用于治疗和预防细菌感染的新氧代喹嗪化合物

本发明涉及可用于治疗和/或预防哺乳动物的有机化合物，特别是涉及可用于治疗和/或预防细菌感染的DNA促旋酶和/或拓扑异构酶IV的抑制剂。

发明领域

细菌感染是一持续的医学问题，因为抗菌药物最终会使得它们所作用的细菌产生耐药性。几乎所有现有抗生素药物的细菌耐药性都在增加。许多形式的抗生素耐药性甚至可以跨越国界，并以极快的速度传播。因此迫切需要新型的抗菌化合物。

开发抗菌药物的一个靶点是DNA促旋酶和拓扑异构酶IV(细菌IIA型拓扑异构酶)，它们对细胞生命至关重要，可解决DNA复制、转录和重组导致的DNA拓扑问题。DNA促旋酶控制DNA超螺旋并减轻当DNA链未解开时(例如复制期间)发生的拓扑应力。拓扑异构酶IV主要在DNA复制结束时解决连接的染色体二聚体。两种酶均可引起双链DNA断裂；使第二条DNA链通过断裂并重新连接断裂的链。两种酶的活性由ATP的结合和水解驱动。细菌DNA促旋酶由两个A(GyrA)和两个B(GyrB)亚基组成。DNA的结合和切割与GyrA相关，而ATP通过GyrB结合和水解。细菌拓扑异构酶IV也是由两个C(ParC)和两个E(ParE)亚基组成的杂四聚体。后面的亚基与ATP结合(如GyrB)，以提供酶催化转换所需的能量。

对于开发广谱抗生素，DNA促旋酶和拓扑异构酶IV的抑制具有潜力。这些酶在广泛的革兰氏阳性和革兰氏阴性病原体中高度保守。有两类抗生素证明了这种作用机制。第一类，由喹诺酮类代表，通过稳定切割的DNA-酶复合物抑制GyrA和ParC亚基，从而整体抑制促旋酶功能，导致细胞死亡。新生霉素是第二类中唯一上市的药物，通过阻断酶的ATP酶活性发挥其作用。新生霉素于20世纪50年代被确定。但其使用迅速下降并最终退出市场，主要是由于其在许多细菌菌株中的低渗透性、自发耐药性发展的增加以及更有效药物(如20世纪60年代和70年代的青霉素酶稳定的青霉素和第一代头孢菌素)的开发。

最近，已经认识到DNA促旋酶和/或拓扑异构酶IV的强抑制对于酶抑制剂处理的细菌菌株的低耐药性发展是重要的。与广泛使用的喹诺酮类相比，具有不同作用机制的细菌DNA促旋酶和/或拓扑异构酶IV的抑制剂将表现出最小的交叉耐药性，并且可能用于对抗在过去几年中显着增加的喹诺酮耐药性。

发明内容

本发明涉及新的式(I)化合物，

其中，

R

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐、或对映体或非对映体。

本发明的其他目标是新的式(I)化合物、它们的制备、基于本发明化合物的药物及其制备以及式(I)化合物在治疗或预防细菌感染中的用途。式(I)化合物作为DNA促旋酶和/或拓扑异构酶IV抑制剂的用途也是本发明的一个目标。式(I)化合物显示出优异的抗菌活性、良好的溶解性、良好的CC

发明详述

除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。此外，阐述以下定义以说明和定义用于描述本发明的各种术语的含义和范围。

定义

术语“C

术语“卤素”和“卤代”在本文中可互换使用，表示氟、氯、溴或碘。

术语“卤代C

术语“C

术语“杂环基”表示具有3至12个环原子的单价饱和或部分不饱和的单环、二环或三环环系，其包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为碳。在特别的实施方案中，杂环基是具有4至10个环原子的单价饱和或部分不饱和单环或双环环系，其包含1、2或3个选自N、O和S的环杂原子，其余环原子为碳。单环饱和杂环基的实例是氮丙啶基、环氧乙烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、异噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧代-硫代吗啉-4-基、氮杂环庚烷基、二氮杂环庚烷基、高哌嗪基或氧氮杂环庚烷基。二环杂环基可以是螺环、稠环或桥环。二环杂环基的实例是十氢萘啶；氮杂二环[3.2.0]庚基；八氢环戊二烯并[b]吡咯基；八氢环戊二烯并[c]吡咯基；1,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[3,4-c]吡咯基；1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯基；1,7-二氮杂螺[3.4]辛基；1,7-二氮杂螺[4.4]壬基；2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[2,3-c]吡咯基；2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯基；2,3,3a,5,6,6a-六氢吡咯并[3,2-b]吡咯基；2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯基；2,3,3a,5,6,6a-六氢吡咯并[3,2-b]吡咯基；2,3,4a,5,7,7a-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；2,6-二氮杂二环[3.2.0]庚基；2,6-二氮杂螺[3.4]辛基；2,7-二氮杂螺[4.4]壬基；2,8-二氮杂螺[4.5]癸基；2,9-二氮杂螺[4.5]癸基；3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯基；3,3a,4,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡啶基；3,3a,4,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,2-c]吡啶基；3,3a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,2-b]吡啶基；3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b]吡啶基；3,4,6,6a-四氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡咯基；3,4,6,6a-四氢-2H-吡咯并[3,4-b]吡咯基；3,4,6,7,8,8a-六氢-1H-吡咯并[1,2-a]吡嗪基；3,6-二氮杂二环[3.2.0]庚基；3,8-二氮杂二环[4.2.0]辛基；3,7-二氮杂二环[4.2.0]辛基；2,7-二氮杂二环[4.2.0]辛基；3-氮杂二环[3.1.0]己基；5-氮杂螺[2.4]庚基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；6-氮杂螺[3.4]辛基；6-氧杂-2,9-二氮杂螺[4.5]癸基；六氢-1H-异吲哚-2(3H)-基；六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6(2H)-基；六氢吡嗪并[2,1-c][1,4]噁嗪-8(1H)-基；六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6(2H)-基；六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-1(2H)-基；氧杂氮杂二环[2.2.1]庚基；和氧杂氮杂二环[3.1.1]庚基。部分不饱和的杂环基的实例是二氢呋喃基、咪唑啉基、二氢-噁唑基、四氢-吡啶基或二氢吡喃基。单环或二环杂环基还可以被下列基团取代一次、两次或三次：羟基C

术语“顺式-异构体”和“反式-异构体”表示分子或基团(moiety)的相对立体化学。例如：作为“顺式-异构体”的中间体C2

术语“对映体”表示化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。

术语“非对映体”表示具有两个或更多个手性中心并且其分子不是彼此的镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如，熔点、沸点、光谱特性和反应性。

术语“药学上可接受的盐”表示在生物学上或其它方面不是不合需要的盐。药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。

术语“药学上可接受的酸加成盐”表示与无机酸和有机酸形成的那些药学上可接受的盐，无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，有机酸选自脂族的、环脂族的、芳族的、芳脂族的、杂环的、羧酸和磺酸类的有机酸，如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、扑酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸和水杨酸。

术语“药学上可接受的碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些药学上可接受的盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括以下物质的盐：伯、仲和叔胺、取代的胺包括天然存在的取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、三甲胺、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和多胺树脂。

术语“治疗有效量”表示本发明化合物或分子的量，当给予受试者时，(i)治疗或预防特定疾病、疾患或病症，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、疾患或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、疾患或病症的一种或多种症状的发作。治疗有效量将根据化合物、所治疗的疾病状态、所治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、给药途径和形式、主治医学或兽医的判断和其他因素而变化。

术语“药物组合物”表示包含治疗有效量的活性药物成分和药学上可接受的赋形剂的混合物或溶液，其待被施用于哺乳动物，例如需要其的人。

DNA促旋酶和/或拓扑异构酶IV的抑制剂

本发明涉及式(I)化合物，

其中

R

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐、或对映体或非对映体。

本发明的进一实施方案是(ii)根据(i)所述的式(I)化合物，其中

R

R

R

R

2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[2,3-c]吡咯基，其被(C

2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯基，其被C

2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯基，其被C

2,3,4a,5,7,7a-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基，其被C

3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯基，其被(C

3,3a,4,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡啶基，其被C

3,4,6,6a-四氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡咯基，其被C

3-氮杂二环[3.1.0]己基，其被(C

5-氮杂螺[2.4]庚基，其被氨基取代；

氨基C

吗啉基，所述吗啉基是未取代的或被((C

R

R

R

或其药学上可接受的盐、或对映体或非对映体。

本发明的进一实施方案是(iii)根据(ii)所述的式(I)化合物，其中

R

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐、或对映体或非对映体。

本发明的进一实施方案是(iv)根据(ii)所述的式(I)化合物，其中R

本发明的进一实施方案是(v)根据(iv)所述的式(I)化合物，其中R

本发明的进一实施方案是(vi)根据(iv)所述的式(I)化合物，其中R

本发明的进一实施方案是(vii)根据(vi)所述的式(I)化合物，其中R

本发明的进一实施方案是(viii)根据(ii)所述的式(I)化合物，其中

R

R

R

R

2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯基，其被C

3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯基，其被(C

R

R

R

或其药学上可接受的盐或对映体或非对映体。

本发明的进一实施方案是(ix)根据(viii)所述的式(I)化合物，其中

R

R

R

R

甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯基；或

二甲基氨基-3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯基；

R

R

R

或其药学上可接受的盐或对映体或非对映体。

本发明的另一实施方案是选自以下的式(I)化合物：

7-(4-(二甲基氨基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(6-氟-8-(甲基氨基)-4-吗啉代-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-[5,6-二氟-4-(顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,6aS)-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-(4R)-4-(二甲基氨基)-3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-3-(二甲基氨基)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[2,3-c]吡咯-5-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-(5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-4-((3aS,6aS)-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-(4R)-4-(二甲基氨基)-3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-(4S)-4-(二甲基氨基)-3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-(3a,5-二甲基-3,4,6,6a-四氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[5-氰基-6-氟-4-(顺式-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基)-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-(5-氰基-4-(顺式-(4R)-4(二甲基氨基)-3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯-2-基)-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1R,5S,6S)-6-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,6aS)-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5-氰基-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[5-氰基-4-[顺式-3-(二甲基氨基)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[2,3-c]吡咯-5-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-5-氰基-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-1-甲基-3,3a,4,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-基]-5-氰基-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[5-氰基-4-(二甲基氨基)-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[6-氯-4-(顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-(二甲基氨基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-9-甲基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[3-(1-氨基环丙基)吡咯烷-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(4aS,7aR)-4-甲基-2,3,4a,5,7,7a-六氢吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,6aS)-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-6-氰基-5-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-(5,6-二氟-8-(甲基氨基)-4-(顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-9-甲基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-9-氟-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-1-[(二甲基氨基)甲基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-1-甲基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-1-环丙基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-1-(三氟甲基)喹嗪-3-甲酸；

(R)-7-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)吗啉代)-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

(S)-7-(4-(2-((二甲基氨基)甲基)吗啉代)-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-1-(吗啉代甲基)-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-1-(吡咯烷-1-基甲基)喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-1-氯-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,6aS)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,6aS)-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aR,6aR)-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,6aS)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aR,7aR)-1-甲基-3,3a,4,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(3aS,7aS)-1-甲基-3,3a,4,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-[4-[(1S,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1R,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1R,3S)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1S,3S)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1S,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1R,3S)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

7-(4-((1R,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；和

7-(4-((1S,3S)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸；

或其药学上可接受的盐或对映体或非对映体。

合成

本发明化合物可利用任何常规方法制备。在下述流程和实施例中提供了合成所述化合物及其原料的适当方法。除非另外说明，所有取代基，特别是R

流程1

其中X

式(Ig)化合物可根据流程1制备。邻-氟硝基苯(Ia)与胺R

流程2

其中X

或者，式(Ig)化合物可根据流程2制备。式(Id)化合物与二卤代吡啶的偶联可使用钯催化剂和膦配体实现，得到式(Ik)化合物。使用钯催化剂和膦配体环化式(Ik)化合物，得到式(Im)化合物。可以使用卤化试剂如NCS、NBS或NIS对式(Im)化合物进行卤化，得到式(If)化合物，其随后经历吡啶氧化，然后卤化，例如用POCl

流程3

其中X

式(I)化合物可根据流程3制备。引入R

本发明还涉及制备式(I)化合物的方法，该方法包含式(Ii)化合物，

与酸(其可以是例如三氟乙酸)反应；

其中R

药物组合物和施用

另一个实施方案提供含有本发明化合物和治疗惰性载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物或药物，以及使用本发明化合物制备这种组合物和药物的方法。在一个实例中，式(I)化合物可以通过在环境温度下在适当的pH和所需的纯度下与生理学上可接受的载体混合来配制，所述生理学上可接受的载体即在用于盖仑制剂施用形式的剂量和浓度下对接受者无毒的载体。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度，但优选在约3至约8的范围内。在一个实例中，将式(I)化合物配制在pH 5的乙酸盐缓冲液中。在另一个实施方案中，式(I)化合物是无菌的。该化合物可以例如作为固体或无定形组合物、作为冻干制剂或作为水溶液储存。

以符合良好医学实践的方式配制、给药和施用组合物。在这种情况下需要考虑的因素包括所治疗的特定疾病、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、疾病的原因、活性剂的递送部位、施用方法、施用方案以及医师所知的其他因素。待施用的化合物的“有效量”将受这些考虑因素控制，并且是通过抑制细菌DNA促旋酶和/或拓扑异构酶IV来减少细菌负荷或改善宿主存活所需的最小量。例如，这样的量可能低于对正常细胞或哺乳动物整体有毒的量。

在一个实例中，每剂量肠胃外施用的本发明化合物的药学有效量将为约0.1至1000mg/kg，或者约1至100mg/kg患者体重/天。在另一个实施方案中，口服单位剂型，例如片剂和胶囊，优选含有约5至约5000mg本发明化合物。

本发明化合物可以通过任何合适的方式施用，包括口服、局部(包括口腔和舌下)、直肠、阴道、透皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内和硬膜外和鼻内施用，并且如果需要的话，用于局部治疗、病灶内施用。肠胃外输注包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下施用。

本发明化合物可以任何方便的施用形式例如片剂、粉剂、胶囊剂、溶液剂、分散剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂、栓剂、凝胶剂、乳剂、贴剂等施用。这些组合物可含有药物制剂中的常规的组分例如稀释剂、载体、pH调节剂、甜味剂、填充剂和其他活性剂。

通过混合本发明化合物和载体或赋形剂制备典型的制剂。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员熟知的，并且在例如Ansel,Howard C.,等人,

合适的口服剂型的实例是含有约10至500mg本发明化合物的片剂，其混合有约40至400mg无水乳糖、约5至50mg交联羧甲基纤维素钠、约5至50mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K30和约1至10mg的硬脂酸镁。首先将粉末成分混合在一起，然后与PVP溶液混合。可以将所得组合物干燥、制粒，与硬脂酸镁混合并使用常规设备压制成片剂形式。气雾剂制剂的实例可以通过将本发明化合物(例如5至1000mg)溶解在合适的缓冲溶液(例如，磷酸盐缓冲液)中来制备，如果需要，加入张力调节剂，例如盐如氯化钠。可以例如使用0.2微米过滤器过滤溶液，以除去杂质和污染物。

因此，一个实施方案包括药物组合物，其包含式(I)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐。在另一实施方案中，包括药物组合物，其包含式(I)化合物、或其立体异构体或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

另一个实施方案包括药物组合物，其包含式(I)化合物，用于治疗和/或预防细菌感染。

在一些实施方案中，本发明化合物可作为单剂量或多剂量方案的一部分经口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、直肠、经鼻、口腔、阴道或通过植入的储库施用。所用的术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射或输注技术。通常，本发明的药物组合物每天施用约1至5次，或者患者情况改善时连续输注施用。

适应症和治疗方法

通过向需要的受试者施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或对映体或非对映体，本发明的化合物可用于治疗和/或预防人或其它动物的细菌感染。本发明的化合物和方法特别适用于被病原体感染的人类患者，所述病原体包括金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)。还可以通过本发明化合物控制的细菌生物的实例包括但不限于以下革兰氏阳性和革兰氏阴性生物：肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、肠杆菌属物种(Enterobacter spp.species)、变形杆菌属物种(Proteus spp.species)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，Coag.Neg.Staphylococci、流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzae)、炭疽杆菌(Bacillus anthraces)、肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)、卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis)、肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)、结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)、腐生葡萄球菌(Staphylococcus saprophyticus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、土拉弗朗西斯菌(Francisella tularensis)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、艰难梭菌(Clostridium difficile)、拟杆菌属物种(Bacteroides spp.species)、淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)、脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)、类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)、鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia mallei)、伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi)、鸟型分枝杆菌复合体(Mycobacterium avium complex)、脓肿分枝杆菌(Mycobacterium abscessus)、堪萨斯分枝杆菌(Mycobacterium kansasii)、大肠杆菌(E.coli)和溃疡分枝杆菌(Mycobacterium ulcerans)。

细菌感染的实例可包括但不限于上呼吸道感染、下呼吸道感染、耳部感染、胸膜肺和支气管感染、并发的尿路感染(complicated urinary tract infections)、无并发症的尿路感染(uncomplicated urinary tract infections)、腹腔内感染、心血管感染、血流感染、败血症、菌血症、CNS感染、皮肤和软组织感染、GI感染、骨和关节感染、生殖器感染、眼部感染或肉芽肿性感染。特定细菌感染的实例包括但不限于无并发症的皮肤和皮肤结构感染(uSSSI)、并发的皮肤和皮肤结构感染(cSSSI)、导管感染、咽炎、鼻窦炎、外耳炎、中耳炎、支气管炎、脓胸、肺炎、社区获得性细菌性肺炎(CABP)、医院获得性肺炎(HAP)、医院获得性细菌性肺炎、呼吸机相关性肺炎(VAP)、糖尿病足感染、万古霉素耐药性肠球菌感染、膀胱炎和肾盂肾炎、肾结石、前列腺炎、腹膜炎、并发的腹腔内感染(cIAI)和其他腹腔感染、透析相关性腹膜炎、内脏脓肿、心内膜炎、心肌炎、心包炎、输血相关性败血症、脑膜炎、脑炎、脑脓肿、骨髓炎、关节炎、生殖器溃疡、尿道炎、阴道炎、宫颈炎、牙龈炎、结膜炎、角膜炎、眼内炎(endophthalmitisa)、囊性纤维化患者的感染或发热性中性粒细胞减少患者的感染。

此外，本发明涉及式(I)化合物用于治疗和/或预防细菌感染的用途。本发明涉及式(I)化合物在制备用于治疗和/或预防细菌感染的药物中的用途。另一个实施方案包括治疗或预防细菌感染的方法，该方法包括施用有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐或对映体或非对映体。

实施例

通过参考以下实施例将更全面地理解本发明。然而，它们不应被解释为限制本发明的范围。

缩写

文中使用的缩写如下：

ACN或MeCN乙腈

AcOK 乙酸钾

[α]D

B

BINAP 2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联二萘

BOMCl 苄基氯甲基酯

CAMHB Caution-Adjusted Mueller Hinton Broth

calc’d 计算的

CC

CL 清除率

Ct 循环阈值

d 天

DBU 1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯

DCM 二氯甲烷

DHP 二氢吡喃

DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯

DIPEA N,N-二异丙基乙胺

EDTA-k2 依地酸

EtOAc或EA 乙酸乙酯

FA 甲酸

h(s)或hr(s) 小时

HATU： 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐

HPLC： 高效液相色谱

HPLC-UV： 具有紫外检测器的高效液相色谱

IV 静脉内

LAH 氢化铝锂

LDA 二异丙基氨基锂

NADPH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

MIC 最小抑菌浓度

OD 光密度

Pd-Ad

(II)

PE 石油醚

PBS 磷酸盐缓冲盐水

Precat 预催化剂

prep-HPLC 制备型高效液相色谱法

qPCR 定量聚合酶链反应

qRT-PCR 定量实时聚合酶链反应

rel 相对的

rt 室温

Rt 保留时间

rpm 每分钟转数

SEM 2-甲氧基乙基(三甲基)硅烷

SFC 超临界流体色谱

SM 原料

TLC 薄层色谱

UV 紫外检测器

wt 量重

一般实验条件

使用以下仪器之一通过快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge模块。ii)ISCO组合快速色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL

使用X Bridge

使用ChiralPak AD-10μ(200×50mm I.D.)在Thar 350制备型SFC上进行手性分离，流动相A为CO

酸性条件：A：0.1％甲酸和1％乙腈的H

碱性条件：A：0.05％NH

质谱(MS)：通常仅报告指示母体质量的离子，并且除非另有说明，否则引用的质量离子是正质量离子(M+H)

使用Bruker Avance 400MHz获得NMR光谱。

涉及空气敏感试剂的所有反应均在氮气/或氩气氛下进行。除非另有说明，否则试剂来自商业供应商原样使用而无需进一步纯化。

制备实施例

中间体A1

N-(3,4-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

在0℃历经15min将甲胺溶液(355g,2.866mol,25％的乙醇溶液)滴加加至2,4-二氟硝基苯(147g,0.924mol)中。加入完成后，将反应混合物在0℃搅拌2h。将溶液用乙醇(500mL)稀释并倒入2L冰水中。将得到的沉淀通过过滤收集并真空干燥，得到5-氟-N-甲基-2-硝基-苯胺(143g,63％产率)，为黄色固体。

在0℃向氢化钠(141g,3.5mol,60％在矿物油中的分散体)的干燥四氢呋喃(2.0L)混悬液中分份加入5-氟-N-甲基-2-硝基-苯胺(60g，0.35mol，化合物A1.2)。将溶液在0℃搅拌1h。然后将碳酸二叔丁酯(115g，0.53mol)的四氢呋喃(0.5L)溶液滴加加入，并且反应在15℃再持续15h。将反应混合物倒入1.6L冰水中并用EtOAc(1.6L)萃取两次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗产物通过快速色谱法纯化(硅胶，1-5％乙酸乙酯的石油醚溶液)，得到N-(5-氟-2-硝基-苯基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(70g，73％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：293.0([M+Na]

向N-(5-氟-2-硝基-苯基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(70.0g，259mmol，化合物A1.3)的甲醇(1.0L)溶液中加入钯碳(5.0g，10wt.％载荷)。在H

向N-(2-氨基-5-氟-苯基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(80.0g，333mmol，化合物A1.4)和2,3,5-三氯吡啶(66.8g，366mmol，CAS：16063-70-0)的二氧六环(2.0L)溶液中加入碳酸铯(217g，666mmol)、乙酸钯(II)(3.74g，16.7mmol)和BINAP(20.7g，33.3mmol，CAS：98327-87-8)。反应在氮气气氛下在120℃持续16h。然后将反应混合物冷却至室温并用EtOAc(800mL)稀释。将沉淀通过过滤除去。将滤液在真空中浓缩并将残留物通过快速色谱法纯化(硅胶,0.2％至5％EtOAc的石油醚溶液)，得到N-[2-[(3,5-二氯-2-吡啶基)氨基]-5-氟-苯基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(75g，58％产率).MS(ESI)：390.1([{

在氮气气氛下，向N-[2-[(3,5-二氯-2-吡啶基)氨基]-5-氟-苯基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(5.0g，12.95mmol)和DBU(3.94g，25.9mmol，CAS：6674-22-2)在邻二甲苯(7.5mL)和N,N-二甲基乙酰胺(7.5mL)的混合物中的溶液中加入乙酸钯(II)(727mg，3.24mmol)和三环己基膦四氟硼酸盐(2.38g,6.48mmol)。将反应混合物在160℃搅拌6h，然后冷却至室温并倒入水(100mL)中。然后将混合物用EtOAc(200mL)萃取并收集有机层并用水(50mL)洗涤两次和盐水(30mL)洗涤两次，用无水硫酸钠干燥。在真空中浓缩分离的有机层并将残留物通过快速色谱法纯化(硅胶，0.5％～20％EtOAc的二氯甲烷溶液)，得到N-(3-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(873mg，19.3％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：352.1([{

在0℃、氮气气氛下向N-(3-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(4.8g，13.7mmol，化合物A1.5)的二氯甲烷(200mL)溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(9.47g，54.9mmol)。然后，将反应混合物升温至30℃，并搅拌12h。然后，将反应混合物倒入亚硫酸钠水溶液(10％,150mL)中并搅拌1h，随后用EtOAc(750mL)萃取三次。将合并的有机层用碳酸氢钠水溶液(5N,200mL)和盐水(250mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，得到N-(3-氯-6-氟-1-氧负离子基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-1-正离子-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(4.8g,96％产率)，为棕色固体。MS(ESI)：368.1([{

在-5℃向N-(3-氯-6-氟-1-氧负离子基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-1-正离子-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(4.8g，13.1mmol)的二甲基甲酰胺(100mL)溶液中滴加加入三氯氧磷(V)(22.1g，144mmol)。将混合物在-5℃至0℃搅拌1h。然后，在0℃倒入碳酸氢钠水溶液(饱和的,350mL)中。将混合物用EtOAc(500mL)萃取三次，并将合并的有机层用水(200mL)洗涤三次和盐水(150ml)洗涤两次，用硫酸钠干燥并真空浓缩。将粗产物通过用甲醇(120mL)洗涤纯化，得到N-(3,4-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(2.16g，42.9％产率)，为淡黄色固体。MS(ESI)：388.1([{

中间体A2

N-(3,4-二氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

以与中间体A1类似的方法通过在步骤(a)中用2,4,5-三氟硝基苯替换2,4-二氟硝基苯制备N-(3,4-二氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(中间体A2)。MS(ESI)：406.1([{

中间体A2-Br

(3-溴-4-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

向搅拌的(2-氨基-4,5-二氟苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(142.0g，0.550mol)和2,3-二氯吡啶(81.4g，0.550mol，化合物A2.1)的二氧六环(1.5L)溶液中加入碳酸铯(358.6g，1.10mol)。将混合物用氮气脱气2min，然后在氮气下加入乙酸钯(II)(12.3g,0.055mol)和BINAP(68.5g,0.110mmol,CAS：98327-87-8)。然后将得到的混悬液加热至110℃并搅拌3h。然后将反应混合物冷却回到r.t.，并用EtOAc(1.0L)稀释并过滤。将滤液在真空中浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚：EtOAc＝500:1～20:1)，得到(2-((3-氯吡啶-2-基)氨基)-4,5-二氟苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(175.0g，86％产率)，为白色固体。MS(ESI)：370.1([{

将(2-((3-氯吡啶-2-基)氨基)-4,5-二氟苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(175.0g,473.24mmol,化合物A2.2)、Pd

在-60℃向搅拌的(5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(140.0g,0.420mol)和吡啶(166.1g,2.1mol)的四氢呋喃(2.0L)溶液中加入溴(335.6g,2.1mol)。加入后，将混合物升温并在15℃搅拌2h。在LCMS显示原料消耗后，将混合物滴加加入亚硫酸钠水溶液(5.0L,10％)中并在0℃用碳酸钠水溶液调节pH＝8.0，并在25℃再搅拌1h。将混合物用EtOAc(2.0L)萃取三次。然后将合并的有机层用碳酸钠水溶液(1.0L)洗涤两次和盐水(1.0L)洗涤三次。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物，将其用MeOH(1.0L)重结晶，得到(3-溴-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(150.0g,86.6％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：412.1([{

向搅拌的(3-溴-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(150.0g，363.9mmol)的四氢呋喃(1.2L)溶液中加入3-氯过氧苯甲酸(148.0g，727.8mmol，85％wt)。将混合物用氮气脱气2min，然后在50℃搅拌2h。TLC(石油醚：EtOAc＝2:1)显示原料完全消耗后，将反应冷却回到r.t.并将混合物倒入亚硫酸钠水溶液(6.0L，10％)中并搅拌1h。将得到的沉淀通过过滤收集，并用亚硫酸钠水溶液(1.0L，5％)洗涤。将滤饼在减压下蒸发至干，得到3-溴-8-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚1-氧化物(150.0g，96.3％产率)，为黄色固体。MS(ESI)：428.1([{

在冰盐浴下，向搅拌的3-溴-8-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚1-氧化物(150g，0.35mol)的二甲基甲酰胺/四氢呋喃(2.5L，v/v＝1:1)溶液中滴加加入三氯氧磷(V)(421.3g，2.75mol)。将混合物在-5～0℃搅拌4h直到TLC(石油醚：EtOAc＝2:1)显示原料完全消耗。在0℃下将混合物倒入饱和的碳酸钠的水溶液(5.0L)中并用EtOAc(3.0L)萃取两次。将合并的有机层依次用饱和的碳酸钠的水溶液(1.0L)洗涤两次，氯化钙水溶液(1N，1.5L)洗涤四次，和盐水(1.0L)洗涤两次。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗产物，将其用MeOH(1.2L)重结晶，得到(3-溴-4-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(142.0g，产率90.8％)，为白色固体。

中间体A1-Br

N-(3-溴-4-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯

以与中间体A2-Br类似的方法通过在步骤(a)中用2,4-二氟硝基苯替换2,4,5-三氟硝基苯，制备N-(3-溴-4-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(中间体A1-Br)。MS(ESI)：428.1([{

中间体A3

(3-溴-4,5-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

向N-(3-溴-4-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(2.50g，5.83mmol，中间体A1-Br)的DMF(20.0mL)溶液中加入TsOH·H

中间体A4

(3,4-二氯-5-氰基-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据下面的流程图合成标题化合物:

向(3-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.5g，12.86mmol，化合物A1.5)的无水DMF(60.0mL)溶液中加入NBS(4.58g,25.72mmol)和TsOH·H

在手套箱中于氩气下，向(5-溴-3-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g,3.03mmol)、Zn(CN)

向(3-氯-5-氰基-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(1.0g,2.67mmol)的THF(10.0mL)溶液中加入m-CPBA(1.08g,5.34mmol,85％wt)。将反应混合物用氮气脱气2min后，将其在45℃搅拌2h。在TLC(石油醚：EtOAc＝2:1)显示原料完全消耗后，将反应混合物倒入aq.Na

在冰盐浴下向8-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)-3-氯-5-氰基-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚1-氧化物(1.0g,2.56mmol)的DMF/THF(10.0mL,v/v＝1:1)溶液中滴加加入POCl

中间体A5

(3-溴-4,6-二氯-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据下面的流程图合成标题化合物:

在0℃历经15min将甲胺溶液(50.0g,0.28mol,25％的乙醇溶液)滴加至4-氯-2-氟-1-硝基苯(26.6g，0.86mmol，化合物A5.1)中。加入完成后，将反应混合物在0℃搅拌2h，然后将溶液用乙醇(2.5L)稀释。TLC(石油醚/EtOAc＝10:1)显示反应完成后，将反应混合物倒入冰水(2L)中。将得到的沉淀通过过滤收集，并将滤饼再溶于乙酸乙酯中，并用盐水洗涤。然后，将有机层经无水Na

向5-氯-N-甲基-2-硝基苯胺(40.2g，0.216mol，化合物A5.2)的干燥THF(2.0L)溶液中，加入Boc

向(5-氯-2-硝基苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(45.2g，0.16mol，化合物A5.3)的THF(500.0mL)、EtOH(500.0mL)和H

向(2-氨基-5-氯苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(34.2g，133mmol，化合物A5.4)和2,3-二氯吡啶(21.6g，146mmol)的二氧六环(100.0mL)溶液中，加入Cs

将(5-氯-2-((3-氯吡啶-2-基)氨基)苯基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(25.0g，68.1mmol，化合物A5.5)、Pd

在-76℃下，向(6-氯-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(7.0g，21.1mmol，化合物A5.6)的THF溶液中，加入Br

向(3-溴-6-氯-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-(甲基)氨基甲酸叔丁酯(12.7g，31.1mmol，化合物A5.7)的THF(130mL)溶液中，加入m-CPBA(8.1g，46.6mmol)。将得到的反应混合物在30℃搅拌4h后，倒入5％Na

在N

中间体A6

(3-溴-4,6-二氯-5-氰基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

将N-(6-氯-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(化合物A5.6，15.0g，45.21mmol)、NIS(3.0g，135.62mmol)和PTSA(3.4g,18.08mmol)的DMF(5mL)溶液在60℃搅拌3h。将反应混合物冷却至r.t.，将其倒入NaHSO

向搅拌的(6-氯-3-碘-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物A6.1，1.0g，2.18mmol)的DMF(10mL)溶液中，加入NBS(583.4mg，3.28mmol)和PTSA(166.2mg，0.87mmol，0.4eq)。将得到的混合物在40℃搅拌3h后，将其倒入Na

向

在Ar气氛下，将(5-溴-6-氯-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物A6.3，1.9g，4.63mmol)、氰化锌(2.72g,23.13mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(801.9mg，0.69mmol)的NMP(13mL)混合溶液在120℃搅拌1.5h。将反应混合物冷却至r.t.，将其用50mL EtOAc稀释，并过滤。然后，将滤液用CaCl

向(6-氯-5-氰基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物A6.4，1.8g，5.04mmol)的THF(36mL)溶液中，加入吡啶(6.12mL，75.67mmol)。将反应混合物在N

向(3-溴-6-氯-5-氰基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物A6.5，1.35g，3.1mmol)的THF(0.5mL)溶液中，加入3-氯过氧苯甲酸(1.6g，9.3mmol)，并将反应混合物在40℃搅拌16h后，将其倒入5％Na

在氮气气氛、-30℃下，向3-溴-8-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-6-氯-5-氰基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚1-氧化物(化合物A6.6，1.4g，3.1mmol)的DMF(20mL)溶液中，加入磷酰氯(0.43mL，4.65mmol)。将得到的反应混合物首先在-30℃下搅拌2h，然后在10℃下搅拌14h之后，将其倒入5％NaHCO

中间体B1

4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

方法A:

方法B:

方法A：

在N

将2-[2-(5-溴-2-吡啶基)-1-乙氧基-乙基]丙二酸二乙酯(26g，66.97mmol，化合物B1.3)的多磷酸/AcOH(100mL,v/v＝5/2)溶液在120℃搅拌40min。将反应物冷却至r.t.后，将混合物用EtOAc(300mL)稀释，用水(100mL)、盐水(100mL)洗涤。然后，将分离的有机层用无水Na

向7-溴-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(2.01g，6.79mmol，化合物B1.4)和Pin

方法B：

在-78℃向搅拌的6-甲基吡啶-3-醇化合物B1.5(10.0g，91.63mmol，化合物B1.5)的THF(100mL)溶液中，缓慢加入n-BuLi(80.64mL，201.59mmol)。加入后，将反应混合物在-30℃搅拌2h后，将其冷却至-78℃，随后滴加乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯(21.8g，100.8mmol)的THF(40mL)溶液。将得到的混合物在-30℃下再搅拌1小时后，用饱和NH

将2-[1-乙氧基-2-(5-羟基-2-吡啶基)乙基]丙二酸二乙酯(15g，46.1mmol，化合物B1.6)的二甲苯(80mL，46.1mmol)混悬液在140℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温后，通过过滤收集形成的沉淀。将滤饼用MTBE(50mL)冲洗，并真空干燥，得到7-羟基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(5.7g，产率50.79％)，作为黄色粉末。MS(ESI)：234.2([M+H]

在0℃，向7-羟基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(4.0g，17.15mmol，化合物B1.7)的DCM(64mL)溶液中，缓慢加入三乙胺(3.47g，34.3mmol)和N,N-二(三氟甲基磺酰基)苯胺(12.25g，34.3mmol)。将得到的混合物在0℃下搅拌1h后，用饱和NaHCO

在氩气气氛下，向4-氧代-7-(三氟甲基磺酰氧基)喹嗪-3-甲酸乙酯(6.5g，17.79mmol，化合物B1.8)的1,4-二氧六环(100mL)溶液中，加入Pin

中间体B2

9-甲基-4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

在-65℃下，向二(异丙基)胺(4.9g，0.049mol)的无水THF(30mL)溶液中，加入n-BuLi(21.6mL，2.0M的THF溶液)，并将混合物在氩气气氛下搅拌1小时。此后，缓慢加入5-溴-2,3-二甲基-吡啶(5.0g，0.027mol，化合物B2.1)的无水THF(10.0mL)的溶液，并将得到的混合物在氩气气氛下再搅拌1h。然后，缓慢加入2-(乙氧基亚甲基)丙二酸二乙酯(8.8g，0.041mol，化合物B2.1A)的无水THF(10.0mL)溶液，并将合并的反应混合物在氩气气氛下再搅拌1h。将反应混合物倒入NH

向PPA(20mL)的溶液中，加入2-(2-(5-溴-3-甲基吡啶-2-基)-1-乙氧基乙亚基)丙二酸二乙酯(6.5g，0.016mol，化合物B2.2)，并将反应混合物在130℃下搅拌1h。冷却至r.t.后，将反应混合物倒入水(100mL)中，并用EtOAc(75mL)萃取三次。有机层用盐水洗涤，无水Na

在N

中间体B3

4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

向7-溴-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(200.0mg，0.680mmol，化合物B1.4)的氯仿(5mL)溶液中，加入N-氯琥珀酰亚胺(120.0mg，0.810mmol)，并将得到的反应混合物在50℃下搅拌18h。将反应物冷却至室温后，将混合物用DCM(40mL)稀释，用饱和NaHCO

中间体B4

7-溴-9-氟-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

在氩气气氛下，将2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(8.87g，70.62mmol，2当量)、2,5-二溴-3-氟吡啶(9.0g，35.31mmol，1eq)、Pd(Ph

在N

在N

将2-(2-(5-溴-3-氟-4-(三甲基硅烷基)吡啶-2-基)-1-乙氧基乙基)丙二酸二乙酯(350mg，0.730mmol)、乙酸(0.5mL)和多磷酸(1mL)的混合物溶液在130℃搅拌0.75h。将其冷却至r.t.后，将反应混合物用EtOAc(30mL)和冰冷的水(30mL)处理。用另外的EtOAc(30mL)萃取水相后，将合并的有机层经无水Na

将7-溴-9-氟-4-氧代-8-(三甲基硅烷基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(950mg，2.46mmol)和四丁基氟化铵(4.92mL，4.92mmol，？M的THF溶液)的THF(10mL)溶液在15℃搅拌1h。然后，将反应混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(50mL)萃取两次。将合并的有机层真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化(NH

中间体B5

7-溴-1-((二甲基氨基)甲基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

在0℃下，将POCl

向7-溴-1-甲酰基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(150.0mg，0.460mmol)的THF(15mL)溶液中，加入二甲胺的THF(1.16mL，2.31mmol)和AcOH(69.5mg，1.16mmol)溶液。将其在50℃下搅拌4小时后，加入NaBH(OAc)

中间体B6

7-溴-1-甲基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

向7-溴-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(1.00g，3.38mmol，化合物B6.1)的DMF(15mL)溶液中，加入N-碘琥珀酰亚胺(1.90g，8.44mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌2h后，将其倒入10％Na

在氩气气氛下，手套箱中，向7-溴-1-碘-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(150.0mg，0.360mmol，化合物B6.2)、三甲基环三硼氧烷(178.47mg，1.42mmol)和Na

中间体B7

7-溴-1-环丙基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯

类似于7-溴-1-甲基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(中间体B6)的制备，通过用环丙基硼酸(326mg，3.79mmol)代替三甲基环三硼氧烷，制备标题化合物，在Prep-TLC(DCM:MeOH＝30:1)纯化后，得到7-溴-1-环丙基-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(52mg，0.150mmol，产率31.36％)，作为黄色固体物。MS(ESI)：338.1([{

中间体B8

7-溴-4-氧代-1-(三氟甲基)喹嗪-3-甲酸乙酯

在氩气气氛下，手套箱中，向7-溴-1-碘-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(200mg，0.47mmol，化合物B6.2)和2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸甲酯(300mg，1.56mmol，化合物B8.1)的DMF(8mL)溶液中，加入CuI(271mg，1.42mmol)。将反应混合物在70℃下搅拌3小时，然后冷却至r.t.，并用EtOAc(100mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到粗产物，将其通过Prep-TLC纯化(DCM：MeOH＝30：1)，得到7-溴-4-氧代-1-(三氟甲基)喹嗪-3-甲酸乙酯(110mg，0.30mmol，产率60.15％)，作为黄色固体物。

MS(ESI)：364.1([{

中间体B9

7-溴-1-(吗啉代甲基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

向7-溴-1-甲酰基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(150mg，0.46mmol，化合物B5.2)的THF(20mL)溶液中，加入吗啉(202mg，2.31mmol)。将混合物在70℃搅拌12h后，加入NaBH(OAc)

中间体B10

4-氧代-1-(吡咯烷-1-基甲基)-7-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯

根据下述流程图，合成标题化合物：

在0℃下将POCl

向1-甲酰基-4-氧代-7-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(50.0mg，0.13mmol)和吡咯烷的乙醇(5mL)溶液中，加入乙酸(0.2mL,3.5mmol)，并将混合物在N

中间体C1

(4R)-顺式-N,N-二甲基-1,2,3,3a,4,5,6,6a-八氢环戊二烯并[c]吡咯-4-胺

根据下述流程图，合成标题化合物：

向rac-(3aR,4R,6aS)-4-氨基-3,3a,4,5,6,6a-六氢-1H-环戊二烯并[c]吡咯-2-甲酸叔丁酯(900mg，3.98mmol，化合物C1.1)和甲醛(900mg，8.99mmol)混合物的甲醇(10mL)溶液中，加入NaBH

向

中间体C2

顺式-N,N-二甲基-1,2,3,3a,4,5,6,6a-八氢环戊二烯并[c]吡咯-4-胺

根据下述流程图，合成标题化合物：

向rac-(3aS,6aS)-3-氧代-3a,4,6,6a-四氢呋喃并[2,3-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(700mg，3.08mmol，化合物C2.1)的甲醇(10mL)溶液中，加入二甲基胺(7.7mL，15.4mmol，2.0M的THF溶液)。将混合物在25℃下搅拌1h后，缓慢加入NaBH

步

将顺式-3-(二甲基氨基)-2,3,3a,4,6,6a-六氢呋喃并[2,3-c]吡咯-5-甲酸叔丁酯(600mg，2.34mmol，化合物C2.2)的HCl/EtOAc(10mL，4M)溶液在25℃搅拌16h后，将其真空浓缩，得到顺式-N,N-二甲基-3,3a,4,5,6,6a-六氢-2H-呋喃并[2,3-c]吡咯-3-胺盐酸的粗产物(300mg，产率66.52％)，作为白色固体物。MS(ESI)：157.2[(M+H)+].不需进一步纯化，将其直接用于下一步骤。

中间体C3

(4S)-顺式-N,N-二甲基-1,2,3,3a,4,5,6,6a-八氢环戊二烯并[c]吡咯-4-胺

类似于中间体C1，用(4S)-顺式-4-氨基六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯代替(4R)-顺式-4-氨基六氢环戊二烯并[c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯(化合物C1.1)，制备标题化合物。

中间体C4

3a,5-二甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯

根据下述流程图，合成标题化合物：

向1-苄基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-3a,5(1H)-二甲酸5-叔丁酯3a-乙酯(800mg,2.14mmol)的THF(2.0mL)溶液中，加入LiAlH

向(1-苄基-5-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯-3a-基)甲醇(700.0mg,2.84mmol,化合物C4.2)、TsCl(650mg,3.41mmol)和TEA(862.2mg,8.52mmol)的DCM(5.0mL)溶液中加入DMAP(69mg,0.568mmol)，并将得到的混合物在28℃搅拌3h。然后，将反应混合物用EtOAc(50.0mL)稀释并过滤。将滤液真空浓缩，得到粗产物4-甲基苯磺酸(1-苄基-5-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯-3a-基)甲基酯(900mg，产率79.08％)，作为为黄色油状物。MS(ESI)：401.1(M+H)

在0℃，向4-甲基苯磺酸(1-苄基-5-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯-3a-基)甲基酯(900mg,2.25mmol,化合物C4.3)的THF(15mL)溶液中，缓慢地加入LiAlH

向1-苄基-3a,5-二甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯(400.0mg，0.521mmol，化合物C4.4)的EtOH(5.0mL)溶液中加入Pd(OH)

中间体C5

顺式-1-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯

根据下述流程图，合成标题化合物：

在N

将顺式-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-甲酸叔丁酯(500.0mg，2.21mmol，化合物C5.2)混合物的HCl/MeOH(20.0mL，80mmol，2M)溶液在25℃搅拌1h。随后，将混合物真空浓缩，得到粗产物1-甲基-3,3a,4,5,6,6a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b]吡咯(300mg，2.38mmol，产率107.6％)，作为黄色油状物。不需进一步纯化，将其直接用于下一步骤。

中间体C6

(1R,5S,6S)-N,N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-胺盐酸盐

根据下述流程图，合成标题化合物：

向(1R,5S,6S)-6-氨基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(400.0mg，2.017mmol)的无水EtOH(10.0mL)溶液中，加入HCOH/EtOH(1.64g，20.17mmol，37％的H

将(1R,5S,6S)-6-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(400.0mg，1.77mmol，化合物C6.2)的HCl/二氧六环(2mL，4M)溶液在25℃搅拌3h。然后，将混合物真空浓缩，得到粗产物(1R,5S,6S)-N,N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-6-胺盐酸盐(400.0mg)，作为棕色油状物。MS(ESI)：127.1([M+H]

中间体C7

顺式-1-甲基-2,3,3a,4,5,6,7,7a-八氢吡咯并[2,3-c]吡啶盐酸盐

类似于中间体C5，通过用顺式-六氢-1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-6(2H)-甲酸叔丁酯代替顺式-(2,3,3a,4,6,6a-六氢-1H-吡咯并[3,4-b]吡咯-5-甲酸乙酯(化合物C5.1)，制备标题化合物。

中间体C8

(S)-N,N-二甲基-1-(吗啉-2-基)甲胺盐酸盐

根据下述流程图，合成标题化合物：

向(S)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.0g，4.6mmol，化合物C8.1)的DCM(5mL)溶液中，加入p-甲苯磺酰氯(0.97g，5.06mmol)、三乙胺(0.64mL，4.6mmol)和4-二甲基氨基吡啶(56.23mg，0.460mmol)，并将得到的反应混合物在25℃下搅拌16h。将混合物用20mL EtOAc稀释并过滤，然后将滤液真空浓缩，得到粗产物(S)-2-((对甲苯磺酰基氧基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(2g，5.38mmol，产率95.92％)。MS(ESI)：394.2([M+Na]

将(S)-2-((甲苯磺酰基氧基)甲基)吗啉-4-甲酸乙酯(1.9g，5.12mmol，1eq)和二甲基胺/THF(20.46mL，40.92mmol)的混合物溶液在60℃搅拌24h。将反应混合物冷却至r.t.后，将其真空浓缩，得到粗产物，将其通过硅胶快速色谱纯化，得到(R)-2-((二甲基氨基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1g，4.09mmol，产率80.01％)，作为黄色油状物。MS(ESI)：245.1([M+H]

将(R)-2-((二甲基氨基)甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(1.0g，4.09mmol)的HCl/1,4-二氧六环(5.0mL，20mmol，4M)溶液在25℃搅拌4h。然后，将混合物用20mL EtOAc稀释并过滤。真空干燥滤饼，得到粗产物(S)-N,N-二甲基-1-(吗啉-2-基)甲胺盐酸盐(620mg，3.43mmol，产率83.84％)，作为白色固体物。不需进一步纯化，将其直接用于下一步骤。

中间体C9

(R)-N,N-二甲基-1-(吗啉-2-基)甲胺盐酸盐

类似于中间体C8，通过用(R)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯代替(S)-2-(羟基甲基)吗啉-4-甲酸乙酯(化合物C8.1)，制备标题化合物。

实施例1.01

7-(4-(二甲基氨基)-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸

向N-(3,4-二氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(中间体A2，2.80g，6.96mmol，作为表1中的“CORE”)和DIPEA(11.69g，90.48mmol)的DMSO(6.0mL)溶液中，加入N-甲基甲胺盐酸盐(5.60g，69.60mmol，作为表1中的“胺”)，将反应溶液在100℃下搅拌18小时。将其冷却至r.t.后，将混合物倒入水(150mL)中，并用EtOAc(100mL)萃取两次。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤3次，用无水Na

在氩气气氛下，将N-[3-氯-4-(二甲基氨基)-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(250.0mg，0.610mmol)、4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)喹嗪-3-甲酸乙酯(313mg，0.730mmol)(中间体B1，1.80g，3.80mmol，作为表1中的“硼酸试剂”)、K

向7-(8-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-4-(二甲基氨基)-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(200.0mg，0.340mmol)的乙醇(5mL)溶液中，加入NaOH水溶液(1.0Ml，1N)，并将混合物在15℃下搅拌16h。然后，将混合物真空浓缩，并将残余物用1N HCl酸化至pH＝5～6，并用EtOAc(30mL)萃取3次。将合并的有机层经Na

向7-[8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-4-(二甲基氨基)-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸(150.0mg，0.270mmol)的DCM(5mL)溶液中，加入三氟乙酸(1.0mL,12.98mmol)。将反应混合物在15℃搅拌1h后，将溶液真空浓缩，得到粗产物，将其用RP-18(水-CAN，0.5％NH

以与制备实施例1.01类似的方法，在步骤(a)中用所述“核心(CORE)”替换N-(3,4-二氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(中间体A2)，在步骤(a)中用所述“胺”替换N-甲基甲胺盐酸盐，在步骤(b)中用所述“溶剂”替换THF/H

表1.化合物合成和表征

实施例2.01

7-(5,6-二氟-8-(甲基氨基)-4-(顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-9-甲基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸

向(3-溴-4-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A2-Br，210.0mg，0.47mmol，作为表2中的“核心”)和顺式-5-甲基八氢吡咯并[2,3-c]吡咯(118.0mg，0.94mmol，作为表2中的“胺”)的DMSO(2.0mL)溶液中，加入DIPEA(181.9mg，1.41mmol)，并将所得混合物加热至120℃，保持12h。将反应混合物冷却至室温后，将其倒入水(100mL)中，并用EtOAc(100mL)萃取三次。将合并的有机层经Na

在氩气气氛、0℃下，向(3-溴-5,6-二氟-4-(顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(155.6mg，0.291mmol)的无水THF(1.0mL)溶液中，加入i-Pr-MgCl-LiCl(0.67mL，1.3mol的THF溶液)。加完后，将反应混合物在25℃下搅拌3h，然后加入2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(162.3mg，0.872mmol)，并将反应混合物在25℃下再搅拌1h。然后，将混合物倒入NH

将(5,6-二氟-4-((顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100.0mg，0.172mmol)、7-溴-9-甲基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(79.5mg，0.257mmol)(中间体B2/步骤b，75mg，0.16mmol，作为表2中的“溴化物试剂”)和K

向2-(6-(8-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-6-氟-4-(顺式-5-甲基六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1(2H)-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-1,8-萘啶-1(4H)-基)乙酸乙酯(65.3mg，0.095mmol)的THF(2.0mL)和H

将7-(8-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-5,6-二氟-4-(顺式-5-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-9-甲基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸(51.3mg，0.078mmol)的TFA(0.4mL)和DCM(2.0mL)溶液在25℃搅拌2h。然后将混合物真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化(0.5％TFA作为添加剂)，得到7-(5,6-二氟-8-(甲基氨基)-4-(顺式-5-甲基六氢吡咯并[2,3-c]吡咯-1(2H)-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-9-甲基-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸(33.5mg，产率77.0％)，作为黄色固体物。MS(ESI)：559.3([M+H]

类似于实施例2.01，步骤(a)中用所述“核心”代替(3-溴-4-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A2-Br)，步骤(a)中用所述“胺”代替顺式-5-甲基八氢吡咯并[2,3-c]吡咯，步骤(b)中用所述“溶剂”代替THF/H

表2.化合物合成和表征

实施例3.01A

7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸

向(3-溴-4-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A1-Br，500.0mg，1.17mmol，作为表3中的“核心”)的DMSO(5mL)混合物中，加入N,N-二异丙基乙基胺(454mg，3.51mmol)和顺式-1-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯(222.0mg，1.76mmol，作为表3中的“胺”)，并将得到的反应混合物在115℃下搅拌16h。将其冷却至室温后，将混合物用EtOAc(200mL)稀释，并用盐水(50mL)洗涤3次。然后，将有机层用无水Na

将顺式-N-[4-[1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-3-溴-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.58mmol)的THF(2mL)溶液脱气，并用氩气清洗3次后，缓慢加入1,1-二甲基丙基-氯化镁(2.23mL，2.89mmol，1M的THF溶液)，并将得到的混合物在25℃搅拌3h。加入2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(540mg，2.9mmol)，并将混合物在氩气气氛、25℃下再搅拌1h。将反应混合物用饱和NH

将顺式-[4-[1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]硼酸(220mg，0.46mmol)、7-溴-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(135mg，0.46mmol，作为表3中的“溴化物试剂”),Pd-Ad

将130mg顺式-7-[8-[叔丁氧羰基-(甲基)氨基]-6-氟-4-(1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯经手性SFC纯化，得到7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(60mg，产率44.77％，峰1Rt＝5.802min)，作为黄色油状物，以及7-[4-[(3aS,6aS)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(60mg，产率42.46％，峰2Rt＝6.945min)，作为另一种黄色固体物，SFC柱：OD(250mm×30mm，10μm，流动相：40％IPA(0.1％NH

向7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(60mg，0.09mmol)的乙醇(5mL)溶液中，加入NaOH的水溶液(1.5mL，1.5mmol，1N)，并将得到的混合物在25℃搅拌1h。然后，将反应混合物用水(20mL)稀释并用1N HCl酸化至pH＝5。将水层用EtOAc(30mL)萃取3次，然后将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用无水Na

向7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸(55mg，0.09mmol)的DCM(5mL)混合物中，加入三氟乙酸(1.5mL，19.47mmol)。将得到的混合物在25℃搅拌0.5h后，将混合物真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化(水-CAN，0.1％TFA作为添加剂)，得到7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸(20mg，产率35.36％)，作为黄色固体物。MS(ESI)：527.3[(M+H)

实施例3.01B

7-[4-[(3aS,6aS)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸

类似于实施例3.01A，在步骤(e)中，通过用7-[4-[(3aS,6aS)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯代替7-[4-[(3aR,6aR)-1-甲基-2,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯，制备标题化合物。MS(ESI)：527.3[(M+H)

类似于实施例3.01A和实施例3.01B，在步骤(a)中用所述“核心”代替(3-溴-4-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A1-Br)，在步骤(a)中用所述“胺”代替顺式-1-甲基八氢吡咯并[3,4-b]吡咯，在步骤(b)中用所述“溶剂”代替THF/H

表3.化合物合成和表征

实施例4.01A

7-[4-[(1S,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸

将N-(3,4-二氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯(400.0mg，1mmol，中间体A2，作为表4中的“核心”)、5-氮杂螺[2.4]庚烷-1-基氨基甲酸叔丁酯(390.8mg，1.8mmol，作为表4中的“胺”)和N,N-二异丙基乙基胺(0.57mL，3.2mmol)的DMSO(5mL)溶液在110℃搅拌12h。冷却至r.t.后，将混合物用EtOAc(100mL)稀释，倒入水(100mL)中，并用EtOAc(100mL)萃取。将有机层用饱和NaCl水溶液(100mL)洗涤，经无水Na

将550mg N-[4-[2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基]-3-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基]-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯进行手性SFC分离，得到(4-((1S,3R)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-3-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，峰2，Rt＝3.895min)。MS(ESI)：770.6([{

SFC条件：柱子：AD,250×20mm I.D.,5μm.流动相：A为CO

将(4-((1S,3R)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-3-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(100.0mg，0.2mmol)、4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(70.0mg，0.2mmol，中间体B1，作为表4中的“硼酸试剂”)和K

向7-[4-[(2S,3R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸乙酯(95.0mg,0.13mmol)的乙醇(5.0mL)和水(1.0mL)溶液中，加入NaOH(50.0mg，1.2mmol)，并将得到的反应混合物在20℃下搅拌2h。然后，将反应混合物用DCM(50mL)稀释，倒入冰水(20mL)中，用HCl水溶液(2M)调节至pH＝3，并用DCM(100mL)萃取。然后，将有机层用盐水(50mL)洗涤，用无水Na

向7-[4-[(2S,3R)-2-(叔丁氧羰基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基]-8-[叔丁氧羰基(甲基)氨基]-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸(90.0mg,0.12mmol)的无水DCM(4.0mL)溶液中，加入三氟乙酸(2.0mL，25.9mmol)，并将得到的反应混合物在20℃下搅拌1h。之后，将混合物真空浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(0.1％TFA作为添加剂)纯化，得到7-[4-[(1S,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基]-5,6-二氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基]-4-氧代-喹嗪-3-甲酸(37mg,46.3％产率)，作为黄色固体物。MS(ESI)：531.2([M+H]

类似于实施例4.01A，在步骤(a)中用所述“核心”代替(3-溴-4-氯-5,6-二氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A2)，在步骤(a)中用所述“胺”代替N-甲基甲胺盐酸盐，在步骤(c)中用所述“溶剂”代替THF/H

表4.化合物合成和表征

实施例5.01A

7-(4-((1S,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-8-(甲基氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸

向(3-溴-4,5-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A3，900.0mg，1.94mmol，作为表5中的“核心”)、5-氮杂螺[2.4]庚烷-1-基氨基甲酸叔丁酯(500.0mg，2.36mmol)的环丁砜(10.0mL)溶液中，加入DIPEA(750.0mg，5.80mmol)，然后将溶液在100℃下搅拌2h。然后，将混合物倒入水(100mL)中，用EtOAc(80mL)萃取两次。将合并的有机层用无水Na

通过SFC分离反式-(3-溴-4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(320.0mg，0.500mmol)。SFC分离后，浓缩第一个峰的洗脱液，得到(3-溴-4-((1S,3R)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(峰1，Rt＝1.206min，80.0mg，旋光：(-))，作为黄色固体物，浓缩第二个峰的洗脱液，得到(3-溴-4-((1R,3S)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡咯并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(峰2，Rt＝1.425min，78.0mg，旋光：(+))，作为黄色固体物。SFC条件：柱子：Daicel Chiralcel AS(250mm×30mm,10μm)；流动相：0.1％NH

通过SFC分离顺式-(3-溴-4-(1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(710.0mg，1.11mmol)。SFC分离后，浓缩第一个峰的洗脱液，得到(3-溴-4-((1R,3R)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(峰3，Rt＝1.558min，360.0mg，旋光：(-))，作为黄色固体物，以及浓缩第二个峰的洗脱液，得到(3-溴-4-((1S,3S)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(峰4，Rt＝1.620min，300.0mg，旋光：(+))，作为黄色固体物。SFC条件：柱：Daicel Chiralcel OD(250mm×30mm,10μm)；流动相：0.1％NH

向化合物(3-溴-4-((1S,3R)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(30.0mg，0.047mmol)、4-氧代-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊-2-基)-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(38.0mg，0.077mmol，作为表5的“硼酸试剂”)的THF/H

向7-(8-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-4-((1S,3R)-1-((叔丁氧羰基)-氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡咯并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸乙酯(25.0mg，0.032mmol)的EtOH(5.0mL)溶液中，加入NaOH(1N水溶液，2.0mL)，然后，将溶液在20℃搅拌18h。然后，将混合物浓缩以除去有机溶剂，并将残余物用1N HCl酸化至pH＝5～6，然后用EtOAc(30mL)萃取两次。将合并的EtOAc层用盐水(30mL)洗涤3次，用无水Na

向7-(8-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)-4-((1S,3R)-1-((叔丁氧羰基)-氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-9H-吡咯并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸(25.0mg，0.032mmol)的DCM(3.0mL)溶液中，加入TFA(0.5mL)。在20℃搅拌2小时后，浓缩反应混合物，得到粗物质，将其溶于MeCN(3mL)中，并通过制备型HPLC(水(1％TFA)-ACN)纯化，得到7-(4-((1S,3R)-1-氨基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-5-基)-5-氯-6-氟-8-(甲基-氨基)-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-3-基)-4-氧代-4H-喹嗪-3-甲酸(5.2mg，21.6％)。MS(ESI)：547.1[{

类似于实施例5.01A，在步骤(a)中用所述“核心”代替(3-溴-4,5-二氯-6-氟-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚-8-基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(中间体A3)，在步骤(c)中用所述“溶剂”代替THF/H

表5.化合物合成和表征

生物学实施例

实施例6

50％生长抑制浓度(IC

化合物对金黄色葡萄球(S.aureus)(ATCC29213)、肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)(ATCC10031)和鲍曼不动杆菌(A.baumannii)(ATCC17978)的体外抗菌活性是根据以下方法测定的：

该测定法使用10点Iso-Sensitest肉汤培养基来定量测量化合物对金黄色葡萄球菌ATCC29213、肺炎克雷伯菌ATCC 10031和鲍曼不动杆菌ATCC17978的体外活性。

将DMSO中的储备化合物在384孔微量滴定板中连续两倍稀释(范围为50至0.097μM最终浓度)，并在Iso-Sensitest肉汤培养基中接种49μL细菌混悬液，以50μL/孔的最终体积/孔，最终细胞浓度为～5×10

通过在16小时的时间过程中每20分钟在λ＝600nm处测量的光密度来确定细菌细胞的生长。

在细菌细胞对数生长期间计算生长抑制，并确定抑制50％生长的浓度(IC

使用GP-6(WO 2012/125746 A1公开的实施例4.131)作为表6-8中的参考化合物。

测试了本发明化合物的抑制50％的浓度(IC

表6：本发明化合物对金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的IC

“*”：检测限.

实施例7

冻干溶解度测定法(LYSA)：

通过LYSA测定法评价本发明化合物的溶解性。从稀释在30μL纯DMSO中的10mMDMSO储备溶液(20μL)一式两份制备样品。用真空离心蒸发仪蒸发DMSO后，将残留物溶于0.05M磷酸盐缓冲液(150μL,pH 6.5)中，将其搅拌一小时和振摇两小时。一夜后，用微量滴定板过滤该溶液。然后用HPLC-UV分析滤液及其1/10的稀释物。另外，从10mM储备溶液中制备了四点校准曲线，用于测定化合物的溶解度。结果以μg/mL为单位，并总结在表7中。发现本发明的具体化合物的LYSA>10μg/mL，与GP-6相比溶解度大大提高。

表7：实施例的溶解度数据

“*”：检测限.

实施例8

细胞毒性测定:

通过HepG2测定法评估本发明化合物的细胞毒性。将HepG2细胞(ATCC HB-8065

表8：实施例的CC

“*”：检测限.

实施例9

雌性CD-1小鼠的单剂量PK研究(SDPK)：

进行雌性CD-1小鼠的单剂量PK，来评估化合物的药代动力学特性。一组动物通过静脉注射(IV)各化合物来给药。在5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时和7小时通过隐静脉收集血液样品(约30μL)。对于最后一个时间点(24小时)，在小鼠处于麻醉状态时通过心脏穿刺收集样品。将血液样品放入装有EDTA-K2抗凝剂(每管2μL的0.5M)的试管中，并在半小时内于4℃在3000rpm下离心10分钟，以从样品中分离血浆。离心后，将血浆样品储存在聚丙烯管中，在干冰上快速冷冻并保持在-70±10℃直到LC/MS/MS分析。使用

表9：实施例的SDPK数据

实施例10

最小抑菌浓度(MIC)：

根据M07-A10临床和实验室标准协会(Clinical and Laboratory StandardsInstitute(CLSI))指南(CLSI(2015)用于需氧生长的细菌的稀释抗菌敏感性试验的方法，已批准的标准，第十版。CLSI Document M7-A10(ISBN 1-56238-987-4)，宾夕法尼亚州韦恩市：临床和实验室标准协会，19087，美国)使用肉汤微量稀释方法测定了抗菌化合物针对多种种类和菌株的MIC。简而言之，细菌菌株的制备是在D1和D2上进行的。在MIC筛选前两天，从冷冻的存储中恢复细菌菌株，并将其划线到琼脂平板的表面上，在潮湿、35±2℃的环境空气培养箱中孵育20-24小时。选择5-10个具有相似形态的良好分离的菌落，并使用无菌环将其重新划线到新鲜的琼脂平板上，并在35±2℃下孵育20-24小时。将细菌菌株传代培养两次，以确保新鲜接种物用于MIC筛选。在MIC测定的当天(第3天)，将菌落用无菌环从新鲜培养板中转移到5mL盐水中并混合均匀，使用浊度计将其浊度测量并调节至0.5McFarland硫酸钡标准品(1-2×10

表10.抗菌化合物针对多种种类的MIC

Ex.:实施例编号

Cip:环丙沙星

S1:鲍曼不动杆菌(A.baumannii)ATCC 19606

S2:鲍曼不动杆菌ATCC 51432

S3:鲍曼不动杆菌ATCC BAA-747

S4:肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)ATCC 10031

S5:肺炎克雷伯菌ATCC 700603

S6:肺炎克雷伯菌ATCC BAA-2146

S7:铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)ATCC 27853

S8:铜绿假单胞菌ATCC BAA-2113

S9:大肠杆菌ATCC 35218

S10:大肠杆菌ATCC BAA-2340

S11:大肠杆菌ATCC 25922