一种测定磺胺多辛原料药中对乙酰氨基苯磺酸甲酯含量的方法

技术领域

本发明属于对乙酰氨基苯磺酸甲酯技术领域，具体涉及一种测定磺胺多辛原料药中对乙酰氨基苯磺酸甲酯含量的方法。

背景技术

对乙酰氨基苯磺酸甲酯是广谱杀菌剂磺胺多辛的基因毒性杂质，其结构如下：

对乙酰氨基苯磺酸甲酯在较低水平即有DNA损伤的风险，因此对对乙酰氨基苯磺酸甲酯残留测试显得尤为重要，目前对对乙酰氨基苯磺酸甲酯痕量测定的方法主要为气相色谱法。

但是气相色谱法对于磺胺多辛原料药中对乙酰氨基苯磺酸甲酯残留量测定来说，灵敏度远远不能满足要求，且由于磺胺多辛基质干扰，专属性也不能满足要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定磺胺多辛原料药中对乙酰氨基苯磺酸甲酯含量的方法，以达到该检测方法灵敏度高，专属性好。

一种测定磺胺多辛原料药中对乙酰氨基苯磺酸甲酯含量的方法，包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：取对乙酰氨基苯磺酸甲酯对照品，以乙腈为稀释剂，配制对乙酰氨基苯磺酸甲酯溶液，在所述对乙酰氨基苯磺酸甲酯溶液中加入衍生溶液进行衍生反应，冷却至室温，得到对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：取磺胺多辛原料药，以乙腈为溶剂，制得磺胺多辛溶液，在所述磺胺多辛溶液中加入所述衍生溶液进行衍生反应，冷却至室温，得到供试品溶液；

(3)用LC-MS/MS法分别检测所述对照品溶液和所述供试品溶液，记录谱图。

优选的，所述衍生溶液为0.2％二乙胺乙腈溶液。

优选的，在步骤(3)中，LC-MS/MS法的条件如下，

色谱柱：Poroshell 120HILIC-Z，2.7μm，3.0mm*150mm；

柱温：30℃，进样量：5μl，进样盘温度为室温；

检测器为质谱检测器：离子源为ESI，负离子模式，离子对为214/134；

流动相A：pH＝4的20mM乙酸铵-甲酸水溶液，流动相B：乙腈，流速：0.5ml/min，等度洗脱10min，流动相B的体积百分数为80％。

优选的，在步骤(1)中，衍生反应的温度为50-70℃。

优选的，在步骤(2)中，衍生反应的温度为50-70℃。

优选的，在步骤(3)中，用LC-MS/MS法检测所述对照品溶液中对乙酰氨基苯磺酸甲酯衍生物的峰面积，并与溶液浓度进行标准曲线拟合，记录谱图。

优选的，在步骤(3)中，用LC-MS/MS法检测所述供试品溶液的峰面积，用外标标准曲线法计算所述供试品溶液中对乙酰氨基苯磺酸甲酯的含量，记录谱图。

本发明的有益效果是：

第一，本申请步骤少，检测时间短，根据谱图可知灵敏度高，专属性好；

第二，本申请使用LC-MS/MS进行检测，重复性实验和准确度实验证明本申请准确度佳，重复性好；

综上，本发明能够实现精确至10ppm的准确定量，具有检测时间短，灵敏度高，专属性好，准确度好，精密度高，重复性好的优点。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。

在附图中：

图1是本发明的对乙酰氨基苯磺酸甲酯的标准曲线示意图；

图2是本发明的空白溶液谱图示意图；

图3是本发明的供试品溶液谱图示意图；

图4是本发明的对照品溶液谱图示意图；

图5是本发明的100％供试品加标溶液谱图示意图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

若如无特别说明，实施例中所使用的试剂均可容易地从商业公司获取。

实施例1

如图1至图5所示，一种测定磺胺多辛原料药中对乙酰氨基苯磺酸甲酯含量的方法，具体制备步骤如下：

(1)对照品溶液的制备：取适量对乙酰氨基苯磺酸甲酯对照品，以乙腈为稀释剂，配制适当浓度的对乙酰氨基苯磺酸甲酯溶液，然后取0.5ml对乙酰氨基苯磺酸甲酯溶液放入进样小瓶中，加入0.5ml衍生溶液，60℃衍生反应3h，冷却至室温，得到对照品溶液，其中衍生溶液为0.2％二乙胺乙腈溶液；

(2)供试品溶液的制备：取磺胺多辛原料药，以乙腈为溶剂，制得磺胺多辛溶液，然后取0.5ml磺胺多辛溶液放入进样小瓶中，加入0.5ml衍生溶液，60℃衍生反应3h，冷却至室温，得到供试品溶液，其中衍生溶液为0.2％二乙胺乙腈溶液；

(3)配制系列对照品溶液，用LC-MS/MS法检测对照品溶液中对乙酰氨基苯磺酸甲酯衍生物的峰面积，并与溶液浓度进行标准曲线拟合，记录谱图；

(4)取供试品溶液，用LC-MS/MS法检测供试品溶液的峰面积，用外标标准曲线法计算供试品溶液中对乙酰氨基苯磺酸甲酯的含量，记录谱图；

其中，步骤(3)和步骤(4)中，LC-MS/MS法的条件为：色谱柱：Poroshell120HILIC-Z，2.7μm，3.0mm*150mm；柱温：30℃，进样量：5μl，进样盘温度为室温；检测器为质谱检测器：离子源为ESI，负离子模式，离子对为214/134；流动相A：pH＝4的20mM乙酸铵-甲酸水溶液，流动相B：乙腈，流速：0.5ml/min，等度洗脱10min，流动相B的体积百分数为80％，洗脱程序参照下述表1；

表1

对乙酰氨基苯磺酸甲酯标准曲线参照下述表2和图1，

表2

由表2和图1可知，r>0.99，R

本申请准确度检测结果参照下述表3，50％、100％、150％都为加标供试品浓度，

表3

本申请重复性检测结果参照下述表4，100％为加标供试品浓度，

表4

参照图1-图5，综合上述表2-表4，可知本申请的方法具有检测时间短，灵敏度高，专属性好，准确度好，精密度高，重复性好的优点。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。