长效胰高血糖素受体选择性肽和使用方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年4月17日提交的美国临时申请号63/011,641的权益，所述临时申请的公开内容以引用的方式整体并入本文。

发明领域

本发明涉及作为胰高血糖素受体选择性肽的化合物和制备所述化合物的方法。本发明还提供了包含本发明化合物的药学上可接受的组合物和使用所述组合物治疗各种病症的方法。

背景技术

胰高血糖素是一种由胰腺的α细胞产生的肽激素，其升高血流中葡萄糖的浓度。它的作用与降低葡萄糖浓度的胰岛素相反。当血流中的葡萄糖浓度过低时，胰腺会释放胰高血糖素。胰高血糖素使肝脏将储存的糖原转化为葡萄糖，然后释放到血流中。高血糖水平会刺激胰岛素的释放。胰岛素使得葡萄糖能够被胰岛素依赖性组织吸收和使用。因此，胰高血糖素和胰岛素是使血糖水平保持在稳定水平的反馈系统的一部分。

胰高血糖素和神经肽胰高血糖素样肽-1(GLP-1)来源于前胰高血糖素原，所述前胰高血糖素原是一种158个氨基酸的前体多肽，其在不同组织中被加工以形成许多不同的胰高血糖素原衍生肽。这些胰高血糖素原衍生肽包括例如胰高血糖素、GLP-1、胰高血糖素样肽-2(GLP-2)和胃泌酸调节素(OXM)，它们参与多种生理功能，包括葡萄糖稳态、胰岛素分泌、胃排空和肠道生长，以及食物摄入的调节。人胰高血糖素具有氨基酸序列：HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH(SEQ ID NO:300)。需要模拟胰高血糖素活性的治疗剂和疗法。

发明内容

现已发现本发明的化合物及其药学上可接受的组合物作为胰高血糖素受体选择性肽(即，胰高血糖素类似物)是有效的。此类化合物具有如下通式：

一种分离的多肽，其包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列：

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

Z-尾不存在或选自由以下组成的组：PSSGAPPPS(SEQ ID NO:90)、PSSGEPPPS(SEQID NO:91)、PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)或PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)；

其中当X

条件是所述多肽包含至少一个任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的残基；并且

其中所述分离的多肽任选地还包含经由酰胺键在赖氨酸和天冬氨酸的侧链之间或在赖氨酸和谷氨酸的侧链之间形成的内酰胺桥，其中形成所述内酰胺桥的残基位于位置X

本文表3中提供了其他示例性化合物。

本发明的化合物已被设计为获得长的消除半衰期(t

本发明的化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗与人胰高血糖素受体有关的多种疾病、病症或病状。此类疾病、病症或病状包括代谢疾病或病症，诸如2型糖尿病、肥胖症和获得体重减轻的需要。在某些实施方案中，本发明还涉及治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。

附图说明

图1描绘了用于药物递送的代表性渗透微型泵的横截面图示。

图2描绘了胰高血糖素、艾塞那肽和化合物A6(SEQ ID NO:6)针对人、食蟹猴和大鼠胰高血糖素受体和GLP-1受体的活性。

图3描绘了在快速浓注和静脉内输注后A6的血浆浓度的变化。

具体实施方式

本发明的某些实施方案的一般说明

本发明的化合物及其药物组合物可用作胰高血糖素受体的调节剂，特别是用作人胰高血糖素受体的调节剂，并且更特别是用作人胰高血糖素受体的激动剂。本发明还涉及产生和使用此类化合物，即长效胰高血糖素类似物多肽的方法。这些胰高血糖素类似物多肽在治疗代谢疾病或病症诸如2型糖尿病、肥胖症的方法中以及在提供体重减轻的方法中特别有用。在某些实施方案中，本发明还涉及治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。

在某些实施方案中，本公开提供了一种分离的多肽，其包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列：

X

定义

应理解，本文使用的术语仅是用于描述特定实施方案的目的，并且不意图具限制性。除非上下文另外明确规定，否则如本说明书和所附权利要求书中使用的单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”包括复数个指示物。因此，例如，提及“一种溶剂”包括两种或更多种此类溶剂的组合，提及“一种肽”包括一种或多种肽或肽的混合物，提及“一种药物”包括一种或多种药物，提及“一个渗透递送装置”包括一个或多个渗透递送装置等。除非特别说明或从上下文中显而易见，否则如本文所用，术语“或”应理解为包括性的并且涵盖“或”和“和”两者。

除非特别说明或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“约”应理解为在本领域的正常公差范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可以理解为在所述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％内。除非从上下文另外清楚，否则本文提供的所有数值均由术语“约”修饰。

除非特别说明或从上下文显而易见，否则如本文所用，术语“基本上”应理解为在本领域的狭窄变化范围或其他正常公差内。基本上可以理解为在所述值的5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％、0.01％或0.001％内。

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域中的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。虽然可在本发明的实践中使用类似于或等效于本文所述的那些方法和材料的其他方法和材料，但本文描述了优选的材料和方法。

在描述和要求保护本发明时，将根据下面列出的定义使用以下术语。

术语“药物”、“治疗剂”和“有益剂”可互换使用来指代递送至受试者以产生期望有益效果的任何治疗活性物质。在本发明的一个实施方案中，所述药物是多肽。在本发明的另一个实施方案中，所述药物是小分子，例如激素，诸如雄激素或雌激素。本发明的装置和方法非常适合蛋白质、小分子及其组合的递送。

术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，并且通常是指包含两个或更多个氨基酸(例如，最通常L-氨基酸，但也包括例如D-氨基酸、修饰的氨基酸、氨基酸类似物和氨基酸模拟物)的链的分子。

在一些实施方案中，天然存在的L-氨基酸由表1的常规三个字母或一个大写字母的氨基酸名称表示。在其他实施方案中，天然存在的L-氨基酸和D-氨基酸两者均由表1的常规三个字母或一个大写字母的氨基酸名称表示。在又其他实施方案中，D-氨基酸由对应于表2的一个字母名称的小写一个字母氨基酸名称表示，即a、l、m、f、w、k、q、e、s、p、v、i、c、y、h、r、n、d和t。

表1：天然存在的氨基酸

表2：小写名称指代氨基酸的D立体异构体

肽可以是天然存在的、合成产生的或重组表达的。肽还可以包含修饰氨基酸链的附加基团，例如经由翻译后修饰添加的官能团。翻译后修饰的实例包括但不限于乙酰化、烷基化(包括甲基化)、生物素化、谷氨酰化、甘氨酰化、糖基化、异戊二烯化、脂酰化、磷酸泛酰巯基乙胺化、磷酸化、硒化和C末端酰胺化。术语肽还包括包含氨基末端和/或羧基末端的修饰的肽。末端氨基的修饰包括但不限于脱氨基、N-低级烷基、N-二低级烷基和N-酰基修饰。末端羧基的修饰包括但不限于酰胺、低级烷基酰胺、二烷基酰胺和低级烷基酯修饰(例如，其中低级烷基是C

肽链一端的末端氨基酸通常具有游离氨基(即，氨基末端)。链另一端的末端氨基酸通常具有游离羧基(即，羧基末端)。通常，组成肽的氨基酸按顺序编号，从氨基末端开始并向肽的羧基末端方向增加。

如本文所用，短语“氨基酸残基”是指通过酰胺键或酰胺键模拟物掺入肽中的氨基酸。

如本文所用，术语“促胰岛素”通常是指化合物(例如，肽)刺激或影响胰岛素(例如，促胰岛素激素)的产生和/或活性的能力。此类化合物通常刺激或以其他方式影响受试者中胰岛素的分泌或生物合成。因此，“促胰岛素肽”是能够刺激或以其他方式影响胰岛素的分泌或生物合成的含有氨基酸的分子。

如本文所用，与所公开的多肽结合的术语“酰化”意指所公开的多肽被一个或多个亲脂性取代基各自任选地经由间隔基取代，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”在本文中定义。某些亲脂性取代基可各自任选地经由间隔基结合白蛋白并赋予所得酰化多肽对白蛋白的亲和力。亲脂性取代基各自任选地经由间隔基结合白蛋白并赋予所得酰化多肽对白蛋白的亲和力的程度是可变的，并且取决于许多因素。许多因素包括亲脂性取代基、任选的间隔基、多肽和与多肽共价附接的位点的特性。

如本文所用，术语“线性”或“线性多肽”是指“非酰化”多肽，换言之，所公开的胰高血糖素类似物多肽不具有各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”在本文中定义。

如本文所用，术语“缀合的”或“缀合的多肽”是指“酰化的”多肽，换言之，所公开的胰高血糖素类似物多肽具有一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”在本文中定义。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指所公开的多肽的衍生物，其中亲本多肽通过将现有的酸部分或碱部分转化为其盐形式来修饰。合适的盐的列表可见于Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)，所述文献中的每一者都以引用的方式整体并入本文。

如本文所用，术语“媒介物”是指用于携带化合物(例如，药物或含有药物的颗粒)的介质。本发明的媒介物通常包含诸如聚合物和溶剂的组分。本发明的悬浮液媒介物通常包含溶剂和聚合物，其用于制备还包含药物颗粒制剂的悬浮液制剂。

如本文所用，短语“相分离”是指诸如当悬浮液媒介物接触水性环境时，在悬浮液媒介物中形成多个相(例如，液相和凝胶相)。在本发明的一些实施方案中，悬浮液媒介物被配制成在与具有小于大约10％的水的水性环境接触时表现出相分离。

如本文所用，短语“单相”是指整体上物理和化学均匀的固体、半固体或液体均质系统。

如本文所用，术语“分散的”是指在悬浮液媒介物中溶解、分散、悬浮或以其他方式分布化合物，例如药物颗粒制剂。

如本文所用，短语“化学稳定的”是指在制剂中形成可接受百分比的降解产物，所述降解产物在规定的时间段内通过化学途径诸如脱酰胺(通常通过水解)、聚集或氧化产生。

如本文所用，短语“物理稳定的”是指在制剂中形成可接受百分比的聚集体(例如，二聚体和其他更高分子量的产物)。此外，物理稳定的制剂不会改变其物理状态，例如像从液体到固体，或从无定形到晶体形式。

如本文所用，术语“粘度”通常是指基本上如下由剪切应力与剪切速率的比率确定的值(参见，例如，Considine，D.M.和Considine，G.D.，Encyclopedia of Chemistry，第4版，Van Nostrand，Reinhold，N.Y.，1984)：

F/A＝μ*V/L (等式1)

其中F/A＝剪切应力(每单位面积的力)，

μ＝比例常数(粘度)，并且

V/L＝每层厚度的速度(剪切速率)。

根据这种关系，剪切应力与剪切速率的比率定义了粘度。剪切应力和剪切速率的测量值通常使用在选定条件(例如，约37℃的温度)下进行的平行板流变测定来确定。用于确定粘度的其他方法包括使用粘度计测量运动粘度，所述粘度计例如Cannon-Fenske粘度计、用于Cannon-Fenske不透明溶液的Ubbelohde粘度计或Ostwald粘度计。通常，本发明的悬浮液媒介物具有足以防止悬浮于其中的颗粒制剂在储存和递送方法(例如，植入式药物递送装置)中使用期间沉降的粘度。

如本文所用，术语“非水性”是指例如悬浮液制剂的总水分含量通常小于或等于约10重量％，例如，小于或等于约7重量％、小于或等于约5重量％和/或小于约4重量％。此外，本发明的颗粒制剂包含小于约10重量％，例如小于约5重量％的残留水分。

如本文所用，术语“受试者”是指脊索动物亚门的任何成员，包括但不限于人和其他灵长类动物，包括非人灵长类动物，诸如恒河猴和其他猴子物种以及黑猩猩和其他猿物种；农场动物，诸如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养哺乳动物，诸如狗和猫；实验动物，包括诸如小鼠、大鼠和豚鼠的啮齿动物；鸟类，包括家禽、野生鸟类和猎鸟，诸如鸡、火鸡和其他鸡类鸟类、鸭、鹅等。所述术语不表示特定的年龄或性别。因此，预期涵盖成人个体和新生儿个体两者。

如本文所用，术语“治疗(treatment/treat/treating)”是指逆转、减轻疾病或病症或其一种或多种症状、延迟其发作或抑制其进展，如本文所述。在一些实施方案中，可以在一种或多种症状出现后施用治疗。在其他实施方案中，可以在不存在症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前(例如，根据症状病史和/或根据遗传因素或其他易感因素)向易感个体施用治疗。也可以在症状消退后继续治疗，例如以便预防或延迟其复发。

如本文所用，术语“渗透递送装置”通常是指用于将药物(例如，所公开的胰高血糖素类似物多肽)递送至受试者的装置，其中所述装置包括例如储液器(例如，由一种钛合金制成)，其具有容纳包含药物(例如，所公开的胰高血糖素类似物多肽)的悬浮液制剂和渗透剂制剂的腔。位于腔中的活塞组件将悬浮液制剂与渗透剂制剂分开。半透膜位于储液器的与渗透剂制剂相邻的第一远端，并且扩散调节器(其限定了悬浮液制剂离开装置时所通过的递送孔)位于储液器的与悬浮液制剂相邻的第二远端。通常，渗透递送装置被植入受试者体内，例如，真皮下(subdermally)或皮下(subcutaneously)植入(例如，在上臂的内侧、外侧或背部以及腹部区域中)。示例性渗透递送装置是

如本文所用，术语“连续递送”通常是指药物从渗透递送装置中基本上连续释放并进入植入部位附近的组织例如真皮下(subdermal)和皮下(subcutaneous)组织中。例如，渗透递送装置基于渗透原理基本上以预定速率释放药物。细胞外液通过半透膜进入渗透递送装置，直接进入渗透发动机，所述渗透发动机膨胀来以缓慢且一致的运行速度驱动活塞。活塞的运动使药物制剂通过扩散调节器的孔释放。因此，药物从渗透递送装置释放的速率是缓慢的、受控的、一致的。

如本文所用，术语“基本稳态递送”通常是指在规定的时间段内以目标浓度或接近目标浓度递送药物，其中从渗透递送装置递送的药物量基本上是零级递送。活性剂(例如，所公开的胰高血糖素类似物多肽)的基本零级递送意指药物递送速率是恒定的并且与递送系统中可用的药物无关；例如，对于零级递送，如果将药物递送速率针对时间作图并且用一条线拟合数据，则所述线的斜率近似为零，如通过标准方法(例如，线性回归)所确定。

如本文所用，短语“药物半衰期”是指药物从血浆中消除其浓度的一半需要花费的时间。药物的半衰期通常通过监测药物在经由注射或静脉内施用时的降解方式来测量。药物通常使用例如放射免疫测定法(RIA)、色谱法、电化学发光(ECL)测定法、酶联免疫吸附测定法(ELISA)或免疫酶促夹心测定法(IEMA)来检测。

术语“μg”和“mcg”和“ug”应理解为意指“微克”。类似地，术语“μl”和“uL”应理解为意指“微升”，并且术语“μM”和“uM”应理解为意指“微摩尔”。

术语“血清”意在意指可以从中检测物质的任何血液产品。因此，术语血清至少包括全血、血清和血浆。例如，“受试者血清中[物质]的量”将涵盖“受试者血浆中[所述物质]的量”。

基线被定义为在最初放置渗透递送装置(含有药物或安慰剂)当天或当天之前的最后一次评估。

示例性化合物：胰高血糖素类似物多肽

某些公开的胰高血糖素类似物多肽，包括下表3中的那些，表现出以下中的一者或多者：优异的溶解度、稳定性、生物利用度、生物活性和特异性；以及比内源胰高血糖素和已知胰高血糖素类似物长的半衰期。开发了某些公开的胰高血糖素类似物多肽以适应比已知胰高血糖素类似物所需的施用频率更少的施用频率。开发了某些公开的胰高血糖素类似物多肽用于经由每周或每月注射施用。开发了某些公开的胰高血糖素类似物多肽用于经由植入包含胰高血糖素类似物多肽的递送装置来施用，其中递送装置包含长达3个月、6个月、9个月、一年、18个月或两年的胰高血糖素类似物多肽剂量。

在一些实施方案中，本公开的分离的多肽包含选自由表3中所列出的以下肽组成的组的氨基酸序列：

表3：示例性化合物：胰高血糖素类似物多肽，其任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基。

/>

/>

/>

Aib是2-氨基异丁酸

K

表3的某些肽的结构表示在下表4中提供：

表4：示例性肽的化学结构：胰高血糖素类似物多肽，其包含经由间隔基的亲脂性取代基，所述多肽的两个肽还包含桥接部分。

/>

/>

注意：

·K

·如本文所用，dpeg表示-COCH

·氨基末端氨基酸，即Y

·羧基末端氨基酸，即S

·羧基末端氨基酸，即S

在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:1至60组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:1至39组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:3、6、21和24组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供了一种上表3中所列出的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供了一种分离的多肽，其包含选自由SEQ ID NO:1至60组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供了一种分离的多肽，其包含选自由SEQ ID NO:1至39组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是乙酸盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是三氟乙酸(TFA)盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是盐酸(HCl)盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一些实施方案中，本公开的分离的多肽包含选自由表5中所列出的以下肽组成的组的氨基酸序列：

表5：示例性化合物：胰高血糖素类似物多肽，其任选地包含任选地经由间隔基的亲脂性取代基；并且任选还包含桥接部分。

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/>

/>

在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142-147和149-160组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:101至112和115至139组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:103、106、121和124组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，本发明提供了一种上表5中所阐述的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供了一种分离的多肽，其包含选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147和149至160组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本发明提供了一种分离的多肽，其包含选自由SEQ ID NO:101至112和115至139组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是乙酸盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是三氟乙酸(TFA)盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是盐酸(HCl)盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:124的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

在一些实施方案中，本公开的分离的多肽包含选自由表6中所列出的以下肽组成的组的氨基酸序列：

表6：示例性化合物：胰高血糖素类似物多肽，其任选地经由间隔基任选地共价结合至亲脂性取代基

/>

注意：

·K

在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:211、212、221、225至235、238至245、251、252和255至258组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含选自由SEQ ID NO:211、212、221、225至235、238和239组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:211的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:212的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:225的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:226的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:227的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:228的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:229的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:230的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:231的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:232的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:233的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:234的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ ID NO:235的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ IDNO:238的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，分离的多肽包含SEQ IDNO:239的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，药学上可接受的盐是乙酸盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是三氟乙酸(TFA)盐。在一些实施方案中，药学上可接受的盐是盐酸(HCl)盐。

在一个实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的分离的多肽的乙酸盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的分离的多肽的TFA盐。在一些实施方案中，化合物是包含SEQ ID NO:221的氨基酸序列的分离的多肽的HCl盐。

示例性实施方案的描述

在某些实施方案中，本公开提供了一种分离的多肽，其包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列：

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

Z-尾不存在或选自由以下组成的组：PSSGAPPPS(SEQ ID NO:90)、PSSGEPPPS(SEQID NO:91)、PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)或PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)；

其中当X

条件是所述多肽包含至少一个任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的残基；并且

其中所述分离的多肽任选地还包含经由酰胺键在赖氨酸和天冬氨酸的侧链之间或在赖氨酸和谷氨酸的侧链之间形成的内酰胺桥，其中形成所述内酰胺桥的残基位于位置X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，肽还包含经由酰胺键分别在位置X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

如本文所用，Aib是指2-氨基异丁酸，或者称为α-氨基异丁酸、α-甲基丙氨酸或2-甲基丙氨酸。

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，Z-尾不存在。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGAPPPS(SEQ IDNO:90)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGEPPPS(SEQ ID NO:91)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)。

关于由SEQ ID NO:80的共有序列表示的特定氨基酸的某些实施方案如下：

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

关于由SEQ ID NO:80的共有序列表示的特定氨基酸的某些实施方案如下：

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在某些实施方案中，本公开提供了一种分离的多肽，其包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列：X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

X

Z-尾不存在或选自由以下组成的组：PSSGAPPPS(SEQ ID NO:90)、PSSGEPPPS(SEQID NO:91)、PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)或PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)；

其中当X

条件是所述多肽包含至少一个任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的残基；并且

其中所述分离的多肽任选地还包含经由酰胺键在赖氨酸和天冬氨酸的侧链之间或在赖氨酸和谷氨酸的侧链之间形成的内酰胺桥，其中形成所述内酰胺桥的残基位于位置X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，肽还包含经由酰胺键分别在位置X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，Z-尾不存在。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGAPPPS(SEQ IDNO:90)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGEPPPS(SEQ ID NO:91)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)。

关于由SEQ ID NO:81的共有序列表示的特定氨基酸的某些实施方案如下：

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

关于由SEQ ID NO:81的共有序列表示的特定氨基酸的某些实施方案如下：

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在某些实施方案中，本公开提供了一种分离的多肽，其包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列：X

X

X

X

X

X

X

X

X

Z-尾不存在或选自由以下组成的组：PSSGAPPPS(SEQ ID NO:90)、PSSGEPPPS(SEQID NO:91)、PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)或PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)；

其中当X

条件是所述多肽包含至少一个任选地经由间隔基共价结合至亲脂性取代基的残基；并且

其中所述分离的多肽任选地还包含经由酰胺键在赖氨酸和天冬氨酸的侧链之间或在赖氨酸和谷氨酸的侧链之间形成的内酰胺桥，其中形成所述内酰胺桥的残基位于位置X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，当X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，肽还包含经由酰胺键分别在位置X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，Z-尾不存在。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGAPPPS(SEQ IDNO:90)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGEPPPS(SEQ ID NO:91)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGKPPPS(SEQ ID NO:92)。在一些实施方案中，Z-尾是PSSGSPPPS(SEQ ID NO:93)。

关于由SEQ ID NO:82的共有序列表示的特定氨基酸的某些实施方案如下：

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

关于由SEQ ID NO:82的共有序列表示的特定氨基酸的某些实施方案如下：

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

在一些实施方案中，X

任选地经由间隔基使亲脂性取代基缀合至任何肽

在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者任选地被一个或多个亲脂性取代基各自任选地经由间隔基取代，其中“亲脂性取代基”和“间隔基”在本文中定义。在一些实施方案中，包含选自由以SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:60的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者包含一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基，或者可以通过一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基的共价附接而被修饰或进一步被修饰。在一些实施方案中，包含选自由以SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:39的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者包含一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基，或者可以通过一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基的共价附接而被修饰或进一步被修饰。在一些实施方案中，包含选自由以SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147或149-160的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者可以通过一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基的共价附接而被修饰。在一些实施方案中，包含选自由以SEQ ID NO:101至SEQ ID NO:112或SEQ ID NO:115至SEQ IDNO:139的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者可以通过一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基的共价附接而被修饰。在一些实施方案中，包含选自由以SEQ ID NO:211、212、221、225至235、238至245、251、252或255至258的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者可以通过一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基的共价附接而被修饰。在一些实施方案中，包含选自由以SEQ ID NO:211、212、221、225至235、238或239的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者可以通过一个或多个各自任选地经由间隔基的亲脂性取代基的共价附接而被修饰。在一些实施方案中，亲脂性取代基可以通过亲脂性取代基的羧基附接至多肽的氨基(例如，赖氨酸残基的ε-氨基)，或任选地附接至间隔基的氨基，其中间隔基的羧基与赖氨酸残基的ε-氨基形成酰胺键。

亲脂性取代基

使一个或多个“亲脂性取代基”各自任选地经由“间隔基”缀合至本发明的所公开的多肽中的任一者意图通过促进与血清白蛋白的结合并延迟缀合的多肽的肾清除率来延长多肽的作用。如本文所用，“亲脂性取代基”包括包含4至40个碳原子、8至25个碳原子、12至22个碳原子或6至20个碳原子的取代基。亲脂性取代基可以通过亲脂性取代基的羧基附接至多肽的氨基(例如，赖氨酸残基的ε-氨基)，或任选地附接至间隔基的氨基，其中间隔基的羧基又与它所附接的氨基酸(例如，赖氨酸)残基的氨基形成酰胺键。在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有或不具有任选间隔基的亲脂性取代基，所述间隔基在下文更详细地定义。

在一些实施方案中，亲脂性取代基包括直链或支链烷基。在一些实施方案中，亲脂性取代基是直链或支链脂肪酸的酰基。在一些实施方案中，亲脂性取代基是直链或支链脂肪酸的酰基，其进一步被一个或多个羧酸基团和/或异羟肟酸基团取代。

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自不具有任选间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基是-CO(CH

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自不具有任选间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基是式I的单价基团：

-CO-(CH

式I

其中

Z是-CH

m是4至24，

其中亲脂性取代基在所公开的多肽的氨基(例如，赖氨酸的ε-氨基)与亲脂性取代基的CO-基团之间形成酰胺键。

在一些实施方案中，Z是-CO

在一些实施方案中，m选自由4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20组成的组。

在一些实施方案中，Z是-CO

在一些实施方案中，亲脂性取代基是-CO-(CH

在一些实施方案中，Z是-CH

亲脂性取代基和间隔基

在一些实施方案中，亲脂性取代基通过“间隔基”附接至亲本肽。在一些实施方案中，本文提供了包含选自由以SEQ ID NO:1至60、101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252或255至258的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列的所公开的多肽中的任一者，其包含亲脂性取代基，其中亲脂性取代基经由间隔基连接至赖氨酸的ε-氨基，所述间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，本文提供了所公开的多肽中的任一者，其包含选自由以SEQ ID NO:1至39、101至112、115至139、211、212、221、225至235、238或239的共有序列中的任一者表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，其包含亲脂性取代基，其中亲脂性取代基经由间隔基连接至赖氨酸的ε-氨基，所述间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

在一些实施方案中，间隔基包含一个或多个氨基酸，例如，单个氨基酸诸如Glu、Asp、Gly或Lys，二肽诸如2(Glu)、Glu-Gly，或者多肽诸如3(Glu)、4(Glu)、2(Glu)-Gly等。在一些实施方案中，当间隔基包含一个或多个氨基酸(例如，Glu、Asp、Gly或Lys)时，间隔基的一个羧基可以与所公开的多肽的氨基形成酰胺键，并且间隔基的氨基可以与亲脂性取代基的羧基形成酰胺键。

在一些实施方案中，当间隔基包含Glu或Asp(所述间隔基还包含羧酸终止侧链(carboxylic acid-terminating sidechain))时，含有Glu或Asp的间隔基的侧链的末端羧基可以与所公开的多肽的氨基形成酰胺键，并且含有Glu或Asp的间隔基的氨基可以与亲脂性取代基即γGlu或βAsp的羧基形成酰胺键。

在一些实施方案中，间隔基是-γGlu-γGlu-dpeg-。在一些实施方案中，间隔基是-γGlu-γGlu-dpeg-γGlu-γGlu-。在一些实施方案中，间隔基是-[COCH

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些非限制性实施方案中，亲脂性取代基和间隔基形成选自由表7中所列出的那些组成的组的单价基团：

表7：代表性亲脂性取代基和间隔基部分

优选地，亲脂性取代基和间隔基附接至多肽的氨基。特别地，亲脂性取代基的羧基或任选地间隔基的羧基与赖氨酸残基的ε-氨基形成酰胺键。任选地经由间隔基结合至亲脂性取代基的赖氨酸残基可以是L-赖氨酸或D-赖氨酸。表8中提供了代表性间隔基部分和亲脂性取代基的结构表示：

表8：结合至赖氨酸的代表性间隔基部分和亲脂性取代基的结构

/>

在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基形成式II的单价基团：

-(Y)

式II

其中

Y选自由γGlu、Asp、Lys和Gly组成的组；

Z是-CH

m是4至24；并且

n是1至10。

在一些实施方案中，Z是-CO

在一些实施方案中，Y选自由γGlu和Gly组成的组。在一些实施方案中，Y是γGlu。在一些实施方案中，Y是Gly。

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式III的单价基团：

-(V)

式III

其中，

V是-[COCH

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Z是-CH

m是4至24；

n是1至10；

r是1至6；并且

t是1至6。

在一些实施方案中，Z是-CO

在一些实施方案中，Y是γGlu。在一些实施方案中，Y是Asp。在一些实施方案中，Y是Gly。

在一些实施方案中，m选自由4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20组成的组。在一些实施方案中，m是14至20。

在一些实施方案中，n选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n是1至5。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。

在一些实施方案中，r是1至3。在一些实施方案中，r是1。在一些实施方案中，r是2。在一些实施方案中，r是3。在一些实施方案中，r是4。在一些实施方案中，r是5。

在一些实施方案中，t是1至3。在一些实施方案中，t选自由1、2、3、4、5和6组成的组。

在一些实施方案中，Y是γGlu；Z是-CO

在一个实施方案中，-(V)

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式IV的单价基团：

-(Y1)

式IV

其中

Z是-CH

m是4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg是-[CO(CH

r是1至8；

n1是0至10；并且

n2是0至10。

在一些实施方案中，Z是-CO

在一些实施方案中，m选自由4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20组成的组。在一些实施方案中，m是14至20。

在一些实施方案中，Y1是γGlu。在一些实施方案中，Y1是Asp。在一些实施方案中，Y1是Gly。

在一些实施方案中，Y2是γGlu。在一些实施方案中，Y2是Asp。在一些实施方案中，Y2是Gly。

在一些实施方案中，n1选自由0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n1是0至3。在一些实施方案中，n1是0。在一些实施方案中，n1是1。在一些实施方案中，n1是2。在一些实施方案中，n1是3。在一些实施方案中，n1是4。在一些实施方案中，n1是5。

在一些实施方案中，n2选自由0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n2是0至3。在一些实施方案中，n2是0。在一些实施方案中，n2是1。在一些实施方案中，n2是2。在一些实施方案中，n2是3。在一些实施方案中，n2是4。在一些实施方案中，n2是5。

在一些实施方案中，r是1至3。在一些实施方案中，r是1。在一些实施方案中，r是2。在一些实施方案中，r是3。在一些实施方案中，r是4。在一些实施方案中，r是5。在一些实施方案中，r是6。在一些实施方案中，r是7。在一些实施方案中，r是8。

在一些实施方案中，r是1，n1是2并且n2是0。

在一些实施方案中，r是1，n1是2并且n2是2。

在一些实施方案中，Y1是γGlu并且Y2是γGlu。

在一些实施方案中，Y1是γGlu并且n2是0。

在一些实施方案中，Y1是γGlu，r是1，n1是2并且n2是0。

在一些实施方案中，-(Y1)

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式V的单价基团：

-(γGlu)

式V

其中

Z是-CH

m是4至24；并且

n是1至10。

在一些实施方案中，Z是-CH

在一些实施方案中，m是14至20。

在一些实施方案中，m选自由4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20组成的组。

在一些实施方案中，n选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式VI的单价基团：

-(γGlu)

式VI

其中

Z是-CH

m是4至24；并且

n是1至10。

在一些实施方案中，(γGlu)

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式VII的单价基团：

-(Gly)-(γGlu)

式VII

其中

Z是-CH

m是4至24；并且

n是1至10。

在一些实施方案中，在某些前述式中表示的某些变量包括以下：

在一些实施方案中，Z是-CH

在一些实施方案中，m选自由4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20组成的组。

在一些实施方案中，n选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。

在一些实施方案中，n是1并且Z是-CO

在一些实施方案中，n是1，Z是-CO

在一些实施方案中，n是1，Z是-CH

在一些实施方案中，n是2，Z是-CO

在一些实施方案中，n是2，Z是-CH

在一些实施方案中，n是3，Z是-CO

在一些实施方案中，n是3，Z是-CH

在一些实施方案中，n是4，Z是-CO

在一些实施方案中，n是4，Z是-CH

在一些实施方案中，n是5，Z是-CO

在一些实施方案中，n是5，Z是-CH

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式VIII的单价基团：

-(Y1)

式VIII

其中

Z是-CH

m是4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

V是-[COCH

r是1至6；

n1是0至10；

n2是0至10；并且

t是1至6。

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式IX的单价基团：

-(Y)

式IX

其中

Z是-CH

m是4至24；

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

V是-[COCH

r是1至6；并且

n是1至10；并且

t是1至6。

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式X的单价基团：

-(dpeg)

式X

其中

Z是-CH

m是4至24；

dpeg是-[CO(CH

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

r是1至8；并且

n2是0至10。

在一些实施方案中，-(dpeg)

在一个实施方案中，-(dpeg)

在一些实施方案中，多肽包含三个、两个或优选地一个各自具有间隔基的亲脂性取代基。在一些实施方案中，亲脂性取代基和间隔基是式XI的单价基团：

-(Y1)

式XI

其中

Z是-CH

m是4至24；

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg是-[CO(CH

r是1至8；并且

n1是0至10。

在一些实施方案中，Z是-CO

在一些实施方案中，m选自由4-20、8-20、12-20、14-20、16-20、14、16、18和20组成的组。在一些实施方案中，m是14至20。

在一些实施方案中，Y1是γGlu。在一些实施方案中，Y1是Asp。在一些实施方案中，Y1是Gly。

在一些实施方案中，n1选自由0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n1是0至3。在一些实施方案中，n1是0。在一些实施方案中，n1是1。在一些实施方案中，n1是2。在一些实施方案中，n1是3。在一些实施方案中，n1是4。在一些实施方案中，n1是5。

在一些实施方案中，r是1至3。在一些实施方案中，r是1。在一些实施方案中，r是2。在一些实施方案中，r是3。在一些实施方案中，r是4。在一些实施方案中，r是5。在一些实施方案中，r是6。在一些实施方案中，r是7。在一些实施方案中，r是8。

在一些实施方案中，r是1并且n1是2。

在一些实施方案中，Y1是γGlu，r是1并且n1是2。

在一些实施方案中，-(Y1)

其他示例性间隔基

在一些实施方案中，间隔基包含式XII的二价基团：

–N(R

式XII

其中

每个R

每个R

p是1、2、3、4、5或6；

q是1、2或3；

r是0或1。

所述间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

在一些实施方案中，间隔基包含式XIII的二价基团：

[-N(R

式XIII

其中

每个R

q是1、2或3；

r是0或1。

所述间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。

在一些实施方案中，在某些式中表示的某些变量包括以下：

在一些实施方案中，每个R

在一些实施方案中，至少一个R

在一些实施方案中，p是1。在一些实施方案中，p是2。在一些实施方案中，p是3。在一些实施方案中，p是4。在一些实施方案中，p是5。在一些实施方案中，p是6。

在一些实施方案中，q是1。在一些实施方案中，q是2。在一些实施方案中，q是3。

在一些实施方案中，r是0。在一些实施方案中，r是1。

在一些实施方案中，间隔基是γ-谷氨酰基，即-NH(CHCO

在一些实施方案中，间隔基是–NHCH(CO

在一些实施方案中，间隔基包含式XIV的二价基团：

-(Y)

式XIV

其中

Y选自由γGlu、Asp、Lys和Gly组成的组；

n是1至10。

在一些实施方案中，Y选自由γGlu和Gly组成的组。在一些实施方案中，Y是γGlu。在一些实施方案中，Y是Gly。

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键，并且间隔基的另一端与氢原子或保护基团形成共价键。

在一些实施方案中，间隔基包含式XV的二价基团：

-(γGlu)

式XV

其中

n是1至10。

在一些实施方案中，n选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键，并且间隔基的另一端与氢原子或保护基团形成共价键。

在一些实施方案中，间隔基包含式XVI的二价基团：

-(γGlu)

式XVI

其中

n是1至10。

在一些实施方案中，(γGlu)

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键，并且间隔基的另一端与氢原子或保护基团形成共价键。

在一些实施方案中，间隔基包含式XVII的二价基团：

-(Gly)-(γGlu)

式XVII

其中

n是1至10。

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键，并且间隔基的另一端与氢原子或保护基团形成共价键。

在一些实施方案中，n选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。

在一些实施方案中，间隔基包含式XVIII的二价基团：

-(V)

式XVIII

其中

Y选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

V是-[COCH

r是1至6；

n是1至10；并且

t是1至6。

在一些实施方案中，Y是γGlu。在一些实施方案中，Y是Asp。在一些实施方案中，Y是Gly。

在一些实施方案中，n选自由1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n是1至5。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。

在一些实施方案中，r是1至3。在一些实施方案中，r是1。在一些实施方案中，r是2。在一些实施方案中，r是3。在一些实施方案中，r是4。在一些实施方案中，r是5。

在一些实施方案中，t是1至3。在一些实施方案中，t选自由1、2、3、4、5和6组成的组。

在一个实施方案中，-(V)

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键，并且间隔基的另一端与氢原子或保护基团形成共价键。

在一些实施方案中，间隔基包含式XIX的二价基团：

-(Y1)

式XIX

其中

Y1选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

Y2选自由γGlu、Asp和Gly组成的组；

dpeg是-[CO(CH

r是1至8；

n1是0至10；并且

n2是0至10。

在一些实施方案中，Y1是γGlu。在一些实施方案中，Y1是Asp。在一些实施方案中，Y1是Gly。

在一些实施方案中，Y2是γGlu。在一些实施方案中，Y2是Asp。在一些实施方案中，Y2是Gly。

在一些实施方案中，n1选自由0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n1是0至3。在一些实施方案中，n1是0。在一些实施方案中，n1是1。在一些实施方案中，n1是2。在一些实施方案中，n1是3。在一些实施方案中，n1是4。在一些实施方案中，n1是5。

在一些实施方案中，n2选自由0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10组成的组。在一些实施方案中，n2是0至3。在一些实施方案中，n2是0。在一些实施方案中，n2是1。在一些实施方案中，n2是2。在一些实施方案中，n2是3。在一些实施方案中，n2是4。在一些实施方案中，n2是5。

在一些实施方案中，r是1至3。在一些实施方案中，r是1。在一些实施方案中，r是2。在一些实施方案中，r是3。在一些实施方案中，r是4。在一些实施方案中，r是5。在一些实施方案中，r是6。在一些实施方案中，r是7。在一些实施方案中，r是8。

在一些实施方案中，r是1，n1是2并且n2是0。

在一些实施方案中，r是1，n1是2并且n2是2。

在一些实施方案中，Y1是γGlu并且Y2是γGlu。

在一些实施方案中，Y1是γGlu并且n2是0。

在一些实施方案中，Y1是γGlu，r是1，n1是2并且n2是0。

在一些实施方案中，-(Y1)

在一些实施方案中，间隔基在所公开的多肽的氨基与亲脂性取代基的CO-基团之间形成桥。在一些实施方案中，间隔基的一端与所公开的多肽的氨基形成共价键，并且间隔基的另一端与氢原子或保护基团形成共价键。

因此，在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ IDNO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基，并且任选地包含间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基，并且任选地包含间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基式I。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含式I的亲脂性取代基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含式I的亲脂性取代基和选自由以式XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII和XIX描述的那些组成的组的间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含式I的亲脂性取代基和选自由以式XII、XIII、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII和XIX描述的那些组成的组的间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X和XI描述的那些组成的组的间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII、IX、X和XI描述的那些组成的组的间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式I描述的那些组成的组的间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式I描述的那些组成的组的间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式II描述的那些组成的组的间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式II描述的那些组成的组的间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式III描述的那些组成的组的间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式III描述的那些组成的组的间隔基。

在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式IV描述的那些组成的组的间隔基。在一些实施方案中，本文提供的分离的多肽包含选自由以共有序列表示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列，或其药学上可接受的盐，所述共有序列选自由SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255-258组成的组，其中分离的肽还包含亲脂性取代基和选自由以式IV描述的那些组成的组的间隔基。

如本文所用，(γGlu)

桥接部分

在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者任选地被一个或多个桥接部分取代。如本文所用，术语“桥接部分”意指接合两个单独氨基酸残基的两个侧链的共价键或任何二价接头或部分。在一些实施方案中，所公开的多肽中的任一者任选地被一个或多个内酰胺桥接部分取代。如本文所用，术语“内酰胺桥接部分”意指接合两个单独氨基酸残基的含氨基侧链和含羧基侧链的内酰胺桥或内酰胺键。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分在赖氨酸残基与天冬氨酸残基之间形成，并且赖氨酸的含氨基侧链和天冬氨酸的含羧基侧链共价接合，失去水，以形成内酰胺桥接部分。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分在赖氨酸残基与谷氨酸残基之间形成，并且赖氨酸的含氨基侧链和谷氨酸的含羧基侧链共价接合，失去水，以形成内酰胺桥接部分。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分在肽上被三个、四个或五个残基间隔开的两个氨基酸之间形成。在一些实施方案中，内酰胺桥接部分在肽上被四个残基间隔开的两个氨基酸之间形成。

多肽中间体和提供本发明化合物的一般方法

本发明的化合物通常可以通过本领域技术人员对于类似化合物已知的合成和/或半合成方法以及通过本文实施例中详细描述的方法来制备或分离。

在描绘了特定保护基团(“PG”)、离去基团(“LG”)或转化条件的以下方案中，本领域普通技术人员将了解其他保护基团、离去基团和转化条件也是合适的并且被考虑。这些基团和转化在March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,M.B.Smith和J.March,第5版,John Wiley&Sons,2001；Comprehensive OrganicTransformations,R.C.Larock,第2版,John Wiley&Sons,1999；以及Protecting Groupsin Organic Synthesis,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons,1999中详细描述，所述文献中的每一者的整体内容特此以引用的方式并入本文。

如本文所用，短语“离去基团”(LG)包括但不限于卤素(例如氟化物、氯化物、溴化物、碘化物)、磺酸酯(例如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对硝基苯磺酸酯(nosylate)、三氟甲磺酸酯)、重氮化合物等。

如本文所用，短语“氧保护基团”包括例如羰基保护基团、羟基保护基团等。羟基保护基团是本领域公知的并且包括在Protecting Groups in Organic Synthesis,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons,1999中详细描述的那些，所述文献的整体内容以引用的方式并入本文。合适的羟基保护基团的实例包括但不限于酯(例如，乙酰基、苄基)、烯丙基醚、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚、苄基醚和烷氧基烷基醚。此类酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具体实例包括甲酸酯、甲酸苯甲酰酯(benzoyl formate)、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4,4-(亚乙基二硫代)戊酸酯、新戊酸(三甲基乙酰基)酯(pivaloate(trimethylacetyl))、巴豆酸酯、4-甲氧基-巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苄基苯甲酸酯(p-benylbenzoate)、2,4,6-三甲基苯甲酸酯、碳酸酯(诸如碳酸甲酯、碳酸9-芴基甲基酯、碳酸乙酯、碳酸2,2,2-三氯乙基酯、碳酸2-(三甲基甲硅烷基)乙酯、碳酸2-(苯磺酰基)乙酯、碳酸乙烯酯、碳酸烯丙酯和碳酸对硝基苄酯)。此类甲硅烷基醚的实例包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基和其他三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基醚、苄基醚、对甲氧基苄基醚、3,4-二甲氧基苄基醚、三苯甲基醚、叔丁基醚、烯丙基醚和烯丙氧基羰基醚或它们的衍生物。烷氧基烷基醚包括缩醛诸如甲氧基甲基醚、甲硫基甲基醚、(2-甲氧基乙氧基)甲基醚、苄氧基甲基醚、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基醚和四氢吡喃醚。芳烷基醚的实例包括苄基醚、对甲氧基苄基醚(MPM)、3,4-二甲氧基苄基醚、邻硝基苄基醚、对硝基苄基醚、对卤代苄基醚、2,6-二氯苄基醚、对氰基苄基醚以及2-吡啶甲基醚和4-吡啶甲基醚。

氨基保护基团是本领域公知的并且包括在Protecting Groups in OrganicSynthesis,T.W.Greene和P.G.M.Wuts,第3版,John Wiley&Sons,1999中详细描述的那些，所述文献的整体内容以引用的方式并入本文。合适的氨基保护基团包括但不限于芳烷基胺、氨基甲酸酯、环状酰亚胺、烯丙基胺、酰胺等。此类基团的实例包括叔丁氧羰基(Boc)、乙氧羰基、甲氧羰基、三氯乙氧羰基、烯丙氧羰基(Alloc)、苄氧羰基(Cbz)、烯丙基、邻苯二甲酰亚胺、苄基(Bn)、二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)乙基(Dmb)、1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基(ivDde)、芴基甲基羰基(Fmoc)、甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、苯乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。

在某些实施方案中，本发明还涉及所公开的胰高血糖素类似物的合成肽中间体。在一些实施方案中，本公开的多肽中间体是包含SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239中任一者的氨基酸序列的分离的多肽，其中至少一个氨基酸共价结合至保护基团。在一些实施方案中，本公开的多肽中间体是包含SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255至258中任一者的氨基酸序列的分离的多肽，其中至少一个氨基酸共价结合至保护基团。

在一些实施方案中，本公开的多肽中间体是包含SEQ ID NO:101至112、115至139、211、212、221、225至235、238和239中任一者的氨基酸序列的分离的多肽，其中至少一个氨基酸共价结合至如本文定义的间隔基，其中所述间隔基进一步共价结合至保护基团或氢原子。在一些实施方案中，本公开的多肽中间体是包含SEQ ID NO:101至112、115至140、142至147、149至160、211、212、221、225至235、238至245、251、252和255至258中任一者的氨基酸序列的分离的多肽，其中至少一个氨基酸共价结合至如本文定义的间隔基，其中所述间隔基进一步共价结合至保护基团或氢原子。在一些实施方案中，多肽中间体包含经由其侧链的氨基结合至保护基团的赖氨酸残基。在一些实施方案中，赖氨酸残基共价结合至Alloc或ivDde。在一些实施方案中，多肽中间体包含经由其侧链的羧基结合至保护基团的天冬氨酸残基。在一些实施方案中，天冬氨酸残基共价结合至烯丙基。在一些实施方案中，多肽中间体包含经由其侧链的羧基结合至保护基团的谷氨酸残基。在一些实施方案中，谷氨酸残基共价结合至烯丙基。

使用方法

根据另一个实施方案，本发明涉及一种治疗需要治疗的受试者的代谢疾病或病症的方法，其包括向所述受试者提供有效量的本公开的胰高血糖素类似物多肽或其药物组合物。代谢疾病或病症包括1型糖尿病、2型糖尿病和肥胖症。此外，本发明涉及一种实现受试者(包括糖尿病受试者)的体重减轻的方法，其包括向所述受试者提供有效量的本公开的胰高血糖素类似物多肽。在某些实施方案中，本发明还涉及治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人受试者的肥胖症、向人受试者提供体重减轻或抑制人受试者的食欲的方法，其包括向所述受试者施用本文公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人受试者的糖尿病的方法，其包括向所述受试者施用本文公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。在一些实施方案中，糖尿病是1型糖尿病。在一些实施方案中，糖尿病是2型糖尿病。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人受试者的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的方法，其包括向所述受试者施用本文公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。

在一些实施方案中，提供了一种治疗人受试者的非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法，其包括向所述受试者施用本文公开的多肽中的任一者、包含所公开的多肽中的任一者的药物组合物或包含所公开的多肽中的任一者的渗透递送装置。

本公开的胰高血糖素类似物多肽特别可用于治疗糖尿病，所述方法包括向糖尿病受试者提供有效量的胰高血糖素类似物多肽。在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有1型或2型糖尿病的受试者以控制或降低受试者的血糖浓度，其中血糖水平可以基于测量的血液糖化血红蛋白(血红蛋白A1c，HbA1c)浓度进行监测或估算。

(i)在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者；

(ii)在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者；

(iii)在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于治疗肥胖症；并且

(iv)在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于向受试者(诸如糖尿病受试者)提供体重减轻，

(v)在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)，

(vi)在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽用于治疗非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，

其中用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括本公开的任何分离的多肽，其包括由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:39的共有序列中的任一者表示的那些，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括本公开的任何分离的多肽，其包括由SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:60的共有序列中的任一者表示的那些，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括本公开的任何分离的多肽，其包括选自由SEQ ID NO:3、6、21和24组成的组的那些，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括具有SEQ ID NO:3的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括具有SEQ ID NO:6的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括具有SEQ ID NO:21的分离的多肽或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，用途(i)、(ii)、(iii)、(iv)、(v)或(vi)中的胰高血糖素类似物多肽包括具有SEQ ID NO:24的分离的多肽或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:3，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:6，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:21，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有1型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:24，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:3，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:6，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:21，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有2型糖尿病的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:24，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:3，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:6，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:21，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有肥胖症的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:24，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于向受试者提供体重减轻，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:3，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于向受试者提供体重减轻，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:6，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于向受试者提供体重减轻，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:21，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于向受试者提供体重减轻，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:24，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:3，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:6，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:21，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NAFLD的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:24，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:3，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:6，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:21，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽用于治疗患有NASH的受试者，其中分离的多肽具有SEQ ID NO:24，或其药学上可接受的盐。

如本文所用，术语“患者”或“受试者”是指啮齿动物或动物，优选地为哺乳动物并且最优选地为人。

组合物

在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽与第二剂组合共同配制。在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽与第二剂组合共同配制，其中第二剂是肠促胰岛素模拟物。在一些实施方案中，本公开的胰高血糖素类似物多肽与第二剂组合共同配制，其中第二剂是促胰岛素化合物。

如本文所用，短语“肠促胰岛素模拟物”包括但不限于GLP-1肽；GLP-l(7-36)；GLP-1受体激动剂；GLP-1的肽衍生物；GLP-1的肽类似物；艾塞那肽；具有毒蜥外泌肽-4氨基酸序列的艾塞那肽(艾塞那肽的天然存在形式；艾塞那肽-LAR；利西拉肽(lixisenatide)；利拉鲁肽(liraglutide)；索马鲁肽(semaglutide)；度拉鲁肽(dulaglutide)；阿必鲁肽(albiglutide)；他司鲁肽(taspoglutide)；替西帕肽(tirzepatide)(Eli Lilly的LY3298176或Y-(Aib)-EGTFTSDYSI-(Aib)-LDKIAQ-[二酸-γ-Glu-(AEEA)

本发明的一些实施方案包括使用本发明的所公开的胰高血糖素类似物多肽与第二治疗剂的组合，所述第二治疗剂诸如第二多肽，诸如但作为非限制性实例，促胰岛素肽。在一些实施方案中，包含胰高血糖素类似物多肽与第二剂的组合的药物组合物用于治疗2型糖尿病。

在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含如本文公开的分离的多肽中的任一者。在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含如本文公开的分离的多肽中的任一者并且还包含第二多肽。在一些实施方案中，第二多肽是PYY类似物。在一些实施方案中，第二多肽是胰淀素类似物。在一个优选的实施方案中，第二多肽是GLP-1受体激动剂。

术语“GLP-1”是指多肽胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺，它是一种在营养消耗后从肠L细胞释放的30个残基的肽激素。GLP-1具有(HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH

胰高血糖素样肽-1(7-36)酰胺(GLP-1)是一种在营养消耗后从肠L细胞释放的30个残基的肽激素。它增强葡萄糖诱导的胰岛素从胰腺β细胞分泌、增加胰岛素表达、抑制β细胞凋亡、促进β细胞新生、减少胰高血糖素分泌、延缓胃排空、促进饱腹感并且增加外周葡萄糖利用。这些多种效应引起了人们对发现用于治疗2型糖尿病的长效GLP-1受体(GLP-1R)激动剂的极大兴趣。如本文所用，术语“艾塞那肽(exenatide)”包括但不限于艾塞那肽(exenatide)、具有(HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH

内源性GLP-1响应于营养摄取而从肠道释放。随着食物摄入和消化，糖类和脂肪会出现在肠腔中，这会刺激所谓的肠促胰岛素效应，即刺激肠促胰岛素诸如GLP-1从肠L细胞释放。GLP-1一旦被释放就会靶向胰腺，在胰腺它以“葡萄糖依赖性方式”增强胰岛素的分泌。换句话说，这种GLP-1介导的对胰岛素的效应在葡萄糖水平高时持续存在，但随着葡萄糖水平下降而安全消失。因此，GLP-1活性自我调节以降低低血糖症(葡萄糖水平下降到危险的低水平的病状)的风险。由于GLP-1具有小于五分钟的短消除半衰期(t

GLP-1的合成类似物被设计成具有更长的半衰期，并且类似地以葡萄糖依赖性方式(如内源性GLP-1)增强胰岛素的分泌，从而用于治疗2型糖尿病以及用于提供体重减轻。

显示促胰岛素作用的多种GLP-1受体激动剂(例如，GLP-1肽衍生物和肽类似物)在本领域中(参见，例如，美国专利号5,118,666；5,120,712；5,512,549；5,545,618；5,574,008；5,574,008；5,614,492；5,958,909；6,191,102；6,268,343；6,329,336；6,451,974；6,458,924；6,514,500；6,593,295；6,703,359；6,706,689；6,720,407；6,821,949；6,849,708；6,849,714；6,887,470；6,887,849；6,903,186；7,022,674；7,041,646；7,084,243；7,101,843；7,138,486；7,141,547；7,144,863；和7,199,217)，以及在临床试验中是已知的(例如，他司鲁肽和阿必鲁肽)。

某些GLP-1受体激动剂，包括由Cambridge,U.K.的AstraZeneca销售的

在一些实施方案中，本文提供了一种药物组合，其包含本公开的胰高血糖素类似物多肽和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种药物组合，其包含有包含选自由SEQ ID NO:1至60组成的组的氨基酸序列的分离的多肽和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，本文提供了一种药物组合，其包含有包含选自由SEQ ID NO:1至39组成的组的氨基酸序列的分离的多肽和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，药物组合包含选自由SEQ ID NO:3、6、21和24组成的组的氨基酸序列连同GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合包含选自由SEQ ID NO:3、6、21和24组成的组的氨基酸序列连同A303，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合包含选自由SEQ ID NO:3、6、21和24组成的组的氨基酸序列连同A304，或其药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，药物组合包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合包含SEQ IDNO:21的氨基酸序列和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，药物组合包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列和GLP-1受体激动剂，或其药学上可接受的盐。

已发现本公开的胰高血糖素类似物多肽与GLP-1受体激动剂的组合提供减肥手术样功效以实现体重减轻。观察到肥胖或肥胖T2D患者的Roux-en-Y胃旁路手术(RYGB)后血糖控制改善先于RYGB后所见的体重减轻，这表明肠道的手术重排导致生理适应超出了仅由体重减轻驱动的生理适应。事实上，RYGB导致GLP-1和胰高血糖素的餐后分泌增强。肠道肽激素GLP-1和胰高血糖素各自通过对能量输入的几种重叠生物反应在全身能量平衡中发挥作用。这些反应主要包括增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌、抑制胃排空、诱导饱腹感和抑制食物摄入。

因此，本公开的胰高血糖素类似物多肽连同GLP-1受体激动剂的组合适用于治疗本文公开的疾病和病症。在一些实施方案中，GLP-1受体激动剂是长效GLP-1受体激动剂。

胃泌酸调节素是一种在结肠中发现的天然存在的37个氨基酸的肽激素，其已被发现可抑制食欲并促进体重减轻(Wynne K等人,Int J Obes(Lond)30(12):1729-36(2006))。胃泌酸调节素以及其肽类似物和肽衍生物的序列是本领域已知的(例如，Bataille D等人,Peptides 2(增刊第2版):41-44(1981)；以及美国专利公开号2005/0070469和2006/0094652)。

胃抑制肽(GIP)是一种促胰岛素肽激素(Efendic,S.等人,Horm Metab Res.36:742-6(2004))并且响应于吸收的脂肪和糖类(它们刺激胰腺分泌胰岛素)而由十二指肠和空肠的粘膜分泌。GIP作为具有生物活性的42个氨基酸的肽循环。GIP也称为葡萄糖依赖性促胰岛素蛋白。GIP是一种42个氨基酸的胃肠道调节肽，其在葡萄糖存在下刺激胰腺β细胞分泌胰岛素(Tseng,C.等人,PNAS 90:1992-1996(1993))。GIP以及其肽类似物和肽衍生物的序列是本领域已知的(例如Meier J.J.,Diabetes Metab Res Rev.21(2):91-117(2005)和Efendic S.,Horm Metab Res.36(11-12):742-6(2004))。

胰高血糖素是一种由胰腺的α细胞产生的肽激素，其升高血流中葡萄糖的浓度。它的作用与降低葡萄糖浓度的胰岛素相反。当血流中的葡萄糖浓度过低时，胰腺会释放胰高血糖素。胰高血糖素使肝脏将储存的糖原转化为葡萄糖，然后释放到血流中。高血糖水平会刺激胰岛素的释放。胰岛素使得葡萄糖能够被胰岛素依赖性组织吸收和使用。因此，胰高血糖素和胰岛素是使血糖水平保持在稳定水平的反馈系统的一部分。

人胰淀素或胰岛淀粉样多肽(IAPP)是一种37个残基的多肽激素。胰淀素与来自胰腺β细胞的胰岛素共同分泌，比率大约为100:1(胰岛素:胰淀素)。前胰岛淀粉样多肽(即，前IAPP)在胰腺β细胞中产生为67个氨基酸、7404道尔顿的前肽，其经历翻译后修饰(包括蛋白酶切割)以产生37个残基的胰淀素。在1型糖尿病早期发生并可在2型糖尿病晚期发生的β细胞功能丧失导致胰岛素和胰淀素分泌不足。

胰淀素作为内分泌胰腺的一部分起作用，在胰腺内的这些细胞合成和分泌激素。胰淀素有助于血糖控制；它从胰岛分泌到血液循环中，并被肾脏中的肽酶清除。胰淀素的代谢功能被很好地表征为血浆中营养物质(诸如葡萄糖)出现的抑制剂。因此，它作为胰岛素的协同伙伴发挥作用，胰岛素是一种调节血糖水平并协调身体葡萄糖分布和摄入的肽。除其他外，胰岛素在体内的作用是防止血糖水平升高过高，尤其是饭后。

胰淀素被认为通过减缓胃排空和促进饱腹感(即，饱胀感)来在血糖调节中发挥作用，从而防止餐后(即，饭后)血糖水平陡升。总体效应是减缓进食后血液中葡萄糖的出现速率。胰淀素还降低胰腺的胰高血糖素分泌。除其他外，胰高血糖素在体内的作用是防止血糖水平下降过低。这很重要，因为例如某些1型糖尿病在刚饭后容易分泌过量的升高血糖的胰高血糖素。

由于许多原因，在血清中的半衰期为约13分钟的人胰淀素不适合用作治疗剂。相反，开发了普兰林肽(

植入式递送

在一些实施方案中，提供了如本文所述的渗透递送装置，其包含如本文公开的长效胰高血糖素类似物多肽中的任一者或者包含长效胰高血糖素类似物多肽中的任一者的药物组合物。

在一些实施方案中，渗透递送装置包括不可渗透的储液器，所述储液器包括内表面和外表面以及第一开口端和第二开口端；半透膜，所述半透膜与储液器的第一开口端处于密封关系；渗透发动机，所述渗透发动机在储液器内并与半透膜相邻；活塞，所述活塞与渗透发动机相邻，其中活塞与储液器的内表面形成可移动的密封件，活塞将储液器分成第一腔室和第二腔室，第一腔室包括渗透发动机；悬浮液制剂，其中第二腔室包含悬浮液制剂并且悬浮液制剂是可流动的并且包含分离的多肽；以及扩散调节器，所述扩散调节器插入储液器的第二开口端中，所述扩散调节器与悬浮液制剂相邻。

植入式渗透递送装置通常包括具有至少一个递送悬浮液制剂所通过的孔的储液器。悬浮液制剂可以储存在储液器内。在优选的实施方案中，植入式药物递送装置是渗透递送装置，其中药物的递送是渗透驱动的。已描述了一些渗透递送装置及其部件，例如

渗透递送装置通常由含有渗透发动机、活塞和药物制剂的圆柱形储液器组成。将储液器的一端用可控速率的半透膜盖住，并且将另一端用扩散调节器盖住，包含药物的悬浮液制剂通过所述扩散调节器从药物储液器中释放出来。活塞将药物制剂与渗透发动机分开，并利用密封件来防止渗透发动机隔室中的水进入药物储液器。与药物制剂结合来设计扩散调节器，以防止体液通过孔进入药物储液器。

渗透装置基于渗透原理以预定速率释放药物。细胞外液通过半透膜进入渗透递送装置，直接进入盐发动机，所述盐发动机膨胀来以缓慢且均匀的递送速率驱动活塞。活塞的运动迫使药物制剂以预定的剪切速率通过孔或出口释放。在本发明的一个实施方案中，渗透装置的储液器装载有悬浮液制剂，其中所述装置能够以预定的治疗有效递送速率在延长的时间段(例如，约1、约3、约6、约9、约10和约12个月)内将悬浮液制剂递送至受试者。

药物从渗透递送装置释放的速率通常为受试者提供预定目标剂量的药物，例如，在一天内递送治疗有效日剂量；也就是说，药物从装置中释放的速率提供了在治疗浓度下药物至受试者的基本稳态递送。

通常，对于渗透递送装置，包含有益剂制剂的有益剂腔室的体积在约100μl至约1000μl之间、更优选地在约120μl与约500μl之间、更优选地在约150μl与约200μl之间。

通常，将渗透递送装置例如真皮下或皮下植入受试者体内以提供皮下药物递送。可以将装置真皮下或皮下植入一个或两个臂(例如，在上臂的内侧、外侧或背部)或腹部。腹部区域中的优选位置是在肋骨下方和腰线上方延伸的区域中的腹部皮肤下方。为了在腹腔内提供多个用于植入一个或多个渗透递送装置的位置，可将腹壁分为如下4个象限：右上象限，其在右肋下方延伸至少2-3厘米，例如在右肋下方延伸至少约5-8厘米，并且在中线右侧延伸至少2-3厘米，例如在中线右侧延伸至少约5-8厘米；右下象限，其在腰线上方延伸至少2-3厘米，例如在腰线上方延伸至少约5-8厘米，并且在中线右侧延伸至少2-3厘米，例如在中线右侧延伸至少约5-8厘米；左上象限，其在左肋下方延伸至少2-3厘米，例如在左肋下方延伸至少约5-8厘米，并且在中线左侧延伸至少2-3厘米，例如在中线左侧延伸至少约5-8厘米；以及左下象限，其在腰线上方延伸至少2-3厘米，例如在腰线上方延伸至少约5-8厘米，并且在中线左侧延伸至少2-3厘米，例如在中线左侧延伸至少约5-8厘米。这提供了用于在一个或多个场合植入一个或多个装置的多个可用位置。渗透递送装置的植入和移除通常由医疗专业人员使用局部麻醉(例如，利多卡因)进行。

通过从受试者移除渗透递送装置来终止治疗是简单的，并且提供了立即停止向受试者递送药物的重要优势。

优选地，渗透递送装置具有防止在理论情况(如借以递送药物制剂的出口(扩散调节器)的堵塞或阻塞)下药物的意外过量或大量递送的故障安全机制。为了防止药物的意外过量或大量递送，渗透递送装置被设计和构造成使得将扩散调节器从储液器中部分或全部移出或排出所需的压力超过将半透膜部分或全部移出或排出至为储液器减压所必要的程度所需的压力。在这种情况下，压力会在装置内建立，直到它将另一端的半透膜向外推，从而释放渗透压力。如果活塞与储液器处于密封关系，则渗透递送装置将变得静止并且不再递送药物制剂。

可以选择剂量和递送速率以在植入装置后通常在受试者体内药物的少于约6个半衰期内实现期望的药物血液浓度。选择药物的血液浓度以给出最佳药物治疗效果，同时避免可能由药物浓度过高引起的不良副作用，同时避免可能诱导与药物的峰血浆浓度或谷血浆浓度相关的副作用的峰和谷。

悬浮液制剂也可用于输液泵，例如

施用方式

在一些实施方案中，方法包括经由注射向需要治疗的受试者提供本公开的胰高血糖素类似物多肽或其药物组合物。在一些实施方案中，方法包括向需要治疗的受试者提供被配制用于口服施用的本公开的胰高血糖素类似物多肽或其药物组合物。

在一些实施方案中，方法包括经由植入向需要治疗的受试者提供本公开的胰高血糖素类似物多肽或其药物组合物。在一些实施方案中，方法包括从渗透递送装置向需要治疗的受试者提供胰高血糖素类似物多肽的连续递送。递送装置(诸如渗透递送装置)包括足够用于连续施用长达3个月、6个月、9个月、12个月、18个月或24个月的本公开的胰高血糖素类似物多肽。因此，经由渗透递送装置连续施用本公开的胰高血糖素类似物多肽消除了市售胰高血糖素类似物多肽的每日给药或每日多次给药。

来自渗透递送装置的胰高血糖素类似物多肽的基本稳态递送在施用时段内是连续的。在一些实施方案中，受试者或患者是人受试者或人患者。

在本发明的一些实施方案中，施用时段为例如至少约3个月、至少约3个月至约一年、至少约4个月至约一年、至少约5个月至约一年、至少约6个月至约一年、至少约8个月至约一年、至少约9个月至约一年、至少约10个月至约一年、至少约一年至约两年、至少约两年至约三年。

在其他实施方案中，本发明的治疗方法提供在受试者体内植入渗透递送装置之后受试者的空腹血浆葡萄糖浓度的显著降低(相对于植入渗透递送装置之前受试者的空腹血浆葡萄糖浓度)，这在将渗透递送装置植入受试者体内之后约7天、6天、5天、4天、3天、2天、1天或更少的时间内实现。空腹血浆葡萄糖的显著降低通常是统计学上显著的，如通过应用适当的统计学测试所证明，或者空腹血浆葡萄糖的显著降低被医学从业者认为对于受试者是显著的。空腹血浆葡萄糖相对于植入之前的基线的显著降低通常在施用时段内保持。

在一些实施方案中，本发明涉及一种治疗需要治疗的受试者的疾病或病状的方法。方法包括从渗透递送装置提供药物的连续递送，其中在受试者体内实现了在治疗浓度下药物的基本稳态递送。药物从渗透递送装置的基本稳态递送在至少约3个月的施用时段内是连续的。所述药物在典型受试者中具有已知或确定的半衰期。人是实践本发明的优选受试者。本发明包括有效于治疗疾病或病状的药物，以及用于治疗需要治疗的受试者的疾病或病状的本发明方法的包含所述药物的渗透递送装置。本发明的优点包括减轻与峰相关的药物毒性和减弱与谷相关的次佳药物治疗。

在一些实施方案中，在将渗透递送装置植入受试者体内之后约1个月、7天、5天、3天或1天的时段内实现了在治疗浓度下药物的基本稳态递送。

本发明还提供了一种用于促进有需要的受试者的体重减轻的方法、一种用于治疗有需要的受试者的过重或肥胖症的方法和/或一种用于抑制有需要的受试者的食欲的方法。所述方法包括提供分离的胰高血糖素类似物多肽的递送。在一些实施方案中，分离的胰高血糖素类似物多肽从植入式渗透递送装置中连续递送。在一些实施方案中，实现了胰高血糖素类似物多肽从渗透递送装置的基本稳态递送并且所述递送在施用时段内基本上是连续的。在一些实施方案中，受试者是人。

本发明包括用于在需要治疗的受试者中在本发明方法中使用的包含胰高血糖素类似物多肽的渗透递送装置。受试者可能患有2型糖尿病。有需要的受试者的基线HbA1c％可能大于10.0％，即高基线(HBL)受试者。受试者以前可能没有接受过用于治疗2型糖尿病的药物。

在其他实施方案中，本发明的治疗方法提供在受试者体内植入渗透递送装置之后受试者的空腹血浆葡萄糖浓度的显著降低(相对于植入渗透递送装置之前受试者的空腹血浆葡萄糖浓度)，这在将渗透递送装置植入受试者体内之后约7天或更少的时间内、在将渗透递送装置植入受试者体内之后约6天或更少的时间内、在将渗透递送装置植入受试者体内之后约5天或更少的时间内、在将渗透递送装置植入受试者体内之后约4天或更少的时间内、在将渗透递送装置植入受试者体内之后约3天或更少的时间内、在将渗透递送装置植入受试者体内之后约2天或更少的时间内或在将渗透递送装置植入受试者体内之后约1天或更少的时间内实现。在本发明的优选的实施方案中，相对于植入之前受试者的空腹血浆葡萄糖浓度，在植入渗透递送装置之后受试者的空腹血浆葡萄糖浓度的显著降低在将渗透递送装置植入受试者体内之后约2天或更少的时间内、优选地在约1天或更少的时间内或更优选地在将渗透递送装置植入受试者体内之后约1天内实现。空腹血浆葡萄糖的显著降低通常是统计学上显著的，如通过应用适当的统计学测试所证明，或者空腹血浆葡萄糖的显著降低被医学从业者认为对于受试者是显著的。空腹血浆葡萄糖相对于植入之前的基线的显著降低通常在施用时段内保持。

在涉及治疗受试者的疾病或病状的方法的本发明的所有方面的实施方案中，示例性渗透递送装置包括以下部分：不可渗透的储液器，所述储液器包括内表面和外表面以及第一开口端和第二开口端；半透膜，所述半透膜与储液器的第一开口端处于密封关系；渗透发动机，所述渗透发动机在储液器内并与半透膜相邻；活塞，所述活塞与渗透发动机相邻的，其中活塞与储液器的内表面形成可移动的密封件，活塞将储液器分成第一腔室和第二腔室，第一腔室包括渗透发动机；药物制剂或包含药物的悬浮液制剂，其中第二腔室包含药物制剂或悬浮液制剂并且药物制剂或悬浮液制剂是可流动的；以及扩散调节器，所述扩散调节器插入储液器的第二开口端中，所述扩散调节器与悬浮液制剂相邻。在优选的实施方案中，储液器包括钛或钛合金。

在涉及治疗受试者的疾病或病状的方法的本发明的所有方面的实施方案中，药物制剂可以包含药物和媒介物制剂。或者，悬浮液制剂用于所述方法并且可以例如包括颗粒制剂，所述颗粒制剂包含药物和媒介物制剂。用于形成本发明的悬浮液制剂的媒介物制剂可以例如包含溶剂和聚合物。

渗透递送装置的储液器可以例如包括钛或钛合金。

在本发明的所有方面的实施方案中，植入的渗透递送装置可用于提供皮下递送。

在本发明的所有方面的实施方案中，连续递送可以例如是零级受控的连续递送。

药物组合物

根据另一个实施方案，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的化合物(即，分离的多肽)或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物。

在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含作为其药学上可接受的盐，诸如三氟乙酸盐、乙酸盐或盐酸盐来配制的所公开的多肽中的任一者。在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含作为三氟乙酸盐配制的所公开的多肽中的任一者。在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含作为乙酸盐配制的所公开的多肽中的任一者。在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含作为盐酸盐配制的所公开的多肽中的任一者。

术语“药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物”是指不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载剂、佐剂或媒介物。

如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”意图包括与药物施用相容的任何和所有溶剂、聚合物、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。合适的载剂在最新版的Remington's Pharmaceutical Sciences(本领域的标准参考文本)中有所描述，所述文献以引用的方式并入本文。此类载剂或稀释剂的优选实例包括但不限于水、盐水、林格氏(ringer’s)溶液、右旋糖溶液和5％人血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性媒介物诸如不挥发油。此类介质和剂用于药学活性物质的用途是本领域公知的。除非任何常规介质或剂与活性化合物不相容，否则考虑其在组合物中的用途。补充活性化合物也可掺入组合物中。

可用于本发明的组合物的代表性药学上可接受的载剂、佐剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(诸如人血清白蛋白)、缓冲物质(诸如磷酸盐、甘氨酸)、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质(诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁)、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

在一些实施方案中，提供了一种药物组合物，其包含作为其药学上可接受的盐，诸如三氟乙酸盐、乙酸盐或盐酸盐来配制的所公开的多肽中的任一者的药学上可接受的衍生物。“药学上可接受的衍生物”意指本发明的化合物的任何无毒盐、酯、酯的盐或其他衍生物，其在向接受者施用时能够直接或间接提供本发明的化合物或其活性代谢物或残留物。

药物组合物包含药物并且可以配制为如下文更详细描述的“颗粒制剂”。药物组合物和/或颗粒制剂可以包含稳定组分(在本文中也称为“赋形剂”)。稳定组分的实例包括但不限于糖类、抗氧化剂、氨基酸、缓冲剂、无机化合物和表面活性剂。

本发明的组合物中化合物的量使得可在生物样品或患者(例如，人、大鼠、猴等)中有效地可测量地激活一种或多种胰高血糖素受体。在某些实施方案中，本发明的组合物中化合物的量使得可在生物样品或患者中在人血清白蛋白不存在或存在下有效地可测量地激动人胰高血糖素受体。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制用于向需要这种组合物的患者施用。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制用于向患者可注射地施用。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制用于经由植入式递送装置诸如渗透递送装置向患者施用。

本公开的分离的多肽(在本文中也称为“活性化合物”)及其衍生物、片段、类似物和同系物可以掺入适用于施用的药物组合物中。此类组合物通常包含分离的多肽或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载剂。

本发明的药物组合物被配制成与其预期施用途径相容。施用途径的实例包括肠胃外(例如，静脉内、皮内、真皮下、皮下)、口服(例如，吸入)、经皮(即，局部)、经粘膜、直肠或其组合。在一些实施方案中，本公开的药物组合物或分离的多肽被配制用于通过局部施用来施用。在一些实施方案中，本公开的药物组合物或分离的多肽被配制用于通过吸入施用来施用。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于通过装置或其他合适的递送机制来施用，所述装置或其他合适的递送机制适用于真皮下或皮下植入并且皮下递送药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于通过植入装置来施用，所述植入装置适用于真皮下或皮下植入并且皮下递送药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物被配制用于通过渗透递送装置(例如，植入式渗透递送装置)来施用，所述渗透递送装置适用于真皮下或皮下放置或其他植入并且皮下递送药物组合物。用于肠胃外应用、皮内应用、真皮下应用、皮下应用或其组合的溶液或悬浮液可包含以下组分：无菌稀释剂，诸如注射用水、盐水溶液、不挥发油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶剂；抗细菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，诸如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；以及用于调节张力的剂，诸如氯化钠或右旋糖。pH可以用酸或碱诸如盐酸或氢氧化钠来调节。肠胃外制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

适用于注射用途的药物组合物包括无菌水性溶液(在水溶性的情况下)或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载剂包括生理盐水、抑菌水、Cremophor EL(BASF,Parsippany,N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的，并且应该是达到易于注射的程度的流体。它必须在制造和储存条件下是稳定的，并且必须防止诸如细菌和真菌的微生物的污染作用。载剂可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。可以例如通过使用包衣诸如卵磷脂、通过在分散体的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂来防止微生物的作用，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等。在许多情况下，将优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨糖醇)、氯化钠。可通过在组合物中包含延迟吸收的剂(例如单硬脂酸铝和明胶)来延长注射组合物的吸收。

可以通过将所需量的活性化合物与上文列举的成分中的一种或其组合(根据需要)一起掺入适当的溶剂中，然后过滤灭菌来制备无菌注射溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物含有碱性分散介质和来自上文列举的那些的所需的其他成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥，所述冷冻干燥由其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加上任何其他所需成分的粉末。

口服组合物通常包含惰性稀释剂或可食用载剂。它们可以封装在明胶胶囊中或压制成片剂。出于口服治疗施用的目的，活性化合物可以与赋形剂合并并且以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。口服组合物也可以使用流体载剂制备以用作漱口剂，其中流体载剂中的化合物口服应用并漱口并吐出或吞咽。可以包含药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可以含有以下成分中的任一者或具有类似性质的化合物：粘合剂，诸如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，诸如淀粉或乳糖；崩解剂，诸如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂，诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂，诸如胶体二氧化硅；甜味剂，诸如蔗糖或糖精；或调味剂，诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙子调味剂。

对于通过吸入施用，将化合物以气溶胶喷雾的形式从压力容器或分配器(其含有合适推进剂，例如气体，诸如二氧化碳)或喷雾器中递送。

全身施用也可以通过经粘膜或经皮方式进行。对于经粘膜或经皮施用，制剂中使用适于渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常是本领域已知的，并且包括例如(对于经粘膜施用)去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。经粘膜施用可以通过使用鼻喷雾剂或栓剂来完成。对于经皮施用，将活性化合物配制成本领域公知的软膏剂、药膏剂、凝胶剂或乳膏剂。

在一个实施方案中，将活性化合物与会保护化合物免于从体内快速消除的载剂一起制备，诸如控释制剂，其包含植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的生物相容性聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法将是本领域技术人员清楚的。这些材料也可以从Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals,Inc商购获得。脂质体悬浮液也可以用作药学上可接受的载剂。这些制剂可以根据本领域技术人员已知的方法来制备，例如如美国专利号4,522,811中所述。

为了便于施用和剂量的均匀性，将口服组合物或肠胃外组合物配制成剂量单位形式是特别有利的。如本文所用，剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单一剂量(unitary dosage)的物理离散单位；每个单位含有被计算来产生所需治疗效果的预定量的活性化合物以及所需的药物载剂。本发明的剂量单位形式的规格决定于并直接取决于活性化合物的独特特性和待实现的特定治疗效果，以及将这种活性化合物配混用于治疗个体的领域中所固有的限制。

药物组合物可以与施用说明书一起包括在容器、包装或分配器中。

药物颗粒剂型

用于实践本发明的化合物(即，分离的多肽或其药学上可接受的盐)通常被添加到颗粒制剂中，所述颗粒制剂用于制备均匀悬浮、溶解或分散在悬浮液媒介物中以形成悬浮液制剂的含有多肽的颗粒。在一些实施方案中，胰高血糖素类似物多肽被配制成颗粒制剂并且转化(例如，喷雾干燥)为颗粒。在一些实施方案中，将包含胰高血糖素类似物多肽的颗粒悬浮在媒介物制剂中，从而产生媒介物和包含胰高血糖素类似物多肽的悬浮颗粒的悬浮液制剂。

优选地，颗粒制剂可使用诸如喷雾干燥、冻干、干燥、冷冻干燥、研磨、制粒、超声液滴产生、结晶、沉淀或本领域中可用于由组分混合物形成颗粒的其他技术的方法来形成为颗粒。在本发明的一个实施方案中，颗粒是喷雾干燥的。颗粒优选地在形状和大小上基本均匀。

在一些实施方案中，本发明提供了用于药物用途的药物颗粒制剂。颗粒制剂通常包含药物并且包含一种或多种稳定组分(在本文中也称为“赋形剂”)。稳定组分的实例包括但不限于糖类、抗氧化剂、氨基酸、缓冲剂、无机化合物和表面活性剂。鉴于本说明书的教导，颗粒制剂中稳定剂的量可以基于稳定剂的活性和制剂的所需特性来凭实验确定。

在任一实施方案中，颗粒制剂可包含约50重量％至约90重量％的药物、约50重量％至约85重量％的药物、约55重量％至约90重量％的药物、约60重量％至约90重量％的药物、约65重量％至约85重量％的药物、约65重量％至约90重量％的药物、约70重量％至约90重量％的药物、约70重量％至约85重量％的药物、约70重量％至约80重量％的药物或约70重量％至约75重量％的药物。

通常，颗粒制剂中糖类的量由聚集问题决定。一般来说，糖类的量不应太高，以避免在水存在下因过多的糖类未与药物结合而促进晶体生长。

通常，颗粒制剂中抗氧化剂的量由氧化问题决定，而制剂中氨基酸的量由氧化问题和/或喷雾干燥期间颗粒的可成形性决定。

通常，颗粒制剂中缓冲剂的量由预处理问题、稳定性问题和喷雾干燥期间颗粒的可成形性决定。当所有稳定剂都溶解时，在加工(例如，溶液制备和喷雾干燥)期间可能需要缓冲剂来稳定药物。

可包含在颗粒制剂中的糖类的实例包括但不限于单糖(例如，果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖和山梨糖)、二糖(例如，乳糖、蔗糖、海藻糖和纤维二糖)、多糖(例如，棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖和淀粉)和糖醇(无环多元醇；例如，甘露糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇山梨糖醇、吡喃糖基山梨糖醇和肌醇)。合适的糖类包括二糖和/或非还原糖，诸如蔗糖、海藻糖和棉子糖。

可包含在颗粒制剂中的抗氧化剂的实例包括但不限于甲硫氨酸、抗坏血酸、硫代硫酸钠、过氧化氢酶、铂、乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸、半胱氨酸、硫代甘油、巯基乙酸、硫代山梨糖醇、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯和没食子酸丙酯。此外，容易氧化的氨基酸可以用作抗氧化剂，例如半胱氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

可包含在颗粒制剂中的氨基酸的实例包括但不限于精氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸、组氨酸、丙氨酸、亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、L-苏氨酸、2-苯胺、缬氨酸、正缬氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丝氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、酪氨酸、赖氨酸和正亮氨酸。合适的氨基酸包括容易氧化的那些氨基酸，例如半胱氨酸、甲硫氨酸和色氨酸。

可包含在颗粒制剂中的缓冲剂的实例包括但不限于柠檬酸盐、组氨酸盐、琥珀酸盐、磷酸盐、马来酸盐、tris、乙酸盐、糖类和双甘氨肽。合适的缓冲剂包括柠檬酸盐、组氨酸盐、琥珀酸盐和tris。

可包含在颗粒制剂中的无机化合物的实例包括但不限于NaCl、Na

此外，颗粒制剂可以包含其他稳定剂/赋形剂，诸如表面活性剂和盐。表面活性剂的实例包括但不限于聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、

颗粒的大小通常使得它们可以经由植入式渗透递送装置递送。颗粒的均匀形状和大小通常有助于从这种递送装置提供一致且均匀的释放速率；然而，也可以使用具有非正态粒度分布曲线的颗粒制剂。例如，在具有递送孔的典型植入式渗透递送装置中，颗粒的大小小于递送孔直径的约30％、更优选地约20％、更优选地约10％。在与渗透递送系统一起使用的颗粒制剂的一个实施方案中，其中植入物的递送孔直径为约0.5mm，粒度可为例如小于约150微米至约50微米。在与渗透递送系统一起使用的颗粒制剂的一个实施方案中，其中植入物的递送孔直径为约0.1mm，粒度可为例如小于约30微米至约10微米。在一个实施方案中，孔为约0.25mm(250微米)并且粒度为约2微米至约5微米。

本领域普通技术人员将理解，颗粒群遵循粒度分布原则。广泛使用的本领域公认的描述粒度分布的方法包括例如平均直径和D值，诸如D50值，它通常用于表示给定样品的粒度范围的平均直径。

颗粒制剂的颗粒具有约2微米至约150微米之间的直径，例如直径小于150微米、直径小于100微米、直径小于50微米、直径小于30微米、直径小于10微米、直径小于5微米和直径约2微米。优选地，颗粒具有约2微米与约50微米之间的直径。

包含分离的胰高血糖素类似物多肽的颗粒制剂的颗粒具有约0.3微米至约150微米之间的平均直径。包含分离的胰高血糖素类似物多肽的颗粒制剂的颗粒具有约2微米至约150微米之间的平均直径，例如平均直径小于150微米、平均直径小于100微米、平均直径小于50微米、平均直径小于30微米、平均直径小于10微米、平均直径小于5微米和平均直径约2微米。在一些实施方案中，颗粒具有约0.3微米与50微米之间的平均直径，例如在约2微米与约50微米之间。在一些实施方案中，颗粒具有0.3微米与50微米之间的平均直径，例如在约2微米与约50微米之间，其中每个颗粒的直径小于约50微米。

通常，当掺入悬浮液媒介物中时，颗粒制剂的颗粒在少于约3个月内不沉降、优选地在少于约6个月内不沉降、更优选地在少于约12个月内不沉降、更优选地在递送温度下在少于约24个月内不沉降并且最优选地在递送温度下在少于约36个月内不沉降。悬浮液媒介物通常具有约5,000至约30,000泊之间、优选地约8,000至约25,000泊之间、更优选地约10,000至约20,000泊之间的粘度。在一个实施方案中，悬浮液媒介物具有约15,000泊(±约3,000泊)的粘度。一般来说，较小的颗粒在粘性悬浮液媒介物中的沉降速率往往低于较大的颗粒。因此，通常需要微米至纳米大小的颗粒。在粘性悬浮液制剂中，基于模拟建模研究，本发明的约2微米至约7微米的颗粒在室温下至少20年不会沉降。在本发明的用于植入式渗透递送装置中的颗粒制剂的一个实施方案中，所述颗粒制剂包含大小小于约50微米、更优选地小于约10微米、更优选地在约2微米至约7微米范围内的颗粒。

总之，所公开的多肽或其药学上可接受的盐被配制成固态颗粒形式的干燥粉末，其保持药物的最大化学和生物学稳定性。颗粒在高温下提供长期储存稳定性，因此允许在延长的时间段内向受试者递送稳定且生物学上有效的药物。将颗粒悬浮在悬浮液媒介物中以向患者施用。

媒介物中的颗粒悬浮液

在一方面，悬浮液媒介物提供了药物颗粒制剂分散在其中的稳定环境。药物颗粒制剂在悬浮液媒介物中是化学和物理稳定的(如上所述)。悬浮液媒介物通常包含一种或多种聚合物和一种或多种溶剂，它们形成具有足够粘度以均匀悬浮包含药物的颗粒的溶液。悬浮液媒介物可以包含其他组分，包括但不限于表面活性剂、抗氧化剂和/或其他可溶于媒介物的化合物。

悬浮液媒介物的粘度通常足以防止药物颗粒制剂在储存和在递送方法(例如，植入式渗透递送装置)中使用期间沉降。悬浮液媒介物是可生物降解的，因为悬浮液媒介物响应于生物环境而在一段时间内崩解或分解，同时药物颗粒溶解在生物环境中并且颗粒中的活性药物成分(即，药物)被吸收。

在实施方案中，悬浮液媒介物是“单相”悬浮液媒介物，其是整体物理和化学均匀的固体、半固体或液体均质系统。

溶解聚合物的溶剂可能会影响悬浮液制剂的特性，诸如药物颗粒制剂在储存期间的表现。可以选择溶剂与聚合物组合，以使所得悬浮液媒介物在与水性环境接触时表现出相分离。在本发明的一些实施方案中，可以选择溶剂与聚合物组合，以使所得悬浮液媒介物在与具有小于大约10％的水的水性环境接触时表现出相分离。

溶剂可以是不与水混溶的可接受的溶剂。还可以选择溶剂以使聚合物以高浓度(诸如以大于约30％的聚合物浓度)溶于溶剂中。可用于本发明的实践中的溶剂的实例包括但不限于月桂醇、苯甲酸苄酯、苯甲醇、乳酸月桂酯、正癸醇(也称为癸醇)、乳酸乙基己酯和长链(C8至C24)脂肪醇、酯或其混合物。悬浮液媒介物中使用的溶剂可以是“干的”，因为它具有低水分含量。用于配制悬浮液媒介物的优选溶剂包括乳酸月桂酯、月桂醇、苯甲酸苄酯及其混合物。

用于配制本发明的悬浮液媒介物的聚合物的实例包括但不限于聚酯(例如，聚乳酸和聚乳酸聚乙醇酸)、包含吡咯烷酮的聚合物(例如，分子量范围为大约2,000至大约1,000,000的聚乙烯吡咯烷酮)、不饱和醇的酯或醚(例如，乙酸乙烯酯)、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物或其混合物。聚乙烯吡咯烷酮可以由其K值(例如，K-17)表征，所述值是粘度指数。在一个实施方案中，聚合物是分子量为2,000至1,000,000的聚乙烯吡咯烷酮。在一个优选的实施方案中，聚合物是聚乙烯吡咯烷酮K-17(通常平均分子量范围为大约7,900-10,800)。悬浮液媒介物中使用的聚合物可以包含一种或多种不同的聚合物，或者可以包含不同等级的单一聚合物。悬浮液媒介物中使用的聚合物也可以是干燥的或具有低水分含量。

一般而言，用于本发明的悬浮液媒介物的组成可以基于所需的性能特性而变化。在一个实施方案中，悬浮液媒介物可以包含约40重量％至约80重量％的聚合物和约20重量％至约60重量％的溶剂。悬浮液媒介物的优选的实施方案包括由以以下比率组合的聚合物和溶剂形成的媒介物：约25重量％的溶剂和约75重量％的聚合物；约50重量％的溶剂和约50重量％的聚合物；约75重量％的溶剂和约25重量％的聚合物。因此，在一些实施方案中，悬浮液媒介物可以包含选定的组分，而在其他实施方案中，基本上由选定的组分组成。

悬浮液媒介物可能表现出牛顿行为。悬浮液媒介物通常被配制来提供在预定时间段内保持颗粒制剂均匀分散的粘度。这有助于方便制备适于提供药物颗粒制剂中所含药物的受控递送的悬浮液制剂。悬浮液媒介物的粘度可根据所需应用、颗粒制剂的大小和类型以及悬浮液媒介物中颗粒制剂的负载而变化。悬浮液媒介物的粘度可以通过改变所用溶剂或聚合物的类型或相对量来改变。

悬浮液媒介物可具有约100泊至约1,000,000泊、优选地约1,000泊至约100,000泊范围内的粘度。在优选的实施方案中，悬浮液媒介物通常在33℃下具有约5,000至约30,000泊之间、优选地约8,000至约25,000泊之间、更优选地约10,000至约20,000泊之间的粘度。在一个实施方案中，悬浮液媒介物在33℃下具有约15,000泊(±约3,000泊)的粘度。粘度可使用平行板流变仪以10-4/s的剪切速率在33℃下测量。

当与水性环境接触时，悬浮液媒介物可能会表现出相分离；然而，通常悬浮液媒介物基本上不表现出随温度变化的相分离。例如，在大约0℃至大约70℃的温度范围内以及在温度循环(诸如4℃至37℃至4℃的循环)时，悬浮液媒介物通常不表现出相分离。

悬浮液媒介物可以通过在干燥条件下(诸如在干燥箱中)将聚合物和溶剂组合来制备。聚合物和溶剂可以在升高的温度诸如大约40℃至大约70℃下组合，并且使其液化并形成单相。成分可以在真空下共混以去除从干燥成分中产生的气泡。成分可以使用设置在大约40rpm的速度下的常规混合器诸如双螺旋叶片或类似混合器来组合。然而，也可以使用更高的速度来混合成分。一旦获得成分的液体溶液，就可将悬浮液媒介物冷却至室温。差示扫描量热法(DSC)可用于验证悬浮液媒介物是否为单相。此外，媒介物的组分(例如，溶剂和/或聚合物)可以被处理以大量减少或大量去除过氧化物(例如，通过用甲硫氨酸处理；参见，例如，美国专利申请公开号2007-0027105)。

将药物颗粒制剂添加到悬浮液媒介物中以形成悬浮液制剂。在一些实施方案中，悬浮液制剂可以包含药物颗粒制剂和悬浮液媒介物，而在其他实施方案中，基本上由药物颗粒制剂和悬浮液媒介物组成。

可以通过将颗粒制剂分散在悬浮液媒介物中来制备悬浮液制剂。可以加热悬浮液媒介物并且在干燥条件下将颗粒制剂添加到悬浮液媒介物中。可以在升高的温度(诸如约40℃至约70℃)下在真空下将成分混合。可以在足够的速度(诸如约40rpm至约120rpm)下将成分混合，并且持续足够的时间(诸如约15分钟)，以实现颗粒制剂在悬浮液媒介物中的均匀分散。混合器可以是双螺旋叶片或其他合适的混合器。可以将所得混合物从混合器中取出，密封在干燥容器中以防止水污染悬浮液制剂，并且在进一步使用之前使其冷却至室温，所述进一步使用例如装载到植入式药物递送装置、单位剂量容器或多剂量容器中。

悬浮液制剂通常具有小于约10重量％、优选地小于约5重量％并且更优选地小于约4重量％的总水分含量。

在优选的实施方案中，本发明的悬浮液制剂基本上是均质的并且是可流动的，以提供药物颗粒制剂从渗透递送装置向受试者的递送。

总之，悬浮液媒介物的组分提供了生物相容性。悬浮液媒介物的组分提供形成药物颗粒制剂的稳定悬浮液的合适的化学物理性质。这些性质包括但不限于以下：悬浮液的粘度；媒介物的纯度；媒介物的残留水分；媒介物的密度；与干燥粉末的相容性；与植入式装置的相容性；聚合物的分子量；媒介物的稳定性；以及媒介物的疏水性和亲水性。这些性质可以例如通过改变媒介物组成并操纵悬浮液媒介物中使用的组分的比率来操纵和控制。

本文所述的悬浮液制剂可用于植入式渗透递送装置，以在延长的时间段内(诸如在数周、数月或多达约一年或更长的时间内)提供化合物的零级、连续、受控且持续的递送。这种植入式渗透递送装置通常能够在所需的时间段内以所需的流速递送包含药物的悬浮液制剂。悬浮液制剂可以通过常规技术装载到植入式渗透递送装置中。

实施例

提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供如何实践本发明的完整公开内容和说明，而不意图限制本发明人所认为的本发明的范围。已努力确保所用数字的准确性(例如，量、浓度和百分比变化)，但应考虑一些实验误差和偏差。除非另有说明，否则温度以摄氏度为单位，并且压力为大气压或接近大气压。

实施例1：长效胰高血糖素类似物多肽的产生

如表3中提供的本发明的长效胰高血糖素类似物多肽是使用Fmoc策略通过固相方法在Prelude肽合成仪(Protein Technologies Inc.,Tucson,AZ))上合成的，其中N-[(二甲基氨基)-1H-1,2,3-三唑并-[4,5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物(HATU)或2-(6-氯-1-H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵六氟磷酸盐(HCTU)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中活化(对氨基酸摩尔过量5倍)，并且将N'N-二异丙基乙胺(DIEA)用作碱。将20％哌啶/DMF溶液用于Fmoc去保护。所用的树脂是Rink Amide MBHA LL(Novabiochem)，其负载量在(20-400)μmol级别上为(0.30–0.40)mmol/g。

在线性多肽的固相合成完成后，将树脂用二氯甲烷(DCM)洗涤并且在真空下干燥30分钟。对于含有烯丙氧基羰基(Alloc)保护基团的类似物，经由Pd(PPh

对于含有内酰胺桥的类似物，如上所述在正常固相条件下安装适当的烯丙基保护的氨基酸构建块。此外，还安装了Fmoc-Lys-ε-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基(ivDde)-OH作为柄，以在之后使酰基间隔基和侧链合并。在线性肽完成后，如上所述去除烯丙基保护基团。使用苯并三唑-1-基-氧三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP,.5M)活化并使用DIEA作为碱，经由固相方案提供内酰胺桥形成。经由4％肼在DMF中的溶液提供Fmoc&ivDde基团的去保护。将所得的去保护的树脂用DMF洗涤(6x30秒)。如前面段落中所述进行间隔区的延长和亲脂性取代基的添加。通过将树脂用(95％ TFA、2％水、2％茴香硫醚和1％三异丙基硅烷)处理2-3个小时来进行最后的去保护以及将肽从固体支持物上切割下来。使用冷乙醚将切割的肽沉淀。倾析出乙醚，并且将固体再次用冷乙醚研磨并且通过离心沉淀。

接下来将粗产物溶解在乙腈(ACN)/H

实施例2：不含任何亲脂性取代基和任选间隔基的长效胰高血糖素受体激动剂多肽(即，线性多肽)的纯化和表征

将实施例1的产物冻干并且通过电喷雾离子化-液相色谱/质谱(ESI-LC/MS)和分析型高压液相色谱(HPLC)进行分析，并且所述产物被证明是纯的(>98％)。质量结果与计算值一致。

肽类似物的表征使用方法A、方法B、方法C或方法D中的一种，经由C18 HPLC和LC/MS分析(Acquity SQD Waters Corp,Milford,MA)以及由215nm和280nm处的双吸光度信号提供的UV检测来进行。

方法A，LC/MS条件：使用Phenomenex HPLC Aeris

方法B，C18 HPLC条件：HPLC分析在Acquity BEH130,C18柱,1.7μm,100X2.10mm柱上，在25℃下，5-65％乙腈/含0.05％TFA的水，在30分钟内，流速0.5mL/min，λ-215nm/280nm来进行。

方法C，HPLC条件：HPLC分析在Acquity BEH130,C18柱,1.7μm,100X2.10mm柱上，在25℃下，5-65％乙腈/含0.05％ TFA的水，在20分钟内，流速0.5mL/min，λ-215nm/280nm来进行。

方法D，HPLC条件：HPLC分析在Acquity BEH130,C18柱,1.7μm,100X2.10mm柱上，在25℃下，5-65％乙腈/含0.05％ TFA的水，在10分钟内，流速0.5mL/min，λ-215nm/280nm来进行。使用PLNO(在使用针溢出的情况下部分充满定量环)注入方式注入5.0μL样品。

表9提供了本公开的示例性长效胰高血糖素受体激动剂多肽。

不含亲脂性取代基和任选间隔基的多肽类似物在本文中有时被称为“线性多肽”。具有至少一个共价结合的亲脂性取代基和任选间隔基的多肽类似物在本文中有时被称为“缀合的多肽”。

表9：示例性化合物：长效胰高血糖素类似物多肽

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实施例3：长效胰高血糖素受体激动剂多肽的功能测定：人和大鼠受体

人、食蟹猕猴和大鼠胰高血糖素受体(GCGR)以及人、食蟹猕猴和大鼠GLP-1受体(GLP-1R)的激活导致细胞环磷酸腺苷(cAMP)增加。在非特异性cAMP/cGMP磷酸二酯酶抑制剂3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)存在下，可使用常用检测方法在体外测量积累cAMP。因此，可以使用cAMP积累的拟合剂量反应曲线来估计肽激活这些受体中的每一者的体外效力(pEC50)。

细胞处理和cAMP积累测定

使稳定表达人GLP-1R(Genebank登录号NM_002062)的CHO-K1细胞在补充有10％FBS和250μg/ml G418的90％ F12-K培养基中生长。对于大鼠GLP-1R表达，将编码大鼠GLP-1R(Genebank登录号NM 012728)的全长开放阅读框的cDNA片段亚克隆到表达载体pcDNA3.1+中，以在CHO-K1细胞中实现瞬时受体表达。

将编码食蟹猕猴GLP-1R(Genebank登录号XM_028847603)的全长开放阅读框的cDNA片段克隆到pcDNA3.1+中，用于在CHO-K1细胞中表达。将编码人GCGR(Genebank登录号NM_000160)的全长开放阅读框的cDNA片段克隆到pcDNA3.1+中，用于在CHO-K1细胞中表达。将编码大鼠GCGR(Genebank登录号NM_172091)的全长开放阅读框的cDNA片段克隆到pcDNA3.1+中，用于在CHO-K1细胞中表达。将编码食蟹猕猴GCGR(Genebank登录号XM_005585255)的全长开放阅读框的cDNA片段克隆到pcDNA3.1+中，用于在CHO-K1细胞中表达。

在第1天，将CHO-K1细胞以每个T75烧瓶150万个细胞铺种在补充有10％ FBS的90％ F12-K培养基中。在第3天，使用Lipofectamine 2000转染试剂将细胞用40mcg的每种表达质粒转染。在第5天，将细胞以每孔1000个细胞分配到白色384孔OptiPlate中的5mcL测定缓冲液中，所述测定缓冲液由1X HBSS、5mM HEPES、0.5mM IBMX和0.1％酪蛋白组成。

将肽在测定缓冲液中连续稀释4倍至1x10

数据分析

首先使用以下公式将测试值归一化为Excel中的系统最大值和系统最小值平均值：(测试值-系统最小值平均值)/(系统最大值平均值-系统最小值平均值)*100。归一化测试值表示由毛喉素诱导的系统最大cAMP响应的基线校正百分比。分析每种肽的多达3次重复测试的数据。使用GraphPad Prism软件(v7.04)通过将数据拟合到4参数逻辑曲线模型来估计效力值：Y＝基线响应+(最大响应-基线响应)/(1+10^((LogEC50-X)))。曲线坡度(hillslope)被限制为1.0。使用以下公式将EC50值转换为pEC50值：pEC50＝-Log(EC50)。本公开的胰高血糖素类似物的平均pEC50值报告在表10中。胰高血糖素、艾塞那肽和化合物A6(SEQID NO:6)针对人、食蟹猕猴和大鼠胰高血糖素和GLP-1受体的比较活性数据提供在表11和图2中。

表10：胰高血糖素类似物多肽针对胰高血糖素受体和GLP-1受体的活性

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ND＝未测定

表11：化合物A6针对人、食蟹猕猴和大鼠胰高血糖素和GLP-1受体的活性(作为EC

ND＝未测定

实施例4：胰高血糖素类似物的体外代谢稳定性研究

大鼠和人肾刷状缘膜

将在皮下(SC)组织匀浆中的体外培养用于表征肽在SC施用后抵抗蛋白酶和肽酶的系统前降解的能力。体内非临床研究表明，SC空间中的肽酶活性可以限制在SC施用后肽的生物利用度。具有高SC生物利用度的肽在此测定中是稳定的，而具有低SC生物利用度的肽在此测定中是不稳定的。

经由离心制备来自大鼠和人肾组织的刷状缘膜并将其储存在-70℃下。将解冻的大鼠或人kBBM原液在含有1％酪蛋白的25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中稀释至适当浓度，并且等分到96孔板中。将kBBM溶液在37℃下预温热10分钟。通过添加同样溶解在含有1％酪蛋白的25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中的测试肽(1mcM最终浓度)来开始反应。每次孵育中kBBM的最终浓度为50mcg蛋白质/mL。将反应物保持在37℃振荡水浴中。在开始后0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0h，取出30mcL反应混合物并且将其置于含有120mcL含2.5％甲酸的冰冷甲醇的96孔板中。将淬灭的样品以2178×g离心10min，然后将一部分上清液转移到干净的96孔板中并且用水1:1稀释。通过UPLC-MS/MS对样品进行分析。化合物A6(SEQ ID NO:6)的此分析的结果显示于表12中。

人皮下组织匀浆

将在皮下(SC)组织匀浆中的体外培养用于表征肽在SC施用后抵抗蛋白酶和肽酶的系统前降解的能力。体内非临床研究表明，SC空间中的肽酶活性可以限制在SC施用后肽的生物利用度。具有高SC生物利用度的肽在此测定中是稳定的，而具有低SC生物利用度的肽在此测定中是不稳定的。

将人SC组织在冷的25mM HEPES缓冲液(pH 7.4，基于样品重量的10倍体积)中均质化，然后通过双层粗棉布过滤。将滤液等分，在甲醇/干冰浴上快速冷冻并且储存在-80℃下。使用BCA蛋白测定确定每个合并的批次的蛋白质浓度。将解冻的人SC组织匀浆原液在25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中稀释到1.0mg蛋白质/mL，并且等分到96孔板中。将稀释的SC匀浆在37℃下预温热10分钟。通过添加同样溶解在25mM HEPES缓冲液(pH 7.4)中的测试肽(10mcM最终浓度)来开始反应。将反应物保持在37℃振荡水浴中。在开始后0、0.25、0.5、1.0、2.0和4.0h，取出50mcL反应混合物并且将其置于含有150mcL含2.5％甲酸的冰冷甲醇的96孔板中。将淬灭的样品以2178×g离心10min，然后将一部分上清液转移到干净的96孔板中并且用水1:10稀释。通过UPLC-MS/MS对样品进行分析。化合物A6(SEQ ID NO:6)的此分析的结果显示于表12中。

血浆中未结合的分数(f

测量血浆蛋白结合的常规方法(诸如平衡透析、超滤和超速离心)对肽不可靠，因为肽倾向于吸附到塑料管、透析膜和分子量截留过滤器的表面。因此，使用表面等离子共振(SPR)评估了酰化肽与血清白蛋白结合的程度。文献中已证明了此技术在合理估计与血浆蛋白结合的药物分数方面的实用性。化合物A6(SEQ ID NO:6)的此分析的结果显示于表12中。

表12：胰高血糖素类似物化合物A6的代谢稳定性药代动力学和未结合分数

实施例5：胰高血糖素类似物多肽的药代动力学分析

静脉内输注长效胰高血糖素类似物多肽以评估多肽的静脉内药代动力学

将肽溶解在含0.05％ Tween-20的磷酸盐缓冲盐水中，并且以1小时静脉内输注的形式经由股静脉插管施用至非空腹雄性Sprague-Dawley大鼠(每组n＝3)，最终剂量为0.033mg/kg。将制剂以1.67mL/kg/h的速率施用。在开始输注后0.25、0.5、0.75、1、1.17、1.33、1.5、2、4、8、24、48、72和96小时经由颈静脉插管将血样(大约250μL)收集到含有K

皮下快速浓注长效胰高血糖素类似物多肽以评估多肽的生物利用度(F)

将肽溶解在无菌盐水中并且以0.1mg/kg的剂量经由单次快速浓注到肩胛骨之间的皮下空间而施用于非空腹雄性Sprague-Dawley大鼠(每组n＝3)。在给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、8、24、48、72、96和120小时经由颈静脉插管将血样(大约250μL)收集到含有K

用于药代动力学研究的血浆样品制备

将每个血浆样品的70μL等分试样置于96孔板中。向每个孔中添加210μL含有适当内标物的2:1乙醇:乙腈中的0.1％ TFA。将板以1300rpm涡旋混合10分钟，然后以500x g离心10分钟。将上清液(210μL)置于干净的96孔板中，并且在45℃的氮气流下蒸发。将残留物在80μL含有0.1％甲酸的20％乙腈(水溶液)中重构。

血浆中胰高血糖素类似物多肽的LC/MS量化

所有校准标准品均在含有K2EDTA和蛋白酶抑制剂混合物的对照大鼠血浆中制备。

通过电喷雾电离(ESI)UPLC-MS/MS使用由以下组成的系统来分析样品和标准品：CTC HTS PAL自动进样器(Leap,Carrboro,NC)、带柱温箱的Agilent Infinity 1290系统(Palo Alto,CA)、Valco切换阀(Houston,TX)和Sciex

表13：化合物A6的药代动力学和ADME曲线

ND＝未测定

其他实施方案

尽管已结合本发明的详细说明对其进行了描述，但前述说明意图例示而不是限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其他方面、优点和修改在以下权利要求书的范围内。