。

[制造法2]

在一个实施方式中，通式(1B)所示的化合物可以按照下述的反应工序式－2所示的合成方案制造。即，通式(1B)所示的化合物可以由通式(5)所示的化合物和通式(6)所示的化合物制造。

反应工序式－2

[式中，A、B、X、R

在反应工序式－2中，A、B、X、R

作为G

G

作为G

作为G

优选的G

通过使通式(5)所示的化合物与通式(6)所示的化合物偶联，能够得到通式(1B)所示的化合物。通式(5)所示的化合物和通式(6)所示的化合物是公知的化合物，可以按照公知的方法制造。

该反应例如可以在不活泼溶剂中在存在碱的条件下进行。

作为不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举：氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，通式(6)所示的化合物的使用量通常为0.5摩尔以上、进而为1摩尔以上、优选0.9～2摩尔、更优选0.9～1.5摩尔。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选1～5摩尔、更优选1～2摩尔。

反应温度通常可以列举30℃～比溶剂的沸点高10℃的温度，优选列举80℃～比溶剂的沸点高10℃的温度。为了促进反应，可以使用微波，作为此时的反应温度，例如为80℃～180℃、优选100℃～180℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选10分钟～24小时。

另外，通式(5)所示的化合物与通式(6)所示的化合物的反应还可以利用Buchward反应进行，例如在钯催化剂、膦配体、碱的存在下，在溶剂中使通式(5)所示的化合物与通式(6)所示的化合物反应。

作为钯催化剂，例如可以列举Pd(OAc)

作为膦配体，例如可以列举BINAP((2,2′-双(二苯膦)-1,1′-联萘)、Xphos(2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯)等双齿膦配体。

作为碱，可以列举t－BuONa(叔丁醇钠)等强碱。

在该反应中，相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，通式(6)所示的化合物的使用量通常为0.5摩尔以上、进而1摩尔以上、优选0.9～2摩尔、更优选1～1.5摩尔。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，钯催化剂的使用量通常为0.005～1摩尔、优选0.01～0.2摩尔。

相对于钯催化剂1摩尔，膦配体的使用量通常为0.5～5摩尔、优选1～2摩尔。

相对于通式(5)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为0.5摩尔以上、进而1摩尔以上、优选1～2摩尔。

反应温度通常为40℃～150℃、优选80℃～110℃，反应时间通常为1～24小时、优选3～12小时。

[制造法3]

在一个实施方式中，通式(1)或(2)所示的化合物可以按照下述的反应工序式－3所示的合成方案制造。即，通式(1C)所示的化合物可以通过将通式(7)所示的化合物转化成通式(8)所示的化合物，再与通式(4)所示的化合物反应制造通式(2B)所示的肟化合物，再将其闭环而制造。并且，本领域技术人员可以理解，通过在反应工序式－3所示的反应中，使用适当的对应的具有可以被取代的苯环A的化合物来代替通式(7)或(8)所示的化合物，能够制造通式(2)所示的化合物。另外，通式(7)所示的化合物是公知的化合物，可以按照公知的方法制造。

反应工序式－3

[式中，A、B、Y、R

G

在反应工序式－3中，A、B、Y、R

作为G

工序1、即将通式(7)所示的化合物转化成通式(8)所示的化合物的工序例如可以在不活泼溶剂中使卤化剂与通式(7)所示的化合物反应。

作为该反应中的不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为卤化剂，例如可以列举N－溴琥珀酰亚胺、N－氯琥珀酰亚胺等通常的卤化剂。

相对于通式(7)所示的化合物，卤化剂的使用量通常为等摩尔～过量摩尔、优选1～5倍摩尔、更优选1～2倍摩尔。

反应温度通常为－30～150℃、优选－10～100℃、更优选－10～40℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选10分钟～24小时、更优选30分钟～18小时。

工序2、即使通式(8)所示的化合物与通式(4)所示的化合物反应合成通式(2B)所示的化合物的工序，例如可以在不活泼溶剂中在存在碱的条件下进行。

作为该反应中的不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举：氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，通式(8)所示的化合物的使用量通常为0.5摩尔以上、0.8摩尔以上、优选0.9～2摩尔、更优选0.9～1.5摩尔。

相对于通式(4)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选1～5倍摩尔、更优选1～2倍摩尔。

反应温度通常为－20℃～比溶剂的沸点高10℃的温度、优选0℃～40℃。反应时间通常为10分钟～48小时、优选10分钟～24小时、更优选30分钟～18小时。

工序3、即使通式(2B)所示的化合物闭环转化成通式(1)所示的化合物的工序例如可以在不活泼溶剂中在存在碱的条件下进行。

通式(2B)所示的化合物存在作为几何异构体的(E)体和(Z)体，从闭环反应时可以减少加热的观点考虑，优选(E)体。

作为该反应中的不活泼溶剂，可以列举二乙基醚、四氢呋喃(THF)、二噁烷、二甲氧基甲烷等醚系溶剂、甲苯、苯、二甲苯等芳香族烃系溶剂、二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、四氯化碳等卤代烃系溶剂、丙酮等酮系溶剂、二甲基亚砜、N,N－二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈等非质子溶剂、吡啶等。这些溶剂可以将2种以上以适当的比例混合使用。

作为碱，例如可以列举：氢化钠、氢化钾等金属氢化物、氢氧化钾、氢氧化钠等金属氢氧化物、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铯等金属碳酸盐、三乙胺、乙基二异丙胺等烷基胺类、甲醇钠、叔丁醇钾等金属醇盐。

相对于通式(2B)所示的化合物1摩尔，碱的使用量通常为1摩尔以上、优选1～5倍摩尔、更优选1～2倍摩尔。

反应温度通常为50℃～比溶剂的沸点高10℃的温度、优选80℃～比溶剂的沸点高10℃的温度。为了促进反应，可以使用微波，作为此时的反应温度，例如为80℃～180℃、优选100℃～180℃。反应时间通常为10分钟～8小时、优选10分钟～2小时。

本发明的通式(1)或(2)所示的化合物、其中间体化合物及其起始原料化合物可以按照上述的合成方法制造，并且，也可以基于本说明书的实施例中记载的合成方法，参考本申请提出时已知或公知的技术(例如B.R.Kiran et al.,SYNTHESIS,EVALUATION OFANALGESIC AND ANTI-INFLAMMATORY ACTIVITIES OF SUBSTITUTED 1,2-BENZOXAZOLONEAND 3-CHLORO-1,2-BENZOXAZOLE DERIVATIVES,International Journal ofPharmaceutical Sciences and Research,2015；6:2918-2925.)而制造。

上述反应式分别表示的起始原料化合物和中间体化合物，在供于反应之前可以根据需要使用公知的方法利用适当的保护基保护官能团，在反应结束后，使用公知的方法将该保护基脱保护。

按照上述反应式得到的目的化合物分别可以进行分离和精制。例如，在将反应混合物冷却之后，为了分离粗制反应产物，进行过滤、浓缩、提取等分离步骤，之后，将粗制反应产物供于色谱柱、重结晶等通常的精制步骤，由此，由反应混合物进行分离和精制。

上述反应式分别表示的起始原料化合物和通式(1)或(2)所示的化合物包含与溶剂加合了的溶剂合物(例如水合物、乙醇合物等)的形态的化合物。

通式(1)或(2)所示的化合物、上述各反应式中得到的中间体化合物和起始原料化合物中，在双键、环、稠环的异构体(E、Z、顺式体、反式体)、由于存在手性碳等而形成的异构体(R体、S体、α体、β体、对映异构体、非对映异构体)、具有旋光性的光学活性体(D、L、d、l体)、通过色谱分离而形成的极性体(高极性体、低极性体)、平衡化合物、旋转异构体、它们的任意比例的混合物、外消旋混合物存在几何异构体、立体异构体、光学异构体等异构体的情况下，包括所有的异构体。例如，光学异构体可以利用公知的各种分割法(例如利用结晶化的光学分割、利用色谱直接进行光学分割的方法等)进行拆分。

通式(1)或(2)所示的化合物的盐包括所有的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐没有特别限制，例如可以列举钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；锌盐等无机金属盐；三乙胺、三乙醇胺、三羟基甲基氨基甲烷、氨基酸等有机碱盐等；盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐等无机酸盐；乙酸盐、碳酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、抗坏血酸盐等有机酸盐等。这些盐可以按照常规方法制造。

各种异构体可以通过公知的拆分法进行分离。例如，外消旋化合物可以通过通常的光学分割法(例如利用结晶化的光学分割、利用色谱直接进行光学分割的方法等)得到立体上单一的异构体。另外，光学活性的化合物还可以通过使用适当的光学活性的原料来制造。

上述反应式分别表示的起始原料化合物、中间体化合物和目的化合物可以以适当的盐的形态使用。

在本发明化合物等中，1个或多个原子可以被1个或多个同位素原子取代。作为同位素原子的示例，可以列举氘(2H)、氚(3H)、13C、14N、18O等。

本发明包括含有通式(1)或(2)所示的化合物、其盐或其前药的医药组合物。本发明的医药组合物是将本发明的化合物、其盐或其前药制成通常的医药组合物的形态的制剂，使用本发明的化合物、其盐或其前药和药学上可以接受的载体进行制备。作为该载体，可以列举通常使用的填充剂、增量剂、粘合剂、赋湿剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等的稀释剂或赋形剂。

本发明的前药是指由于生物体内的反应(例如酶反应、胃酸的反应)而转化成本发明化合物的化合物。例如，在本发明的化合物具有羧基的情况下，是该羧基转化成酯的化合物。作为该酯，可以列举甲酯、乙酯、1－丙酯、2－丙酯、新戊酰氧基甲酯、乙酰氧基甲酯、环己基乙酰氧基甲酯、1－甲基环己基羰氧基甲酯、乙氧基羰氧基－1－乙酯、环己氧基羰氧基－1－乙酯等。

作为本发明的医药组合物，可以根据治疗的目的从各种形态中选择，作为其代表的形态，可以列举片剂、丸剂、散剂、液体制剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、注射剂(液体制剂、混悬剂等)、软膏剂、吸入剂等。

作为成型为片剂所使用的载体，可以广泛使用公知的载体，例如可以列举：乳糖、白糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸钙、高岭土、结晶纤维素等赋形剂；水、乙醇、丙醇、单糖浆、葡萄糖液、淀粉液、明胶溶液、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纤维素、虫胶等粘合剂；藻酸钠、干淀粉、琼脂粉末、昆布多糖粉末、碳酸钙、碳酸氢钠、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯类、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、淀粉、乳糖等崩解剂；季胺碱、十二烷基硫酸钠等促吸收剂；硬脂精、可可脂、氢化油等崩解抑制剂；甘油、淀粉等保湿剂；淀粉、乳糖、高岭土、膨润土、胶态硅酸等吸附剂；精制滑石、硬脂酸盐、硼酸粉末、聚乙二醇等润滑剂等。

另外，片剂可以为根据需要实施了通常的包衣的片剂，例如可以为糖衣剂、明胶包衣片、肠溶包衣片、薄膜包衣片或双层片、多层片。

作为成型为丸剂所使用的载体，可以广泛使用公知的载体，例如可以列举：葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化植物油、高岭土、滑石等赋形剂；阿拉伯胶粉、黄耆胶粉、明胶、乙醇等粘合剂；昆布多糖、琼脂等崩解剂等。

作为成型为栓剂所使用的载体，可以广泛使用公知的载体，例如可以列举聚乙二醇、可可脂、高级醇、高级醇的酯类、明胶、半合成甘油酯等。

在制备成注射剂的情况下，优选液体制剂、乳剂和混悬剂经过杀菌，并且与血液等渗。作为制备成这些液体制剂、乳剂和混悬剂时所使用的稀释剂，可以广泛使用公知的稀释剂，例如可以列举水、乙醇、丙二醇、聚氧化异硬脂醇、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯类等。其中，在注射剂的情况下，为了制备等渗性的溶液，医药制剂中可以含有充分量的食盐、甘油、葡萄糖等，还可以含有通常的溶解助剂、缓冲剂、无痛剂等，可以根据需要进一步含有着色剂、保存剂、香料、矫味剂、甜味剂等、其他的医药品。

软膏剂有糊剂、乳膏剂或凝胶等形态，在制备成这些形态时，作为稀释剂，例如可以使用白色凡士林、石蜡、甘油、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土等。

吸入剂是以通过将有效成分以气溶胶的形态吸入而应用于支气管或肺为目的的制剂，包括粉末吸入剂、吸入液体制剂、吸入气溶胶剂等。粉末吸入剂是指以粉末状固体颗粒的气溶胶的形态吸入的制剂，通常通过将有效成分制成微细的颗粒，根据需要与乳糖等添加剂混合并均匀化而制造。吸入液体制剂是指利用喷雾器等应用的液态的吸入剂，通常通过在有效成分中添加溶剂和适当的等渗剂、pH调节剂等并混合而制造。吸入气溶胶剂是将一定量的有效成分与容器内所填充的喷射剂一起喷雾的定量喷雾式吸入剂。吸入气溶胶剂通常通过在有效成分中添加溶剂和适当的分散剂、稳定剂等，制成溶液或悬浊液，与液态的喷射剂一起填充到耐压性的容器中，再安装定量阀而制造。

本发明的医药组合物可以根据需要含有着色剂、保存剂、香料、矫味剂、甜味剂等、其他的医药品。

本发明的医药组合物中所含的本发明的化合物、其盐或其前药的量没有特别限定，可以从宽范围内适当选择，在医药组合物中通常为0.5～90重量％、1～85重量％、优选1～80重量％。

本发明的医药组合物的给药方法没有特别的限制，可以按照与各种制剂形态、患者年龄、性别、疾病的状况、其他条件相应的方法给药。例如在片剂、丸剂、液体制剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂和胶囊剂的情况下口服给药。另外，在注射剂的情况下，单独给药或与葡萄糖、氨基酸等通常的辅助液混合后静脉内给药，另外，还可以根据需要单独在肌肉内、皮内、皮下或腹腔内等给药。在栓剂的情况下在直肠内给药。在吸入剂的情况下经鼻给药。

含有本发明的化合物、其盐或其前药的医药组合物的给药量考虑用法、患者的年龄、性别、疾病的程度、其他条件选择即可，本发明的化合物、其盐或其前药通常每1日对于体重1kg的给药量为0.01～100mg、优选0.1～50mg，每1日分成1次～数次，或者以2日、3日、4日、5日、6日、1周、2周或4周为1次间隔给药。给药量因各种条件而变动，有时比上述范围少的给药量就足够了，还有时需要超出上述范围的给药量。

另外，本发明的医药组合物还可以作为与其他药剂组合的并用剂。

本发明的化合物、其盐或其前药具有调节TRPC3通道的活性的作用(在本说明书中，有时称为TRPC3调节)、调节TRPC6通道的活性的作用(在本说明书中，有时称为TRPC6调节)、或者调节TRPC3通道和TRPC6通道两者的活性的作用(在本说明书中，有时将这些作用统称为TRPC3和/或TRPC6调节)。并且，本发明的化合物、其盐或其前药具有抑制TRPC3通道的活性的作用(在本说明书中，有时称为TRPC3抑制)、抑制TRPC6通道的活性的作用(在本说明书中，有时称为TRPC6抑制)、或者抑制TRPC3通道和TRPC6通道两者的活性的作用(在本说明书中，有时将这些作用统称为TRPC3和/或TRPC6抑制)。因此，本发明的化合物、其盐或其前药作为TRPC3和/或TRPC6调节剂或者TRPC3和/或TRPC6抑制剂、或者TRPC3和/或TRPC6相关疾病的预防或治疗是有效的。TRPC3和/或TRPC6通道是存在于细胞膜的、控制阳离子向细胞内流入的通道。TRPC3和/或TRPC6通道的抑制在肌成纤维细胞中通过Ca

本发明的医药组合物作为TRPC3和/或TRPC6相关疾病的预防或治疗剂是有用的。TRPC3和/或TRPC6相关疾病例如是由于TRPC3和/或TRPC6通道的过度活化或过度不活化而引起的疾病，没有特别限制，优选TRPC6相关疾病。作为TRPC3和/或TRPC6相关疾病，例如可以列举纤维症(例如肺纤维症、肾纤维症、因纤维化而引起的肝硬化)、神经变性疾病(例如肌萎缩侧索硬化症(ALS)、阿尔茨海默病等)、肌肉变性疾病(例如肌萎缩症等)、炎症性疾病(例如克罗恩病、溃疡性大肠炎、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)等)、威廉斯氏综合征、慢性肾病、心脏肥大、肺高血压症等。优选的疾病例如有纤维症。

另外，现有的TRPC3和/或TRPC6抑制剂容易在肝脏代谢，而本发明化合物等不易在肝脏代谢。另外，PBS溶解性高，因而有利于制剂化，并且，膜通过性高，因而在生物利用度的观点上是有利的。因此，本发明的化合物、其盐或其前药在药物代谢动力学方面优异。所以，与现有的TRPC3和/或TRPC6抑制剂相比，能够以少量长期地发挥抑制活性。

并且，可以预料本发明化合物等对于除TRPC3和TRPC6通道以外的其他TRP通道(例如、TRPC1、TRPC2、TRPC5、TRPC7、TRPM2、TRPV1、TRPV6)、或者其他的Ca

本发明包括TRPC3和/或TRPC6抑制方法，该抑制方法包括对需要TRPC3和/或TRPC6抑制处理的患者给予有效量的通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐、或者其前药的步骤。

本发明包括TRPC3和/或TRPC6相关疾病的预防或治疗方法，该预防或治疗方法包括对需要TRPC3和/或TRPC6相关疾病的预防或治疗的患者给予有效量的通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐、或者其前药的步骤。

本发明包括纤维症的预防或治疗方法，该预防或治疗方法包括对需要纤维症的预防或治疗的患者给予有效量的通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐、或者其前药的步骤。

本发明包括通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐、或者其前药用于制造TRPC3和/或TRPC6相关疾病的预防或治疗剂的用途。

本发明包括通式(1)或(2)所示的化合物、其药学上可接受的盐、或者其前药用于制造纤维症的预防或治疗剂的用途。

实施例

以下，参照参考例和实施例对本发明进行具体说明，但本发明并不限定于这些。其中，化合物的LC/MS分析采用以下的条件。

[LC/MS分析条件]

LC/MS系统：Waters ACQUITY UPLC H-Class/QDa样品管理器–FTN

四元溶剂管理器(Quaternary Solvent Manager)

柱加热器A(Column Heater A)

PDAeλ检测器(PDAeλDetector)

QDa检测器(QDa Detector)

柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(2.1×50mm)流速：0.5mL/min

溶出条件：流动相A：乙腈、流动相B：0.1％甲酸水溶液

[表1]

[实施例1]

5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物011)的合成

步骤1－1

在2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛(2g、10.41mmol)和盐酸羟胺(0.868g、12.49mmol)的乙醇(10mL)的溶液中加入1N氢氧化钠水溶液(12.5mL、12.5mmol)，在室温搅拌3小时。对反应液进行减压浓缩，再利用乙酸乙酯提取。将有机层用水、饱和食盐水清洗后，利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛肟(2.126g)。

步骤1－2

以0℃在2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛肟(2.12g、10.24mmol)的DMF(10mL)的溶液中加入NCS(N-氯琥珀酰亚胺)(1.435g、10.75mmol)，在室温搅拌过夜。LC/MS表示肟转化成100％氯化物。2－氟－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物的溶液不进行精制，用于如下的反应。

步骤1－3

以室温在5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸盐酸盐(1836mg、6.6mmol)和三乙胺(2.93mL、21mmol)的二氯甲烷(10mL)的溶液中加入步骤1－2的2－氟－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液(6mL、约6mmol)，搅拌过夜。在反应溶液中加入10％KHSO

步骤1－4

将(E)－5－氯－6－(4－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(1026mg)的2N氢氧化钾水溶液(6mL)与二噁烷(18mL)的混合溶液以105℃加热搅拌3小时。利用LC/MS分析表明转化率为100％。将溶液减压浓缩，利用2N盐酸水溶液中和，过滤分离所得到的固体。将其干燥，得到876mg的标题化合物。

(Rf＝0.5,乙酸乙酯)

[实施例2]

5－氯－N－甲基－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酰胺(化合物021)的合成

将5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(实施例1的化合物、22.5mg、0.053mmol)、三乙胺(29.4μL、0.211mmol)、1-[二甲基氨基(二甲基亚氨基)甲基]-1H-1,2,3-三唑[4,5-b]吡啶3-氧化物·六氟磷酸盐(以下有时称为HATU)(40.1mg、0.105mmol)和甲胺(0.2mmol)的THF(0.5mL)溶液以室温搅拌过夜。将溶液浓缩，利用制备用液相硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)对残渣进行精制，得到20.8mg的标题化合物。

(Rf＝0.5,1:2己烷/乙酸乙酯)

[实施例3]

(S)－5－氯－6－(3－甲基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物031)的合成

将(S)－2－甲基哌嗪(1.002g、10mmol)、5,6－二氯烟酸(1.92g、10mmol)和N－乙基－N－异丙基丙烷－2－胺(3.48mL、20mmol)的DMF(20mL)的溶液以90℃加热搅拌10小时。利用精制水稀释后，利用10％KHSO

除了使用所得到的粗制(S)－5－氯－6－(3－甲基哌嗪－1－基)烟酸代替5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸盐酸盐以外，按照实施例1的步骤1－3和步骤1－4的方法得到标题化合物。(Rf＝0.25,2:1乙酸乙酯/己烷).

[实施例4]

(R)－5－氯－6－(3－甲基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物041)的合成

除了使用(R)－2－甲基哌嗪代替(S)－2－甲基哌嗪以外，按照实施例3的方法得到标题化合物。

[实施例5]

5－氯－6－(4－(4－(甲氧基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物051)的合成

除了使用2－氟－6－(甲氧基)苯甲醛代替2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛以外，按照实施例1的方法得到标题化合物。

Rf＝0.2,10％甲醇/乙酸乙酯

其中，在合成的过程中得到5－氯－6－(4－((2－氟－6－甲氧基苯基(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物052)(LC-MS:r.t.2.11min.,m/z 409(M+1))。

[实施例6]

4－氯－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物061)的合成

步骤6－1

除了使用2,6－二氯苯甲醛代替2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛以外，按照实施例1的步骤1－1和1－2的方法，得到2,6－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液。

步骤6－2

以室温在1－(2－氯苯基)哌嗪(118mg、0.6mmol)和三乙胺(83μL、0.6mmol)的二氯甲烷(2mL)的溶液中加入步骤6－1的2,6－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液(0.5mL、约0.5mmol)，搅拌3小时。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/甲醇)对残渣进行精制，得到(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(58.7mg)和Z异构体(50mg)。

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(化合物062(E))：

Rf:0.5,3:1己烷/乙酸乙酯,

(Z)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(化合物062(Z))：

Rf:0.3,3:1己烷/乙酸乙酯

步骤6－3

将(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(58.7mg、0.152mmol)的2N氢氧化钾水溶液(1mL)与二噁烷(3mL)的混合溶液以120℃搅拌加热25小时。将溶液减压浓缩，用2N盐酸水溶液中和，在利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/甲醇)对残渣进行精制，得到6.9mg的标题化合物。

[实施例7]

4－氯－3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物071)的合成

步骤7－1

除了使用1－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪盐酸盐代替1－(2－氯苯基)哌嗪以外，按照实施例6的步骤6－2的方法，得到(E)－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟和Z异构体。

(E)－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(化合物072(E))：

(Z)－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(化合物072(Z))：

步骤7－2

利用微波将(E)－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟(192mg、0.498mmol)的2N氢氧化钾水溶液(2mL)与二噁烷(6mL)的混合溶液以120℃搅拌加热1小时。通过LC/MS分析表明转化率约为50％。用1N盐酸水溶液和饱和氯化铵水溶液中和溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/甲醇)对残渣进行精制，得到70.6mg的标题化合物和79mg的起始物质。

[实施例8]

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物081)的合成

步骤8－1

除了使用5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸三氟乙酸盐代替1－(2－氯苯基)哌嗪以外，按照实施例6的步骤6－2的方法，得到5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物082)。

步骤8－2

利用微波将5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(215mg、0.5mmol)的2N氢氧化钾水溶液(2mL)与二噁烷(6mL)的混合溶液以140℃搅拌加热1小时。通过LC/MS分析表明转化率约为90％。用1N盐酸水溶液和10％KHSO

[实施例9]

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)N,N－二甲基烟酰胺(化合物091)的合成

步骤9－1

将6－(4－(叔丁氧基羰基)哌嗪－1－基)－5－氯烟酸(171mg、0.5mmol)、二甲胺(0.75mmol)、三乙胺(209μL、1.5mmol)与HATU(285mg、0.75mmol)的DMF(3mL)溶液以室温搅拌3小时，加入饱和食盐水，并利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱对残渣进行精制，得到153.2mg的叔丁基4－(3－氯－5－(二甲基氨基甲酰基)吡啶－2－基)哌嗪－1－羧酸酯(Rf＝0.45,1:3己烷/乙酸乙酯)。

利用过量的三氟乙酸对该化合物进行处理，得到5－氯－N,N－二甲基－6－(哌嗪－1－基)烟酰胺三氟乙酸盐。

步骤9－2

以室温在5－氯－N,N－二甲基－6－(哌嗪－1－基)烟酰胺(159mg、0.415mmol)与三乙胺(289μL、2.075mmol)的DMF(2mL)的溶液中加入实施例6的步骤6－1的2,6－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液(0.5mL、约0.5mmol)，搅拌3小时。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/甲醇)对残渣进行精制，得到(E)－5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)－N,N－二甲基烟酰胺(化合物092(E)，77.2mg；LC-MS:r.t.2.27min.,m/z 456(M+1))和Z异构体(30mg)。

(Z)－5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)－N,N－二甲基烟酰胺(化合物092(Z))：

步骤9－3

利用微波将(E)－5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)－N,N－二甲基烟酰胺(77.2mg、0.048mg)的2N氢氧化钾水溶液(2mL)与二噁烷(6mL)的混合溶液以140℃搅拌加热1小时。通过LC/MS分析表明转化率约为70％。在溶液中加入10％KHSO

[实施例10]

3－氯－4－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)苯甲酸(化合物101)的合成

步骤10－1

除了使用3－氯－4－(哌嗪－1－基)苯甲酸甲酯代替1－(2－氯苯基)哌嗪以外，按照实施例6的步骤6－2的方法，得到3－氯－4－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)苯甲酸甲酯(化合物102)(LC-MS:r.t.2.97min.,m/z 442(M+1))。

步骤10－2

除了使用3－氯－4－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)苯甲酸甲酯代替5－氯－6－(4－((2,6－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸以外，按照实施例8的步骤8－2的方法，得到标题化合物。

[实施例11]

5－氯－3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物111)的合成

步骤11－1

除了使用2,5－二氯苯甲醛代替2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛以外，按照实施例1的步骤1－1和1－2的方法，得到2,5－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液。

步骤11－2

使用1－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪盐酸盐代替1－(2－氯苯基)哌嗪，并使用2,5－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液代替2,6－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液，除此以外，按照实施例6的步骤6－2的方法，得到(E)－4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,5－二氯苯基)甲酮肟、其Z异构体和E、Z混合物。

(E)－4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,5－二氯苯基)甲酮肟(化合物112(E))：

(Z)－4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,5－二氯苯基)甲酮肟(化合物112(Z))：

步骤11－3

利用微波将(E)－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)(2,5－二氯苯基)甲酮肟(26.8mg、0.069mmol)的2N氢氧化钾水溶液(1mL)与二噁烷(3mL)的混合溶液以120℃搅拌加热0.5小时，接着以140℃搅拌加热1小时。用1N盐酸水溶液和饱和氯化铵水溶液中和溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯)对残渣进行精制，得到17.6mg的标题化合物。

[实施例12]

5－氯－6－(4－(5－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物121)的合成

步骤12－1

使用5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸盐酸盐代替1－(2－氯苯基)哌嗪，并使用2,5－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液代替2,6－二氯－N－羟基－6－苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液，除此以外，按照实施例6的步骤6－2的方法，得到5－氯－6－(4－((2,5－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物122)(LC-MS:r.t.2.46min.,m/z 429(M+1))。

步骤12－2

利用微波将5－氯－6－(4－((2,5－二氯苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(115.1mg、0.5mmol)的2N氢氧化钾水溶液(2mL)与二噁烷(6mL)的混合溶液以140℃搅拌加热2小时。通过LC/MS分析表明转化率约为100％。用1N盐酸水溶液和10％KHSO

[实施例13]

5－氯－6－(4－(5－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物131)的合成

步骤13－1

在2－氯－5－(三氟甲基)苯甲醛(5g、23.97mmol)和盐酸羟胺(2g、28.8mmol)的乙醇(20mL)的溶液中加入1N氢氧化钠水溶液(28.8mL、28.8mmol)，在室温搅拌3小时。对反应液进行减压浓缩，再利用乙酸乙酯提取。将有机层用水、饱和食盐水清洗后，利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到Z与E异构体的混合物的状态的2－氯－5－(三氟甲基)苯甲醛肟(4.77g)。

步骤13－2

以0℃在2－氯－5－(三氟甲基)苯甲醛肟(4.77g、21.33mmol)的DMF(10mL)的溶液中加入NCS(N-氯琥珀酰亚胺)(2.99g、22.4mmol)，在室温搅拌过夜。LC/MS表明肟转化成100％氯化物。2－氯－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物的溶液不进行精制，用于如下反应。

步骤13－3

以室温在5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸盐酸盐(70mg、0.252mmol)和三乙胺(140μL、1.0mmol)的二氯甲烷(1mL)的溶液中加入步骤13－2的2－氯－N－羟基－5－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物的DMF溶液(0.252mL、约0.252mmol)，搅拌3小时。在反应溶液中加入10％KHSO

步骤13－4

利用微波将5－氯－6－(4－((2－氯－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌嗪－1－基)烟酸(117mg、0.253mmol)的2N氢氧化钾水溶液(1mL、2mmol)与二噁烷(5mL)的混合溶液以160℃搅拌加热1小时。通过LC/MS分析表明转化率为100％。利用10％KHSO

[实施例14]

3－(4－(吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物141)的合成

利用微波将3－氯苯并[d]异噁唑(100mg、0.651mmol)和1－(吡啶－2－基)哌嗪(319mg、1.954mmol)的吡啶(1mL)的溶液以150℃搅拌加热1小时。减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯)对残渣进行精制，得到61.1mg的标题化合物。

[实施例15]

3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物151)的合成

利用微波将3－氯苯并[d]异噁唑(77.5mg、0.505mmol)和1－(2－氯苯基)哌嗪(84μL、0.505mmol)的吡啶(1mL)的溶液以180℃搅拌加热40分钟。减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到8.7mg的标题化合物。

Rf:0.5(10:1己烷/乙酸乙酯)

[实施例16]

3－(4－(2,3－二甲基苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物161)的合成

利用微波将3－氯苯并[d]异噁唑(50mg、0.326mmol)和1－(2,3－二甲基苯基)哌嗪(62mg、0.326mmol)的吡啶(1mL)的溶液以180℃搅拌加热30分钟。减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到2.4mg的标题化合物。Rf:0.8(5:1己烷/乙酸乙酯),

[实施例17]

3－(4－(2,4－二氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物171)的合成

利用微波将3－氯苯并[d]异噁唑(55mg、0.358mmol)和1－(2,4－二氯苯基)哌嗪(190mg、0.822mmol)的二甲氧基乙烷(0.5mL)的溶液以160℃搅拌加热120分钟。减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到13.3mg的标题化合物。

[实施例18]

3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噻唑(化合物181)的合成

将2－溴－3－氯吡啶(96mg、0.5mmol)、3－(哌嗪－1－基)苯并[d]异噻唑(110mg、0.5mmol)、Pd

Rf＝0.75,(2:1己烷/乙酸乙酯)

[实施例19]

5－氯－6－(8－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)烟酸(化合物191)的合成

步骤19－1

将叔丁基(1R,5S)－3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－8－羧酸酯(0.5g、2.355mmol)、5,6－二氯烟酸(0.452g、2.355mmol)的吡啶(5mL)的溶液以90℃加热搅拌10小时。用精制水稀释后，利用10％KHSO

步骤19－2

以室温在上述的粗制6－(8－(叔丁氧基羰基)－3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)－5－氯烟酸(227mg、0.617mmol)的甲醇(5mL)的溶液中加入过量的亚硫酰氯，放置过夜。将反应混合物浓缩使其干燥固化，得到208.2mg的粗制6－(3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)－5－氯烟酸盐酸盐。不对其进行精制，用于如下步骤。

步骤19－3

以室温在上述的粗制6－(3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)－5－氯烟酸盐酸盐(152mg、0.5mmol)和三乙胺(279μL、2.0mmol)的DMF(1.5mL)的溶液中加入约1N的2－氟－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物的DMF液(0.5mL)，搅拌过夜。利用精制水稀释后，利用10％KHSO

步骤19－4

将5－氯－6－(8－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基(羟基亚氨基)甲基)－3,8－二氮杂双环[3,2,1]辛烷－3－基)烟酸(90mg)的2N氢氧化钾水溶液(0.6mL)和二噁烷(1.8mL)的混合溶液以100℃搅拌加热10小时。通过LC/MS分析表明转化率约为95％。利用精制水将反应溶液稀释后，利用1N盐酸和10％KHSO

Rf＝0.25(2:1乙酸乙酯/己烷)

[实施例20]

7－氯－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物201)的合成

除了使用2,3－二氯苯甲醛代替2,6－二氯苯甲醛以外，按照实施例6的步骤6－1、6－2的方法，得到(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,3－二氯苯基)甲酮肟和其Z异构体。

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,3－二氯苯基)甲酮肟(化合物202(E))：

Rf:0.5,3:1己烷/乙酸乙酯,

(Z)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,3－二氯苯基)甲酮肟(化合物202(Z))：

Rf:0.3,3:1己烷/乙酸乙酯

1H NMR(CDCl

除了使用(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,3－二氯苯基)甲酮肟代替(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟以外，按照与实施例6的步骤6－3的方法，得到标题化合物。

[实施例21]

6－氯－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物211)的合成

除了使用2,4－二氯苯甲醛代替2,6－二氯苯甲醛以外，按照实施例6的步骤6－1、6－2的方法，得到(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,4－二氯苯基)甲酮肟和其Z异构体。

(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,4－二氯苯基)甲酮肟(化合物212(E))：

Rf:0.5(3:1己烷/乙酸乙酯)

(Z)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,4－二氯苯基)甲酮肟(化合物212(Z))：

Rf:0.3(3:1己烷/乙酸乙酯)

除了使用(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,4－二氯苯基)甲酮肟代替(E)－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)(2,6－二氯苯基)甲酮肟以外，按照实施例6的步骤6－3的方法，得到标题化合物。

[实施例22]

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)吡啶－3－基)(吗啉基)甲酮(化合物221)的合成

将5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸替换为5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物081)，并将甲胺替换为吗啉，除此以外，按照实施例2的方法，得到标题化合物。

[实施例23]

5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)－N－(甲基磺酰基)烟酰胺(化合物231)的合成

将5－氯－6－(4－(4－氯苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物081、79mg、0.2mmol)、甲磺酰胺(28.5mg、0.3mmol)、DMAP(4-二甲基氨基吡啶、36.7mg、0.3mmol)和EDC(N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐、57.5mg、0.3mmol)的二氯甲烷(1mL)的溶液在室温搅拌过夜。利用10％KHSO

Rf＝0.3,5％甲醇/乙酸乙酯

[实施例24]

5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸甲酯(化合物241)的合成

将5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物011、110mg)的1N氯化氢甲醇溶液(12mL)以68℃加热搅拌24小时。通过利用LC/MS的解析表明转化率约为90％。将反应混合物浓缩后利用精制水稀释，再利用饱和碳酸氢钠水溶液中和，利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到84.9mg的标题化合物。

(Rf＝0.5,2:1己烷/乙酸乙酯).

[实施例25]

(5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)吡啶－3－基)甲醇(化合物251)的合成

在5－氯－6－(4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸甲酯(化合物241、24mg)和硼氢化钠(4mg)的THF溶液中加入异丙醇(0.08mL)，以65℃加热搅拌4小时。在反应混合物中加入甲醇并进行浓缩，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到4.7mg的标题化合物。

Rf＝0.27,1:1己烷/乙酸乙酯

[实施例26]

3－(4－(3－甲基吡啶－2－基)哌嗪－1－基)－4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑(化合物261)的合成

除了使用1－(3－甲基吡啶－2－基)哌嗪代替5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸盐酸盐以外，按照实施例1的步骤1－3和1－4的方法，得到标题化合物。

[实施例27]

4－甲氧基－3－(4－(2－氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物271)的合成

除了使用2－氟－6－(甲氧基)苯甲醛代替2－氟－6－(三氟甲基)苯甲醛以外，按照实施例1的方法，得到标题化合物。

Rf:0.6(2:1己烷/乙酸乙酯),

[实施例28]

1－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－1,3－二氢－2H－苯并[d]咪唑－2－酮(化合物281)的合成

除了使用1－(哌啶－4－基)－1,3－二氢－2H－苯并[d]咪唑－2－酮代替5－氯－6－(哌嗪－1－基)烟酸盐酸盐以外，按照实施例1的步骤1－3和1－4的方法，得到标题化合物。

其中，在合成过程的步骤1－3中，得到1－(1－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基(羟基亚氨基)甲基)哌啶－4－基)－1,3－二氢－2H－苯并[d]咪唑－2－酮(化合物282；LC-MS:r.t.2.20min.,m/z 423(M+1))。

[实施例29]

2－(2－氧代基－3－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－2,3－二氢－1H－苯并[d]咪唑－1－基)乙酸叔丁酯(化合物291)的合成

将1－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－1,3－二氢－2H－苯并[d]咪唑－2－酮(化合物281、67mg、0.171mmol)、溴乙酸叔丁酯(50mg、0.256mmol)和60％氢化钠(10.4mg、0.256mmol)的DMF(1mL)的溶液以室温搅拌2小时，加入饱和食盐水，并利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，进行过滤、浓缩，利用制备用液相硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)对残渣进行精制，得到标题化合物(86.6mg)。

[实施例30]

2－(2－氧代基－3－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－2,3－二氢－1H－苯并[d]咪唑－1－基)乙酸(化合物301)的合成

将2－(2－氧代基－3－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)－2,3－二氢－1H－苯并[d]咪唑－1－基)乙酸叔丁酯(化合物291、78.3mg)溶于DME(二甲醚、5mL)，加入1N氢氧化钠水溶液(2mL)，以室温搅拌2小时。利用1N盐酸中和，将析出的晶体过滤分离，利用精制水清洗并进行干燥，得到标题化合物(50.8mg)。

[实施例31]

3－(4－(2－氯吡啶－3－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物311)的合成

除了使用1－(2－氯吡啶－3－基)哌嗪代替1－(吡啶－2－基)哌嗪以外，按照实施例14的方法，得到标题化合物。

LC-MS:r.t.2.60min.,m/z 315(M+1)。

[实施例32]

3－(4－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物321)的合成

除了使用1－(3－氯吡啶－2－基)哌嗪代替1－(吡啶－2－基)哌嗪以外，按照实施例14的方法，得到标题化合物。

LC-MS:r.t.2.89min.,m/z 315(M+1)。

[实施例33]

3－(4－(3,5－二氯苯基)哌嗪－1－基)苯并[d]异噁唑(化合物331)的合成

除了使用1－(3,5－二氯苯基)哌嗪代替1－(2,4－二氯苯基)哌嗪以外，按照实施例17的方法，得到标题化合物。

LC-MS:r.t.3.40min.,m/z 348(M+1)

[实施例34]

5－氯－6－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)烟酸甲酯(化合物341)的合成

步骤34－1

将4－(4,4,5,5－四甲基－1,3,2－二氧杂硼烷－2－基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－甲酸叔丁酯(618mg、2mmol)、5,6－二氯烟酸(384mg、2mmol)和碳酸钾(691mg、5mmol)、双三苯基膦二氯化钯(140mg、0.2mmol)添加到二甲氧基乙烷∶乙醇∶水(容积比1∶1∶1)的混合液(12mL)中，在氮气氛下以90℃加热2小时。在反应溶液中加入10％硫酸氢钾水溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用二醇硅胶柱色谱(5％甲醇/乙酸乙酯)对残渣进行精制，得到696mg的1′－(叔丁氧基羰基)－3－氯－1′,2′,3′,6′－四氢－[2,4′－联吡啶]－5－甲酸(收率103％)。

LC-MS:r.t.2.78min.,m/z 284(M+1-C4H8)。

步骤34－2

将1′－(叔丁氧基羰基)－3－氯－1′,2′,3′,6′－四氢－[2,4′－联吡啶]－5－甲酸(696mg,2mmol)添加到甲醇(5mL)中，再加入过量的亚硫酰氯，以45℃加热3小时。将溶剂浓缩，得到3－氯－1′,2′,3′,6′－四氢－[2,4′－联吡啶]－5－甲酸甲酯盐酸盐，不进行精制，用于如下步骤。

LC-MS:r.t.1.55min.,m/z 253(M+1)。

步骤34－3

将3－氯－1′,2′,3′,6′－四氢－[2,4′－联吡啶]－5－甲酸甲酯盐酸盐(322mg,1.114mmol)溶于甲醇(5mL)中，加入Pd/C(53mg)，在氢气氛下以室温搅拌1小时。通过LC/MS确认在反应液中生成了5－氯－6－(哌啶－4－基)烟酸甲酯盐酸盐(1.114mmol)。利用硅藻土过滤反应物除去Pd/C，将滤液浓缩用于如下反应。

LC-MS:r.t.1.57min.,m/z 255(M+1)。

步骤34－4

将含有5－氯－6－(哌啶－4－基)烟酸甲酯盐酸盐(1.114mmol)的浓缩物和三乙胺(0.621mL,4.46mmol)添加到DMF(3mL)中，制作第1液。将1.114mmol的2－氟－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物添加到DMF中，制作第2液(0.88235mmol/mL in DMF)。在室温下将第2液全部量添加到第1液全部量中，搅拌过夜。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到12mg的E/Z混合物形态的5－氯－6－(1－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌啶－4－基)烟酸甲酯(化合物342)。

步骤34－5

将5－氯－6－(1－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)哌啶－4－基)烟酸甲酯(12mg)和对甲苯磺酸(1mg)添加到DMSO(1mL)中，以80℃加热1小时。在其中加入DBU(二氮杂双环十一碳烯，100μL)，以100℃加热90分钟。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到7.7mg的标题化合物。

LC-MS:r.t.4.08min.,m/z 440(M+1)。

[实施例35]

5－氯－6－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)烟酸(化合物351)的合成

将5－氯－6－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌啶－4－基)烟酸甲酯(化合物341；7.7mg)添加到DME(二甲醚，1mL)中，再加入1N氢氧化钠水溶液(0.2mL)，在室温搅拌过夜。将生成液减压浓缩，加入1N盐酸(0.2mL)进行中和。过滤分离生成的粉末，进行减压干燥，得到3.1mg的标题化合物。

LC-MS:r.t.3.66min.,m/z 426(M+1)。

[实施例36]

3－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)－4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑(化合物361)的合成

步骤36－1

将4－(4,4,5,5－四甲基－1,3,2－二氧杂硼烷－2－基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－甲酸叔丁酯(309mg,1mmol)、1－氯－2－碘苯(238mg,1mmol)和碳酸钾(207mg,1.5mmol)、双三苯基膦二氯化钯(70.2mg,0.1mmol)添加到二甲氧基乙烷∶水(容积比2∶1)的混合液(12mL)中，在氮气氛下以90℃加热1小时。在反应溶液中加入10％硫酸氢钾水溶液，利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(己烷/乙酸乙酯)对残渣进行精制，得到287.2mg的4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－甲酸叔丁酯(收率98％)。

LC-MS:r.t.3.77min.,m/z 238(M+1-C4H8)。

步骤36－2

将4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－甲酸叔丁酯(280.5mg)添加到4N盐酸/乙酸乙酯(5mL)中，在室温放置过夜。将溶剂浓缩，得到4－(2－氯苯基)－1,2,3,6－四氢吡啶盐酸盐，不进行精制，用于如下步骤。

LC-MS:r.t.1.75min.,m/z 194(M+1)。

步骤36－3

将4－(2－氯苯基)－1,2,3,6－四氢吡啶盐酸盐(115mg,0.5mmol)和三乙胺(0.209mL,1.5mmol)添加到DMF(3mL)中，制作第1液。将0.5mmol的2－氟－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物添加到DMF中，制作第2液(0.88235mmol/mL in DMF)。在室温下将第2液全部量添加到第1液全部量中，搅拌1小时。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，再利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，得到158.5mg的E/Z混合物形态的E－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)(2－氟－6－(三氟甲基)苯基)甲酮肟(化合物362)。为了将其中的80mg用于如下反应，进行分离，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对剩余部分进行精制，得到E－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)(2－氟－6－(三氟甲基)苯基)甲酮肟(化合物362(E))和其Z异构体(化合物362(Z))。

(E)－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)(2－氟－6－(三氟甲基)苯基)甲酮肟(27.6mg、Rf＝0.56)

LC-MS:r.t.3.41min.,m/z 399(M+1)。

(Z)－(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)(2－氟－6－(三氟甲基)苯基)甲酮肟(17.1mg、Rf＝0.34)

LC-MS:r.t.3.49min.,m/z 399(M+1)。

步骤36－4

将(4－(2－氯苯基)－3,6－二氢吡啶－1(2H)－基)(2－氟－6－(三氟甲基)苯基)甲酮肟(化合物362、E异构体与Z异构体的混合物，80mg，0.2mmol)和对甲苯磺酸(2mg)添加到DMSO(1mL)中，以80℃加热30分钟。向其中加入DBU(100μL)，以100℃加热90分钟。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到67.6mg的标题化合物(收率89％)。

[实施例37]

5－氯－6－(2－氧代基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸乙酯的合成(化合物371)的合成

步骤37－1

将3－氧代基哌嗪－1－甲酸叔丁酯(2.0g,9.99mmol)、5,6－二氯烟酸乙酯(2.3g,10.45mmol)、碳酸铯(6.51g,19.98mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(578mg,0.999mmol)和Pd

步骤37－2

将4－(3－氯－5－(乙氧基羰基)吡啶－2－基)－3－氧代基哌嗪－1－甲酸叔丁酯(369mg,0.961mmol)添加到4N盐酸/乙酸乙酯混合液(5mL)中，在室温下搅拌过夜，将溶剂浓缩使其干燥固化，得到5－氯－6－(2－氧代基哌嗪－1－基)烟酸乙酯盐酸盐。残渣不进行精制，用于如下步骤。

步骤37－3

将5－氯－6－(2－氧代基哌嗪－1－基)烟酸乙酯盐酸盐(296mg,0.925mmol)和三乙胺(0.515mL,3.7mmol)添加到DMF(6mL)中，制作第1液。将0.925mmol的2－氟－N－羟基－6－(三氟甲基)苯甲酰亚胺基氯化物添加到DMF中，制作第2液(在DMF中为0.88235mmol/mL)。在室温下将第2液添加到第1液中，搅拌过夜。在反应溶液中加入10％KHSO

LC-MS:r.t.2.61min.,m/z 489(M+1)。

步骤37－4

将(Z)－5－氯－6－(4－((2－氟－6－(三氟甲基)苯基)(羟基亚氨基)甲基)－2－氧代基哌嗪－1－基)烟酸乙酯(化合物372(Z)，128.8mg)和对甲苯磺酸(10mg)添加到DMSO(2mL)中，以80℃加热1小时。向其中加入DBU(910μL)，以120℃加热30分钟。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，利用乙酸乙酯提取。将有机层利用硫酸镁干燥，减压蒸馏除去溶剂，利用制备用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/己烷)对残渣进行精制，得到标题化合物(50mg、Rf＝0.4,1∶1己烷/乙酸乙酯)。

LC-MS:r.t.2.66min.,m/z 441(M+1)。

[实施例38]

5－氯－6－(2－氧代基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸(化合物381)的合成

将5－氯－6－(2－氧代基－4－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)哌嗪－1－基)烟酸乙酯(化合物371，45mg)添加到DME(2mL)中，再加入2N氢氧化钠水溶液(1mL)，在室温下搅拌过夜。将溶液减压浓缩，加入1N盐酸(2mL)进行中和。将生成的粉末过滤分离，进行减压干燥，得到18.3mg的标题化合物。

LC-MS:r.t.2.66min.,m/z 441(M+1)。

[实施例39]

3－氯－4－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－1,2,3,6－四氢吡啶－4－基)苯甲酸甲酯(化合物391)的合成

除了使用4－溴－3－氯苯甲酸甲酯代替1－氯－2－碘苯以外，按照实施例36的方法，得到标题化合物。

LC-MS:r.t.3.72min.,m/z 437(M+1)。

[实施例40]

3－氯－4－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－1,2,3,6－四氢吡啶－4－基)苯甲酸甲酯(化合物401)的合成

除了使用3－氯－4－(1－(4－(三氟甲基)苯并[d]异噁唑－3－基)－1,2,3,6－四氢吡啶－4－基)苯甲酸甲酯(化合物391)代替化合物371以外，按照实施例38的方法，得到标题化合物。

LC-MS:r.t.3.40min.,m/z 423(M+1)。

[试验例1]

使用瞬时表达TRPC通道的HEK293细胞的钙检验

1.TRPC通道在细胞中的导入和表达

通过脂质转染法在HEK293细胞(来自人胎儿肾的细胞)中导入TRPC6基因，在细胞膜上表达TRPC6通道。具体而言，使用脂质转染剂，向HEK293细胞导入TRPC6的质粒DNA(pCI-neo(promega公司))后，在37℃培养24～48小时，在细胞膜上表达TRPC6通道。同样操作，对导入了TRPC3基因的HEK293细胞进行培养，在细胞膜上表达TRPC3通道。

2.TRPC表达细胞内的钙离子浓度变化的测定

利用胰蛋白酶将培养细胞剥离，重新散布在盖玻片上之后，再以37℃培养3小时。在培养基中加入钙指示剂Fura-2 AM，以37℃培养30分钟，使其进入细胞。在细胞外溶液中，准备含Ca

含Ca

无Ca

在含Ca

0分钟：在加入了含Ca

30秒后：将含Ca

1分钟后：在无Ca

3分钟后：在无Ca

7分钟后：将无Ca

15分钟后：测定结束

试验化合物使用化合物011，其添加量为0.01、0.1、0.5、1.0、5.0、10或50μM。另外，代替试验化合物使用0.1％的DMSO，作为对照。其中，碳酰胆碱(cch)是TRPC通道活化剂，将其应用于细胞时，TRPC通道开口，细胞外溶液中的Ca

将TRPC6表达细胞和TRPC3表达细胞的测定结果以钙成像的方式分别示于图1和图2。对于细胞内Ca

[试验例2]

使用瞬时表达TRPC6通道的HEK293细胞的钙检验

使用与试验例1同样操作制得的TRPC6表达细胞，使用10μM的Pyr 4、以及作为试验化合物的10μM的化合物011、031、041和191，除此以外，与试验例1同样操作，计量测定开始7分钟以后(即置换含Ca

[试验例2－1]

使用瞬时表达TRPC6通道的HEK293细胞的钙检验

作为试验化合物，使用10μM的化合物011、361、362(E)、362(Z)、371、372(Z)、381和401，不使用Pyr 4，除此以外，与试验例2同样操作测定钙离子浓度，求取钙离子增加量。在表2中，以将对照(DMSO)中的钙离子增加量作为100％的相对值表示各试验化合物的钙离子增加量。

[表2]

通过添加试验化合物，流入细胞内的钙离子减少，由此可以确认TRPC6通道的活性化得到了抑制。

[试验例3]

使用瞬时表达TRPC6通道的HEK293细胞的钙检验

使用10μM的Pyr 4、以及作为试验化合物的10μM的化合物202(E)、061和071，作为TRPC通道活化剂，使用ATP代替碳酰胆碱，除此以外，与试验例2同样操作测定钙离子浓度，求取钙离子增加量。将结果示于图4。在图4中，以将对照(DMSO)中的钙离子增加量作为100％的相对值表示钙离子增加量。通过添加试验化合物，流入细胞内的钙离子减少，由此可以确认TRPC6通道的活性化得到了抑制。

[试验例4]

使用瞬时表达TRPC6通道的HEK293细胞的电生理学评价

使用实施与试验例1同样的处置而培养的TRPC6表达细胞进行评价。将转染后的细胞置于显微镜所设置的室内，利用贴片玻璃电极(5～10MΩ)以全细胞(Whole cell)模式测定TRPC6电流。在此所使用的细胞外溶液和细胞内溶液如下。

细胞外溶液：(140mM NaCl,5mM KCl,1mM CaCl

细胞内溶液：(120mM CsOH,120mM天冬氨酸,20mM CsCl,2mM MgCl

保持电位固定在－50mV。通过在细胞中添加碳酰胆碱(100μM)而激发TRPC电流。在添加碳酰胆碱20秒后，在细胞中添加30μM的试验化合物(化合物011)30秒，评价由此引起的电流变化。

将试验例4的结果(化合物011在因碳酰胆碱：cch而激发的TRPC6电流中的效果)示于图5。图5的左图表示－50mV的追踪。图5的右图表示在左图的a、b两个时刻施加约1秒的斜波(－100～+100mV的直线电压)而测得的电流－电压特性曲线。在添加试验化合物后能够看到电流量明显减小，由此，可以确认通过添加试验化合物能够获得TRPC6通道活性化的抑制效果。

[试验例5]

纤维化抑制评价实验1(免疫印迹法和细胞形态观察)

利用免疫印迹评价α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)在成纤维细胞中的表达。从出生后1～3日龄的小鼠分离皮肤成纤维细胞，将2.5×10

将免疫印迹的结果示于图6。在图6中表明试验化合物(特别是10μM)和Pyr 2与对照(DMSO的TGFβ1+)相比，α-SMA抗体的显色浅，确认试验化合物能够较强地抑制由TGFβ1引发的α-SMA的表达。

另外，作为显微镜观察的结果，观察到细胞因添加Pyr 2而伸长，但在添加试验化合物时，未见细胞形态的变化和细胞障碍性。

[试验例6]

纤维化抑制评价实验2(免疫荧光染色法)

与试验例5同样操作从小鼠分离皮肤成纤维细胞，将进行了杀菌处理的直径12mm的盖玻片放入12孔板，接种2.5×10

将荧光染色的结果示于图7(皮肤成纤维细胞)和图8(心脏成纤维细胞)。在两细胞中，TGFβ处置使纤维状的α-SMA的表达增强。化合物011基本与Pyr2同样，能够基本完全抑制由TGFβ引发的α-SMA的表达。