一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法

技术领域

本发明涉及免疫层析检测技术领域，尤其涉及一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法。

背景技术

胶体金免疫层析技术是一种将抗原抗体免疫反应与胶体金标记示踪技术结合用于抗原、抗体含量定性定量检测的技术。抗体的胶体金标记主要是通过胶体金与蛋白质之间的静电作用力进行牢固结合的，由于其快速、简便、成本低、稳定性好等优点，特别是为现场快速检测叩开了一扇崭新的大门。

金标垫和样品垫是胶体金免疫层析试纸的重要组成部分，金标垫和样品垫的预处理对后续检测有不同程度的影响。金标垫的主要作用是吸附标记有相应蛋白质抗体的金纳米颗粒，决定了后续金纳米颗粒的灵敏度和特异性、释放效果等。目前金标垫的标记方法多为将标记好的浓缩的金颗粒喷涂在玻璃纤维素膜上，在使用过程中发现，该方法制备的金标结合垫标记量小，在检测过程中释放不完全，影响检测结果的准确度和灵敏性。样品垫在使用前也要进行预处理，样品垫中的基质影响很大，不处理直接应用于检测时，存在较大的问题，例如：出现假阳性和假阴性反应、阴阳性对比度不高、不能有效的促进金标结合垫中的金颗粒释放等。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法。

本发明的具体技术方案为：一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1）材料选择：选择玻璃纤维素膜和聚酯膜，避光阴凉处保存。

玻璃纤维素膜和聚酯膜的老化是因为膜上的水分蒸发，使膜变得疏水，带电荷并变脆。储存膜一般要求是避光密封，过干或过湿都不利。

2）浸泡：将预处理浸泡液添加至容器中，分别将玻璃纤维素膜和聚酯膜浸没25-35s。

玻璃纤维素膜和聚酯膜进行预处理，增大吸水速率，去除基质上的电荷影响，确保膜的功能均一性。

3）烘干：将浸润后的玻璃纤维素膜和聚酯膜分别移至35-40℃下烘干。

4）制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应单克隆抗体，将标记好的单克隆抗体封闭、离心、浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用喷金划膜机将浓缩的胶体金溶液喷涂到步骤3）所得聚酯膜上，35-40℃烘干，制备成金标结合垫。

将标记好的胶体金用喷金划膜机喷涂到聚酯膜上，在其上形成均匀的金标结合垫。

5）组装：将所得金标结合垫和步骤3）所得玻璃纤维素膜组装成胶体金免疫层析试纸条。

作为优选，步骤1）中，所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：

磷酸氢二钠：0.142%~0.363%，磷酸二氢钾：0.024%~0.027%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

作为优选，步骤1）中，所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：

磷酸氢二钠：0.363%，磷酸二氢钾：0.024%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

作为优选，步骤4）中，离心条件为转速10000~15000rpm，离心时间为15~30min。

进一步优选， 所述离心条件为转速12000rpm，离心时间为30min。

作为优选，步骤4）中，所述浓缩的胶体金溶液为原浓度的1/10。

与现有技术对比，本发明的有益效果是：

1）本发明预处理浸泡液能有效去除商品金标垫和样品垫中的基质，改善金标垫和样品垫的理化性质；

2）经本发明预处理浸泡液处理后的所得的试纸条，胶体金颗粒标记、释放均匀，金标结合物稳定性有极大提高；

3）经本发明预处理浸泡液处理后的样品垫吸收均匀，减少了样品垫本身的理化性质的影响。

附图说明

图1为不同胶体金免疫层析试纸条的测试结果对比图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

实施例1

一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1）材料选择：选择玻璃纤维素膜和聚酯膜，避光阴凉处保存。

2）浸泡：将预处理浸泡液添加至容器中，分别将玻璃纤维素膜和聚酯膜浸没30s。所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：磷酸氢二钠：0.363%，磷酸二氢钾：0.024%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

3）烘干：将浸润后的玻璃纤维素膜和聚酯膜分别移至37℃下烘干。

4）制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应单克隆抗体，将标记好的单克隆抗体封闭、离心（15000rpm，30min）、浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用喷金划膜机将浓缩的胶体金溶液喷涂到步骤3）所得聚酯膜上，37℃烘干，制备成金标结合垫。

5）组装：将所得金标结合垫和步骤3）所得玻璃纤维素膜组装成胶体金免疫层析试纸条。

图1（左）为本发明实施例1所得胶体金免疫层析试纸条，使用该方法制备的胶体金颗粒标记、释放均匀，在膜上显色清晰明显，金标结合物稳定性有极大提高；而图（中、右）中的胶体金在膜上分布不均与，颜色深浅不一，效果差。

实施例2

一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1）材料选择：选择玻璃纤维素膜和聚酯膜，避光阴凉处保存。

2）浸泡：将预处理浸泡液添加至容器中，分别将玻璃纤维素膜和聚酯膜浸没30s。所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：磷酸氢二钠：0.142%，磷酸二氢钾：0.027%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

3）烘干：将浸润后的玻璃纤维素膜和聚酯膜分别移至37℃下烘干。

4）制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应单克隆抗体，将标记好的单克隆抗体封闭、离心（15000rpm，30min）、浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用喷金划膜机将浓缩的胶体金溶液喷涂到步骤3）所得聚酯膜上，37℃烘干，制备成金标结合垫。

5）组装：将所得金标结合垫和步骤3）所得玻璃纤维素膜组装成胶体金免疫层析试纸条。

实施例3

一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1）材料选择：选择玻璃纤维素膜和聚酯膜，避光阴凉处保存。

2）浸泡：将预处理浸泡液添加至容器中，分别将玻璃纤维素膜和聚酯膜浸没30s。所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：磷酸氢二钠：0.363%，磷酸二氢钾：0.024%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

3）烘干：将浸润后的玻璃纤维素膜和聚酯膜分别移至37℃下烘干。

4）制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应单克隆抗体，将标记好的单克隆抗体封闭、离心（15000rpm，30min）、浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用喷金划膜机将浓缩的胶体金溶液喷涂到步骤3）所得聚酯膜上，37℃烘干，制备成金标结合垫。

5）组装：将所得金标结合垫和步骤3）所得玻璃纤维素膜组装成胶体金免疫层析试纸条。

实施例4

一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1）材料选择：选择玻璃纤维素膜和聚酯膜，避光阴凉处保存。

2）浸泡：将预处理浸泡液添加至容器中，分别将玻璃纤维素膜和聚酯膜浸没30s。所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：磷酸氢二钠：0.363%，磷酸二氢钾：0.024%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

3）烘干：将浸润后的玻璃纤维素膜和聚酯膜分别移至37℃下烘干。

4）制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应单克隆抗体，将标记好的单克隆抗体封闭、离心（12000rpm，15min）、浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用喷金划膜机将浓缩的胶体金溶液喷涂到步骤3）所得聚酯膜上，37℃烘干，制备成金标结合垫。

5）组装：将所得金标结合垫和步骤3）所得玻璃纤维素膜组装成胶体金免疫层析试纸条。

实施例5

一种胶体金免疫层析试纸条的制备方法，包括以下步骤：

1）材料选择：选择玻璃纤维素膜和聚酯膜，避光阴凉处保存。

2）浸泡：将预处理浸泡液添加至容器中，分别将玻璃纤维素膜和聚酯膜浸没30s。所述预处理浸泡液包括以下质量百分数的组分：磷酸氢二钠：0.142%，磷酸二氢钾：0.027%，氯化钠：0.8%，氯化钾：0.02%，BSA：1%，蔗糖：1%，Tween-20:0.2%，溶解在超纯水中。

3）烘干：将浸润后的玻璃纤维素膜和聚酯膜分别移至37℃下烘干。

4）制备金标结合垫：用制备好的胶体金溶液标记相应单克隆抗体，将标记好的单克隆抗体封闭、离心（12000rpm，15min）、浓缩后得到浓缩的胶体金溶液，使用喷金划膜机将浓缩的胶体金溶液喷涂到步骤3）所得聚酯膜上，37℃烘干，制备成金标结合垫。

5）组装：将所得金标结合垫和步骤3）所得玻璃纤维素膜组装成胶体金免疫层析试纸条。

本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。