一种盐酸奈康唑杂质检测控制分析方法

技术领域

本发明属于杂质检测技术领域，具体涉及一种盐酸奈康唑杂质检测控制分析方法。

背景技术

盐酸奈康唑(CAS No.130773-02-3)，其化学名称为：(E)-1-[2-甲硫基-1-[2-(戊氧基)苯基]乙烯基]-1H-咪唑盐酸盐，具有如下式所示的结构：

盐酸奈康唑是一种新型咪唑类抗真菌药物，具有抗菌和杀菌双重功效。其抗菌谱广，对酵母样真菌、皮肤癣菌、花斑癣菌、着色真菌以及其他丝状真菌具有广谱抗菌作用。

众所周知，盐酸奈康唑原料药中不可避免地存在杂质，可能会从制备过程中引入，也可能为降解类杂质。如何对盐酸奈康唑原料药中含有的杂质进行准确检测分析，进而控制原料药中的杂质含量，提升用药安全，成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明提供一种盐酸奈康唑杂质检测控制分析方法，包括如下步骤：采用液相色谱对盐酸奈康唑中的杂质进行检测分析，所述杂质至少包括降解杂质和残留溶剂，所述残留溶剂包括起始物料可能引入的溶剂以及工艺制备过程可能引入的溶剂。

根据本发明，所述降解杂质包括奈康唑Z异构体，所述奈康唑Z异构体为式(I)所示化合物：

根据本发明，所述奈康唑Z异构体的检测分析方法包括如下步骤：选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以酒石酸氢钠溶液-甲醇为流动相，采用高效液相色谱仪，检测供试品溶液中奈康唑Z异构体的含量。

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，所述酒石酸氢钠溶液和甲醇的体积比为(40-50):(50-60)，例如(43-48):(52-57)，示例性为45:55。进一步地，所述酒石酸氢钠溶液的浓度为0.02-0.1mol/L，例如0.03-0.07mol/L，示例性为0.05mol/L。

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，所述供试品溶液为盐酸奈康唑的乙醇溶液，其浓度为0.05-1.5mg/mL，例如0.08-1.2mg/mL，示例性为1.0mg/mL。

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，所述对照溶液为浓度0.05-1.5mg/mL的盐酸奈康唑标准品的乙醇溶液，例如浓度为0.08-1.2mg/mL，示例性为1.0mg/mL。

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，还包括系统适应性溶液，所述系统适应性溶液为光照破坏后的盐酸奈康唑标准品的流动相溶液。其中，所述系统适应性溶液的浓度为0.05-1.5mg/mL，优选为0.08-1.2mg/mL，示例性为1.0mg/mL。其中，所述光照破坏为采用总光照度约为10

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，所述供试品溶液、对照溶液和系统适应性溶液的浓度相同。

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，还包括灵敏度溶液，其浓度为对照溶液的1/20。优选地，所述灵敏度溶液信噪比应不小于10。

根据本发明，上述奈康唑Z异构体的检测分析方法中，检测条件包括：

柱温为38-42℃，优选为40℃；

检测波长为276-296nm，优选为286nm；

供试品溶液和/或对照品溶液的进样量为5-15μL，优选10μL；

流动相的流速为0.5-1.5ml/min，优选为0.8ml/min；

理论板数按奈康唑峰计算不低于2000；

记录色谱图至主峰保留时间的至少3倍，优选为3倍；根据本发明，所述降解杂质还包括Z08所示化合物：

根据本发明，所述杂质还可以包括工艺杂质，所述工艺杂质包括Z01-Z06所示化合物中的至少一种：

根据本发明，所述工艺杂质的检测方法与奈康唑Z异构体检测方法相同。

根据本发明，所述残留溶剂包括乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚、三氯甲烷和二甲基甲酰胺。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法包括如下步骤：以毛细管柱为色谱柱，以氰丙基苯基-二甲基硅氧烷为固定液，采用程序升温，利用气相色谱仪检测供试品溶液中的乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的含量。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法中，所述固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基硅氧烷。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法中，所述供试品溶液为盐酸奈康唑的二甲基甲酰胺溶液。其中，所述供试品溶液的浓度为50-150mg/mL，例如80-120mg/mL，示例性为100mg/mL。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法中，还包括对照溶液，所述对照溶液为含有乙醇、二氯甲烷和叔丁基甲醚的二甲基甲酰胺混合溶液。其中，所述对照溶液中，乙醇的浓度为400-600μg/mL，例如450-550μg/mL，示例性为500μg/mL。其中，所述对照溶液中，二氯甲烷的浓度为50-70μg/mL，例如55-65μg/mL，示例性为60μg/mL。其中，所述对照溶液中，叔丁基甲基醚的浓度为400-600μg/mL，例如450-550μg/mL，示例性为500μg/mL。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法中，所述程序升温包括：起始温度30-45℃，维持3-6分钟，以每分钟20-40℃的速率升至175-185℃，维持0.5-2分钟，后运行195-205℃，维持1-4min；优选地，起始温度40℃，维持4分钟，以每分钟30℃的速率升至180℃，维持1分钟，后运行200℃，维持2min。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法中，所述气相色谱仪中的检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为290-320℃，例如295-310℃，示例性为300℃。

根据本发明，所述乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚的检测分析方法中，检测条件包括：

进样口温度为190-210℃，例如195-205℃，示例性为200℃；

载气为氮气；

固定液的流速为3.0-5.0mL/min，例如3.5-4.5mL/min，示例性为4.0ml/min；

分流比(15-25):1，例如(18-22):1，示例性为20:1；

供试品溶液和/或对照品溶液的进样量为0.5-1.5μL，例如0.7-1.2μL，示例性为1.0μl。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法包括如下步骤：

以毛细管柱为色谱柱，以氰丙基苯基-二甲基硅氧烷为固定液，采用程序升温，利用气相色谱仪检测供试品溶液中的三氯甲烷和二甲基甲酰胺的含量。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法中，所述固定液为6％氰丙基苯基-94％二甲基硅氧烷。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法中，所述供试品溶液为盐酸奈康唑的二甲亚砜溶液。其中，所述供试品溶液的浓度为5-15mg/mL，例如8-12mg/mL，示例性为10mg/mL。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法中，还包括对照溶液，所述对照溶液为含有三氯甲烷和二甲基甲酰胺的二甲亚砜混合溶液。其中，所述对照溶液中，三氯甲烷的浓度为8-20μg/mL，例如10-15μg/mL，示例性为12μg/mL。其中，所述对照溶液中，二甲基甲酰胺的浓度为150-200μg/mL，例如160-190μg/mL，示例性为176μg/mL。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法中，所述程序升温包括：起始温度55-65℃，维持7-13分钟，以每分钟20-40℃的速率升至195-205℃，维持1.5-5分钟。优选地，起始柱温60℃，维持10分钟，以每分钟30℃的速率升至200℃，维持3分钟。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法中，所述气相色谱仪中的检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为240-260℃，例如245-255℃，示例性为250℃。

根据本发明，所述三氯甲烷和二甲基甲酰胺的检测分析方法中，检测条件包括：

进样口温度为190-210℃，例如195-205℃，示例性为200℃；

载气为氮气；

顶空平衡温度为80-100℃，平衡10-30min；例如顶空平衡温度为85-95℃，平衡15-25min；示例性地，顶空平衡温度90℃，平衡20min；

固定液的流速为2.0-4.0mL/min，例如2.5-3.5mL/min，示例性为3.0ml/min；

分流比(2-7):1，例如(3-6):1，示例性为5:1；

供试品溶液和/或对照品溶液顶空进样。

本发明的有益效果：

本发明提供的杂质检测控制分析方法，能够精确检测盐酸奈康唑原料药中的降解杂质、工艺杂质和残留溶剂等有机杂质，为控制盐酸奈康唑原料药中的杂质含量提供指导性方向，进而提升用药安全性。各杂质的检测方法具有精密度高、重复性好、准确度高、稳定性强等特点。

附图说明

图1为系统适用性色谱图。

图2为奈康唑Z异构体定位色谱图。

图3为对照溶液色谱图。

图4为供试品溶液色谱图。

图5为残留溶剂色谱图一。

图6为残留溶剂色谱图二。

具体实施方式

下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1盐酸奈康唑杂质检测控制分析方法

一、降解杂质及工艺杂质的检测

1.分析方法

1.1稀释液的配制

乙醇。

1.2系统适用性溶液的配制

取盐酸奈康唑对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，摇匀，置4500lx光照下放置24小时，即得。系统适用性溶液的色谱图如图1所示。

1.3供试品溶液的配制

避光操作。取盐酸奈康唑适量，精密称定，用稀释液溶解并稀释制成每1ml中约含1.0mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的色谱图如图4所示。

1.4对照溶液的配制

精密移取供试品溶液1.0ml，置于100ml量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。对照溶液的色谱图如图3所示。

1.5系统适用性要求

依次出峰为奈康唑、奈康唑Z异构体，二者分离度符合要求，理论塔板数按奈康唑峰计算不低于2000。

1.6色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂[Aglient Poroshell 120EC-C18(150×4.6mm，2.7μm)]；

流动相：甲醇-0.05mol/L酒石酸氢钠溶液(55:45)；

柱温：40℃；

检测波长：286nm；

进样量：10μl。

1.7计算公式

注：A为峰面积。

1.8限度

单个杂质不得过0.1wt％，总杂不得过1.0wt％。

2.系统适用性试验

(1)溶液配制

空白溶液：乙醇

系统适用性溶液：取盐酸奈康唑对照品0.10137g，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置4500lx光照下放置24小时，即得。

(2)结果

系统适用性结果见下表1。

表1系统适用性试验结果

结果表明：系统溶液连续进样6针，奈康唑、Z异构体依次出峰，两峰间分离度＞1.5；奈康唑、Z异构体峰面积RSD分别为0.4％、0.2％＜2.0％，保留时间RSD均为0.3％＜1.0％，奈康唑峰理论塔板数均＞2000，系统适用性良好。

3.专属性试验

采用DAD(Agilent液相色谱仪)检测器，对供试品的主成分峰纯度进行检测，检测波长范围在190nm～400nm。

(1)溶液配制

空白溶液：乙醇。

系统适用性溶液：取盐酸奈康唑0.02760g，置50ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置4500lx光照下放置24小时，即得。

供试品溶液：取本品0.02532g，置25ml棕色量瓶中，用适量乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

各杂质定位溶液：按表2称定各杂质适量，并用适量乙醇溶解并稀释，摇匀，作为杂质定位溶液。

奈康唑Z异构体定位色谱图如图2所示。

表2各杂质定位溶液配制

混合杂质贮备液①：精密移取Z01、Z02、Z04、Z05、Z06、Z08杂质定位溶液200μl，置20ml棕色量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

混合杂质贮备液②：精密移取Z03、Z异构体杂质定位溶液1ml，置100ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

分离度溶液①：精密移取混合杂质贮备液①1.0ml，置10ml棕色量瓶中，加系统适用性溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

分离度溶液②：精密移取混合杂质贮备液②1.0ml，置10ml量瓶中，加系统适用性溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

(2)结果

专属性(选择性干扰)结果见表3。

表3专属性(选择性)干扰结果

结果表明：空白溶液不干扰供试品溶液检测；系统适用性溶液中奈康唑、奈康唑Z异构体依次出峰，且分离度应＞1.5；分离度溶液中主峰与相邻峰、各已知杂质峰间分离度均＞1.5，专属性良好。

4.精密度(重复性)

(1)溶液配制

空白溶液：乙醇。

系统适用性溶液：取盐酸奈康唑0.10137g，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置4500lx光照下放置24小时，即得。

供试品溶液：取本品0.02623g、0.02680g、0.02549g、0.02572g、0.02563g、0.02537g，置不同25ml棕色棕色量瓶中，用适量乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

对照溶液：精密量取上述6份供试品溶液1ml，分别置不同100ml棕色量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

(2)结果

重复性试验结果见下表。

表4重复性试验结果

结果表明：平行测定6份样品，单个杂质及总杂均符合要求；单个杂质含量变化的绝对值均小于0.02％，总杂含量变化的绝对值为0.019％＜0.02％，重复性良好。

5.精密度(中间精密度)

考察随机变动的因素对精密度的影响，由不同的分析人员，使用不同的仪器和不同批号的色谱柱在不同日期进行，对重复性试验项下相同批次的盐酸奈康唑原料药进行分析来评估。

(1)溶液配制

空白溶液：乙醇。

系统适用性溶液：取盐酸奈康唑0.10137g，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，置4500lx光照下放置24小时，即得。

供试品溶液：取本品0.02575g、0.02513g、0.02541g、0.02525g、0.02597g、0.02569g，置不同25ml棕色量瓶中，用适量乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。平行配制6份。

对照溶液：精密量取上述6份供试品溶液1ml，分别置不同100ml棕色量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

(2)结果

精密度试验结果见下表。

表5精密度试验结果

结果表明：实验员2平行测定6份样品，单个杂质及总杂均符合要求；单个杂质含量变化的绝对值均小于0.02％，总杂含量变化的绝对值为0.011％＜0.02％，中间精密度良好；12份样品，单个杂质含量变化的绝对值均小于0.02％，总杂含量变化的绝对值为0.019％＜0.02％，符合要求，方法精密度良好。

6.准确度

准确度用回收率试验评价，分别选择盐酸奈康唑原料各杂质的60％、100％、150％的浓度水平作为回收率试验溶液。

(1)溶液配制

杂质对照品贮备液：精密称取各杂质对照品适量，按下表配制。

表6杂质贮备配制

杂质对照品溶液①：精密量取杂质Z01、Z02、Z04、Z05、Z06、Z08对照品贮备液1ml，置10ml棕色量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品溶液①。

杂质对照品溶液②：精密量取杂质Z03、Z异构体对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，作为杂质对照品溶液②。

准确度溶液：配制各水平回收率试验溶液如下表所示，分别精密称取盐酸奈康唑原料适量，置相应棕色量瓶中，分别加入杂质对照品贮备液3ml、5ml、3ml(相当于加入各杂质标准限度的60％、100％、150％浓度水平)，用乙醇稀释至刻度，摇匀，作为回收率测试溶液。每个浓度水平同法配制3份。

表7回收率试验溶液配制

(2)结果

表8杂质Z01回收率结果

表9杂质Z02回收率结果

表10杂质Z03回收率结果

表11杂质Z04回收率结果

表12杂质Z05回收率结果

表13杂质Z06回收率结果

表14Z异构体回收率结果

表15杂质Z08回收率结果

结果表明：盐酸奈康唑杂质Z01、Z02、Z03、Z04、Z05、Z06、Z异构体、Z08的9份回收率均值分别为105.7％、103.5％、100.7％、98.3％、99.7％、95.4％、102.3％及105.9％，在90.0％～108.0％范围内，RSD分别为2.5％、1.9％、1.1％、2.3％、1.2％、1.1％、1.4％、2.4％，均＜10％，准确度良好。

7.溶液的稳定性试验

在室温条件下来评估对照溶液和样品溶液的稳定性。

(1)溶液配制

供试品溶液：精密称取本品0.02623g，置25ml棕色量瓶中，用适量乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

对照溶液：精密移取上述供试品溶液1ml，置100ml棕色量瓶中，摇匀，作为对照溶液。

(2)检测

在室温条件下于24内考察对照溶液和样品溶液的稳定性，分别在0h、3h、7h、10h、13h、17h、20h及24h各进样1针。

(3)结果

溶液稳定性试验结果见下表。

表16溶液稳定性试验结果

结果表明：在预设条件下，对照溶液各时间点相对0h的峰面积的百分比为99.5％～101.9％；供试品溶液各时间点各杂质及总杂含量相对0h的变化绝对值均小于0.02％，对照溶液及供试品溶液在室温下24小时内稳定。

二、残留溶剂的检测

2.1乙醇、二氯甲烷与叔丁基甲基醚的检测

取盐酸奈康唑约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密称取乙醇、二氯甲烷和叔丁基甲醚各适量，用二甲基甲酰胺稀释制成每1ml中约含乙醇500μg、二氯甲烷60μg和叔丁基甲基醚500μg的混合溶液，摇匀，作为对照品溶液。

以6％氰丙基苯基-94％二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱[DB-624(30m×0.530mm×3μm)]；程序升温：起始温度40℃，维持4分钟，以每分钟30℃的速率升至180℃，维持1分钟，后运行200℃，维持2min；检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度为300℃；进样口温度为200℃，载气为氮气，流速为每分钟4.0ml，分流比20:1。精密量取对照品溶液1.0μl，直接进样，记录色谱图，出峰顺序依次为：乙醇、二氯甲烷、叔丁基甲基醚，各峰之间分离度应符合要求。

精密量取供试品溶液和对照品溶液各1.0μl，分别注入气相色谱仪，记录色谱图(如图5所示)，按外标法以峰面积计算，含乙醇不得过0.5wt％、二氯甲烷不得过0.06wt％、叔丁基甲醚不得过0.5wt％。

2.2三氯甲烷、二甲基甲酰胺的检测

取盐酸奈康唑约0.2g，精密称定，置20ml顶空瓶中，加二甲亚砜溶解，密封，摇匀，作为供试品溶液。取三氯甲烷、二甲基甲酰胺各适量，精密称定，加二甲亚砜溶解并稀释制成每1ml中分别约含三氯甲烷12μg、二甲基甲酰胺176μg的溶液。精密量取1ml，置20ml顶空瓶中，密封，作为对照溶液。

6％氰丙基苯基-94％二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱[DB-624(60m×0.320mm×1.8μm)]；起始柱温60℃，维持10分钟，以每分钟30℃的速率升至200℃，维持3分钟；FID检测器温度为250℃；载气为氮气；流速为3.0ml/min；进样口温度为200℃；顶空平衡温度为90℃，平衡20min；分流比为5:1；精密量取对照品溶液进样，记录色谱图，出峰顺序依次为：三氯甲烷、二甲基甲酰胺，各峰之间分离度应符合要求。

精密量取对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱仪中，记录色谱图(如图6所示)，按外标法以峰面积计算，含三氯甲烷不得过0.006wt％，二甲基甲酰胺不得过0.088wt％。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。