用于治疗沙粒病毒感染的化合物

相关申请的交叉引用

本专利申请是2018年12月6日提交的美国临时专利申请序列号62/776,390的部分连续案并且要求其优先权权益，出于所有目的，所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。

关于联邦资助研究开发下完成的发明的权利声明

本发明是在由美国国立卫生研究院授予的R44 AI112097的政府支持下进行。美国政府享有本发明的一些权利。

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不适用

技术领域

本发明涉及杂环化合物在人、其他哺乳动物中、或在细胞培养物中抑制沙粒病毒感染的用途，治疗沙粒病毒感染诸如拉沙(Lassa)出血热、玻利维亚(Bolivian)出血热、阿根廷(Argentine)出血热、委内瑞拉(Venezuelan)出血热、巴西(Brazilian)出血热、查帕雷(Chapare)出血热和卢约(Lujo)出血热的方法，抑制沙粒病毒的复制的方法，减少沙粒病毒的量的方法，以及可以用于此类方法的组合物。

背景技术

沙粒病毒科(Arenaviridae)包括29种(并且在扩大中)负链包膜RNA病毒的多样性家族。基于血清学、遗传学和地理数据，将沙粒病毒分为两个组，即旧世界和新世界。旧世界病毒被发现主要遍及南非和西非，并且包括原型淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)，以及拉沙病毒(LASV)、卢约病毒(LUJV)、莫佩亚(Mopeia)病毒(MOPV)、伊派(Ippy)病毒和莫巴拉(Mobala)病毒(MOBV)。LASV和LUJV两者均可引起致命性出血热(HF)，而LCMV感染与无菌性脑膜炎相关。据估计，仅拉沙病毒(LASV)就在西非每年引起超过300,000例疾病病例，其中15％-20％的住院患者死亡，并且幸存者经常遭受后遗症，包括永久性双侧听力损伤。较大的新世界复合组主要位于南美洲，分为3个进化枝A、B和C，其中进化枝B是重要的，因为此组中的许多病毒都可以引起致命性HF。进化枝B HF病毒包括胡宁(Junin)病毒(JUNV)、马秋博(Machupo)病毒(MACV)、瓜纳里托(Guanarito)病毒(GTOV)、萨比埃(Sabia)病毒(SABV)和查帕雷病毒，以及非HF病毒，诸如塔卡里伯(Tacaribe)病毒(TCRV)和阿马帕里(Amapari)病毒(AMPV)。通过接触被感染的啮齿动物的排泄物或通过吸入被啮齿动物尿液或唾液污染的细小颗粒(气溶胶传播)而发生人类感染。也有证据表明人与人的传播主要在院内环境(例如医院)中。病毒的潜伏期是1-2周，之后是发烧、全身不适、虚弱、喉咙痛、头痛、咳嗽、腹泻和呕吐。这些一般症状使得难以区别地诊断沙粒病毒感染。症状恶化至包括胸腔积液、面部浮肿、神经系统并发症和从粘膜表面出血指示不良预后。当前的沙粒病毒治疗仅限于利巴韦林(ribavirin)的使用，利巴韦林仅在早期给予时部分有效并与明显的副作用相关。尽管已经开发了针对胡宁病毒的疫苗，但其使用主要限于阿根廷农场工人中的风险最高群体，并且没有针对任何其他沙粒病毒的批准疫苗。尽管非常需要预防性疫苗，但预防性疫苗可能并不总是针对迅速出现、抗原性不同的新病毒毒株的有效对抗措施，并且现有的疫苗开发和生产策略无法充分应对当前的或新出现的沙粒病毒的多样性家族。因此，新的广谱抗病毒药物可以提供一线疗法和/或预防法，其不仅用于沙粒病毒感染的流行地区，而且还作为针对潜在生物战制剂的预防措施。

沙粒病毒由包膜围绕的核衣壳(NP)组成，并且NP含有指导两个多肽的合成的两个双义RNA基因组区段L和S。L区段编码RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)和小的环指蛋白Z。S区段编码核蛋白和糖蛋白前体GPC，所述糖蛋白前体被宿主蛋白酶切割并经历翻译后修饰成为成熟复合物，所述成熟复合物由糖蛋白GP1(在细胞表面处结合宿主蛋白)、GP2(指导pH依赖性膜融合和细胞质中基因组物质的释放)和稳定信号肽(SSP1)构成。成熟的糖蛋白复合物(GP，或称为糖蛋白)在病毒包膜中形成，并且负责介导病毒进入。为了进入/内吞至细胞中，旧世界沙粒病毒与宿主d-营养不良聚糖结合，而新世界沙粒病毒与转铁蛋白受体1结合。与细胞表面受体结合后，病毒被内吞并引导至酸性晚期内体，由此GP2介导pH依赖性膜融合和基因组物质向细胞质中的释放，以进行病毒复制和转录。因此，靶向病毒GP复合物或宿主因子的病毒进入抑制剂(例如小分子)是治疗感染有沙粒病毒感染的患者的潜在治疗性/预防性方法。由于HF沙粒病毒物种被分类为BSL-4，因此需要替代性方法来鉴定病毒进入抑制剂。为了促进对沙粒病毒进入抑制剂的鉴定，可以在非致病性BSL-2包膜病毒中表达沙粒病毒GP复合物以产生单轮感染性假病毒，其病毒进入功能由异源目的糖蛋白决定。可以利用的一种病毒表达系统是水泡性口炎病毒(VSV)系统，由此VSV的包膜蛋白被来自另一种病毒(例如LASV)的包膜糖蛋白取代，以介导假型病毒体的进入。已经针对多种病毒(包括HIV、乙型肝炎和丙型肝炎、埃博拉病毒、拉沙病毒、汉塔病毒等)显示GP假型VSV病毒的细胞进入和感染特性[

向药物分子中引入氘(D)是一种有吸引力的策略，其可能有助于改善药物的代谢、药代动力学和毒性谱。氘是氢的稳定、无毒、无放射性同位素。由于更大的原子量，与氢相比，氘与碳形成更强的键，从而使碳-氘键更难断裂。在碳-氢键的断裂在细胞色素P450介导的药物代谢中是部分或完全限速步骤的情况下，用氘置换氢原子可以减慢代谢速率，导致改善的半衰期、更大的耐受性、改善的功效和给药方案、更低的副作用以及降低的毒性[Foster，A.B.Deuterium isotope effects in studies of drug metabolism.Trends inPharmacological Sciences(1984)5：524-527；Anderson，K.E.；Stamler，D.；Davis，M.D.等人Deutetrabenazine for treatment of involuntary movements in patients withtardive dyskinesia(AIM-TD)：a double-blind，randomised，placebo-controlled，phase3 trial.Lancet Psychiary(2017)4：595-604；Harbeson，S.；Morgan，A.；Liu，J.等人Altering metabolic profiles of drugs by precision deuteration 2：discovery ofa deuterated analog of ivacaftor with differentiated pharmacokinetics forclinical development.J.Pharmacol.Exp.Ther.(2017)362：359-367；

在本发明中，使用沙粒病毒GP假病毒筛选来鉴定所述的进入抑制剂，并且针对天然非HF病毒TCRV对所选化合物进行测试，以确认对复制性沙粒病毒的活性。然后针对天然LASV测试所选的优异化合物，以确认对天然高度致病性人类(HF)沙粒病毒的活性，并评估初始药物样特性。

发明内容

本发明涉及杂环化合物在人、其他哺乳动物中、或在细胞培养物中抑制沙粒病毒感染的用途，治疗沙粒病毒感染诸如拉沙出血热、玻利维亚出血热、阿根廷出血热、委内瑞拉出血热、巴西出血热、查帕雷出血热和卢约出血热的方法，抑制沙粒病毒的复制的方法，减少沙粒病毒的量的方法，以及可以用于此类方法的组合物。

在一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物

或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中

A独立地选自C和N；

G独立地选自CH、CD和N；

E独立地选自CH、CD和N；

J独立地选自

R

R

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R

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并且当E是N、CH或CD时，则A是C，G是CH或CD，并且J是

并且当A是N时，则J是

条件是排除以下化合物：

具体实施方式

在一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物

或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中

A独立地选自C和N；

G独立地选自CH、CD和N；

E独立地选自CH、CD和N；

J独立地选自

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并且当E是N、CH或CD时，则A是C，G是CH或CD，并且J是

并且当A是N时，则J是

条件是排除以下化合物：

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、J、R

E是CH或CD。

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中E、G、J、R

A是C。

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中E、G、J、R

A是N。

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用有效量的由结构式I表示的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，所述方法包括向人、其他哺乳动物、细胞培养物或生物样品施用药学有效量的药物组合物，所述药物组合物包含选自实施例A1至A3、B4至B9、C10至C26、D27至D29和E30所述的化合物的化合物，以及药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物。

在另一个实施方案中，所述方法包括施用药学有效量的药物组合物和另外的治疗有效量的治疗剂，所述药物组合物包含结构式I的所选化合物或如上所示的化合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，所述治疗剂选自：利巴韦林、聚合酶抑制剂、法匹拉韦(Favipiravir)、特力阿扎维林(Triazavirin)、小干扰RNA(siRNA)、疫苗、单克隆抗体、免疫调节剂和其他沙粒病毒抑制剂。

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物

或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中

A独立地选自C和N；

G独立地选自CH、CD和N；

E独立地选自CH、CD和N；

J独立地选自

R

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并且当E是N、CH或CD时，则A是C，G是CH或CD，并且J是

并且当A是N时，则J是

条件是排除以下化合物：

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、J、R

E是CH或CD。

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中E、G、J、R

A是C。

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中E、G、J、R

A是N。

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，本发明涉及具有结构式I的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物，其中A、G、E、R

J是

在另一个实施方案中，本发明涉及选自实施例A1至A3、B4至B9、C10至C26、D27至D29和E30所述的化合物的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物。

在另一个实施方案中，本发明涉及选自以下的化合物或药学上可接受的盐，以及其药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物：

定义

如本文所用，术语“包含”和“包括”以其开放的、非限制性的意义使用。

术语“卤素”和/或“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

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如本文所用，术语“(C

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如本文所用，术语“螺环”具有其常规含义，即，任何含有两个或更多个环的化合物，其中两个环具有一个共同的碳环。如本文所定义，螺环化合物的环独立地具有3至20个环原子。优选地，它们具有3至10个环原子。螺环化合物的非限制性实例包括螺[3.3]庚烷、螺[3.4]辛烷和螺[4.5]癸烷。

术语“(C

“醛”基团是指羰基-C(O)R，其中R是氢。

如本文所定义，“烷氧基”是指-O-烷基和-O-环烷基。

“烷氧基羰基”是指-C(O)OR。

“烷基氨基烷基”是指-烷基-NR-烷基。

“烷基磺酰基”是指-SO

“氨基”是指-NH

“氨基烷基”是指-烷基-NRR′基团。

“氨基羰基”是指-C(O)NRR′。

“芳基烷基”是指-烷基芳基，其中烷基和芳基是本文定义的。

如本文所定义，“芳氧基”是指-O-芳基和-O-杂芳基。

“芳氧基羰基”是指-C(O)O芳基。

“芳基磺酰基”是指-SO

“C-酰胺基”是指-C(O)NRR′基团。

“羰基”是指-C(O)R。

“C-羧基”是指-C(O)OR基团。

“羧酸”基团是指C-羧基，其中R是氢。

“氰基”是指-CN基团。

“二烷基氨基烷基”是指-(烷基)N(烷基)

“卤基”或“卤素”基团是指氟、氯、溴或碘。

“卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的烷基。

“杂芳基氧基”是指具有如本文定义的杂芳基的杂芳基-O基团。

“羟基”是指-OH基团。

“N-酰胺基”是指-R′C(O)NR基团。

“N-氨基甲酰基”是指-ROC(O)NR-基团。

“硝基”是指-NO

“N-磺酰胺基”是指-NR-S(O)

“N-硫代氨基甲酰基”是指ROC(S)NR′基团。

“O-氨基甲酰基”是指-OC(O)NRR′基团。

“O-羧基”是指RC(O)O基团。

“O-硫代氨基甲酰基”是指-OC(S)NRR′基团。

“氧代”基团是指羰基部分，使得被氧代取代的烷基是指酮基。

“全氟烷基”是指其中所有氢原子已被氟原子置换的烷基。

“膦酰基”是指-P(O)(OR)

“甲硅烷基”是指-SiR

“S-磺酰胺基”是指-S(O)

“亚磺酰基”是指-S(O)R基团。

“磺酰基”是指-S(O)

“硫代羰基”是指-C(＝S)-R基团。

“三卤甲烷羰基”是指Z

“三卤甲烷磺酰胺基”是指Z

“三卤甲烷磺酰基”是指Z

“三卤甲基”是指-CZ

“C-羧基”是指-C(O)OR基团。

术语“取代的”意指指定基团或部分携带一个或多个取代基。

术语“未取代的”意指指定基团不携带取代基。术语“任选取代的”意指指定基团是未取代的或被一个或多个取代基取代。应当理解，在本发明的化合物中，当一个基团被说成“未取代的”或被比填满所述化合物中所有原子的原子价少的基团“取代”时，这个基团上的其余原子价被氢填满。例如，如果C

使用术语“溶剂化物”来描述本发明的化合物与溶剂分子之间的分子复合物。溶剂化物的实例包括但不限于与水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲亚砜(DMSO)、乙酸乙酯、乙酸、乙醇胺或其混合物组合的本发明化合物。当所述溶剂是水时，可以使用术语“水合物”。尤其设想到，在本发明中，一个溶剂分子可以与一分子本发明化合物缔合，诸如水合物。此外，尤其设想到，在本发明中，多于一个的溶剂分子可以与一分子本发明化合物缔合，诸如二水合物。另外，尤其设想到，在本发明中，少于一个的溶剂分子可以与一分子本发明化合物缔合，诸如半水合物。此外，本发明的溶剂化物被设想为是本发明化合物的保留所述化合物的非水合形式的生物学有效性的溶剂化物。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”意指本发明化合物的保留指定衍生物的游离酸和碱的生物学有效性并且在生物学或其他方面合乎需要的盐。

如本文所用，术语“药学可接受的配制品”意指本发明化合物或其盐或溶剂化物和与本发明化合物相容并对其受者无害的载体、稀释剂和/或赋形剂的组合。药物配制品可以通过本领域普通技术人员已知的程序制备。例如，可以将本发明化合物与常用赋形剂、稀释剂或载体一起配制并成型为片剂、胶囊等。适用于此类配制品的赋形剂、稀释剂和载体的实例包括下列：填充剂和增量剂，诸如淀粉、糖、甘露醇和硅酸衍生物；粘合剂，诸如羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；保湿剂，诸如甘油；崩解剂，诸如聚维酮、羟基乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；延迟溶解剂，诸如石蜡；再吸收促进剂，诸如季铵化合物；表面活性剂，诸如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯；吸附载体，诸如高岭土和膨润土；和润滑剂，诸如滑石、硬脂酸钙和硬脂酸镁和固体聚乙二醇。最终药物形式可以是丸剂、片剂、粉剂、锭剂、袋剂、扁囊剂、糖衣丸或无菌包装粉剂等，这取决于所用赋形剂的类型。另外，尤其设想到，本发明的药物可接受的配制品可以含有多于一种的活性成分。例如，此类配制品可以含有多于一种的根据本发明的化合物。可替代地，此类配制品可以含有一种或多种本发明化合物和抑制沙粒病毒的一种或多种附加药剂。

如本文所用，术语“沙粒病毒GP抑制量”是指在体内，诸如在哺乳动物、鸟体内，或在体外抑制细胞进入所需的本发明化合物或其盐或溶剂化物的量。可以使用本文所述的方法和本领域普通技术人员已知的方法，不需要过多试验就能确定导致这种抑制作用所需的此类化合物的量。

如本文所用，术语“治疗有效量”意指本发明化合物或其盐的在向需要这种治疗的哺乳动物施用时足以实现如本文所定义的治疗的量。因此，本发明化合物或其盐的治疗有效量是这样的量，所述量足以调节或抑制沙粒病毒GP蛋白的活性，使得降低或减轻由沙粒病毒GP蛋白的活性介导的沙粒病毒的细胞进入或复制。

在哺乳动物、特别是人体内，关于沙粒病毒感染的术语“治疗(trea/treating/treatment)”包括：(i)预防疾病或病症在可能易患所述病症的受试者体内出现，使得治疗构成病理病症的预防性治疗；(ii)调节或抑制疾病或病症，即阻止其发展；(iii)减轻疾病或病症，即引起疾病或病症的消退；或(iv)减轻和/或缓解疾病或病症或由疾病或病症产生的症状。

除非另外指明，否则本文中对本发明化合物的所有提及均包括对其盐、溶剂化物和复合物(包括其多晶型物、立体异构体、互变异构体及其同位素标记形式)的提及。例如，本发明化合物可以是药学上可接受的盐和/或药学上可接受的溶剂化物。

术语“立体异构体”是指具有相同化学组成，但关于其原子或基团在空间中的排列不同的化合物。特别地，术语“对映异构体”是指化合物的彼此为不可重叠镜像的两种立体异构体。纯对映异构体可以被最多至约10％的相反对映异构体污染。

如本文所用，术语“外消旋”或“外消旋混合物”是指特定化合物的对映异构体的1∶1混合物。另一方面，术语“非对映异构体”是指包括两个或更多个不对称中心并且不是彼此的镜像的一对立体异构体之间的关系。根据本领域中所用的惯例，符号在本文的结构式中用于绘示键，其是一个部分或取代基与核心或骨架结构的连接点。根据另一惯例，在本文的一些结构式中，没有明确绘示碳原子和它们的键合氢原子，例如

本发明的化合物可以具有不对称碳原子。本发明化合物的碳碳键在本文中可以使用实线(__)、实楔形线

除非另外定义，否则取代基“R”可以存在于环系的任何原子上，假定置换来自一个环原子的所绘示、隐含或明确定义的氢，只要形成稳定结构即可。

用于制备/分离单独对映异构体的常规技术包括从合适的光学纯前体手性合成或使用例如手性高压液相色谱法(HPLC)拆分外消旋物。可替代地，可以使外消旋物(或外消旋前体)与合适的光学活性化合物(例如醇)反应，或者，在其中化合物含有酸性或碱性部分的情况中，与酸或碱(诸如酒石酸或1-苯乙胺)反应。所得的非对映异构体混合物可以通过色谱法和/或分级结晶分离，并且非对映异构体中的一者或两者可以通过本领域技术人员熟知的手段转化成对应的纯对映异构体。本发明的手性化合物(及其手性前体)可以使用在不对称树脂上的色谱法(通常为HPLC)以对映体异构体富集的形式获得，其中流动相由烃(通常为庚烷或己烷)组成，含有0％至50％异丙醇(通常为2％至20％)和0％至5％的烷基胺(通常为0.1％二乙胺)。洗脱物的浓缩得到富集混合物。非对映异构体集合体可以通过本领域技术人员已知的常规技术分离。参见例如E L Eliel的“Stereochemistry of OrganicCompounds”(Wiley，New York，1994)，将其公开内容通过引用整体并入本文。

当本发明的化合物含有烯基或亚烯基时，几何顺/反(或Z/E)异构体是可能的。在化合物含有例如酮基或肟基或芳族部分的情况下，可能发生互变异构现象(“互变现象”)。互变现象的实例包括酮和烯醇互变异构体。单一化合物可以表现出多于一种类型的异构现象。在本发明的范围内包括本发明化合物的所有立体异构体、几何异构体和互变异构形式，包括表现出多于一种类型的异构现象的化合物及其一种或多种的混合物。顺式/反式异构体可以通过本领域技术人员熟知的常规技术(例如色谱法和分级结晶)分离。

本发明化合物可以作为前药施用。因此，具有式I的化合物的某些衍生物(其本身可以几乎没有或无药理学活性)当被施用至哺乳动物时可以例如通过水解裂解被转化成具有所需活性的具有式(I)的化合物。此类衍生物是被称为“前药”。前药可以例如通过以本领域技术人员已知的某些部分置换存在于具有式I的化合物中的适当官能团产生。参见例如“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T Higuchi和W Stella)和“Bioreversible Carriers in Drug Design”，Pergamon Press，1987(E BRoche编辑，American Pharmaceutical Association)。此类前药的一些实例包括：替代羧酸官能团的酯部分；替代醇官能团的醚部分或酰胺部分；以及替代伯或仲氨基官能团的酰胺部分。置换基团的另外实例是本领域技术人员已知的。参见例如H Bundgaard的“Designof Prodrugs”(Elsevier，1985)，将其公开内容通过引用整体并入本文。还可能的是，具有式I的某些化合物本身可以充当具有式I的其他化合物的前药。

可以根据本领域技术人员已知的方法来制备本发明的盐。盐的实例包括但不限于乙酸盐、丙烯酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐(诸如氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐和甲氧基苯甲酸盐)、碳酸氢盐、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、丁炔-1，4二酸盐、依地酸钙盐、樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、己酸盐、辛酸盐、克拉维酸盐、柠檬酸盐、癸酸盐、二氢氯化物、磷酸二氢盐、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、依托盐(estolate)、乙磺酸盐、乙基琥珀酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酸盐、乙醇酰基对氨基苯胂酸盐、庚酸盐、己炔-1，6-二酸盐、己基间苯二酚盐(hexylresorcinate)、海巴明盐(hydrabamine)、氢溴酸盐、盐酸盐、γ-羟基丁酸盐、碘化物、异丁酸盐、异硫代硫酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、磷酸一氢盐、粘酸盐、萘磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(恩波酸盐)、棕榈酸盐、泛酸盐、苯乙酸盐、苯丁酸盐、苯丙酸盐、邻苯二甲酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、聚半乳糖醛酸盐、丙磺酸盐、丙酸盐、丙炔酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、辛二酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、磺酸盐、亚硫酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、8-氯茶碱盐、甲苯磺酸盐、三乙碘化合物(triethiodode)和戊酸盐。

在性质上为碱性的本发明化合物能够与各种无机酸和有机酸形成多种不同的盐。尽管此类盐必须对于施用至动物而言是药学可接受的，在实践中通常需要首先从反应混合物中将本发明化合物作为药学不可接受的盐分离，然后通过用碱性试剂处理来将后者简单地转化回游离碱化合物，并且随后将后一游离碱转化成药学可接受的酸加成盐。本发明碱化合物的酸加成盐可以通过以下方式来制备：在水性溶剂介质或在合适的有机溶剂(诸如甲醇或乙醇)中用基本等效量的所选矿物酸或有机酸处理碱化合物。在溶剂蒸发后，获得所需固体盐。所需酸式盐也可以通过向溶液中添加适当的矿物酸或有机酸来从游离碱在有机溶剂中的溶液中沉淀出来。

在性质上为酸性的那些本发明化合物能够与各种药学可接受阳离子形成碱性盐。此类盐的实例包括碱金属或碱土金属盐，并且特别是钠盐和钾盐。这些盐都通过常规技术来制备。用作制备本发明的药学可接受碱性盐的试剂的化学碱是与本发明的酸性化合物形成无毒碱性盐的那些化合物。此刻无毒碱性盐包括衍生自诸如钠、钾、钙和镁等的药学可接受阳离子的那些化合物。这些盐可以通过以下方式来制备：用含有所需药学可接受阳离子的水性溶液处理相应酸性化合物，然后优选在减压下将所得溶液蒸发至干。可替代地，它们也可以通过以下方式来制备：将酸性化合物的低级醇式溶液与所需碱金属醇盐混合在一起，然后以与前文相同的方式将所得溶液蒸发至干。在任一情况下，优选使用化学计量数量的试剂以确保反应完全和所需最终产物的最大收率。

如果本发明化合物是碱，可以通过本领域可用的任何适当方法来制备所需盐，例如，用无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)或用有机酸诸如乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羟基乙酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)(诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸)、α-羟基酸(诸如柠檬酸或酒石酸)、氨基酸(诸如天门冬氨酸或谷氨酸)、芳族酸(诸如苯甲酸或肉桂酸)、磺酸(诸如对甲苯磺酸或乙磺酸)等处理游离碱。

如果本发明化合物是酸，可以通过任何合适的方法来制备所需盐，例如，用无机碱或有机碱，诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)；碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等处理游离酸。合适的盐的说明性实例包括衍生自氨基酸(诸如甘氨酸和精氨酸)、氨、伯胺、仲胺和叔胺、和环胺(诸如哌啶、吗啉和哌嗪)的有机盐；以及衍生自钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂的无机盐。

在为固体的药剂的情况下，本领域技术人员应理解，本发明化合物、药剂和盐可以以不同晶体或多晶形物形式存在，所有这些都旨在处于本发明和指定化式的范围内。

本发明还包括同位素标记的本发明化合物，其中一个或多个原子被具有相同原子序数，但原子质量或质量数不同于自然界中常见的原子量或质量数的原子置换。适合包括在本发明化合物中的同位素的实例包括氢的同位素，诸如

某些同位素标记的本发明化合物，例如掺入放射性同位素的那些可用于药物和/或底物组织分布研究。放射性同位素氚

术语“氘代”是指用对应数量的氘原子置换一个或多个氢原子。除非另外说明，否则当本发明化合物中的特定位置被明确指定为“D”、“氘”、被“氘代”或“具有氘”(元素氘在化学结构和式中用字母“D”表示，并且在化学名称中用小写字母“d”表示)时，应理解所述位置的氘处于比天然氘丰度(其为0.015％)高至少3000倍的丰度下(即术语“D”、“d”或“氘”指示至少45％的氘掺入)。

如本文所用，术语“同位素富集因子”意指指定同位素的同位素丰度与天然丰度之间的比率。

在一些实施方案中，本发明化合物具有的针对在指定为化合物上的氘潜在位点的位点处存在的每个氘原子的同位素富集因子为至少3500(52.5％氘掺入)、至少4000(60％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入)、至少6466.7(97％氘掺入)、至少6600(99％氘掺入)、或至少6633.3(99.5％氘掺入)。

本发明化合物可以配制成如下所述的呈本领域技术人员认为合适的任何药物形式的药物组合物。本发明的药物组合物包含治疗有效量的至少一种本发明化合物以及惰性的药学上可接受的载体或稀释剂。

为了治疗或预防由沙粒病毒感染或表达沙粒病毒糖蛋白的病毒部分或全部介导的疾病或病症，将本发明的药物组合物以合适的配制品施用，所述配制品通过将治疗有效量(即，有效实现治疗功效的沙粒病毒GP调节、调控或抑制量)的至少一种本发明化合物(作为活性成分)与一种或多种药学上合适的载体组合来制备，所述一种或多种药学上合适的载体可以例如选自促进将活性化合物加工成最终的药物制剂的稀释剂、赋形剂和助剂。

所采用的药物载体可以是固体或液体。示例性固体载体是乳糖、蔗糖、滑石、凝胶、琼脂、果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。示例性液体载体是糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，本发明组合物可以包括本领域已知的时间延迟或定时释放材料，诸如单独或与蜡、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯等一起使用的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。可以添加另外的添加剂或赋形剂以实现所需配制品特性。例如，可以添加生物利用度增强剂，诸如Labrasol、Gelucire等；或配制剂，诸如CMC(羧甲基纤维素)、PG(丙二醇)或PEG(聚乙二醇)。例如，当制备胶囊配制品时，可以添加

如果使用固体载体，可以将制剂压片，以粉末或小丸形式置于硬明胶胶囊中，或制成糖锭剂或锭剂。固体载体的量可以变化，但通常将是约25mg至约1g。如果使用液体载体，制剂可以呈糖浆、乳液、软明胶胶囊、在安瓿或小瓶中的无菌注射溶液或悬浮液、或非水性液体悬浮液的形式。如果使用半固体载体，制剂可以呈硬和软明胶胶囊配制品的形式。本发明组合物可以以适合于施用方式(例如肠胃外或口服施用)的单位剂型制备。

为了获得稳定的水溶性剂型，可以将本发明化合物的盐溶解在有机或无机酸的水性溶液中，诸如琥珀酸或柠檬酸的0.3M溶液中。如果不可获得可溶性盐形式，可以将药剂溶解在合适的共溶剂或共溶剂组合中。合适的共溶剂的实例包括浓度在总体积的0％至60％范围内的醇、丙二醇、聚乙二醇300、聚山梨醇酯80、甘油等。组合物也可以呈活性成分的盐形式在适当的水性媒介物(诸如水或等渗盐水或葡萄糖溶液)中的溶液的形式。

适当的配制品取决于所选的施用途径。对于注射，本发明化合物的药剂可以配制成水性溶液，优选配制在生理上相容的缓冲液诸如汉克溶液、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中。

对于经粘膜施用，在配制品中使用适合于待渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域已知的。

对于口服施用，可以通过将活性化合物与本领域已知的药学上可接受的载体组合来配制化合物。此类载体使得本发明化合物能够被配制成用于由有待治疗的受试者口服摄取的片剂、丸剂、糖衣片、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等。用于口服使用的药物制剂可以通过以下方式获得：使用与活性成分(药剂)混合的固体赋形剂，任选地研磨所得混合物，并且(如果需要的话)在添加适合的助剂之后，加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣片核心。合适的赋形剂包括：填充剂，诸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；和纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、树胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠；或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以添加崩解剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐(诸如海藻酸钠)。糖衣片核心提供有合适的包衣。为此，可以使用浓缩糖溶液，所述糖溶液可以任选地含有阿拉伯树胶、聚乙烯吡咯烷酮、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及适合的有机溶剂或溶剂混合物。可以向片剂或糖衣片包衣中添加染料或颜料以用于鉴定或表征活性剂的不同组合。

可以口服使用的药物制剂包括由明胶制成的插接式胶囊(push-fit capsule)以及由明胶和增塑剂(诸如甘油或山梨糖醇)制成的软密封型胶囊。插接式胶囊可以含有与填充剂(诸如乳糖)、粘合剂(诸如淀粉类)、和/或润滑剂(诸如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，可以将活性剂溶解或悬浮在适合的液体，诸如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇中。此外，可以添加稳定剂。用于口服施用的所有配制品应处于适于这种施用的剂量。对于经颊施用，组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

对于鼻内或通过吸入施用，根据本发明使用的化合物可以在使用合适推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适气体)的情况下，从加压包装或雾化器以气溶胶喷雾剂呈现形式便利地递送。在加压气溶胶的情况下，可以通过提供阀门以便递送计量的量来确定剂量单位。

用于在吸入器或吹入器等中使用的明胶的胶囊和药筒可以配制成含有化合物与合适粉末基质(诸如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

化合物可以被配制用于通过注射(例如通过快速浓注或连续输注)进行肠胃外施用。注射用配制品可以以单位剂型呈现，例如在添加有防腐剂的安瓿中或多剂量容器中。这些组合物可以采用诸如于油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以含有诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的配制剂。

用于肠胃外施用的药物配制品包括呈水溶性形式的活性化合物的水性溶液。另外，活性剂的悬浮液可以制备为适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(诸如芝麻油)或合成脂肪酸酯(油酸乙酯或甘油三酸酯)或脂质体。水性注射悬浮液可以含有增加悬浮液粘度的物质，诸如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。任选地，悬浮液也可以含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解性以允许制备高度浓缩溶液的剂。

可替代地，活性成分可以呈粉末形式，用于在使用之前用合适的媒介物(例如，无菌的无热原水)构成。

除上文所述的配制品之外，本发明化合物还可以被配制为储库制剂。此类长效配制品可以通过植入(例如皮下或肌内)或通过肌内注射施用。因此，例如，化合物可以与适合的聚合材料或疏水性材料(例如，作为在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂一起配制，或被配制为略微可溶的衍生物(例如，被配制为略微可溶的盐)。用于疏水性化合物的药物载体是包含苯甲醇、非极性表面活性剂、水混溶性有机聚合物和水相的共溶剂体系。共溶剂体系可以是VPD共溶剂体系。VPD是3％w/v苄醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨醇酯80和65％w/v聚乙二醇300的溶液，在无水乙醇中定容。VPD共溶剂体系(VPD：5W)含有用在水溶液中的5％右旋糖1∶1稀释的VPD。此共溶剂体系良好地溶解疏水性化合物，并且在全身性施用时本身产生较低的毒性。共溶剂体系的比例可以适当地变化而不破坏其溶解度和毒性特征。此外，共溶剂组分的身份可以变化：例如，可以使用其他低毒性非极性表面活性剂代替聚山梨醇酯80；聚乙二醇的分级尺寸可以变化；其他生物相容性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮可以置换聚乙二醇；其他糖或多糖可以取代右旋糖。

可替代地，可以采用用于疏水性药物化合物的其他递送系统。脂质体和乳液是用于疏水性药物的递送媒介物或载体的已知实例。也可以采用某些有机溶剂，诸如二甲亚砜，但通常由于DMSO的毒性性质而以更大的毒性为代价。另外，可以使用持续释放系统，诸如含有治疗剂的固体疏水聚合物的半渗透基质来递送化合物。各种持续释放材料已经确立并且是本领域技术人员已知的。根据其化学性质，持续释放胶囊可以根据其化学性质在数周内释放活性成分直至超过100天。根据治疗剂的化学性质和生物学稳定性，可以采用其他蛋白质稳定化策略。

药物组合物还可以包含适合的固体或凝胶相载体或赋形剂。这些载体和赋形剂可以提供难溶药物的生物利用度的显著改善。此类载体或赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物(诸如聚乙二醇)。此外，可以使用添加剂或赋形剂诸如

此外，可以将药物组合物掺入皮肤贴剂中以便将药物直接递送到皮肤上。

应当理解，本发明药剂的实际剂量将根据所用特定药剂、配制的特定组合物、施用方式和要治疗的特定位点、宿主和疾病而变化。考虑到给定化合物的实验数据，本领域技术人员可以使用常规的剂量测定试验为指定的条件集合确定最佳剂量。对于口服施用，通常采用的示例性每日剂量将是约0.001至约1000mg/kg体重，以适当间隔重复治疗周期。

此外，本发明的药学上可接受的配制品可以含有以下量的本发明化合物或其盐或溶剂化物：约10mg至约2000mg、或约10mg至约1500mg、或约10mg至约1000mg、或约10mg至约750mg、或约10mg至约500mg、或约25mg至约500mg、或约50至约500mg、或约100mg至约500mg。

另外，本发明的药学上可接受的配制品可以含有以下量的本发明化合物或其盐或溶剂化物：约0.5w/w％至约95w/w％、或约1w/w％至约95w/w％、或约1w/w％至约75w/w％、或约5w/w％至约75w/w％、或约10w/w％至约75w/w％、或约10w/w％至约50w/w％。

可以将本发明化合物或其盐或溶剂化物单独地或与作为药学上可接受的配制品的一部分的选自利巴韦林、聚合酶抑制剂、法匹拉韦、特力阿扎维林、小的干扰性RNA(siRNA)、疫苗、单克隆抗体、免疫调节剂和其他沙粒病毒抑制剂的一种或多种化合物组合施用至罹患由沙粒病毒或表达沙粒病毒糖蛋白的任何病毒介导的病症或疾病的哺乳动物(诸如人)，一天一次、一天两次、一天三次、一天四次或甚至更频繁地。

可以将本发明化合物或其盐或溶剂化物与选自由以下组成的组的用于治疗沙粒病毒的至少一种其他药剂(单独地或作为含有其他沙粒病毒抑制剂的药学上可接受的配制品的一部分)组合施用至罹患由沙粒病毒介导的病症或疾病的哺乳动物(诸如人)，一天一次、一天两次、一天三次、一天四次或甚至更频繁地：利巴韦林(病毒RNA依赖性RNA聚合酶抑制剂)(如由Ng KK，Arnold JJ和Cameron CE，Structure-Function Relationships AmongRNA-Dependent RNA Polymerases，Curr Top Microbiol Immunol，2008；320：137-156所示，将所述文献通过引用整体并入本文)、法匹拉韦(病毒RNA依赖性RNA聚合酶的广谱抑制剂)、特力阿扎维林(病毒RNA依赖性RNA聚合酶的广谱抑制剂)、小的干扰性RNA(siRNA)和微RNA(如由Carthew RW和Sontheimer EJ，Origins and Mechanisms of miRNAs andsiRNAs，Nature，2009；136：642-655所示，将所述文献通过引用整体并入本文)、疫苗(如由Nablel GJ，Designing Tomorrow’s Vaccines，NEJM，2013；368：551-560所示，将所述文献通过引用整体并入本文)和免疫调节剂(如由Patil US，Jaydeokar AV和Bandawane DD，Immunomodulators：A Pharmacological Review，Internatl J Pharmacy andPharmaceutical Sci，2012；4：30-36所示，将所述文献通过引用整体并入本文)。

本领域普通技术人员将理解，对于本发明化合物而言，每天给予至需要这种治疗的哺乳动物的特定药物配制品、剂量和剂量数全部都是在本领域普通技术人员的知识范围内的选择，并且无需过多实验即可确定。

本发明化合物可用于在体外和体内调节或抑制沙粒病毒糖蛋白(GP)。

因此，这些化合物可用于预防和/或治疗与沙粒病毒感染相关的疾病状态或治疗表达沙粒病毒糖蛋白的病毒。

本发明还涉及用于在包括人在内的哺乳动物中治疗沙粒病毒感染的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用有效治疗与沙粒病毒感染相关的疾病状态或表达沙粒病毒糖蛋白的病毒的量的具有如上定义的式I的化合物或其盐或溶剂化物。

在以下制备和实例中，“Ac”意指乙酰基，“Me”意指甲基，“Et”意指乙基，“Ph”意指苯基，“Py”意指吡啶，“BOC”、“Boc”或“boc”意指N-叔丁氧羰基，“Ns“意指2-硝基苯磺酰基，“DCM”(CH

本发明的化合物可以使用下文所述的反应途径和合成方案，采用本领域可得的技术，使用易获得的原材料制备。在下列实施例中详细描述了本发明的某些实施方案的制备，但本领域普通技术人员将认识到，可以容易地调节所述制备以制备本发明的其他实施方案。例如，可以通过对本领域技术人员显而易见的修改，例如通过适当地保护干扰基，通过变成本领域中已知的其他合适试剂，或通过对反应条件作出常规修改来进行根据本发明的未例举化合物的合成。可替代地，将认识到本文提及的或本领域已知的其他反应具有用于制备本发明的其他化合物的适用性。

方案1示出了可用于合成具有结构式I(其中G是CH，J是N，E是CH并且A是C)的化合物的方法。可以在溶剂(诸如THF或DMF)中，在碱(诸如NaH或Cs

方案1

方案2绘示了合成氘代苯胺2-4的方法，所述氘代苯胺2-4可用于制备氘代中间体1-2，以如上文方案1中所述合成氘代的本发明化合物。在溶剂(诸如N，N-二甲基甲酰胺)中，在碱(诸如K

方案2

方案3绘示了合成氘代苯胺3-4的方法，所述氘代苯胺3-4可用于制备氘代中间体1-2，以如上文方案1中所述合成氘代的本发明化合物。在溶剂(诸如戊烷)中，在碱(诸如NaHMDS)存在下，用二芳基碘鎓盐3-2对醇3-1的芳基化可提供化合物3-3[Lindstedt，E.；Stridfeldt，E.；Olofsson，B.Mild synthesis of sterically congested alkyl arylethers.Org.Lett.(2016)18：4234-4237]。出于所有目的，以上文件都通过引用整体并入本文。在溶剂(诸如甲醇)中，在催化剂(诸如碳载钯)存在下，使用还原剂(诸如氢气)还原硝基可以提供苯胺3-4。

方案3

方案4绘示了可用于合成具有结构式I(其中A是N，E是CH并且J是C)的化合物的方法。可以在溶剂(诸如二甲氧基乙烷)中，在碱(诸如K

方案4

方案5绘示了可用于合成具有结构式I(其中G是CH，A是C，J是N，并且E是N)的化合物的方法。可以在溶剂(诸如THF或DMF)中，在碱(诸如NaH或K

方案5

反应方案6-8说明了合成硼烷试剂6-4、7-4和8-4的方法，所述硼烷试剂6-4、7-4和8-4可用于如以上方案1、4和5中所述制备氘代中间体和本发明的最终化合物，以引入R

方案6绘示了可用于合成氘代硼酸或硼酸酯6-4的方法。在溶剂(诸如N，N-2甲基甲酰胺)中，在碱(诸如K

方案6

方案7绘示了可用于合成氘代硼酸或硼酸酯7-4的方法。在溶剂(诸如甲苯)中，在碱(诸如NaHCO

方案7

方案8绘示了可用于合成氘代硼酸或硼酸酯8-4的方法。使化合物8-1(X＝Br或I)与有机锂试剂(诸如正丁基锂)进行金属-卤素交换，之后在溶剂(诸如四氢呋喃)中用化合物8-2处理可以提供化合物8-3。可以使用本领域技术人员熟知的标准硼基化反应条件将化合物8-3转化为硼酸或硼酸酯8-4。例如，在溶剂(诸如二噁烷)中，在碱(诸如乙酸钾)存在下，使用催化剂(诸如[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯化物)将化合物8-3与二硼基试剂(诸如双(频哪醇合)二硼)偶联可以提供硼酸酯8-4。

方案8

5-溴-N

向1-溴-5-氟-2-甲基-4-硝基苯(200mg，0.85mmol)在异丙醇(2mL)的溶液中添加4-异丙氧基苯胺(129mg，0.85mmol)。在微波辐射下，将所得混合物在120℃下搅拌30min。在冷却至室温后，将反应物减压浓缩，并将残余物溶解于乙醇(0.6mL)、二噁烷(0.6mL)和水(0.3mL)中。向溶液中添加铁(476mg，8.5mmol)和NH

5-溴-N1-(4-(叔丁氧基)苯基)-4-甲基苯-1，2-二胺

以与对于5-溴-N

6-溴-5-甲基-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，3-苯并二唑

向5-溴-N

6-溴-1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑

以与对于6-溴-5-甲基-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，3-苯并二唑所述相同的方式从5-溴-N1-(4-(叔丁氧基)苯基)-4-甲基苯-1，2-二胺制备标题化合物。

实施例A1：2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇

向6-溴-1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑(1g，2.79mmo1)在1，4-二噁烷(15mL)的溶液中添加(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)硼酸(0.502g，2.79mmol)、[1，1’-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯化物(230mg，0.279mmol)、碳酸钾(1.15g，8.4mmol)和水(5mL)。将所得反应混合物用氮气脱气10min，然后加热至100℃过夜。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水洗涤。将有机相经Na

以与上文对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式，使用上文所述的适当的芳基卤化物和适当的可商购获得的硼酸制备实施例A2至A3。

6-溴咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲腈

向2-氨基-5-溴异烟碱甲腈(150mg，0.76mmol)在i-PrOH(2mL)的溶液中添加0.6mL(1.5eq)的2-氯-1，1-二甲氧基乙烷。将溶液盖紧并在微波反应器中加热至160℃，持续30分钟。将混合物冷却并真空蒸发，将残余物溶解于乙酸乙酯中，用饱和NaHCO

6-溴-3-碘-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶

向6-溴-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶(100mg，0.47mmol)在CH

6-溴-3-碘咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲腈

以与对于6-溴-3-碘-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶所述的相同方式从6-溴咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲腈和NIS制备标题化合物。LC/MS m/z：348.01(M+H)

6-溴-3-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从6-溴-3-碘-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶和4-异丙氧基硼酸制备标题化合物。LC/MSm/z：345.20(M+H)

6-溴-3-(4-(叔丁氧基)苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从6-溴-3-碘-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶和(4-(叔丁氧基)苯基)硼酸制备标题化合物。LC/MS m/z：359.22(M+H)

2-(4-(6-溴-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-3-基)苯基)丙-2-醇

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从6-溴-3-碘-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶和(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)硼酸制备标题化合物。LC/MS m/z：345.10(M+H)

以与上文对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式，使用适当的芳基卤化物和可商购获得的硼酸制备实施例B4至B9。在具有芳基卤化物的相同取代基的化合物的情况下，使用2当量的硼酸。

2-溴-4-((4-异丙氧基苯基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯

以与对于5-溴-N

5-溴-N

以与对于5-溴-N

5-溴-4-氯-N1-(4-异丙氧基苯基)苯-1，2-二胺

以与对于5-溴-N

5-溴-6-氟-N1-(4-异丙氧基苯基)苯-1，2-二胺

以与对于5-溴-N

5-溴-4-氟-N1-(4-异丙氧基苯基)苯-1，2-二胺

以与对于5-溴-N

5-溴-N1-(4-异丙氧基苯基)-6-甲基苯-1，2-二胺

以与对于5-溴-N

5-溴-N1-(4-异丙氧基苯基)-4-甲氧基苯-1，2-二胺

以与对于5-溴-N

6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑

在0℃下向5-溴-N

6-溴-1-(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酸甲酯

以与对于6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑所述相同的方式从2-溴-4-((4-异丙氧基苯基)氨基)-5-硝基苯甲酸甲酯、亚硝酸钠和三苯基膦制备标题化合物。LC/MS m/z：390.17(

6-溴-5-氯-1-(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

以与对于6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑所述相同的方式从5-溴-4-氯-N1-(4-异丙氧基苯基)苯-1，2-二胺制备标题化合物。LC/MS m/z：368.13(M+H)

6-溴-7-氟-1-(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

以与对于6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑所述相同的方式从5-溴-6-氟-N1-(4-异丙氧基苯基)苯-1，2-二胺制备标题化合物。

6-溴-5-氟-1-(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

以与对于6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑所述相同的方式从5-溴-4-氟-N1-(4-异丙氧基苯基)苯-1，2-二胺制备标题化合物。LC/MS m/z：352.20(M+H)

6-溴-1-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

以与对于6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑所述相同的方式从5-溴-N1-(4-异丙氧基苯基)-6-甲基苯-1，2-二胺制备标题化合物。LC/MS m/z：346.03(M+H)

6-溴-1-(4-异丙氧基苯基)-5-甲氧基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

以与对于6-溴-1-[4-(丙-2-基氧基)苯基]-1H-1，2，3-苯并三唑所述相同的方式从5-溴-N1-(4-异丙氧基苯基)-4-甲氧基苯-1，2-二胺制备标题化合物。LC/MS m/z：362.13(M+H)

以与上文对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式，使用上文所述的适当的芳基卤化物和适当的可商购获得的硼酸制备实施例C10至C18。

实施例C19：(1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-基)甲醇

向1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酸甲酯(86mg，1Eq)在THF(3mL)的溶液中缓慢添加在THF(80uL，1Eq)中的2.6M氢化铝锂溶液。将此混合物在室温下搅拌3小时，用冷的饱和Na

实施例C20：1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酸

向1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酸甲酯(200mg，1Eq)在1∶1 MeOH/THF(8mL)的溶液中添加2M NaOH水溶液(4.25mL)。将混合物搅拌过夜，通过添加1M HCl水溶液淬灭，用MTBE萃取，并且真空蒸发有机相。将10mg残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到2.3mg的标题化合物。LC/MS m/z：432.35(M+H)

实施例C21：1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酰胺

向1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酸(9.5mg，1Eq)在DMF(0.5mL)的溶液中添加二异丙基乙胺(11uL，3Eq)和HATU(12mg，1.5Eq)。将混合物搅拌1小时，此时一次性添加氯化铵(5mg，4Eq)。将混合物搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用1M HCl水溶液洗涤两次，并真空蒸发。将残余物通过制备型HPLC进行纯化，得到5mg的呈白色固体的标题化合物。LC/MS m/z：431.29(M+H)

实施例C22：(1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-基)甲胺

在回流而不是室温下搅拌，以与对于(1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-基)甲醇(实施例C19)所述相同的方式，从1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酰胺制备标题化合物。LC/MS m/z：417.41(M+H)

实施例C23：1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-胺

向1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲酰胺(51mg，1Eq)在t-BuOH(0.5mL)的溶液中添加三乙胺(33uL，2Eq)和二苯基磷酰基叠氮化物(25uL，1Eq)。将混合物加热至85℃，并且搅拌6小时，此时将其用乙酸乙酯稀释，用饱和NH

实施例C24：4，4′-(5-甲氧基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-1，6-二基)联苯酚

在0℃下向1，6-双(4-异丙氧基苯基)-5-甲氧基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑(200mg，0.5mmol)在DCM(4mL)的溶液中添加BBr

实施例C25：1，6-双(4-异丙氧基苯基)-5-乙烯基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

步骤1：1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲醛

向(1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-基)甲醇(30mg，0.072mmol)的溶液中添加DCM(0.5mL)和MnO

步骤2：1，6-双(4-异丙氧基苯基)-5-乙烯基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

在0℃下向甲基三苯基鏻碘化物(40mg，0.1mmol)在THF(1mL)的悬浮液中添加正丁基锂(0.06mL，0.1mmol)的1.6M溶液。在0℃下将混合物搅拌30分钟，此时添加1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑-5-甲醛(24mg，0.057mmol)在THF(0.5mL)中的溶液，并且在室温下继续搅拌3小时。将混合物用NH

实施例C26：5-乙基-1，6-双(4-异丙氧基苯基)-1H-苯并[d][1，2，3]三唑

通过抽真空并用氮气回填两次来吹扫1，6-双(4-异丙氧基苯基)-5-乙烯基-1H-苯并[d][1，2，3]三唑(11.5mg，0.028mmol)在MeOH(0.5mL)中的溶液中的空气。然后添加10％碳载钯(5mg)，并且通过抽真空并用氢气球回填两次来用氢气置换气氛。将混合物搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，通过硅藻土垫过滤，并真空蒸发滤液，得到10mg的标题化合物，其纯度足以无需进一步纯化即可使用。

实施例D27：3，6-双(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶

步骤1：6-溴-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶

以与对于6-溴咪唑并[1，2-a]吡啶-7-甲腈所述相同的方式从5-溴-4-甲基嘧啶-2-胺制备标题化合物。

步骤2：6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从6-溴-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶和4-异丙氧基苯基硼酸制备标题化合物。LC/MS m/z：268.25(M+H)

步骤3：3-碘-6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶

以与对于6-溴-3-碘-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶所述相同的方式从6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶和NIS制备标题化合物。LC/MS m/z：394.23

步骤4：3，6-双(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从3-碘-6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶和4-异丙氧基苯基硼酸制备标题化合物。

实施例D28：3-(4-(叔丁氧基)苯基)-6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从3-碘-6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶和4-叔丁氧基苯基硼酸制备标题化合物。LC/MS m/z：416.35(M+H)

实施例D29：2-(4-(6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶-3-基)苯基)丙-2-醇

以与对于2-(4-(1-(4-(叔丁氧基)苯基)-5-甲基-1H-苯并[d]咪唑-6-基)苯基)丙-2-醇(实施例A1)所述相同的方式从3-碘-6-(4-异丙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]嘧啶和(4-(2-羟基丙-2-基)苯基)硼酸制备标题化合物。LC/MS m/z：402.39(M+H)

实施例E30：3-(4-(叔丁氧基)苯基)-6-(4-(异丙氧基-d

步骤1：4-(3-(4-(叔丁氧基)苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基)苯酚

向微波反应器小瓶中添加6-溴-3-(4-(叔丁氧基)苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶(25mg，0.07mmol)、4-羟基苯基硼酸(11mg，.083mmol，1.2Eq)、Pd(dppf)Cl

步骤2：3-(4-(叔丁氧基)苯基)-6-(4-(异丙氧基-d

向4-(3-(4-(叔丁氧基)苯基)-7-甲基咪唑并[1，2-a]吡啶-6-基)苯酚(142mg，0.38mmol)在乙腈中的溶液中添加碳酸钾(0.105g，0.76mmol，2Eq)。将混合物在回流下搅拌30分钟，此时一次性添加d7-异丙基溴化物(57uL，1.5Eq)。将混合物在回流下搅拌过夜，然后蒸发至干。将残余物溶解于乙酸乙酯中，用水洗涤两次，经Na

使用适当的起始物质，根据以上方案2、3、6-8和程序，可以制备以下实施例。

利用表达沙粒病毒糖蛋白的VSV假型系统(假型病毒在此称为LASV-p、MACV-p、JUNV-p、GTOV-p和TCRV-p)和海肾萤光素酶报告基因，对杂环化合物进行筛选，以鉴定抑制假型病毒的感染性而非表达VSV糖蛋白的天然VSV病毒的单独化合物。在培养的HEK-293T细胞(ATCC CRL-3216)中产生表达VSV糖蛋白或用LASV、MACV、JUNV、GTOV和TCRV糖蛋白(LASV-p、MACV-p、JUNV-p、GTOV-p和TCRV-p)假型化的VSV病毒，将所述细胞在10cm皿中在补充有10％FBS、1X青霉素-链霉素、非必需氨基酸和L-谷氨酰胺的DMEM中培养。当细胞达到大约80％汇合度时，将它们用15μg编码所需糖蛋白的pCAGGS质粒和45μl PEI(聚乙烯亚胺)转染试剂(PEI MAX，Polysciences Inc.，#24765)的混合物转染。将细胞在37℃下在5％CO

还评价了假型测定中的活性化合物在3天时段内的细胞毒性。将化合物连续稀释并添加至Vero细胞(4000个细胞/孔)，其中最终DMSO浓度在由最小必需培养基(MEM)和1％FBS组成的生长培养基中维持在1％。将板在37℃下孵育3天，然后通过用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤除去死细胞。通过以下方式来评估CPE：用中性红染料将细胞染色1小时，然后用50％乙醇/1％乙酸溶液脱色。在Spectramax Plus 384分光光度计上在540nm和690nm处读取吸光度。将数据分析为(540nm-690nm)，然后与未经处理的对照进行比较以获得细胞存活率％。

在12孔一次性细胞培养板中制备了汇合或接近汇合的细胞培养单层。将细胞维持在补充有10％FBS的MEM或DMEM中。对于抗病毒测定，使用相同的培养基，但FBS减少至2％或以下，并补充有1％青霉素/链霉素。在2X MEM或2X DMEM中以七个半log10最终浓度(01-10μM)制备测试化合物。将测试化合物和阳性对照化合物(法匹拉韦或利巴韦林)以生物学一式三份平行运行。首先从细胞的12孔板中去除生长培养基来起始测定，将所述细胞用给定浓度的化合物和0.01 MOI的病毒或约50至100个噬斑形成单位(pfu)攻击。将细胞孵育60min：100μL接种物/孔，在37℃，5％CO

VYR测试是对抑制病毒复制的测试化合物的浓度的直接测定。将化合物和病毒添加至Vero细胞，持续3-4天，此时取出上清液并测试感染性颗粒。在96孔板中的Vero细胞新鲜单层上，使用3或4个微孔/稀释以病毒的log10稀释液滴定上清液。在观察到明显的CPE后，针对病毒存在或不存在对孔进行评分。将抑制剂浓度相对于在每种浓度下产生的病毒的log

使用基于ELISA的测定，针对天然复制型塔卡里伯(TCRV)病毒(TRVL-11573，BEI来源)对所选化合物进行测试。将Vero细胞(ATCC：CCL-81)以96孔形式(5000个细胞/孔)在补充的DMEM培养基中生长。过夜孵育后，将细胞用TCRV和所需浓度的化合物在具有1％FBS和补充剂的MEM培养基中处理。化合物测试孔中的最终DMSO浓度保持≤1％，并且将对照孔用TCRV或培养基和1％DMSO处理。在5％CO

除了化合物在体外展现出对沙粒病毒的广泛抑制活性的能力外，化合物还必须具有某些药物样特性以便将它们用于抑制沙粒病毒并提供治疗哺乳动物体内沙粒病毒感染的方法。此类化合物可表现出药物样特性，包括但不限于抵抗肝脏微粒体CYP p450酶的代谢降解的化学稳定性、细胞通透性和口服生物利用度(如果药物将被口服递送)以及没有对hERG离子通道(其与心脏安全性相关)的抑制作用[Kerns，E.H.Li，D.Drug-likeProperties：Concepts，Structure Design and Methods from ADME to ToxicityOptimization，(2008)Academic Press，Burlington MA]。出于所有目的，以上出版物都通过引用并入本文。为了表征化学系列的药物样特性，针对在人、小鼠、豚鼠、猴、大鼠、小鼠或犬肝脏微粒体测定中的代谢稳定性(表4)和对hERG离子通道的抑制作用(表5)对示例化合物进行评估。表现出＞60％母体剩余的化合物指示出有吸引力的化学稳定性。在人和非人物种中展现出良好的微粒体稳定性促进在临床前动物研究中测试和优化化合物的能力。

建立反应预混合物，其含有1uM目的化合物、1mg/mL所需物种的肝脏微粒体、2.1mMMgCl

已显示属于不同类别的药物与QT延长相关，并且在一些情况下与严重的室性心律失常相关。这些不良事件的最常见机制是抑制一个或多个心脏钾通道，特别是hERG。此电流对于心肌细胞复极化很重要，并且是延长QT间隔的药物的常见靶标。因此，对本研究中的测试制品进行表征以确定其抑制hERG通道的能力。使用稳定转染的表达hERG mRNA的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系测量离子通道活性。在CHO细胞系中表达的此克隆通道的药理学与天然组织中观察到的非常相似。将细胞在含有10％FBS、1％青霉素/链霉素和500μg/ml G418的DMEM/F12中培养。在测试之前，使用Accumax(Innovative Cell Technologies)收获细胞。对于电生理学记录，使用以下溶液：外部溶液：2mM CaCl2；2mM MgCl2；4mM KCl；150mMNaCl；10mM葡萄糖；10mM HEPES；305-315mOsm；pH 7.4(用5M NaOH调节)；内部溶液：140mMKCl；10mM MgCl2；6mM EGTA；5mM HEPES-Na；5mM ATP-Mg；295-305mOsm；pH 7.25(用1M KOH调节)。用AVIVA的SealChip

表1.假型病毒活性。实施例化合物及其观察到的抑制活性，所述抑制活性显示为针对LASV-p、MACV-p、JUNV-p、TCRV-p和GTOV-p的EC

表2.假型与复制型TCRV抑制性活性的比较。实施例化合物及其观察到的对假型或复制型TCRV的抑制活性(EC

令人惊讶地发现在本发明化合物的假型与复制型病毒抑制活性之间的非常密切的相关性。

表3.对天然拉沙病毒的抑制。实施例化合物及其在复制型LASV噬斑和病毒产量减少(VYR)测定中观察到的抑制活性和选择性指数(SI)。

所有五种化合物中化合物A1、A2、B7和B8在噬斑和VYR测定形式中展示出小于1-3nM的非常有效的EC

表4.多物种微粒体稳定性。在肝脏微粒体中在60分钟时母体化合物剩余％

多物种微粒体稳定性研究的结果(表4)显示，与其未氘代类似物B7相比，氘代化合物E30在猴肝脏微粒体测定中展示出改善的代谢稳定性，因此在人和非人物种中均显示出良好的微粒体稳定性。

表5：hERG通道测定

这些数据指示没有hERG通道抑制，从而表明良好的心脏安全性潜力。

表6：小鼠药代动力学参数

通过静脉内(3mg/kg)和口服(30mg/kg)途径在小鼠中给予化合物以确定药代动力学参数。IV时间点包括0.083、0.25、0.5、1、2、6和24h，并且口服时间点包括0.5、1、2、4、6、8和24h。每个时间点从3只小鼠中抽取血液。分离血浆并在Varian 500-LC/MS上通过LC/MS/MS进行测量。两种化合物均展示出低的首过肝脏清除率，这与小鼠肝脏微粒体中1小时后剩余的高水平化合物一致(表4)。两种化合物均展示出合理的口服生物利用度和适合于每天一次给药的长半衰期。最后，分布体积(Vd)值表明化合物被吸收至组织中，这进一步支持靶向沙粒病毒感染的良好口服生物分布。

小鼠能够耐受每日口服持续3天至每天一次至少(测试的最高剂量)100mg/kg给予的两种化合物。如通过每日监测体重、体温和行为所确定的，没有明显毒性的临床迹象。在第4天(最后一次剂量后24小时)，从给予动物中收集血浆和肝脏样品以测量化合物水平。将肝脏在1∶1w/v的磷酸盐缓冲盐水中匀浆。在Varian 500-MS上通过LC/MS/MS测量血浆和肝脏提取物(表7)。

表7：最终施用后24小时的化合物浓度

总之，结果显示，本发明化合物表现出对HF沙粒病毒的有效的广谱抑制作用，以及有吸引力的药物样特性以便用作用于由沙粒病毒糖蛋白介导的病毒感染的治疗。