吡咯烷酮类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及吡咯烷酮类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的用途。

背景技术

一点红药材系菊科植物(Compositae)一点红Emilia sonchifolia(Linnaeus)deCandolle的新鲜或干燥全草。本品长10～50cm。根细而弯曲，有须根。茎细圆柱形，表面暗绿色，下部被茸毛。叶多皱缩，展平后基生叶呈琴状分裂，长5～10cm，宽2.5～5cm，灰绿色或暗绿色，先端裂片大，近三角形，基部抱茎，边缘具疏钝齿；茎生叶渐狭。头状花序2～3个排成聚伞状，总苞圆柱形，苞片1层，呈条状披针形或近条状，长约1cm；管状花棕黄色，冠毛白色。瘦果狭矩圆形，长约3mm，有棱。

中国华南、华中和西南等地均有野生。一点红性平，味苦微辛，凉血解毒，其以食嫩梢嫩叶为主，可炒食、作汤或作火锅料，质地爽脆，类似茼蒿的品味，具有清热解毒、活血散淤等功效，还可以治泌尿系统感染、咽喉炎、毒疮等。

神经保护剂是一种保护易受损神经元，减轻或阻止疾病进展的神经调节剂。可减少神经元的死亡，常用的神经保护剂包括钙通道阻滞剂、自由基清除剂、谷氨酸拮抗剂、细胞膜稳定剂等。目前，神经保护剂是急性脑卒中的治疗手段之一。神经保护药物可以抑制细胞死亡和阻止缺血区组织再灌注损伤，借此可以延长脑卒中发作后的使用纤维蛋白溶解疗法的治疗时间。

发明内容

本发明公开了式I的化合物及其药学上可接受的盐；

所述的式I的化合物的制备方法包括以下步骤：

A、取一点红药材经体积分数80-95％的乙醇回流提取1-3次，合并提取液，浓缩干燥后得浸膏；

B、将浸膏与硅藻土以1:1-3的重量比例拌样后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯回流洗脱，取乙酸乙酯回流提取物，回收溶剂，得乙酸乙酯提取物；

C、将乙酸乙酯提取物用硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比20:1-0:1进行梯度洗脱，取其中11:1-9:1段的洗脱留分；

D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱，取其中以氯仿-甲醇29:1-20:1洗脱收集段的洗脱留分；

E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱，取其中以氯仿-甲醇40-21:60-79洗脱收集段的洗脱留分；

F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离，采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱，取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后，即得。

本发明还公开了式I的化合物在制备神经细胞保护药物中的用途。

本发明还公开了一种神经细胞保护药物组合物，含有式I的化合物和/或其药学上可接受的盐。

所述的药物组合物，还含有一点红、白花蛇舌草、鸡血藤、桃金娘根、白背叶根、地桃花、菥蓂中的一种或几种。

所述的药物组合物，还含有一点红、白花蛇舌草、鸡血藤、桃金娘根、白背叶根、地桃花、菥蓂中的一种或几种的提取物。

所述的药物组合物的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂、软膏剂、栓剂或喷雾剂。

本发明所述的式Ⅰ的化合物为一点红中新发现的化合物，经过本实验例2的细胞水平实验表明其对皮质酮损伤的PC12细胞具有明显的保护作用，体现出了较好的神经细胞保护作用，是一种新型的神经细胞保护药物。

附图说明

本发明附图如下：

图1是不同浓度的式Ⅰ的化合物对皮质酮损伤的PC12细胞存活力的影响结果图；

图2是本发明化合物的式Ⅰ。

具体实施方式

实施例1

所述化合物的制备方法包括以下步骤：

A、取一点红药材30kg，干燥、切碎，用6倍量体积分数为80％的乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，浓缩干燥得浸膏备用；将浸膏与硅藻土以1:1的重量比例拌样

B、将步骤A中浸膏与硅藻土混合物用石油醚进行回流洗脱，取石油醚回流洗脱后的残渣，用二氯甲烷进行回流洗脱，取二氯甲烷回流洗脱后的残渣，用乙酸乙酯进行回流洗脱，收集洗脱液，命名为ZF-3；

C、将洗脱液ZF-3用60-180目的柱层析硅胶进行色谱分离，洗脱溶剂为氯仿-甲醇，氯仿和甲醇体积比逐步变化，20:1to 0:1；其按顺序收集洗脱留分，其中以氯仿-甲醇(20:1、19:1、18:1)洗脱收集为Fr1；以氯仿-甲醇(17:1、16:1、15:1)洗脱收集为Fr2；以氯仿-甲醇(14:1、13:1、12:1)洗脱收集为Fr3；以氯仿-甲醇(11:1、10:1、9:1)洗脱收集为Fr4；以氯仿-甲醇(8:1、7:1、6:1)洗脱收集为Fr5；以氯仿-甲醇(5:1、4:1、3:1)洗脱收集为Fr6；以氯仿-甲醇(2:1、1:1、0:1)洗脱收集为Fr7；

D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱，其中以氯仿-甲醇(50:1-45:1)洗脱收集为Fr4.1；以氯仿-甲醇(44:1-40:1)洗脱收集为Fr4.2；以氯仿-甲醇(39:1-35:1)洗脱收集为Fr4.3；以氯仿-甲醇(34:1-30:1)洗脱收集为Fr4.4；以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集为Fr4.5；以氯仿-甲醇(19:1-10:1)洗脱收集为Fr4.6；以氯仿-甲醇(9:1-0:1)洗脱收集为Fr4.7。取其中以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5；

E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱，其中以氯仿-甲醇(100-81:0-19)洗脱收集为Fr4.5.1；以氯仿-甲醇(80-61:20-39)洗脱收集为Fr4.5.2；以氯仿-甲醇(60-41:40-59)洗脱收集为Fr4.5.3；以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集为Fr4.5.4；以氯仿-甲醇(20-100:80-0)洗脱收集为Fr4.5.5。取其中以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5.4；

F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离，采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱，取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后，即得式1的化合物。

将制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测，结果证明所得化合物为式1的化合物。

实施例2

所述化合物的制备方法包括以下步骤：

A、取一点红药材30kg，干燥、切碎，用9倍量体积分数为95％的乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，浓缩干燥得浸膏备用；将浸膏与硅藻土以1:3的重量比例拌样

B、将步骤A中浸膏与硅藻土混合物用石油醚进行回流洗脱，取石油醚回流洗脱后的残渣，用二氯甲烷进行回流洗脱，取二氯甲烷回流洗脱后的残渣，用乙酸乙酯进行回流洗脱，收集洗脱液，命名为ZF-3；

C、将洗脱液ZF-3用60-180目的柱层析硅胶进行色谱分离，洗脱溶剂为氯仿-甲醇，氯仿和甲醇体积比逐步变化，20:1to 0:1；其按顺序收集洗脱留分，其中以氯仿-甲醇(20:1、19:1、18:1)洗脱收集为Fr1；以氯仿-甲醇(17:1、16:1、15:1)洗脱收集为Fr2；以氯仿-甲醇(14:1、13:1、12:1)洗脱收集为Fr3；以氯仿-甲醇(11:1、10:1、9:1)洗脱收集为Fr4；以氯仿-甲醇(8:1、7:1、6:1)洗脱收集为Fr5；以氯仿-甲醇(5:1、4:1、3:1)洗脱收集为Fr6；以氯仿-甲醇(2:1、1:1、0:1)洗脱收集为Fr7；

D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱，其中以氯仿-甲醇(50:1-45:1)洗脱收集为Fr4.1；以氯仿-甲醇(44:1-40:1)洗脱收集为Fr4.2；以氯仿-甲醇(39:1-35:1)洗脱收集为Fr4.3；以氯仿-甲醇(34:1-30:1)洗脱收集为Fr4.4；以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集为Fr4.5；以氯仿-甲醇(19:1-10:1)洗脱收集为Fr4.6；以氯仿-甲醇(9:1-0:1)洗脱收集为Fr4.7。取其中以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5；

E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱，其中以氯仿-甲醇(100-81:0-19)洗脱收集为Fr4.5.1；以氯仿-甲醇(80-61:20-39)洗脱收集为Fr4.5.2；以氯仿-甲醇(60-41:40-59)洗脱收集为Fr4.5.3；以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集为Fr4.5.4；以氯仿-甲醇(20-100:80-0)洗脱收集为Fr4.5.5。取其中以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5.4；

F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离，采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱，取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后，即得式1的化合物。

将制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测，结果证明所得化合物为式1的化合物。

实施例3

所述化合物的制备方法包括以下步骤：

A、取一点红药材30kg，干燥、切碎，用7倍量体积分数为90％的乙醇回流提取2次，每次2小时，合并提取液，浓缩干燥得浸膏备用；将浸膏与硅藻土以1:2的重量比例拌样

B、将步骤A中浸膏与硅藻土混合物用石油醚进行回流洗脱，取石油醚回流洗脱后的残渣，用二氯甲烷进行回流洗脱，取二氯甲烷回流洗脱后的残渣，用乙酸乙酯进行回流洗脱，收集洗脱液，命名为ZF-3；

C、将洗脱液ZF-3用60-180目的柱层析硅胶进行色谱分离，洗脱溶剂为氯仿-甲醇，氯仿和甲醇体积比逐步变化，20:1to 0:1；其按顺序收集洗脱留分，其中以氯仿-甲醇(20:1、19:1、18:1)洗脱收集为Fr1；以氯仿-甲醇(17:1、16:1、15:1)洗脱收集为Fr2；以氯仿-甲醇(14:1、13:1、12:1)洗脱收集为Fr3；以氯仿-甲醇(11:1、10:1、9:1)洗脱收集为Fr4；以氯仿-甲醇(8:1、7:1、6:1)洗脱收集为Fr5；以氯仿-甲醇(5:1、4:1、3:1)洗脱收集为Fr6；以氯仿-甲醇(2:1、1:1、0:1)洗脱收集为Fr7；

D、将步骤C获得的洗脱留分经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比50:1-0:1进行梯度洗脱，其中以氯仿-甲醇(50:1-45:1)洗脱收集为Fr4.1；以氯仿-甲醇(44:1-40:1)洗脱收集为Fr4.2；以氯仿-甲醇(39:1-35:1)洗脱收集为Fr4.3；以氯仿-甲醇(34:1-30:1)洗脱收集为Fr4.4；以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集为Fr4.5；以氯仿-甲醇(19:1-10:1)洗脱收集为Fr4.6；以氯仿-甲醇(9:1-0:1)洗脱收集为Fr4.7。取其中以氯仿-甲醇(29:1-20:1)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5；

E、将步骤D获得的洗脱留分继续经硅胶柱色谱分离，采用氯仿-甲醇溶液体系以体积比100:0-0:100进行梯度洗脱，其中以氯仿-甲醇(100-81:0-19)洗脱收集为Fr4.5.1；以氯仿-甲醇(80-61:20-39)洗脱收集为Fr4.5.2；以氯仿-甲醇(60-41:40-59)洗脱收集为Fr4.5.3；以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集为Fr4.5.4；以氯仿-甲醇(20-100:80-0)洗脱收集为Fr4.5.5。取其中以氯仿-甲醇(40-21:60-79)洗脱收集段的洗脱留分Fr4.5.4；

F、将步骤E获得的洗脱留分经MCIgel柱色谱分离，采用甲醇-水溶液体系以体积比10:90-100:0进行梯度洗脱，取其中甲醇-水30:70段的洗脱留分回收溶剂后，即得式1的化合物。

将制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的检测，结果证明结果证明所得化合物为式1的化合物。

实验例1

结构鉴定：

式I化合物

白色粉末；UV(MeOH)λ

式I化合物的碳谱和氢谱

实验例3

通式I的生物碱类化合物神经保护作用的研究：

一点红生物碱对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

以式I化合物为研究对象，考察其对神经细胞的保护作用。PC12细胞株为大鼠肾上腺嗜铬细胞克隆化细胞株，分化的PC12细胞有典型的神经细胞特征，其胞膜上糖皮质激素受体表达丰富。用高浓度的皮质酮诱导PC12细胞损伤，已成为研究抑郁症的一种常用体外模型。本研究用高浓度的皮质酮与PC12细胞共同孵育，模拟抑郁症病人的大脑神经元损伤状态，以此观察一点红生物碱碱对神经细胞的保护作用。

1材料与试剂

1.1药物式I的化合物。

1.2试剂大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞(上海细胞库)；精致胎牛血清、马血清、青霉素钠、链霉素(Gibco公司)；皮质酮，DMEM，MTT，二甲基亚砜(Sigma公司)。

1.3仪器纯水仪(美国Millipore公司)；二氧化碳培养箱(NAPCO 6500TC法国)；连续波长酶标仪(美国BIO-TEK)。

2方法

2.1PC12细胞培养

PC12细胞液置于15mL的离心管中，1000rpm，离心5min，弃上清液，将细胞用含有10％胎牛血清、5％马血清的高糖DMEM培养基悬浮，分装于25mL的培养瓶中，置于37℃的二氧化碳培养箱中培养，每2-3d换液1次。

2.2供试品对皮质酮损伤的PC12细胞存活力的影响

PC12细胞培养基养至对数生长期，用含10％胎牛血清、5％马血清的DMEM培养基(含青霉素钠100U/ml、链霉素100μg/ml)重悬细胞，调细胞浓度为每毫升1×10

实验结果见图1，从图1中可见式I的化合物在5μg/mL)时显示出较强的保护作用(P<0.05),细胞存活率为87％.在更高的浓度时(20μg/mL)会导致细胞生存率下降。