KRAS G12D抑制剂及其在医药上的应用

技术领域

本发明涉及通式(I)所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，其具有KRAS抑制活性，特别是KRAS G12D抑制活性。本发明还涉及这些化合物的制备方法以及包含其的药物组合物。

背景技术

临床数据显示，RAS是人类肿瘤中发生突变率最高的基因，所有肿瘤中，约20-30％有RAS突变，大约98％的胰腺癌，52％的结肠癌,43％的多发性骨髓瘤，及32％的肺腺癌中存在RAS基因突变。RAS最常见的突变方式是点突变，经常发生在12、13、61密码子，其中又以第12位密码子突变最常见，例如G12C、G12D或G12V。

目前针对KRAS突变的药物研发是当前新药研究热点之一。KRAS G12C抑制剂AMG510(WO2018217651A1)和MRTX849(WO2019099524A1)已进入后期临床阶段；而MIRATI在G12D抑制剂(WO2021041671A1)研发上进展领先。

基于KRAS异常激活在癌症进展中的重要性和KRAS基因突变在人类癌症中的普遍性，KRAS一直是药物开发人员关注的靶点。尽管己在这个领域中取得进展，但在本领域中仍需要改进的KRAS Gl2D突变蛋白抑制剂。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中基于KRAS Gl2D突变蛋白抑制剂缺乏的问题，而提供了一种通式(I)所示的化合物及其应用。本发明提供的通式(I)所示的化合物对KRAS Gl2D突变蛋白具有良好的抑制作用。

本发明提供一种通式(I)所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐：

其中，

X

X

X

L选自键、O、NR

R

R

R

R

R

R

每个R

且通式(I)化合物不为

在本发明的一些实施方式中，式(I)所示的化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，选自下式(IA)或(IB)化合物：

优选为

其中，取代基R

在本发明的一些实施方式中，所述R

在本发明的一些实施方式中，所述L为键，所述R

在本发明的一些实施方式中，所述L选自键或C

在本发明的一些实施方式中，所述R

在本发明的一些实施方式中，所述R

在本发明的一些实施方式中，所述R

在本发明的一些实施方式中，所述R

在本发明的一些实施方式中，所述R

在本发明的一些实施方式中，式(I)所述化合物选自：

/>

/>

/>

/>

/>

/>

本发明还提供了一种药物组合物，其中，所述药物组合物包括式(I)所示化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐，任选地进一步包括药学上可接受的辅料。

本发明提供了式(I)所示化合物、其互变异构体、氘代物或可药用盐、或其药物组合物在制备药物中的应用。

本发明进一步提供了所述应用的优选技术方案：

作为优选，所述应用为制备治疗和/或预防癌症药物中的应用。

作为优选，所述应用为制备用于治疗和/或预防由KRAS G12D介导的疾病的药物的应用。

作为优选，所述KRAS G12D介导的疾病是癌症。

作为优选，所述癌症选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。

本发明还提供了一种治疗和/或预防疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物或含其的药物组合物。

本发明还提供了一种治疗和/或预防由KRAS G12D介导的疾病的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐或含其的药物组合物。

本发明还提供了一种治疗癌症的方法，包括向治疗对象施用治疗有效量的至少任意一种结构式(I)所示化合物、其互变异构体、氘代物或药用盐或含其的药物组合物。

作为优选，在上述方法中，所述KRAS G12D介导的疾病是癌症。

作为优选，在上述方法中，所述的癌症选自乳腺癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、子宫内膜癌、胃癌、宫颈癌、横纹肌肉瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、多形性肺癌、卵巢癌、食管癌、黑色素瘤、结肠直肠癌、肝细胞瘤、头颈部肿瘤、肝胆管细胞癌、骨髓增生异常综合征、恶性胶质瘤、前列腺癌、甲状腺癌、徐旺氏细胞瘤、肺鳞状细胞癌、苔藓样角化病、滑膜肉瘤、皮肤癌、胰腺癌、睾丸癌或脂肪肉瘤。

除非另有说明，所述结构通式中使用的一般化学术语具有通常的含义。

例如，除非另有说明，本发明所用的术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

在本发明中，除非另有说明，“烷基”包括直链或支链的一价饱和烃基。例如，烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、3-(2-甲基)丁基、2-戊基、2-甲基丁基、新戊基、正己基、2-己基、2-甲基戊基等。类似的，“C

术语“亚烷基”是指二价烷基连接基团。亚烷基在形式上是指两个C-H键替换为亚烷基与化合物其余部分的连接点的烷烃。类似的，C

“烷氧基”是指前述的直链或支链烷基的氧醚形式，即-O-烷基。

术语“芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的包括6-14元单环或稠环芳香基团。优选芳基为6到10元的单环或双环的芳香环基团。优选为苯基、萘基。最优选为苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实例包括但不限于苯并环戊基。

术语“杂环基”，在本发明中，除非另有说明，是指由碳原子和1-3个选自N、O或S的杂原子组成的未取代或取代的稳定环系统，其为饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包括3至14个碳原子，其中氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，并且氮杂原子可以选择性地被季铵化。该杂环基可以被连接到任何的杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。这些杂环基的实例包括但不限于氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、氧代哌嗪基、氧代哌啶基、四氢呋喃基、二氧戊环基、四氢咪唑基、四氢噻唑基、四氢恶唑基、四氢吡喃基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉基亚砜、硫代吗啉基砜基和四氢恶二唑基。所述杂环基可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基。

术语“杂芳基”，在本发明中，除非另有说明，是指未取代或取代的稳定的5元或6元单环芳族环系统或未取代或取代的9元-14元苯并稠合杂芳族环系统或多环杂芳族环系统，其由碳原子和1-4个选自N、O或S的杂原子组成，并且其中所述氮或硫杂原子可以选择性地被氧化，所述氮杂原子可以选择性地被季铵化。杂芳基可以连接在任何杂原子或碳原子上以形成稳定的结构。杂芳基的实例包括但不限于噻吩基、呋喃基、咪唑基、异恶唑基、恶唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、噻二唑基、三唑基、吡啶基、哒嗪基、吲哚基、氮杂吲哚基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并异恶唑基、苯并噻唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基腺嘌呤、喹啉基或异喹啉基。所述杂芳基可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环。

术语“环烷基”是指具有3-14个碳原子的环状饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基。所述环烷基可以稠合于芳基、杂环基或杂芳基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基。

术语“取代的”是指基团中的一个或多个氢原子分别被相同的或者不同的取代基所取代。典型的取代基包括但不限于H、氰基、卤素、C

当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH

当本发明提供的化合物是酸时，可以从药学上可接受的无毒的碱，包括无机碱和有机碱，方便地制得其相应的盐。从无机碱衍生的盐包括铝、铵、钙、铜(高价和低价)、三价铁、亚铁、锂、镁、锰(高价和低价)、钾、钠、锌之类的盐。特别优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。能够衍生成药学上可接受的盐的无毒有机碱包括伯胺、仲胺和叔胺，也包括环胺及含有取代基的胺，如天然存在的和合成的含取代基的胺。能够成盐的其他药学上可接受的无毒有机碱，包括离子交换树脂以及精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N',N'-二苄乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡萄糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、异丙胺、赖氨酸，甲基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、氯普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。

当本发明提供的化合物是碱时，可以从药学上可接受的无毒的酸，包括无机酸和有机酸，方便制得其相应的盐。这样的酸包括，如，醋酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、甲酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、草酸、丙酸、乙醇酸、氢碘酸、高氯酸、环己氨磺酸、水杨酸、2-萘磺酸、糖精酸、三氟乙酸、酒石酸和对甲苯磺酸等。较优地，柠檬酸、氢溴酸、甲酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。更优地，甲酸和盐酸。

本发明化合物的药物前体包含在本发明的保护范围内。通常，所述药物前体是指很容易在体内转化成所需化合物的功能性衍生物。例如，本申请化合物的任何药学上可接受的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其在向受体施用后能够直接或间接地提供本申请的化合物或其具有药学活性的代谢物或残基。

本发明所述化合物可能含有一个或多个不对称中心，并可能由此产生非对映异构体和光学异构体。本发明包括所有可能的非对映异构体及其外消旋混合物、其基本上纯的拆分对映异构体、所有可能的几何异构体及其药用盐。

当式(I)所示化合物存在互变异构体时，除非特别声明，本发明包括任何可能的互变异构体和其药用盐，及它们的混合物。

当式(I)所示化合物用较重的同位素(例如氘)替代可能提供某些治疗优势，这是由于更大的代谢稳定性，例如增加体内半衰期或减少剂量要求。

术语“药物组合物”是指一种或多种本申请的化合物或其药用盐与药学上可接受的辅料组成的混合物。药物组合物的目的是有利于对有机体给予本申请的化合物。

在本发明中，“一”、“一个”、“该”、“至少一个”和“一个或多个”可互换使用。因此，例如，包含“一种”药学上可接受的辅料组成的混合物可以被解释为表示该药物组合物包括“一种或多种”药学上可接受的辅料。

术语“药学上可接受的辅料”是指对有机体无明显刺激作用，而且不会损害该活性化合物的生物活性及性能的那些辅料。合适的辅料是本领域技术人员熟知的，例如碳水化合物、蜡、水溶性和/或水可膨胀的聚合物、亲水性或疏水性材料、明胶、油、溶剂、水等。

本发明的药物组合物可通过将本申请的化合物与适宜的药学上可接受的辅料组合而制备，例如可配制成固态、半固态、液态或气态制剂，如片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、膏剂、乳剂、悬浮剂、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶剂、微球及气溶胶等。

给予本发明化合物或其药用盐或其药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、局部、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。

术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(b)缓解疾病的症状，即，导致疾病或症状退化。

术语“有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病、病况或障碍，(ii)减轻、改善或消除特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文中所述的特定疾病、病况或障碍的一种或多种症状发作的本申请化合物的用量。构成“治疗有效量”的本申请化合物的量取决于该化合物、疾病状态及其严重性、给药方式以及待被治疗的哺乳动物的年龄而改变，但可例行性地由本领域技术人员根据其自身的知识及本公开内容而确定。

合成方案：

步骤A：化合物I-1在碱性条件下如Cs

步骤B：化合物I-2在Pd催化剂如SphosPdG2作用下，与化合物

步骤C：化合物I-3与通过钯碳氢化作用脱去Bn保护基团即得到化合物I-4；

步骤D：化合物I-4在碱性条件如三乙胺作用下，与三氟甲磺酸酐反应引入Tf保护基团即可得到目标产物I-5。

步骤E：化合物I-5与在Pd催化剂如Pd(PPh

步骤F：化合物I-6在酸性条件下如TFA的作用下，脱去TG保护基团的可得到目标化合物I。

具体实施方式

为使上述内容更清楚、明确，本发明将用以下实施例来进一步阐述本发明的技术方案。以下实施例仅用于说明本发明的具体实施方式，以使本领域的技术人员能够理解本发明，但不用于限制本发明的保护范围。本发明的具体实施方式中，未作特别说明的技术手段或方法等为本领域的常规技术手段或方法等。

除非另有说明，所有温度均指摄氏度。

实施例中使用了下列缩略语：

DABCO：三乙烯二胺；

DIEA：N，N-二异丙基乙胺；

DCM:二氯甲烷；

Dioxane：二氧六环；

ESI-MS：电喷雾电离质谱；

Tf2O：三氟甲磺酸酐；

EtOH：乙醇；

HOAc：冰醋酸；

MeOH：甲醇；

POCl3：三氯氧磷；

THF：四氢呋喃；

TFA：三氟乙酸；

TEA：三乙胺；

LiAlH4：氢化铝锂；

TBAF：四丁基氟化铵；

SphosPdG2：氯(2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)；

Pre-HPLC：制备高效液相；

Pre-TLC：制备薄层板。

中间体M1的合成：

步骤1：化合物M1-2的合成

在室温下，向化合物M1-1(40g)，HOAc(77g)，EtOH(400mL)与H

步骤2：化合物M1-3的合成

将2,2,2-三氯乙烷-1,1-二醇(66.4g)与Na

步骤3：化合物M1-4的合成

在60℃，向浓硫酸(300mL)中添加化合物M1-3(47g),将温度升高至90℃且维持3小时，反应完全，将反应混合物冷却至室温且倾注入冰水中。通过过滤收集黄色沉淀物且干燥，得到黑色固体产物(43g，99％产率)，即化合物M1-4。

步骤4：化合物M1-5的合成

在0℃，将化合物M1-4(43g)于NaOH(2N)中的溶液中添加H

步骤6：化合物M1-6的合成

在室温下，将二(咪唑-1-基)甲酮(2.70g)加入到粗品化合物M1-5(4.0g)的THF(20mL)中，再将N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.4g)加入其中，混合物移至50℃反应，反应2小时。化合物M1-6基本完全转化为中间产物，接着将混合物逐滴加入到冰的氨水(35mL)中，搅拌5min即反应完全。将混合物倾注入冰水中，用乙酸乙酯萃取混合物，有机层用盐水洗涤，经Na

步骤7：化合物M1-7的合成

将化合物M1-6与脲的混合物在200℃搅拌反应3小时。将混合物冷却至室温，用乙酸乙酯洗涤固体，将固体干燥即得所要粗品固体产物M1-7(209mg,78％产率)。

步骤8：化合物M1-8的合成

在室温下，将DIPEA加入到M1-7的POCl

步骤9：化合物M1的合成

在室温下，向M1-8(3.0g)溶于1,4-二氧六环(20ml)中，向溶液中添加叔丁基(1R，5S)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-8-羧酸盐(1.6g)及DIPEA(2.8g)，所得混合物在室温搅拌10分钟。使混合物真空浓缩，残余物通过硅胶管柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝75:25至65:35)纯化，得到呈黄色固体状的所要产物M1(2.5g，57％产率)。ESI-MS m/z:471[M+H]

中间体M2的合成：

步骤1：化合物M2-1的合成

在室温下，依次加入2-氯-3-氟-吡啶-4-羧酸(54.00g)，甲苯(390.00mL)，叔丁醇(390.00mL)，三乙胺(128.27mL)，粉末状4A分子筛(90.00mL)(预活化)，氮气保护下，保温回流半小时(内温87℃)。再自然冷却至室温，然后加入DPPA(99.44mL)，升温至回流，保温反应5小时。将反应混合物冷却至40℃以下，然后加入EA 500mL稀释；继续冷却至室温，硅藻土助滤，将加入的分子筛过滤除去；并用EA 1500mL多次漂洗滤渣、抽干；收集滤液，依次用水700mL，饱和食盐水700mL洗涤、分液；无水硫酸钠干燥有机相；过滤，除干燥剂，浓缩，浓缩物经柱层析分离纯化(PE/EA＝30:1～20:1)，浓缩洗脱液，最终得到白色固体状目标产物M2-1(68.2g，产率89.88％)。ESI-MS m/z:247.1[M+H]

步骤2：化合物M2-2的合成

在室温下，将化合物M2-1(65.00g)溶于CH

步骤3：化合物M2-3的合成

在室温下，将化合物M2-2(36.00g)溶于乙腈(180.00mL)中，NIS(66.32g)和对甲苯磺酸(2.12g)加入其中，氮气保护下，加热保温70℃反应。反应液冷却至50℃，加入水900mL，有粉白色固体粉末析出，打浆半小时；过滤，并用水漂洗滤饼，抽干。收集滤饼，加入乙酸乙酯1200mL溶解完全，然后依次用饱和亚硫酸钠水溶液350mL，洗涤两次，再用饱和食盐水350mL洗涤、分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，得到淡黄色固体颗粒目标产物M2-3(63.2g，产率94.43％)。ESI-MS m/z:272.9[M+H]

步骤4：化合物M2-4的合成

在室温下，将化合物M2-3(57.50g)溶于DMF(22.00mL)中，氰化锌(32.22g)、四三苯基膦钯(12.19g)和粉末状

步骤5：化合物M2-5的合成

在室温下，500mL的单口烧瓶中，加入浓硫酸(61.37mL)，冰水浴冷却至10℃以下，分批加入化合物M2-4(39.30g)，加毕，搅拌10分钟，在氮气氛围中，用油浴保温60℃，反应约1小时。反应液冷却至室温，然后小心地加入到1100mL的冰水混合物中，稀释淬灭，有少量黄色固体析出。搅拌10分钟后，过滤；收集滤饼，用50mL饱和碳酸氢钠水溶液，打浆20分钟，再次过滤，收集两次滤液，合并；然后慢慢加入碳酸钠固体，调pH约等于7，有类白色固体粉末析出。搅拌半小时，过滤、抽干；每次用水100mL漂洗滤饼、抽干，共漂洗2次。收集滤饼，放入真空烘箱中，55℃烘干至恒重得到米黄色固体粉末状目标产物M2-5(33.6g，产率77.37％)。ESI-MS m/z:190.0[M+H]

步骤6：化合物M2-6的合成

在室温下，加入四氢呋喃(470.00mL)，氮气置换后，微氮气流保护下，加入氢化钠(10.00g)，用油浴加热，保温40～45℃，搅拌15分钟；然后分批加入化合物M2-5(18.95g)，加毕，保温机械搅拌20分钟后，然后小心地分批加入CDI(24.31g)，加毕，搅拌15分钟后，油浴加热升温，保温回流反应。反应液用冰水浴，冷却至10℃以下，然后加入饱和氯化铵水溶液500mL，有浅黄色固体析出，加入水1000mL；然后转移至5L烧杯中，补加水3000mL；搅拌1小时，过滤，抽干；收集滤饼，放入真空烘箱中，50～55℃干燥至恒重得到淡黄色固体粉末状目标产物M2-6(18.3g，产率84.93％)。ESI-MS m/z:216.0[M+H]

步骤7：化合物M2-7的合成

在室温下，将化合物M2-6(18.00g)和DIEA(36.00mL)溶于POCl

步骤8：化合物M2-8的合成

在室温下，将化合物M2-7(10.50g)和DIEA (17.18mL)溶于DCM(120.00mL)中，水浴冷却，分批加入叔丁基3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-羧酸盐(9.27g)，然后室温搅拌反应约10分钟。补加二氯甲烷120mL，依次用100mL水，100mL饱和氯化钠水溶液洗涤、分液，无水硫酸钠干燥有机相，过滤，浓缩，浓缩物经硅胶柱(PE/EA＝90/10～75/25)及打浆纯化(40mLEA+160mL PE)得到白色固体粉末状目标化合物M2-8(15.9g，产率89.26％)。

步骤9：化合物M2-9的合成

在室温下，在反应瓶中加入THF(80.00mL)，苄醇(1.60g)，降温至0℃，加NaH(0.59g)，加完恢复室温反应0.4h，降温至0℃，加化合物M2-8(5.30g)，加完恢复室温反应1h。向反应液中加水淬灭反应，用EA萃取，有机相干燥，浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化(PE～PE:EA＝1:1)得到黄色油状目标产物M2-9(5.60g，产率90.51％)。ESI-MS m/z:500[M+H]

步骤10：化合物M2-10的合成

在室温下，在反应瓶中加入化合物M2-9(1.90g)，2-[6-(甲氧基甲氧基)-8-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)萘-1-基]乙炔基三丙烷-2-基硅烷(2.82g)，SphosPdG2(0.27g)，K

步骤11：化合物M2-11的合成

在室温下，在反应瓶中加入M2-10(1.80g)，甲醇(25.00mL)和Pd/C(0.92g)，氢气置换后氢气保护下室温反应12h。将反应混合物过滤，滤渣用甲醇洗涤，滤液浓缩并过柱纯化得到黄色固体状目标化合物M2-11(0.60g,37.38％)。ESI-MS m/z:812[M+H]

步骤12：化合物M2的合成

在室温下，在反应瓶中加入M2-11(600.00mg)，干燥的DCM(8.00mL)和DIEA(0.40mL)，将反应混合物降温至-10℃，取Tf

实施例1：化合物4-(4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基-3-基)-2-((1-((二甲氨基)甲基)环丙基)乙炔基)-8-氟喹唑啉-7-基)萘-2-醇的合成

步骤1：化合物1-1的合成

在室温下，将化合物1-甲氧羰基环丙烷-1-羧酸(5.00g)溶于DCM(80.00mL)中，冰浴下加入DMF(0.27mL)，然后将草酰氯(8.81mL)滴加入其中，加完后35℃搅拌3h。最后将反应混合物直接浓缩，即可得到目标化合物1-1的粗品，粗品直接用于下一步反应。

步骤2：化合物1-2的合成

在室温下，将上述粗品1-1(5.64g)溶于DCM(80.00mL)中，冰浴加TEA(24.11mL)和二甲胺盐酸盐(5.66g)，加完后室温搅拌1h。向反应混合中加水，进行萃取，有机相干燥后浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化得到目标化合物1-2(5.4g，产率91％)。

步骤3：化合物1-3的合成

在室温下，将化合物1-2(5.4g)溶于THF(120mL)，降温至-20℃，分批次加入LiAlH

步骤4：化合物1-4的合成

在室温下，将DMSO(2.34g)溶于DCM(30mL)，在-78℃下向其中滴加草酰氯(1.9g)，搅拌30min。继续在-78℃下向其中滴加化合物1-3(1.3g)的DCM(10mL)溶液，搅拌1h。在-78℃下再向其中滴加三乙胺(3.1g)，滴加完毕后缓慢恢复至室温。向反应液中加入水，萃取、分液，分去水相。将有机相浓缩，得到目标化合物1-4的粗品。

步骤5：化合物1-5的合成

在室温下，将上述化合物1-4的粗品、碳酸钾(2.8g)溶于甲醇(10mL)，室温搅拌15min。滴加(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(2.5g)，加完后室温搅拌过夜。向反应液中加入甲苯、水萃取，分液，有机相用饱和碳酸钾溶液洗一次后，用无水硫酸钠干燥，得到目标化合物1-5的粗品。

步骤6：化合物1-6的合成

在室温下，将中间体M1(1.4g)、苯甲醇(0.65g)、碳酸铯(3.9g)、DABCO(50mg)溶于DMF(10mL)和THF(10mL)的混合溶液中，室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入水、EA，萃取、分液，有机相经干燥后浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化(EA:PE＝0-30％)得到目标化合物1-6(1.9g，115％)。ESI-MS m/z:543，545[M+H]

步骤7：化合物1-7的合成

在室温下，将化合物1-6(1.8g)、(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)萘-1-基)硼酸频哪醇酯(2.5g)、SphosPdG2(0.24g)、磷酸钾(2.1g)溶于1,4-二氧六环(18mL)和水(2mL)的混合溶液中，100℃搅拌1h。反应完成后，向反应液中加入水、EA，萃取、分液，有机相经干燥后浓缩。浓缩物经硅胶柱纯化(MeOH：DCM＝0-10％)，得到目标化合物1-7(1.9g，产率80％)。

步骤8：化合物1-8的合成

在室温下，将化合物1-7(1.9g)溶于甲醇(40mL)中，在氮气保护下加入10％湿钯碳(0.2g)，再用氢气置换，室温搅拌12h。反应完成后，将混合物过滤，滤液浓缩得到目标化合物1-8的粗品(1.5g，产率88％)。

步骤9：化合物1-9的合成

在室温下，将化合物1-8的粗品(1.4g)溶于DCM(15mL)中，在冰浴条件下加入三乙胺(1.0mL)，向其中缓慢滴加三氟甲磺酸酐(0.5mL)，加完后在0℃搅拌1h。将反应液直接浓缩，浓缩物经硅胶柱纯化(EA：PE＝0-50％)得到目标化合物1-9(1.37g，产率81％)。ESI-MSm/z:763[M+H]

步骤10：化合物1-10的合成

在室温下，将化合物1-9(80mg)、Pd(PPh

步骤11：化合物1-11的合成

在室温下，将化合物1-10(5mg)溶于THF(5mL)中，向其中滴加三乙胺三氢氟酸盐(0.1mL)，室温搅拌30min。将反应液浓缩，得到目标化合物1-11粗品。

步骤12：化合物1的合成

在室温下，将化合物1-11的粗品溶于DCM(5mL)中，向其中滴加三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌30min。将反应液浓缩，得到化合物1粗品。将化合物1粗品用反相制备柱纯化(ACN:H

实施例2：化合物4-(4-((1R，5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-2-((1-(异吲哚-2-基甲基)环丙基)乙炔基)喹唑啉-7-基)萘-2-醇的合成

化合物2-1～化合物2-4的详细合成步骤参考实施例1。

步骤5：化合物2-5的合成

在室温下，将化合物2-4的粗品(2.0g)、碳酸钾(2.75g)溶于甲醇(20mL)中，室温搅拌15min。向其中滴加(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(2.49g)，加完后室温搅拌2h。向反应液中加入EA、水，萃取，分液，有机相干燥后浓缩，浓缩物经柱色谱纯化(MeOH:DCM＝0-20％)得到目标化合物2-5(1.4g，产率70％)。ESI-MS m/z:198[M+H]

步骤6：化合物2-6的合成

在室温下，将化合物1-9(200mg)、Pd(PPh

化合物2-7和目标化合物2的详细合成步骤参考实施例1。化合物2ESI-MS m/z:596[M+H]

实施例3：化合物4-(4-((1R，5S)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛基-3-基)-8-氟-2-((1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基)乙炔基)喹唑啉-7-基)-5-乙炔基萘-2-醇的合成

化合物3-1～化合物3-6的详细合成步骤参考实施例1。化合物3-6ESI-MS m/z:886[M+H]

步骤7：化合物3-7的合成

在室温下，将化合物3-6(110mg)溶于THF(5mL)中，滴加TBAF(1M/THF，0.12mL)，室温搅拌30min。将反应液浓缩，浓缩物经柱色谱纯化(MeOH:DCM＝0-200％)得到目标化合物3-7(80mg，产率90％)。ESI-MS m/z:730[M+H]

步骤8目标化合物3的合成步骤参考实施例1。ESI-MS m/z:585[M+H]

实施例4：化合物4-(4-((1R，5S)-3,8-二氮杂环[3.2.1]辛烷-3-基)-8-氟-2-((1-((3-氟吡咯烷-1-基)甲基)环丙基)乙炔基)喹唑啉-7-基)萘-2-醇的合成

步骤1：化合物4-1的合成

在室温下，将1-甲氧羰基环丙烷-1-羧酸(5000.00mg)溶于DCM(50.00mL)，加入草酰氯(11.74mL)，加入DMF(0.03mL)，升高温度35℃，反应1小时。浓缩，加入DCM(50.00mL)，降温到0℃，加入TEA(24.11mL)，再加入3-氟吡咯烷(3091.46mg)，反应2小时。将反应混合物直接拌样，经过硅胶柱纯化(EA：PE＝1:1)得到黄色油状目标化合物4-1(6000.00mg，产率80.36％)。

步骤2：化合物4-2的合成

在室温下，在反应瓶中加入化合物4-1(6.20g)，THF(70.00mL)降温至-5℃，分批加入LAH(2.5M/THF)(1.64g)，加完过10min后恢复室温反应2h。将反应混合物移至低温下先加1.6mL的水淬灭反应，加1.6mL的15％氢氧化钠水溶液，再加4.8mL水，搅拌10min后加入无水硫酸镁，搅拌10min后过滤，滤饼用DCM洗两次，浓缩母液，用硅胶柱纯化(DCM～DCM:EA＝3:1)得到淡黄色油状目标化合物4-2(4.02g，产率80.56％)。

步骤3：化合物4-3的合成

在室温下，在干燥的反应瓶中加入无水DCM(15.00mL)，加干燥的DMSO(2.46mL)，加完氮气保护下降温至-78℃，缓慢加入2M的草酰氯(1.47mL)，加完继续在该温度下反应0.5h，取化合物4-2(2.00g)溶于DCM(15.00mL)中然后缓慢加到反应液中，加完在该温度下继续反应1h，最后加TEA(4.81mL)，加完在该温度下搅拌0.3h后恢复室温。向其中加水和DCM萃取，有机相干燥，浓缩，即得到无色液体状粗品化合物4-3(1.94g，产率98.14％)。

步骤4：化合物4-4的合成

在室温下，在反应瓶中加入上述粗品4-3(1.90g)，MeOH(20.00mL)和K

步骤5：化合物4-5的合成

在室温下，在反应瓶中加入化合物4-4(65.77mg)，化合物1-9(100.00mg)，CuI(7.48mg)，PdCl

步骤6：化合物4-6的合成

在室温下，在反应瓶中加入上述化合物4-5(23.00mg)，THF(1.00mL)和三乙胺三氢氟酸盐(0.05mL)，室温反应0.3h。将反应物直接浓缩，得到黄色油状目标化合物4-6的粗品，直接用于下一步反应。ESI-MS m/z:666[M+H]

步骤7：化合物4的合成

在室温下，向反应瓶中加入上述粗品4-6(20.00mg)，DCM(1.00mL)和TFA(1.00mL)，室温反应0.3h。先将溶剂旋干，加DCM溶解，冰浴下用碳酸氢钠水溶液调pH＝8，用DCM和MeOH萃取，有机相干燥，浓缩。浓缩物经Pre-TLC分离纯化(DCM:MeOH:氨水＝10:1：0.1)得到黄色固体状目标产物4(10.00mg，产率58.93％)。ESI-MS m/z:566[M+H]

下述的实施例采用上述方法合成，或使用相应中间体的类似方法合成。

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药理实验

实施例1:细胞p-ERK检测试验

将两种KRas-G12D突变型肿瘤细胞AGS(

p-ERK％值＝((2×磷酸化信号值)/(磷酸化信号值+总信号值))×100

根据以下公式，计算p-ERK抑制百分数：

抑制百分数＝(最大值-所测值)/(最大值-Blank)×100

(“最大值”来自0.1％DMSO对照孔，“Blank”来自空白对照孔，“所测值”来自化合物处理孔)。

利用GraphPad Prism软件进行曲线拟合并获取IC

表1

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实施例2：细胞增殖实验(AGS)

将KRas-G12D突变型肿瘤细胞AGS(

抑制百分数＝(最大值-所测值)/(最大值-Blank)×100

(“最大值”来自0.1％DMSO对照孔，“Blank”来自空白对照孔，“所测值”来自化合物处理孔)。

利用GraphPad Prism软件进行曲线拟合并获取IC

表2

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