用于治疗自身免疫性疾病的四氢-1H-吡嗪并2,1-a异吲哚基喹啉化合物

本发明涉及用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，尤其涉及用于治疗系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的TLR7和/或TLR8和/或TLR9的拮抗剂。

技术领域

自身免疫性结缔组织病(CTD)包括典型的自身免疫综合征，例如系统性红斑狼疮(SLE)、原发性干燥综合征(pSjS)、混合性结缔组织病(MCTD)、皮肌炎/多发性肌炎(DM/PM)、类风湿关节炎(RA)和系统性硬化症(SSc)。除RA以外，患者没有真正有效、安全的疗法。SLE代表典型的CTD，其发病率为20-150/100,000，并在不同器官引起广泛的炎症和组织损伤，从皮肤和关节的常见症状到肾、肺或心力衰竭。传统上，SLE已经用非特异性抗炎或免疫抑制药物治疗。但是，长期使用免疫抑制药物(例如皮质类固醇)仅部分有效，并伴有不良的毒性和副作用。贝利木单抗是过去50年中唯一获得FDA批准的治疗狼疮的药物，即使其仅对部分SLE患者具有适度且延迟的疗效(Navarra,S.V.等人.Lancet 2011,377,721.)。其他生物制剂，例如抗CD20单克隆抗体(抗特定细胞因子的单克隆抗体或抗特定细胞因子的可溶性受体的单克隆抗体)，在大多数临床研究中均失败。因此，需要新型的疗法，其在更大比例的患者组中提供持续的改善，并且对于在许多自身免疫以及自身炎症性疾病中的长期使用而言更安全。

Toll样受体(TLR)是模式识别受体(PRR)的重要家族，其可以在多种免疫细胞中引发广泛的免疫应答。内体TLR7、8和9作为天然的宿主防御传感器，可识别源自病毒、细菌的核酸，具体地，TLR7/8和TLR9分别识别单链RNA(ssRNA)和单链CpG-DNA。然而，TRL7、8、9的异常核酸传感被认为是广泛的自身免疫和自身炎症性疾病的关键节点(Krieg,A.M.等人.Immunol.Rev.2007,220,251.Jiménez-Dalmaroni,M.J.等人.Autoimmun Rev.2016,15,1.Chen,J.Q.,等人.Clinical Reviews in Allergy&Immunology 2016,50,1.)。抗RNA和抗DNA抗体是SLE的公认诊断标志，这些抗体可以将自身RNA和自身DNA传递至内体。尽管自身RNA复合物可以被TLR7和TLR8识别，但是自身DNA复合物可以触发TLR9激活。实际上，在SLE(系统性红斑狼疮)患者中，自身RNA和自身DNA从血液和/或组织中的缺陷清除很明显。据报道，TLR7和TLR9在SLE组织中被上调，并分别与狼疮性肾炎的慢性和活性有关。在SLE患者的B细胞中，TLR7表达与抗RNP抗体的产生相关，而TLR9表达与IL-6和抗dsDNA抗体水平相关。一致地，在狼疮小鼠模型中，抗RNA抗体需要TLR7，抗核小体抗体需要TLR9。另一方面，小鼠中TLR7或人TLR8的过度表达会促进自身免疫和自身炎症。此外，TLR8的激活特别有助于mDC/巨噬细胞的炎症性细胞因子分泌，中性粒细胞释放胞外捕获网，Th17细胞的诱导和Treg细胞的抑制。除了描述的TLR9在促进B细胞自身抗体产生中的作用外，pDC中自身DNA激活TLR9还会导致诱导I型干扰素和其他炎症性细胞因子。考虑到pDC和B细胞中TLR9的这些作用，它们都是自身免疫性疾病发病机理的关键因素，而且在许多自身免疫性疾病患者中大量存在的可轻易激活TLR9的自身DNA复合物，除抑制TLR7和TLR8途径外，它可能在抑制TLR7和TLR8途径的基础上进一步阻断自身DNA介导的TLR9途径。总之，TLR7、8和9途径代表了治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的新治疗靶点，针对这些疾病，不存在有效的不含类固醇和无细胞毒性的口服药物，并且从上游就抑制了所有这些途径可能会带来令人满意的治疗效果。因此，我们发明了靶向和抑制TLR7、TLR8和TLR9的口服化合物，用于治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病。

发明内容

本发明涉及具有式(I)的新型化合物，

其中

R

R

R

R

R

R

(C

(C

被C

被一个或两个独立地选自羟基和C

被氨基取代的1,4-氧杂氮杂环庚烷基；

1,4-氧杂氮杂环庚烷基氨基；

1,6-二氮杂螺[3.3]庚基；

2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基羰基；

未被取代或被C

被氨基取代的2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛基；

3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基羰基；

3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基；

5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；

9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

氨基(C

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基和C

氮杂环丁烷基氨基；

氮杂环丁烷氧基；

C

C

C

卤代氮杂环丁烷基(C

卤代吡咯烷基氨基；

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷氧基；

羟基吡咯烷基C

吗啉基C

未被取代或被C

哌嗪基羰基；

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基、C

哌啶基氨基；或

被一个、两个或三个独立地选自氨基、C

m为0、1、2或3；

n为1、2、3或4；

m+n≤4

前提是R

或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个目的涉及具有式(I)或(Ia)或(Ib)的新型化合物，其制备，基于本发明化合物的药物，其制备以及式具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物作为TLR7和/或TLR8和/或TLR9拮抗剂的用途，并用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎。具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物显示出优异的TLR7和/或TLR8和/或TLR9拮抗活性。另外，具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物还显示出良好的hPBMC、细胞毒性、溶解性、人微粒体稳定性和SDPK分布，以及低CYP抑制。

具体实施方式

定义

术语“C

术语“卤素”和“卤代”在本文可互换使用，表示氟、氯、溴或碘。

术语“卤代C

术语“氧基”表示-O-。

术语“C

术语“卤代吡咯烷基”表示被卤素取代一次、两次或三次的吡咯烷基。卤代吡咯烷基的实例包括但不限于二氟吡咯烷基和氟吡咯烷基。

术语“卤代氮杂环丁烷基”表示被卤素取代一次、两次或三次的氮杂环丁烷基。卤代吡咯烷基的实例包括但不限于二氟氮杂环丁烷基和氟氮杂环丁烷基。

术语“对映体”表示化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。

术语“非对映体”表示具有两个或更多个手性中心并且其分子并非彼此镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱特性和反应性。

术语“顺式异构体”和“反式异构体”表示分子或部分的相对立体化学。例如：作为“反式异构体”的实例16的原料(反式-3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷，

术语“药学上可接受的盐”表示在生物学上或其他方面不是不期望的盐。“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐。

术语“药学上可接受的酸加成盐”是指与无机酸和有机酸形成的那些药学上可接受的盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸，所述有机酸选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双氢萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸。

术语“药学上可接受的碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些药学上可接受的盐。可接受的无机碱的实例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂(诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙基氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和多胺树脂)的盐。

术语“药物活性代谢物”表示通过特定化合物或其盐在体内的代谢产生的药理活性产物。进入人体后，大多数药物都是化学反应的底物，这些化学反应可能会改变其物理性质和生物学效应。这些通常影响本发明化合物极性的代谢转化改变了药物在体内分布和从体内排泄的方式。然而，在某些情况下，药物代谢是治疗效果所必需的。

术语“治疗有效量”是表示本发明的化合物或分子的量，当将其施用于受试者时，(i)治疗或预防特定疾病、病症或疾患，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状的发作。治疗有效量取决于化合物，所治疗的疾病状态，所治疗疾病的严重程度，受试者的年龄和相对健康状况，给药途径和形式，主治医学或兽医的判断和其他因素。

术语“药物组合物”表示包含治疗有效量的活性药物成分以及施用于哺乳动物(例如需要其的人)的可药用的赋形剂的混合物或溶液。

TLR7和/或TLR8和/或TLR9的拮抗剂

本发明涉及(i)具有式(I)的化合物，

其中

R

R

R

R

R

R

(C

(C

被C

被一个或两个独立地选自羟基和C

被氨基取代的1,4-氧杂氮杂环庚烷基；

1,4-氧杂氮杂环庚烷基氨基；

1,6-二氮杂螺[3.3]庚基；

2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基羰基；

未被取代或被C

被氨基取代的2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛基；

3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基羰基；

3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基；

5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；

9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

氨基(C

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基和C

氮杂环丁烷基氨基；

氮杂环丁烷氧基；

C

C

C

卤代氮杂环丁烷基(C

卤代吡咯烷基氨基；

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷氧基；

羟基吡咯烷基C

吗啉基C

未被取代或被C

哌嗪基羰基；

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基、C

哌啶基氨基；或

被一个、两个或三个独立地选自氨基、C

m为0、1、2或3；

n为1、2、3或4；

m+n≤4

前提是R

或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是(ii)具有式(Ia)的化合物，

其中

R

R

R

R

R

R

(C

(C

被C

被一个或两个独立地选自羟基和C

被氨基取代的1,4-氧杂氮杂环庚烷基；

1,4-氧杂氮杂环庚烷基氨基；

1,6-二氮杂螺[3.3]庚基；

2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基羰基；

未被取代或被C

被氨基取代的2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛基；

3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基羰基；

3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基；

5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；

9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

氨基(C

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基和C

氮杂环丁烷基氨基；

氮杂环丁烷氧基；

C

C

C

卤代氮杂环丁烷基(C

卤代吡咯烷基氨基；

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷氧基；

羟基吡咯烷基C

吗啉基C

未被取代或被C

哌嗪基羰基；

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基、C

哌啶基氨基；或

被一个、两个或三个独立地选自氨基、C

或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是(iii)具有式(Ib)的化合物，

其中

R

R

R

R

R

R

(C

(C

被C

被一个或两个独立地选自羟基和C

被氨基取代的1,4-氧杂氮杂环庚烷基；

1,4-氧杂氮杂环庚烷基氨基；

1,6-二氮杂螺[3.3]庚基；

2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基羰基；

未被取代或被C

被氨基取代的2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛基；

3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基羰基；

3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪基；

5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；

9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

氨基(C

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基和C

氮杂环丁烷基氨基；

氮杂环丁烷氧基；

C

C

C

卤代氮杂环丁烷基(C

卤代吡咯烷基氨基；

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷基C

卤代吡咯烷氧基；

羟基吡咯烷基C

吗啉基C

未被取代或被C

哌嗪基羰基；

未被取代或被一个或两个独立地选自氨基、C

哌啶基氨基；或

被一个、两个或三个独立地选自氨基、C

或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是(iv)根据(i)至(iii)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(v)根据(i)至(iv)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(vi)根据(i)至(v)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(vii)根据(i)至(vi)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(viii)根据(i)至(vii)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(ix)根据(ii)或(iii)所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R

被羟基取代的1,4-二氮杂环庚烷基；

被氨基取代的1,4-氧杂氮杂环庚烷基；

3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；

9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

被氨基和C

C

卤代吡咯烷基氨基；或

被两个或三个独立地选自氨基、C

本发明的另一个实施例是(x)根据(i)至(ix)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(xi)根据(i)至(x)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中R

本发明的另一个实施例是(xii)根据(i)至(xi)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R

R

R

R

R

R

R

被羟基取代的1,4-二氮杂环庚烷基；

被氨基取代的1,4-氧杂氮杂环庚烷基；

3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪基；

5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬基；

9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬基；

被氨基和C

C

卤代吡咯烷基氨基；或

被两个或三个独立地选自氨基、C

或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是(xiii)根据(i)至(xii)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施例是(xiv)根据(i)至(xiii)中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物或其药学上可接受的盐，其中

R

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐。

本发明涉及(i')具有式(I)的化合物，

其中

R

中R

R

R

R

R

R

m为0、1、2或3；

n为1、2、3或4；

m+n≤4

前提是R

或其药学上可接受的盐、对映体或非对映体。

本发明的另一个实施例是(ii')具有式(Ia)的化合物，

其中

R

中R

R

R

R

R

R

前提是R

或其药学上可接受的盐、对映体或非对映体。

本发明的另一个实施例是(iii')具有式(Ib)的化合物，

其中

R

R

R

R

R

R

前提是R

或其药学上可接受的盐、对映体或非对映体。

本发明的另一个实施例是(iv')根据(i')至(iii')中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中R

本发明的另一个实施例是(v')根据(i')至(iv')中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中R

本发明的另一个实施例是(vi')根据(i')至(iv')中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中R

本发明的另一个实施例是(vii')根据(i')至(vi')中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中R

本发明的另一个实施例是(viii')根据(i')至(vii')中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中R

本发明的另一个实施例是(ix')根据(ii')或(iii')所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐、对映体或非对映体。

本发明的另一个实施例是(x')根据(i')至(ix')中任一项所述的具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物，其中

R

R

R

R

R

R

或其药学上可接受的盐、对映体或非对映体。

本发明的另一个实施例是(xv)具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物选自：

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4S,10bR)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-(8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基)喹啉-8-腈；

7-(8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基)-1,3-苯并噻唑-4-腈；

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

7-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-1,3-苯并噻唑-4-腈；

8-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹喔啉-5-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-7-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(4-哌啶基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(2R)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(2S)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S)-3-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[反式-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[顺式-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(5-氨基-2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛烷-7-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[3-氨基-3-(羟甲基)吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[反式-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-甲氧基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬-8-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[2-(二甲基氨基)乙基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(氮杂环丁烷-3-基氨基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(1,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(3a-甲氧基-1,2,3,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-羟基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[(3R,4R)-3-羟基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[(4aR,7aR)-3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[反式-(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4R)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(6S)-6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(6S)-6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(6S)-6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基氨基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(6R)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基]氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(6S)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基]氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(吗啉-3-基甲基氨基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(2S)-吗啉-2-基]甲基氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(2R)-吗啉-2-基]甲基氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4,9-二甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]-甲基-氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(3R)-3-哌啶基]氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-3-甲氧基-4-哌啶基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(2-吗啉代乙基氨基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[2-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]乙基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(2S,4S)-4-氟吡咯烷-2-基]甲基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(8aS)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(8aR)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氧基-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(2S,4S)-4-氟吡咯烷-2-基]甲氧基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-(8-甲基-5-喹啉基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺；

(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-(8-甲基喹喔啉-5-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺；

(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-[8-(三氟甲基)喹喔啉-5-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺；

7-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-1,3-苯并噻唑-4-腈；

(4R,10bS)-2-(8-氯-5-喹啉基)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺；

5-[(4R,10bS)-7-[2-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]乙基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-7-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-9-氟-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(哌嗪-1-羰基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羰基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羰基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-8-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈；

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S))-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-4-氨基-3-甲氧基-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-3-氨基-4-甲氧基-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；和

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；

或其药学上可接受的盐、对映体或非对映体。

合成

本发明的化合物可以通过任何常规方法制备。在以下方案和实例中提供了合成这些化合物及其原料的合适方法。除非另有说明，否则所有取代基，特别是R

制备具有式(I)化合物的一般合成路线在以下流程1中显示。

流程1

其中X为卤素或离去基团，例如，OTf或OMs；m为0、1、2或3；n为1、2、3或4；m+n≤4；R

可以使用偶联剂(诸如HATU和DIPEA)，实现被保护的氨基酸(II)和甲硅烷基胺(III)的酰胺偶联，以得到中间体(IV)。在通过选择性脱保护除去R

流程2

通过选择性脱保护从式(X)中除去R

本发明的化合物可以以非对映体或对映体的混合物形式获得，它们可以通过本领域熟知的方法分离，例如(手性)HPLC或SFC。

本发明还涉及制备具有式(I)、(Ia)或(Ib)的化合物的方法，该方法包括以下任何步骤：

a)在碱存在下，式(XII)化合物，

与卤化物(XIII)的取代反应；

b)在催化剂和碱存在下，式(XII)化合物，

与卤化物(XIII)的Buchwald-Hartwig胺化反应；

c)在催化剂和碱存在下，式(XV)化合物，

与卤化物(XIII)的Buchwald-Hartwig胺化反应；

d)在催化剂和碱存在下，式(XV)化合物，

与硼试剂的Suzuki偶联反应；

e)在催化剂存在下，式(XV)化合物，

与有机锡试剂的Stille偶联反应；

f)在催化剂存在下，式(XV)化合物，

与有机锌试剂的Negishi偶联反应；

其中，

在步骤a)中，碱可以是例如DIPEA；

在步骤b)和c)中，催化剂可以为例如Ruphos Pd-G2；碱可以是例如Cs

在步骤d)中，催化剂可以是例如四(三苯基膦)钯(0)或[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)；碱可以是例如K

在步骤e)中，催化剂可以是例如四(三苯基膦)钯(0)；

在步骤f)中，催化剂可以是例如四(三苯基膦)钯(0)或[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)。

当根据上述方法用非手性或手性原料制造式(I)、(Ia)或(Ib)的化合物也是本发明的目的。

适应症和治疗方法

本发明提供了可用作TLR7和/或TLR8和/或TLR9拮抗剂的化合物，其抑制通过TLR7和/或TLR8和/或TLR9的途径激活以及相应的下游生物学事件，所述下游生物学事件包括但不限于通过产生所有类型的细胞因子和所有形式的自身抗体介导的先天性和适应性免疫应答。因此，本发明的化合物可用于在表达此类受体的所有类型的细胞中阻断TLR7和/或TLR8和/或TLR9，所述细胞包括但不限于浆细胞样树突细胞、B细胞、T细胞，巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、角质形成细胞、上皮细胞。这样，所述化合物可用作系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的治疗剂或预防剂。

本发明提供了在有需要的患者中治疗或预防系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法。

另一个实施例包括在需要这种治疗的哺乳动物中治疗或预防系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的具有式(I)的化合物、立体异构体、互变异构体、前药或其药学上可接受的盐。

通过参考以下实例将更充分地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。

缩写

通过参考以下实例将更充分地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。

本文使用的缩写如下：

ACN： 乙腈

Boc

Tf

DCM： 二氯甲烷

DDI 药物相互作用

DIPEA 二乙基异丙胺

DMA 二甲基乙酰胺

EA或EtOAc： 乙酸乙酯

FA： 甲酸

HATU 1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐

HLM 人肝微粒体

hr 小时

小时 小时

IC

LCMS 液相色谱-质谱

LYSA 冻干溶解度测定

MS： 质谱

PE： 石油醚

Prep-HPLC： 制备型高效液相色谱法

rt： rt

RT： 保留时间

RuPhos Pd G2： 氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]钯(II)第二代

SFC： 超临界流体色谱

TFA： 三氟乙酸

v/v 体积比

一般实验条件

使用以下仪器之一通过快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge模块。ii)ISCO combi-flash色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL

中间体和最终化合物使用XBridge

对于SFC手性分离，使用Mettler Toledo Multigram III系统SFC，Waters 80Q制备SFC或Thar 80制备SFC，通过手性柱(Daicel chiralpak IC，5μm，30×250mm)，AS(10μm，30×250mm)或AD(10μm，30×250mm)分离中间体，溶剂系统为：CO2和IPA(0.5％TEA的IPA溶液)或CO2和MeOH(0.1％NH3·H2O的MeOH溶液)，背压100bar，在254或220nm下检测UV。

使用LC/MS(Waters

酸性条件I：A：0.1％TFA的水溶液；B：0.1％TFA的乙腈溶液

酸性条件II：A：0.0375％TFA的水溶液；B：0.01875％TFA的乙腈溶液

碱性条件I：A：0.1％NH3·H2O的水溶液；B：乙腈

碱性条件II：A：0.025％NH3·H2O的水溶液；B：乙腈

中性条件：A：水；B：乙腈。

质谱(MS)：通常只报告指示母体质量的离子，除非另有说明，否则所引用的质量离子为正质量离子(MH)

使用Bruker Avance 400MHz获得NMR光谱。

微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty微波合成仪中进行。所有涉及空气敏感试剂的反应均在氩气或氮气气氛下进行。除非另有说明，否则试剂按原样购自商业供应商，未经进一步纯化。

制备实施例

以下实例旨在说明本发明的含义，但绝不代表本发明含义的限制：

实例1

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备8-溴-5-氟喹啉(化合物1b)

在100mL梨形烧瓶中，将2-溴-5-氟苯胺(2.0g，10.5mmol)，丙烷-1,2,3-三醇(969mg，10.5mmol)和3-硝基苯磺酸钠(2.4g，10.5)与70％H

步骤2：制备5-氟喹啉-8-腈(化合物1c)

向8-溴-5-氟喹啉(化合物1b，4.9g，21.7mmol)的DMF(30mL)溶液中加入双氰锌(5.0g，43.4mmol)和RuPhos Pd G2(CAS：1375325-68-0，西格玛奥德里奇，目录：753246，842mg，1.1mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌3小时，然后冷却至室温。过滤反应混合物，并将滤液用水(50ml)稀释，然后用EA(80mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤3：制备N-[(1R)-2-[苄基(三甲基甲硅烷基甲基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物1e)

向(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(10.0g，52.9mmol)的DMF(40mL)溶液中加入N-苄基-1-(三甲基甲硅烷基)甲胺(10.2g，52.9mmol)，HATU(20.1g，52.9mmol)和DIEA(13.6g，18.4mL，105.8mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用水(150mL)淬灭反应，并用DCM(100mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤4：制备(2R)-2-氨基-N-苄基-N-(三甲基甲硅烷基甲基)-丙酰胺(化合物1f)

向N-[(1R)-2-[苄基(三甲基甲硅烷基甲基)氨基]-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(化合物1e，13.0g，35.7mmol)的DCM溶液(60mL)加入TFA(10mL)。将所得混合物在室温搅拌4小时，然后在真空中浓缩，并将残余物在饱和NaHCO

步骤5：制备(2R)-N1-苄基-N1-(三甲基甲硅烷基甲基)丙烷-1,2-二胺(化合物1g)

向(2R)-2-氨基-N-苄基-N-(三甲基甲硅烷基甲基)-丙酰胺(化合物1f，9.0g，34.0mmol)的无水THF(100mL)冰冷却溶液中缓慢加入LiAlH

步骤6：制备(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-1,3,4,10b-四氢吡嗪并[1,2-b]异吲哚-6-酮(化合物1i)

将(2R)-N1-苄基-N1-(三甲基硅烷基甲基)丙烷-1,2-二胺(化合物1g，3.0g，12.0mmol)，5-溴-2-甲酰基苯甲酸甲酯(2.9g，12.0mmol)和4A MS(5.0g)的MeCN(80mL)溶液的混合物，在室温，氮气下搅拌过夜。将反应混合物过滤并将滤饼用DCM洗涤。将滤液真空浓缩并将残余物重新溶解于MeCN/TFE(45mL/5mL)中，然后加入[Ir(dtbbpy)(ppy)

步骤7：制备(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物1j)

将(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-1,3,4,10b-四氢吡嗪并[1,2-b]异吲哚-6-酮(化合物1i，1.9g，5.0mmol)和BH

步骤8：制备4-[(4R,10bS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物1k)

向(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物1j，0.4g，1.1mmol)的二恶烷溶液(15mL)中加入哌嗪-1-羧酸叔丁酯(209mg，1.1mmol)，Cs

步骤9：制备4-[(4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物1l)

4-[(4R,10bS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物1k，240mg，519μmol)和Pd-C(16.6mg，156μmol)的MeOH(20mL)溶液的混合物在室温下用氢气球氢化5小时。滤出催化剂后，将滤液真空浓缩，得到化合物1l(181mg，94％收率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值为373[(M+H)

步骤10：制备4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯

(化合物1m)

向5-氟喹啉-8-腈(化合物1c，20.1mg，112μmol)的DMSO(3mL)溶液中加入4-[((4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物1l，42mg，112μmol)和DIEA(73mg，560μmol)。将反应混合物在120℃下搅拌5小时。冷却至室温后，将反应用水(30mL)淬灭，并用EA(50mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤11：制备5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例1)

向4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物1m，100mg)的DCM(10mL)溶液加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到实例1(33mg，77％)。MS：计算值为425[(M+H)

实例2

5-[(4S,10bR)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例1的制备方法，使用(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸代替(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(化合物1d)制备标题化合物。获得实例2(12mg)。MS：计算值为425[(M+H)

实例3

5-(8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基)喹啉-8-腈

类似于实例1的制备方法，使用2-(叔丁氧基羰基氨基)乙酸代替(2R)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(化合物1d)制备标题化合物。获得实例3(19.7mg)。MS：计算值为411[(M+H)

实例4

7-(8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基)-1,3-苯并噻唑-4-腈

类似于实例3的制备方法，使用7-氟-1,3-苯并噻唑-4-腈代替5-氟喹啉-8-腈(化合物1c)制备标题化合物。获得实例4(15mg)。MS：计算值为417[(M+H)

实例5

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备4-[(4R,10bS)-2-(7-氰基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物5a)

向4-[(4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物1l，42.0mg，113μmol)的二恶烷(5mL)溶液加入4-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(20mg，113μmol)，RuPhos Pd G2(CAS：1375325-68-0，西格玛奥德里奇，目录：753246；8.7mg，11.3μmol)和Cs

步骤2：制备4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(实例5)

向4-[(4R,10bS)-2-(7-氰基吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物5a，15mg，29.2μmol)的DCM(3mL)溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到实例5(3.3mg，27％产率)。MS：计算值为414[(M+H)

实例6

7-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-1,3-苯并噻唑-4-腈

类似于实例1的制备方法，使用7-氟-1,3-苯并噻唑-4-腈代替5-氟喹啉-8-腈(化合物1c)制备标题化合物。获得实例6(15mg)。MS：计算值为431[(M+H)

实例7

8-[(4R,10bS)-4-甲基-8-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹喔啉-5-腈

类似于实例5的制备方法，使用8-溴喹喔啉-5-腈代替4-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈制备标题化合物。获得实例7(3.3mg)。MS：计算值为426[(M+H)

实例8

5-[(4R,10bS)-4-甲基-7-哌嗪-1-基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例1的制备方法，使用2-溴-6-甲酰基-苯甲酸甲酯代替5-溴-2-甲酰基苯甲酸制备标题化合物。获得实例8(19.6mg)。MS：计算值为425[(M+H)

实例9

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(4-哌啶基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备4-[(4R,10bS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(化合物9a)

向10mL微波小瓶中加入4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(130mg，420μmol)，(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物1j，100mg，280μmol)，PdCl

步骤2：制备4-[(4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物9b)

4-[(4R,10bS)-2-苄基-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-3,6-二氢-2H-吡啶-1-羧酸叔丁酯(化合物9a，83mg，180μmol)和Pd(OH)

步骤3：制备4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物9c)

向5-氟喹啉-8-腈(化合物1c，19mg，113μmol)的DMSO(2mL)溶液中加入4-((4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物9b，42mg，113μmol)和DIEA(73mg，565μmol)。将反应混合物在120℃下搅拌5小时，然后冷却至室温，用水(10mL)稀释，并用EA(15mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤4：制备5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(4-哌啶基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例9)

向4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基喹啉-5-基)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物9c，40mg，76.4μmol)的DCM(3mL)溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到实例9(12mg，38％产率)。MS：计算值为424[(M+H)

实例10

5-[(4R,10bS)-8-[(2R)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物10a)

向(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物1j，900mg，2.4mmol)的DCE(30mL)溶液中，室温搅拌下加入1-氯乙基碳酰氯(1.7g，12.1mmol)。将反应混合物在回流下加热过夜，并冷却至室温，然后真空浓缩。将残余物溶于MeOH(20mL)中，并在回流下加热另外2小时，然后冷却至室温并真空浓缩。将残余物用水(10mL)稀释，用NaHCO

步骤2：制备5-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(化合物10b)

向5-氟喹啉-8-腈(化合物1c，258mg，1.5mmol)的DMSO(10mL)溶液中加入(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物10a，400mg，1.5mmol)和DIEA(1.3mL，7.5mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌5小时，然后冷却至室温，用水(50mL)淬灭，并用EA(80mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤3：制备(3R)-4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物10c)

向5-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(化合物10b，70mg，167μmol)的二恶烷溶液(10mL)中加入(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(CAS：278788-66-2，Accela ChemBio，目录：SY017685，43.2mg，200μmol)，t-BuONa(32.1mg，334μmol)和tBuXPhos Pd G3(CAS：1447963-75-8，西格玛奥德里奇，目录：762229，13.3mg，16.7μmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜，然后冷却至室温，用水(50mL)稀释，并用EA(30mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤4：制备5-[(4R,10bS)-8-[(2R)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例10)

向(3R)-4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物10c，21mg，38μmol)的DCM(2mL)溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到实例10(8mg，46％产率)。MS：计算值为455[(M+H)

实例11

5-[(4R,10bS)-8-[(2S)-2-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(CAS：314741-40-7，Accela ChemBio，目录：SY020478)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例11(24mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例12

5-[(4R,10bS)-8-[(3S)-3-(羟甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(2S)-2-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(CAS：1030377-21-9，Accela ChemBio，目录：SY018056)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例12(8.6mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例13

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-7-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-羧酸叔丁酯(CAS：1251010-45-3，PharmaBlock，目录：PB07078)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯，制备标题化合物。获得实例13(8.2mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例14

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-3-羧酸叔丁酯(CAS：478647-20-0，无锡药业，目录：WX120052)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例14(7.2mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例15

5-[(4R,10bS)-8-(6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：956317-40-1，无锡药业，目录：WX604354)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例15(7.2mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例16

5-[(4R,10bS)-8-[反式-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用反式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷(CAS：128739-92-4，PharmaBlock，目录：PBN20121069)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例16(58mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例16A和16B：5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

制备实例16A和16B：

在OJ(5μm，250×20mm)色谱柱上用40％乙醇(0.25％NH

向化合物16c-a(62mg，112μmol)的DCM(4mL)溶液中加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到实例16A(42mg，82％产率)。MS：计算值为455[(M+H)

类似于实施例16A的制备方法制备实施例16B(51mg，82％产率)。MS：计算值为455[(M+H)

实例17

5-[(4R,10bS)-8-[顺式-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用顺式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷(CAS：128739-89-9，PharmaBlock，目录：PBXA8055)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例17(36mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例18

5-[(4R,10bS)-8-(5-氨基-2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛烷-7-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-(2-氧杂-7-氮杂螺[3.4]辛基-5-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：1422496-61-4，PharmaBlock，目录：PBLG1162)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例18(12mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例19

5-[(4R,10bS)-8-[3-氨基-3-(羟甲基)吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[3-(羟甲基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：号，PharmaBlock，目录：PBXA7029-1)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例19(7.7mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例20

5-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3R)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：122536-77-0，Accela ChemBio，目录：SY006424)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例20(8.6mg)。MS：计算值为425[(M+H)

实例21

5-[(4R,10bS)-8-[反式-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用反式3-(boc-氨基)-4-羟基吡咯烷(CAS：870632-89-6，PharmaBlock，目录：PB07572)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例21(8.6mg)。MS：计算值为441[(M+H)

实例22

5-[(4R,10bS)-8-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-(氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例22(34mg)。MS：计算值为411[(M+H)

实例23

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-甲氧基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]-N-氨基甲酸酯叔丁基(CAS：174727-04-9，PharmaBlock，目录：PBN20121070)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例23(34mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例24

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬-8-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(CAS：1251011-05-8，PharmaBlock，目录：PBN20111063)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例24(16mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例25

5-[(4R,10bS)-8-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N,N-二甲基乙醇胺(CAS：108-01-0，奥德里奇，目录：471453)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例25(9.4mg)。MS：计算值为428[(M+H)

实例26

5-[(4R,10bS)-8-[2-(二甲基氨基)乙基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用2-二甲基氨基乙胺(CAS：108-00-9，TCI，目录：D0719)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例26(19mg)。MS：计算值为427[(M+H)

实例27

5-[(4R,10bS)-8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：141699-55-0，PharmaBlock，目录：PB00001)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例27(13mg)。MS：计算值为412[(M+H)

实例28

5-[(4R,10bS)-8-(氮杂环丁烷-3-基氨基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用3-氨基氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：193269-78-2，PharmaBlock，目录：PB00002)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例28(30mg)。MS：计算值为411[(M+H)

实例29

5-[(4R,10bS)-8-(氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备3-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(化合物29a)

向锌(156mg，2.4mmol)的DMF(3mL)悬浮液中加入1,2-二溴乙烷(44.8mg，238μmol)。将所得混合物在60℃下加热10分钟，然后冷却至室温。向混合物中加入氯三甲基硅烷(25.9mg，238μmol)，在60℃下搅拌10分钟，然后冷却至室温。然后加入3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：254454-54-1，PharmaBlock，目录：PB00430，675mg，2.4mmol)的DMF(1mL)溶液，混合物在室温下搅拌1小时。5-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(化合物10b，500mg，1.2mmol)和Pd(PPh

步骤2：制备5-[(4R,10bS)-8(氮杂环丁烷-3-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例29)

向3-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(化合物29a，42mg，85μmol)的DCM(2mL)溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC纯化，得到实例29(23mg，68％产率)。MS：计算值为396[(M+H)

实例30

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4R)-3-氨基-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1174020-30-4，PharmaBlock，目录：PB07374)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例30(46mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例31

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4S)-3-氨基-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1009075-43-7，PharmaBlock，目录：PB07376)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例31(46mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例32

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3R,4S)-3-氨基-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1009075-48-2，PharmaBlock，目录：PB07375)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例32(26mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例33

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3R,4R)-3-氨基-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1441392-27-3，PharmaBlock，目录：PB07377)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例33(38mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例34

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1400562-12-0，PharmaBlock，目录：PBXA3109)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例34(46mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例35

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯(CAS：1251005-61-4，PharmaBlock，目录：PBN20111065-5G)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例35(16mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例36

5-[(4R,10bS)-8-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸草酸叔丁酯(CAS：1041026-70-3，PharmaBlock，目录：PB03883-1G)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例36(19.2mg)。MS：计算值为437[(M+H)

实例37

5-[(4R,10bS)-8-(1,6-二氮杂螺[3.3]庚-6-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用1,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1330763-95-5，PharmaBlock，目录：PBN2011926-1G)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例37(8.8mg)。MS：计算值为437[(M+H)

实例38

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(6-甲基-2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用2-甲基-2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷(CAS：1203567-11-6，PharmaBlock，目录：PBLJ2831)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例38(16.0mg)。MS：计算值为451[(M+H)

实例39

5-[(4R,10bS)-8-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-(3-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：1018443-01-0，PharmaBlock，目录：PB03046)代替(3R)-3-(羟甲基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例39(30mg)。MS：计算值为425[(M+H)

实例40A和40B：

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例16A和16B的制备方法，使用反式3-(boc-氨基)-4-羟基吡咯烷(CAS：870632-89-6，PharmaBlock，目录：PB07572)代替反式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷制备标题化合物。得到实例40A(38mg)。MS：计算值为441[(M+H)

实例41

5-[(4R,10bS)-8-(3a-甲氧基-1,2,3,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用3a-甲氧基-1,2,3,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-羧酸叔丁酯酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。获得实例41(8.8mg)。MS：计算值为481[(M+H)

实例42

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-羟基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-羟基吡咯烷基-3-基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例42(46mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例43

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[(3R,4R)-3-羟基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-羟基吡咯烷基-3-基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例43(45mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例44

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[(4aR,7aR)-3,4,4a,5,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-6-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(4aR,7aR)-3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-4-羧酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例44(8.8mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例45

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[反式-(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[反式-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例45(26mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例45A和45B：

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例16A和16B的制备方法，使用N-[反式-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替反式-3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷制备标题化合物。得到实例45A(18mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例46

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4R)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：1033718-89-6，PharmaBlock，目录：PB09206)代替-(3R)-3-(羟甲基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例46(35mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例47

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：1033718-91-0，PharmaBlock，目录：PB09204)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例47(31mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例48

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3R,4R)-4-氟吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(CAS：2097061-04-4，BePharm，目录：BD00765464)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例48(8.8mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例49

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：213388-72-8，PharmaBlock，目录：PB09205)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例49(58mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例50

5-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-(甲氧基甲基)哌嗪-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(2R)-2-(甲氧基甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(CAS：1023301-73-6，PharmaBlock，目录：PBU12178)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例50(5.4mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例51

5-[(4R,10bS)-8-(4-氨基-4-甲基-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：163271-08-7，PharmaBlock，目录：PB02909)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例51(40mg)。MS：计算值为453[(M+H)

实例52

5-[(4R,10bS)-8-(3,4a,5,6,7,7a-六氢-2H-吡咯并[3,4-b][1,4]噁嗪-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用八氢吡咯并[3,4-b]吗啉-6-羧酸叔丁酯(CAS：1360364-21-1，PharmaBlock，目录：PBCS1406244)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例52(18mg)。MS：计算值为467[(M+H)

实例53A和53B：

5-[(4R,10bS)-8-[(6S)-6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例16A和16B的制备方法，使用6-羟基-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：956317-40-1，药明康德，目录：WX604354)代替反式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷制备标题化合物。得到实例53A(19.8mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例54

5-[(4R,10bS)-8-(6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-(1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：1782916-90-8，PharmaBlock，目录：PB95734)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例54(8.1mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例54A和54B：

5-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-8-[(6S)-6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例16A和16B的制备方法，使用N-(1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS：1782916-90-8，PharmaBlock，目录：PB95734)代替反式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷制备标题化合物。得到实例54A(29mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例55

5-[(4R,10bS)-8-(6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(南京药石科技股份有限公司，目录：PB96918)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例55(42mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例55A和55B：

5-[(4R,10bS)-8-[(6S)-6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例16A和16B的制备方法，使用6-羟基-6-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(南京药石科技股份有限公司，目录：PB96918)代替反式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷制备标题化合物。得到实例55A(26mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例56

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基氨基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-羧酸叔丁酯(CAS：1170390-54-1，药明康德，目录：WX601045)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例56(49.4mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例56A和56B：

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(6R)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基]氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈和5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(6S)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基]氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例16A和16B的制备方法，使用6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-羧酸叔丁酯(CAS：1170390-54-1，药明康德，目录：WX601045)代替反式3-(boc-氨基)-4-甲氧基吡咯烷制备标题化合物。得到实例56A(24mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例57

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(吗啉-3-基甲基氨基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用3-(氨基甲基)吗啉-4-羧酸叔丁酯(CAS：475106-18-4，BePharm，目录：BD28817)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例57(17.5mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例58

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(2S)-吗啉-2-基]甲基氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(2S)-吗啉-2-基甲基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：875551-59-0，PharmaBlock，目录：PBN20121323)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例58(28mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例59

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(2R)-吗啉-2-基]甲基氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用N-[(2R)-吗啉-2-基甲基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：186202-57-3，PharmaBlock，目录：PBN20121322)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例59(8.8mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例60

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4R)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：148260-95-1，BePharm，目录：BD260807)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例60(70mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例61

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3R,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：148260-94-0，BePharm，目录：BD285562)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例61(61mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例62

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1001635-01-3，BePharm，目录：BD260806)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例62(58mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例63

5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4,9-二甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：(3R,4R)-3-[[(4R,10bS)-9-溴-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氨基]-4-甲氧基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物63b)

向(3R,4R)-3-[[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氨基]-4-甲氧基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物63a，200mg，361μmol)的醋酸(5mL)溶液加入NBS(64.2mg，361μmol)。将所得混合物在室温搅拌2小时。用NaHCO

步骤2：制备(3R,4R)-3-[[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4,9-二甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氨基]-4-甲氧基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物63c)

向(3R,4R)-3-[[(4R,10bS)-9-溴-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氨基]-4-甲氧基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物63b，98mg，155μmol)的二恶烷(5mL)和水(1mL)溶液，加入2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧三硼硼烷(38.8mg，309μmol)，K

步骤3：制备5-[(4R,10bS)-8-[[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基]-4,9-二甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例63)

向(3R,4R)-3-[[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4,9-二甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氨基]-4-甲氧基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物63c，53mg，93.2μmol)的DCM(10ml)溶液加入TFA(5ml)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例63(32mg，58.9％产率)。MS：计算值为469[(M+H)

实例64

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]-甲基-氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4S)-3-甲氧基-4-(甲基氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：960316-16-9，PharmaBlock，目录：PBXA7014)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例64(25mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例65

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[[(3R)-3-哌啶基]氨基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(CAS：188111-79-7，BePharm，目录：BD0329)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例65(27mg)。MS：计算值为439[(M+H)

实例66

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-3-甲氧基-4-哌啶基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4R)-4-氨基-3-甲氧基哌啶-1-羧酸叔丁酯(CAS：1171125-92-0，PharmaBlock，目录：PBN20120813)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例66(28mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例67

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(2-吗啉代乙基氨基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用2-吗啉基乙胺(CAS：2038-03-1，BePharm，目录：BD89767)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例67(29mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例68

5-[(4R,10bS)-8-[2-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]乙基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S)-1-(2-氨基乙基)吡咯烷-3-醇(CAS：540787-75-5，BePharm，目录：BD45313)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例68(13mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例69

5-[(4R,10bS)-8-[(3-氟氮杂环丁烷-3-基)甲基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用3-(氨基甲基)-3-氟氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1083181-23-0，PharmaBlock，目录：PBN20120081)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例69(10mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例70

5-[(4R,10bS)-8-[[(2S,4S)-4-氟吡咯烷-2-基]甲基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(2S,4S)-2-(氨基甲基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1033245-12-3，PharmaBlock，目录：PB05325)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例70(28mg)。MS：计算值为457[(M+H)

实例71

5-[(4R,10bS)-8-[(8aS)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(8aR)-3-氧代-1,2,5,6,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7-羧酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例71(38mg)。MS：计算值为480[(M+H)

实例72

5-[(4R,10bS)-8-[(8aR)-3-氧代-1,5,6,7,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-2-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(8aS)-3-氧代-1,2,5,6,8,8a-六氢咪唑并[1,5-a]吡嗪-7-羧酸叔丁酯代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例72(8.8mg)。MS：计算值为480[(M+H)

实例73

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氧基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(3S,4S)-3-氟-4-羟基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：1174020-51-9，PharmaBlock，目录：PB08192)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例73(18mg)。MS：计算值为444[(M+H)

实例74

5-[(4R,10bS)-8-[[(2S,4S)-4-氟吡咯烷-2-基]甲氧基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例10的制备方法，使用(2S,4S)-4-氟-2-(羟甲基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(CAS：317356-27-7，PharmaBlock，目录：PB05324)代替(3R)-3-(羟甲基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例74(12mg)。MS：计算值为458[(M+H)

实例75

(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-(8-甲基-5-喹啉基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备(3S,4R)-3-(((4R,10bS)-2-苄基-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)氨基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75a)

向(3S,4R)-3-氨基-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(366mg，1.8mmol)在二恶烷(15mL)的溶液中加入(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物1j，640mg，1.8mmol)，Cs

步骤2：制备(3R,4S)-3-氟-4-(((4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75b)

将(3S,4R)-3-(((4R,10bS)-2-苄基-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)氨基)-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75a，710mg，1.5mmol)和Pd-C(100mg)的MeOH(80mL)溶液的混合物在室温下用氢气球氢化5小时。滤出催化剂后，将滤液真空浓缩，得到化合物75b(490mg，84.9％收率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值为391[(M+H)

步骤3：制备(3R,4S)-3-氟-4-(((4R,10bS)-4-甲基-2-(8-甲基喹啉-5-基)-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)-氨基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75c)

向5-溴-8-甲基喹啉(CAS：74316-55-5，BePharm，目录：BD239383，34.1mg，154μmol)的二恶烷(5mL)溶液中加入(3R,4S)-3-氟-4-(((4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)氨基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75b，60mg，154μmol)，RuPhos Pd G2(11.9mg，15.4μmol)和Cs

步骤4：(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-(8-甲基-5-喹啉基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺(实例75)

向(3R,4S)-3-氟-4-(((4R,10bS)-4-甲基-2-(8-甲基喹啉-5-基)-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)氨基)-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75c，39mg，73.4μmol)的DCM(8mL)溶液加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例75(10mg，32％产率)。MS：计算值为432[(M+H)

实例76

(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-(8-甲基喹喔啉-5-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺

类似于实例75的制备方法，使用5-溴-8-甲基喹喔啉(CAS：1360599-43-4，BePharm，目录：BD00771201)代替5-溴8-甲基喹啉制备标题化合物。得到实例76(11mg)。MS：计算值为433[(M+H)

实例77

(4R,10bS)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-2-[8-(三氟甲基)喹喔啉-5-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺

类似于实例75的制备方法，使用5-溴-8-(三氟甲基)喹喔啉代替5-溴-8-甲基喹啉制备标题化合物。得到实例77(21.2mg)。MS：计算值为487[(M+H)

实例78

7-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-1,3-苯并噻唑-4-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备(3S,4R)-3-[[(4R,10bS)-2-(4-氰基-1,3-苯并噻唑-7-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-氨基]-4-氟-吡咯烷-1-羧酸叔丁脂(化合物78a)

向7-氟苯并[d]噻唑-4-腈(27.4mg，154μmol)的DMSO(2ml)溶液中加入(3S,4R)-3-[[(4R,10bS)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]氨基]-4-氟-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物75b，60mg，154μmol)和DIEA(99.3mg，768μmol)。将所得混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应用水(20mL)淬灭，并用EA(20mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤2：制备7-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-1,3-苯并噻唑-4-腈(实例78)

向(3S,4R)-3-[[(4R,10bS)-2-(4-氰基-1,3-苯并噻唑-7-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-氨基]-4-氟-吡咯烷-1-羧酸叔丁脂(化合物78a，20mg，36.5μmol)的DCM(8mL)溶液加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例78(11mg，67％产率)。MS：计算值为449[(M+H)

实例79

(4R,10bS)-2-(8-氯-5-喹啉基)-N-[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-胺

类似于实例75的制备方法，使用5-溴-8-氯喹啉(CAS：927800-41-7，BePharm，目录：BD38263)代替5-溴8-甲基喹啉制备标题化合物。得到实例79(12mg)。MS：计算值为452[(M+H)

实例80

5-[(4R,10bS)-7-[2-[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]乙基氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例68的制备方法，制备标题化合物。得到实例80(12mg)。MS：计算值为469[(M+H)

实例81

5-[(4R,10bS)-7-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例30的制备方法，制备标题化合物。得到实例81(10mg)。MS：计算值为443[(M+H)

实例82

5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备5-溴-4-氟-2-甲基-苯甲酸(化合物82b)

在0℃下，向4-氟-2-甲基苯甲酸(化合物82a，50.0g，324.38mmol)的浓H

步骤2：制备5-溴-4-氟-2-甲基-苯甲酸甲酯(化合物82c)

向搅拌的5-溴-4-氟-2-甲基-苯甲酸(化合物82b，35.0g，150.2mmol)的DMF(350mL)溶液加入碳酸铯(73.5g，225.6mmol)。将所得混合物搅拌30分钟，然后加入碘甲烷(22.0g，155mmol)。将混合物在40℃下搅拌15小时。冷却至室温后，将反应用水(1.5L)淬灭，并用EA(800mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤3：制备5-溴-2-(二溴甲基)-4-氟苯甲酸甲酯(化合物82d)

向5-溴-4-氟-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物82c，35.0g，粗品)的四氯化碳(200mL)溶液加入过氧化苯甲酰(3.43g，14.2mmol)和NBS(77.0g，432.6mmol)。将所得混合物在回流下搅拌18小时。通过硅藻土过滤反应混合物，并用CCl

步骤4：制备5-溴-4-氟-2-甲酰基-苯甲酸甲酯(化合物82e)

在室温无光和氮气保护下，经过约30分钟，向5-溴-2-(二溴甲基)-4-氟-苯甲酸甲酯(化合物82d，10.0g，粗品)的2-丙醇(150mL)的悬浮液加入硝酸银(9.2g，54.16mmol)的水(20mL)溶液。在室温无光下将所得混合物搅拌另外3小时。用5mL盐水淬灭反应，将所得混合物通过硅藻土过滤，并将滤液真空浓缩。将残余物用DCM(500mL)重新溶解，随后用NaHCO

步骤5：制备(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-9-氟-4-甲基-1,3,4,10b-四氢吡嗪并[1,2-b]异吲哚-6-酮(化合物82g)

(2R)-N1-苄基-N1-(三甲基硅烷基甲基)丙烷-1,2-二胺(化合物1g，1.0g，2.0g，8.0mmol)，5-溴-4-氟-2-甲酰基苯甲酸甲酯(化合物82e，2.5g，7.6mmol)和4A MS(4.5g)的混合物于MeCN(50mL)中在氮气下在室温搅拌过夜。通过硅藻土过滤反应混合物，并用DCM洗涤。真空浓缩滤液，得到中间体化合物82f，并将残余物重新溶于MeCN/TFE(18mL/2mL)，然后加入[Ir(dtbbpy)(ppy)

步骤6：制备(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物82h)

(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-9-氟-4-甲基-1,3,4,10b-四氢吡嗪并[1,2-b]异吲哚-6-酮(化合物82g，0.9g，2.31mmol)和BH

步骤7：制备(4R,10bS)-8-溴-9-氟-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物82i)

向(4R,10bS)-2-苄基-8-溴-9-氟-4-甲基-1,3,4,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物82g，0.5g，1.3mmol)的DCE(15mL)溶液，在室温下加入1-氯乙基碳氯化物(0.9g，6.6mmol)。将反应混合物在回流下加热过夜，并冷却至室温，然后真空浓缩。将残余物溶解在MeOH(30mL)中，并将所得混合物在回流下加热另外2小时。将混合物冷却至室温并真空浓缩。将残余物用水(10mL)稀释，并将溶液用NaHCO

步骤8：制备5-[(4R,10bS)-8-溴-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(化合物82j)

向5-氟喹啉-8-腈(化合物1c，186mg，1.1mmol)的DMSO(5mL)溶液加入(4R,10bS)-8-溴-9-氟-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物82i，280mg，1.0mmol)和(381mg，3.0mmol)。将反应混合物在120℃下搅拌5小时。将混合物冷却至室温，用水(50mL)淬灭，并用EA(60mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤9：制备N-[(3R,4R)-1-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基羧酸叔丁脂(化合物82k)

向5-[(4R,10bS)-8-溴-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(化合物82j，60.0mg，140μmol)的二恶烷(5mL)溶液，加入N-[(3R,4R)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷基-3-基]氨基甲酸叔丁酯(45.0mg，210μmol)，碳酸铯(90.0mg，280μmol)和tBuXPhos Pd G3(CAS：1447963-75-8，西格玛奥德里奇，目录：762229，24mg，30μmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，用水(10mL)稀释，并用EA(15mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤10：制备5-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例82)

向N-[(3R,4R)-1-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基羧酸叔丁脂(化合物82k，50.0mg，87μmol)的DCM(5mL)溶液加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例82(5.9mg，14％产率)。MS：计算值为473[(M+H)

实例83

5-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例82的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替N-[(3R,4R)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例83(8.1mg)。MS：计算值为473[(M+H)

实例84

5-[(4R,10bS)-8-(2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基)-9-氟-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例82的制备方法，使用2,6-二氮杂螺并[3.3]庚烷-2-羧酸叔丁酯代替N-[(3R,4R)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸酯制备标题化合物。得到实例84(10.4mg)。MS：计算值为455[(M+H)

实例85

5-[(4R,10bS)-9-氟-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例82的制备方法，使用9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-3-羧酸叔丁酯代替N-[(3R,4R)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例85(10.4mg)。MS：计算值为485[(M+H)

实例86

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(哌嗪-1-羰基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-羧酸2,4,6-三氯苯脂(化合物86a)

5-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(化合物10b，500mg，1.2mmol)，甲酸2,4,6-三氯苯脂(1.6g，7.1mmol)，XantPhos(140mg，240μmol)，Pd(OAc)

步骤2：制备4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-羰基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物86b)

向(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-羧酸(2,4,6-三氯苯脂)(化合物86a，120.0mg，210μmol)的THF(3mL)溶液，加入DMAP(5.0mg，40μmol)，三乙胺(44.0mg，430μmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁脂(60.0mg，320μmol)。将所得混合物在50℃下搅拌16小时，然后将混合物真空浓缩。残余物通过Prep-TLC纯化，得到化合物86b(80mg，64.0％收率)。MS：计算值为553[(M+H)

步骤3：制备5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(哌嗪-1-羰基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈(实例86)

向4-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-羰基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(化合物86b，80.0mg，140μmol)的DCM(5mL)溶液加入TFA(2mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例86(34.5mg，51.0％产率)。MS：计算值为453[(M+H)

实例87

5-[(4R,10bS)-8-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羰基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例86的制备方法，使用(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸叔丁酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例87(46.1mg)。MS：计算值为465[(M+H)

实例88

5-[(4R,10bS)-8-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-羰基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例86的制备方法，使用N-(4-甲基-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例88(56.1mg)。MS：计算值为481[(M+H)

实例89

5-[(4R,10bS)-8-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羰基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]喹啉-8-腈

类似于实例86的制备方法，使用代替哌嗪-1-羧酸叔丁酯。得到实例89(34.3mg)。MS：计算值为479[(M+H)

实例90

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂双环[3.5]壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备N-(2-溴-5-氟-苯基)-3,3-二甲氧基-丙酰胺(化合物90b)

向2-溴-5-氟苯胺(50g，263mmol)和3,3-二甲氧基丙酸甲酯(45mL，316mmol)的THF(150mL)溶液，在0℃下滴加NaHMDS的THF(394mL，394mmol)溶液。将混合物在该温度下搅拌10分钟，然后将其加热至15℃并搅拌18小时。用饱和NH

步骤2：制备8-溴-5-氟-1H-喹啉-2-酮(化合物90c)

在0℃下，将N-(2-溴-5-氟-苯基)-3,3-二甲氧基-丙酰胺(化合物90b，100g，238mmol)的DCM(500mL)溶液加入到浓硫酸(300mL)中。将混合物在15℃下搅拌2小时。将混合物缓慢倒入2000mL冰水中，出现黄色沉淀。过滤混合物，并将湿饼用500mL水，200mL异丙醇和300mL PE洗涤。通过抽真空干燥固体，得到化合物90c(50g，86.5％收率)。MS：计算值为242[(M+H)

步骤3：制备5-氟-2-氧代-1H-喹啉-8-腈(化合物90d)

8-溴-5-氟-1H-喹啉-2-酮(化合物90c，50g，206mmol)，氰化锌(4820mg，412mmol)，Pd(PPh

步骤4：制备(8-氰基-5-氟-2-喹啉基)三氟甲磺酸脂(化合物90e)

向5-氟-2-氧代-1H-喹啉-8-腈(化合物90d，17g，90mmol)和2,6-二甲基吡啶(39g，361mmol)的DCM溶液，在0℃下滴加三氟甲磺酸酐(51g，181mmol)。将混合物在0℃下搅拌1小时，然后将反应用水稀释，用DCM萃取。将有机层干燥并浓缩。残余物通过快速柱纯化，得到化合物90e(23.0g，80％产率)。MS：计算值为321[(M+H)

步骤5：制备2-氘代-5-氟喹啉-8-腈(化合物90f)

向(8-氰基-5-氟-2-喹啉基)三氟甲磺酸脂(化合物90e，23g，72mmol)和氧化氘(100mL)的THF(230mL)溶液，加入碳酸钾(20g，144mmol)和Pd/C(6g)。将混合物在氘气氛(气球)下在40℃搅拌5小时。将混合物过滤，并将滤液浓缩并通过快速柱纯化，得到化合物90f(11g，87.8％收率)，其无需进一步纯化即可直接用于下一步。MS：计算值为174[(M+H)

步骤6：制备5-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈(化合物90g)

向(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并-[2,1-a]异吲哚(化合物10a，660mg，2.8mmol)的DMSO(20mL)溶液，加入2-氘代-5-氟-喹啉-8-腈(化合物90f，350mg，2.0mmol)和DIEA(1.3g，10.1mmol)。将所得混合物在120℃下搅拌过夜。冷却至室温后，将反应用水(50mL)淬灭，并用EA(80mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤2：制备2-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-2-氘代-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯(化合物90h)

向5-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并-[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉8-腈(化合物90g，100mg，238μmol)的二恶烷(15mL)溶液，加入t-BuONa(45.7mg，476μmol)，5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯(65.2mg，285μmol)和tBuXPhos Pd G3(9.4mg，11.9μmol)。将反应混合物在90℃下搅拌过夜。将混合物冷却至室温，用水(50ml)稀释，并用EA(50mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤3：制备5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]-壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈(实例90)

向2-[(4R,10bS)-2-(8-氰基-2-氘代-5-喹啉基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯(化合物90h，80mg，141μmol)的DCM(8mL)溶液，加入TFA(4mL)。将混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物，将其通过制备HPLC纯化，得到实例90(42mg)。MS：计算值为468[(M+H)

实例91

5-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈

类似于实例90的制备方法，使用(3S,4R)-3-氨基-4-氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯代替5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例91(21.2mg)。MS：计算值为444[(M+H)

实例92

5-[(4R,10bS)-8-(3-氨基-3-甲基-氮杂环丁烷-1-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈

类似于实例90的制备方法，使用N-(3-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯代替5-氧杂2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例92(21.2mg)。MS：计算值为426[(M+H)

实例93

5-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-2-氘代-喹啉-8-腈

类似于实例90的制备方法，使用9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-3-羧酸叔丁酯代替5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例93(21.2mg)。MS：计算值为468[(M+H)

实例94

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备氨基2,4,6-三甲基苯磺酸盐(化合物94b)

向(1E)-N-(2,4,6-三甲基苯基)磺酰氧基乙酰胺酸乙酯(化合物94a，200g，700mmol)的1,4-二恶烷(500mL)溶液，在0℃下在30分钟内滴加盐酸(110mL)，并搅拌1小时。加入1000mL冰水，并将混合物过滤。将滤饼溶解在1.5L EtOAc中，然后搅拌30分钟。浓缩有机层(保持温度低于25℃)，得到粗产物。将粗产物重结晶(石油/EtOAc＝10/1)，得到化合物94b(110g，73％收率)。MS：计算值为216[(M+H)

步骤2：制备2-溴-5-氟-吡啶-1-鎓-1-胺2,4,6-三甲基苯磺酸盐(化合物94c)

将氨基2,4,6-三甲基苯磺酸盐(化合物94b，110g，511mmol)和2-溴-5-氟吡啶(60g，341mmol)的DCM(1800mL)溶液在10℃下搅拌18小时。浓缩混合物，残余物在EtOAc中重结晶，得到化合物94c(90g，92％收率)。MS：计算值为191[(M+H)

步骤3：制备7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(化合物94d)

2-溴-5-氟吡啶-1-鎓-1-胺，2,4,6-三甲基苯磺酸盐(化合物94c，90g，230mmol)，K

步骤4：制备7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物94e)

向7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(化合物94d，8.0g，26.7mmol)的乙酸(48mL)和水(48mL)的混合物，加入浓HCl(36mL，432mmol)。将混合物在100℃下搅拌18小时。将混合物用水(200mL)稀释，用浓NaOH(1N)水溶液碱化至pH＝8，并用EA(200mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤5：制备4-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物94f)

将7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物94e，1000mg，4.6mmol)，氰化锌(880mg，7.5mmol)，锌(31mg，0.5mmol)，XantPhos(1076mg，1.8mmol)和Pd(OAc)

步骤6：制备4-((4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢吡唑并-[2,1-a]异吲哚-2(1H)-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物94g)

向4-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物94f，750mg，4.6mmol)的DMSO(30mL)溶液加入(4R,10bS)-8-溴氟-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚(化合物10a，1.2mg，4.6mmol)和DIEA(3.0mg，23.3mmol)。将反应混合物在100℃下搅拌20小时。冷却至室温后，将反应用水(50mL)淬灭，并用EA(100mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤7：制备((3R,4R)-1-((4R,10bS)-2-(7-氰基吡唑并-[1,5-a]吡啶-4-基)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物94h)

向4-((4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢脱水吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2(1H)-基)吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物94g，40mg，98μmol)的二恶烷(6mL)溶液，加入((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯(25.4mg，118μmol)，Cs

步骤3：制备4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(实例94)

向((3R,4R)-1-((4R,10bS)-2-(7-氰基吡唑并-[1,5-a]吡啶-4-基)-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(化合物94h，22mg，40.5μmol)的DCM(10mL)溶液，加入TFA(3mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例94(12mg，66％产率)。MS：计算值为444[(M+H)

实例95

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用((3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例95(18mg)。MS：计算值为444[(M+H)

实例96

4-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-氨基吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例96(5.2mg)。MS：计算值为414[(M+H)

实例97

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用(2R)-2-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例97(6.0mg)。MS：计算值为428[(M+H)

实例98

4-[(4R,10bS)-8-[[(3S,4R)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用(3S,4R)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例98(17mg)。MS：计算值为432[(M+H)

实例99

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-3-氨基-4-氟-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R,4S)-4-氟吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例99(17mg)。MS：计算值为432[(M+H)

实例100

4-[(4R,10bS)-8-(4-氨基-4-甲基-1-吡咯烷-1-哌啶基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-(4-甲基-4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例100(9.0mg)。MS：计算值为442[(M+H)

实例101

4-[(4R,10bS)-8-[(6R)-6-氨基-1,4-氧杂氮杂环庚烷-4-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(6R)-1,4-氧杂氮杂环庚烷-6-基]氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例101(10.0mg)。MS：计算值为444[(M+H)

实例102

4-[(4R,10bS)-8-(5-氧杂-2,8-二氮杂双环[3.5]壬-2-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-羧酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例102(20.2mg)。MS：计算值为456[(M+H)

实例103

4-[(4R,10bS)-8-[(3R)-3-氨基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R)-3-甲基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：167888-15-5，PharmaBlock，目录：PBXA3113)代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例103(20mg)。MS：计算值为428[(M+H)

实例104

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-甲氧基-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R,4R)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：907544-18-7，PharmaBlock，目录：PB07428)代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例104(10mg)。MS：计算值为458[(M+H)

实例105

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-4-氨基-3-甲氧基-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用双(N-[(3R,4S)-3-甲氧基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯)草酸(南京药石科技股份有限公司，目录：PB97963-1)代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例105(10mg)。MS：计算值为458[(M+H)

实例106

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4S)-3-氨基-4-甲氧基-1-哌啶基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R,4S)-4-甲氧基-3-哌啶基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：2227197-47-7，PharmaBlock，目录：PBZ5288-1)代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例106(10mg)。MS：计算值为458[(M+H)

实例107

4-[(4R,10bS)-4-甲基-8-(9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-3-基)-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用9-氧杂-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬烷-3-羧酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例107(10mg)。MS：计算值为456[(M+H)

实例108

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R,4R)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷基-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例108(10mg)。MS：计算值为444[(M+H)

实例109

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷基-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例109(27mg)。MS：计算值为444[(M+H)

实例110

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3R,4R)-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：1820575-70-9，BePharm，目录：BD761646)代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例110(40mg)。MS：计算值为430[(M+H)

实例111

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例94的制备方法，使用N-[(3S,4S)-4-羟基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS：870632-91-0，BePharm，目录：BD447697)代替((3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)-氨基甲酸叔丁酯制备标题化合物。得到实例111(42mg)。MS：计算值为430[(M+H)

实例112

4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

根据以下方案制备标题化合物：

步骤1：制备7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(化合物112a)

将7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸乙酯(化合物94d，5.2g，18.1mmol)，NaOH(2.1g，54.3mmol)在EtOH(90.0mL)和水(70.0mL)中的混合物在60℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，然后用水稀释。用1N HCl调节pH至4后，沉淀出灰色固体，将其通过过滤收集以得到化合物112a(4.0g，85.6％产率)。MS：计算值为259[(M+H)

步骤2：制备7-溴-3,4-二氟吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物112b)

向7-溴-4-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-3-羧酸(化合物112a，4.0g，15.4mmol)和KF(3.6g，61.8mmol)在DCE(60.0mL)和水(50.0mL)的溶液，加入Selectfluor(10.9g，30.9mmol)。将反应在70℃下搅拌18小时。用水淬灭反应，用DCM萃取两次。合并的有机层用Na

步骤3：制备3,4-二氟吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物112c)

向7-溴-3,4-二氟-吡唑并[1,5-a]吡啶(化合物112b，2.8g，12.0mmol)和氰化锌(5.6g，48.0mmol)的DMF(70.0mL)溶液，加入四(三苯基膦)钯(1.4g，1.2mmol)。将反应混合物在氮气气氛下在120℃下搅拌18小时。用水淬灭混合物，并用EtOAc萃取两次。合并的有机层经Na

步骤4：制备4-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物112d)

3,4-二氟吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物112c，200.0mg，1.12mmol)，(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-1,2,3,4,6,10b-六氢吡嗪[2,1-a]异吲哚(化合物10a，351.1mg，1.32mmol)和DIEA(800.0mg，6.19mmol)在DMA(20mL)中的混合物在130℃下搅拌15小时。将反应混合物用水(50mL)淬灭，用EtOAc(50mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na

步骤5：制备N-[(3S,4S)-1-[(4R,10bS)-2-(7-氰基-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(化合物112e)

将N-[(3S,4S)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(31.0mg，140μmol)，4-[(4R,10bS)-8-溴-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈(化合物112d，50.0mg，120μmol)，RuPhos Pd G2(20.0mg，20μmol)和碳酸铯(115.0mg，350μmol)在1,4-二恶烷(5mL)中的混合物用氩气吹扫三次，然后将混合物在氩气气氛下在100℃下搅拌16小时。将混合物用DCM(80mL)稀释，过滤，并将滤液真空浓缩。残余物通过Prep-TLC纯化(PE：EA＝1∶2)得到化合物112e(40mg，37％产率)。MS：计算值为562[(M+H)

步骤6：制备4-[(4R,10bS)-8-[(3S,4S)-4-氨基-3-羟基-3-甲基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈；2,2,2-三氟乙酸(实例112)

向N-[(3S,4S)-1-[(4R,10bS)-2-(7-氰基-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-8-基]-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基羧酸叔丁脂(化合物112e，40.0mg，70μmol)的DCM(10mL)溶液加入TFA(3mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后浓缩，得到粗产物将其通过制备型HPLC纯化，得到实例112(5.5mg，17％产率)。MS：计算值为462[(M+H)

实例113

4-[(4R,10bS)-8-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-4-甲基-3,4,6,10b-四氢-1H-吡嗪并[2,1-a]异吲哚-2-基]-3-氟-吡唑并[1,5-a]吡啶-7-腈

类似于实例112的制备方法，使用N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸酯叔丁酯代替N-[(3S,4S)-4-羟基-4-甲基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁基脂来制备标题化合物。得到实例113(70mg)。MS：计算值为462[(M+H)

实例114

为了确定具有式(I)或(Ia)或(Ib)的化合物在HEK293-Blue-hTLR-7/8/9细胞测定中的活性，进行了以下测试。

HEK293-Blue-hTLR-7细胞测定：

稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系购自InvivoGen(目录号：hkb-htlr7，圣地亚哥，加利福尼亚，美国)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB的激活来研究人类TLR7的刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞激活NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，在配体诸如R848(Resiquimod)的刺激下，孵育20小时后，TLR7拮抗剂使报告基因表达下降。使用QUANTI-Blue

HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度以170μL的体积，在96孔板中在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中孵育,其中在1％的最终的DMSO存在下于连续稀释液中添加20μL测试化合物和10μL的20μMR848的以上DMEM溶液，在37℃的CO

HEK293-Blue-hTLR-8细胞测定：

稳定的HEK293-Blue-hTLR-8细胞系购自InvivoGen(目录号：hkb-htlr8，圣地亚哥，加利福尼亚，美国)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB的激活来研究人类TLR8的刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR8配体刺激HEK-Blue hTLR8细胞激活NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，在配体诸如R848的刺激下，孵育20小时后，TLR8拮抗剂使报告基因表达下降。使用QUANTI-Blue

HEK293-Blue-hTLR8细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度以170μL的体积，在96孔板中在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中孵育,其中在1％的最终的DMSO存在下于连续稀释液中添加20μL测试化合物和10μL的60μMR848的以上DMEM溶液，在37℃的CO

HEK293-Blue-hTLR-9细胞测定：

稳定的HEK293-Blue-hTLR-9细胞系购自InvivoGen(目录号：hkb-htlr9，圣地亚哥，加利福尼亚，美国)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB的激活来研究人类TLR9的刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR9配体刺激HEK-Blue hTLR9细胞激活NF-κB和AP-1来诱导SEAP。因此，在配体诸如ODN2006(Resiquimod)(目录号：tlrl-2006-1，Invivogen，圣地亚哥，加利福尼亚，美国)的刺激下，孵育20小时后，TLR9拮抗剂使报告基因表达下降。使用QUANTI-Blue

HEK293-Blue-hTLR9细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度以170μL的体积，在96孔板中在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50接口mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中孵育,其中在1％的最终的DMSO存在下于连续稀释液中添加20μL测试化合物和10μL的20μM ODN2006的以上DMEM溶液，在37℃的CO

具有式(I)的化合物具有TLR7和/或TLR8抑制活性(IC

表1：本发明化合物在HEK293-Blue-hTLR-7/8/9细胞测定中的活性

实例113

人微粒体稳定性测定

将人肝微粒体(目录号：452117，美国康宁)在37℃下于100mM磷酸钾缓冲液(pH7.4)中与受试化合物预孵育10分钟。通过添加NADPH再生系统来引发反应。最终的孵育混合物在100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中包含1μM测试化合物、0.5mg/mL肝微粒体蛋白、1mMMgCl2、1mM NADP，1单位/mL异柠檬酸脱氢酶和6mM异柠檬酸。在37℃下孵育0、3、6、9、15和30分钟后，将300μL冷ACN(包括内标)添加到100μL孵育混合物中以终止反应。沉淀并离心后，取出100μL上清液并加入300μL水。通过LC-MS/MS测定样品中残留的化合物的量。还制备并分析了零和30分钟无NADPH再生系统的对照。结果分类为：低(<7.0mL/min/kg)，中(7.0-16.2mL/min/kg)和高(16.2-23.2mL/min/kg)。测试结果汇总于表2中。

表2：人类微粒体稳定性结果

实例 114

hERG 通道抑制测定

hERG通道抑制测定是一种高度灵敏的测量，可鉴定表现出与体内心脏毒性相关的hERG抑制作用的化合物。将hERG K

表3：hERG结果

实例115

3T3体外光毒性测定

光毒性被定义为在皮肤第一次暴露于某些化学物质并随后暴露于光之后引起的毒性反应，或者是类似的在全身性施用化学物质后通过皮肤照射引起的毒性反应。本研究中使用的测定旨在通过使用Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞的简单体外细胞毒性测定来检测化学物质的光毒性潜力。该测试的原理是比较在暴露或不暴露于无毒剂量的UVA-光下进行测试时化学物质的细胞毒性。细胞毒性表示为细胞生长速率的剂量依赖性降低，该降低取决于处理后一天对活性染料中性红的吸收。

方法

制备储备溶液和测试物品的剂量

即将开始暴露于细胞之前，称重少量物质并在DMSO中新鲜配制。将该原液或适当的DMSO稀释液加入细胞悬液中，以获得所需的最终浓度。所有溶液通常在Eppendorf瓶盖中制备，使用后丢弃。

参考物质

氯丙嗪(HCL)(Sigma，批次/批号：120M1328V)，测试浓度：300μg/mL，溶剂：PBS/3％DMSO

紫外吸收光谱的测量

用Lambda-2光谱光度计(Perkin Elmer)在240nm和400nm之间记录吸收光谱本身或用UV-A或UV-B预照射的吸收光谱。

UV辐射源：对于UV-A：带有滤波器H1的Sol 500

主要光谱： 315-690nm

辐照度： 大约1.67mW/cm

辐射剂量 大约5J/cm

对于UV-B：Philips TL 20W/12

主要光谱： 290-320nm

辐照度： 大约0.083mW/cm

辐射剂量： 大约0.05J/cm

光毒性的测定

对于该研究，Borenfreund和Puerner的中性红吸收(NRU)分析(Borenfreund,E,Puerner JA.Toxicity determined in vitro by morphological alterations andNeutral Red absorption.Toxicology Lett.1985；24:119-124.)modified according toINVITTOX protocol No 78(ERGATT/FRAME data bank of in vitro techniques intoxicology.INVITTOX PROTOCOL No 78.3T3 NRU Phototoxicity Assay.March 1994)已被调整为检查测试物品可能的光毒性潜力。该测定基于中性红染料向培养的鼠成纤维细胞的溶酶体中的主动吸收。因为已知溶酶体膜是许多光毒性化合物的作用部位，所以该测定法可以提供潜在的光毒性损伤的量度。

制备细胞培养物

在37℃下在6％CO2的潮湿气氛中将鼠成纤维细胞克隆A 31(ATCC编号CCL 163-第108代)在含有sDMEM(Dulbecco’s最少必备培养基，其中添加了10％的小牛血清、2mM L-谷氨酰胺，100单位/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素)的175cm2组织培养级烧瓶中培养。在细胞接近汇合之前，通过胰蛋白酶消化将它们从烧瓶中移出。在用于测定之前，在100μl体积的sDMEM中将细胞以1x104个细胞/孔的浓度转移到96孔微量滴定板中，并使其附着24小时。

暴露于测试物品

为了与鼠成纤维细胞一起孵育，将测试物品稀释在PBS/3％DMSO中(详细浓度见结果)。

培养基(Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)，GlutaMAX(Gibco Ref21885-025)，10％胎牛血清(FBS)(Gibco Ref 10270-106)，100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Gibco Ref 15140-122)从孔中移出，用PBS洗涤鼠成纤维细胞。然后加入100μL含测试物品的PBS/3％DMSO，并将靶细胞在37℃下用6％CO2孵育1小时。

UV暴露

对于每个测试物品，按照表4制备微量滴定板。将“UVA板”暴露于约5J/cm2的UVA光下，将“深色板”置于黑暗中，作为细胞毒性对照。含有盐酸氯丙嗪的板作为阳性对照。UV通量使用UV计量器(Dr.

UV照射后，将测试物品从孔中取出(用PBS的一个洗涤步骤)，并替换为sDMEM。然后将靶细胞在37℃下在6％CO2中孵育过夜。

表4.96孔微量滴定板设置

96孔微量滴定板的制备如下：

每块板含有带有细胞和溶剂但没有测试物品的孔，这些测试物品未与中性红溶液(0％标准品-S1)一起孵育，或用中性红(100％标准品-S2)染色以计算标准细胞活力曲线。标有U01-U08的孔包含不同的测试物品浓度。

中性红吸收

将要使中性红(NR)染色溶液的新鲜制备如下：

·将0.4％的储备水溶液避光并在使用前过滤以除去NR晶体。

·然后在sDMEM中制备1:40稀释的储备溶液，并添加到细胞中。

孵育后，待测孔中装有100μL含有中性红的sDMEM。将靶细胞与NR在37℃下在6％CO2中于孵育3小时。

中性红吸收测量

从靶细胞中去除未掺入的中性红，并用至少100μL PBS洗涤孔。然后加入150μL中性红脱附溶液(1％冰醋酸，50％乙醇水溶液)以定量萃取所掺入的染料。在微量滴定板振荡器上剧烈振荡至少10分钟后，直到从细胞中提取出中性红并形成均匀溶液为止，使用SPECTRAmax PLUS微量滴定板读数器(Molecular Devices)测量所得有色溶液在540nm的吸收。

计算细胞活力

用SOFTmax Pro软件包(Molecular Devices)计算细胞活力。首先根据以下公式使用程序的线性曲线拟合选项，计算两点标准曲线(0％和100％活力)：

Y＝A+(B×X)

(A＝线的y截距；B＝线的斜率；

0％细胞活力＝含溶剂但无测试物品和中性红的细胞；

100％细胞活力＝含溶剂和中性红但无测试物品的细胞；

通过这种方式，计算与浓度增加的测试化学品一起孵育的细胞的活力。氯丙嗪(HCl)作为实验的阳性对照。

IC50值的计算

所有计算均使用SOFTmax Pro分析软件包进行(分子器件-有关详细信息，请参见：

http://www.mbl.edu/jbpc/files/2014/05/SoftMax_Pro_User_Guide.pdf)

计算光毒性的鉴别因子

为了评估光毒性潜力，比较在有和没有UV暴露下确定的IC

因子＝IC

为了区分光毒性和非光毒性测试化学品，使用大于5的截断因子(Liebsch M,Spielmann H,Balls M,Brand M,

即使在最高测试浓度下对鼠成纤维细胞也没有细胞毒性的测试物品，但在UV暴露后显示出细胞活力的强烈剂量依赖性下降，也被认为具有光毒性(Spielmann H,Balls M,Dupuis J,Pape WJW,Pechovitch G,Silva DeO,Holzhütter,HG,Clothier R,Desolle P,Gerberick F,Liebsch M,Lowell WW,Maurer T,Pfannenbecker U,Potthast JM,Csato M,Sladowski D,Steiling W,Brantom P.The international EU/COLIPA in vitrophototoxicity validation study:Results of phase II(blind trial).Part 1:The3T3 NRU phototoxicity test.Toxicology in Vitro 1998,12:305-327).

测试结果如下所示，本发明的化合物显示出非常好的光毒性。

表5.本发明化合物的3T3测试结果