一种酶法制备维生素C葡萄糖苷新方法

技术领域

本发明涉及一种酶法制备维生素C葡萄糖苷新方法，底物易得价格低廉，工艺反应绿色环保、高效，产品纯度达98％以上，成本低，可以工业化生产，极具竞争力。

背景技术

维生素C是体内多种酶反应途径的重要辅助因子，是人体不可缺少的物质，但人类、灵长类等少数动物不能自身合成，必须通过食物、药物等摄取维生素C；维生素C是一种多羟基化合物，很不稳定，容易被氧化成脱氢维生素C或二酮古乐糖酸，从而失去生理效能，所以体外补充的维生素C大多是稳定性好的维生素C衍生物。在众多的维生素C衍生物中，稳定性和利用率都非常好的物质是维生素C葡萄糖苷。维生素C葡萄糖苷含有维生素C天然结构，保持了维生素C抗氧化的生理特性而且在脂肪和水中均具有相当的溶解度，克服了维生素C的易变色和不稳定性，被广泛应用于使用食品、化妆品及医药加工领域，特别是在化妆品领域中成为了热点产品。当前工业化的维生素C葡萄糖苷合成方法主要是生物酶(环麦芽糊精葡聚糖转移酶)催化法，而本项目是通过蔗糖磷酸化酶催化蔗糖和维生素C合成维生素C葡萄糖苷。本工艺采用的酶法合成工艺，底物(蔗糖)价廉易得，成本低，反应绿色环保，高效；采用层析除糖工艺，步骤简单，效率高；应用重结晶技术，确保产品的高质量，产品生产成本低，极具竞争力。

发明内容

本生物催化合成新工艺制备维生素C葡萄糖苷的方法包括以下步骤：

蔗糖磷酸化酶的发酵制备工艺。采用生物催化技术，工艺条件温和、环保、高效，适合大规模生产应用。

底物蔗糖易得，成本低。

酶法合成维生素C葡萄糖苷工艺。生物催化技术专一性高，可以获得高纯度的高端维生素C葡萄糖苷产品。

根据产品性质特点，采用简单的重结晶工艺确保产品的高质量。

具体实施方式：

蔗糖磷酸化酶的发酵制备工艺。以改良的LB培养基为发酵培养基，高密度发酵大肠杆菌基因工程菌，蔗糖磷酸化酶的表达量超过3g/L；

酶法合成维生素C葡萄糖苷工艺。采用10～100OD的大肠杆菌，底物浓度：蔗糖10～300g/L，维生素C 5～50g/L，反应温度25～37℃，pH值6.5～8.5，反应时间8～24小时，维生素C的转化率大于90％。

经离子交换层析除糖工艺进行提纯。经离子交换层析分离提纯后，在分离中采用201×8的阴离子交换树脂,其具体条件为：柱床高105mm，柱床直径45mm，样品浓度213mg/mL，洗脱流速0.5mL/(cm～2.min)。去除杂质率达70％以上，得纯化后的纯化液。

采用重结晶方法精制产品。产品纯度大于98％，符合化妆品使用要求。