狄尔斯-阿尔德缀合方法

相关申请的交叉引用

根据美国的35 U.S.C.§119(e)，本申请要求于2020年4月16日提交的美国临时申请号63/010,903的权益，其全部内容通过引用并入本文，用于所有目的。

发明领域

本申请涉及蛋白质-有效负载(payload)缀合物(例如抗体-药物缀合物)、药物组合物和用其治疗疾病的方法。还提供了利用转谷氨酰胺酶和狄尔斯-阿尔德(Diels-Alder)技术的组合制备蛋白质-有效负载构建体的特异性的和有效的方法。在某些实施方案中，提供了用于谷氨酰胺酰基修饰的抗体和反应性有效负载的特异性的和有效的反应的方法。

序列表

序列表的正式拷贝通过EFS-Web与本说明书同时提交，作为ASCII格式的序列表的纸质拷贝，文件名为250298-000130_ST25.txt，大小约为173千字节。ASCII格式文档的该纸质拷贝中包含的序列表是本说明书的组成部分，并且通过引用以其整体并入本文。

发明背景

蛋白质缀合物，例如抗体缀合物利用结合剂的选择性结合将有效负载递送至受试者组织内的靶标。有效负载可以是能够在靶标处起作用的治疗部分，或成像剂部分，例如能够增加体内结构或流体的对比度以用于诊断或治疗目的。

用于将接头(linker)和有效负载与抗体缀合的几种技术是可获得的。许多缀合物通过与抗体中的半胱氨酸或赖氨酸残基的非选择性共价连接来制备。这种非选择性技术可以产生在不同位点具有缀合并且每个抗体具有不同数目的缀合的产物的异质混合物。因此，本领域需要提供位点选择性的抗体缀合的方法和技术。

本领域需要另外的安全且有效的靶向药物，其可以结合各种抗原以提供用于单一疗法和联合疗法的增强的疾病治疗，所述疾病例如癌症、感染性疾病、炎性疾病和免疫系统病症。在某些实施方案中，本申请满足了这些需求并且提供了额外的优点。

上述讨论仅是为了更好地理解本领域面临的问题的性质，并且不应以任何方式解释为承认现有技术，也不应将本文中任何参考文献的引用解释为承认这类参考文献构成本申请的“现有技术”。

发明概述

下面描述各种非限制性的方面和实施方案。

在一个方面，本申请提供了具有式(I)的结构的化合物：

其中：BA为结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP不存在或为间隔基；Z为狄尔斯-阿尔德加合物；L为接头；D为治疗部分和/或成像剂部分；n为1-3的整数；其中当n为2或3时，Z、L和D可以相同或不同；且d为1-6的整数。

在一个实施方案中，D为治疗部分；其中所述治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀(auristatin)、多拉司他汀(dolastatin)、喜树碱(camptothesin)、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或它们的类似物或衍生物，或D为成像剂部分。

在一个实施方案中，D为治疗部分；其中所述治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂或它们的类似物或衍生物。

在一个方面，本申请提供了具有式(I)的结构的化合物：

其中：BA为结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP不存在或为间隔基；Z为狄尔斯-阿尔德加合物；L为接头；D为治疗部分；其中所述治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或它们的类似物或衍生物，或D为成像剂部分；n为1-3的整数；其中当n为2或3时，Z、L和D可以相同或不同；且d为1-6的整数。

在一个实施方案中，所述化合物为式(1A)：

在一个实施方案中，所述化合物为式(1B)：

在一个实施方案中，n为1或2。在一个实施方案中，其中n为2，两个部分D相同。在一个实施方案中，其中n为2，两个部分D不同。在一个实施方案中，其中n为2，两个狄尔斯-阿尔德加合物Z相同。在一个实施方案中，其中n为2，两个狄尔斯-阿尔德加合物Z不同。

在一个方面，本申请提供了具有式(II)的结构的化合物：

其中：BA为结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP不存在或为间隔基；Q为CHR、(CHR)

在一个实施方案中，所述化合物为式(IIA)：

在一个实施方案中，所述化合物为式(IIB)：

在一个实施方案中，两个部分D相同。在一个实施方案中，两个部分D不同。

在一个实施方案中，所述化合物为式(IIIA)：

在一个实施方案中，所述化合物为式(IIIB)：

在一个实施方案中，所述化合物为式(IIIC)：

在上述任一项的一个实施方案中，R在每次出现时为H。

在另一个实施方案中，至少一个R不为H。在一个实施方案中，至少一个R为C

在一个方面，本申请提供了具有式(IV)的结构的化合物：

其中：BA为结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP不存在或为间隔基；L为接头；D为治疗部分；其中所述治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或它们的类似物或衍生物，或D为成像剂部分；且d为1-6的整数。

在上述式的任一个的化合物的一个实施方案中，BA为抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，BA为单克隆人源化抗体。在另一个实施方案中，BA为HER-2抗体、其抗原结合片段、MSR1抗体或其抗原结合片段。

在上述式的任一个的化合物的一个实施方案中，Gln每次出现时独立地为Q295或N297Q。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，d为2、4或6。在某一实施方案中，d为2。在某一实施方案中，d为4。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，D为治疗部分；其中所述治疗部分为澳瑞他汀、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、美登素类化合物、安沙霉素抗生素或其类似物或衍生物。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，D为治疗部分，其中所述治疗部分为一甲基澳瑞他汀E(MMAE)、PBD-1、利福霉素或其类似物或衍生物。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，D为成像剂部分，其中成像剂包含染料(例如荧光染料)、螯合剂、放射性核素或寡核苷酸。在一个实施方案中，D包含荧光染料。

在一个实施方案中，D为Alexa Fluor荧光染料，其选自Alexa Fluor 647、AlexaFluor 488、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 555和Alexa Fluor 568。在一个具体的实施方案中，D为Alexa Fluor 647。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，SP包含如下的一个或多个：-(CH

在一个实施方案中，SP为

在上述任一项的一个实施方案中，两个部分D相同。在上述任一项的一个实施方案中，两个部分D不同。

上述式的任一个的化合物，其中z为式2a的部分：

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，Z为式2a的部分：

在另一个实施方案中，Z为式2a-1至2a-3的任意一个的部分：

在另一个实施方案中，Z为式2a-1的部分：/>

在一个实施方案中，至少一个R不为H。在一个实施方案中，Z为式2a-4至2a-6的任意一个的部分：

在一个实施方案中，部分Z每次出现时独立地选自2a-1至2a-12。

在一个实施方案中，其中化合物包含两个部分z，一个部分Z为2a-7，而另一个部分Z为2a-11。在一个实施方案中，其中化合物包含两个部分Z，一个部分Z为2a-7，而另一个部分Z为2a-12。

在一个实施方案中，片段-SP-Z-选自

在一个实施方案中，片段-SP-Z-选自

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，L包含一个或多个氨基酸。在另一个实施方案中，L还包含一个或多个下述基团：-NH-、-S-、-O-、-(CH

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，L为：

其中l、m和n每次出现时独立地为0-20的整数；且p为0-4的整数。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，L为：

其中n为1-6的整数；m为2-10的整数；p为1-3的整数，且氨基酸每次出现时独立地为缬氨酸、瓜氨酸或丙氨酸。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，治疗部分和/或成像剂部分D通过叔氨基连接至接头L。

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中/>

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中/>

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中/>

在式I的化合物的一个实施方案中，片段

其中/>

在上述式(II)的化合物的任一项的一个实施方案中，BA为HER-2抗体、其抗原结合片段、MSR1抗体或其抗原结合片段；且D为治疗部分，其中所述治疗部分为一甲基溴瑞他汀E(MMAE)、PBD-1、利福霉素或它们的类似物或衍生物，或D为成像剂部分Alexa Fluor 647。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，所述化合物具有式(I-A1’)至(I-A10’)的任一个的结构：

/>

/>

/>

其中d为1-6的整数。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，所述化合物具有式(I-A11’)的结构：

其中d为1-6的整数。

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，所述化合物具有式(I-B)的结构：

其中d为1-6的整数。/>

在上述化合物的任一项的一个实施方案中，所述化合物具有式(I-C)的结构

其中d为1-6的整数。

在一个方面，本申请提供了一种组合物，其包含上述化合物的任一项的化合物群，所述化合物具有约0.5至约8.0的药物-抗体比(DAR)。在另一个实施方案中，所述组合物包含具有约1.0至约2.5的DAR的化合物群。在另一个实施方案中，所述组合物包含具有约2的DAR的化合物群。在另一个实施方案中，所述组合物包含具有约3.0至约4.5的DAR的化合物群。在另一个实施方案中，所述组合物包含具有约4的DAR的化合物群。

本申请的一个方面提供了生产上述实施方案任一项的化合物的方法，该方法包含下列步骤：

a.)使：i)具有式(V-x)的结构的化合物：

其中：

BA为结合剂；

SP不存在或为间隔基；

X为包含二烯的部分；

l为1-6的整数；且

n为1-3的整数；其中当n为2或3时，Z、L和D可以相同或不同；

接触ii)式(VI-y)的化合物：

Y-L-D(VI-y)；

其中：

Y为包含亲双烯体的部分；

L为接头；且

D为治疗部分，其中治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或它们的类似物或衍生物，或D为成像剂部分；并且

b.)分离产生的化合物。

在一个实施方案中，n为1或2。在一个实施方案中，n为1，即所述化合物具有结构

在一个实施方案中，上述方法包含制备具有式(V-x)的结构的化合物，该方法包含下列步骤：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式V-x2的化合物在转谷氨酰胺酶(TG)存在下接触：

其中：

SP不存在或为间隔基；且

X为包含二烯的部分，其中两个X部分相同；并且

2.)分离产生的化合物。

在一个实施方案中，上述方法包含制备具有式(V-x)的结构的化合物，该方法包含下列步骤：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式V-x2的化合物在转谷氨酰胺酶(TG)存在下接触：

其中：

SP不存在或为间隔基；且

X为包含二烯的部分，其中两个X部分不同；并且

2.)分离产生的化合物。

在一个实施方案中，X每次出现时独立地选自

在上述方法的一个实施方案中，R每次出现时为H。

在上述方法的一个实施方案中，至少一个R不为H。在上述方法的一个实施方案中，至少一个R为C

在一个实施方案中，X为

在另一个方面，本申请提供了一种方法，包含下列步骤：

a.)使：i)具有式(V-x)的结构的化合物：

其中：

BA为结合剂；

SP不存在或为间隔基；

X为包含二烯的部分；

l为1-6的整数；

接触ii)式(VI-y)的化合物：

Y-L-D(VI-y)；

其中：

Y为包含亲双烯体的部分；

L为接头；且

D为治疗部分，其中治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或D为成像剂部分，或其类似物或衍生物；

产生具有式(V-x’z)的结构的化合物：

b.)使式(V-x’z)的化合物接触式(VI-y)的化合物：Y-L-D(VI-y)；并且

c.)分离产生的式(1B)的化合物。

在一个实施方案中，两个X部分相同。在另一个实施方案中，两个X部分不同。

在一个实施方案中，步骤a.)的D部分与步骤b.)的D部分不同。在一个实施方案中，步骤a.)的D部分与步骤b.)的D部分相同。

在一个实施方案中，步骤a.)在约7.0-约7.6的pH下进行。在一个实施方案中，步骤a.)在约7.2-约7.4的pH下进行。在一个实施方案中，步骤a.)在约7.2的pH下进行。

在一个实施方案中，步骤b.)在约5.0-约6.0的pH下进行。在一个实施方案中，步骤b.)在约5.3-约5.7的pH下进行。在一个实施方案中，步骤b.)在约5.5的pH下进行。

在一个实施方案中，该方法在步骤a.)之后和步骤b.)之前还包含缓冲液交换步骤。

在一个实施方案中，X每次出现时独立地选自

在上述方法的一个实施方案中，R每次出现时为H。

在上述方法的一个实施方案中，至少一个R不为H。在上述方法的一个实施方案中，至少一个R为C

在一个实施方案中，上述方法包含制备具有式(IV-x)的结构的化合物，该方法包含下列步骤：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式IV-x1的化合物在转谷氨酰胺酶(TG)存在下接触：

NH

SP不存在或为间隔基；且

X为包含二烯的部分；且

2.)分离产生的化合物。

在上述方法的另一个实施方案中，X为

在本申请的一个方面，提供了生产上述实施方案任一项的化合物的方法，该方法包含下列步骤：

a.)使：i)具有式(IV-y)的结构的化合物：

其中：

BA为结合剂；

SP不存在或为间隔基；

Y为包含亲双烯体的部分；

l为1-6的整数；且

n为1-3的整数；

接触ii)式(VI-x)的化合物：

X-L-D(V-x)，其中：

X为包含二烯的部分；

L为接头；且

D为治疗部分，其中治疗部分为美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二氮杂卓、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或D为成像剂部分，或其类似物或衍生物；并且

b.)分离产生的化合物。

在一个实施方案中，上述方法包含制备具有式(V-y)的结构的化合物，其包含下列步骤：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式V-y1的化合物在转谷氨酰胺酶(TGase)存在下接触：

NH

SP不存在或为间隔基；

Y为包含亲双烯体的部分；并且

2.)分离产生的化合物。

在一个实施方案中，上述方法包含制备具有式(V-y)的结构的化合物，其包含下列步骤：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式V-y2的化合物在转谷氨酰胺酶(TGase)存在下接触：

其中：

SP不存在或为间隔基；

Y为包含亲双烯体的部分，其中两个Y部分相同；并且

2.)分离产生的化合物。

在一个实施方案中，上述方法包含制备具有式(V-y)的结构的化合物，其包含下列步骤：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式V-y2的化合物在转谷氨酰胺酶(TGase)存在下接触：

其中：

SP不存在或为间隔基；

Y为包含亲双烯体的部分，其中两个Y部分不同；并且

2.)分离产生的化合物。

在上述方法的另一个实施方案中，X为

在上述方法任一项的一个实施方案中，所述结合剂是无糖基化的。

在上述方法任一项的一个实施方案中，所述结合剂在步骤1之前被去糖基化。

在上述方法的一个实施方案中，BA为HER-2抗体、其抗原结合片段、MSR1抗体或其抗原结合片段。

在上述方法的一个实施方案中，Gln每次出现时独立地为Q295或N297Q。

在上述方法的一个实施方案中，d为2或4。在另一个实施方案中，d为2。在另一个实施方案中，d为4。

在上述方法的一个实施方案中，SP为-(CH

在一个实施方案中，SP为

在一个实施方案中，SP为

在一个实施方案中，SP为

在一个实施方案中，

在上述方法的一个实施方案中，X为下式3或4的二烯部分：

其中R为H或C

在上述方法的一个实施方案中，Y为式5或6的亲双烯体部分：

在上述方法的一个实施方案中，L包含一个或多个氨基酸。在另一个实施方案中，L还包含-NH-、-S-、-O-、-(CH

在上述方法的一个实施方案中，L包含

在上述方法的一个实施方案中，D为治疗部分；其中所述治疗部分为澳瑞他汀、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、安沙霉素抗生素或其类似物或衍生物。

在上述方法的一个实施方案中，D为治疗部分；其中所述治疗部分为一甲基澳瑞他汀E(MMAE)、PBD-1、利福霉素或其类似物或衍生物。

在上述方法的一个实施方案中，BA为HER-2抗体、其抗原结合片段、MSR1抗体或其抗原结合片段；X为下式4a的二烯部分：

在上述方法的一个实施方案中，包含下列步骤：

a.)通过下列步骤生产化合物：

1.)使i)具有至少一个受体谷氨酰胺残基的结合剂和ii)式V-x1a的化合物在转谷氨酰胺酶(TGase)存在下接触：

其中结合剂为去糖基化HER-2抗体、其抗原结合片段、MSR1抗体或其抗原结合片段；

2.)分离产生的化合物；且

b.)使步骤a.)的化合物接触下式(VI-A)、(VI-B)或(VI-C)的化合物：

/>

其中D为治疗部分；其中所述治疗部分为通过治疗部分的氨基连接的一甲基澳瑞他汀E(MMAE)、PBD-1、利福霉素或其类似物或衍生物；并且

c.)分离产生的化合物。

在一个方面，本申请提供了通过上述方法的任意一种生产的化合物。

在一个方面，本申请提供了药物组合物，其包含上述实施方案任一项的化合物或所提供的实施方案任一项的组合物和稀释剂、载体和/或赋形剂。在一个实施方案中，所述组合物为胃肠外制剂。

在一个方面，本申请提供了在有需要的受试者中治疗病症的方法，包含向所述受试者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含根据所提供的实施方案的任一项的化合物、所提供的实施方案的任一项的组合物或所提供的实施方案的任一项的药物组合物。在前述方法的一个实施方案中，所述病症是癌症。在上述方法的另一个实施方案中，所述病症为HER2+乳腺癌。在上述方法的一个实施方案中，BA为HER2抗体或其抗原结合片段。在上述方法的一个实施方案中，D为细胞毒性剂。

在上述治疗受试者的病症的方法的一个实施方案中，所述癌症的特征在于在前列腺、膀胱、子宫颈、肺、结肠、肾、乳腺、胰腺、胃、子宫和卵巢中的一处或多处发生的原发性和/或转移性肿瘤。在上述方法的一个实施方案中，所述癌症为前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌或卵巢癌。

在上述治疗受试者的病症的方法的一个实施方案中，D选自：多拉司他汀、澳瑞他汀、美登素类化合物、吡咯并苯并二氮杂卓和tubulysin相互作用剂。在另一个实施方案中，D为MMAE或PDB。

在上述治疗受试者的病症的方法的一个实施方案中，所述病症为感染。在另一个实施方案中，BA为MSR1抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，D为利福霉素或其类似物或衍生物。在另一个实施方案中，所述病症为细菌感染。在另一个实施方案中，所述病症为病毒感染。

在上述治疗受试者的病症的方法的一个实施方案中，所述病症为炎性病症。在另一个实施方案中，BA为MSR1抗体或其抗原结合片段。在另一个实施方案中，所述病症为免疫系统病症。在另一个实施方案中，所述炎性病症为：因癌症导致的高钙血症、梅尼埃病、偏头痛、丛集性头痛、严重口疮性溃疡、喉头炎、严重肺结核、对梅毒的赫克斯海默反应、代偿失调的心力衰竭、过敏性鼻炎或鼻息肉。

在阅读了包括所附权利要求的以下详细描述之后，本申请的这些和其他方面对于本领域技术人员将变得很清楚。

详细描述

本文公开了本申请的详细实施方案；然而，应当理解，所公开的实施方案仅是可以以各种形式体现的本申请的示例。另外，结合本申请的各种实施方案给出的每个示例旨在是示例性的而非限制性的。因此，本文公开的具体结构和功能细节不应被解释为限制性的，而仅是作为教导本领域技术人员以不同方式采用本申请的代表性基础。应当理解，本申请不限于所描述的特定方法和实验条件，因此这些方法和条件可以改变。还应理解，本文使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制，因为本申请的范围将仅由所附权利要求限定。

定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。如本文所用，术语“约”当用于提及特定列举的数值时，意指该值可以从列举的值变化不超过1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101以及其间的所有值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。

尽管在本申请的实施或测试中可以使用与本文描述的那些类似或等同的任何方法和材料，但是现在描述特定的方法和材料。本说明书中提及的所有专利、申请和非专利出版物通过引用整体并入本文。

范围在本文中可以表示为从“约”或“大约”一个特定值和/或到“约”或“大约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一个实施方案包括从一个特定值和/或到另一个特定值。

所谓“包含”或“含有”或“包括”是指至少指定的化合物、要素、品种或方法步骤存在于组合物或制品或方法中，但不排除其他化合物、材料、品种或方法步骤的存在，即使其他这样的化合物、材料、品种或方法步骤具有与所命名的相同的功能。

状态、障碍或病症的术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”包括：(1)预防、延迟或降低在可能罹患或易患该状态、障碍或病症但尚未经历或显示该状态、障碍或病症的临床或亚临床症状的受试者中出现该状态、障碍或病症的至少一种临床或亚临床症状的发生率和/或可能性；或(2)抑制状态、障碍或病症，即阻止、减少或延迟疾病的发展或其复发或其至少一种临床或亚临床症状；或(3)缓解疾病，即引起状态、障碍或病症或其至少一种临床或亚临床症状的消退。对待治疗的受试者的益处是统计学上显著的或至少对于患者或临床医师是可感知的。

如本文所用，“受试者”或“患者”或“个体”或“动物”是指人、兽医动物(例如猫、狗、牛、马、绵羊、猪等)和疾病的实验动物模型(例如小鼠、大鼠)。在一个实施方案中，受试者为人。

如本文所用，用于剂量或量的术语“有效”是指化合物或药物组合物的量，其在施用于有需要的受试者时足以产生期望的活性。注意，当施用活性成分的组合时，组合的有效量可以包括或可以不包括如果单独施用将有效的每种成分的量。所需的确切量将因受试者而异，这取决于受试者的物种、年龄和一般状况、所治疗病症的严重程度、所用的一种或多种特定药物、施用模式等。

与本申请的组合物结合使用的短语“药学上可接受的”是指这样的组合物的分子实体和其他成分，其是生理上可耐受的，并且当施用于哺乳动物(例如人)时通常不产生不良反应。优选地，如本文所用，术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的或在美国药典或其他公认的药典中列出的用于哺乳动物，更特别是人的。

与本申请的组合物结合使用的短语“药学上可接受的盐”是指适于对患者施用的任何盐。适合的盐包括但不限于公开于以下文献中的那些：Berge等人，″PharmaceuticalSalts″，J.Pharm.Sci.，1977，66：1，其通过引用并入本文。盐的实例包括但不限于酸衍生的盐、碱衍生的盐、有机盐、无机盐、胺盐和碱金属盐或碱土金属盐，包括但不限于钙盐、镁盐、钾盐、钠盐、盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等的盐。在一些实例中，本文所述的有效负载(例如本文所述的利福霉素类似物)包含叔胺，其中叔胺中的氮原子是有效负载通过其与接头或接头-间隔基键合的原子。在这种情况下，与有效负载的叔胺键合在接头-有效负载分子中产生季胺。季胺上的正电荷可以被抗衡离子(例如氯、溴、碘或任何其他合适带电的部分，例如本文所述的那些)平衡。

本文所用的短语“治疗有效量”是指施用时产生期望的效果的量。确切的量将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见，例如，Lloyd(1999)TheArt，Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)。

术语“最小抑制浓度”(“MIC”)是指在过夜孵育后抑制微生物可见生长的抗微生物剂的最低浓度。用于测定MIC的测定法是已知的。一种方法如以下实施例中所述。

某些基团、部分、取代基和原子用波状线描绘。波状线可以与一个或多个键相交或覆盖一个或多个键。波状线表示基团、部分、取代基或原子通过其键合的原子。例如，苯基基团，其被丙基取代，描述为：

其具有如下结构：

某些基团、部分、取代基和原子被描述为与另一个基团或部分(例如环部分)的漂浮键连接。与另一个键相交的漂浮键表示基团、部分、取代基或原子可以连接到其他基团或部分(例如环部分)的任何未指定的原子，其中其为化学上可能的。例如，在如下结构中：

取代基SP可以在化学上可能的环上的任一位置连接至该环。

如本文所用，术语“给电子基团”具有其在本领域中的普通含义，即通过共振(内消旋)或诱导效应(或诱导)将其一些电子密度提供给共轭π体系从而使π体系更具亲核性的原子或官能团。作为这些电子效应的结果，与这种基团连接的芳环更可能参与亲电取代反应。给电子基团的非限制性实例包括取代和未取代的胺、羟基、烷氧基、烷基、乙烯基、芳基、酰氨基、酰氧基、烷硫基、烷基膦基和氟基团。

如本文所用，术语“烷基”具有其在本领域中的普通含义，并且可包括饱和脂族基团，包括直链烷基、支链烷基、环烷基、烷基取代的环烷基和环烷基取代的烷基。在某些实施方案中，直链或支链烷基在其主链中具有约1-20个碳原子(例如，对于直链为C1-C20，对于支链为C2-C20)，或者约1-10个碳原子，或约1至6个碳原子。在一些实施方案中，环烷基环在其环结构中具有约3-10个碳原子，其中此类环是单环或双环的，或者在环结构中具有约5、6或7个碳。在一些实施方案中，烷基基团可以是低级烷基基团，其中低级烷基基团包含1-4个碳原子(例如，对于直链低级烷基，C1-C4)。

如本文所用，术语“烯基是指具有一个或多个双键的如本文所定义的烷基。

如本文所用，术语“炔基”是指具有一个或多个三键的如本文所定义的烷基。

术语“杂烷基”具有其在本领域中的普通含义，并且是指其中一个或多个碳原子被杂原子(例如，卤素、氧、氮、硫等)替代的如本文所述的烷基。杂烷基的实例包括但不限于烷氧基、聚(乙二醇)-、烷基取代的氨基、四氢呋喃基、哌啶基、吗啉基等。

如本文所用，“芳族基团”是指单环或多环、芳族或杂芳族环，其可具有5至20个环原子，并且任选地可具有1至20个杂原子取代基。在一些实施方案中，芳族基团可任选地具有1至10个杂原子取代基。在一些实施方案中，芳族基团可任选地具有1至5个杂原子取代基。在一些实施方案中，芳族基团是单环或多环芳族环，例如环戊二烯基、苯基、萘基或蒽基。在一些实施方案中，芳族基团是具有5至10个环原子的单环或多环芳族环。在一些实施方案中，芳族基团是含有5至6个碳原子的单环芳族环，例如苯基和环戊二烯基。在一个具体实施方案中，芳族基团为苯基。

单独使用或作为较大部分如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”的一部分使用的术语“芳基”是指具有总共5-14个环成员的单环或双环系统，其中该系统中的至少一个环是芳族的，并且其中该系统中的每个环含有3-7个环成员。在本申请的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环系统，其包括但不限于苯基、联苯基、萘基、联萘基、蒽基等，其可带有一个或多个取代基。如本文所用，术语“芳基”的范围内还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，例如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘酰亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。

如本文所用，表述“MSR1”、“HMSR1”等是指人单程、三聚化II型跨膜糖蛋白模式识别受体，其包含(i)NCBI登录号NP_002436.1中所述的氨基酸序列，(ii)NCBI登录号NP_619729.1中所述的氨基酸序列，和/或(iii)NCBI登录号NP_619730.1中所述的氨基酸序列，它们代表A类巨噬细胞清道夫受体的各种类型和同种型。表述“MSR1”包括单体和多聚体MSR1分子。如本文所用，表述“单体人MSR1”是指MSR1蛋白或其部分，其不含有或具有任何多聚化结构域，并且在正常条件下作为单个MSR1分子存在，而不与另一MSR1分子直接物理连接。

表述“HER2”或“人表皮生长因子受体2”是指人表皮生长因子受体家族的成员。该癌基因的扩增或过度表达已显示在某些侵袭性类型的乳腺癌的发展和进展中起重要作用。近年来，该蛋白质已成为约30％乳腺癌患者的重要生物标志物和治疗靶标。HER2的氨基酸序列如SEQ ID NO：49所示。本文中对蛋白质、多肽和蛋白质片段的所有提及旨在指相应蛋白质、多肽或蛋白质片段的人形式，除非明确指定为来自非人物种。因此，表述“HER2”意指人HER2，除非指定为来自非人物种，例如“小鼠HER2”、“猴HER2”等。

短语“结合HER2的抗体”或“抗HER2抗体”包括特异性识别HER2的抗体及其抗原结合片段。

本申请中使用的所有氨基酸缩写均为美国专利商标局接受的那些，如在37C.F.R.§1.822(B)(J)中举出的。

术语“蛋白质”是指具有超过约20个通过酰胺键共价连接的氨基酸的任何氨基酸聚合物。如本文所用，“蛋白质”包括生物治疗蛋白、用于研究或治疗的重组蛋白、捕获蛋白和其他Fc融合蛋白、嵌合蛋白、抗体、单克隆抗体、人抗体、双特异性抗体、抗体片段、纳米抗体、重组抗体嵌合体、scFv融合蛋白、细胞因子、趋化因子、肽激素等。蛋白质可以使用基于重组细胞的生产系统产生，例如昆虫杆状病毒系统、酵母系统(例如毕赤酵母属(Pichiasp.)物种)、哺乳动物系统(例如CHO细胞和CHO衍生物如CHO-K1细胞)。

本文中对蛋白质、多肽和蛋白质片段的所有提及旨在指相应蛋白质、多肽或蛋白质片段的人形式，除非明确说明为来自非人物种。因此，表述“MSR1”是指人MSR1，除非另有说明为来自非人物种，例如“小鼠MSR1”、“猴MSR1”等。

可以使用任意已知的编号方案给抗体的氨基酸序列编号，包括如下文献中所述的那些：Kabat等人，(″Kabat″编号方案)；Al-Lazikani等人，1997，J.Mol.Biol.，273：927-948(″Chothia″编号方案)；MacCallum等人，1996，J.Mol.Biol.262：732-745(″Contact″编号方案)；Lefranc等人，Dev.Comp.Immunol.，2003，27：55-77(″IMGT″编号方案)；和Honegge andPluckthun，J.Mol.Biol.，2001，309：657-70(″AHo″编号方案)。除非另有说明，否则本文使用的编号方案是Kabat编号方案。然而，编号方案的选择不旨在暗示不存在的序列差异，并且本领域技术人员可以通过检查一种或多种抗体的氨基酸序列容易地确认序列位置。除非另有说明，否则当提及抗体重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号方案”(例如，如Kabat等人同上中所报道的)。

术语“谷氨酰胺酰基修饰的抗体”是指具有至少一个从谷氨酰胺侧链到本申请的伯胺化合物的共价键的抗体。在具体实施方案中，伯胺化合物通过谷氨酰胺侧链上的酰胺键连接。在某些实施方案中，谷氨酰胺是内源性谷氨酰胺。在其他实施方案中，谷氨酰胺是由多肽工程化(例如，通过多肽上的氨基酸缺失、插入、取代或突变)产生反应性的内源性谷氨酰胺。在另外的实施方案中，谷氨酰胺是用含有酰基供体谷氨酰胺的标记(例如，含有谷氨酰胺的肽标记、Q-标记或TGase识别标记)进行工程化的多肽。

术语“转谷氨酰胺酶识别标记”是指包含受体谷氨酰胺残基的氨基酸序列，当在适合的条件下掺入(例如附加到)多肽序列时，其被转谷氨酰胺酶识别，并通过氨基酸序列内的氨基酸侧链和反应配偶体之间的反应导致转谷氨酰胺酶交联。识别标记可以是不天然存在于包含TGase识别标记的多肽中的肽序列。在一些实施方案中，Tgase识别标记包含至少一个Gln。在一些实施方案中，Tgase识别标记包含氨基酸序列XXQX(SEQ ID NO：467)，其中X为任意的氨基酸(例如常见的氨基酸Leu、Ala、Gly、Ser、Val、Phe、Tyr、His、Arg、Asn、Glu、Asp、Cys、Gin、He、Met、Pro、Thr、Lys或Trp或不常见的氨基酸)。在一些实施方案中，包含酰基供体谷氨酰胺的标记包含氨基酸序列，其选自LLQGG(SEQ ID NO：468)、LLQG(SEQ ID NO：469)、LSLSQG(SEQ ID NO：470)、GGGLLQGG(SEQ ID NO：471)、GLLQG(SEQ ID NO：472)、LLQ、GSPLAQSHGG(SEQ ID NO：473)、GLLQGGG(SEQ ID NO：474)、GLLQGG(SEQ ID NO：475)、GLLQ(SEQ ID NO：476)、LLQLLQGA(SEQ ID NO：477)、LLQGA(SEQ ID NO：478)、LLQYQGA(SEQ IDNO：479)、LLQGSG(SEQ ID NO：480)、LLQYQG(SEQ ID NO：481)、LLQLLQG(SEQ ID NO：482)、SLLQG(SEQ ID NO：483)、LLQLQ(SEQ ID NO：484)、LLQLLQ(SEQ ID NO：485)和LLQGR(SEQ IDNO：486)。参见，例如WO2012059882，该文献的全部内容通过引用并入。

在一些实施方案中，TGase识别标记衍生自myc肽，所述myc肽可被导入多种多肽，包括但不限于抗体。参见例如US10036010，其全部内容并入本文。在一些实施方案中，Myc-Tag序列为：EQKLISEEDL(N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C，SEQ ID NO：487)。

如本文所用，术语“抗体”是指包含至少一个特异性结合特定抗原或与特定抗原相互作用的互补决定区(CDR)的任何抗原结合分子或分子复合物。术语“抗体”包括包含四条多肽链(通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链)的免疫球蛋白分子，以及其多聚体(例如IgM)。每条重链包含重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(在本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在不同的实施方案中，抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列相同，或者可以是天然或人工修饰的。可以基于两个或更多个CDR的并排分析来定义氨基酸共有序列。

如本文所用，术语“抗体”还包括完整抗体分子的抗原结合片段。如本文所用，术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括特异性结合抗原以形成复合物的任何天然存在的、可酶促获得的、合成的或遗传改造的多肽或糖蛋白。抗体的抗原结合片段可以使用任何适合的标准技术例如蛋白水解消化或涉及操纵和表达编码抗体可变结构域和任选地恒定结构域的DNA的重组遗传改造技术从例如完整抗体分子衍生。这类DNA是已知的和/或易于从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得，或可以合成。可以以化学方式或通过使用分子生物学技术对DNA进行测序和操作，例如将一个或多个可变和/或恒定结构域排列成适合的构型，或导入密码子，产生半胱氨酸残基，修饰、添加或缺失氨基酸等。

抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab′)2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模拟抗体的高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如，分离的互补决定区(CDR)，如CDR3肽)或受约束的FR3-CDR3-FR4肽。其他工程化分子，例如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双体、三抗体、四抗体、微型抗体、纳米抗体(例如，单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域，也包括在如本文所用的表述“抗原结合片段”内。

抗体的抗原结合片段通常包含至少一个可变结构域。可变结构域可以具有任何大小或氨基酸组成，并且通常将是包含至少一个与一个或多个框架序列相邻或同框的CDR。在具有与VL结构域结合的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以相对于彼此以任何适合的排列定位。例如，可变区可以是二聚体并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。

或者，抗体的抗原结合片段可以包含单体VH或VL结构域。

在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可以包含与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以在本说明书的抗体的抗原结合片段内发现的可变结构域和恒定结构域的非限制性示例性构型包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(V)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；和(xiv)VL-CL。在可变结构域和恒定结构域的任何构型中，包括本文列出的任何示例性构型，可变结构域和恒定结构域可以彼此直接连接或可以通过完全或部分铰链或接头区连接。铰链区可由至少2个(例如5、10、15、20、40、60或更多个)氨基酸组成，其在单个多肽分子中的相邻可变结构域和/或恒定结构域之间产生柔性或半柔性连接。

此外，本说明书的抗体的抗原结合片段可以包含本文所列的任何可变和恒定结构域构型的同型二聚体或异二聚体(或其他多聚体)，其彼此非共价结合和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价结合(例如，通过二硫键)。

与完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如，双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常包含至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够特异性结合单独的抗原或相同抗原上的不同表位。任何多特异性抗体形式，包括本文公开的示例性双特异性抗体形式，可以使用本领域可利用的常规技术适用于本说明书的抗体的抗原结合片段的情况。

本说明书的抗体可通过补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)起作用。“补体依赖性细胞毒性”(CDC)是指在补体存在下本说明书的抗体对抗原表达细胞的裂解。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”(ADCC)是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)非特异性细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)识别结合在靶细胞上的抗体，从而导致靶细胞的裂解。CDC和ADCC可以使用本领域众所周知和可利用的测定法来测量。(参见，例如美国专利NO.5,500,362和5,821,337，和Clynes等人(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95：652-656)。抗体的恒定区在抗体固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性的能力中是重要的。因此，可以基于抗体是否需要介导细胞毒性来选择抗体的同种型。

在某些实施方案中，本说明书的抗体，例如抗-HER2抗体或抗-MSR1抗体，是人抗体。如本文所用，术语“人抗体”旨在包括具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。本说明书的人抗体可以包括不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变导入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包括其中衍生自另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。

在一些实施方案中，抗体可以为重组人抗体。如本文所用，术语“重组人抗体”旨在包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如使用转染到宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体(下文进一步描述)、从重组组合人抗体文库分离的抗体(下文进一步描述)、从人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如小鼠)分离的抗体(参见，例如Taylor等人(1992)Nucl.Acids Res.20：6287-6295)，或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接至其他DNA序列的任何其他方式制备、表达、产生或分离的抗体。这类重组人抗体具有衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，对此类重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用针对人Ig序列转基因的动物时，进行体内体细胞诱变)，因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然衍生自人种系VH和VL序列并且与人种系VH和VL序列相关，但可能不天然存在于体内的人抗体种系库中。

人抗体可以以与铰链异质性相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键保持在一起。在第二种形式中，二聚体不通过链间二硫键连接，并且形成由共价偶联的轻链和重链(半抗体)组成的约75-80kDa的分子。即使在亲和纯化后，这些形式也极难分离。在各种完整IgG同种型中出现第二种形式的频率是由于但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代可以将第二种形式的出现(Angal等人(1993)Molecular Immunology 30：105)显著减少至使用人IgG1铰链典型地观察到的水平。本说明书涵盖在铰链、CH2或CH3区中具有一个或多个突变的抗体，所述突变例如在生产中可能是期望的，以提高所需抗体形式的收率。

本说明书的抗体可以是分离的或纯化的抗体。如本文所用，“分离的抗体”或“纯化的抗体”意指已经从其天然环境的至少一种组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，出于本说明书的目的，已经从生物体的至少一种组分或从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或去除的抗体是“分离的抗体”。例如，已经从反应或反应序列的至少一种组分中纯化的抗体是“纯化的抗体”或由纯化抗体产生。分离的抗体还包括重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经经历至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体或纯化的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。

与衍生抗体的相应种系序列相比，本文公开的抗体可以在重链和轻链可变结构域的框架区和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失。通过将本文公开的氨基酸序列与可从例如公共抗体序列数据库获得的种系序列进行比较，可以容易地确定此类突变。本说明书包括衍生自本文公开的任何氨基酸序列的抗体及其抗原结合片段，其中一个或多个框架和/或CDR区内的一个或多个氨基酸突变为衍生抗体的种系序列的相应残基，或突变为另一种人种系序列的相应残基，或突变为相应种系残基的保守氨基酸取代(此类序列变化在本文中统称为“种系突变”)。本领域普通技术人员从本文公开的重链和轻链可变区序列开始，可以容易地产生许多抗体和抗原结合片段，它们包含一个或多个单独的种系突变或其组合。在某些实施方案中，VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基突变回在衍生抗体的原始种系序列中发现的残基。在其他实施方案中，仅某些残基突变回原始种系序列，例如，仅在FRI的前8个氨基酸内或在FR4的最后8个氨基酸内发现的突变残基，或仅在CDR1、CDR2或CDR3内发现的突变残基。在其他实施方案中，一个或多个框架和/或CDR残基突变为不同种系序列(即，与最初衍生抗体的种系序列不同的种系序列)的相应残基。

此外，本说明书的抗体可以在框架区和/或CDR区内含有两个或更多个种系突变的任何组合，例如，其中某些单个残基突变为特定种系序列的相应残基，而与原始种系序列不同的某些其他残基保持或突变为不同种系序列的相应残基。一旦获得，则可以便利地测试包含一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段的一种或多种期望的特性，例如抗体-药物缀合物的改善的结合特异性、增加的结合亲和力、改善或增强的拮抗或激动生物学特性(视情况而定)、降低的免疫原性、改善的药物-抗体比(DAR)等。

抗体的氨基酸序列可以使用任何已知的编号方案编号，包括Kabat等人，(“Kabat”编号方案)；A1-Lazikani等人，1997，J.Mol.Biol.，273：927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人，1996，J.Mol.Biol.262：732-745(“Contact”编号方案)；Lefranc等人，Dev.Comp.Immunol.，2003，27：55-77(“IMGT”编号方案)；和Honegge and Plückthun，J.Mol.Biol.，2001，309：657-70(“AHo”编号方案)所述的那些。除非另有说明，否则本文使用的编号方案是Kabat编号方案。然而，编号方案的选择不旨在暗示不存在的序列差异，并且本领域技术人员可以通过检查一种或多种抗体的氨基酸序列容易地确认序列位置。除非另有说明，否则当提及抗体重链恒定区中的残基时，通常使用“EU编号方案”(例如，如Kabat等人，同上中所报道的)。

术语“无糖基化抗体”是指不包含可能干扰转谷氨酰胺化反应的糖基化序列的抗体，例如在一条或多条重链上的N297处不具有糖基的抗体。在具体实施方案中，抗体重链具有N297突变。换句话说，根据Kabat等人公开的EU编号系统，抗体被突变为在297位不再具有天冬酰胺残基。在具体的实施方案中，抗体重链具有N297Q或N297D突变。这样的抗体可以通过定点诱变以去除糖基化序列或使糖基化序列失活或通过定点诱变以在除了任何干扰糖基化位点或任何其他干扰结构之外的位点插入谷氨酰胺残基来制备。这样的抗体也可以从天然或人工来源分离。

术语“去糖基化抗体”是指其中N297处的糖基被除去，从而促进Q 295转谷氨酰胺化的抗体。在特定实施方案中，本文提供了包括使抗体(例如N297抗体)去糖基化的额外步骤的方法。

术语“表位”是指与抗体分子可变区中称作互补位的特异性抗原结合位点相互作用的抗原决定簇。单一抗原可以具有一个以上表位。因此，不同的抗体可以结合抗原上的不同区域，并且可以具有不同的生物学效应。表位可以是构象的或线性的。构象表位由来自线性多肽链的不同区段的空间并置的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中的相邻氨基酸残基产生的表位。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺酰基的部分。

本文所用的术语“缀合的蛋白质”或“缀合的抗体”是指与一个或多个化学部分共价连接的蛋白质或抗体。化学部分可以包括本申请的胺化合物。本文详细描述了适用于本申请的接头(L)和有效负载(D)。在特定实施方案中，包含治疗部分的缀合抗体为抗体-药物缀合物(ADC)，也称作抗体-有效负载缀合物或抗体-接头-有效负载缀合物。

术语“药物-抗体比”或(DAR)为与本申请的结合剂缀合的治疗部分(例如药物)的平均数。

术语“接头抗体比”或(LAR)在一些实施方案中也表示为小写字母i，是与本发明的结合剂缀合的反应性伯胺化合物的平均数。这类结合剂，例如抗体可以与包含适合的二烯或亲二烯体的伯胺化合物缀合。所得的用二烯或亲双烯体官能化的结合剂随后可以通过狄尔斯-阿尔德反应与包含相应的二烯或亲双烯体的治疗剂反应。

术语“谷氨酰胺酰基修饰的抗体”是指具有至少一个从谷氨酰胺侧链到化学部分的共价连接的抗体。化学部分可以是本领域技术人员认为适合的任何部分，例如本申请的胺化合物。在具体实施方案中，化学部分通过谷氨酰胺侧链上的酰胺键连接。

短语“药学上可接受的量”是指在有需要的受试者中有效或足够治疗、减轻、缓解或调节至少一种健康问题的作用或症状的量。例如，抗体或抗体-药物缀合物的药学上可接受的量是使用本文提供的抗体或抗体-药物-缀合物有效调节生物靶标的量。适合的药学上可接受的量包括但不限于本文提供的抗体或抗体-药物-缀合物的约0.001％-约10％和其中的任一量，例如约0.01％、约0.02％、约0.03％、约0.04％、约0.05％、约0.06％、约0.07％、约0.08％、约0.09％、约0.1％、约0.2％、约0.3％、约0.4％、约0.5％、约0.6％、约0.7％、约0.8％、约0.9％、约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％。

短语“初始pH”是指在将组分或反应物加入反应混合物之前，用于反应的成分或反应物的pH。例如，在将缓冲溶液加入反应混合物之前，缓冲溶液的初始pH为7.74。

短语“反应pH”是指加入所有反应组分或反应物后反应的pH。

术语“药学上可接受的”是指由美国联邦或州政府的管理机构批准的，或在美国药典或其它公认的药典中列出的，其用于动物，更特别是人。

当涉及核酸或其片段时，术语“基本相同”或“基本上相同”表示，当以适合的核苷酸插入或缺失与另一核酸(或其互补链)进行最佳比对时，通过任何众所周知的序列同一性算法，例如如下所述的FASTA、BLAST或GAP测量的，至少约95％，更优选至少约96％，97％，98％或99％的核苷酸碱基存在核苷酸序列相同性。在某些情况下，与参比核酸分子具有基本上同一性的核酸分子可以编码与由参比核酸分子编码的多肽具有相同或基本上相似的氨基酸序列的多肽。

当应用于多肽时，术语“基本相似”或“基本上相似”意指当例如通过程序GAP或BESTFIT使用默认空位权重进行最佳比对时，两个肽序列共享至少95％的序列同一性，甚至更优选至少98％或99％的序列同一性。优选地，不相同的残基位置因保守氨基酸取代而不同。“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链(R基团)的另一个氨基酸残基取代的氨基酸取代。通常，保守氨基酸取代基本上不会改变蛋白质的功能特性。在两个或更多个氨基酸序列因保守取代而彼此不同的情况下，可以向上调整序列同一性百分比或相似性程度以校正取代的保守性质。进行这种调节的方法是本领域技术人员公知的。参见，例如Pearson(1994)Methods Mol.Biol.24：307-331。具有类似化学特性的侧链的氨基酸组的实例包括(1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含酰胺侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸，和(7)含硫侧链是半胱氨酸和甲硫氨酸。在一些实施方案中，保守氨基酸取代组为：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。

或者，保守置换是在Gonnet等人(1992)Science 256：1443-1445中公开的PAM250对数似然矩阵中具有正值的任何改变。“中等保守”置换是在PAM250对数似然矩阵中具有非负值的任何改变。

通常使用序列分析软件测量多肽的序列相似性，也称为序列同一性。蛋白质分析软件使用分配给各种取代、缺失和其他修饰(包括保守氨基酸取代)的相似性度量来匹配相似的序列。例如，GCG软件包含例如GAP和BESTFIT这样的程序，其可以与默认参数一起使用以确定密切相关的多肽(例如来自不同物种的生物体的同源多肽)之间或野生型蛋白质与其突变蛋白之间的序列同源性或序列同一性。参见例如GCG版本6.1。还可以使用FASTA使用默认或推荐参数(GCG版本6.1中的程序)比较多肽序列。FASTA(例如，FASTA2和FASTA3)提供查询和搜索序列之间最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(Pearson(2000)，同上)。另一个当将描述的序列与含有来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，特定算法是使用默认参数的计算机程序BLAST，特别是BLASTP或TBLASTN。参见，例如Altschul等人(1990)J.Mol.Biol.215：403-410和Altschul等人(1997)Nucleic Acids Res.25：3389-402。

如本文所用，“治疗有效量”是指足以在疾病或病症的治疗或控制中为患者提供治疗益处，或延迟或最小化与疾病或病症相关的一种或多种症状的(化合物的)量。

本申请的化合物

蛋白质-有效负载缀合化合物

根据上述目的和其它目的，本发明提供了蛋白质-有效负载缀合化合物，例如蛋白质-药物缀合化合物、其前体和中间体，药物组合物，以及在需要这种治疗的受试者中治疗某些疾病的方法。根据本申请，本文提供的蛋白质-有效负载缀合物化合物包含与连接至治疗剂或成像剂部分的伯胺化合物缀合的谷氨酰胺酰基修饰的结合剂，其中接头包含狄尔斯-阿尔德加合物，其为如本文所述的取代的环己烯衍生物。

如本文所用，术语“蛋白质-有效负载缀合物”是指包含本申请的结合剂(例如，抗体或其片段)的化合物，其具有与一种或多种本申请的化合物缀合的一个或多个谷氨酰胺残基，所述本申请的化合物包含i)狄尔斯-阿尔德加合物和ii)治疗剂或成像剂部分。示例性的非限制性实例包括本文所述的式(IA)、(IB)和(IC)。

如本文所用，术语“蛋白质-药物缀合物”是指包含本申请的结合剂的化合物(例如，抗体或其片段)，其具有与一种或多种本申请的化合物缀合的一个或多个谷氨酰胺残基，所述本申请的化合物包含i)狄尔斯-阿尔德加合物和ii)治疗部分。示例性的非限制性实例包括本文所述的式(IA)、(IB)和(IC)。在蛋白质-药物缀合物的具体实施方案中，其中结合剂为抗体(例如，单克隆抗体)，任选使用术语“抗体-药物缀合物”或ADC。

根据本申请，提供了蛋白质-有效负载缀合物化合物，其包含式(A)的结构所示例的要素：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；D为如本文所述的治疗部分或成像剂部分，n为1-4的整数，且d为1-10的整数。在某些实施方案中，式A的蛋白质-药物缀合化合物还可以包括本领域技术人员公知的另外的接头和间隔基。

通常，狄尔斯-阿尔德反应是共轭二烯与烯烃或炔烃(通常称作亲双烯体(也称为亲二烯体))之间的化学反应，形成环己烯衍生物，在本文中也称作“狄尔斯-阿尔德加合物”。

虽然不受理论的约束，但狄尔斯-阿尔德反应被视为共轭二烯和亲双烯体(烯烃或炔烃)的[4+2]-环加成，这是一种涉及二烯的4π-电子和亲二烯体的2π-电子的电环化反应。认为反应的驱动力为形成新的σ-键，其在能量上比π-键更稳定。狄尔斯-阿尔德反应和所得加合物的非限制性实例在方案I中示例。

方案I.

本申请的术语“狄尔斯-阿尔德加合物”Z包括任何二价环己烯衍生物，与生产取代的环己烯衍生物所采取的合成步骤无关。也就是说，如本文所用的狄尔斯-阿尔德加合物术语不限于狄尔斯-阿尔德反应的字面产物，而是包括可以通过狄尔斯-阿尔德反应产生(或预期会产生)的结构。

在某些实施方案中，狄尔斯-阿尔德加合物Z包含式1或2的部分：

其中R′每次出现时独立地为H、C

在某些实施方案中，本申请提供了具有式(I)的结构的蛋白质-药物缀合化合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP为如本文所述的任选的间隔基；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；L为本申请的接头；D为如本文所述的治疗部分和/或成像剂部分，n为1-4的整数，且d为1-10的整数。

在某些实施方案中，本申请提供了具有式(IA)的结构的蛋白质-药物缀合化合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP为如本文所述的任选的间隔基；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；L为本申请的接头；D为如本文所述的治疗部分和/或成像剂部分，且d为1-10的整数。

在某些实施方案中，提供了具有式(II)的结构的蛋白质-药物缀合化合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP不存在或为如本文所述的间隔基；Q为CHR、(CHR)

在某些实施方案中，提供了具有式(II)的结构的蛋白质-药物缀合化合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP不存在或为如本文所述的间隔基；L为本申请的接头；D为如本文所述的治疗部分和/或成像剂部分，且d为1-10的整数。

结合剂

在一个实施方案中，本文所述的蛋白质-药物缀合物实施方案的有效性取决于结合剂结合其结合配偶体的选择性。在本申请的一个实施方案中，结合剂是能够以一定特异性结合给定结合配偶体的任何分子。在一个实施方案中，结合剂在哺乳动物内，其中相互作用可产生治疗用途。在一个替代实施方案中，结合剂在体外，其中相互作用可产生诊断用途。在一些方面，结合剂能够结合细胞或细胞群。

本申请的适合的结合剂包括与结合配偶体结合的蛋白质，其中所述结合剂包含一个或多个谷氨酰胺残基。适合的结合剂包括但不限于抗体、淋巴因子、激素、生长因子、病毒受体、白细胞介素或任何其他细胞结合或肽结合分子或物质。

在一个实施方案中，结合剂为抗体。在某些实施方案中，抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(Fab、Fab′和F(ab)2、小体、双体、三抗体等)。本文的抗体可以使用No.6,596,541和美国公布号US 2012/0096572中所述的方法人源化，其各自通过引用整体并入。在本申请的蛋白质-药物缀合化合物的某些实施方案中，BA为人源化单克隆抗体。例如，BA可以为结合HER2或MSR1的单克隆抗体。

在本申请中，抗体可以为本领域技术人员认为适合的任何抗体。在一些实施方案中，抗体在至少一个多肽链序列中包含至少一个谷氨酰胺残基。在某些实施方案中，抗体包含一个或多个Gln295残基。在某些实施方案中，所述抗体包含两条重链多肽，每条重链多肽具有一个Gln295残基。在进一步的实施方案中，抗体在重链295以外的位点包含一个或多个谷氨酰胺残基。这类抗体可从天然来源分离或改造以包含一个或多个谷氨酰胺残基。用于将谷氨酰胺残基改造入抗体多肽链中的技术在本领域技术人员的技能范围内。在某些实施方案中，抗体为无糖基化的。

抗体可以是本领域技术人员已知的任何形式。在某些实施方案中，抗体包含轻链。在某些实施方案中，轻链为κ轻链。在某些实施方案中，轻链为λ轻链。

在某些实施方案中，抗体包含重链。在一些方面，重链为IgA。在一些方面，重链为IgD。在一些方面，重链为IgE。在一些方面，重链为IgG。在一些方面，重链为IgM。在一些方面，重链为IgG1。在一些方面，重链为IgG2。在一些方面，重链为IgG3。在一些方面，重链为IgG4。在一些方面，重链为IgA1。在一些方面，重链为IgA2。

在一些实施方案中，抗体为抗体片段。在一些方面，抗体片段为Fv片段。在一些方面，抗体片段为Fab片段。在一些方面，抗体片段为F(ab′)2片段。在一些方面，抗体片段为Fab′片段。在一些方面，抗体片段为scFv(sFv)片段。在一些方面，抗体片段为scFv-Fc片段。

在一些实施方案中，抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体为多克隆抗体。

在一些实施方案中，抗体为嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体为人源化抗体。在一些实施方案中，抗体为人抗体。

抗体可以对本领域技术人员认为适合的任何抗原具有结合特异性。在某些实施方案中，抗原为跨膜分子(例如受体)或生长因子。示例性抗原包括但不限于分子，例如肾素；生长激素，包括人生长激素和牛生长激素；生长激素释放因子；甲状旁腺激素；促甲状腺激素；脂蛋白；α1-抗胰蛋白酶；胰岛素A链；胰岛素B链；胰岛素原；促卵泡激素；降钙素；促黄体激素；胰高血糖素；凝血因子，如因子VmC、因子IX、组织因子(TF)和von Willebrands因子；抗凝血因子如蛋白C；心房利钠因子；肺表面活性剂；纤溶酶原激活物，如尿激酶或人尿或组织型纤溶酶原激活物(t-PA)；铃蟾肽；凝血酶；造血生长因子；肿瘤坏死因子-α和-β；脑啡肽酶；RANTES(调节活化正常T细胞表达和分泌)；人巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1-α)；血清白蛋白，如人血清白蛋白；Muellerian抑制物质；松弛素A链；松弛素B链；松弛素原；小鼠促性腺激素相关肽；微生物蛋白，如β内酰胺酶；DNase；19E；细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA)，如CTLA-4；抑制素；激活素；血管内皮生长因子(VEGF)；激素或生长因子的受体；蛋白A或D；类风湿因子；神经营养因子，如骨源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3、-4、-5或-6(NT-3、NT4、NT-5或NT-6)，或神经生长因子，如NGF-β；血小板衍生生长因子(PDGF)；成纤维细胞生长因子如aFGF和bFGF；成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)、表皮生长因子(EGF)；转化生长因子(TGF)如TGF-α和TGF-β，包括TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4或TGF-β5；胰岛素样生长因子-1和-2(IGF-1和IGF-2)；des(1-3)-IGF-1(脑IGF-I)、胰岛素样生长因子结合蛋白、EpCAM、GD3、FLT3、PSMA、PSCA、MUCI、MUCI6、STEAP、CEA、TENB2、EphA受体、EphB受体、叶酸受体、FOLRI、间皮素、cripto、αVβ6、整联蛋白、VEGF、VEGFR、EGFR、转铁蛋白受体、1RTAI、1RTA2、1RTA3、1RTA4、1RTA5；CD蛋白，例如CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD8、CDII、CDI4、CDI9、CD20、CD21、CD22、CD25、CD26、CD28、CD30、CD33、CD36、CD37、CD38、CD40、CD44、CD52、CD55、CD56、CD59、CD70、CD79、CD80、CD81、CD103、CD105、CD134、CD137、CD138、CDI52或美国公布号US 2008/0171040或美国公布号US 2008/0305044中公开的结合一种或多种肿瘤相关抗原或细胞表面受体的抗体，其全部内容通过引用并入本文；促红细胞生成素；骨诱导因子；免疫毒素；骨形态发生蛋白(BMP)；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSFs)，例如M-CSF、GM-CSF和G-CSF；白细胞介素(IL)，例如IL-1至IL-10；超氧化物歧化酶；T细胞受体；表面膜蛋白；衰变加速因子；病毒抗原，例如HIV包膜的部分；转运蛋白；归巢受体；地址素；调节蛋白；整联蛋白，如CDlla、CDllb、CDllc、CDI8、ICAM、VLA-4和VCAM；肿瘤相关抗原，如AFP、ALK、B7H4，BAGE蛋白、β-连环蛋白、brc-abl、BRCA1、BORIS、CA9(碳酸酐酶IX)、胱天蛋白酶-8、CD20、CD40、CD123、CDK4、CEA、CLEC12A、c-Kit、cMET、CTLA4、细胞周期蛋白-B1、CYP1B1、EGFR、EGFRvIII、内皮因子、Epcam、EphA2、ErbB2/HER2、ErbB3/HER3、ErbB4/HER4、ETV6-AML、Fra-1、FolRl、GAGE蛋白(例如，GAGE-1、GAGE-2)、GD2、GD3、GloboH、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3；GM3、gp100、Her2、HLA/B-raf、HLA/EBNA1、HLA/k-ras、HLA/MAGE-A3、hTERT、IGF1R、LGR5、LMP2、MAGE蛋白(例如MAGE-1、-2、-3、-4、-6和-12)、MART-1、间皮素、ML-IAP、Muc1、Muc16(CA-125)、MUM1、NA17、NGEP、NY-BR1、NY-BR62、NY-BR85、NY-ESO1、OX40、p15、p53、PAP、PAX3、PAX5、PCTA-1、PDGFR-α、PDGFR-β、PDGF-A、PDGF-B、PDGF-C，PDGF-D，PLAC1，PRLR、PRAME、PSCA、PSGR、PSMA(FOLH1)、RAGE蛋白、Ras、RGS5、Rho、SART-1、SART-3、STEAP1、STEAP2、STn、存活素、TAG-72、TGF-β、TMPRSS2、Tn、TNFRSF17、TRP-1、TRP-2、酪氨酸酶和尿溶蛋白-3和本文列出的多肽的任一种的片段。

示例性抗原还包括、但不限于BCMA、SLAMF7、B7H4、GPNMB、UPK3A和LGR5。示例性抗原还包括、但不限于MUC16、PSMA、STEAP2和HER2。

在一些实施方案中，抗原包括促乳素受体(PRLR)或前列腺特异性膜抗原(PSMA)。在一些实施方案中，抗原包括MUC16。在一些实施方案中，抗原包括STEAP2。在一些实施方案中，抗原包括PSMA。在一些实施方案中，抗原包括HER2。在一些实施方案中，抗原为促乳素受体(PRLR)或前列腺特异性膜抗原(PSMA)。在一些实施方案中，抗原为MUC16。在一些实施方案中，抗原包括PSMA。在一些实施方案中，抗原为HER2。在一些实施方案中，抗原为STEAP2。

结合剂还包括锚蛋白复制蛋白、干扰素、淋巴因子如IL-2或IL-3、激素如胰岛素和糖皮质激素、生长因子如EGF、转铁蛋白、纤连蛋白III型等。

本文的一些实施方案是治疗或诊断用途的靶向特异性的。在一个实施方案中，制备结合剂以与定义为肿瘤抗原的抗原相互作用并结合，所述抗原包括对一种类型的肿瘤具有特异性的抗原或在特定类型的肿瘤上共享、过表达或修饰的抗原。实例包括：具有肺癌的α-辅肌动蛋白-4、具有黑素瘤的ARTC1、具有慢性骨髓性白血病的BCR-ABL融合蛋白、具有黑素瘤的B-RAF、CLPP或Cdc27、具有鳞状细胞癌的CASP-8和具有肾细胞癌的HSP70-2以及以下共有的肿瘤特异性抗原，例如：BAGE-1、GAGE、GNTV、KK-LC-1、MAGE-A2、NA88-A、TRP2-INT2。在一些实施方案中，抗原为PRLR或HER2。在一些实施方案中，所述抗体结合STEAP2、MUC16、EGFR、EGFRVIII、FGR2或PRLR。

适合于蛋白质-药物缀合物的抗-HER2抗体

在一些实施方案中，抗体为抗-HER2抗体。在一些实施方案中，抗体为曲妥珠单抗、培妥珠单抗(2C4)或马吉妥昔单抗(MGAH22)。在一些实施方案中，抗体为曲妥珠单抗。根据某些实施方案，本申请的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)包含抗-HER2抗体。在一些实施方案中，抗体结合HER2，包括WO 2019/212965 A1中描述的那些。

适合于蛋白质-药物缀合物的抗-MSR1抗体

本申请的蛋白质-药物缀合物任选地包含抗-MSR1抗体，例如全长(例如IgG1或IgG4抗体)或抗原结合部分(例如Fab、F(ab′)

本文所述的抗体-药物缀合物的实施方案可以包含表1和2中列出的抗-MSR1抗体。表1列出了示例性抗-MSR1抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。表2列出了示例性抗-MSR1抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列识别符。

特异性结合MSR1的其它适合的抗体或其抗原结合片段包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，所述HCVR/LCVR包含与表1中列出的任何LCVR氨基酸序列配对的表1中列出的任何HCVR氨基酸序列。某些实施方案涉及包含抗体或其抗原结合片段的抗体-药物缀合物，所述抗体或其抗原结合片段包含表1中列出的任何示例性抗-MSR1抗体内所含的HCVR4LCVR氨基酸序列对。在一些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自：2/10、23/42、50/58；90/98和282/290。

用于本文所述的抗体-药物缀合物的适合的抗体或其抗原结合片段包括特异性结合MSR1并包含重链CDR1(HCDR1)的那些抗体或其抗原结合片段，所述重链CDR1(HCDR1)包含选自表1中列出的任何HCDR1氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。

特异性结合MSR1的其他适合的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR2(HCDR2)，所述重链CDR2(HCDR2)包含选自以下的氨基酸序列：与表1中列出的任何HCDR2氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。

特异性结合MSR1的其它适合的抗体或其抗原结合片段包含重链CDR3(HCDR3)，其包含选自表1中列出的任何HCDR3氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本相似的序列。

用于本文所述的抗体-药物缀合物的适合的抗体或其抗原结合片段包括特异性结合MSR1并包含轻链CDR1(LCDR1)的那些，所述轻链CDR1(LCDR1)包含选自表1中列出的任何LCDR1氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。

特异性结合MSR1的其他适合的抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR2(LCDR2)，所述轻链CDR2(LCDR2)包含选自表1中列出的任何LCDR2氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。

特异性结合MSR1的其它适合的抗体或其抗原结合片段包含轻链CDR3(LCDR3)，所述轻链CDR3(LCDR3)包含选自表1中列出的任何LCDR3氨基酸序列的氨基酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上相似的序列。

特异性结合MSR1的其它适合的抗体或其抗原结合片段包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)，其包含与表1中列出的任何LCDR3氨基酸序列配对的表1中列出的任何HCDR3氨基酸序列。某些实施方案涉及抗体或其抗原结合片段，其包含在表1中列出的任何示例性抗-MSR1抗体内包含的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对。在一些实施方案中，HCDR3/LCDR3氨基酸序列对选自：8/16、40/48、56/64；96/104和288/296。

用于本文所述的抗体-药物缀合物的适合的抗体或其抗原结合片段包括特异性结合MSR1并包含表1中列出的任何示例性抗-MSR1抗体中所含的一组六个CDR(即HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)的那些抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组选自：4-6-8-12-14-16；36-38-40-44-46-48；52-54-56-60-62-64；92-94-96-100-102-104和284-286-288-292-294-296。

在一个相关实施方案中，特异性结合MSR1的合适抗体或其抗原结合片段包含一组六个CDR(即，HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)，所述CDR包含在由表1中列出的任何示例性抗-MSR1抗体定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对内。例如，本申请包括适合的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合MSR1并且包含选自如下的HCVR/LCVR氨基酸序列对内包含的HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组：2/10、23/42、50/58、90/98和282/290。用于鉴定HCVR和LCVR氨基酸序列内的CDRs的方法和技术是本领域众所周知的，并且可以用于鉴定本文公开的指定HCVR和/或LCVR氨基酸序列内的CDR。可用于鉴定CDR边界的示例性规则包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般而言，Kabat定义基于序列变异性，Chothia定义基于结构环区域的位置，且AbM定义是Kabat与Chothia方法之间的折衷。参见，例如Kabat，″Sequences ofProteins ofImmunological Interest，″NationalInstitutes of Health，Bethesda，Md.(1991)；A1-Lazikani等人，J.Mol.Biol.273：927-948(1997)；和Martin等人，Proc.Natl.Acad..Sci.USA86：9268-9272(1989)。公共数据库也可利用于鉴定抗体内的CDR序列。

本文还提供了编码抗-MSR1抗体或其部分的核酸分子，其用于制备本文所述的抗体-药物缀合物。例如，本文提供了编码表1中列出的任何HCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何HCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何LCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何LCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何HCDR1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何HCDR1核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少98％或至少99％的序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何HCDR2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何HCDR2核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何HCDR3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何HCDR3核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何LCDR1氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何LCDR1核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何LCDR2氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何LCDR2核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码表1中列出的任何LCDR3氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何LCDR3核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列。

本文还提供了编码HCVR的核酸分子，其中HCVR可以包含一组三个CDR(即HCDR1-HCDR2-HCDR3)，其中HCDR1-HCDR2-HCDR3氨基酸序列组如表1中列出的任何示例性抗-MSR1抗体所定义。

本文还提供了编码LCVR的核酸分子，其中LCVR可以包含一组三个CDR(即LCDR1-LCDR2-LCDR3)，其中LCDR1-LCDR2-LCDR3氨基酸序列组如表1中列出的任何示例性抗-MSR1抗体所定义。

本文还提供了编码HCVR和LCVR的核酸分子，其中HCVR可以包含表1中列出的任何HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，并且其中LCVR可以包含表1中列出的任何LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施方案中，核酸分子可以包含选自表2中列出的任何HCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性基本上相似的序列，以及选自表2中列出的任何LCVR核酸序列的多核苷酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似的序列。在根据本申请的此方面的某些实施方案中，核酸分子编码HCVR和LCVR，其中HCVR和LCVR均来源于表1中列出的相同抗-MSR1抗体，例如H1H21234N。

本文还提供了重组表达载体，其能够表达包含HER2或抗-MSR1抗体的重链或轻链可变区的多肽，用于制备本文所述的抗体-药物缀合物。例如，实施方案包括重组表达载体，其包含本文提及的任何核酸分子，即编码表1中列出的任何HCVR、LCVR和/或CDR序列的核酸分子。本申请的范围内还包括已导入这类载体的宿主细胞，以及通过在允许产生抗体或抗体片段的条件下培养宿主细胞并回收如此产生的抗体和抗体片段来产生用于制备本文所述的抗体-药物缀合物的抗体或其部分的方法。

用于本文所述的抗体-药物缀合物的适合的抗-MSR1抗体包括具有修饰的糖基化模式的那些。在一些实施方案中，修饰抗体以去除不期望的糖基化位点。在替代实施方案中，抗体缺乏寡糖链上存在的岩藻糖部分，例如，以增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等人(2002)JBC 277：26733)。在其他实施方案中，改变半乳糖基化以改变补体依赖性细胞毒性(CDC)。

根据某些实施方案，本申请的抗体-药物缀合物包含抗-MSR1抗体，所述抗-MSR1抗体包含Fc结构域，所述Fc结构域包含一个或多个突变，所述突变例如在酸性pH下与中性pH相比增强或减少抗体与FcRn受体的结合。例如，本文提供了包含抗-MSR1抗体的抗体-药物缀合物，所述抗-MSR1抗体包含Fc结构域的C

例如，实施方案包括包含抗-MSR1抗体的抗体-药物缀合物，所述抗-MSR1抗体包含Fc结构域，所述Fc结构域包含选自如下的一对或多对突变或突变组：250Q和248L(例如T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如M428L和N434S)；和433K和434F(例如H433K和N434F)。前述Fc结构域突变和本文公开的抗体可变结构域内的其他突变的所有可能组合都涵盖在本申请的范围内。

重链和轻链可变区氨基酸和核酸序列

表1列出了本文所述的所选抗-MSR1抗体的重链和轻链可变区和CDR的氨基酸序列标识符。相应的核酸序列标识符如表2中所示。

表1：氨基酸序列识别符

/>

表2：核酸序列识别符

/>

抗体在本文中典型地根据以下命名法提及：Fc前缀(例如″H1H，″″H2aM″等)，随后是数字识别符(例如″21227″、″21228″、″21231″等)，随后是″P″、″N″或″P2″后缀，如表1和2中所示。因此，根据该命名法，抗体在本文中可以称作例如“H1H21227N”、“H2aM21228N”、“H1H27729P”、“H1H27760P2”等。本文使用的抗体名称上的前缀表示抗体的特定Fc区同种型。特别地，“H1H”抗体具有人IgG1 Fc(所有可变区均为完全人的，如抗体名称中的第一个“H”所示)，而″H2aM″抗体具有小鼠IgG2a Fc。如本领域普通技术人员可以理解的，具有特定Fc同种型的抗体可以转化为具有不同Fc同种型的抗体(例如，具有小鼠IgG4Fc的抗体可以转化为具有人IgG1的抗体等)，但在任何情况下，可变结构域(包括CDR)-其由表1和2中所示的数字标识符指示-保持相同，并且无论Fc结构域的特性如何，预期结合特性是相同的或基本上相似的。

抗体修饰.本文所述的抗-MSR1抗体(例如，H1H21234N)用原始人Fcγ部分以及具有所有三种抗-MSR1抗体的N297Q单点突变的形式产生。本文所述的所有其他抗体均用人Fcγ部分中的N297Q单点突变制备。

在一些实施方案中，根据已知方法生产蛋白质药物缀合物，得到包含如式(B)中所示的要素的缀合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；D为如本文所述的治疗部分和/或成像剂部分，且d为1-10的整数。在某些实施方案中，式B的蛋白质-药物缀合化合物还可以包括本领域技术人员已知的另外的接头和间隔基。

在某些实施方案中，本申请提供了具有式(BI)的结构的蛋白质-药物缀合化合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；SP为如本文所述的任选的间隔基；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；L为本申请的接头；D为如本文所述的治疗部分和/或成像剂部分，且d为1-10的整数。

在某些实施方案中，本申请提供了具有式(BII)的结构的蛋白质-药物缀合化合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；SP不存在或为如本文所述的间隔基；L为本申请的接头；D为如本文所述的治疗部分和/或成像剂部分，且d为1-10的整数。

用于缀合至抗体残基或其抗原结合片段的技术和接头为本领域公知的。抗原用于本方面上下文中的示例性氨基酸，例加赖氨酸(参见例如US 5,208,020；US 2010/0129314；Hollander等人，Bioconjugate Chem.，2008，19：358-361；WO 2005/089808；US 5,714,586；US 2013/0101546；和US 2012/0585592)、半胱氨酸(参见例如US 2007/0258987；WO 2013/055993；WO 2013/055990；WO 2013/053873；WO 2013/053872；WO 2011/130598；US 2013/0101546；和US 7,750,116)、硒代半胱氨酸(参见例如WO 2008/122039；和Hofer等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，2008，105：12451-12456)、甲酰基甘氨酸(参见例如Carrico等人，Nat.Chem.Biol.，2007，3：321-322；Agarwal等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，2013，110：46-51，和Rabuka等人，Nat.Protocols，2012，10：1052-1067)、非天然氨基酸(参见例如WO 2013/068874和WO 2012/166559)和酸性氨基酸(参见例如WO 2012/05982)。赖氨酸缀合也可以通过NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)进行。接头还可以通过在硫醇之间形成碳桥而缀合至半胱氨酸残基，包括裂解的链间二硫键的半胱氨酸残基(参见例如US 9,951,141和US 9,950,076)。接头也可以通过与碳水化合物(参见例如US 2008/0305497，WO 2014/065661和Ryan等人，Food&Agriculture Immunol.，2001，13：127-130)和二硫化物接头(参见例如WO2013/085925、WO 2010/010324、WO 2011/018611和Shaunak等人，Nat.Chem.Biol.，2006，2：312-313)连接缀合至抗原-结合蛋白。位点特异性缀合技术也可用于指导与抗体或抗原结合蛋白的特定残基的缀合(参见例如Schumacher等人J Clin Immunol(2016)36(增刊1)：100)。在下文更详细讨论的具体实施方案中，位点特异性缀合技术包括通过转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺缀合(参见例如Schibli，Angew Chemie Inter Ed.2010，49，9995)。

转谷酰胺酶介导的位点特异性缀合

在一些实施方案中，根据提供谷氨酰胺酰基修饰的蛋白质的已知方法产生蛋白质药物缀合物。用于缀合伯胺化合物的技术是本领域已知的。本文采用位点特异性缀合技术来使用通过转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺缀合来指导与谷氨酰胺的缀合(参见，例如Schibli，Angew Chemie Inter Ed.2010，49，9995)。

本申请的含伯胺化合物可以通过基于转谷氨酰胺酶的化学-酶促缀合与一个或多个谷氨酰胺残基缀合(参见，例如Dennler等人，Protein Conjugate Chem.2014，25，569-578和WO 2017/147542)。例如，在转谷氨酰胺酶存在下，抗体的一个或多个谷氨酰胺残基可以与伯胺接头化合物偶联。简言之，在一些实施方案中，在酶转谷氨酰胺酶存在下，用伯胺化合物处理具有谷氨酰胺残基(例如Gln295，即Q295残基)的结合剂，下文更详细地描述。在某些实施方案中，结合剂是无糖基化的。在某些实施方案中，结合剂是去糖基化的。

在某些实施方案中，结合剂在至少一个多肽链序列中包含至少一个谷氨酰胺残基。在某些实施方案中，结合剂包含两条重链多肽，每条重链多肽具有一个Gln295残基。在进一步的实施方案中，结合剂在重链295以外的位点包含一个或多个谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，结合剂(例如抗体)可以通过定向诱变的方法制备，以便在不导致抗体功能或结合丧失的位点插入谷氨酰胺残基的诱变。例如，本文包括携带如本文所述的Asn297Gln(N297Q)突变的抗体。在一些实施方案中，具有Gln295残基和/或N297Q突变的抗体在其可变区中包含一个或多个另外的天然存在的谷氨酰胺残基，其可以是转谷氨酰胺酶可及的，因此能够与接头或接头-有效负载缀合。示例性天然存在的谷氨酰胺残基可以在例如轻链的Q55处找到。在此类情况下，通过转谷氨酰胺酶缀合的结合剂(例如抗体)可以具有高于预期的DAR值(例如DAR高于4)。任何这样的抗体可以从天然或人工来源分离。

在本申请的某些实施方案中，DAR为1、2、3、4、5、6、7或8个药物分子/抗体。在一些实施方案中，DAR为1-8。在一些实施方案中，DAR为1-6。在某些实施方案中，DAR为2-4。在一些情况中，DAR为2-3。在某些情况中，DAR为0.5-3.5。在一些实施方案中，DAR约为1或约1.5或约2或约2.5或约3或约3.5。

伯胺化合物

可以用于转谷氨酰胺酶介导的包含谷氨酰胺残基的结合剂(例如抗体或抗原结合化合物)的偶联的伯胺化合物可以为本领域普通技术人员认为有用的任何伯胺。

反应性伯胺化合物

在某些实施方案中，伯胺化合物包含能够在转谷氨酰胺化后进一步反应的反应性基团。在这些实施方案中，谷氨酰胺酰基修饰的蛋白质(例如抗体)能够与如本文所公开的反应性有效负载化合物或反应性接头-有效负载化合物进一步反应，以形成蛋白质-有效负载缀合物。更具体地，反应性有效负载化合物或反应性连接体-有效负载化合物包含能够与伯胺化合物的反应性基团反应的反应性基团。在某些实施方案中，本申请的反应性基团包含能够进行狄尔斯-阿尔德环加成的部分。在某些实施方案中，反应性基团为二烯。在某些实施方案中，反应性基团为亲双烯体。在本申请的某些实施方案中，反应性基团与结合剂和转谷氨酰胺化反应条件相容。

在本申请的某些实施方案中，提供了反应性伯胺化合NH

二烯X

本申请的某些实施方案包含下式3或4的二烯部分X：

其中R为H或C

本申请的某些实施方案包含选自如下的结构的二烯部分X：

其中R为H或给电子基团。

本申请的某些非限制性实施方案包含选自如下的结构的含二烯部分X：

/>

本申请的某些实施方案包含选自如下的结构的二烯部分X：

其中R每次出现时独立地为H或给电子基团。

本申请的某些实施方案包含选自如下的结构的二烯部分X：

本申请的某些实施方案包含选自如下的结构的二烯部分X：

本申请的某些实施方案包含如下结构之一的环戊二烯或甲基取代的环戊二烯：

在本申请的实施方案中，提供了反应性伯胺化合物NH

在本申请的某些实施方案中，提供了如下结构的反应性伯胺化合物：

其中R为H或C

在本申请的某些实施方案中，提供了如下结构的反应性伯胺化合物：

其中R为H或C

在本申请的某些实施方案中，提供了如下结构的反应性伯胺化合物：

在某些实施方案中，反应性伯胺化合物为如下结构之一或其混合物：

亲双烯体Y

本申请的某些实施方案包含下式5或6的亲双烯体部分：

其中：R′为H或C

本申请的某些非限制性实施方案包含如下结构之一的亲双烯体部分Y：

本申请的某些实施方案包含如下结构之一的亲双烯体部分Y：

其中K为CH、N、

本申请的某些实施方案包含如下结构之一的亲双烯体部分Y：

其中：J每次出现时独立地为CH或N。

本申请的某些非限制性实施方案包含如下结构之一的亲双烯体部分Y：

在某些实施方案中，亲双烯体部分包含式6a的马来酰亚胺：

在其他实施方案中，提供了反应性伯胺化合物NH

在某些实施方案中，反应性伯胺化合物包含如下结构之一的亲双烯体：

其中：R′为H或C

在某些实施方案中，反应性伯胺化合物包含如下结构之一的亲双烯体：

其中K为CH、N、

在某些实施方案中，反应性伯胺化合物包含如下结构之一的亲双烯体：

在某些实施方案中，反应性伯胺化合物包含如下结构的马来酰亚胺：

间隔基SP

在本文所述的某些实施方案中，SP任选地存在并且包含间隔基，其选自-(CH

在某些实施方案中，SP包含一个连接基团，其与一个二烯或一个亲双烯体或一个狄尔斯-阿尔德加合物共价键合。这类SP称作“直链的”。

在其他实施方案中，SP包含两个连接基团，它们与两个二烯或亲双烯体或两个狄尔斯-阿尔德加合物共价键合。在其他实施方案中，SP包含三个连接基团，它们与三个二烯或亲双烯体或三个狄尔斯-阿尔德加合物共价键合。这类SP称作“支链的”。

在一个实施方案中，SP共价键合至一个二烯。在一个实施方案中，SP共价键合至一个狄尔斯-阿尔德加合物。

在一个实施方案中，SP共价键合至两个二烯。在一个实施方案中，SP共价键合至两个狄尔斯-阿尔德加合物。在这种情况下，SP可以键合至两个二烯或狄尔斯-阿尔德加合物，它们彼此可以相同或不同。在一个实施方案中，SP键合至两个不同二烯。在另一个实施方案中，SP键合至两个不同狄尔斯-阿尔德加合物。

支链SP的实例包括、但不限于

在本申请的某些实施方案中，SP包含选自如下的间隔基：-(CH

在本申请的某些实施方案中，SP为-(CH

在具体的实施方案中，SP为具有1-20个PEG单体的二价聚乙二醇(PEG)基团。如本文所用，“PEG#”是指通过末端氧原子和末端碳原子理解的二价乙二醇部分，其中#为1-100。例如，当#为1时，PEG 1为-OCH

在某些实施方案中，伯胺-间隔基化合物为下式之一：

H

H

H

在某些实施方案中，伯胺-间隔基化合物选自如下：

H

H

H

其中W包含如上文所定义的二烯(X)或亲双烯体(Y)。

在某些实施方案中，任一的烷基或亚烷基(即-CH

谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质

本文提供了谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质，例如抗体，其包含与一种或多种如本文所定义的反应性伯胺化合物缀合的结合剂。

在某些实施方案中，使无糖基化抗体接触本申请的反应性伯胺化合物，以产生如本文更详细描述的谷氨酰胺酰基-修饰的抗体。在某些实施方案中，去糖基化抗体与反应性伯胺化合物反应，产生谷氨酰胺酰基-修饰的抗体。出于本说明书的目的。可以从任何来源或通过本领域技术人员认为适合的任何技术得到或生产去糖基化抗体。在某些实施方案中，根据如下步骤(1)使抗体去糖基化。在其他实施方案中，去糖基化或无糖基化抗体包含至少一个谷氨酰胺残基是足够的，其完全不含干扰糖基化或其他结构，可利用于与转谷氨酰胺酶反应，如下所述。

反应性伯胺化合物可以为伯胺，其能够与谷氨酰胺残基在转谷酰胺酶存在下形成共价键，并且包含反应性基团W(包括X和z)，如下所述。有用的伯胺如本文章节中所述。

在某些实施方案中，本申请的谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-W)的结构：

其中：BA为结合剂；SP不存在或为间隔基；W为包含亲双烯体的部分，且l为1-10的整数。

在某些实施方案中，本申请的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-X)的结构：

其中：BA为结合剂；SP不存在或为间隔基；X为包含二烯的部分，且l为1-10的整数。

在某些实施方案中，本申请的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-Y)的结构：

其中：BA为结合剂；SP不存在或为间隔基；Y为包含亲双烯体的部分，且l为1-10的整数。

在某些实施方案中，本申请的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-X1)的结构：

其中：BA为结合剂；且l为1-10的整数。在某些实施方案中，BA为曲妥珠单抗。在某些实施方案中，BA为抗-MSR1抗体，例如H1H21234N。

在某些实施方案中，本申请的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-X2)的结构：

其中：BA为结合剂，且l和n独立地为1-10的整数。在某些实施方案中，BA为曲妥珠单抗。在某些实施方案中，BA为抗-MSR1抗体，例如H1H21234N。

在某些实施方案中，本申请的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-X3)的结构：

其中：BA为结合剂，且l和n独立地为1-10的整数。在某些实施方案中，BA为曲妥珠单抗。在某些实施方案中，BA为抗-MSR1抗体，例如H1H21234N。

在某些实施方案中，本申请的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)具有式(V-X4)的结构：

其中：BA为结合剂，且l和n独立地为1-10的整数。在某些实施方案中，BA为曲妥珠单抗。在某些实施方案中，BA为抗-MSR1抗体，例如H1H21234N。

在本申请的某些实施方案中，接头-抗体比或LAR(例如在如下情况中缩写为字母“l”，例如在上述式V-W、V-X和V-Y中)为1、2、3、4、5、6、7或8个药物分子/抗体。在一些实施方案中，LAR为1-8。在一些实施方案中，LAR为1-6。在某些实施方案中，LAR为2-4。在一些情况中，LAR为2-3。在某些情况中，LAR为0.5-3.5。在一些实施方案中，LAR约为1或约1.5或约2或约2.5或约3或约3.5。

在本申请的某些实施方案中，l为1-10、1-9、1-8、1-7、1-6、1-5、1-4、1-3、1-2、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6或4-5的整数。在某些实施方案中，l为1-4、1-3、1-2、2-4、2-3或3-4的整数。在某些实施方案中，l为2。在某些实施方案中，d为3。在某些实施方案中，l为4。在一些实施方案中，l为4。

在某些实施方案中，BA可以包含两个或四个谷氨酰胺残基。在某些实施方案中，BA可以包含Q295残基。在某些实施方案中，BA可以包含N297Q突变。在某些实施方案中，BA可以包含Q295和N297Q。在这类实施方案中，因为BA可以为二聚化的，所以对于具有反应性伯胺化合物的转谷酰胺酶，BA具有四个谷氨酰胺残基。在这类实施方案中，l为1-4。在某些实施方案中，l为2。在某些实施方案中，l为3。在某些实施方案中，l为4。

式(IV-X)的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)是有用的，例如用于与反应性接头-有效负载分子，例如Y-L-D进行狄尔斯-阿尔德环加成反应，形成蛋白质-药物缀合物。

式(IV-Y)的反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)是有用的，例如用于与反应性接头-有效负载分子，例如X-L-D进行狄尔斯-阿尔德环加成反应，形成蛋白质-药物缀合物。

反应性接头-有效负载化合物

在一些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为式W-L-D的化合物，其中反应性接头-有效负载化合物包含二价接头L、反应性基团W和有效负载D，其中W能够与如本文所述的谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如抗体)的反应性基团反应。如所述的，本申请包括包含下列步骤的方法，使反应性谷氨酰胺酰基-修饰的蛋白质(例如BA-[Gln-NH-SP-W]

在某些实施方案中，本申请的反应性接头-有效负载化合物包含如本文部分中所定义的二烯(X)。在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物包含亲双烯体(Y)如本文部分中所定义。

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载具有如下结构：

/>

其中R为H或给电子基团；且Q为CH

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载具有如下结构：

其中R为H或C

在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构之一：

其中L为如本文所定义的接头，且D为如本文所定义的治疗部分和/或成像剂部分。

在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构之一或其混合物：

其中L为如本文所定义的接头，且D为如本文所定义的治疗部分和/或成像剂部分。

在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构之一：

其中：R′为H或C

在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构之一：

/>

其中K为CH、N、

在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构之一：

其中L为如本文所定义的接头，且D为如本文所定义的部分。

在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物包含马来酰亚胺部分。在某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构：

其中L为如本文所定义的接头，且D为如本文所定义的部分。

接头

如本文所用，“接头”或“连接单元”是指如本文所述，使反应性基团，例如W、X或Y或狄尔斯-阿尔德加合物Z共价连接至一个或多个治疗部分D的任何二价部分-L-。通常，用于本文所述的抗体缀合物和治疗部分的合适接头为足够稳定以利用抗体的循环半衰期并且同时能够在抗原介导的缀合物摄入后释放其有效负载的那些。通常，接头还可以包括本文所述的任何间隔基。

接头可以是可裂解的或不可裂解的。可裂解的接头包括在摄入后通过胞内代谢裂解的接头，例如通过水解、还原或酶促反应裂解。不可裂解的接头包括在摄入后通过抗体的溶酶体降解释放连接的有效负载的接头。

在一些实施方案中，适合的接头包括但不限于酸不稳定接头、水解不稳定接头、酶可裂解接头、还原不稳定接头、自分解接头和不可裂解接头。在某些实施方案中，接头为可裂解接头。根据其他实施方案，接头为不可裂解的接头。

适合的接头还包括但不限于是或包含一个或多个氨基酸、葡糖醛酸苷、琥珀酰亚胺-硫醚、聚乙二醇(PEG)单元、腙、马来酰基单元、二肽单元、缬氨酸-瓜氨酸单元、缬氨酸-丙氨酸单元和对氨基苄基单元的那些。本领域已知的任何接头分子或接头技术可用于产生或构建本申请的ADC。可在本申请的上下文中使用的示例性接头包括包含以下或由以下组成的接头：例如，MC(6-马来酰亚胺基己酰基)、MP(马来酰亚胺基丙酰基)、val-cit(缬氨酸-瓜氨酸)、val-ala(缬氨酸-丙氨酸)、val-gly(缬氨酸-甘氨酸)、蛋白酶可切割的接头中的二肽位点、Ala-Phe(丙氨酸-苯丙氨酸)、蛋白酶可切割的接头中的二肽位点、对氨基苄基、对氨基苄氧基羰基、SPP(N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶硫基)戊酸酯)、SMCC(N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸酯)、SIAB(N-琥珀酰亚胺基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯)及其变体和组合。在例如US 7,754,881和Ducry，Bioconjugate Chem.，2010，21：5-13以及其中引用的参考文献中提供了可以在本申请的上下文中使用的接头的另外的实例，其内容通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，接头包含一种或多种氨基酸。适合的氨基酸包括天然的、非天然的、标准的、非标准的、蛋白原的、非蛋白原的和L-或D-α-氨基酸。在一些实施方案中，接头包含丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸或瓜氨酸、其衍生物或其组合。

在一些实施方案中，接头包含两个或多个氨基酸，也称作肽。在某些实施方案中，接头包含两个氨基酸，也称作二肽，其选自缬氨酸-瓜氨酸、瓜氨酸-缬氨酸、赖氨酸-苯丙氨酸、苯丙氨酸-赖氨酸、缬氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-缬氨酸、苏氨酸-天冬酰胺、丝氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-丝氨酸、苯丙氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-苯丙氨酸、亮氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-亮氨酸、异亮氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-异亮氨酸、甘氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-甘氨酸、谷氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-谷氨酸、瓜氨酸-天冬酰胺、天冬酰胺-瓜氨酸、丙氨酸-天冬酰胺和天冬酰胺-丙氨酸。在某些实施方案中，肽是缬氨酸-瓜氨酸；瓜氨酸-缬氨酸；缬氨酸-丙氨酸；丙氨酸-缬氨酸：缬氨酸-甘氨酸或甘氨酸-缬氨酸。在一些实施方案中，接头包含缬氨酸和瓜氨酸。在一些实施方案中，接头包含缬氨酸和丙氨酸。

在某些实施方案中，接头包含氨基酸或肽和一个或多个选自如下的基团：-NH-、-S-、-O-、-(CH

在其他实施方案中，接头包含氨基酸或肽和选自如下的一个或多个基团：-(CH

在一些实施方案中，接头包含自裂解基团。自裂解基团可以为本领域技术人员公知的任何这类基团。在具体的实施方案中，自裂解基团为

PAB和PABC接头单元也称作电子级联间隔基。连接肽单元的羧基末端和PAB的对氨基苄基的酰胺键可以为底物并且可被某些蛋白酶裂解。芳族胺变成给电子的并引发导致离去基排出的电子级联，其在消除二氧化碳后释放游离药物(de Groot等人(2001)Journalof Organic Chemistry 66(26)：8815-8830)。在与PAB/PABC相邻的肽键裂解(即通过胞内酶)后，药物从配体释放，由此不结合接头的剩余部分(de Groot等人(2002)MolecularCancer Therapeutics 1(11)：901-911；de Groot等人(1999)J.Med.Chem.42(25)：5277-5283)。

在一些实施方案中，包含氨基酸或肽的接头可以被一种或多种酶(包括癌症或肿瘤相关蛋白酶)酶促裂解，以释放部分(-D)，其在一个实施方案中在释放时在体内质子化以提供治疗部分。在某些实施方案中，所述一种或多种氨基酸或肽包含天然氨基酸。在其他实施方案中，氨基酸或肽包含非天然氨基酸。

在某些实施方案中，接头包含选自如下的结构：

在某些实施方案中，接头包含选自如下的结构：

在某些实施方案中，部分D包含氨基，该氨基是与接头L的连接点。这类部分可以表示为D

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构，其中表示为D

在式(III-A)的反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构，其中表示为D

在式(III-B)的反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构，其中表示为D

/>

在式(III-C)的反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D

在一些实施方案中，本文所述的有效负载D

这样的实例包括这样的实施方案，其中反应性接头-有效负载分子包含利福霉素类似物并且具有下式(III-C1)：

本文也称作mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog。

在某些实施方案中，当PAB部分连接至对于形成季铵的治疗部分和/或成像剂部分有利的仲胺氮时，如(III-C1)中所示例的，接头称作PABQ接头。

在具有本文所述的有效负载D

在具有本文所述的有效负载D

在某些实施方案中，本申请提供了具有式(I-N)的结构的蛋白质-药物缀合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP为如本文所述的任选的间隔基；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；L为本申请的接头；D

在某些实施方案中，本申请提供了具有式(IV-N)的结构的蛋白质-药物缀合物：

其中：BA为如本文所述的结合剂；Gln为谷氨酰胺残基；SP为如本文所述的任选的间隔基；Z包含如本文所述的狄尔斯-阿尔德加合物；L为本申请的接头；D

在一些实施方案中，片段

其中

在式(IV-NA)反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D

在一些实施方案中，片段

在一些实施方案中，片段

其中

在式(IV-NB)反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D

在一些实施方案中，片段

其中/>

在一些实施方案中，片段

其中/>

在式(IV-NC)反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D

在一些实施方案中，片段

其中

在一些实施方案中，片段

其中

治疗部分-D

在本申请的实施方案中，D可以是被认为有用的任何治疗剂和/或显像剂部分。在一个方面，治疗部分为导致抑制、延迟、减少和/或阻止细胞生长的化合物。治疗部分还可以通过坏死或凋亡导致细胞死亡。

用于本文所述缀合物化合物的示例性治疗部分包括：多拉司他汀及其肽类似物和衍生物，奥瑞他汀，其为已经显示具有抗癌和抗真菌活性的高效抗有丝分裂剂。参见，例如，美国专利号No.5,663,149和Pettit等人，Antimicrob.Agents Chemother.42：2961-2965(1998)。示例性多拉司他汀和溴瑞他汀包括但不限于溴瑞他汀E、溴瑞他汀EB(AEB)、澳瑞他汀EFP(AEFP)、一甲基澳瑞他汀F(MMAF)、一甲基澳瑞他汀-D(MMAD)、单甲基澳瑞他汀E(MMAE)和5-苯甲酰基戊酸-AE酯(AEVB)。在某些实施方案中，所述多拉司他汀衍生物或类似物为MMAF。

用于本文所述缀合物化合物的示例性治疗部分包括：美登素类化合物(例如DM1、DM4等)、澳瑞他汀(例如MMAE、MMAD、MMAF等)、多卡米星(例如MGBA)、多拉司他汀、类毒素和其他化学治疗有效的药物。

在一个实施方案中，治疗部分为美登素类化合物或美登素类化合物类似物。用于本文的示例性美登素类化合物描述在Widdison等人，J.Med.Chem.，2006，49，4392-4408中，其出于所有目的通过引用并入本文。

在某些实施方案中，所述治疗部分为DM1(含硫醇的美登素类化合物抗微管剂)。

可以在所提供的蛋白质-药物缀合物的上下文中使用的治疗部分D的其他具体实例包括例如1-脱氢睾酮、2-吡咯烷多柔比星、5-氟尿嘧啶、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、放线菌素D、蒽环霉素、安曲霉素(AMC)、博来霉素、白消安、加利车霉素、卡莫司汀、顺铂、秋水仙素、氰基吗啉代-多柔比星、环磷酰胺、阿糖胞苷、细胞松弛素B、更生霉素、柔红霉素、达卡巴嗪、二溴甘露醇、二羟基蒽二酮、多柔比星、依米丁、表柔比星、溴化乙锭、依托泊苷、短杆菌肽D、糖皮质激素、利多卡因、洛莫司汀(CCNU)、氮芥、美法仑、甲氨蝶呤、光辉霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、吗啉代-多柔比星、普鲁卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素、吡咯并苯并二氮杂吖庚因(pyrrolobenzodiazapine)、西伯利亚霉素、链脲霉素、紫杉醇、替尼泊苷、丁卡因、塞替派苯丁酸氮芥、单端孢霉烯、tubulysin、长春新碱，以及上述任何化合物的立体异构体、电子等排体、类似物或衍生物。

在本申请的某些实施方案中，治疗部分D包含细胞毒性剂。细胞毒性剂包括对细胞的生长、活力或繁殖有害的任何活性剂，包括但不限于微管蛋白相互作用剂和DNA损伤剂。根据本申请内容的该方面，可以与抗-HER2抗体或抗-MSR1抗体缀合的适合的细胞毒性剂和化学治疗剂的实例包括例如1-(2-氯乙基)-1，2-二甲磺酰肼、1，8-二羟基-双环[7.3.1]十三碳-4，9-二烯-2，6-二炔-13-酮、1-脱氢睾酮、5-氟尿嘧啶、6-巯嘌呤、6-硫鸟嘌呤、9-氨基喜树碱、放线菌素D、鹅膏亭、氨基蝶呤、安吉苷、蒽环霉素、安曲霉素(AMC)、澳瑞他汀、博来霉素、白消安、丁酸、加利车霉素(例如，加利车霉素g1)、喜树碱、洋红霉素、卡莫司汀、西马多丁、顺铂、秋水仙碱、考布他汀、环磷酰胺、阿糖胞苷、细胞松弛素B、柔红霉素、达卡巴嗪、二乙酰氧基戊基多柔比星、二溴甘露醇、二羟基蒽二酮、地索拉唑、多拉司他汀(例如多拉司他汀10)、多柔比星、多卡米星、棘霉素、eleutherobins、依米丁、埃坡霉素、埃斯波霉素、雌莫司汀、溴化乙锭、依托泊苷、氟尿嘧啶、格尔德霉素、短杆菌肽D、糖皮质激素、伊立替康、驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)抑制剂、来普霉素、亮氨酸、利多卡因、洛莫司汀(CCNU)、美登素类化合物、氮芥、美法仑、巯基嘌呤、甲蝶呤、甲氨蝶呤、光辉霉素、丝裂霉素、米托蒽醌、N8-乙酰基亚精胺、鬼臼毒素、普鲁卡因、普萘洛尔、蝶啶、嘌呤霉素、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、根霉素、链脲霉素、太利苏霉素、泰素、替尼泊苷、丁卡因、塞替派苯丁酸氮芥、托马霉素、托泊替康、tubulysin、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨和任一上述化合物的衍生物。

在某些实施方案中，D为选自美登素类化合物、tubulysin、澳瑞他汀、多拉司他汀、喜树碱、吡咯并苯并二吖庚因、抗生素、抗病毒剂、抗炎剂、免疫调节剂、抗真菌剂、类固醇或其类似物或衍生物的治疗部分。在某些实施方案中，D为成像剂部分。在一些实施方案中，成像剂部分包含染料、螯合剂、放射性核素或寡核苷酸。

在一些实施方案中，染料为荧光染料。在一些实施方案中，D可以为选自AlexaFluor 647、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 555和Alexa Fluor 568的染料。在一个实施方案中，D为Alexa Fluor 647。

在一些实施方案中，D包含放射性核素。在一个实施方案中，D包含

在某些实施方案中，本申请提供了抗体-药物缀合物(ADC)，其包含抗-HER2抗体或其抗原结合片段和治疗部分和/或成像剂部分D(即“有效负载”)(例如细胞毒性剂)，例如、但不限于DM1。在一些实施方案中，抗-HER2抗体或其抗原结合片段和细胞毒性剂(例如、但不限于DM1)通过接头(“L”)共价连接。在某些实施方案中，ADC包含为曲妥珠单抗的抗-HER2抗体。在不同的实施方案中，ADC包含抗-HER2抗体或其抗原结合片段(其包含具有WO 2019/212965 A1中所示的氨基酸序列的HCVR和LCVR的CDR)和美登素类化合物，任选地DM1，任选地其中抗-HER2抗体或其抗原结合片段和美登素类化合物通过接头(例如SMCC)共价连接。

在不同的实施方案中，ADC包含抗-HER2抗体抗或其抗原结合片段，其包含具有WO2019/212965 A1中所示氨基酸序列的HCVR和LCVR的CDR。

根据另一个方面，本申请提供了抗体-药物缀合物，其包含抗-HER2抗体或其抗原结合片段，例如曲妥珠单抗，和治疗部分和/或成像剂部分(例如细胞毒性剂)。在一些实施方案中，如本文所讨论的，抗体或抗原结合片段和细胞毒性剂通过接头共价连接。在不同的实施方案中，抗-HER2抗体或抗原结合片段可以为本文所述的任何抗-HER2抗体或片段。在特定的实施方案中，抗-HER2抗体包含曲妥珠单抗。

根据某些实施方案，与抗-HER2抗体如曲妥珠单抗缀合的细胞毒性剂为美登素类化合物，例如DM1或DM4、茅层霉素衍生物或多拉司他汀衍生物。根据某些实施方案，与抗-HER2抗体缀合的细胞毒性剂为澳瑞他汀，例如MMAE、MMAF或其衍生物。在本申请的范围内涵盖本领域已知的其他细胞毒性剂，包括例如蛋白质毒素，例如蓖麻毒素白、艰难梭菌毒素、假单胞菌外毒素、蓖麻毒素、白喉毒素、肉毒杆菌毒素、牛血清蛋白、皂草素、美洲商陆毒素(即商陆毒素和商陆皂甙元)，以及其他例如Sapra等人，Pharmacol.&Therapeutics，2013，138：452-469中所述的那些。

在某些实施方案中，细胞毒性剂为溴瑞他汀。适合的溴瑞他汀包括MMAE、MMAF及其衍生物。在一个实施方案中，所述溴瑞他汀为MMAE。在一个实施方案中，MMAE或其衍生物具有如下结构：

在某些实施方案中，细胞毒性剂为美登素类化合物，例如美登素的衍生物。适合的美登素类化合物包括DM1、DM4或其衍生物、立体异构体或同位素体。适合的美登素类化合物还包括但不限于WO 2014/145090 A1、WO 2015/031396 A1、US 2016/0375147 A1和US2017/0209591 A1中公开的那些，其通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，美登素类化合物具有如下结构：

其中A为任选取代的亚芳基或亚杂芳基。

在一些实施方案中，美登素类化合物具有如下结构：

其中A，美登素类化合物具有如下结构

在一些实施方案中，美登素类化合物具有如下结构：

其中n为1-12的整数，且R

在一些实施方案中，美登素类化合物具有如下结构：

在某些实施方案中，治疗部分包括小分子，其提供通过MSR1或HER2递送的治疗有益性。在某些实施方案中，D为分子残余物，其选自类固醇、LXR调节剂或利福霉素类似物。在一些情况中，D为类固醇。在一些情况中，D为LXR调节剂。在一些情况中，D为LXR激动剂。在一些实施方案中，D为LXR拮抗剂。描述了示例性LXR调节剂有效负载，例如在2017年5月18日提交的美国申请号No.62/508,327，Bis-Octahydrophenanthrene Carboxamides AndProtein Conjugates中，作为US 2018/0334426公布，其通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，治疗部分D为利福霉素类似物，包括2018年12月21日提交的美国申请NO.62/783,506和2019年12月20日提交的NO.16/722,958中所述的任意利福霉素类似物，其通过引用整体并入本文。在一些实施方案中，治疗部分D为具有如下结构的利福霉素类似物或衍生物：

在一个实施方案中，治疗部分为tubulysin。首先从分枝杆菌培养肉汤中分离的tubulysin是一组非常有效的微管蛋白聚合抑制剂，其快速分解正在分裂的细胞的细胞骨架并诱导细胞凋亡。tubulysin由N-甲基-D-哌啶酸(Mep)、L-异亮氨酸(Ile)和微管缬氨酸(Tuv)组成，其包含罕见的N，O-缩醛和仲醇或乙酰氧基。Tubulysin A、B、C、G和I包含C-末端tubutyrosine(Tut)α-氨基酸，而D、E、F和H在该位置具有微管苯丙氨酸(Tup)(Steinmetz，H.，等人(2004)，Isolation，Crystal and Solution Structure Determination.andBiosynthesis of tubulysins-Powerful Inhibitors of Tubulin Polymerization fromMyxobacteria.Angewandte Chemie International Edition，43：4888-4892)。

在其他实施方案中，所述治疗部分选自吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)。PBD具有识别和结合特异性DNA序列的能力；在某些实施方案中，所述序列为PuGPu。第一种PBD抗肿瘤抗生素安曲霉素在1965年被发现(Leimgmber，等人，J.Am.Chem.Soc，87，5793-5795(1965)；Leimgruber，等人，J.Am.Chem.Soc，87，5791-5793(1965))。从那时起，已经报道了许多天然存在的PBD，并且已经开发了多种类似物的超过10种合成途径(Thurston等人，Chem.Rev.1994，433-465(1994)；Antonow，D.和Thurston，D.E.，Chem.Rev.2011 11 1(4)，2815-2864)。家族成员包括阿巴霉素(Hochlowski，等人，J.Antibiotics，40，145-148(1987))、奇卡霉素(Konishi，等人，J.Antibiotics，37，200-206(1984))、DC-81(JapanesePatent 58-180487；Thurston，等人，Chem.Brit，26，767-772(1990)；Bose等人，Tetrahedron，48，751-758(1992))、甲基氨茴霉素(Kuminoto，等人，J.Antibiotics，33，665-667(1980))、新茴霉素A和B(Takeuchi，等人，J.Antibiotics，29，93-96(1976))、门霉素(Tsunakawa，等人，J.Antibiotics，41，1366-1373(1988))、prothracarcin(Shimizu等人，J.Antibiotics，29，2492-2503(1982)；Langley和Thurston，J.Org.Chem.，52，91-97(1987))、西班米星(DC-102)(Hara等人，J.Antibiotics，41，702-704(1988)；Itoh等人，J.Antibiotics，41，1281-1284(1988))、西伯利亚霉素(Leber等人，J.Am.Chem.Soc，110，2992-2993(1988))和托马霉素(Arima等人，J.Antibiotics，25，437-444(1972))。

在一些实施方案中，本申请的PBD具有下式：

PBD的不同之处在于取代基的数目、类型和位置，它们的芳族A环和吡咯并C环，以及G环的饱和度。在B环中，在N10-C11位置处存在亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OME))，所述N10-C11位置是负责烷基化DNA的亲电中心。所有已知的天然产物在手性C11a位置具有(S)-构型，当从C环朝向A环观察时，这为它们提供了右旋扭曲。这使它们具有与B型DNA的小沟等渗性的适当的三维形状，导致在结合位点处的紧密配合(Kohn，In Antibiotics III.Springer-Verlag，New York，pp.3-11(1975)；Hurley和Needham-VanDevanter，Acc.Chem.Res.，19，230-237(1986))。它们在小沟中形成加合物的能力使它们能够干扰DNA加工，因此它们用作抗肿瘤剂。

在一个具体实施方案中，治疗部分D为式PBD-1的PBD化合物：

或其类似物或衍生物。

在某些实施方案中，所述治疗部分为溴瑞他汀、PBD或安沙霉素，例如利福霉素或其类似物或衍生物。

在某些实施方案中，所述治疗部分为MMAE、PBD-1或抗生素，例如利福霉素或其类似物或衍生物。

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构，其中表示为D的治疗部分通过氨基连接接头：

在式(V-A)的反应性接头-有效负载化合物的其他实施方案中，D为美登素类化合物或美登素类化合物类似物。

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构，其中表示为D的治疗部分通过氨基连接接头：

在式(V-B)的反应性接头-有效负载化合物的其他实施方案中，D为吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)或其类似物或衍生物。在一个具体的实施方案中，D为PBD-1。

在本申请的某些实施方案中，反应性接头-有效负载化合物为如下结构，其中表示为D的治疗部分通过氨基连接接头：

在式(V-C)的反应性接头-有效负载化合物的其他实施方案中，D为利福霉素或其类似物或衍生物。

在一些实施方案中，本文所述的有效负载D(例如利福霉素类似物)包含叔胺，其中叔胺中的氮原子是有效负载通过其与接头键合的原子。在这种情况下，与有效负载的叔胺键合在接头-有效负载分子中产生季胺。季胺上的正电荷可以通过抗衡离子(例如氯、溴、碘或任何其他合适带电的部分，例如本文所述的那些)平衡。这样的实例包括这样的实施方案，其中反应性接头-有效负载分子具有下式(V-C1)：

本文也称作mal-PEG8-VC-PABQ-Rif类似物。

在具有本文所述的有效负载D(例如MMAE)的一些实施方案中，反应性接头-有效负载分子具有下式(V-A1)：

本文也称作mc-VC-PABC-MMAE.

在具有本文所述的有效负载D的一些实施方案中，反应性接头-有效负载分子具有下式(V-A11)：

在具有本文所述的有效负载D(例如PBD，例如PBD-1)的一些实施方案中，反应性接头-有效负载分子具有下式(V-B1)：

本文也称作mc-VA-PBD。

在一些实施方案中，片段

其中

式(I-DA)的反应性接头-有效负载化合的另外的实施方案中，D为美登素类化合物或如本文所述的美登素类化合物类似物

在一些实施方案中，片段

其中/>

在一些实施方案中，片段

其中/>

在一些实施方案中，片段

其中

在式(I-DB)的反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D为如本文所述的吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)或其类似物或衍生物。在一个具体的实施方案中，D为PBD-1。

在一些实施方案中，片段

在一些实施方案中，片段

其中/>

在式(I-DC)的反应性接头-有效负载化合物的另外的实施方案中，D为利福霉素或其如本文所述的类似物或衍生物。

在一些实施方案中，片段

其中

在一些实施方案中，片段

其中

在某些实施方案中，提供了蛋白质-药物缀合物，其具有式(I-A1’)-(I-A11’)的结构：

(I-A1’或BA-3-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A2’或BA-9-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A3’或BA-10-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A4’或BA-13-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A5’或BA-16-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A6’、I-A6”和I-A6”’或BA-38-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A7’和I-A7”或BA-44-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A8’或BA-48-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A9’和I-A9”或BA-46-mc-VC-PABC-MMAE)；

(I-A10’或BA-27-mc-VC-PABC-MMAE-Alexa)；和

其中d为1-6的整数。在某些实施方案中，BA为抗体。在某些实施方案中，BA人单克隆抗体。在某些实施方案中，BA为人源化单克隆抗体。在某些实施方案中，BA为MSR1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，BA为HER2抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方案中，提供了蛋白质-药物缀合物，其具有式(I-B1’)的结构：

其中d为1-4的整数。其中d为1-6的整数。在某些实施方案中，BA为抗体。在某些实施方案中，BA人单克隆抗体。在某些实施方案中，BA为人源化单克隆抗体。在某些实施方案中，BA为MSR1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，BA为HER2抗体或其抗原结合片段。

在某些实施方案中，提供了蛋白质-药物缀合物，其具有式(I-C1’)的结构：

其中d为1-6的整数。在某些实施方案中，BA为抗体。在某些实施方案中，BA人单克隆抗体。在某些实施方案中，BA为人源化单克隆抗体。在某些实施方案中，BA为MSR1抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，BA为HER2抗体或其抗原结合片段。在某些实施方案中，BA为曲妥珠单抗。

使用方法

在另一个方面，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)尤其可用于治疗、预防和/或改善需要这种治疗的疾病、障碍或病症。

在一个实施方案中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗癌症。在另一个实施方案中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗感染。在一个实施方案中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗细菌感染。在另一个实施方案中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗病毒感染。在另一个实施例中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗真菌感染。在另一个实施例中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗炎性病症。在另一个实施例中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)可用于治疗免疫系统障碍。

在另一个方面，本文公开的蛋白质-有效负载缀合物尤其用于诊断和/或成像。在一个实施方案中，本申请的蛋白-有效负载缀合物包含成像剂部分。这样的抗体可用于例如可视化样品内(例如在治疗的受试者内)的靶蛋白的分布。

在一些实施方案中，本申请的蛋白质-药物缀合物可以包含治疗部分和成像剂部分。在一些实施方案中，这类缀合物可同时用于治疗疾病和可视化蛋白质靶标在体内的位置。在一个非限制性实施方案中，这类抗体具有式(I-A10’)的结构：

其中d为1-6的整数。

抗-HER2抗体-药物缀合物

在某些实施方案中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)尤其可用于治疗、预防和/或改善与HER2表达或活性相关或由HER2表达或活性介导的任何疾病或病症，或可通过结合HER2而不与经修饰的LDL竞争，或/或促进HER2受体摄入和/或减少细胞表面受体数量来治疗的任何疾病或病症。

本申请的蛋白质-药物缀合物(和包含它们的治疗组合物)尤其可用于治疗其中免疫应答的刺激、活化和/或靶向将是有益的任何疾病或病症。特别地，本申请的抗HER2抗体蛋白质-药物缀合物可用于治疗、预防和/或改善与HER2表达或活性或HER2+细胞增殖相关或介导的任何疾病或病症。作用机制实现本申请的治疗方法的方法包括在效应细胞存在下杀伤表达HER2的细胞，例如通过CDC、细胞凋亡、ADGC、吞噬作用或通过这些机制中的两种或多种的组合。可以使用本申请的蛋白质-药物缀合物抑制或杀伤的表达HER2的细胞包括，例如乳腺肿瘤细胞。

本申请的蛋白质-药物缀合物可用于治疗例如前列腺、膀胱、子宫颈、肺、结肠、肾、乳腺、胰腺、胃、子宫和/或卵巢中出现的原发性和/或转移性肿瘤。在某些实施方案中，本申请的蛋白质-药物缀合物用于治疗以下癌症中的一种或多种：前列腺癌、膀胱癌、宫颈癌、肺癌、结肠癌、肾癌、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、子宫癌和卵巢癌。根据本申请的某些实施方案，抗-HER2抗体或抗-HER2可用于治疗患有IHC2+或更高的乳腺癌细胞的患者。根据本申请的其他相关实施方案，提供了方法，其包含向患有IHC2+或更高的乳腺癌细胞的患者施用如本文所公开的抗-HER2抗体。本领域已知的分析/诊断方法，例如肿瘤扫描等，可用于确定患者是否具有为去势抗性的肿瘤。

在某些实施方案中，本申请还包括治疗受试者中残留癌症的方法。术语“残留癌症”意指在用抗癌疗法治疗后受试者中一种或多种癌细胞的存在或持久性。

本申请的蛋白质-药物缀合物(和包含它们的治疗组合物)尤其可用于治疗其中免疫应答的刺激、活化和/或靶向将是有益的任何疾病或病症。特别地，包含本申请的抗-HER2抗体的蛋白质-药物缀合物可用于治疗、预防和/或改善与HER2表达或活性或HER2+细胞增殖相关或由其介导的任何疾病或病症。实现本申请的治疗方法的作用机制包括在效应细胞存在下杀伤表达HER2的细胞，例如通过CDC、细胞凋亡、ADCC、吞噬作用或通过这些机制中的两种或更多种的组合。可以使用本申请的蛋白质-药物缀合物抑制或杀伤的表达HER2的细胞包括，例如乳腺肿瘤细胞。

根据某些方面，本申请提供了用于治疗与HER2表达相关的疾病或病症(例如乳腺癌)的方法，包含在已经确定受试者患有乳腺癌(例如IHC2+乳腺癌)之后，向受试者施用一种或多种本文另外部分所述的抗-HER2蛋白-药物缀合物。例如，本申请包括用于治疗乳腺癌的方法，包含在受试者接受激素疗法(例如，抗雄激素药疗法)后1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周或4周、2个月、4个月、6个月、8个月、1年或更长时间向患者施用包含抗-HER2抗体或抗原结合分子的蛋白质-药物缀合物。

在某些实施方案中，本申请还包括本申请的抗-HER2抗体在制备用于治疗与HER2表达细胞相关或由其引起的疾病或病症(例如癌症)的药物中的用途。在一个方面，本申请涉及包含如本文所公开的抗-HER2抗体或抗原结合片段的蛋白质-药物缀合物，其用于药物。在一个方面，本申请涉及包含如本文所公开的抗体-药物缀合物(ADC)的化合物，其用于药物。

抗-MSR1抗体-药物缀合物

在某些实施方案中，本文公开的蛋白质-药物缀合物(例如ADC)尤其可用于治疗、预防和/或改善与MSR1表达或活性相关或由其介导的任何疾病或病症，或可通过结合MSR1而不与修饰的LDL竞争，或/或促进MSR1受体内化和/或减少细胞表面受体数量来治疗的任何疾病或病症。例如，本文公开的抗体和ADC可用于通过靶向表达MSR1和/或响应于MSR1介导的信号传导的细胞(例如巨噬细胞)来治疗、减弱或改善动脉粥样硬化、增殖性病症、神经变性病症和炎症。在一些实施方案中，当有效载荷是类固醇时，疾病、障碍或病症为过敏状态，包括但不限于哮喘、特应性皮炎、接触性皮炎、过敏性皮炎、药物超敏反应、过敏性鼻炎、常年性或季节性过敏性鼻炎和血清病；皮肤病和病症，包括但不限于皮肤瘙痒、脂溢性皮炎、神经性皮炎、湿疹、疱疹样大疱性皮炎、剥脱性红皮病、蕈样真菌病、天疱疮和严重多形性红斑(斯-约二氏综合征)；内分泌障碍，包括但不限于原发性或继发性肾上腺皮质功能不全、先天性肾上腺增生、与癌症相关的高钙血症和非化脓性甲状腺炎；胃肠疾病；血液学失调，包括但不限于获得性(自身免疫性)溶血性贫血、先天性(红细胞系统)再生不良性贫血(戴-布二氏贫血)、成人特发性血小板减少性紫癜、单纯红细胞再生障碍和继发性血小板减少；旋毛虫病；结核性脑膜炎伴蛛网膜下腔阻滞或悬挂性斑块；肿瘤病，包括但不限于白血病和淋巴瘤；神经系统障碍，包括但不限于多发性硬化、与原发性或转移性脑肿瘤相关的脑水肿、穿颅术或头部损伤的急性加重；眼科疾病，包括但不限于交感性眼炎、颞动脉炎、葡萄膜炎、干眼症和对局部皮质类固醇无反应的眼部炎性病症；肾病，包括但不限于用于诱导特发性肾病综合征或由红斑狼疮引起的蛋白尿的利尿或缓解；呼吸系统疾病，包括但不限于铍中毒、暴发性或播散性肺结核(当与适当的抗结核化疗同时使用时)、特发性嗜酸性粒细胞性肺炎、症状性结节病；和风湿病，包括但不限于在急性痛风性关节炎、急性风湿性心脏炎、强直性脊柱炎、银屑病关节炎、类风湿性关节炎(包括幼年型类风湿性关节炎)中用作短期施用的辅助疗法(以使患者在急性发作或恶化中潮解)，以及用于皮肌炎、多发性肌炎、口腔炎和系统性红斑狼疮。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防关节炎的方法。

在一些实施方案中，本文列出了治疗疾病、障碍或病症的方法，所述疾病、障碍或病症选自自身免疫疾病、变态反应、关节炎、哮喘、呼吸障碍、血液病症、癌症、胶原病、结缔组织障碍、皮肤病、眼病、内分泌问题、免疫性疾病、炎性疾病、肠障碍、胃肠疾病、神经障碍、器官移植病症、类风湿性障碍、皮肤障碍、肿胀病症、伤口愈合病症及其组合，所述方法包含施用本文所述的类固醇有效负载或其缀合物。

在一些实施方案中，自身免疫性疾病选自多发性硬化、自身免疫性肝炎、带状疱疹、系统性红斑狼疮(即狼疮)、重症肌无力、杜兴肌营养不良和结节病。在一些实施方案中，所述呼吸障碍选自哮喘、慢性呼吸疾病、慢性阻塞性肺病、支气管炎症和急性支气管炎。在一些实施方案中，所述癌症选自白血病、成淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性成淋巴细胞性白血病，在一些实施方案中，所述胶原病是系统性红斑狼疮。在一些实施方案中，眼病是角膜炎。在一些实施方案中，内分泌问题选自艾迪生病、肾上腺功能不全、肾上腺皮质功能障碍、肾上腺皮质和先天性肾上腺增生。在一些实施方案中，所述炎性疾病选自白内障手术后炎症、关节炎症、免疫炎症、腱膜炎性疾病。炎症、滑囊炎、上髁炎、克罗恩病、炎性肠病、脂质性肺炎甲状腺炎、荨麻疹(荨麻疹)、心包炎、肾病综合征和葡萄膜炎。在一些实施方案中，所述肠病症选自胶原性结肠炎、se。在一些实施方案中，类风湿性障碍选自类风湿性关节炎、风湿性多肌痛、银屑病关节炎、强直性脊柱炎和系统性红斑狼疮。在一些实施方案中，皮肤病症选自银屑病、湿疹和毒葛。在一些实施方案中，神经障碍为慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病。

在一些实施方案中，将本文所述的化合物施用于患者以治疗急性炎性事件，包括但不限于休克、脑水肿和移植物抗宿主病。在一些实施方案中，施用本文所述的化合物以治疗破坏淋巴细胞作用，包括但不限于与血液恶性肿瘤相关的那些，例如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。

在一些实施方案中，本文提供了在有需要的受试者中减轻炎症的方法，所述方法包含向有此需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的类固醇或其缀合物。在一些实施方案中，本文提供了一种用于调节有需要的受试者的免疫系统的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的类固醇或其缀合物。在一些实施方案中，本发明提供了一种调节有需要的受试者的皮质醇水平的方法，其包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明所述的类固醇或其缀合物。在一些实施方案中，本文提供了一种减少有需要的受试者的淋巴细胞迁移的方法，其包含向有此需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的类固醇或其缀合物。在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗由癌症、梅尼埃病、偏头痛、丛集性头痛、严重阿弗他溃疡、喉炎、严重结核病、对梅毒的赫氏反应、失代偿性心力衰竭、过敏性鼻炎或鼻息肉引起的高钙血症的方法，包含向有此需要的受试者施用本发明所述的类固醇有效负载或其缀合物。在一些实施方案中，本文公开的化合物可用于治疗炎性肠病、克罗恩病或溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症为慢性炎性病状，包括但不限于哮喘、皮肤感染和眼部感染。在一些实施方案中，本文所述的化合物用于经历器官移植的患者中的免疫抑制。

在一些实施方案中，将本文所述的类固醇有效负载及其缀合物施用于患者以治疗与GR信号传导相关的神经障碍，包括但不限于精神障碍如精神分裂症、药物成瘾、创伤后精神紧张性障碍(PTSD)和情绪障碍、物质滥用、应激和焦虑。

在一些实施方案中，将本文所述的类固醇有效负载及其缀合物施用于患者以治疗视觉系统病症，包括但不限于眼部炎症(例如结膜炎、角膜炎、葡萄膜炎)、黄斑水肿和黄斑变性。在一些实施方案中，将本文所述的类固醇有效负载及其缀合物施用于患者以治疗心血管病症。在一些实施方案中，将本文所述的类固醇有效负载及其缀合物施用于患者以治疗葡萄糖和/或肝代谢病症。在一些实施方案中，将本文所述的类固醇有效负载及其缀合物施用于患者以治疗肌肉骨骼系统病症。在一些实施方案中，将本文所述的类固醇有效负载及其缀合物施用于患者以治疗皮肤炎性病症，例如湿疹和银屑病。

本文所述的蛋白质缀合物提供了将其类固醇有效负载靶向递送至特定细胞或器官系统的方式，从而减少或防止了由施用游离的未缀合类固醇有效负载引起的副作用。待减少或预防的这类潜在副作用的实例包括在批准的

因此，本文提供了治疗与糖皮质激素受体相关的疾病、障碍或病症的方法，包含向患有所述疾病、障碍或病症的患者施用上述任何式的缀合物，其中与施用所述缀合物的游离类固醇有效负载相关的副作用降低。此外，本文提供了将如上所述的任何式的化合物递送至细胞的方法，包含使所述细胞与如上所述的任何式的化合物的蛋白质缀合物接触，其中所述蛋白质缀合物包含结合所述细胞的表面抗原的抗体或其抗原结合片段。

在一些实施例中，当所述有效负载为LXR调节剂时，本发明提供了治疗疾病、障碍或病症的方法，包含向患有所述障碍的患者施用治疗有效量的化合物和/或ADC(例如，上述任何式的ADC)或其药物组合物。

在一些实施例中，本文提供了预防疾病、障碍或病症的方法，包含向患有所述障碍的患者施用预防有效量的化合物和/或ADC(例如，上述任何式的ADC)或其药物组合物。

增殖性疾病可以为本领域技术人员已知的任何增殖性疾病。在某些实施方案中，增殖性病症包括但不限于肿瘤学病症，其中肿瘤学病症可以为本领域技术人员已知的任何癌症病症。在某些实施方案中，本文提供治疗或预防黑素瘤的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防转移性黑素瘤的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防肺癌的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防EGFR-酪氨酸激酶抑制剂抗性肺癌的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防口腔癌的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防口腔鳞状细胞癌的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防前列腺癌的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防乳腺癌的方法。

代谢病可以是本领域技术人员已知的任何代谢病。在一些实施方案中，所述代谢病为血脂异常。血脂异常可以为本领域技术人员已知的任何血脂异常。在某些实施方案中，血脂异常选自高脂血症、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、高脂蛋白血症、HDL缺乏、ApoA-1缺乏和心血管疾病如冠状动脉疾病(包括例如治疗和预防心绞痛、心肌梗塞和心源性猝死)；动脉粥样硬化(包括例如动脉粥样硬化的治疗和预防)；和再狭窄(包括例如预防或治疗由于例如球囊血管成形术的医疗操作而发生的动脉粥样硬化斑块)。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防糖尿病的方法。

心血管疾病可以是本领域技术人员已知的任何心血管疾病。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防动脉粥样硬化的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防源自异常巨噬细胞加工的动脉粥样硬化的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防源自氧化低密度脂蛋白(OxLDL)形成的动脉粥样硬化的方法，其中巨噬细胞不能加工OxLDL。在某些情况下在一些实施方案中，本文提供了治疗或预防缺血性心脏病的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防中风的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防高血压性心脏病的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防主动脉瘤的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防心内膜炎的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防外周动脉疾病的方法。在某些实施方案中，本文提供了治疗或预防本段中提供的任何疾病的组合的方法。

在一些实施例中，本文提供了调节核受体功能的方法。作为非限制性实例，功能可以选自炎症介体(例如细胞因子、趋化因子)的表达/分泌、胆固醇调节、胆固醇摄入、胆固醇流出、胆固醇氧化、迁移、趋化性、细胞凋亡和坏死、炎症活性、脂质调节、细胞凋亡、迁移、趋化性、基因转录和蛋白质表达。

在一些实施例中，本文提供了预防疾病、障碍或病症的方法，包含给患有所述障碍的患者施用治疗有效量的如上所述的任何式的化合物和/或ADC或其药物组合物。

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是一种兼性胞内细菌，其可以在巨噬细胞和其他细胞类型的吞噬作用下存活(Horn，J.，等人，Inside job：Staphylococcus aureus host-pathogen interactions.Int J Med Microbiol，2018.308(6)：p.607-624；Jubrail，J.，等人，Inability to sustain intraphagolysosomal killing of Staphylococcus aureuspredisposes to bacterial persistence in macrophages.Cell Microbiol，2016.18(1)：p.80-96)。活体成像已经证明巨噬细胞可以用作金黄色葡萄球菌复制的储库，然后在感染期间接种其他器官(Surewaard，B.G.，等人，Identification and treatment of theStaphylococcus aureus reservoir in vivo.J Exp Med，2016.213(7)：p.1141-51)。大部分抗生素不能很好地穿透细胞(包括巨噬细胞)，表明胞内金黄色葡萄球菌储库可以逃避用标准护理抗生素的治疗(Lehar，S.M.，等人，Novel antibody-antibiotic conjugateeliminates intracellular S.aureus.Nature，2015.527(7578)：p.3238)。然而，万古霉素的脂质体制剂比标准护理万古霉素更有效地增加抗生素向巨噬细胞中的渗透并降低金黄色葡萄球菌器官负荷(Surewaard，B.G.等人，Identification and treatment of theStaphylococcus aureus reservoir in vivo.J Exp Med，2016.213(7)：p.1141-51)。总之，这些数据表明，将抗生素递送至巨噬细胞可以是消除胞内金黄色葡萄球菌储库的有效方法。

抗生素抗性金黄色葡萄球菌仍然是公共健康问题，在美国大约40％的血流感染是由甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的。对于MRSA血流感染几乎没有FDA批准的治疗选择，万古霉素仍然是抗生素的选择。尽管进行了适当的抗生素治疗，但金黄色葡萄球菌血流感染的死亡率为～18％，这促使了对可以改善治疗的组合的研究。

利福霉素类抗生素抑制细菌RNA聚合酶(RNAP)并具有抗金黄色葡萄球菌的有效活性。然而，使用这类抗生素的单一疗法可在治疗期间导致选择抗性群体。因此，利福霉素抗生素可以与一线抗生素组合使用以改善结果，通常在涉及假体或外来装置的感染中。

本文所述的包含利福霉素类似物的ADC可用于预防或治疗受试者中细菌的生长和/或细菌感染。在一些情况下，细菌是革兰氏阳性细菌(革兰氏阳性细菌是细菌感染的原因)。在一些情况下，细菌是耐青霉素细菌(耐青霉素细菌是细菌感染的原因)。在一些情况下，细菌是金黄色葡萄球菌、甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)细菌(MRSA细菌是细菌感染的原因)。在一些情况下，细菌是甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA)细菌(MSSA细菌是细菌感染的原因)。在一些情况下，细菌是耐万古霉素金黄色葡萄球菌(VRSA)细菌(VRSA细菌是细菌感染的原因)。在一些情况下，细菌是多重耐药性结核分枝杆菌(多重耐药性结核分枝杆菌细菌是细菌感染的原因)。在另外的情况下，细菌是对例如阿奇霉素具有抗性的沙眼衣原体(对例如阿奇霉素具有抗性的沙眼衣原体是细菌感染的原因)。在更多情况下，细菌是对例如甲硝唑、万古霉素和/或非达米星具有抗性的艰难梭菌(对例如甲硝唑、万古霉素和/或非达米星具有抗性的艰难梭菌是细菌感染的原因)。

本文提供了一种在受试者中预防或治疗蜂窝织炎、菌血症、真皮坏死、眼睑感染、眼感染、新生儿结膜炎、骨髓炎、脓疱病、疖、皮肤烫伤综合征、食物中毒、肺炎、手术感染、尿道感染、烧伤感染、脑脊膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克综合征、脓毒性关节炎、乳腺炎、与假体关节相关的感染、与导管相关的感染或与植入物相关的感染的方法，包含向受试者施用有效治疗量的包含利福霉素类似物的抗体-药物缀合物。本文还提供了预防或治疗受试者的胞内细菌感染的方法，包含向所述受试者施用有效治疗量的包含利福霉素类似物的抗体-药物缀合物。

在一些情况下，本文提供了治疗方法，包含将抗-MSR1抗体、抗-MSR1抗体的抗原结合部分或包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段的ADC施用于有需要的受试者，其可用于治疗和/或预防受试者中的细菌感染和/或与葡萄球菌感染(例如金黄色葡萄球菌感染)相关的疾病或障碍或病症和/或用于改善与此类疾病、障碍或病症状相关的至少一种症状。这样的疾病、障碍或病症可以为蜂窝织炎、菌血症、真皮坏死、眼睑感染、眼感染、新生儿结膜炎、骨髓炎、脓疱病、疖、皮肤烫伤综合征、食物中毒、肺炎、手术感染、尿道感染、烧伤感染、脑脊膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克综合征或脓毒性关节炎。在一些情况下，受试者具有假关节，并且本文公开的抗体用于治疗和/或预防假关节周围组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些情况下，受试者具有导管，并且本文公开的抗体用于治疗和/或预防导管和/或导管周围组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些情况下，受试者存在导管，并且本文公开的抗体用于治疗和/或预防导管和/或导管周围组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些情况下，受试者患有乳腺炎，并且本文公开的抗体可用于治疗乳腺炎。

在某些情况下，利福霉素类似物和/或其抗-MSR1 ADC与一种或多种另外的抗生素(例如，可用于MRSA感染的抗生素)组合施用，所述抗生素例如万古霉素、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基异噁唑、四环素、多西环素/米诺环素、克林霉素、头孢菌素(例如头孢氨苄)、纳西林、非达米星、利奈唑胺等，和/或任何其他适合的抗生素。在一些情况下，本文所述的包含利福霉素类似物的ADC以组合方式施用。

本文还提供了预防或抑制细菌生长的方法，包含施用有效量的包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的抗体-药物缀合物(ADC)。

本文还提供了治疗方法，包含向有此需要的受试者施用有效量的包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC。所述治疗方法包含施用治疗有效量的药物组合物，所述药物组合物包含针对受试者的抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC。所治疗的病症为通过靶向MSR1和/或通过施用抗生素剂而改善、减轻、抑制或预防的任何疾病或病症。在一些实施方案中，所述疾病或病症为增殖性疾病、代谢病、炎症、神经变性疾病或与糖皮质激素受体信号传导相关的疾病、障碍或病症。在一些这样的实施方案中，与施用未缀合利福霉素类似物相关的副作用减少。本文提供了本文所述的抗-MSR1抗体、抗-MSR1抗体的抗原结合部分或包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段(如H1H21234N)的ADC在治疗本文所述的任何疾病、障碍或病症中的用途。

本文还提供了用于治疗、减弱或改善与葡萄球菌感染(例如金黄色葡萄球菌感染)相关的疾病或障碍或病症和/或用于改善与此类疾病、障碍或病症相关的至少一种症状的治疗方法，其包括向有此需要的受试者施用利福霉素类似物或包含抗-MSR1抗体(例如H1H21234N)或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC。这样的疾病、障碍或病症可以是蜂窝织炎、菌血症、真皮坏死、眼睑感染、眼感染、新生儿结膜炎、骨髓炎、脓疱病、疖、皮肤烫伤综合征、食物中毒、肺炎、手术感染、尿道感染、烧伤感染、脑脊膜炎、心内膜炎、败血症、中毒性休克综合征或脓毒性关节炎。在一些实施方案中，受试者具有假关节，并且本文公开的利福霉素类似物或包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC用于治疗和/或预防假关节周围组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些实施方案中，受试者具有导管，并且本文公开的利福霉素类似物或包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC用于治疗和/或预防导管和/或导管周围组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些实施方案中，受试者植入了异物，并且本文公开的利福霉素类似物或包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似物的ADC用于治疗和/或预防异物和/或异物周围组织的金黄色葡萄球菌感染。在一些实施方案中，受试者患有乳腺炎，并且本文公开的抗体可用于治疗乳腺炎。所述治疗方法包含向有此需要的受试者施用治疗有效量的包含利福霉素类似物的药物组合物或包含抗-MSR1抗体或其MSR1抗原结合片段和利福霉素类似的ADC。

在另一个方面，本发明提供了抗体-药物缀合物，其包含通过接头或通过接头-间隔基与本申请任何实施方案的利福霉素类似物化合物缀合的抗体或其抗原结合片段。

在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段结合巨噬细胞消除受体1(MSR1)。

在一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段可以包含：

(i)HCDR1结构域，其包含选自的氨基酸序列SEQ ID NO：4、36、52、92和284；

(ii)HCDR2结构域，其包含选自的氨基酸序列SEQ ID NO：6、38、54、94和286；

(iii)HCDR3结构域，其包含选自的氨基酸序列SEQ ID NO：8、40、56、96和288；

(iv)LCDR1结构域，其包含选自的氨基酸序列SEQ ID NO：12、44、60、100和292；

(v)LCDR2结构域，其包含选自的氨基酸序列SEQ ID NO：14、46、62、102和294；和

(vi)LCDR3结构域，其包含选自的氨基酸序列SEQ ID NO：16、48、64、104和296。

药物组合物和施用方法

还提供了这样的方法，其包含向有需要的受试者施用包含本文公开的蛋白质或抗体缀合物的治疗组合物。治疗组合物可以包含本文所述的任何缀合物和药学上可接受的载体或稀释剂。

本说明书的蛋白质-药物缀合物尤其可用于治疗、预防和/或改善与其同源抗原表达或活性相关或由其介导的任何疾病或病症，或可通过阻断其同源抗原与受体或配体之间的相互作用或以其他方式抑制抗原活性和/或信号传导，和/或促进受体摄入和/或减少细胞表面受体数量来治疗。例如，本说明书的蛋白质-药物缀合物可用于治疗表达其同源抗原和/或响应于抗原介导的信号传导的肿瘤。本文提供的抗体和缀合物还可用于治疗在脑和脑膜、口咽、肺和支气管树、胃肠道、男性和女性生殖道、肌肉、骨骼、皮肤和附属物中产生的原发性和/或转移性肿瘤。结缔组织、脾脏、免疫系统、造血细胞和骨髓、肝脏和泌尿道以及特殊的感觉器官如眼。在某些实施方案中，本说明书的蛋白质-药物缀合物用于治疗以下癌症中的一种或多种：肾细胞癌、胰腺癌、头颈癌、前列腺癌、恶性神经胶质瘤、骨肉瘤、结肠直肠癌、胃癌(例如，具有MET扩增的胃癌)、恶性间皮瘤、多发性骨髓瘤、卵巢癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、滑膜肉瘤、甲状腺癌、乳腺癌或黑素瘤。

在本文所述的治疗方法的上下文中，蛋白质-药物缀合物可以作为单一疗法(即，作为唯一的治疗部分)或与一种或多种另外的治疗部分(在本文另外部分描述的实例)组合施用。

本文提供了包含本文提供的蛋白质-药物缀合物的药物(即治疗性)组合物。本说明书的药物组合物与适合的载体、赋形剂和提供改善的转移、递送、耐受性等的其他试剂一起配制。许多适当的制剂可以在所有药物化学家已知的处方集中找到：Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，Pa。这些制剂包括例如粉末、糊剂、软膏、胶冻、蜡、油、脂质、含有脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(例如LIPOFECTIN

施用于患者的蛋白质-药物缀合物的剂量可以根据患者的年龄和体型、目标疾病、病症、施用途径等的不同而变化。在某些实施方案中，根据体重或体表面积计算剂量。在成年患者中，通常以约0.01-约20mg/kg体重、更优选约0.02-约7、约0.03-约5或约0.05-约3mg/kg体重的单剂量静脉内施用本说明书的抗体可能是有利的。根据病症的严重程度的不同，可以调整治疗的频率和持续时间。施用抗体的有效剂量和时间表可以根据经验确定；例如，可以通过定期评估来监测患者进展，并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域众所周知的方法进行剂量的种间缩放(例如Mordenti等人，1991，Pharmaceut.Res.8：1351)。

各种递送系统是已知的并且可用于施用本说明书的药物组合物，例如包封在脂质体、微粒、微胶囊中、能够表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用(参见例如Wu等人，1987，J.Biol.Chem.262：4429-4432)。导入方法包括但不限于真皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。组合物可以通过任何便利的途径施用，例如通过输注或推注，通过上皮或粘膜皮肤粘膜层(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并且可以与其他生物活性剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。

本说明书的药物组合物可以用标准针头和注射器皮下或静脉内递送。此外，关于皮下递送，笔式递送装置容易地应用于递送本说明书的药物组合物。这种笔递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔式递送装置通常利用包含药物组合物的可更换药筒。一旦药筒内的所有药物组合物已被施用并且药筒是空的，则可以便利地丢弃空药筒并用包含药物组合物的新药筒替换。然后可以重复使用笔递送装置。在一次性笔递送装置中，没有可更换的药筒。相反，一次性笔递送装置预填充有保持在装置内的贮存器中的药物组合物。一旦容器中的药物组合物被清空，则丢弃整个装置。

许多可重复使用的笔和自动注射器递送装置可应用于皮下递送本说明书的药物组合物。实例包括但不限于AUTOPEN

在某些情况下，药物组合物可以在控释系统中递送。在一个实施方案中，可以使用泵(参见Langer，上文；Sefton，1987，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201)。在另一个实施方案中，可以使用聚合物材料；参见Medical Applications of Controlled Release，Langerand Wise(eds.)，1974，CRC Pres.，Boca Raton，Fla。在另一个实施方案中，控释系统可以放置在组合物的靶标附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见例如Goodson，1984，Medical Applications of Controlled Release，上文，第2卷，pp.115-138)。在Langer，1990，Science 249：1527-1533的综述中讨论了其他控释系统。

可注射制剂可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射、点滴输注等的剂型。这些可注射制剂可以通过公知的方法制备。例如，可注射制剂可以例如通过将本文所述的抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中来制备。作为注射用水性介质，存在例如生理盐水、包含葡萄糖和其他助剂的等渗溶液等，其可以与适当的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等组合使用。如此制备的注射剂优选填充在适合的安瓿中。作为油性介质，使用例如芝麻油、大豆油等，其可以与增溶剂例如苯甲酸苄酯、苄醇等联用。因此，优选将制备的注射液填充在适当的安瓿中。

有利地，将本文所述的用于口服或肠胃外使用的药物组合物制备成适于配合活性成分剂量的单位剂量的剂型。单位剂量的这类剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂等。所含的上述抗体的量通常为单位剂量中每剂型约5-约500mg；特别是在注射形式中，在某些实施方案中，包含约5-约100mg的上述抗体，并且对于其他剂型，包含约10-约250mg的上述抗体。

“化疗剂”是可用于治疗癌症的化学化合物，与作用机制无关。化疗剂的类别包括但不限于：烷化剂、抗代谢药、纺锤体毒剂植物生物碱、细胞毒性/抗肿瘤抗生素、拓扑异构酶抑制剂、抗体、光敏剂和激酶抑制剂。化疗剂包括用于“靶向疗法”和常规化疗的化合物。

化疗剂的实例包括：埃罗替尼(

化疗剂的更多实例包括：奥沙利铂(

在“化疗剂”的定义中还包括：(i)起调节或抑制激素对肿瘤作用的作用的抗激素药，例如抗雌激素药和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如他莫昔芬(包括

在“化疗剂”的定义中还包括治疗性抗体，例如阿仑珠单抗(Campath)、贝伐单抗(

与本申请的缀合物组合的具有作为化疗剂的治疗潜能的人源化单克隆抗体包括：阿仑珠单抗、阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、阿替珠单抗、巴匹珠单抗、贝伐单抗、bivatuzumabmertansine、莫坎妥珠单抗、西利珠单抗、培塞利珠单抗、西德福妥珠单抗、西妥珠单抗、达珠单抗、艾库组单抗、依法珠单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、非维珠单抗、芳妥珠单抗、吉姆单抗奥佐米星、奥英妥珠单抗、伊匹木单抗、拉贝珠单抗、林妥珠单抗、马妥珠单抗、美泊利单抗、莫维珠单抗、莫托珠单抗、那他珠单抗、尼妥珠单抗、诺洛珠单抗、纳马珠单抗、奥瑞珠单抗、奥马佐单抗、帕利珠单抗、帕考珠单抗、培妥珠单抗、pecfusituzumab、pectuzumab、培妥珠单抗、培克珠单抗、拉利珠单抗、雷珠单抗、利左单抗、瑞利珠单抗、利西珠单抗、罗维珠单抗、鲁利单抗、西罗珠单抗、西利珠单抗、松妥珠单抗、tacatuzumab tetraxetan、他度珠单抗、他利珠单抗、替非珠单抗、托珠单抗、托利珠单抗、曲妥珠单抗、西莫白介素单抗、土库图单抗、乌马珠单抗、乌珠单抗和维西珠单抗。

除活性成分、即本申请的蛋白质-药物缀合物外，本申请的药物组合物和用于本申请的用途的药物组合物可以包含药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员众所周知的其他材料。这样的材料应当是无毒的，并且不应干扰活性成分的功效。载体或其他材料的确切性质将取决于施用途径，其可以是口服或通过注射，例如皮肤、皮下或静脉内。

在另一个方面，本文提供了药物组合物，其包含抗体-药物缀合物和药学上可接受的载体，所述抗体-药物偶联物包含特异性结合MSR1的重组人抗体或其片段，该药物组合物还包含利福霉素类似物。在相关方面，实施方案涉及一种组合物，其为包含抗-MSR1抗体并且还包含利福霉素类似物的抗体-药物缀合物和第二治疗部分的组合。在一个实施方案中，第二治疗部分为有利地与包含抗-MSR1抗体的抗体-药物缀合物组合的任何药剂。在一个实施方案中，第二治疗部分为抗体-药物缀合物，其包含与第二药物或治疗部分缀合的抗-MSR1抗体。涉及抗-MSR1抗体的示例性组合疗法、共制剂和ADC在本文其他部分公开。

在某些实施方案中，本申请提供了包含本申请的蛋白质-药物缀合物的药物组合物。本申请的药物组合物与适合的载体、赋形剂和其他赋形剂一起配制，其提供改善的转移、递送、耐受性等的药剂。许多适当的制剂可以在所有药物化学家已知的处方集中找到：Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。这些制剂包括例如粉末、糊剂、软膏、胶冻、蜡、油、脂质、含有脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(例如LIPOFECTIN

在某些实施方案中，本申请包括方法，其包含向有此需要的受试者施用包含特异性结合HER2的抗-HER2抗体或其抗原结合片段的治疗组合物。该治疗组合物可以包含如本文公开的任何抗体或抗原结合分子和药学上可接受的载体或稀释剂。表述“有此需要的受试者”意指表现出癌症的一种或多种症状或标志的人或非人动物(例如，表达肿瘤或患有下文提及的任何癌症的受试者)，或以其他方式将受益于HER2活性的抑制或降低或HER2+细胞(例如，乳腺癌细胞)的消耗的人或非人动物。

在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含特异性结合HER2的重组人抗体或其片段和药学上可接受的载体。在相关方面，本申请的特征在于一种组合物，其为抗-HER2抗体和第二治疗部分的组合。在一个实施方案中，第二治疗部分是有利地与抗-HER2抗体组合的任何药剂。涉及本申请的抗-HER2抗体的另外的组合疗法和共制剂在本文其他部分公开。

在另一个方面，本申请提供了使用本申请的抗-HER2抗体靶向/杀伤表达HER2的肿瘤细胞的治疗方法，其中所述治疗方法包含向有此需要的受试者施用治疗有效量的包含本申请的抗-HER2抗体的药物组合物。在一些情况下，抗-HER2抗体(或其抗原结合片段)可用于治疗乳腺癌，或可以通过包括但不限于经修饰的Fc结构域以增加ADCC的方法更具毒性(参见，例如Shield等人(2002)JBC 277：26733)、放射免疫疗法、抗体-药物缀合物或用于增加肿瘤消融效率的其他方法的方法来修饰以更具细胞毒性。

制备本申请化合物的方法

缀合伯胺化合物的技术是本领域已知的。本文采用位点特异性缀合技术来使用经由转谷氨酰胺酶的谷氨酰胺缀合来指导与谷氨酰胺的缀合(参见例如Schibli，AngewChemie Inter Ed.2010，49，9995)。还参见WO 2017147542，其主题明确地并入本文。本文提供了制备如本文所述的谷氨酰胺酰基修饰的蛋白质和蛋白质-药物缀合物(例如ADC)的方法和可用于所提供的方法的组合物，以及通过所述方法产生的组合物。缀合的蛋白质可用于测定、诊断和治疗，包括治疗有次需要的受试者的癌症。

在某些实施方案中，该方法至少包含下列步骤(2)，其中反应性胺化合物为本申请的反应性接头-有效负载化合物。

所述方法包含在抗体的谷氨酰胺残基处进行转谷氨酰胺酶反应。抗体可以为本领域技术人员已知的任何抗体。有用的抗体在本文的章节中描述。

本领域技术人员将认识到抗体应包含至少一个谷氨酰胺残基。在某些实施方案中，所述抗体在EU编号系统中编号为295的一个或多个重链位置处包含谷氨酰胺残基。在本申请中，该位置称作谷氨酰胺295，或Gln295，或0295。本领域技术人员将认识到，这是许多抗体的野生型序列中的保守谷氨酰胺残基。在其他有用的实施方案中，可以将抗体改造以包含谷氨酰胺残基。用于修饰抗体序列以包括谷氨酰胺残基的技术在本领域技术人员的技能范围内(参见，例如Ausubel等人，Current Protoc.Mol.Biol)。

在某些实施方案中，抗体包含两个谷氨酰胺残基，每个重链中有一个。在特定实施方案中，抗体在每条重链中包含Q295残基。在另外的实施方案中，抗体包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或更多个谷氨酰胺残基。这些谷氨酰胺残基可以在重链、轻链或重链和轻链两者中。这些谷氨酰胺残基可以为野生型残基或改造的残基。可以根据标准技术制备抗体。

本领域技术人员将认识到，抗体通常在重链序列中的残基N297处、靠近残基Q295处被糖基化。残基N297处的糖基化可干扰残基Q295处的转谷氨酰胺酶(Dennler等人，同上)，并影响药物与抗体比(DAR)。因此，在有利的实施方案中，抗体未被糖基化。在某些实施方案中，抗体为去糖基化的或无糖基化的。

在去糖基化步骤中，可以通过本领域技术人员显而易见的任何技术使抗体去糖基化。在特定实施方案中，通过从抗体中除去一种或多种寡糖来制备去糖基化抗体。去糖基化可以通过本领域技术人员显而易见的任何技术进行。在某些实施方案中，抗体通过化学方式去糖基化。在某些实施方案中，抗体通过酶促方式去糖基化。在某些实施方案中，可以通过在不使多肽糖基化的系统中表达来使抗体去糖基化。有用的表达系统包括例如原核表达系统。

在某些实施方案中，本文提供了包含下列步骤的方法：

(1)使抗体去糖基化。

抗体可以通过本领域技术人员认为适合的任何技术去糖基化。在某些实施方案中，使抗体与能够裂解抗体与寡糖之间的键的试剂接触。所述试剂可以是本领域技术人员已知的任何试剂。在具体的实施方案中，所述试剂是能够裂解天冬酰胺侧链与N-连接的寡糖之间的键的酶。在某些实施方案中，所述试剂是PNGase F或肽-N4-(N-乙酰基-β-葡糖胺基)天冬酰胺酰胺酶或EC 3.5.1.52。试剂如PNGase F可以从商业来源获得。在某些实施方案中，所述试剂是蛋白质去糖基化混合物(New England Biolabs)。所述试剂以适合于糖基化抗体的量和反应体积的量使用。在某些实施方案中，每约1μg糖基化抗体使用约0.4单位的试剂。

在某些实施方案中，从反应混合物中分离去糖基化抗体。可以通过本领域技术人员认为适合的任何技术分离去糖基化抗体。在特定实施方案中，可以通过尺寸排阻色谱、亲和色谱、过滤、离心超滤或认为适合的任何其他技术分离去糖基化抗体。

然后使没有干扰糖基化的抗体与伯胺化合物反应。在某些实施方案中，无糖基化抗体与伯胺化合物反应以产生谷氨酰胺酰基修饰的蛋白质(例如抗体)。在某些实施方案中，去糖基化的抗体与伯胺化合物反应以产生谷氨酰胺酰基修饰的蛋白质(例如抗体)。出于本说明书的目的，去糖基化抗体可以从任何来源或通过本领域技术人员认为适合的任何技术获得或产生。在某些实施方案中，根据上述步骤(1)使抗体去糖基化。在另外的实施方案中，足以使去糖基化或无糖基化抗体包含至少一个谷氨酰胺残基，所述谷氨酰胺残基充分不含干扰糖基化或其它结构，以可用于与转谷氨酰胺酶反应，如下所述。

伯胺可以是在转谷氨酰胺酶存在下能够与谷氨酰胺残基形成共价键的任何伯胺。有用的伯胺描述于本文的章节中。

在另一个实施方案中，提供了用于生产谷氨酰胺酰基-修饰的抗体的方法，包含下列步骤：

(2)在转谷氨酰胺酶存在下，在约7.0-约8.0之间的反应pH下，在适于伯胺与抗体的多肽链中的谷氨酰胺侧链共价偶联的条件下，用足量的伯胺化合物处理抗体。如本文所讨论的，抗体可以为去糖基化的、无糖基化的，否则以其他方式不含干扰性糖基化。

在另一个实施方案中，提供了用于生产谷氨酰胺酰基-修饰的抗体的方法，包含下列步骤：

(i)向溶剂中添加去糖基化抗体或无糖基化抗体；

(ii)添加至少5摩尔当量的伯胺化合物；

(iii)在使得反应pH约为6.5-约8.5的pH下添加转谷酰胺酶；并且

(iv)混合最终的反应混合物。

在另一个实施方案中，步骤(iv)包含混合最终的反应混合物至少4小时。在某些实施方案中，步骤(iv)包含搅拌最终的反应混合物。在其他实施方案中，步骤(iv)包含振摇反应混合物。

转谷氨酰胺酶可以是本领域技术人员认为适合的任何转谷氨酰胺酶。在某些实施方案中，转谷氨酰胺酶是催化伯胺化合物上的游离氨基和谷氨酰胺残基侧链上的酰基之间形成异肽键的酶。转谷氨酰胺酶也称作蛋白质-谷氨酰胺-Y-谷氨酰转移酶。在具体实施方案中，所述转谷氨酰胺酶分类为EC 2.3.2.13。转谷氨酰胺酶可以来自任何认为适合的来源。在某些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶为微生物转谷氨酰胺酶。有用的转谷氨酰胺酶已经从茂原链霉菌(Streptomyces mobaraense)、肉桂链霉菌(Streptomyces cinnamoneum)、灰色链霉菌(Streptomyces griseo-carneum)、淡紫链霉菌(Streptomyces lavendulae)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中分离。还可以使用非微生物转谷氨酰胺酶，包括哺乳动物转谷氨酰胺酶。在某些实施方案中，转谷氨酰胺酶可以通过任何技术产生或从技术人员认为适合的任何来源获得。在特定实施例中，转谷氨酰胺酶获自商业来源。

在步骤(2)中，反应典型地在溶剂中进行。在某些实施方案中，溶剂选自水溶液，例如缓冲溶液或缓冲水、盐水、缓冲盐水、有机溶剂、用磷酸盐缓冲的水、HEPES和MOPS。例如，在一个实施方案中，溶剂为BuPh磷酸缓冲盐水。

在步骤(2)的反应中，抗体可以为本领域技术人员认为适合的任何浓度。在某些实施方案中，抗体以0.1-5mg/ml的浓度存在。在特定实施方案中，抗体以约0.1mg/ml、约0.2mg/ml、约0.3mg/ml、约0.4mg/ml、约0.5mg/ml、约0.6mg/ml、约0.7mg/ml、约0.8mg/ml、约0.9mg/ml、约1.0mg/ml、约1.1mg/ml、约1.2mg/ml、约1.3mg/ml、约1.4mg/ml、约1.5mg/ml、约1.6mg/ml、约1.7mg/ml、约1.8mg/ml、约1.9mg/ml、约2.0mg/ml、约2.5mg/ml、约3.0mg/ml、约3.5mg/ml、约4.0mg/ml、约4.5mg/ml或约5.0mg/ml的浓度存在。

伯胺化合物的浓度可以是本领域技术人员认为适合的任何浓度。在某些实施方案中，伯胺化合物的浓度决定反应的效率(即，提供有用的DAR)。伯胺化合物的浓度可以提供少量的高分子量副产物和高DAR。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约34摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约50摩尔当量。在某些实施方案中，伯胺化合物的浓度相对于抗体的浓度为至少约75摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约85摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约100摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约125摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约150摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约175摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约200摩尔当量。在某些实施方案中，伯胺化合物在下式中：在一些实施方案中，所述抗体的浓度相对于抗体的浓度为至少约300摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约400摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约500摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约600摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约700摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约800摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约900摩尔当量。在某些实施方案中，相对于抗体的浓度，伯胺化合物的浓度为至少约1000摩尔当量。本领域技术人员将认识到，上述范围存在伯胺化合物的溶解度的上限。在某些实施方案中，任何上述浓度小于约500摩尔当量或小于约1000摩尔当量。

转谷氨酰胺酶的U/mg去糖基化抗体的量度可以是本领域技术人员认为适合的任何量。在某些实施方案中，转谷氨酰胺酶至少约为0.5-约30U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为0.5-约6U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为1-约30U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为1.75U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为2.2U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为2.5U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为3.5U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为5U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为10U/mg去糖基化抗体。转谷氨酰胺酶至少约为25U/mg去糖基化抗体。出于放大目的，转谷氨酰胺酶至少约为12U/mg去糖基化抗体。

步骤(2)的反应在本领域技术人员认为适合的任何温度下进行。在具体实施方案中，反应在约20℃-约40℃、约25℃-约40℃或约25℃-约37℃的任意温度下进行。在具体的实施方案中，反应在室温下进行。在具体的实施方案中，反应在约25℃、约30℃、约35℃或约37℃下进行。

步骤(2)的反应可以在本领域技术人员认为适合的任何体积中进行，并且取决于反应的大小。在具体实施方案中，反应体积约为10μL-约10mL、约10μL-约5mL、约10μL-约2.5mL、约10μL-约1.0mL、约10μL-约0.5mL、约10μL-约250μL或约10μL-约100μL。

步骤(2)的反应可以进行任何认为适于形成谷氨酰胺酰基修饰的抗体的时间。在某些实施方案中，反应进行约1-约48小时。在具体实施方案中，反应进行约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约15小时、约20小时、约25小时、约30小时、约40小时或约48小时。反应进行至少4小时、至少18小时或至少24小时。反应进程可以通过标准技术监测，例如尺寸排阻色谱、质谱、MALDI、SDS-PAGE、蛋白质印迹等。

在某些实施方案中，从反应混合物中分离或纯化谷氨酰胺酰基修饰的抗体。谷氨酰胺酰基修饰的抗体可以通过本领域技术人员认为适合的任何技术分离或纯化。在具体的实施方案中，谷氨酰胺酰基修饰的蛋白(例如抗体)可以通过色谱、尺寸排阻色谱、亲和色谱或认为适合的任何其他技术分离。例如，在一个实施方案中，通过亲和层析纯化谷氨酰胺酰基修饰的抗体。作为另一个实例，在一个实施方案中，通过蛋白A色谱法纯化谷氨酰胺酰基修饰的抗体。作为另一个实例，在一个实施方案中，通过亲和色谱和蛋白A色谱纯化谷氨酰胺酰基修饰的抗体。

在某些实施方案中，步骤(2)的反应几乎不得到或无高分子量副产物。高分子量副产物可以为是包含在取决于转谷氨酰胺酶和/或最终反应pH的反应中共价键合的两个或更多个重链基团的高分子量种类。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了不包含基于SDS-PAGE凝胶检查、经由目视检查、染色和/或其他检测方法的可检测副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了包含相对于期望的谷氨酰胺酰基修饰的抗体小于10％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了包含相对于谷氨酰胺酰基修饰的抗体小于5％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供组合物包含相对于谷氨酰胺酰基修饰的抗体少于4％的副产物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了包含相对于谷氨酰胺酰基修饰的抗体小于3％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了包含相对于谷氨酰胺酰基修饰的抗体小于2％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了包含相对于谷氨酰胺酰基修饰的抗体小于1％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(2)的反应提供了包含相对于谷氨酰胺酰基修饰的抗体小于1％的交联抗体的组合物。相对量可以基于质量或摩尔计算。

在某些实施方案中，伯胺化合物包含能够在转谷氨酰胺化后进一步反应的反应性基团(在本文中称作反应性胺接头，例如H

有用的反应性有效负载化合物和反应性连接体-有效负载化合物的实例描述在以上部分中。

因此，本文提供了包含下列步骤的方法：

(3)用反应性接头-有效负载化合物反应或处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体以形成抗体-有效负载缀合物。

反应可以在本领域技术人员认为适合的条件下进行。在某些实施方案中，在适于在谷氨酰胺酰基修饰的抗体和接头-有效负载化合物之间形成键的条件下，用反应性接头-有效负载化合物接触或处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体。在某些实施方案中，在适于在谷氨酰胺酰基修饰的抗体和接头-有效负载化合物之间形成狄尔斯-阿尔德加合物的条件下，用反应性接头-有效负载化合物接触或处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体。适合的反应条件是本领域技术人员众所周知的。示例性反应在以下实施例中提供。

另外，本文提供了包含下列步骤的方法：

(3)使谷氨酰胺酰基修饰的抗体与反应性有效负载化合物反应或用反应性有效负载化合物处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体以形成抗体-有效负载缀合物。

反应可以在本领域技术人员认为适合的条件下进行。在某些实施方案中，在适于在谷氨酰胺酰基修饰的抗体和有效负载之间形成键的条件下，用反应性有效负载化合物接触或处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体。在某些实施方案中，在适于在谷氨酰胺酰基修饰的抗体和有效负载化合物之间形成狄尔斯-阿尔德加合物的条件下，用反应性有效负载化合物接触或处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体。适合的反应条件是本领域技术人员众所周知的。示例性反应在以下实施例中提供。

在某些实施方案中，本文提供了包含下列步骤的方法：

(3a)使谷氨酰胺酰基修饰的抗体与反应性接头化合物反应或用反应性接头化合物处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体以形成抗体-接头缀合物；并且

(3b)使抗体-接头缀合物与反应性有效负载化合物反应或用反应性有效负载化合物处理抗体-接头缀合物以形成抗体-有效负载缀合物。

反应可以在本领域技术人员认为适合的条件下进行。在某些实施方案中，在适于在谷氨酰胺酰基修饰的抗体和接头之间形成键的条件下，用反应性接头化合物接触或处理谷氨酰胺酰基修饰的抗体。在某些实施方案中，在适于在抗体-接头缀合物和有效负载之间形成键的条件下，用反应性有效负载化合物接触或处理抗体-接头缀合物。在某些实施方案中，反应性接头化合物包含与本文所述的伯胺化合物的反应性基团反应的第一反应性基团，和能够与反应性有效负载化合物或反应性接头-有效负载化合物反应的第二反应性基团，并且(1)在步骤(3a)的反应条件下是惰性的或(2)用保护基团保护以在步骤(3a)的反应条件下是惰性的。将所述受保护的第二反应性基团脱保护并进行步骤(3b)。适合的反应条件和保护基团是本领域技术人员众所周知的。示例性反应在以下实施例中提供。

在某些实施方案中，从反应混合物中分离或纯化抗体-药物缀合物。可以通过本领域技术人员认为适合的任何技术分离或纯化抗体-药物缀合物。在特定实施方案中，可以通过尺寸排阻色谱、亲和色谱、过滤或认为适合的任何其他技术分离抗体-药物缀合物。

在某些实施方案中，步骤(3)、(3a)或(3b)的反应几乎不得到或无副产物。副产物可以为包含在取决于转谷氨酰胺酶和/或最终反应pH的反应中彼此共价键合的两个或更多个重链多肽的高分子量种类。步骤(3)、(3a)或(3b)的反应提供包含相对于抗体-有效负载缀合物小于10％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(3)、(3a)或(3b)的反应提供包含相对于抗体-有效负载缀合物小于5％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(3)、(3a)或(3b)的反应提供包含相对于抗体-有效负载缀合物小于4％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(3)、(3a)或(3b)的反应提供包含相对于抗体-有效负载缀合物小于3％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(3)、(3a)或(3b)的反应提供包含相对于抗体-有效负载缀合物小于2％的副产物的组合物。在某些实施方案中，步骤(3)、(3a)或(3b)的反应提供包含相对于抗体-有效负载缀合物小于1％的副产物的组合物。相对量可以基于质量或摩尔计算。

在一些实施方案中，其中谷氨酰胺酰基修饰的抗体包含两个或更多个反应单元，例如当SP为支链时，步骤3可以重复两次或更多次以用相同或不同的反应性有效负载或接头-有效负载使抗体官能化。

在这类实施方案中，步骤3在相同或不同条件下进行两次或多次，例如在相同或不同pH下。

在一个非限制性实施方案中，其中SP为支链的并且包含两个二烯，步骤3可以进行两次，其中第一次的步骤3在第一种pH下进行，而第二次的步骤3在第二种pH下进行。在一个实施方案中，第一种pH约为6.7-约8.5或约7.0-约7.6或约7.2-约7.4或约7.2。在一个实施方案中，第二种pH约为4.5-约6.3或约5.0-约6.0或约5.5。

实施例

下列实施例示例了本说明书的具体方面。实施例不应被解释为限制性的，因为实施例仅提供对实施方案及其各个方面的具体理解和实施。

如本文所用，除非另有相反的指定，否则，本文的方法和实施例中使用的符号和规则与目前科学文献中使用的那些一致，例如Journal of the American Chemical Societyor the Journal ofBiological Chemistr。特别地、但不限于下列缩写用于实施例并且贯穿于本说明书中：

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如本文所用，在这些方法、方案和实施例中使用的符号和惯例，无论特定缩写是否被具体定义，都与当代科学文献(例如Journal of the American Chemical Society或Journal of Biological Chemistry)中使用的符号和惯例一致。

一般方法

所用的所有溶剂均购自Sigma Aldrich或Fisher Scientific，无需进一步纯化即可使用。在Varian Inova 300MHz和500MHz NMR仪器上记录

实施例1：2-(环戊-1，3-二烯-1-基)乙-1-胺和2-(环戊-1，4-二烯-1-基)乙-1-胺(3)的合成

在Ar气氛中向在0℃冷却5min的2-溴乙胺氢溴酸盐(1)(1.01g，4.93mmol)在THF(10mL)中的溶液中滴加氰基环戊二烯氨基钠(2)(5.0ml的2.4M的THF溶液)，历时5min。搅拌该反应混合物，同时温热至22℃。24h后，将该反应混合物转入分液漏斗，用EtOAc(3x)萃取。用H

实施例2：2-(五甲基环戊-1，3-二烯-1-基)乙-1-胺(6)和6-氨基-N-(2-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙基)己酰胺草酸盐(9)的合成

如下所述由化合物1合成Diels Alder连接6和9基。

步骤1：在Ar气氛中向在0℃冷却5min的2-溴乙胺氢溴酸盐1(750mg，3.66mmol)在无水THF(10mL)中的溶液中滴加1，2，3，4，5-五甲基环戊二烯氨基钠5(17.6ml的0.5M的THF溶液)，5min。搅拌该反应混合物，同时温热至22℃。20h后，用H

步骤2：在Ar气氛中中向化合物6(118mg，0.658mmol)在THF(4.0mL)的溶液中加入Fmoc-6-己酸NHS酯(326mg，0.724mmol)。1h后，浓缩该反应混合物，通过柱色谱法纯化(0→100％EtOAc的己烷溶液)，得到208mg的化合物7(0.404mmol，61％收率).LC/MS(方法A)：保留时间4.38min.(ESI)计算值C

步骤3：向化合物7(208mg，0.404mmol)在DCM(2.0mL)在Ar气氛中中的溶液中加入DBU(121mL，0.809mmol)。20min后，浓缩该反应混合物，通过柱色谱法纯化(0→100％[0.1MNH

步骤4：向化合物8(98.9mg，0.339mmol)在EtOAc(1mL)中的溶液中加入饱和草酸的EtOAc溶液(～20滴)。过滤形成的沉淀，用5mL EtOAc洗涤，然后高度真空干燥，得到70.8mg的化合物9(0.185mmol，47％收率)，为黄褐色固体。LC/MS(方法B)：保留时间0.21min.(ESI)C

实施例3：4-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)丁-1-胺(10)的合成

根据实施例2的步骤1，使用4-溴丁胺氢溴酸盐合成化合物10，得到157.0mg的化合物10(0.757mmol，58％收率)，为黄褐色固体。LC/MS(方法A)：保留时间1.60min.(ESI)计算值C

实施例4：2-(2-(2-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺乙酸盐(13)的合成

步骤1.将Boc-氨基-PEG

步骤2.向在Ar气氛中在0℃冷却5min的粗的12(0.103mmol)在无水THF(1.0mL)中的溶液中滴加1，2，3，4，5-五甲基环戊二烯氨基钠5(0.6ml，0.309mmol，0.5M的THF溶液)，历时5min。搅拌该反应混合物，同时温热至r。20h后，用H

实施例5：乙酸(2-(2-(3-氧代-3-((2-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯烯-1-基)乙基)氨基)丙氧基)乙氧基)乙基)-l5-氮烷基(azaneyl)酯(16)

/>

步骤1：在室温向酸14(49mg，0.1228mmol)在DMF(1.0mL)中的溶液中加入胺6(20mg，0.1116mmol)在THF(0.1mL)和EDC(43mg，0.2232mmol)中的溶液。搅拌18h后，通过判断反应完成，直接通过使用C

步骤2：将化合物15(20.0mg，0.0357mmol)溶于DMF(0.7mL)，然后加入5％哌啶的DMF溶液(0.1mL，0.0525mmol)。2h后，通过判断反应完成，直接通过反相C

实施例6：(S)-6-氨基-N-(2-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙基)-2-(3-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)丙酰氨基)己酰胺草酸盐(23)的合成

步骤1.在Ar气氛中向在干冰/丙酮浴中冷却至-78℃的1，2，3，4，5-五甲基环戊二烯氨基钠5(9.41mL的0.5M的THF溶液，4.70mmol)在THF(7.8mL)中的溶液中加入3-溴-乙基丙酸酯17(0.50mL，3.92mmol)，在-78℃搅拌该混合物。1.5h后，除去冷浴，将该反应混合物再搅拌45min。然后通过添加H

步骤2.将粗的酸18(3.92mmol)溶于THF(5.6mL)，然后加入NHS-OH(632mg，5.49mmol)、EDC(902mg，4.70mmol)和DCM(5.6mL)。15h后，再加入NHS-OH(300mg，2.61mmol)，将该混合物搅拌至通过LC/MS判断反应完成。通过垫过滤该混合物，用DCM(50mL)洗涤，然后浓缩滤液。通过柱色谱法纯化得到的残余物(0→50％EtOAc的己烷溶液)，得到893mg的19(2.93mmol，75％收率，历时2步)，为黄白色固体。LC/MS(方法A)：保留时间3.38min.(ESI)计算值C

步骤3.向溶于DMA(0.50mL)的Fmoc-N

步骤4：将酸21(26.5mg，0.0474mmol)和胺6(8.5mg，0.0474mmol)溶于DCM(1.0mL)。然后向该反应混合物中加入EDC(13.6mg，0.0709mmol)和HOBt(9.6mg，0.0710mmol)。1h后，通过LC/MS判断反应完成，直接通过柱色谱法(12g)(0→100％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到16.2mg的化合物22(0.0225mmol，47％收率)，为白色固体。LC/MS(方法A)：保留时间4.44min.(ESI)计算值C

步骤5.将化合物22(16.2mg，0.0225mmol)溶于DCM(0.5mL)，然后加入DBU(3.4mL，0.0225mmol)。10min后，通过LC/MS判断反应完成，真空浓缩该反应混合物，将得到的残余物溶于DMSO(1mL)，通过反相C

实施例7：乙酸(S)-6-氨基-N-(2-(呋喃-3-基)乙基)-2-(3-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)丙酰氨基)己酰亚氨酯(27)的合成

步骤1：向在Ar气氛中在DCM中的(2.6mL)BocNHLys(Fmoc)OH 24(200mg，0.427mmol)和2-(呋喃-3-基)乙-1-胺(43mg，0.388mmol)加入EDC(112mg，0.582mmol)。16h后，通过判断反应完成，直接通过柱色谱法(40g)(10→100％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到142.7mg的化合物25(0.254mmol，66％收率)，为白色固体。LC/MS(方法A)：保留时间3.19min.(ESI)计算值C

步骤2：用15％在DCM中的TFA(1.0mL)处理化合物25(21.4mg，0.0381mmol)。30min后，通过判断反应完成，真空浓缩，从1∶1 MeCN/H

步骤3：将化合物26(28.0mg，0.430mmol)溶于DCM(1.0mL)，然后加入DBU(12.8mL，0.0859mmol)。5min后，通过LC/MS判断反应完成，直接通过反相C

实施例8：(S)-6-氨基-N-(2-(2-(2-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙基)-2-(3-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)丙酰氨基)己酰胺乙酸盐(29)

步骤1：将酸21(50mg，0.0896mmol)和胺6(26.3mg，0.0985mmol)溶于DMF(1.6mL)。然后向该反应混合物中加入EDC(32.6mg，0.0170mmol)和HOBt(10.9mg，0.0806mmol)。3h后，通过LC/MS判断反应完成，直接通过使用C

步骤2：将化合物28(55.0mg，0.0681mmol)溶于DMF(1.4mL)，然后加入5％哌啶的DMF溶液(0.8mL，0.4087mmol)。30min后，通过LC/MS判断反应完成，直接通过反相C

实施例9：草酸3-(环戊-1，3-二烯-1-基)丙-1-铵草酸盐和3-(环戊-1，4-二烯-1-基)丙-1-铵(30)的合成

根据实施例1，使用3-溴丙基胺合成化合物30。根据实施例2的步骤4形成草酸盐，得到150.7mg的化合物30(0.707mmol，31％收率)，为黄褐色固体。LC/MS(方法A)：保留时间0.24min.(ESI)C

实施例10：4-(环戊-1，3-二烯-1-基)丁-1-铵草酸盐和4-(环戊-1，4-二烯-1-基)丁-1-铵草酸盐(31)的合成

根据实施例1，使用4-溴丁胺氢溴酸盐合成化合物31。根据实施例2的步骤4形成草酸盐，得到20.1mg的化合物31(0.0884mmol，6.2％收率)，为黄褐色固体。LC/MS(方法C)：保留时间2.68min.(ESI)C

实施例11：2乙酸-(2-(2-(2-(环戊-1，4-二烯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-铵乙酸盐和2-(2-(2-(2-(环戊-1，3-二烯-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-铵(34)的合成

步骤1.将Boc-氨基-PEG

步骤2.将粗的33混悬于无水DME(3.0mL)，超声处理至我去溶解。然后在Ar气氛中将该溶液冷却至0℃，用环戊二烯氨基钠2(0.50mL的2.4M的THF溶液，1.20mmol)处理。1h后，用10％HOAc(水溶液)(1.0mL)使该反应体系淬灭，浓缩，用MeCN(1.5mL)稀释得到的残余物，直接通过反相C

实施例12：乙酸6-氧代-6-((2-(2，3，4，5-四甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙基)氨基)己-1-铵、乙酸6-氧代-6-((2-(1，2，3，4-四甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙基)氨基)己-1-铵(次要成分)和乙酸6-氧代-6-((2-(1，2，3，5-四甲基环戊-2，4-二烯-1-基)乙基)氨基)己-1-铵(次要成分)(38)的合成

如下所述由化合物35合成Diels Alder接头36和38。

步骤1.向在无水THF(20mL)中的2，3，4，5-四甲基环戊二烯35(1.00g，8.18mmol)中加入nBuLi(6.6mL的1.6M的己烷溶液，10.6mmol)。将得到的混悬液在环境温度搅拌2h。在单独的容器中，将溴乙胺氢溴酸盐1(419mg，2.05mmol)混悬于无水THF(2.0mL)，在Ar气氛中用冰/H

步骤2.根据DMA中的实施例2的步骤2合成化合物37，得到95.4mg的化合物37(0.191mmol，85％收率)，为黄白色固体。LC/MS(方法A)：保留时间3.73min.(ESI)计算值C

步骤3.根据实施例2中的步骤3合成化合物38。一旦通过LC/MS判断反应完成，则浓缩该反应体系，用DMSO(0.5mL)稀释得到的残余物，直接通过反相C

实施例13：乙酸(S)-6-((6-((2-(环己-1，5-二烯-1-基)乙基)氨基)-6-氧代己基)氨基)-6-氧代-5-(3-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)丙酰氨基)己-1-铵(主要)和乙酸(S)-6-((6-((2-(环己-1，3-二烯-1-基)乙基)氨基)-6-氧代己基)氨基)-6-氧代-5-(3-(1，2，3，4，5-五甲基环戊-2，4-二烯-1-基)丙酰氨基)己-1-铵(次要)(46)的合成

如下所述由化合物39合成Diels Alder接头42、44和46。

步骤1.在-78℃在Ar气氛中将LDA(7.2mL，14.4mmol，2.0M溶液)加入到10mL无水THF中，随后添加环己酮39(1.26g，13.1mmol)在10mL无水THF中的溶液。将该混合物在-78℃搅拌30min，然后滴加PhN(Tf)

步骤2.根据Org.Lett.2013，15，3966-3969中报道的已知方法制备化合物41。在油浴中在加热65℃三氟甲磺酸环己-1，5-二烯-1-基酯40(410mg，0.18mmol)、Pd

步骤3.在室温向化合物41(50mg，0.326mmol)在AcOH(2.5mL)中的溶液中加入Zn粉(213mmol，3.26mmol)。2h后，通过LC/MS判断反应完成。通过C盐过滤得到的混合物，浓缩，得到60mg的粗的化合物42，其污染有乙酸盐，不经进一步纯化用于下一步。LC/MS(方法A)：保留时间0.18min和0.25min.(ESI)C

步骤4.根据DMA中的实施例2的步骤2合成化合物43，得到35.2mg的化合物43(0.0768mmol，28％收率)，为黄白色固体。LC/MS(方法A)：保留时间3.33min.(ESI)计算值C

步骤5.根据实施例2中的步骤3合成化合物44。一旦通过LC/MS判断反应完成，则浓缩该反应体系，用DMSO(0.5mL)稀释得到的残余物，直接通过反相C

步骤6.向化合物44(9.9mg，0.0421mmol)在DMA(1.1mL)中的溶液中加入化合物21(35.3mg，0.0631mmol)、HATU(32.0mg，0.0842mmol)和NMM(14μL，0.126mmol)在DMA(0.40mL)中的溶液。2小时后，用AcOH使反应淬灭，直接通过反相C

步骤7.向化合物45(19.8mg，0.0255mmol)在DMA(0.85mL)中的溶液中加入DBU(4.1mg，0.0268mmol)在DMA(30μL)中的溶液。25分钟后，用AcOH使该反应体系淬灭，直接通过反相C

实施例14：乙酸(S)-6-((2-(呋喃-3-基)乙基)氨基)-5-(3-(呋喃-3-基)丙酰氨基)-6-氧代己-1-铵(48)的合成

步骤1：根据实施例7中的步骤2，使用在DMF(1.0mL)中的粗的脱保护的胺25(27mg，0.0584mmol)、3-(呋喃-3-基)丙酸(9.8mg，0.070mmol)和EDCI(20mg，0.105mmol)和TEA(16mL，0.117mmol)合成化合物47。15h后，通过LC/MS判断反应完成.然后直接通过EZ Prep(Gemini，30x150mm)纯化粗反应混合物。洗脱液：CH

步骤2.将化合物47(10mg，0.0171mmol)溶于DCM(1.2mL)，在室温滴加5％哌啶的DMF溶液(200mL)。16h后，通过LC/MS判断反应完成。浓缩该混合物以除去全部挥发性物质，溶于0.5mL DMSO。通过EZ Prep(Gemini，30x150mm)纯化粗残余物。洗脱液：CH

实施例15：乙酸5-(3-甲氧基呋喃-2-基)戊-1-铵(53)的合成

步骤1：如文献中报道的制备化合物49(Bioconjugate Chem.2018，29，2046-2414)。用LAH(1.1mL，1.5eq.的1.0M的THF溶液)还原化合物49(150mg，0.706mmol)，随后用酒石酸钾钠水溶液(0.5mL)处理，得到相应的醇50(136mg，定量收率).LC/MS(方法A)：保留时间1.9min.(ESI)计算值C

步骤2：在Ar气氛中在冰/H

步骤3：将化合物51(143mg，0.545mmol)和K-邻苯二甲酰亚胺(110mg，0.599mmol)在DMF(1mL)中的混合物在KI(9mg，0.1eq.)存在下在室温搅拌3天，直至通过LC/MS判断反应完成，然后真空浓缩挥发性物质。通过柱色谱法纯化得到的残余物(0-60％EtOAc的己烷溶液)，得到64mg的化合物52(0.204mmol，38％收率).LC/MS(方法A)：保留时间3.1min.(ESI)计算值C

步骤4：将化合物52(30mg，0.0957mmol)溶于EtOH(0.5mL)，在环境温度加入NH

实施例16：乙酸3-(3-甲氧基呋喃-2-基)丙-1-铵(57)的合成

步骤1：在冰浴中在Ar气氛中向NaH(95.4mg，2.39mmol，1.5eq.)在无水THF(3mL)中的混悬液中滴加(氰基甲基)膦酸二乙酯(295μL，1.82mmol，1.15eq.)。将得到的混合物搅拌030min，然后向这种冷溶液中滴加化合物54(200mg，1.59mmol)在THF(1mL)中的溶液。5min后，除去冰浴。将该反应混合物在室温搅拌1h。用H

步骤2：用Wilkinson催化剂RdCl(PPh

步骤3：用LAH(84μL，0.0843mmol，1.5eq)在冰浴中处理化合物56(8.5mg，0.0562mmol)。2h后，谨慎地用H

抗体和去糖基化

在下列实施例中，使用400U/mg mAb PNGaseF(NEB P0704L)在PBS pH 7.4在37℃使两种抗体，即来自Carter等人，PNAS1992 89 4285的具有来源于humAb4D5-8的可变区的抗-HER2抗体、也称作曲妥珠单抗和来源于具有与肿瘤或感染性疾病无关的免疫抗原的非结合同种型对照去糖基化。使用旋转过滤器(Amicon，30kDa截止值)对反应混合物进行缓冲液交换成PBS pH 7.4。这使得295Q残基被转谷酰胺酶接近以将抗体缀合至2的最大负载。

在以下实施例中还使用了包含N297Q突变的抗-MSR1抗体H1121234N，该突变消除了Fc在该位点的N-连接糖基化。突变允许抗体在重链的295Q和297Q处缀合至4的最大负载。包含相同N297Q突变的非结合抗体用作非结合同种型对照。

实施例17-化合物3接头的细菌转谷酰胺酶缀合

mAb-3中间体-谷氨酰基修饰的mAbs

使去糖基化对照HER2和MSR1抗体以1mg/mL在PBS pH 7.4中缀合。以相对于抗体50-150倍摩尔过量添加接头3，并通过每μg抗体添加12个单位的细菌转谷氨酰胺酶(Zedira，T1001)引发反应，并在37℃下孵育4-16小时。通过旋转过滤器(Amicon，30kDa截止值)或使用Superdex 200 Increase 10/300GL柱的尺寸排阻色谱法除去过量的接头3。使用与Xevo G2-S QT质谱仪连接的Waters Acquity UPLC，通过ESI-MS分析缀合物以测定接头抗体比(LAR)。在C4柱(2.1X50mm ACQUITY UPLC BEH蛋白质C4，1.7um，300A)上以10min梯度(分钟：流动相B的百分比；0∶10％，1∶10％，5∶90％，7∶90％，7.2∶10％，10∶10％)进行色谱分离。流动相A为0.1％甲酸的水溶液，流动相B为0.1％甲酸的乙腈溶液。流速设定在0.3mL/min。检测器TOF扫描设定为m/z 500-4500，主要参数如所列(毛细管电压3.0kV、取样锥80V、源偏移在100V、源温度150℃、去溶剂化温度450草、锥气0L/hr、去溶剂化气体800L/hr)。用MassLynx软件内的Maxent函数对光谱进行去卷积。当根据强度加权时，所得分子离子相当于表3中列出的负载。尺寸排阻HPLC确定所有缀合物均＞95％单体。

实施例18-狄尔斯-阿尔德与谷氨酰基修饰的mAbs在pH＝7.2缀合：方法A

在pH 7.2-7.4的PBS和10％DMSO中以3-5mg/ml缀合mAb-3中间体。将接头-有效负载mc-VC-PABC-MMAE，Doronina，S.O.等人，Nat.Biotechnol.200321 778；mc-VA-PBD，Jeffrey，S.C.等人，Protein Conjugate Chem.2013 24 1256；mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog和mal-VC-PABQ-Rifalogue，Lehar，S.M.等人，Nature 2015 527 323-328(其各自如下所示)以相对于抗体3.5-10倍摩尔过量添加等人，Nature 2015 527 323-328(其各自在下文说明)，并在室温下孵育45-120分钟。通过蛋白质A色谱法(Pierce Protein AColumns，ThermoScientific，产品编号20356)或使用Superdex 200 Increase 10/300GL柱的尺寸排阻色谱纯化缀合物。通过LC-MS(根据实施例17中描述的方法)测定药物与抗体比。当根据强度加权时，所得分子离子相当于表3中列出的负载。尺寸排阻HPLC确定所有缀合物均＞95％单体。

实施例19-与谷氨酰基修饰的mAbs在pH＝5.5的狄尔斯-阿尔德缀合：方法B

使mAb-3中间体以4mg/mL在50mM组氨酸缓冲液pH 5.5中缀合。10％DMSO用于mc-VC-PABC-MMAE。以相对于抗体10-20倍摩尔过量添加接头-有效负载mc-VC-PABC-MMAE或Alexa Fluor

实施例20-化合物4接头的赖氨酸缀合

mAb-4中间体-随机修饰的mAb

使对照和HER2抗体以5mg/ml在50mM磷酸盐缓冲液pH 8.0中缀合。以相对于抗体2-3倍摩尔过量添加接头4(St.Amant，A.H.等人，Protein Conjugate Chem.2018 29 2406)并在室温下孵育2小时。使用旋转过滤器(Amicon，30kDa截止值)将反应混合物缓冲液交换为PBS，pH7.4。使用实施例17中描述的方法，通过ESI-MS分析缀合物以测定接头抗体比(LAR)。当根据强度加权时，所得分子离子相当于表3中列出的负载。

实施例21-与随机mAb中间体的狄尔斯-阿尔德缀合

在PBS pH 7.4和10％DMSO中以3-5mg/ml缀合mAb-4中间体。如上所示，以相对于抗体4倍摩尔过量添加有效负载(mc-VA-PBD)，在室温下孵育2小时。通过用活性炭处理除去过量的接头-有效负载，然后使用Sephadex PD10柱(GE Healthcare，产品编号17085101)脱盐。使用实施例2中所述的方法通过ESI-MS分析缀合物以测定药物抗体比(DAR)。当根据强度加权时，所得分子离子相当于表3中列出的负载。尺寸排阻HPLC确定所有缀合物均>95％单体。

表3列出了每种缀合物的载量(LAR和DAR)。转谷氨酰胺酶缀合的3产生接近2的理论值的LAR。使抗体-3二烯中间体与狄尔斯-阿尔德马来酰亚胺配偶体mc-VC-PABC-MMAE、mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog或链间二硫化物聚集倾向的mc-VA-PBD反应(Jeffrey，S.C.等人，Protein Conjugate Chem.2013 24 1256)产生具有相似值的DAR。赖氨酸缀合的二烯4产生1.2和1.8的LAR，然而，与相同马来酰亚胺的狄尔斯-阿尔德反应产生较低相对DAR的缀合物。这些结果表明，组合的转谷氨酰胺酶和狄尔斯-阿尔德缀合可以适应多种马来酰亚胺接头-有效负载，改善总体效率，并将它们位点选择性地定位在具有低水平聚集体的抗体上。

表3

*Alexa Fluor

实施例22-逐步狄尔斯-阿尔德缀合

在某些实施方案中，方法A和方法B可以在带有两个二烯的相同抗体-接头-有效负载中间体上连续进行。该策略可以用于产生携带相同有效负载或两个不同有效负载部分的抗体-有效负载缀合物。例如，通过实施例18的方法A将具有化合物27接头的抗体与mc-vc-PAB-MMAE缀合，随后通过实施例19的方法B进一步与Alexa Fluor

表4

实施例23-体外细胞毒性测定

在本实施例中，评估了各种抗体-药物缀合物和裸有效负载在体外杀伤表达抗原的肿瘤细胞的能力。.

将SKBR3(Her2+)细胞以每孔8000个细胞接种在96孔板中的完全生长培养基中并生长过夜。对于细胞活力曲线，将连续稀释的缀合物或裸有效载荷以100nM-5pM的终浓度加入细胞中并孵育3天。使用类似条件运行NCI H929和NCI H1975(HER2-)细胞作为阴性对照。为了测量活力，将细胞与CCK8(Dojindo)一起孵育最后2小时，并在Victor(Perkin Elmer)上测定450nm处的吸光度(OD

表5

/>

*PNR＝未达到坪值

实施例24-胞内金黄色葡萄球菌抗体-药物缀合物杀伤测定

为了测试ADC减少胞内金黄色葡萄球菌的能力，使本申请的利福霉素类似物与实施例1中鉴定的抗-MSR1抗体或也在实施例1中鉴定的同种型对照抗体缀合。

使THP-1单核细胞系在培养基(RMPI+10％FBS+1％青霉素/链霉素)中生长，然后以1e细胞/孔的密度接种在24孔板中，并在使用200nM PMA感染前分化成巨噬细胞3天。在实验之前，用温热培养基(不含FBS的RMPI)洗涤THP-1以除去青霉素/链霉素。使金黄色葡萄球菌NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并以1e7cfu/m重悬于PBS中。用RMPI+10％FBS中的金黄色葡萄球菌混悬液以1e6cfu/孔感染THP-1，感染复数为10∶1(金黄色葡萄球菌：巨噬细胞)。将板以300×g旋转5分钟以使细菌的粘附同步，然后在37℃下孵育2小时。通过用温热培养基(不含FBS的RMPI)洗涤两次除去自由漂浮的细菌，并通过加入含有50μg/ml庆大霉素的培养基(RMPI+10％FBS)杀灭剩余的胞外金黄色葡萄球菌。1小时后，抽吸培养基，并将指定的mAb和ADC以稀释系列一式三份添加到包含50μg/ml庆大霉素的培养基(RMPI+10％FBS)中的感染的巨噬细胞中，以防止金黄色葡萄球菌的胞外生长。稀释系列以10ug/mL开始，其中对于MSR1 ADC：MSR1-mc-VC-PABQ-Rifalogue(链间CYS)、MSR1-mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog(链间CYS)、MSR1-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(TG-DA)，按照1∶3稀释5个点(10、3.3、1.1、0.37和0.12ug/mL终浓度)。仅在最高浓度下测试MSR1 mAb、同种型对照mAb和同种型对照ADCs：同种型Cntl-mc-VC-PABQ-Rifalogue(链间CYS)、同种型Cntl-mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog(链间CYS)和同种型Cntl-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(TG-DA。还包括未处理的孔作为感染的基线。24小时后，将板用不含FBS的温热RPMI洗涤两次，然后加入50μL在PBS中的0.1％Triton X-100以裂解THP-1；裂解后，

表6：抗-MSR1 Ab-抗生素的平均菌落形成单位

如表6中所示，MSR1 mc-VC-PABQ-Rifalogue ADC、MSR1 3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(链间CYS和TG-DA)和MSR1-mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog(链间CYS)在10、3.3和1.1mg/mL的浓度下表现出体外从感染的巨噬细胞根除胞内金黄色葡萄球菌的能力，在较低浓度下活性剂量依赖性降低。用10μtg/ml的未缀合抗体(同种型对照mAb、抗-MSR1 mAb)和同种型对照ADC(链间CYS和TG-DA)处理的巨噬细胞以与未处理的对照相似的水平携带胞内金黄色葡萄球菌。这些数据表明，MSR1-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(链间CYS和TG-DA)可用于有效杀灭驻留在巨噬细胞储库内的病原体。

实施例25-胞内金黄色葡萄球菌抗体-药物缀合物杀伤测定

使本申请的利福霉素类似物与包含N297Q突变的抗-MSR1抗体H1121234N缀合，这种突变消除了该位点处Fc的N-连接糖基化，也用于实施例1中，以测试ADC减少胞内金黄色葡萄球菌的能力。突变允许抗体在重链的295Q和297Q处缀合至4的最大负载。包含相同N297Q突变的非结合抗体用作非结合同种型对照抗体，也用于实施例1中。

使THP-1单核细胞系在培养基(RMPI+10％FBS+1％青霉素/链霉素)中生长，然后以1e5细胞/孔的密度接种在48孔板中，并在使用200nM PMA感染前分化成巨噬细胞3天。在实验之前，用温热培养基(不含FBS的RMPI)洗涤THP-1以除去青霉素/链霉素。使金黄色葡萄球菌NRS384的过夜培养物在RPMI中生长，用PBS洗涤两次，并以1e7 cfu/mL重悬于PBS中。用RMPI+10％FBS中的金黄色葡萄球菌混悬液以1e6 cfu/孔感染THP-1，感染复数为10∶1(金黄色葡萄球菌∶巨噬细胞)。将板以300×g旋转5分钟以使细菌的粘附同步，然后在37℃下孵育2小时。通过用温热培养基(不含FBS的RMPI)洗涤两次除去自由漂浮的细菌，并通过加入包含50μg/ml庆大霉素的培养基(RMPI+10％FBS)杀灭剩余的胞外金黄色葡萄球菌。1小时后，抽吸培养基，并将指定的mAb和ADC以稀释系列一式两份添加到包含50μg/ml庆大霉素的培养基(RMPI+10％FBS)中的感染的巨噬细胞中，以防止金黄色葡萄球菌的胞外生长。稀释系列以30μg/mL开始，其中对于MSR1 ADC(TG-DA)：MSR1-3-mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog和MSR1-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue，按照1∶3稀释6个点(30、10、3.3、1.1、0.37和0.12μg/mL终浓度)。仅在最高浓度下测试对照ADC(通过本申请转谷氨酰胺酶-狄尔斯-阿尔德(“TG-DA”)方法制备)：同种型Cntl-3-mc-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog、同种型Cntrl-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue和未缀合的抗体。还包括未处理的孔作为感染的基线。24小时后，将板用不含FBS的温热RPMI洗涤两次，然后加入50μL在PBS中的0.1％Triton X-100以裂解THP-1；裂解后，向每个孔中加入450μL PBS。通过在PBS中连续稀释并铺板到胰蛋白酶大豆琼脂平板上，根据菌落形成单位计数金黄色葡萄球菌存活量。将结果概括在表7中。

表7：抗-MSR1 Ab-抗生素的平均菌落形成单位

如表7中所示，MSR1-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(TG-DA)和MSR1-3-mc-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog(TG-DA)表现出在体外从感染的巨噬细胞减少胞内金黄色葡萄球菌的能力，在较低浓度下活性剂量依赖性降低，在最高浓度下细菌负荷减少3-4个对数。用30μg/ml的对照mAbs处理的巨噬细胞以与未处理的对照相似的水平携带胞内金黄色葡萄球菌，并且与未处理的对照相比，ADC同种型Cntl-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(TG-DA)和同种型Cntl-3-mal-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog使胞内金黄色葡萄球菌减少约1log。这些数据表明，抗-MSR1ADC、MSR1-3-mc-VC-PABQ-Rifalogue(TG-DA)和MSR1-3-mc-PEG8-VC-PABQ-Rifanalog(TG-DA)可以用于有效杀灭驻留在巨噬细胞储库内的病原体。

由于在不脱离本申请的范围和精神的情况下，可以对上述主题进行各种改变，所以旨在将包含在上述描述中或在所附权利要求中限定的所有主题解释为对本申请的描述和示例明。根据上述教导，本申请的许多变型和改变是可能的。因此，本说明书旨在涵盖落入所附权利要求的范围内的所有这些替代、变型和改变。

本文引用的所有专利、申请、出版物、测试方法、文献和其他材料均通过引用整体并入本文，如同实质上理存在于本说明书中一样。

序列表

<110>瑞泽恩制药公司

<120>狄尔斯-阿尔德缀合方法

<130>250298.000130

<160>466

<170>PatentIn 版本3.5

<210>1

<211>363

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>1

caggtccaat tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtg60

tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tacactgggt gcgccaggtt 120

cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagagggtga aacaatcttc 180

gcacaggagt tccgggacag agtcaccttg accgaggaca catctccaga cacagcctac 240

atggagttga gcagcctgaa atctgaggac gcggccgtat attactgtac aaccccccga 300

tattgtaata atggtatatg ttatgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctct 360

tca 363

<210>2

<211>121

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>2

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 1015

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

202530

Ser Ile His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr Ile Phe Ala Gln Glu Phe

505560

Arg Asp Arg Val Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Pro Asp Thr Ala Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys

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Thr Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>3

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<212>DNA

<213>人工序列

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<212>PRT

<213>人工序列

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<400>5

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<211>8

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1 5

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<220>

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<210>8

<211>14

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<220>

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<211>327

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>9

gacatccaga tgacccagtc gccttcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatact gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tcttcaaact 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag agttacagta attttccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaacga 327

<210>10

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>10

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Asn Phe Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210>11

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>11

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>12

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<212>DNA

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<223>合成的

<400>13

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>14

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1

<210>15

<211>30

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

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<220>

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<400>16

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tgtgcagcct ctggattcac cttcagtgac cactacatgg actgggtccg tcaggctcct 120

gggaaggggc tggagtgggt tggccgaacc agaaacaaag ctaatagtca caccacagaa 180

tacgccgcgt ctgtgagtgg cagattcacc atctcaagag atgattcaaa gaactcattg 240

tatctgcaaa tgaacagcct gaaaaccgag gacacggccg tgtattattg cactagagcc 300

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Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr

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65707580

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

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<212>DNA

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atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaacga 327

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

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Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

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Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

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ccagggaagg ggctggaatg ggttggccgt actcgaaaca aagctaatag tcacaccaca 180

gaatacaccg cgtctgtgac aggcagattc accatctcaa gagatgattc aagaaactca 240

ctatatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtatatta ctgtgttaga 300

gccggtataa ttggaaccct ctttgactat tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His

202530

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Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser His Thr Thr Glu Tyr Thr Ala

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atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctttttaa attggtttca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagttcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

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<220>

<223>合成的

<400>49

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc60

acctgcactg tcactggtgg ctccatcagt aggaactact ggagttggat ccggcagccc 120

ccagggaagg gactggaatg gattggatat atctattaca gtgggagtat cgactacaat 180

ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240

aagctgagtt ctatgaccgc tgcggacacg gccgtatact actgtgcgag agatcggtgg 300

aactggaaat acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcatcgt ctcgtca357

<210>50

<211>119

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>50

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn

202530

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65707580

Lys Leu Ser Ser Met Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

859095

Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Ile Val Ser Ser

115

<210>51

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>51

ggtggctcca tcagtaggaa ctac 24

<210>52

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>52

Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn Tyr

1 5

<210>53

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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atctattaca gtgggagtat c21

<210>54

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>54

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile

1 5

<210>55

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>55

gcgagagatc ggtggaactg gaaatacggt atggacgtc 39

<210>56

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>56

Ala Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210>57

<211>327

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>57

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc60

ctctcctgca gggccagtca gactgttaga aacaactact tagcctggta ccaccagaaa 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

cctgaagatt ttacagtgta ttactgtcac cagtatggta actcaccttg gacgttcggc 300

caagggacca aaatggaaat caaacga 327

<210>58

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>58

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Arg Asn Asn

202530

Tyr Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

354045

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

505560

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65707580

Pro Glu Asp Phe Thr Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Gly Asn Ser Pro

859095

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Met Glu Ile Lys Arg

100 105

<210>59

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>59

cagactgtta gaaacaacta c21

<210>60

<211>7

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>60

Gln Thr Val Arg Asn Asn Tyr

1 5

<210>61

<211>9

<212>DNA

<213>人工序列

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<223>合成的

<400>61

ggtgcatcc 9

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<211>3

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Gly Ala Ser

1

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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caccagtatg gtaactcacc ttggacg27

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<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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His Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Trp Thr

1 5

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<212>DNA

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<220>

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggagggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gaccactaca tggactgggt ccgccaggct 120

cctgggaagg ggctggagtg ggttggccga actagaaaca aagctaatag ttacaccaca 180

gaatacgccg cgtctgtgag tggcagattc accatctcaa gagatgattc aaagaactca 240

ttatatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacgg ccgtgtatta ttgcactaga 300

gccggtataa ttggaaccct ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360

tca 363

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>66

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His

202530

Tyr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Gly Arg Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr Glu Tyr Ala Ala

505560

Ser Val Ser Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65707580

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

859095

Tyr Cys Thr Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

<212>DNA

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<223>合成的

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ggattcacct tcagtgacca ctac 24

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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<400>68

Gly Phe Thr Phe Ser Asp His Tyr

1 5

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<211>30

<212>DNA

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<223>合成的

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<212>PRT

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<220>

<223>合成的

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Thr Arg Asn Lys Ala Asn Ser Tyr Thr Thr

1 5 10

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<212>DNA

<213>人工序列

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<223>合成的

<400>71

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>72

Thr Arg Ala Gly Ile Ile Gly Thr Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

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<211>327

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>73

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca gatcattggt agatatttaa attggtttca gcagaaacca 120

gggaaagtcc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaacgtgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacaata cccctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaacga 327

<210>74

<211>109

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>74

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ile Ile Gly Arg Tyr

202530

Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

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<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

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<223>合成的

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<211>6

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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<213>人工序列

<220>

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Ala Ala Ser

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<212>DNA

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<220>

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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Gln Gln Ser Tyr Asn Thr Pro Pro Ile Thr

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<212>DNA

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<223>合成的

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caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgagggagc ctggggcctc agtgaagctc60

tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tccactgggt gcgacaggct 120

cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagagggtga aacagtctac 180

gcacagaagt tccggggcag agtcaccctg accgaggaca taagtccaga cacggcctac 240

atggagctga gcagcctgac ctctgaggac acggccgtat attattgtgc aaccccccgc 300

tattgtaata atggtatatg ttatgactac tggggccagg gaaccctaat caccgtctcc 360

tca 363

<210>82

<211>121

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>82

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Arg Glu Pro Gly Ala

1 5 1015

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

202530

Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr Val Tyr Ala Gln Lys Phe

505560

Arg Gly Arg Val Thr Leu Thr Glu Asp Ile Ser Pro Asp Thr Ala Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Ile Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

<212>DNA

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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1 5

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<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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tttgatcctg aagagggtga aaca 24

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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Phe Asp Pro Glu Glu Gly Glu Thr

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>88

Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr

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<211>324

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>89

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaa324

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210>91

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>91

cagagcatta gcagctat18

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<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

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<223>合成的

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gctgcatcc 9

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Ala Ala Ser

1

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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caacagagtt acagtacccc tccgatcacc 30

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<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>96

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr

1 5 10

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<211>363

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>97

gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt aattatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggacgg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtagtaa cacatactac 180

acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa catgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcctcat attactgtgc gaaagatcgt 300

tttactacag tggggaactg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360

tca 363

<210>98

<211>121

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>98

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

202530

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Thr Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Thr Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Met Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Arg Phe Thr Thr Val Gly Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>99

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>99

ggattcacct ttagtaatta tgcc 24

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala

1 5

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<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>101

attagtggtc gtggtagtaa caca 24

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>102

Ile Ser Gly Arg Gly Ser Asn Thr

1 5

<210>103

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>103

gcgaaagatc gttttactac agtggggaac tggttcgacc cc 42

<210>104

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>104

Ala Lys Asp Arg Phe Thr Thr Val Gly Asn Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210>105

<211>327

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>105

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca gagtattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcgtccagtt tgcaaaatgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta gtcttccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggatat taaacga 327

<210>106

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>106

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Leu Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys Arg

100 105

<210>107

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>107

cagagtatta gcagctat18

<210>108

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>108

Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

<210>109

<211>9

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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gctgcgtcc 9

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<211>3

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>110

Ala Ala Ser

1

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<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>111

caacagagtt acagtagtct tccgatcacc 30

<210>112

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>112

Gln Gln Ser Tyr Ser Ser Leu Pro Ile Thr

1 5 10

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>113

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc60

acctgcactg tcactggtgg ctccatcagt aggaactact ggagttggat ccggcagccc 120

ccagggaagg gactggaatg gattggatat atctattaca gtgggagtat caactacaat 180

ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtggacatgt ctaagaacca gttctcccta 240

aagctgaatt ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtact actgtgcgag agatcgatgg 300

aactggaaat acggtatgga cgtctggggc caagggacca cggtcatcgt ctcgtca357

<210>114

<211>119

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>114

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn

202530

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Met Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65707580

Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

859095

Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Thr Val Ile Val Ser Ser

115

<210>115

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Gly Gly Ser Ile Ser Arg Asn Tyr

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Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ile

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Ala Arg Asp Arg Trp Asn Trp Lys Tyr Gly Met Asp Val

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gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc60

ctctcctgca gggccagtca gactgttaga aacagctact tagcctggta ccaccagaaa 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Arg Asn Ser

202530

Tyr Leu Ala Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

354045

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

505560

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65707580

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Tyr

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Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Met Glu Ile Lys Arg

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cctggaaaag gacttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagatggtga aacaatctac 180

gcacagaagt tccggggcag agtcaccatg accgaggaca tatctccaga cacagcctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggccgtat attactgtgc aaccccccgc 300

tattgtaata atggtatatg ttatgactat tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu

202530

Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe

505560

Arg Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Ile Ser Pro Asp Thr Ala Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Thr Pro Arg Tyr Cys Asn Asn Gly Ile Cys Tyr Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctatgctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

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gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaacga 327

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Met Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Thr

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

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tcctgtgcag cctctggatt catttttagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120

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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Asp Tyr

202530

Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Thr Thr Ile Tyr Gly Asp Ser Val Lys

505560

Gly Arg Phe Thr Met Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65707580

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

859095

Arg Asn Tyr Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

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gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc aggcgagtca ggacattagc aaatatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctactat acatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180

aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Tyr Thr Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gln Ser Asp Tyr Leu Pro Phe

859095

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg

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acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc cgtattagtt actactgggg ctggatccgc 120

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tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgtgagatat 300

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Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Arg Ile

202530

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

354045

Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Asp Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

505560

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65707580

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

859095

Cys Val Arg Tyr Ser Ser Ser Ser Ala Phe Ala Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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gtgagatata gcagttcgtc cgccttcgct tttgactac 39

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Val Arg Tyr Ser Ser Ser Ser Ala Phe Ala Phe Asp Tyr

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gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agttggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccattcac tttcggccct 300

gggaccaaag tggatatcaa acga324

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

202530

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Phe

859095

Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg

100 105

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cagggtatta gcagttgg18

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gctgcatcc 9

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Ala Ala Ser

1

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<211>27

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<400>175

caacaggcta acagtttccc attcact27

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cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtactt actactgggg ctggatccgc 120

cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtttct attatagtgg gagcacctac 180

tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag gcacgtccaa gaaccagttc 240

tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tttatttctg tgcgagaggg 300

gggctcctgg ggagaccttt tgttatctgg ggccaaggga caatggtcac cgtctcttca 360

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Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser

202530

Thr Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu

354045

Trp Ile Gly Ser Phe Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser

505560

Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Gly Thr Ser Lys Asn Gln Phe

65707580

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Phe

859095

Cys Ala Arg Gly Gly Leu Leu Gly Arg Pro Phe Val Ile Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>30

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>179

ggtggctcca tcagcagtag tacttactac 30

<210>180

<211>10

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<213>人工序列

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Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Thr Tyr Tyr

1 5 10

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<211>21

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>181

ttctattata gtgggagcac c21

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<211>7

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>182

Phe Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

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<211>36

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>183

gcgagagggg ggctcctggg gagacctttt gttatc36

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<211>12

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<223>合成的

<400>184

Ala Arg Gly Gly Leu Leu Gly Arg Pro Phe Val Ile

1 5 10

<210>185

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>185

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300

gggaccaagg tggagatcaa acga324

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<220>

<223>合成的

<400>186

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp

202530

Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu

859095

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

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<211>18

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<400>187

cagggcatta gaaatgat18

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<211>6

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Gln Gly Ile Arg Asn Asp

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gctgcatcc 9

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<223>合成的

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Ala Ala Ser

1

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<223>合成的

<400>191

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>192

Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

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<400>193

gaggtgcagc tggtggagtc taggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacttttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacattctac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacggtatat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagccctc 300

gtattgcgat ttttggagtg gttaggggac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca366

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<211>122

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<220>

<223>合成的

<400>194

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Arg Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Ala Leu Val Leu Arg Phe Leu Glu Trp Leu Gly Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>195

<211>24

<212>DNA

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<211>8

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<220>

<223>合成的

<400>198

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr

1 5

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Ala Lys Ala Leu Val Leu Arg Phe Leu Glu Trp Leu Gly Asp Tyr

1 5 1015

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<211>321

<212>DNA

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<223>合成的

<400>201

gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgtc gggccagtca gagtattagt agctggttgg cctggtttca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gatgattttg caacttatta ctgtcaacag tataaaagtt attggacgtt cggccaaggg 300

accaaggtgg aaatcaaacg a 321

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

202530

Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Lys Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Lys Ser Tyr Trp Thr

859095

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

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Gln Ser Ile Ser Ser Trp

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Lys Ala Ser

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaagt attagtggta gtggtgatag cacattctac 180

acagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca tttccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcgt 300

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<223>合成的

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Phe Tyr Thr Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ile Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Asp Leu Ile Ser Pro Phe His

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

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ggattcacct ttagcagcta tgcc 24

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<220>

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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

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<211>24

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<400>214

Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr

1 5

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<212>DNA

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<223>合成的

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<220>

<223>合成的

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Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Asp Leu Ile Ser Pro Phe His

1 5 1015

Tyr

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<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>217

gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aacatctact tagcctggta ccagcagaaa 120

cctgcccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

gacaggttta gtgtcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcacctcg gacgttcggc 300

caagggacca aggtggaaat caaacga 327

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<223>合成的

<400>218

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Ile

202530

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Ala Gln Ala Pro Arg Leu Leu

354045

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

505560

Val Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65707580

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

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Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

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<211>21

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Gly Ala Ser

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<211>9

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Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Arg Thr

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<223>合成的

<400>225

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtacag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggaatg ggtctcagct attagtggga ctggtagtag tacatacttc 180

acagactccg tgaagggccg gttcgccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatgga 300

gagtggctct ctacggtgac cctttttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360

tcctca366

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<220>

<223>合成的

<400>226

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ala Ile Ser Gly Thr Gly Ser Ser Thr Tyr Phe Thr Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Ala Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Gly Glu Trp Leu Ser Thr Val Thr Leu Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

<212>DNA

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<400>227

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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

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<211>24

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>229

attagtggga ctggtagtag taca 24

<210>230

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>230

Ile Ser Gly Thr Gly Ser Ser Thr

1 5

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<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>231

gcgaaagatg gagagtggct ctctacggtg accctttttg actac45

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<211>15

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Ala Lys Asp Gly Glu Trp Leu Ser Thr Val Thr Leu Phe Asp Tyr

1 5 1015

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<211>330

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>233

gaaattgtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120

ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240

gaagattttg cactttatta ctgtcagcag tattttatct ggcctccgca tcccactttc 300

ggccctggga ccaaagtgga tatcaaacga330

<210>234

<211>110

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>234

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn

202530

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

354045

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser

65707580

Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Phe Ile Trp Pro Pro

859095

His Pro Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg

100 105 110

<210>235

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>235

cagagtgtta gcagcaac18

<210>236

<211>6

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>236

Gln Ser Val Ser Ser Asn

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<220>

<223>合成的

<400>237

ggtgcatcc 9

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>238

Gly Ala Ser

1

<210>239

<211>33

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>239

cagcagtatt ttatctggcc tccgcatccc act 33

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<211>11

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>240

Gln Gln Tyr Phe Ile Trp Pro Pro His Pro Thr

1 5 10

<210>241

<211>363

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>241

caggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt tactatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa aaaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatctg 300

acagtagact tctactacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360

tca 363

<210>242

<211>121

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>242

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr

202530

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Leu Thr Val Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>243

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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ggattcacct tcagttacta tggc 24

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>244

Gly Phe Thr Phe Ser Tyr Tyr Gly

1 5

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<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

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<400>245

atatcatatg atggaagtaa aaaa 24

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Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Lys Lys

1 5

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<223>合成的

<400>247

gcgaaagatc tgacagtaga cttctactac ggtatggacg tc 42

<210>248

<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>248

Ala Lys Asp Leu Thr Val Asp Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val

1 5 10

<210>249

<211>324

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>249

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct acatccagtt tgcaaagtgg ggccccatca 180

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gaagattttg caacttactt ttgtcaacag gctaacagtt tcccatacac ttttggccag 300

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<210>250

<211>108

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>250

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

202530

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Ala Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr

859095

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

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<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>251

cagggtatta gcagctgg18

<210>252

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Gln Gly Ile Ser Ser Trp

1 5

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<220>

<223>合成的

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Ala Thr Ser

1

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<223>合成的

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Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Tyr Thr

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>257

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc60

acctgcactg tctctgatgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120

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<212>PRT

<213>人工序列

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<223>合成的

<400>258

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Asp Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Phe Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Met Ser Gln Phe Ser Leu

65707580

Lys Leu Arg Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

859095

Arg Gly Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

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Asp Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr

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<223>合成的

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Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr

1 5

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<211>24

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

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gcgcgtggga gcccctttga ctac 24

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Ala Arg Gly Ser Pro Phe Asp Tyr

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcaaaga 120

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

202530

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Ser Leu Leu

354045

Ile Ser Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

505560

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Arg Leu Glu

65707580

Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

859095

Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

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<211>21

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Gly Ala Ser

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<220>

<223>合成的

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Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Thr

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<212>DNA

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<223>合成的

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacgttcagt aactatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg gactggaata tgtttcagct attagtagta atgggggtag tacatattat 180

gcagactctg tgaagggcag aatcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

cttcaaatgg gcagcctgag agctgaggat atggctgtgt attactgtgc gagagggcga 300

ccgtactact actacttcgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360

tca 363

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<211>121

<212>PRT

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<400>274

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

202530

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val

354045

Ser Ala Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Ile Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Gly Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Gly Arg Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

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<223>合成的

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<220>

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Ile Ser Ser Asn Gly Gly Ser Thr

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<223>合成的

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<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Ala Arg Gly Arg Pro Tyr Tyr Tyr Tyr Phe Gly Met Asp Val

1 5 10

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<211>339

<212>DNA

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<223>合成的

<400>281

gatattgtga tgactcagac tccagtctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc60

atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg 120

tttcagcaga ggccgggcca gcctccaaga ctcctaattt ataagatttc taaccggttc 180

tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 240

agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tattactgca tgcaagctac acaatttcct 300

ctcaatttcg gcggagggac caaggtggag atcaaacga339

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Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly

1 5 1015

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser

202530

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro

354045

Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Lys Ile Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

505560

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65707580

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala

859095

Thr Gln Phe Pro Leu Asn Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

Arg

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<212>DNA

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<223>合成的

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<211>11

<212>PRT

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<220>

<223>合成的

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Gln Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr

1 5 10

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<212>DNA

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<223>合成的

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Lys Ile Ser

1

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<211>27

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<220>

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Met Gln Ala Thr Gln Phe Pro Leu Asn

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<223>合成的

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagg acctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctagactg ggtctcagct attactggtg atggtggtaa tacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatt tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccatct attactgtgc gaaagatcag 300

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr

202530

Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val

354045

Ser Ala Ile Thr Gly Asp Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Gln Arg Phe Ser Phe Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

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Ile Thr Gly Asp Gly Gly Asn Thr

1 5

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<211>15

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<213>人工序列

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Ala Lys Asp Gln Arg Phe Ser Phe Ala Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr

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<220>

<223>合成的

<400>297

gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc agctggttag cctggtatca gcagaaacca 120

gggaacgccc ctaagctcct gatctatgct gcattcagtt tgcaaagtgg ggtcccgtca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacaatt tcccgtggac gttcggccaa 300

gggaccaagg tggaaatcaa acga324

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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly

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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp

202530

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Phe Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Trp

859095

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

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<211>18

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<223>合成的

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cagggtatta gcagctgg18

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Gln Gly Ile Ser Ser Trp

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Ala Ala Phe

1

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<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>303

caacaggcta acaatttccc gtggacg27

<210>304

<211>9

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>304

Gln Gln Ala Asn Asn Phe Pro Trp Thr

1 5

<210>305

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<212>DNA

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<220>

<223>合成的

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caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactatgaca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg gatggcagtt atatcatatg atggaattaa taaatattat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaaggtact 300

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<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

202530

Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

354045

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Gly Thr Tyr Ser Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp

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Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys

1 5

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<212>DNA

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<212>PRT

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<220>

<223>合成的

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Ala Lys Gly Thr Tyr Ser Trp Tyr Phe Asp Leu

1 5 10

<210>313

<211>324

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>313

gacatccaga tgacccagtc tccttccacc ctgtctacat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggccagtca gactattagt agctggttgg cctggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctcgtt tagaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240

gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attcgtggac gttcggccaa 300

gggaccaagg tggaaatcaa acga324

<210>314

<211>108

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>314

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Thr Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Ser Ser Trp

202530

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Lys Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp

859095

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210>315

<211>18

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Gln Thr Ile Ser Ser Trp

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Lys Ala Ser

1

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caacagtata atagttattc gtggacg27

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<211>9

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<220>

<223>合成的

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Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Ser Trp Thr

1 5

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<223>合成的

<400>321

gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gcttatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120

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<211>122

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<220>

<223>合成的

<400>322

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Ala Tyr

202530

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Glu Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Lys Ile Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

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Ala Lys Asp Lys Ile Leu Glu Leu Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val

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<212>DNA

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<223>合成的

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgttcag cctctggatt cacctttaac atctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attcaaagaa cacgctgtat 240

ttccaaatga atagcctgag agtcgaggac acggccgtat attactgtgc gaaaaaaata 300

agcagctcgt cctactacta ctacgctatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ser Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ile Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Phe Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Lys Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

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Gly Phe Thr Phe Asn Ile Tyr Ala

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Ala Lys Lys Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val

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caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc60

tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agatatgata tcagctgggt gcgacaggcc 120

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gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag tacagtctac 240

atggagctga gcagtctgag atctgaagac acggccgtgt attattgtgc gagaggaggt 300

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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 1015

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr

202530

Asp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ser Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

505560

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

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Ala Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg aactggagtg ggtctcatct attagtggtc gtggtggtag cacatactac 180

gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagat cacgctgtat 240

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ser Ile Ser Gly Arg Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Ile Val Phe Arg Tyr Thr Ser Ser Ala Tyr Trp Tyr Phe

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Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatggca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtt attagtggta gtggtggtag cacatactac 180

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

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Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr

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<211>18

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Ala Lys Asp Arg Trp Thr Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Ser Pro Phe

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Asp Tyr

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gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc60

ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagctact tagcctggta ccagcagaaa 120

cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180

gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240

cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccttg gacgttcggc 300

caagggacca aggtggaaat caaa324

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<211>108

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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 1015

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser

202530

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

354045

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

505560

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65707580

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro

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<211>9

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Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr

1 5

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<211>363

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<220>

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc tttgtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacttttagc agttatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120

ccaggtaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta ctggtagtaa cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgttt actactgtgc gaaagatcgc 300

gtgactacag taacctacta ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360

tca 363

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<220>

<223>合成的

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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Phe Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ala Ile Ser Gly Thr Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Arg Val Thr Thr Val Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>372

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>377

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggttt cacctttagc agctatgcca tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgatag cacatactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaggac cacgctgtct 240

ctgcaattga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300

ctactatggt tcggggaatt aggatcccca tttcactact ggggccaggg aaccctggtc 360

accgtctcct ca 372

<210>378

<211>124

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>378

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Thr Thr Leu Ser

65707580

Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Glu Leu Gly Ser Pro Phe His

100 105 110

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>379

<211>24

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>379

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>380

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

<210>381

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>381

attagtggta gtggtgatag caca 24

<210>382

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>382

Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr

1 5

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<211>51

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>383

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<210>384

<211>17

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>384

Ala Lys Asp Arg Leu Leu Trp Phe Gly Glu Leu Gly Ser Pro Phe His

1 5 1015

Tyr

<210>385

<211>363

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>385

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagtc attagtggta gtggtggtta cacaaactac 180

gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga accgcctgag agccgaggac tcggccgttt attactgtgc gaggcataat 300

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tca 363

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<211>121

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>386

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Val Ile Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Arg His Asn Trp Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>387

<211>24

<212>DNA

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<400>387

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<211>8

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>388

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala

1 5

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<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>389

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<211>8

<212>PRT

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<220>

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<400>390

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1 5

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<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>391

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<211>14

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>392

Ala Arg His Asn Trp Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val

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<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>393

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagt ctgggaggtc cctgagactc60

tcctgtgcag ccgctggatt caccttcagt aattatggca tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcactt atgtcatttg atggaagtga taaatactat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctctgt attactgtgc gaaaggatac 300

gatttttgga gtggttattg ggactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360

<210>394

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>394

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Ser Gly Arg

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ala Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

202530

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ala Leu Met Ser Phe Asp Gly Ser Asp Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Gly Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Trp Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>395

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

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<220>

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<400>396

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1 5

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<211>24

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<220>

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<400>397

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<213>人工序列

<220>

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<400>398

Met Ser Phe Asp Gly Ser Asp Lys

1 5

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<211>39

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>399

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<210>400

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>400

Ala Lys Gly Tyr Asp Phe Trp Ser Gly Tyr Trp Asp Tyr

1 5 10

<210>401

<211>351

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>401

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggcttgagtg ggtctcaact attagtggtc gttctgatat tacatacttc 180

gcagactccg tgaagggccg gtttaccgtc tccagagaca attccaagac cacgctatat 240

ctccaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gacagatgac 300

gacctgcccc ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a351

<210>402

<211>117

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>402

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr

202530

Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Thr Ile Ser Gly Arg Ser Asp Ile Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Thr Asp Asp Asp Leu Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

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<211>24

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<220>

<223>合成的

<400>403

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<220>

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<220>

<223>合成的

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<220>

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<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>407

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<211>10

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>408

Ala Thr Asp Asp Asp Leu Pro Leu Asp Tyr

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<211>354

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

<400>409

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tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agatatactt tcagctgggt gcgacaggcc 120

cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttggtac aacaaactac 180

gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accacggacg aatccacgag cacagtctac 240

atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attattgtac cagaggaggt 300

cgatatggct ggttcgaccc ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354

<210>410

<211>118

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>410

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Thr Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 1015

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Arg Tyr

202530

Thr Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

354045

Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

505560

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Thr Asp Glu Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65707580

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Thr Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

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<211>24

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<223>合成的

<400>411

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<220>

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<220>

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<220>

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Thr Arg Gly Gly Arg Tyr Gly Trp Phe Asp Pro

1 5 10

<210>417

<211>403

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<220>

<221>misc_feature

<223>His-myc tagged human MSR1 antibody (extracellular domain)

<400>417

His His His His His His Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 1015

Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Lys Trp Glu Thr

202530

Lys Asn Cys Ser Val Ser Ser Thr Asn Ala Asn Asp Ile Thr Gln Ser

354045

Leu Thr Gly Lys Gly Asn Asp Ser Glu Glu Glu Met Arg Phe Gln Glu

505560

Val Phe Met Glu His Met Ser Asn Met Glu Lys Arg Ile Gln His Ile

65707580

Leu Asp Met Glu Ala Asn Leu Met Asp Thr Glu His Phe Gln Asn Phe

859095

Ser Met Thr Thr Asp Gln Arg Phe Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Ser

100 105 110

Thr Leu Phe Ser Ser Val Gln Gly His Gly Asn Ala Ile Asp Glu Ile

115 120 125

Ser Lys Ser Leu Ile Ser Leu Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Gln Leu

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Lys Asp Trp Glu His Ser Gln Thr Leu Arg Asn Ile Thr Leu Ile Gln

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Cys Thr Leu

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<211>403

<212>PRT

<213>Macaca fascicularis

<220>

<221>misc_feature

<223>His-myc tagged monkey MSR1 antibody (extracellular domain)

<400>418

His His His His His His Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu

1 5 1015

Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Lys Trp Glu Thr

202530

Lys Asn Cys Ser Ile Gly Ser Thr Asn Ala Asp Asp Ile Thr Gln Ser

354045

Leu Thr Gly Lys Gly Asn Asp Ser Glu Ala Glu Thr Arg Phe Gln Glu

505560

Val Phe Met Glu His Met Ser Asn Met Glu Lys Arg Ile Gln His Ile

65707580

Ser Asp Met Glu Ala Asn Leu Ile Asp Ala Glu His Phe Gln Asn Phe

859095

Ser Met Thr Thr Asp Gln Arg Phe Asn Asp Ile Leu Leu Gln Leu Ser

100 105 110

Thr Leu Phe Ser Ser Val Gln Gly His Gly Asn Thr Ile Asp Glu Ile

115 120 125

Ser Lys Ser Leu Ile Ser Leu Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Gln Leu

130 135 140

Asn Ile Glu Lys Leu Asn Gly Lys Ile Gln Glu Lys Thr Phe Lys Gln

145 150 155 160

Gln Glu Glu Ile Ser Lys Leu Glu Glu His Val Tyr Asn Val Ser Ala

165 170 175

Glu Ile Met Ala Met Lys Glu Glu Gln Val His Leu Glu Gln Glu Ile

180 185 190

Lys Gly Glu Val Lys Val Leu Asn Asn Ile Thr Asn Asp Leu Arg Leu

195 200 205

Lys Asp Trp Glu His Ser Gln Thr Leu Arg Asn Ile Thr Leu Ile Gln

210 215 220

Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Glu Lys Gly Asp Arg Gly Pro Thr Gly

225 230 235 240

Glu Ser Gly Pro Arg Gly Phe Pro Gly Pro Val Gly Pro Pro Gly Leu

245 250 255

Lys Gly Asp Arg Gly Ala Ile Gly Phe Pro Gly Ser Arg Gly Leu Pro

260 265 270

Gly Tyr Ala Gly Arg Pro Gly Asn Ser Gly Pro Lys Gly Gln Lys Gly

275 280 285

Glu Lys Gly Ser Gly Asn Thr Leu Thr Ser Phe Lys Lys Val Arg Leu

290 295 300

Val Gly Gly Ser Gly Pro His Glu Gly Arg Val Glu Ile Leu His Ser

305 310 315 320

Gly Gln Trp Gly Thr Ile Cys Asp Asp Arg Trp Glu Val Arg Val Gly

325 330 335

Gln Val Ile Cys Arg Ser Leu Gly Tyr Pro Gly Val Gln Ala Val His

340 345 350

Lys Ala Ala His Phe Gly Gln Gly Thr Gly Pro Ile Trp Leu Asn Glu

355 360 365

Val Tyr Cys Phe Gly Arg Glu Ser Ser Ile Glu Glu Cys Lys Ile Arg

370 375 380

Gln Trp Gly Thr Arg Thr Cys Ser His Ser Glu Asp Ala Gly Val Thr

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Cys Thr Leu

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<211>360

<212>DNA

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<220>

<223>合成的

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gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtcaagc cgggggggtc cctgagactc60

tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agatatagta tgaactgggt ccgccaggct 120

ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagcagta gcagtagtta catatactac 180

ggagacacag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa gtcactgtat 240

ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtct attactgtgt gagagatcga 300

ggacagctcg tcctctactt tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360

<210>420

<211>120

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>420

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr

202530

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Gly Asp Thr Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Ser Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Val Arg Asp Arg Gly Gln Leu Val Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210>421

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>421

ggattcactt tcagtagata tagt 24

<210>422

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>422

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Ser

1 5

<210>423

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>423

attagcagta gcagtagtta cata 24

<210>424

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>424

Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile

1 5

<210>425

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>425

gtgagagatc gaggacagct cgtcctctac tttgactac 39

<210>426

<211>13

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>426

Val Arg Asp Arg Gly Gln Leu Val Leu Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210>427

<211>324

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>427

gacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctgtctacat ctataagaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtct gagcattagc agctttttaa attggtttca gcagagacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctatgtt gcatccaatt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

agattcagtg acagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag aattacagta cccctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaa324

<210>428

<211>108

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>428

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Thr Ser Ile Arg

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Leu Ser Ile Ser Ser Phe

202530

Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Val Ala Ser Asn Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Asp

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Tyr Ser Thr Pro Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210>429

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>429

ctgagcatta gcagcttt18

<210>430

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>430

Leu Ser Ile Ser Ser Phe

1 5

<210>431

<211>9

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>431

gttgcatcc 9

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<211>3

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>432

Val Ala Ser

1

<210>433

<211>30

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>433

caacagaatt acagtacccc tccgatcacc 30

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<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>434

Gln Gln Asn Tyr Ser Thr Pro Pro Ile Thr

1 5 10

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<211>369

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>435

caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc60

tcctgtgcgg gctctggatt caccttcagt agctatggct tgcactgggt ccgccaggct 120

ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatattat 180

gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240

ctgcaaatga gcagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatcga 300

cttgtacgat attctgactg gccattcttt gactattggg gccagggaac cctggtcacc 360

gtctcctca 369

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<211>123

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>436

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 1015

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

202530

Gly Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

354045

Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

505560

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65707580

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

859095

Ala Lys Asp Arg Leu Val Arg Tyr Ser Asp Trp Pro Phe Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

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<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>437

ggattcacct tcagtagcta tggc 24

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>438

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly

1 5

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<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>439

atatcatatg atggaagtaa taaa 24

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<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>440

Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>441

gcgaaagatc gacttgtacg atattctgac tggccattct ttgactat 48

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<211>16

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>442

Ala Lys Asp Arg Leu Val Arg Tyr Ser Asp Trp Pro Phe Phe Asp Tyr

1 5 1015

<210>443

<211>324

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>443

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca aaacattacc agctatttga attgctatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcatccagtt tgyaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agtttcagta gtcctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taca324

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<220>

<221>misc_feature

<222>(55)..(55)

<223>Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400>444

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Thr Ser Tyr

202530

Leu Asn Cys Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Xaa Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Phe Ser Ser Pro Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Thr

100 105

<210>445

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>445

caaaacatta ccagctat18

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>446

Gln Asn Ile Thr Ser Tyr

1 5

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<212>DNA

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<220>

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<400>447

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

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Ala Ala Ser

1

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>449

caacagagtt tcagtagtcc tccgatcacc 30

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>450

Gln Gln Ser Phe Ser Ser Pro Pro Ile Thr

1 5 10

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<211>348

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>451

caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc60

acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120

ccagggaagg gactggaatg gattgggtac atctattaca gtgggagcgc caactacaac 180

ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240

aagctaagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgtgag agaccgggac 300

ctactccttg accactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctca348

<210>452

<211>116

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>452

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 1015

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

354045

Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

505560

Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

65707580

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val

859095

Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210>453

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>453

ggtggctcca tcagtagtta ctac 24

<210>454

<211>8

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>454

Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr

1 5

<210>455

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>455

atctattaca gtgggagcgc c21

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>456

Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>457

gtgagagacc gggacctact ccttgaccac 30

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<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>458

Val Arg Asp Arg Asp Leu Leu Leu Asp His

1 5 10

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<211>324

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>459

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc60

atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120

gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180

aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240

gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgat caccttcggc 300

caagggacac gactggagat taaa324

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>460

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 1015

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

202530

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

354045

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

505560

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65707580

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro

859095

Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105

<210>461

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>461

cagagcatta gcagctat18

<210>462

<211>6

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>462

Gln Ser Ile Ser Ser Tyr

1 5

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>463

gctgcatcc 9

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<212>PRT

<213>人工序列

<220>

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<400>464

Ala Ala Ser

1

<210>465

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

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<211>10

<212>PRT

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<220>

<223>合成的

<400>466

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1 5 10