包含可检测部分的缀合物

相关申请的交叉引用

本申请要求于2020年8月28日提交的美国临时专利申请第63/071,518号的权益，该申请的公开内容全文通过引用并入本文。

技术领域

本公开涉及包含可检测部分的缀合物，诸如用于检测生物学样品内的一个或多个靶标的缀合物。

背景技术

免疫组织化学(IHC)是指使用对特定抗原具有特异性的抗体检测、定位和/或定量生物学样品中的抗原(例如蛋白质)的方法。IHC具有准确鉴定组织样品中特定蛋白质的位点的实质性优点。这也是一种检查组织本身的有效的方法。原位杂交(ISH)是指检测、定位和定量核酸的方法。IHC和ISH均可用于各种生物学样品，诸如组织(例如，新鲜冷冻、福尔马林固定、石蜡包埋)和细胞学样品。无论靶标是核酸还是抗原，均可使用各种标记物(例如，发色、荧光、发光、放射标记)来检测靶标的识别。为了在临床环境中可靠地检测、定位和定量靶标，期望扩增识别事件，因为可靠地检测低丰度细胞标志物的能力对于诊断用途变得越来越重要。例如，响应于单个抗原检测事件，在标志物位点沉积数百个或数千个标记物分子，通过扩增增强了检测识别事件的能力。

扩增通常伴随有不良事件，诸如随着背景信号的增加，非特异性信号变得明显。增加的背景信号将掩盖可能与较低但有临床意义的表达相关联的微弱信号，从而干扰临床分析。因此，虽然扩增识别事件是可取的，但非常期望具有不增加背景信号的扩增方法。一种此类方法是酪酰胺信号放大(TSA)，该方法也称为催化报告沉积(CARD)。美国专利第5,583,001号公开了一种使用分析物依赖性酶活化系统检测和/或定量分析物的方法，该系统依赖催化报告沉积来放大可检测标记物信号。通过使带标记的苯酚分子与酶反应来增强CARD或TSA方法中酶的催化作用。利用TSA的现代方法有效地增加了从IHC和ISH测定中获得的信号，同时不产生显著的背景信号放大(参见例如美国申请公开第2012/0171668号，其有关与酪酰胺扩增试剂的公开内容据此通过引用全文并入本文)。用于这些扩增方法的试剂正被应用于临床上重要的靶标，以提供先前无法实现的稳定的诊断能力(VENTANA OptiView扩增试剂盒，Ventana Medical Systems，Tucson AZ，目录号760-099)。

TSA利用辣根过氧化物酶(HRP)与酪酰胺之间的反应。在H

共同在审的名称为“Quinone Methide Analog Signal Amplification”(国际申请日为2015年2月20日)的申请PCT/EP2015/053556描述了一种替代技术(″QMSA″)，其像TSA一样，可用于在不增加背景信号的情况下增加信号放大。事实上，PCT/EP2015/053556描述了新颖的醌甲基化物类似物前体以及使用这些醌甲基化物类似物前体检测生物学样品中的一个或多个靶标的方法。其中，检测方法被描述为包括以下步骤：使样品与检测探针接触，然后使样品与包含酶的标记缀合物接触。该酶与包含可检测标记物的醌甲基化物类似物前体相互作用，形成反应性醌甲基化物类似物，其与生物学样品中的靶标近侧结合或直接结合在靶标上。然后检测可检测标记物。

发明内容

本公开的第一方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为可检测部分，并且Z为“组织反应性部分”或能够参与“点击化学”反应的部分。在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)(各自如本文所述)中任一者的部分。

在一些实施例中，W为具有式(IIA)的部分：

其中各R

R

a为0或1至4范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，当R

在一些实施例中，如果R

在一些实施例中，当R

在一些实施例中，W为具有式(IIIA)的部分：

其中各R

R

U

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，W选自式(IVA)：

其中U

U

R

R

或其中R

R

R

R

或其中R

R

或其中R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，W选自式(VA)或(VB)中的任一者：

其中

R

R

或其中R

R

R

R

R

或其中R

各R

或其中R

各R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，W选自式(VI)：

其中a为0或1至6范围内的整数；

R

R

各R

各R

R

各R

或其中任意两个相邻的R

在一些实施例中，W选自式(VIIA)：

其中R

R

R

前提条件是R

本公开的第二方面是一种具有式(VIII)的化合物：

[X]-[Q]

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为“可检测部分”，并且X为选自醌甲基化物前体、醌甲基化物前体的衍生物或类似物、酪酰胺或酪酰胺衍生物的“组织反应性部分”。在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)中任一者的部分。

在一些实施例中，醌甲基化物前体或醌甲基化物前体的衍生物或类似物具有式(IXA)或(IXE)中任一者的结构：

其中R

在一些实施例中，w在2至6的范围内。

在一些实施例中，酪酰胺或酪酰胺衍生物具有式(XA)或(XB)中的任一者：

其中各R基团独立地选自氢或具有在1个与4个之间的碳原子的低级烷基基团；或

在一些实施例中，Q具有式(XIA)的结构：

其中s为0、1或2；L为键、O、S或N(R

在一些实施例中，Q具有式(XIB)的结构：

其中s为0、1或2；L为键、O、S或N(R

本公开的第三方面是一种具有式(XII)的化合物：

[Y]-[Q]

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为可检测部分；并且Y为能够参与点击化学反应的部分。在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)中任一者的部分。

在一些实施例中，Y选自由以下项组成的组：二苯并环辛炔、反式环辛烯、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼和羟胺。

在一些实施例中，Q具有式(XIA)的结构：

其中f为0、1或2；L为键、O、S或N(R

在一些实施例中，Q具有式(XIB)的结构：

其中f为0、1或2；L为键、O、S或N(R

本公开的第四方面是一种试剂盒，其包括：(a)具有式(XIII)的化合物：

[Y

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为可检测部分；并且Y

(b)具有式(XIV)的化合物：

[X]-[M]

其中X为“组织反应性部分”；M为具有在1个与12个之间的碳原子并且任选地被一个或多个选自O、N或S的杂原子取代并且任选地包含一个或多个羰基基团的取代或未取代的、直链或环状脂族基团；并且Y

本公开的第五方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m为0、1或2；并且

W具有式(IIA)：

其中各R

在一些实施例中，W具有式(IIB)：

其中R

在一些实施例中，为-N(H)(Me)。在一些实施例中，R

在一些实施例中，W具有式(IIC)：

其中R

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，W选自由以下项组成的组：

/>

本公开的第六方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m为0、1或2；并且

W具有式(IIIA)：

其中各R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W具有式(IIIB)：

其中R

R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W为：

本公开的第七方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m为0、1或2；并且

W具有式(IVA)：

其中U

在一些实施例中，a为0。在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，W具有式(IVC)或(IVD)中的任一者：

R

或其中R

在一些实施例中，W具有式(IVE)：

其中U

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W具有式(IVG)和(IVH)中的任一者：

其中U

R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自由以下项组成的组：

/>

/>

本公开的第八方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m为0、1或2；并且

W具有式(VA)和(VB)中的任一者：

其中

R

或其中R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自由以下项组成的组：

/>

/>

/>

本公开的第九方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m为0、1或2；并且

W具有式(VI)：

其中a为0或1至6范围内的整数；R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，一组相邻的R

在一些实施例中，W选自由以下项组成的组：

/>

/>

/>

本公开的第十方面是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m为0、1或2；并且

W具有式(VIIA)：

其中R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W具有式(VIIB)和(VIIC)中的任一者：

其中R

在一些实施例中，W选自由以下项组成的组：

本公开的第十一方面是一种缀合物，其选自由以下项组成的组：

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本公开的第十二方面是一种缀合物，其选自由以下项组成的组：

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附图说明

本专利或申请文件含有至少一幅彩色附图。在提出请求并支付必要的费用后，将向专利局提供带有彩色附图的专利或专利申请公布的拷贝。

图1A示出根据本公开的一个实施例的用可检测部分标记靶标的方法。

图1B示出根据本公开的一个实施例的用可检测部分标记靶标的方法。

图2示出根据本公开的一个实施例的检测与生物学样品中的靶标对应的信号的方法，其中该方法利用可检测缀合物，该可检测缀合物包含：(i)可检测部分，以及(ii)酪酰胺部分、酪酰胺部分的衍生物、醌甲基化物前体部分或醌甲基化物前体部分的衍生物。

图3示出根据本公开的一个实施例的包含醌甲基化物前体部分的缀合物的沉积。

图4示出根据本公开的一个实施例的包含酪酰胺部分的缀合物的沉积。

图5示出根据本公开的一个实施例的检测与生物学样品中的靶标对应的信号的方法，其中该方法利用可检测缀合物，该可检测缀合物包含：(i)可检测部分，以及(ii)能够参与点击化学反应的反应性官能团。

图6示出根据本公开的一个实施例的包含醌甲基化物前体部分的缀合物的沉积。

图7示出根据本公开的一个实施例的包含酪酰胺部分的缀合物的沉积。

图8示出若干可检测部分的吸收光谱，并且特别地，示出不同可检测部分的不同吸光度最大值。

图9示出可检测部分吸收光谱和相对视觉响应。

图10A示出通过405nm(30nm FWHM)滤光片观察的羟基香豆素-酪酰胺对Calu-3异种移植物上的HER2的染色。

图10B示出在不使用滤光片(来自钨灯的白光)下观察的羟基香豆素-酪酰胺对Calu-3异种移植物上的HER2的染色。

图11A示出通过376nm(30nm FWHM)滤光片观察的氨基甲基香豆素-酪酰胺对Calu-3异种移植物上的HER2的染色。

图11B示出在不使用滤光片(来自钨灯的白光)下观察的氨基甲基香豆素-酪酰胺对Calu-3异种移植物上的HER2的染色。

图12A示出通过725nm(48nm FWHM)滤光片观察的Cy7-醌甲基化物对扁桃体组织上的Ki67的染色。

图12B示出在不使用滤光片(来自钨灯的白光)下观察的Cy7-醌甲基化物对扁桃体组织上的Ki67的染色。

图13A示出在通过376nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图13B示出连续切片，PSMA经DAB染色。

图14A示出在通过438nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图14B示出连续切片，Ki67经DAB染色。

图15A示出在通过510nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图15B示出连续切片，CD8经DAB染色。

图16A示出在通过549nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图16B示出连续切片，P504x(AMACR)经DAB染色。

图17A示出在通过580nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图17B示出连续切片，基底细胞经DAB染色。

图18示出在通过620nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。未提供B部分，因为这是苏木精细胞核染色的吸光度(无等效DAB IHC)。

图19A示出在通过676nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图19B示出连续切片，ERG经DAB染色。

图20A示出在通过725nm滤光片的照明下成像的多重IHC样品-未混合。

图20B示出连续切片，PTEN经DAB染色。

图21示出使用伪彩色化参数(参见本文中的表2)的彩色合成图像。

具体实施方式

本发明公开了可检测部分和包含一个或多个可检测部分的可检测缀合物。在一些实施方案中，所公开的可检测部分具有窄波长并且适用于多重分析。

定义

如本文所用，除非上下文另有明确指示，否则单数形式“一(a/an)”和“该/所述”包括复数个指代物。类似地，除非上下文另有明确指示，否则词语“或”旨在包括“和”。术语“包括”定义为包容性，如“包括A或B”是指包括A、B或A和B。

“包括”、“包含”、“具有”等术语可互换使用，且含义相同。类似地，“包括”、“包含”、“具有”等可互换使用并且具有相同的含义。具体而言，每个术语的定义都与普通美国专利法对“包括”的定义一致，因此每个术语都可理解为一个开放性术语，其含义为“至少以下”，并且也可理释为不排除额外的特征、限制、方面等。因此，例如“具有组件a、b和c的装置”是指所述装置至少包括组件a、b和c。同样，短语：“涉及步骤a、b和c的方法”是指所述方法至少包括步骤a、b和c。此外，尽管本文可以特定的顺序概述步骤和过程，但是本领域技术人员将认识到，所述顺序步骤和过程可能会有所不同。

如本文所用，术语“烷基”、“芳族”、“杂烷基”、“环烷基”包括所示自由基的取代和未取代形式就这一点而言，每当基团或部分被描述为“取代的”或“任选取代的”(或“任选地具有”或“任选地包含”)时，该基团可以未取代的或被一个或多个所示取代基取代。同样，当一个基团被描述为“取代或未取代的”，如果被取代时，取代基可以选自一个或多个所示取代基。如果没有指示取代基，则是指所指示的“任选取代的”或“取代的”基团可以被一个或多个基团单独地并且独立地选自由以下项组成的组的基团取代：烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、杂芳烷基、(杂脂环基)烷基、羟基、保护的羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、氰酸酯、卤素、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、保护的C-羧基、O-羧基、异氰硫基、氰硫基、异硫氰硫基、硝基、甲硅烷基、硫基、亚磺酰基、磺酰基、卤代烷基、卤代烷氧基、三卤代甲磺酰基、三卤代甲磺酰胺基、醚、氨基(例如单取代的氨基或二取代的氨基)及其保护的衍生物。上述任何基团可包括一个或多个杂原子，包括O、N或S。例如，当部分被烷基取代时，该烷基可包含选自O、N或S的杂原子(例如-(CH

如本文所用，碱性磷酸酶(AP)是一种通过破坏磷酸酯-氧键并且暂时形成中间酶-底物键来去除(通过水解)并且转移磷酸酯基团有机酯的酶。例如，AP将萘酚磷酸酯(底物)水解为酚类化合物和磷酸酯。酚类与无色重氮盐(色原)偶联，以产生不溶性有色偶氮染料。

如本文所用，术语“抗体”，有时缩写为“Ab”，是指免疫球蛋白或免疫球蛋白样分子，包括(例如)但不限于：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM及其组合；在任何脊椎动物(例如，在哺乳动物诸如人类、山羊、兔和小鼠等中)的免疫应答过程中产生的类似分子；以及特异性结合至目标分子(或一组高度相似的目标分子)并且基本上排除与其他分子的结合的抗体片段。“抗体”进一步是指至少包含轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽配体，其特异性识别并结合抗原的表位。抗体可由重链和轻链组成，每条重链和轻链均具有可变区，称为可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区。VH区和VL区共同负责结合由抗体识别的抗原。术语“抗体”还包括本领域中熟知的完整免疫球蛋白及其变体和部分。

如本文所用，术语“抗原”是指可以由特异性体液或细胞免疫的产物(诸如抗体分子或T细胞受体)特异性结合的化合物、组合物或物质。抗原可以是任何类型的分子，包括例如：半抗原、简单中间代谢物、糖(例如寡糖)、脂质和激素以及大分子(诸如复合碳水化合物(例如多糖)、磷脂、核酸和蛋白质)。

如本文所用，术语“芳基”意指优选地含有6至10个碳原子的芳族碳环自由基或取代的碳环自由基，诸如苯基或萘基或苯基或萘基，其任选地被选自由以下项组成的组的取代基中的至少一者取代：烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、芳烷氧基、羧基、芳酰基、卤代、硝基、三卤甲基、氰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、芳烷氧基羰基、酰基氨基、芳酰基氨基、氨基甲酰基、烷基氨基甲酰基、二烷基氨基甲酰基、烷基硫基、芳硫基、亚烷基或-NYY′(其中Y和Y′独立地为氢、烷基、芳基或芳烷基)。

如本文所用，术语“生物学样品”可为从包括但不限于单细胞生物体(诸如细菌、酵母、原生动物和变形虫等)、多细胞生物体(诸如植物或动物)的任何活生物体获得、由其排泄或分泌的任何固体或流体样品，包括来自健康或表观健康人类受试者或受待诊断或研究的病状或疾病诸如癌症影响的人类患者的样品。例如，生物学样品可为从例如血液、血浆、血清、尿液、胆汁、腹水、唾液、脑脊液、房水或玻璃体获得的生物体液或任何身体分泌物、漏出液、渗出物(例如，从脓肿或任何其他感染或炎症部位获得的流体)或从关节(例如，正常关节或受疾病影响的关节)获得的流体。生物学样品也可为从任何器官或组织获得的样品(包括活检或尸检标本，诸如肿瘤活检)，或者可包括细胞(无论是原代细胞还是培养细胞)或由任何细胞、组织或器官调节的培养基。在一些实例中，生物学样品为细胞核提取物。在某些实例中，样品为质量控制样品，诸如所公开的细胞沉淀切片样品中的一者。在其他实例中，样品为测试样品。样品可使用本领域普通技术人员已知的任何方法进行制备。样品可得自接受常规筛查的受试者，或得自疑似患有病症的受试者，诸如遗传异常、感染或瘤形成。本发明所公开的方法的所述实施例还可应用于无遗传异常、疾病、病症等的样品，这些样品称为“正常”样品。样品可包括可由一种或多种检测探针特异性结合的多个靶标。

如本文所用，C

如本文所用，术语“缀合物”是指共价连接至较大构建体的两个或更多个分子或部分(包括大分子或超分子)。在一些实施例中，缀合物包括共价连接至一个或多个其他分子部分的一种或多种生物分子(诸如肽、蛋白质、酶、糖、多糖、脂质、糖蛋白和脂蛋白)。

如本文所用，术语“偶联”是指一个分子或原子与另一分子或原子的结合、键合(例如共价键合)或连接。

如本文所用，类似于“环烷基”的术语(例如，环烷基基团)是指完全饱和(无双键或三键)的单环或多环烃环体系。当由两个或更多个环构成时，环可以稠合方式连接在一起。环烷基基团可在一个或多个环中含有3至10个原子，或在一个或多个环中含有3至8个原子。环烷基基团可未被取代或被取代。典型的环烷基基团包括但决不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

如本文所用，术语“可检测部分”可产生可检测(诸如视觉、电子或其他方式)信号的分子或材料，该可检测信号指示在样品中的标记的存在(即，定性分析)和/或浓度(即，定量分析)。

如本文所用，术语“卤素原子”或“卤素”意指元素周期表第7主族的放射性稳定原子中的任一者，诸如氟、氯、溴和碘。

如本文所用，术语“杂原子”是指包括硼(B)、氧(O)、氮(N)、硫(S)、磷(P)和硅(Si)。在一些实施例中，“杂环”可包含一个或多个杂原子。在其他实施例中，脂肪族基团可以包含一个或多个杂原子或被一个或多个杂原子取代。

如本文所用，辣根过氧化物酶(HRP)是一种可以缀合至带标记分子的酶。当与适当的底物一起孵育时，其产生带标记分子的有色、荧光或发光衍生物，使其能够得到检测和定量。HRP在电子供体存在下发挥作用，首先形成酶底物复合物，然后作用以氧化电子供体。例如，HRP可作用于3，3′-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)以产生可检测的颜色。HRP也可以作用于带标记的酪酰胺缀合物或酪酰胺样反应性缀合物(即，阿魏酸盐、香豆酸、咖啡酸、肉桂酸盐、多巴胺等)，以沉积有色或荧光或无色报告部分，用于酪酰胺信号放大(TSA)。

如本文所用，术语“标记”是指可检测部分，其可以是原子或分子，或原子或分子的集合。标记可以提供可以被检测到的光学、电化学、磁性或静电(例如，感应、电容)标记。

如本文所用，术语“多重”、“多重化的”或“多重化”是指同时、基本上同时或顺序检测样品中的多个靶标。多重化可以包括单独地和以任何和所有组合来鉴定和/或定量多种不同的核酸(例如，DNA、RNA、mRNA、miRNA)和多肽(例如，蛋白质)。

如本文所用，“醌甲基化物前体”是一种醌类似物，其中相应的醌上的羰基氧中的一者被亚甲基基团(-CH

如本文所用，术语“反应性基团”或“反应性官能团”是指能够与不同部分的官能团化学缔合、相互作用、杂交、氢键合或偶联的官能团。在一些实施例中，两个反应性基团或两个反应性官能团之间的“反应”可表示在两个反应性基团或两个反应性官能团之间形成共价键；或者可以表示两个反应性基团或两个反应性官能团彼此缔合、彼此相互作用、彼此杂交、彼此氢键合等。因此，在一些实施例中，“反应”包括结合事件，例如半抗原与抗半抗原抗体或与超分子宿主分子缔合的客体分子的结合。

如本文所用，术语“特异性结合实体”是指特异性结合对的成员。特异性结合对是特征在于彼此结合以实质性地排除与其他分子结合的分子对(例如，特异性结合对的结合常数可以比生物学样品中其他分子的结合对的两个成员中的任一者的结合常数大至少10-3M、10-4M或10-5M)。特异性结合部分的特定实例包括特异性结合蛋白(例如，抗体、凝集素、抗生物素蛋白(诸如链霉抗生物素蛋白)和蛋白A)。特异性结合部分也可以包括由这种特异性结合蛋白特异性结合的分子(或其部分)。

每当基团或部分被描述为“取代的”或“任选取代的”(或“任选地具有”或“任选地包含”)时，该基团可以未取代的或被一个或多个所示取代基取代。同样，当基团被描述为“取代或未取代的”，如果被取代，则一个或多个取代基可以选自一个或多个所示取代基。如果没有指示取代基，则是指所指示的“任选取代的”或“取代的”基团可以被一个或多个基团单独地并且独立地选自由以下项组成的组的基团取代：烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、杂芳烷基、(杂脂环基)烷基、羟基、保护的羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、巯基、烷硫基、芳硫基、氰基、氰酸酯、卤素、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、保护的C-羧基、O-羧基、异氰硫基、氰硫基、异硫氰硫基、硝基、甲硅烷基、硫基、亚磺酰基、磺酰基、卤代烷基、卤代烷氧基、三卤代甲磺酰基、三卤代甲磺酰胺基、氨基、醚、氨基(例如单取代的氨基或二取代的氨基)及其保护的衍生物。上述任何基团可包括一个或多个杂原子，包括O、N或S。例如，当部分被烷基基团取代时，该烷基基团可包含选自O、N或S的杂原子(例如-(CH

如本文所用，术语“靶标”是指确定或可以确定存在、位置和/或浓度的任何分子。靶分子的实例包括蛋白质、核酸序列和半抗原，例如与蛋白质共价结合的半抗原。通常，使用一个或多个特异性结合分子的缀合物和一个可检测的标记来检测靶分子。

如本文所用，符号

概述

本公开提供了包含可检测部分的化合物。在一些实施例中，化合物为可检测部分与以下任一者的缀合物：(i)组织反应性部分，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团(在本文中称为“可检测缀合物”)。在一些实施例中，可检测部分具有窄波长，如本文所述。

在一些实施例中，可检测缀合物适用于标记靶分子，诸如生物学样品(例如，细胞学标本或组织学标本)内存在的靶分子。在一些实施例中，本公开的可检测缀合物适用于免疫组织化学和/或原位杂交测定。在一些实施例中，本公开的可检测缀合物适用于多重免疫组织化学和/或多重原位杂交测定。

可检测缀合物

本公开的一些实施例是一种具有式(I)的化合物：

[Z]-[Q]

其中

Z为(i)“组织反应性部分”，或(ii)能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

W为“可检测部分”；并且

m为0、1或2。

在一些实施例中，m为0。在其他实施例中，m是1。在又一些实施例中，m为2。

部分Z、Q和W中的每一者如本文进一步所述。

可检测部分

如上所述，式(I)化合物包含可检测部分。在一些实施例中，可检测部分具有在可见光谱之外的波长。在其他实施例中，可检测部分具有在可见光谱之外的波长，并且其中可检测部分不吸收光以引起电子激发(即，光激发)。在其他实施例中，可检测部分具有在可见光谱之外的波长，并且其中可检测部分并非发光部分。在其他实施例中，可检测部分具有在可见光谱之外的波长，并且其中可检测部分并非光致发光部分。在其他实施例中，可检测部分具有在可见光谱之外的波长，并且其中可检测部分并非化学发光部分。在其他实施例中，可检测部分具有在可见光谱之外的波长，并且其中可检测部分并非荧光部分。

可检测部分的特性

在一些实施例中，本公开的任何可检测缀合物的可检测部分可根据最大吸光度一半处的吸收峰的全宽进行表征，在本文中称为FWHM。FWHM由因变量等于其最大值的一半时的自变量的两个极值之差所给出的函数范围来表示。换句话说，它是在y轴上最大幅值的一半的那些点之间测量的光谱曲线的宽度。它由函数达到其最大值一半的曲线上的点之间的距离给出。本质上，FWHM是一个通常用于描述曲线上或函数“凹凸”宽度的参数。在一些实施例中，虽然吸光度最大值(λ

在一些实施例中，可检测部分具有窄FWHM。在一些实施例中，可检测部分具有第一吸收峰，该第一吸收峰具有的半峰全宽(FWHM)小于传统染料或色原(例如，通常通过沉淀沉积的染料或色原)的FWHM。例如，传统色原(例如，DAB、Fast Red、Fast Blue或如SISH技术中所用的纳米颗粒银染剂)可具有约200nm或更大的FWHM；而本公开的可检测部分可具有小于约200nm(例如，小于约150nm、小于约130nm、小于约100nm、小于约80nm或小于约60nm)的FWHM。

在一些实施例中，可检测部分的FWHM比常规染料或色原(例如，苏木精、伊红或特殊染色剂)的FWHM低40％；比常规染料或色原的FWHM低50％；比常规染料或色原的FWHM低55％；比常规染料或色原的FWHM低65％；比常规染料或色原的FWHM低70％；比常规染料或色原的FWHM低75％；比常规染料或色原的FWHM低80％；比常规染料或色原的FWHM低85％；比常规染料或色原的FWHM低90％；或比常规染料或色原的FWHM低95％。

在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约200nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约190nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约180nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约170nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约150nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约140nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约120nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约110nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约90nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约70nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM小于约50nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，本公开的可检测部分具有FWHM在15nm与150nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与145nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与140nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与135nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与130nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与125nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与120nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与110nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与100nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在15nm与90nm之间的吸收峰。

在一些实施例中，本公开的可检测部分具有FWHM在20nm与150nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与145nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与140nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与135nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与130nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与125nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与120nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与110nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与100nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在20nm与90nm之间的吸收峰。

在一些实施例中，本公开的可检测部分具有FWHM在25nm与150nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与145nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与140nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与135nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与130nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与125nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与120nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与110nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与100nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在25nm与90nm之间的吸收峰。

在一些实施例中，本公开的可检测部分具有FWHM在30nm与150nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与145nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与140nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与135nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与130nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与125nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与120nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与110nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与100nm之间的吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有FWHM在30nm与90nm之间的吸收峰。

紫外光谱范围内的可检测部分

在一些实施例中，可检测部分具有在紫外光谱范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在约100nm至约400nm之间、约100nm至约390nm之间、约100nm至约380nm之间或约100nm至约370nm之间范围内的峰吸收波长。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有小于约420nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约415nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约400nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约405nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约395nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约390nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约385nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约380nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有小于约375nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，所公开的化合物的可检测部分具有小于约370nm的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分包括或衍生自香豆素(即，可检测部分包括香豆素核)。在一些实施例中，香豆素核为氨基香豆素核。在一些实施例中，香豆素核为7-氨基香豆素核。在一些实施例中，香豆素核为羟基香豆素核。在一些实施例中，香豆素核为7-羟基香豆素核。具有香豆素核的可检测部分的非限制性实例具有如本文所述的式(IIA)。

在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)一个或多个吸电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)一个吸电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)两个吸电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)三个吸电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)三个不同的吸电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)四个吸电子基团。在一些实施例中，一个或多个吸电子基团各自具有在1.5至约3.5之间范围内的电负性。

在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)一个或多个供电子基团(其中各供电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)一个供电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)两个供电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)三个供电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)三个不同的供电子基团。在一些实施例中，香豆素核包含(或被修饰为包含)四个供电子基团。在一些实施例中，一个或多个供电子基团各自具有在1.5至约3.5之间范围内的电负性。在一些实施例中，掺入一个或多个吸电子和/或供电子基团以促进向“红色”光谱或“蓝色”光谱的移动。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有在约300nm至约460nm范围内的波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有在约320nm至约440nm范围内的波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有在约340nm至约430nm范围内的波长。这些范围可能随更多或更少电负性被引入香豆素核而改变或移动。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约460nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约455+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约450nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约445nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约440nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约435nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约430nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约425nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约420nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约415nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约410nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约405nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约400nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约395nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约390nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约385nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约380nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约375nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约370nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约365nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约360nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约355nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约350nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约345nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约340nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约335nm+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约330nm+/-10nm的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约460nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约455+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约450nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约445nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约440nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约435nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约430nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约425nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约420nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约415nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约405nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约400nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约395nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约390nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约385nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约380nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约375nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约370nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约365nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约3160nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约355nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约350nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约345nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约340nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约335nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约330nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约460nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约455+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约450nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约445nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约440nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约435nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约430nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约425nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约420nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约415nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约405nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约400nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约395nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约390nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约385nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约380nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约375nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约370nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约365nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约3130nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约355nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约350nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约345nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约340nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约335nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约330nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约460nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约455+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约450nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约445nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约440nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约435nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约430nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约425nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约420nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约415nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约405nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约400nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约395nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约390nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约385nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约380nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约375nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约370nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约365nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约360nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约355nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约350nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约345nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约340nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约335nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约330nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约460nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约455+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约450nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约445nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约440nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约435nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约430nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约425nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约420nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约415nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约405nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约400nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约395nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约390nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约385nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约380nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约375nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约370nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约365nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约360nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约355nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约350nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约345nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约340nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约335nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约330nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约460nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约455+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约450nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约445nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约440nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约435nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约430nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约425nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约420nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约415nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约410nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约405nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约400nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约395nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约390nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约385nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约380nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约375nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约370nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约365nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约360nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约355nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约350nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约345nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约340nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约335nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有香豆素核的可检测部分具有约330nm+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

合适的香豆素部分的实例如本文所述，并且其中任何香豆素部分可具有如上所述的峰吸收波长值和/或FWHM值。

可见光谱范围内的可检测部分

在一些实施例中，可检测部分具有在可见光谱范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在约400nm至约760nm之间的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在460nm至约680nm之间的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长。

在一些实施例中，可检测部分具有在可见光谱范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的FWHM第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在460nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在460nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在460nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在460nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有在可见光谱范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在460nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在450nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有在400nm至约760nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在440nm至约720nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在450nm至约680nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在500nm至约640nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有在540nm至约600nm之间的峰吸收波长以及FWHM小于40nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分包括或衍生自吩噁嗪或吩噁嗪酮(即，可检测部分包括吩噁嗪或吩噁嗪酮核)。在一些实施例中，衍生自吩噁嗪或吩噁嗪酮的可检测部分为4-羟基-3-吩噁嗪酮或为7-氨基-4-羟基-3-吩噁嗪酮。具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分的非限制性实例具有如本文所述的式(IIIA)。

在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)一个或多个吸电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)一个吸电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)两个吸电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)三个吸电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)三个不同的吸电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)四个吸电子基团。

在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)一个或多个供电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)一个供电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)两个供电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)三个供电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)三个不同的供电子基团。在一些实施例中，吩噁嗪或吩噁嗪酮核包含(或被修饰为包含)四个供电子基团。

在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有在约580nm至约700nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有在约600nm至约680nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有在约620nm至约660nm范围内的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约700+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约695+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约690+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约685+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约680+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约675+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约670+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约665+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约660+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约655+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约650+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约645+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约640+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约635+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约630+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约625+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约620+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约615+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约610+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约605+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约600+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约595+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约590+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约585+/-10nm。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有峰吸收波长约580+/-10nm。

在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约700+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约695+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约690+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约685+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约680+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约675+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约670+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约665+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约660+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约655+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约650+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约645+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约640+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约635+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约630+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约625+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约620+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约615+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约610+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约605+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约600+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约595+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约590+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约585+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约580+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约700+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约695+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约690+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约685+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约680+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约675+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约670+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约665+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约660+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约655+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约650+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约645+/-10 nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约640+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约635+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约630+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约625+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约620+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约615+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约610+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约605+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约600+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约595+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约590+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约585+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约580+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约700+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约695+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约690+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约685+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约680+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约675+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约670+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约665+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约660+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约655+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约650+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约645+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约640+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约635+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约630+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约625+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约620+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约615+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约610+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约605+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约600+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约595+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约590+/-10 nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约585+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约580+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约700+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约695+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约690+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约685+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约680+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约675+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约670+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约665+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约660+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约655+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约650+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约645+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约640+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约635+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约630+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约625+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约620+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约615+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约610+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约605+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约600+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约595+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约590+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约585+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有吩噁嗪或吩噁嗪酮核的可检测部分具有约580+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分包括或衍生自硫堇鎓(thioninium)、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核(即，可检测部分包括硫堇鎓或吩噁噻-3-酮核)。具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分的非限制性实例具有如本文所述的式(IIIA)或式(IVA)。

在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)一个或多个吸电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)一个吸电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)两个吸电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)三个吸电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)三个不同的吸电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)四个吸电子基团。

在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)一个或多个供电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)一个供电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)两个供电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)三个供电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)三个不同的供电子基团。在一些实施例中，硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核包含(或被修饰为包含)四个供电子基团。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约580nm至约720nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约600nm至约720nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约630nm至约720nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约645nm至约700nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约665nm至约690nm范围内的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约580nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约600nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约630nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约645nm至约700nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约665nm至约690nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约580nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约600nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约630nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约645nm至约700nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约665nm至约690nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约580nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约600nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约630nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约645nm至约700nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约665nm至约690nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约580nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约600nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约630nm至约720nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约645nm至约700nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有在约665nm至约690nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约720+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约715+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约710+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约705+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约700+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约695+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约690+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约685+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约680+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约675+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约670+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约665+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约660+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约655+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约620+/-10 nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约720+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约715+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约710+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约705+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约700+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约695+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约690+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约685+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约680+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约675+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约670+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约665+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约660+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约655+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约720+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约715+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约710+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约705+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约700+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约695+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约690+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约685+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约680+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约675+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约670+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约665+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约660+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约655+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约720+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约715+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约710+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约705+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约700+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约695+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约690+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约685+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约680+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约675+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约670+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约665+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约660+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约655+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3一酮核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约720+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约715+/-10nm第峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约710+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约705+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约700+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约695+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约690+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约685+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约680+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约675+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约670+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约665+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约660+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约655+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有硫堇鎓、吩噁嗪或吩噁噻-3-酮核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分包括或衍生自氧杂蒽核(即，可检测部分包括氧杂蒽核)。具有氧杂蒽核的可检测部分的非限制性实例具有如本文所述的式(VA)或(VB)。

在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)一个或多个吸电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)一个吸电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)两个吸电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)三个吸电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)三个不同的吸电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)四个吸电子基团。

在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)一个或多个供电子基团(其中各供电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)一个供电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)两个供电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)三个供电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)三个不同的供电子基团。在一些实施例中，氧杂蒽核包含(或被修饰为包含)四个供电子基团。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约580nm至约650nm范围内的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约590nm至约640nm范围内的波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约600nm至约630nm范围内的波长。在一些实施例中，当应用包含含有氧杂蒽核的可检测部分的缀合物以分发时，上述吸光度可能偏移在约5nm至约10nm之间，到达红色光谱范围。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约580nm至约650nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约590nm至约640nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约600nm至约630nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，当应用包含含有氧杂蒽核的可检测部分的缀合物以分发时，上述吸光度可能偏移在约5nm至约10nm之间，到达红色光谱范围。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约580nm至约650nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约590nm至约640nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约600nm至约630nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，当应用包含含有氧杂蒽核的可检测部分的缀合物以分发时，上述吸光度可能偏移在约5nm至约10nm之间，到达红色光谱范围。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约580nm至约650nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约590nm至约640nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约600nm至约630nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，当应用包含含有氧杂蒽核的可检测部分的缀合物以分发时，上述吸光度可能偏移在约5nm至约10nm之间，到达红色光谱范围。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约580nm至约650nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约590nm至约640nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约600nm至约630nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，当应用包含含有氧杂蒽核的可检测部分的缀合物以分发时，上述吸光度可能偏移在约5nm至约10nm之间，到达红色光谱范围。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约580nm至约650nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约590nm至约640nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有在约600nm至约630nm范围内的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，当应用包含含有氧杂蒽核的可检测部分的缀合物以分发时，上述吸光度可能偏移在约5nm至约10nm之间，到达红色光谱范围。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约650+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约645+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约640+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约635+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约630+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约625+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约620+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约615+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约610+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约605+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约600+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约595+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约590+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约585+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有氧杂蒽核的可检测部分具有约580+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

红外光谱范围内的可检测部分

在一些实施例中，可检测部分具有在红外光谱范围内的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长。在一些实施例中，可检测部分具有在约760nm至约1mm、约770nm至约1mm或约780nm至约1mm之间的波长。

在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分具有大于约740nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约750nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约760nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约765nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约770nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约775nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约780nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约785nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。在一些实施例中，可检测部分具有大于约790nm的波长以及FWHM小于50nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分包括或衍生自七甲川菁核(即，可检测部分包括七甲川菁核)。具有七甲川菁核的可检测部分的非限制性实例具有如本文所述的式(VI)。

在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)一个或多个吸电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)一个吸电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)两个吸电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)三个吸电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)三个不同的吸电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)四个吸电子基团。

在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)一个或多个供电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)一个供电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)两个供电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)三个供电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)三个不同的供电子基团。在一些实施例中，七甲川菁核包含(或被修饰为包含)供个供电子基团。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约780nm至约950nm范围内的波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约810nm至约920nm范围内的波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约840nm至约880nm范围内的波长。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约780nm至约950nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约810nm至约920nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁的可检测部分具有在约840nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约780nm至约950nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约810nm至约920nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁的可检测部分具有在约840nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约780nm至约950nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约810nm至约920nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁的可检测部分具有在约840nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约780nm至约950nm范围内的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约810nm至约920nm范围内的波长以及小于80nm的FWHM。在一些实施例中，具有七甲川菁的可检测部分具有在约840nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约780nm至约950nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有在约810nm至约920nm范围内的波长以及小于60nm的FWHM。在一些实施例中，具有七甲川菁的可检测部分具有在约840nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约950+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约945+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约940+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约935+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约930+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约925+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约920+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约915+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约910+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约905+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约950+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约945+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约940+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约935+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约930+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约925+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约920+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约915+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约910+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约905+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约950+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约945+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约940+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约935+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约930+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约925+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约920+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约915+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约910+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约905+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约950+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约945+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约940+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约935+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约930+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约925+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约920+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约915+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约910+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约905+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约950+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约945+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约940+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约935+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约930+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约925+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约920+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约915+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约910+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约905+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有七甲川菁核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，可检测部分包括或衍生自克酮酸盐核(即，可检测部分包括克酮酸盐核)。具有克酮酸盐核的可检测部分的非限制性实例具有如本文所述的式(VIIA)。

在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)一个或多个吸电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)一个吸电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)两个吸电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)三个吸电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)三个不同的吸电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)四个吸电子基团。

在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)一个或多个供电子基团(其中各吸电子基团可以相同或不同)。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)一个供电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)两个供电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)三个供电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)三个不同的供电子基团。在一些实施例中，克酮酸盐核包含(或被修饰为包含)四个供电子基团。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约780nm至约900nm范围内的波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约800nm至约880nm范围内的波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约820nm至约860nm范围内的波长。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约780nm至约900nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约800nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约820nm至约860nm范围内的波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约780nm至约900nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约800nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约820nm至约860nm范围内的波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约780nm至约900nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约800nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约820nm至约860nm范围内的波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约780nm至约900nm范围内的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约800nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约820nm至约860nm范围内的波长以及FWHM小于80nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约780nm至约900nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约800nm至约880nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有在约820nm至约860nm范围内的波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于160nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于130nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于100nm的第一吸收峰。

在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约900+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约895+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约890+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约885+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约880+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约870+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约865+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约860+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约855+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约850+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约845+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约840+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约835+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约830+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约825+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约820+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约815+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约800+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约795+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约790+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约785+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。在一些实施例中，具有克酮酸盐核的可检测部分具有约780+/-10nm的峰吸收波长以及FWHM小于60nm的第一吸收峰。

合适的可检测部分的化学结构

在一些实施例中，“可检测部分”具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)中的任一者。

在一些实施例中，W为具有式(IIA)的部分：

其中各R

R

a为0或1至4范围内的整数。

在一些实施例中，符号

在一些实施例中，当R

在一些实施例中，如果R

在一些实施例中，当R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，W为具有式(IIB)的部分：

其中R

R

a为0或1至4范围内的整数。

在一些实施例中，当R

在一些实施例中，如果R

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，a为0，R

在一些实施例中，a为0，R

在一些实施例中，a为0，R

在一些实施例中，a为0，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W为具有式(IIC)的部分：

其中R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，当R

在一些实施例中，a为0。在一些实施例中，a为1。在一些实施例中，a为2。在一些实施例中，a为3。在一些实施例中，a为4。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

式(IIA)至(IIC)的可检测部分的具体实例包括以下：

/>

其中符号

在一些实施例中，W选自式(IIIA)：

其中各R

R

U

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，a为0，并且R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，a为0；U

在一些实施例中，W选自式(IIIB)：

其中R

R

U

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，a为0，并且R

下文提供了一个具有式(IIIA)或(IIIB)中的任一者的部分的实例：

在一些实施例中，W选自式(IVA)：

其中U

U

R

R

或其中R

R

R

R

或其中R

或其中R

R

或其中R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自式(IVB)：

其中

U

R

R

或其中R

R

R

R

或其中R

R

或其中R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自式(IVC)和(IVD)中的任一者：

其中

R

R

或其中R

R

R

R

或其中R

R

或其中R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自式(IVE)：

其中U

U

R

R

或其中R

R

R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，R

在一些实施例中，U

在一些实施例中，U

在一些实施例中，W选自式(IVF)：

其中

R

R

或其中R

R

R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自式(IVG)或(IVH)中的任一者：

其中U

U

R

R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

式(IVA)至(IVH)的可检测部分的非限制性实例包括以下：

/>

/>

在一些实施例中，W选自式(VA)或(VB)中的任一者：

/>

其中

R

R

或其中R

R

R

R

R

或其中R

各R

或其中R

各R

a为0或1至6范围内的整数。

在一些实施例中，a为0。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

式(VA)至(VB)的可检测部分的非限制性实例包括以下：

/>

/>

/>

在一些实施例中，W选自式(VI)：

其中a为0或1至6范围内的整数；

R

R

各R

各R

R

各R

或其中任意两个相邻的R

在一些实施例中，至少一个R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，一组相邻的R

在一些实施例中，一组相邻的R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，一组相邻的R

在一些实施例中，一组相邻的R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，一组相邻的R

在一些实施例中，一组相邻的R

式(VI)的可检测部分的非限制性实例包括以下：

/>

/>

/>

/>

/>

在一些实施例中，W选自式(VIIA)：

其中R

R

R

前提条件是R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，R

在一些实施例中，W选自式(VIIB)和(VIIC)中的任一者：

其中R

R

R

R

式(VIIA)部分的非限制性实例包括：

组织反应性部分

如本文所用，术语“组织反应性部分”是指能够与酶反应的部分。因此，当包含组织反应性部分的缀合物与适当的酶反应时，该缀合物的组织反应性部分经历结构、构象和/或电子变化，从而提供适合直接或间接结合至生物学样品(或尽可能在生物学样品内)的组织反应性物种(中间体)。

例如，在其中组织反应性部分为酪酰胺或其衍生物的情况下，当酪酰胺与适当的酶(例如，HRP)反应时，形成酪酰胺自由基物种。该高反应性酪酰胺自由基物种能够与生物学样品中的酪氨酸残基结合。以类似的方式，在其中组织反应性部分为醌甲基化物前体或其衍生物的情况下，在与适当的酶(例如，AP)反应后，醌甲基化物前体被转化为醌甲基化物(或其相应的衍生物)，其被认为与生物学样品中的亲核试剂具有高反应性。本文进一步描述了任何缀合物的组织反应性部分对作用、其与合适的酶的相互作用以及适于检测的固定化组织-缀合物复合物的形成。

在一些实施例中，组织反应性部分为醌甲基化物前体或其衍生物。在一些实施例中，醌甲基化物前体部分具有式(IXA)所提供的结构：

R

R

R

R

在其他实施例中，醌甲基化物前体部分具有式(IXB)所提供的结构：

在其他实施例中，醌甲基化物前体部分具有式(IXD)所提供的结构：

其中R

在其他实施例中，醌甲基化物前体部分具有式(IXE)所提供的结构：

其中w在1至12的范围内。在一些实施例中，w在1至8的范围内。在其他实施例中，w在2至8的范围内。在其他实施例中，w在2至6的范围内。在进一步的实施例中，w为6。

在一些实施例中，任何缀合物的醌甲基化物前体部分衍生自其衍生物中的一者。

/>

在一些实施例中，组织反应性部分为酪酰胺或其衍生物。在一些实施例中，酪酰胺具有式(XA)所提供的结构：

其中各R基团独立地选自氢或具有在1个与4个之间的碳原子的低级烷基基团。

在其他实施例中，酪酰胺部分具有式(XB)所提供的结构：

如本文所述，Q可以为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团。在一些实施例中，Q可包含羰基、胺、酯、醚、酰胺、亚胺、硫酮或硫醇基团。在一些实施例中，Q为具有在2个与20个之间的碳原子、任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链直链基团，并且一个或多个端基选自胺、羰基、酯、醚、酰胺、亚胺、硫酮或硫醇。在其他实施例中，Q为具有在2个与20个之间的碳原子、任选地具有一个或多个氧杂原子的支链或非支链直链基团。在又一些实施例中，基团Q包含旨在增加分子的水溶性的组分。

能够参与点击化学反应的官能团或包括官能团的部分

“点击化学”是一种化学原理，其由Sharpless和Meldal的研究组独立地定义，描述了定制以通过将小单元连接在一起而快速可靠地生成物质的化学过程。“点击化学”已应用于一组可靠并且自主的有机反应(Kolb，H.C.；Finn，M.G.；Sharpless，K.B.Angew.Chem.Int.Ed.2001，40，2004-2021)。例如，将铜催化的叠氮化物-炔烃[3+2]环加成反应鉴定为水中高度可靠的分子连接(Rostovtsev，V.V.等人，Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，2596-2599)，其已经用于增强多种类型的生物分子相互作用的研究(Wang，Q.等人，J.Am.Chem.Soc.2003，125，3192-3193；Speers，A.E.等人，J.Am.Chem.Soc.2003，125，4686-4687；Link，A.J.；Tirrell，D.A.J.Am.Chem.Soc.2003，125，11164-11165；Deiters，A.等人，J.Am.Chem.Soc.2003，125，11782-11783)。此外，还已出现在有机合成(Lee，L.V.等人，J.Am.Chem.Soc.2003，125，9588-9589)、药物发现(Kolb，H.C.；Sharpless，K.B.Drug Disc.Today 2003，8，1128-1137；Lewis，W.G.等人，Angew.Chem.Int.Ed.2002，41，1053-1057)以及表面功能化(Meng，J.-C.等人，Angew.Chem.Int.Ed.2004，43，1255-1260；Fazio，F.等人，J.Am.Chem.Soc.2002，124，14397-14402；Collman，J.P.等人，Langmuir 2004，ASAP，in press；Lummerstorfer，T.；Hoffmann，H.J.Phys.Chem.B 2004，in press)方面的应用。

在一些实施例中，当Z是能够参与点击化学反应的官能团或包括官能团的部分时，Z为二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。本文描述了其他合适的官能团。

连接基

在一些实施例中，基团Q被设计成用作“间隔物”。在其他实施例中，基团Q被设计用于增加缀合物的水溶性。

在一些实施例中，Q具有式(XIA)所示的结构：

其中f为0、1或2；

L为键、O、S或N(R

R

R

R

j为1至8范围内的整数。

在一些实施例中，R

在一些实施例中，Q具有式(XIB)所示的结构：

其中f为0、1或2；

L为键、O、S或N(R

R

R

j为1至8范围内的整数。

在一些实施例中，f为1，并且s为至少2。在一些实施例中，R

在一些实施例中，Q具有式(XIC)所示的结构：

其中f为0、1或2；并且j为1至8范围内的整数。

在一些实施例中，f为1；R

式(XIA)、(XIB)和(XIC)的基于环氧烷烃的L基团在本文中参照二醇类诸如乙二醇来表示。在一些实施例中，据信此类环氧烷烃的掺入能够提高缀合物的亲水性。本领域普通技术人员将认识到，随着接头中环氧烷烃重复单元数量的增加，缀合物的亲水性也可能增加。用于实践本公开的某些公开实施例的另外的异双功能聚亚烷基二醇间隔物描述于在受让人的共同在审的申请中，包括于2006年4月28日提交的名称为″NanoparticleConjugates″的美国专利申请第11/413,778号；于2006年4月27日提交的名称为″AntibodyConjugates″的美国专利申请第11/413,415号；以及于2005年11月23日提交的名称为″Molecular Conjugate″的美国临时专利申请第60/739,794号；所有这些申请均通过引用并入本文。

具有式(VIII)的化合物

本公开的一些实施例是一种具有式(XII)的化合物：

[X]-[Q]

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为可检测部分；并且X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)中任一者的部分。在一些实施例中，X选自如本文所述的式(IXA)至(IXE)、(XA)和(XB)中的任一者。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(VIIIA)的化合物：

其中R

R

a为0或1至4范围内的整数；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；并且

X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，X选自如本文所述的式(IXA)至(IXE)、(XA)和(XB)中的任一者。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(VIIIB)的化合物：

其中R

R

U

a为0或1至6范围内的整数。

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，X选自如本文所述的式(IXA)至(IXE)、(XA)和(XB)中的任一者。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(VIIIC)的化合物：

其中U

U

R

R

或其中R

R

R

R

或其中R

或其中R

R

或其中R

a为0或1至6范围内的整数；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；并且

X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，X选自如本文所述的式(IXA)至(IXE)、(XA)和(XB)中的任一者。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(VIIID)或(VIIIE)的化合物：

其中

R

R

或其中R

R

R

R

R

或其中R

R

或其中R

各R

a为0或1至6范围内的整数；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；并且

X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，X选自如本文所述的式(IXA)至(IXE)、(XA)和(XB)中的任一者。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(VIIIF)的化合物：

其中a为0或1至6范围内的整数；

R

R

各R

各R

R

各R

或其中任意两个相邻的R

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，X选自如本文所述的式(IXA)至(IXE)、(XA)和(XB)中的任一者。

式(I)和式(VIIIA)至(VIIIF)化合物的非限制性实例如下所述，并且示出其载玻片上吸收光谱。

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具有式(XII)的化合物

本公开的一些实施例是一种具有式(XII)的化合物：

[Y]-[Q]

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；W为可检测部分；W为可检测部分；并且Y为能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分。

在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)中任一者的部分。在一些实施例中，Y为能够参与“点击化学”反应的官能团或包括官能团的部分。在一些实施例中，Y选自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(XIIA)的化合物：

其中R

R

a为0或1至4范围内的整数；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，Y选自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(XIIB)的化合物：

其中R

R

U

a为0或1至6范围内的整数。

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，Y选自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(XIIC)的化合物：

其中U

U

R

R

或其中R

R

R

R

或其中R

或其中R

R

或其中R

a为0或1至6范围内的整数；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且X为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，Y选自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(XIID)或(XIIE)的化合物：

其中

R

R

或其中R

R

R

R

R

或其中R

R

或其中R

各R

a为0或1至6范围内的整数；

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且Y为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，Y选自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。

在一些实施例中，本公开提供了一种具有式(XIIF)的化合物：

其中a为O或1至6范围内的整数；

R

R

各R

各R

R

各R

或其中任意两个相邻的R

Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；m为0、1或2；

并且Y为“组织反应性部分”。

在一些实施例中，Y选自二苯并环辛炔、反式环辛烯、炔烃、烯烃、叠氮化物、四嗪、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺、硫醇、1，3-硝酮、醛、酮、肼、羟胺、氨基基团。

具有式(I)和式(XIIA)至(XIIF)的化合物的非限制性实例如下所述，并且示出其载玻片上吸收光谱。

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本领域技术人员将认识到，虽然每个示例性化合物均包括叠氮化物基团(即，N

试剂盒

本公开提供了试剂盒，这些试剂盒包含点击缀合物的两个子集。点击缀合物的第一子集包含通过任选接头偶联至反应性官能团的组织反应性部分。在一些实施例中，点击缀合物的该第一子集用作点击缀合物对的第一成员。点击缀合物的第二子集包含一个或多个通过任选接头偶联至反应性官能团的可检测部分。在一些实施例中，点击缀合物的该第二子集用作点击缀合物对的第二成员(参见本文所述的“方法”)。应当理解，本文所公开的点击缀合物的不同子集可用作模块化“结构单元”，使得当任意两个具有适当反应性官能团的缀合物(“点击缀合物对”)组合时，它们可以发生反应并且形成共价键，从而将两个缀合物偶联以形成具有所需结构或组成部分的“点击加合物”。

在一些实施例中，所形成的“点击加合物”可用作适于在生物学测定中检测靶标的物种。不希望受任何特定理论的束缚，据信本文所公开的点击缀合物在水性介质中是稳定的，且因此适用于某些生物学测定(包括IHC和ISH)。

在一些实施例中，试剂盒包含(a)具有式(XIII)的化合物(“可检测缀合物”)：

[Y

其中Q为具有在2个与40个之间的碳原子并且任选地具有一个或多个选自O、N或S的杂原子的支链或非支链、直链或环状、取代或未取代的基团；

m是0、1或2；

W为可检测部分，包括本文所述的任何那些可检测部分；并且

Y

(b)具有式(XIV)的化合物(“组织反应性缀合物”)：

[X]-[M]

其中X为“组织反应性部分”；

n为0、1或2；

M为具有在1个与12个之间的碳原子并且任选地被一个或多个选自O、N或S的杂原子取代并且任选地包含一个或多个羰基基团的取代或未取代的、直链或环状脂族基团；并且

Y

在一些实施例中，Y

在一些实施例中，点击缀合物经由“应变促进的叠氮化物一炔烃环加成”(SPAAC)或“TCO-四嗪连接”(TTL)偶联。SPAAC涉及叠氮化物与应变炔烃之间的反应，其高能量允许在不存在Cu(I)催化剂(为传统的叠氮化物-炔烃“点击”化学所需)的情况下发生1，3-偶极环加成。在一些实施例中，二苯并环辛炔以其商业可获得性和文献先例而被用作应变环辛炔。TTL利用反式环辛烯与四嗪之间的反应以形成二氢哒嗪键。这些试剂也可商购获得，并且已被证明与SPAAC体系正交反应。

表1：反应性官能团对的第一和第二成员。

在一些实施例中，W为具有式(IIA)、(IIB)、(IIC)、(IIIA)、(IIIB)、(IVA)、(IVB)、(IVC)、(IVD)、(IVE)、(IVF)、(IVG)、(IVH)、(VA)、(VB)、(VI)、(VIIA)、(VIIB)和(VIIC)中任一者的部分，诸如本文所述。

具有式(XIII)的化合物的非限制性实例包括：

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合成

5-(甲基氨基)-2-((甲基亚氨基)甲基)苯酚(1)。在50ml压力容器中，将350mg(1.0eq.1.74mm0l)4-溴-2-羟基苯甲醛溶于10ml 40％甲胺水溶液中。加入11mg(0.1eq.，0.174mmol)铜粉，将容器在空气下密封，并且在100℃油浴中加热16小时。将反应用50mlDCM稀释，然后用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩，以得到279mg(产率98％)亚胺，其为棕色粉末。该产物不经进一步纯化即使用。

7-(甲基氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-甲酸(2)。在100ml圆底烧瓶中，将200mg(1.0eq.1.4mmol)2-(亚乙基氨基)-5-(甲基氨基)苯酚溶于20ml乙醇中。加入252mg(1.25eq.，1.75mmol)Meldrum酸和358mg(3.0eq.，4.2mmol)哌啶，并且反应回流16小时。将反应在冰浴中冷却并且通过过滤以收集产物。将黄色固体用5ml冷乙醇洗涤2次，并且在真空下干燥，以得到151mg产物(产率49％)

N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-7-(甲基氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-甲酰胺(N-甲基香豆素)(3)。向50ml圆底烧瓶中加入含有66mg(1.0eq.，0.30mmol)7-(甲基氨基)-2-氧代-2H-色烯-3-甲酸的5ml无水DMF。然后加入95mg(1.2eq.，0.36mmol)DSC和55mg(1.5eq.，0.45mmol)DMAP。将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)。30分钟后反应完成，并且加入131mg(2.0eq.，0.60mmol)2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺，并且将反应在室温搅拌16小时。将反应用50ml DCM稀释，然后用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(3％至15％MeOH/DCM)，得到95mg产物(产率75％)，其为蜡状黄色固体。

N-(30-(4-羟基苯基)-27-氧代-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂-28-氮杂三十基)-7-硝基-2-氧代-2H-色烯-3-甲酰胺。向25ml圆底烧瓶中加入含有139mg 7-硝基-香豆素-3-甲酸(1.0，0.59mmol)的15ml无水DCM，然后加入0.71ml含有1.0M DCC的DCM(1.4eq，0.77mmol)，再加入88mg NHS(1.4eq，0.77mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(60分钟)。然后依次加入480mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(1.2eq，0.71mmol)和247μl三乙胺(3.0eq，1.77mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(16小时)。将反应在真空下干燥，并且残余物吸收于最少量的甲醇中。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到385mg(产率84％)纯香豆素，其为蜡状固体。

7-氨基-N-(30-(4-羟基苯基)-27-氧代-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂-28-氮杂三十基)-2-氧代-2H-色烯-3-甲酰胺。向25ml圆底烧瓶中加入含有385mg N-(30-(4-羟基苯基)-27-氧代-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂-28-氮杂三十基)-7-硝基-2-氧代-2H-色烯-3-甲酰胺(1.0eq，0.50mmol)的15ml无水乙醇，然后加入376mg氯化亚锡(4.0eq，0.77mmol)。将反应回流搅拌，直至完全还原(如通过HPLC所指示)(60分钟)。将反应在真空下干燥，并且残余物吸收于最少量的甲醇中。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到341mg(产率92％)纯香豆素(最大波长385)，其为蜡状固体。

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2-(7-氨基-4-甲基-2-氧代-2H-色烯-3-基)-N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)乙酰胺(4)。向25ml圆底烧瓶中加入含有250mg 7-氨基-4-甲基-3-香豆素基乙酸(1.0，1.1mmol)的10ml无水DMF，然后依次加入328mg DSC(1.2eq，1.3mmol)和196mgDMAP(1.5eq，1.6mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(30分钟)。然后依次加入1.44g 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，2.1mmol)和597μL三乙胺(4.0eq，4.28mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(16小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到559mg(产率72％)纯香豆素，其为蜡状固体。

7-羟基-N-(30-(4-羟基苯基)-27-氧代-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂-28-氮杂三十基)-2-氧代-2H-色烯-3-甲酰胺(5)。向25ml圆底烧瓶中加入含有250mg 7-羟基香豆素-3-甲酸(1.0，1.2mmol)的15ml无水DMF，然后依次加入373mg DSC(1.2eq，1.5mmol)和221mg DMAP(1.5eq，1.8mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(20分钟)。然后依次加入980mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(1.2eq，1.5mmol)和506μL三乙胺(3.0eq，3.6mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(16小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到716mg(产率79％)纯香豆素，其为蜡状固体。

通过适当调整罗丹明、硫堇鎓和吩噁嗪核结构，合成最大吸收波长在580至700nm之间的蓝色色原。

N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-7-(二甲基氨基)-4-羟基-3-氧代-3H-吩噁嗪-1-甲酰胺(6)。向50ml圆底烧瓶中加入含有350mg(1.0eq.，1.1mmol)花菁的15ml无水DMF。然后加入362mg(1.2eq.，1.4mmol)DSC和198mg(1.5eq.，1.62mmol)DMAP。将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)。20分钟后反应完成，并且加入471mg(2.0eq.，2.16mmol)2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺，并且将反应在室温搅拌16小时。将反应用50ml DCM稀释，然后用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(5％至15％MeOH/DCM)，得到368mg产物(产率68％)，其为蜡状蓝色固体。

1-乙基-1，2，3，4-四氢喹啉-7-醇(21)。向2.45g1，2，3，4-四氢喹啉-7-醇1.02g(1.0eq.，6.83mmol)在10ml无水DMF中的溶液中加入1.6g碘乙烷(1.5eq.，10.25mmol)和2.05g碳酸氢钾(3.0eq.，20.5mmol)。将反应在60℃的油浴中加热24小时，然后用40ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(0％至10％MeOH/DCM)，得到1.1g产物(产率91％)，其为棕褐色固体。

4-(7-羟基-3，4-二氢喹啉-1(2H)-基)丁酸叔丁酯(8)。向2.45g1，2，3，4-四氢喹啉-7-醇(1.0eq.，16.34mmol)在20ml无水DMF中的溶液中加入4.0g4-溴丁酸叔丁酯(1.1eq.，18.0mmol)和4.9g碳酸氢钾(3.0eq.，49.0mmol)。将反应在60℃的油浴中加热24小时，然后用50ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(0％至10％MeOH/DCM)，得到3.38g产物(产率71％)，其为棕褐色固体。

7-甲氧基-1，2，2，4-四甲基-1，2-二氢喹啉(7)。向1.5g 7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢喹啉(1.0eq.，7.38mmol)在25ml无水DMF中的溶液中加入1.57g碘甲烷(1.5eq.，11.06mmol)和2.2g碳酸氢钾(3.0eq.，22.14mmol)。将反应在60℃的油浴中加热24小时，然后用50ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤3次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(0％至10％MeOH/DCM)，得到1.59g产物(产率99％)，其为棕褐色固体。

1，2，2，4-四甲基基-1，2-二氢喹啉-7-醇(10)。向250ml圆底烧瓶中加入含有1.51g7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢喹啉(1.0eq.，7。3mmol)的40ml DCM。向该烧瓶中加入21.9ml含有1.0M BBr

10-甲氧基-5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹诺酮(13)。向2.54g 7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢喹啉(1.0eq.，13.0mmol)和5.77g1-溴-3-碘丙烷(4.0eq.，53mmol)在40ml无水ACN中的溶液中加入1.5g碳酸氢钾(2.0eq.，26.0mmol)和12g碘化钾(0.8eq.，10.4mmol)。将反应在油浴中回流24小时，然后用50ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(50％己烷/DCM-DCM)，得到2.8g产物(产率88％)，其为淡黄色固体。向2.54g 7-甲氧基-2，2，4-三甲基-1，2-二氢喹啉(1.0eq.，13.0mmol)和5.77g 1-溴-3-碘丙烷(4.0eq.，53mmol)在40ml无水ACN中的溶液中加入1.5g碳酸氢钾(2.0eq.，26.0mmol)和12g碘化钾(0.8eq.，10.4mmol)。将反应在油浴中回流24小时，然后用50ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(50％己烷/DCM-DCM)，得到2.8g产物(产率88％)，其为淡黄色固体。

5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-10-醇(14)。向250ml圆底烧瓶中加入含有3.16g 10-甲氧基-5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹诺酮(1.0eq.，13.0mmol)的25ml DCM。向该烧瓶中加入52ml含有1.0M BBr

2，3，4，5-四氯-6-(7-羟基-1，2，2，4-四甲基-1，2-二氢喹啉-6-羰基)苯甲酸。向50ml圆底烧瓶中加入含有325mg 5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-10-醇(1.0eq.，1.4mmol)和405mg 4，5，6，7-四氯异苯并呋喃-1，3-二酮(1.0eq.，1.4mmol)的20ml甲苯。将该烧瓶装上Dean-Stark分水器和回流冷凝器，并且反应回流16小时。将反应在冰浴中冷却并且通过过滤以收集产物。用甲苯洗涤2次并且在高真空下干燥，得到679mg(3.52mmol，产率93％)产物，其为绿色固体。

2-(1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-7-羟基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-羰基)-3，4，5，6-四氯苯甲酸(9)。向100ml圆底烧瓶中加入含有1.39g 4-(7-羟基-3，4-二氢喹啉-1(2H)-基)丁酸叔丁酯(1.0eq.，4.75mmol)和1.36g 4，5，6，7-四氯异苯并呋喃-1，3-二酮(1.0eq.，4.75mmol)的40ml甲苯。将该烧瓶装上Dean—Stark分水器和回流冷凝器，并且反应回流16小时。将反应在冰浴中冷却并且通过过滤以收集产物。用甲苯洗涤2次并且在高真空下干燥，得到2.25g(产率82％)产物，其为绿色固体。

2，3，4，5-四氯-6-(8-羟基-2，3，6，7-四氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-9-羰基)苯甲酸。向50ml圆底烧瓶中加入含有700mg 2，3，6，7-四氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-8-醇(1.0eq.，3.7mmol)和1.06g 4，5，6，7-四氯异苯并呋喃-1，3-二酮(1.0eq.，3.7mmol)的20ml甲苯。将该烧瓶装上Dean-Stark分水器和回流冷凝器，并且反应回流16小时。将反应在冰浴中冷却并且通过过滤以收集产物。用甲苯洗涤2次并且在高真空下干燥，得到1.6g(3.52mmol，产率95％)产物，其为绿色固体

2，3，4，5-四氯-6-(10-羟基-5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-9-羰基)苯甲酸。向50ml圆底烧瓶中加入含有325mg 5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-10-醇(1.0eq.，1.4mmol)和405mg 4，5，6，7-四氯异苯并呋喃-1，3-二酮(1.0eq.，1.4mmol)的20ml甲苯。将该烧瓶装上Dean-Stark分水器和回流冷凝器，并且反应回流16小时。将反应在冰浴中冷却并且通过过滤以收集产物。用甲苯洗涤2次并且在高真空下干燥，得到679mg(3.52mmol，产率93％)产物，其为绿色固体。

氧杂蒽(11)。向25ml圆底烧瓶中加入含有210mg 2，3，4，5-四氯-6-(7-羟基-1，2，2，4-四甲基-1，2-二氢喹啉-6-羰基)苯甲酸(1.0eq.，0.45mmol)和143mg 4-(7-羟基-3，4-二氢喹啉-1(2H)-基)丁酸叔丁酯(1.1eq.，0.49mmol)的4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1mlTMS多磷酸，并且将反应在80℃的油浴上加热4小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到239mg(0.35mmol，产率78％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体(最大吸收波长604nm)。

氧杂蒽(24)。向25ml圆底烧瓶中加入含有199mg 2，3，4，5-四氯-6-(10-羟基-5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-9-羰基)苯甲酸(1.0eq.，0.42mmol)和122mg 5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-10-醇(1.0eq.，0.42mmol)对4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1ml TMS多磷酸，并且将反应在80℃的油浴上加热4小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到218mg(产率77％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(25)。向25ml圆底烧瓶中加入含有380mg氧杂蒽2(1.0eq.，0.54mmol)，280μL Huenig′s碱(3.0eq.，1.6mmol)和75μL 2-(16-硫基)乙酸(2.0eq.，1.1mmol)的5ml无水DMF。将反应在室温搅拌16小时，然后用50ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机相通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到372mg(产率90％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(27)。将氧杂蒽3(150mg，0.20mmol)溶于1ml浓H

氧杂蒽(22)。向25ml圆底烧瓶中加入含有215mg 2-(1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-7-羟基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-羰基)-3，4，5，6-四氯苯甲酸(1.0eq.，0.37mmol)和66mg1-乙基-1，2，3，4-四氢喹啉-7-醇(1.0eq.，0.37mmol)对4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1mlTMS多磷酸，并且将反应在80℃的油浴上加热4小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到193mg(产率79％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体(最大吸收波长588nm)。

氧杂蒽(15)。向25ml圆底烧瓶中加入含有433mg 2-(1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-7-羟基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-羰基)-3，4，5，6-四氯苯甲酸(1.0eq.，0.75mmol)和172mg(1.0eq.，0.75mmol)5，5，7-三甲基-2，3-二氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-10-醇的4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1ml TMS多磷酸，并且将反应在90℃的油浴上加热2小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到391mg(产率73％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

4-(4′，5′，6′，7′-四氯-3-(二甲基氨基)-3′-氧代-10，11-二氢-3′H-螺[苯并[7，8]色烯并[3，2-g]喹啉-7，1′-异苯并呋喃]-12(9H)-基)丁酸(29)。向25ml圆底烧瓶中加入含有410mg2-(1-(4-(叔丁氧基)_4-氧代丁基)-7-羟基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-羰基)-3，4，5，6-四氯苯甲酸(1.0eq.，0.71mmol)和133mg 6-(二甲基氨基)萘-1-醇(1.0eq.，0.71mmol)的4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1ml TMS多磷酸，并且将反应在80℃的油浴上加热2小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到335mg(产率70％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体(最大吸收波长631nm)。

氧杂蒽(12)。向50ml圆底烧瓶中加入含有252mg氧杂蒽11(1.0，0.36mmol)的4ml无水DMF，然后依次加入112mg DSC(1.2eq，0.44mmol)和106mgDMAP(2.4eq，0.87mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(30分钟)。然后依次加入490mg1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，0.73mmol)和202μL三乙胺(4.0eq，01.09mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(16小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到306mg(产率69％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(16)。将氧杂蒽15(35mg，0.049mmol)溶于3ml DCM中，然后依次加入49μL1.0M DCC(1.0eq，0.049mmol)和5.6mg NHS(1.0eq，0.049mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(6小时)。通过过滤去除脲，然后依次加入66mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，0.098mmol)和16μL三乙胺(3.0eq，0.147mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(12小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到44mg(产率71％)纯氧杂蒽。

氧杂蒽(17)。将氧杂蒽15(50mg，0.07mmol)溶于1ml浓H

氧杂蒽(18)。将30mg氧杂蒽17(1.0eq，0.038mmol)溶于3ml无水DMF中，然后依次加入9.7mg DSC(1.2eq，0.046mmol)和7.5mg DMAP(1.5eq，057mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(1小时)。然后依次加入51mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，0.076mmol)和20μL三乙胺(3.0eq，0.114mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(12小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到35mg(产率69％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(19)。向25ml圆底烧瓶中加入含有430mg 2-(1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-7-羟基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-羰基)-3，4，5，6-四氯苯甲酸(1.0eq.，0.75mmol)和142mg(1.0eq.，0.75mmol)2，3，6，7-四氢-1H，5H-吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-8-醇对4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1ml TMS多磷酸，并且将反应在90℃的油浴上加热2小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到465mg(产率69％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体(最大吸收波长598nm)。

氧杂蒽(20)。向142mg氧杂蒽19(1.0eq.，0.21mmol)在5ml无水DMF中的溶液中加入65mg DSC(1.2eq.，0.25mmol)和39mg DMAP(1.5eq.，0.32mmol)，将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(30分钟)。然后依次加入257mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(1.5eq，0.38mmol)和20μL三乙胺(3.0eq，0.114mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(12小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到219mg(0.18mmol，产率72％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(22)。向25ml圆底烧瓶中加入含有215mg2-(1-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁基)-7-羟基-1，2，3，4-四氢喹啉-6-羰基)-3，4，5，6-四氯苯甲酸(1.0eq.，0.37mmol)和66mg(1.0eq.，0.37mmol)1-乙基-1，2，3，4-四氢喹啉-7-醇对4ml无水DMF。向该烧瓶中加入1mlTMS多磷酸，并且将反应在80℃的油浴上加热3小时。利用制备型HPLC对粗反应进行纯化，然后将纯化的级分冻干，得到192mg(0.29mmol，产率78％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体(最大吸收波长588nm)。

氧杂蒽(23)。向67mg氧杂蒽22(1.0eq.，0.10mmol)在3ml无水DMF中的溶液中加入28mg DSC(1.1eq.，0.25mmol)和18mg DMAP(1.5eq.，0.15mmol)，将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(30分钟)。然后依次加入102mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(1.5eq，0.15mmol)和42μL三乙胺(3.0eq，0.30mmo1)。将反应在氮气下于室温搅拌16小时(酰胺形成完全，如通过HPLC所指示)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到96mg(0.18mmol，产率79％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(28)。向78mg氧杂蒽27(1.0eq.，0.085mmol)在3ml DCM中的溶液中依次加入101μL 1.0M DCC(1.2eq，0.10mmol)和12mg NHS(1.2eq，0.049mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(5小时)。通过过滤去除脲，然后依次加入114mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，0.17mmol)和55μL三乙胺(3.0eq，0.147mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(16小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到97mg(0.06mmol，产率78％)纯氧杂蒽。

氧杂蒽(26)。向85mg氧杂蒽24(1.0eq.，0.11mmol)在3ml无水DMF中的溶液中加入32mg DSC(1.1eq.，0.12mmol)和20mg DMAP(1.5eq.，0.17mmol)。将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(40分钟)。然后依次加入148mg1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，0.22mmol)和46μL三乙胺(3.0eq，0.33mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌16小时(酰胺形成完全，如通过HPLC所指示)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到114mg(产率79％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

氧杂蒽(30)。向40mg 4-(4′，5′，6′，7′-四氯-3-(二甲基氨基)-3′-氧代-10，11-二氢-3′H-螺[苯并[7，8]色烯并[3，2-g]喹啉-7，1′-异苯并呋喃]-12(9H)-基)丁酸(1.0eq.，0.06mmol)在3ml无水DMF中的溶液中加入18mg DSC(1.2eq.，0.072mmol)和12mg DMAP(1.6eq.，0.095mmol)，将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(15分钟)。然后依次加入80mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(2.0eq，0.12mmol)和42μL三乙胺(4.0eq，0.24mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌2小时(酰胺形成完全，如通过HPLC所指示)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到54mg(0.087mmol，产率75％)纯氧杂蒽，其为蓝色固体。

4-(3，4-二氢喹啉-1(2H)-基)丁酸叔丁酯(40)。向1.14g 1，2，3，4-四氢喹啉(1.0eq.，8.55mmol)在15ml无水DMF中的溶液中加入3.82g 4-溴丁酸叔丁酯(2.0eq.，17.1mmol)和2.57g碳酸氢钾(3.0eq.，25.65mmol)。将反应在60℃的油浴中加热24小时，然后用50ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(0％至10％MeOH/DCM)，得到2.02g产物(产率86％)，其为棕褐色固体。

4-(甲基(苯基)氨基)丁酸叔丁酯(33)。向N-甲基苯胺2.0g(1.0eq.，18.66mmol)在15ml无水DMF中的溶液中加入5.0g 4-溴丁酸叔丁酯(1.2eq.，22.4mmol)和2.57g碳酸氢钾(3.0eq.，55.98mmol)。将反应在60℃的油浴中加热18小时，然后用70ml DCM稀释，并且用去离子水洗涤2次并且用盐水洗涤2次。将有机层通过硫酸镁塞过滤，然后在真空下浓缩。通过快速层析(0％至10％MeOH/DCM)，得到3.86g产物(产率83％)，其为棕褐色固体。

3，3-二氟-1-(4-硝基苯基)氮杂环丁烷(31)。

4-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯胺(32)。向150ml RB烧瓶中加入含有660mg 3，3-二氟-1-(4-硝基苯基)氮杂环丁烷的40ml 1∶1MeOH/THF，并且加入25mg 10％碳载钯。将反应用连续氢气流覆盖并且在室温搅拌3小时(通过HPLC确定反应完全)。将反应通过硅藻土过滤，并且在真空下去除溶剂。与甲苯共沸3次并且在真空下干燥，得到苯胺，其为黄色固体。该产物不经纯化即使用。

S-(2-氨基-5-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)O-氢硫代硫酸酯(34)。向412mg4-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯胺(1.0eq.，2.24mmol)在10ml去离子水中的溶液中突然加入含有407mg五水合硫代硫酸钠(1.1eq.，2.58mmol)的2ml去离子水。将溶液冷却至5℃，并且在冰浴中在15分钟内逐滴加入含有533mg过硫酸钠(1.0eq.，2.24mmol)的5ml去离子水。将反应物在5℃搅拌3小时，然后将其升至室温并且搅拌1小时。经由过滤收集黑色固体沉淀，并且用水(10ml)洗涤，然后在真空下干燥。将粗制二胺-5-硫代磺酸置于圆底烧瓶中，并且加入乙酸乙酯(20ml)。将浆液加热回流1小时，然后冷却至室温。一旦浆液冷却，经由过滤收集紫色固体，用乙酸乙酯(50ml)洗涤，并且在真空下干燥，以得到478mg产物，其为紫色固体(产率72％)。

4-((7-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸叔丁酯。向107mg S-(2-氨基-5-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)苯基)O-氢硫代硫酸酯(1.0eq.，0.36mmol)在20ml MeOH/去离子水(2：1)中的溶液中突然加入90mg 4-(甲基(苯基)氨基)丁酸叔丁酯(1.0eq.，0.36mmol)和360mg在硅藻土上的AgCO

4-((7-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸(35)。将124mg 4-((7-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-513-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸叔丁酯加入15ml 30％三氟乙酸/DCM中，并且在室温搅拌1.5小时。在真空下去除溶剂，并且残余物与甲苯一起共沸3次。将蓝色残余物在真空下干燥，并且不经纯化即使用。

1-(4-((7-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酰胺基)-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(36)。将33.5mg4-((7-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸(1.0eq，0.083mmol)溶于4ml DCM中，然后依次加入100μL 1.0M DCC(1.2eq，0.10mmol)和11.5mgNHS(1.2eq，0.10mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(5小时)。通过过滤去除脲，然后依次加入62mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(1.1eq，0.411mmol)和41μL三乙胺(3.0eq，0.25mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(14小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到56mg(产率71％)纯硫堇鎓。

S-(2-氨基-5-(二甲基氨基)苯基)O-氢硫代硫酸酯(37)。向5.0g N1，N1-二甲基苯-1，4-二胺(1.0eq.，36.0mmol)在100ml去离子水中的溶液中突然加入含有10.03g五水合硫代硫酸钠(1.1eq.，40mmol)的20ml去离子水。将溶液冷却至5℃，并且在冰浴中在15分钟内逐滴加入含有8.57g过硫酸钠(1.0eq.，36mmol)的40ml去离子水。将反应物在5℃搅拌3小时，然后将其升至室温并且搅拌1小时。经由过滤收集黑色固体沉淀，并且用水(50ml)洗涤，然后在真空下干燥。将N′，N′-二甲基-对苯二胺-5-硫代磺酸加入圆底烧瓶中，并且加入乙酸乙酯(100ml)。将浆液加热回流1小时，然后冷却至室温。一旦浆液冷却经由过滤收集紫色固体，用乙酸乙酯(50ml)洗涤，并且在真空下干燥，以得到6.6g产物，其为紫色固体(产率74％)。

4-((7-(二甲基氨基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸叔丁酯。向500mg S-(2-氨基-5-(二甲基氨基)苯基)O-氢硫代硫酸酯(1.0eq.，2.0mmol)在30ml MeOH/去离子水(2：1)中的溶液中突然加入500mg4-(甲基(苯基)氨基)丁酸叔丁酯(1.0eq.，2.0mmol)和2.0g在硅藻土上的AgCO

4-((7-(二甲基氨基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸(38)。将500mg4-((7-(二甲基氨基)-5l3-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酸叔丁酯加入20ml 30％三氟乙酸/DCM中，并且在室温搅拌3小时。在真空下去除溶剂，并且残余物与甲苯一起共沸3次。将蓝色残余物在真空下干燥，并且不经纯化即使用。

4-(9-(二甲基氨基)-3，4-二氢-1113-吡啶并[3，2-b]吩噻嗪-1(2H)-基)丁酸叔丁酯(41)。向211mg S-(2-氨基-5-(二甲基氨基)苯基)O-氢硫代硫酸酯(1.0eq.，0.85mmol)在30ml MeOH/去离子水(2∶1)中的溶液中突然加入237mg4-(3，4-二氢喹啉-1(2H)一基)丁酸叔丁酯(1.0eq.，2.85mmol)和1.0g在硅藻土上的AgCO

4-(9-(二甲基氨基)-3，4-二氢-11l3-吡啶并[3，2-b]吩噻嗪-1(2H)-基)丁酸(42)。将288mg 4-(9-(二甲基氨基)-3，4-二氢-11l3-吡啶并[3，2-b]吩噻嗪-1(2H)-基)丁酸叔丁酯加入20ml 30％三氟乙酸/DCM中，并且在室温搅拌3小时。在真空下去除溶剂，并且残余物与甲苯一起共沸3次。将蓝色残余物在真空下干燥，并且不经纯化即使用。

1-(4-((7-(二甲基氨基)-513-吩噻嗪-3-基)(甲基)氨基)丁酰胺基)-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(39)。将133mg 4-(9-(二甲基氨基)一3，4-二氢-1113-吡啶并[3，2-b]吩噻嗪-1(2H)-基)丁酸(1.0eq，0.374mmol)溶于5ml DCM中，然后依次加入448μL 1.0M DCC(1.2eq，0.448mmol)和52mg NHS(1.2eq，0.448mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(6小时)。通过过滤去除脲，然后依次加入278mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(1.1eq，0.411mmol)和156μL三乙胺(3.0eq，1.12mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(14小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到29mg(产率77％)纯硫堇鎓。

1-(4-(9-(二甲基氨基)-3，4-二氢-1113-吡啶并[3，2-b]吩噻嗪-1(2H)-基)丁酰胺基)-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺(43)。将4-(9-(二甲基氨基)-3，4-二氢-1113-吡啶并[3，2-b]吩噻嗪-1(2H)-基)丁酸(15mg，0.049mmol)溶于3ml DCM中，然后依次加入84μL 1.0M DCC(2.0eq，0.084mmol)和9.7mg NHS(2.0eq，0.084mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所指示)(6小时)。通过过滤去除脲，然后依次加入85mg 1-氨基-N-(4-羟基苯乙基)-3，6，9，12，15，18，21，24-八氧杂二十七烷-27-酰胺三氟乙酸盐(3.0eq，0.126mmol)和30μL三乙胺(5.0eq，0.21mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌，直至酰胺形成完全(如通过HPLC所指示)(14小时)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到29mg(产率77％)纯硫堇鎓。

2-氯环戊烷-1，3-二甲醛(46)。向100ml RB烧瓶中加入16ml无水DMF和16ml DCM，并且将该烧瓶置于冰浴中，不断搅拌。然后向该烧瓶中加入含有14.5ml POCl

2-氯环己烷-1，3-二甲醛(47)。向100ml RB烧瓶中加入16ml无水DMF和16ml DCM，并且将该烧瓶置于冰浴中，不断搅拌。然后向该烧瓶中加入含有14.5ml POCl

6-(2，3，3-三甲基-3H-1l4-吲哚-1-基)己酸(44)。向100ml RB压力容器中加入35ml二氯苯、5.0g 2，3，3-三甲基-3H-吲哚(1.0eq.31.4mmol)和7.5g 6-溴己酸(1.5eq.47.1mmol)。将该烧瓶置于110℃的冰浴中16小时。冷却至室温后，通过过滤收集产物，然后用二氯苯洗涤2次并且用醚洗涤2次。将产品在真空下干燥，以得到6.1g(产率71％)纯酸，其为淡白色结晶。

3-(2，3，3-三甲基-3H-114-吲哚-1-基)丙烷-1-磺酸。向100ml RB压力容器中加入35ml二氯苯、5.0g 2，3，3-三甲基-3H-吲哚(1.0eq.31.4mmol)和5.75g 1，2-氧硫杂环戊烷2，2一二氧化物(1.5eq.47.1mmol)。将该烧瓶置于110℃的冰浴中16小时。冷却至室温后，通过过滤收集产物，然后用二氯苯洗涤2次并且用醚洗涤2次。将产品在真空下干燥，以得到6.9g(产率78％)磺酸，其为结晶固体。

6-(1，1，2-三甲基-1H-314-苯并[e]吲哚-3-基)己酸(50)。向100ml RB压力容器中加入35ml二氯苯、5.0g1，1，2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚(1.0eq.23.9mmol)和7.0g6-溴己酸(1.5eq.35.8mmol)。将该烧瓶置于110℃的冰浴中16小时。冷却至室温后，通过过滤收集产物，然后用二氯苯洗涤2次并且用醚洗涤2次。将产品在真空下干燥，以得到3.56g(产率46％)酸，其为灰色结晶。

3-(1，1，2-三甲基-1H-3l4-苯并[e]吲哚-3-基)丙烷-1-磺酸(53)。向100ml RB压力容器中加入35ml二氯苯、5.0g 1，1，2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚(1.0eq.23.9mmol)和4.37g2-氧硫杂环戊烷2，2-二氧化物(1.5eq.35.8mmol)。将该烧瓶置于110℃的冰浴中16小时。冷却至室温后，通过过滤收集产物，然后用二氯苯洗涤2次并且用醚洗涤2次。在真空下干燥得到5.8g(产率73％)结晶磺酸。

N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-6-(2，3，3-三甲基-3H-1l4-吲哚-1-基)已酰胺(45)。向2.5g 6-(2，3，3-三甲基-3H-1l4-吲哚-1-基)己酸(1.0eq.，9.12mmol)在25ml无水DMF中的溶液中加入2.8g DSC(1.2eq.，10.95mmol)和1.67g DMAP(1.5eq.，1.37mmol)，将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(30分钟)。然后加入2.99g 2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(1.5eq，0.15mmol)。将反应在氮气下于室温搅拌16小时(酰胺形成完全，如通过HPLC所指示)。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到2.64g(产率61％)纯叠氮化物。

N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-6-(1，1，2-三甲基-1H-314-苯并[e]吲哚-3-基)已酰胺(51)。向1.0g 6-(1，1，2-三甲基-1H-314-苯并[e]吲哚-3-基)己酸(1.0eq.，3.22mmol)在20ml无水DMF中的溶液中加入990mg DSC(1.2eq.，3.67mmol)和560mg DMAP(1.5eq.，4.83mmol)，将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(20分钟)。然后加入915g 2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(1.3eq，4.19mmol)，并且将反应在氮气下于室温搅拌18小时。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到1.13g(产率67％)纯叠氮化物。

6-((E)-2-((E)-2-(3-((E)-2-(1-(1-叠氮基-13-氧代-3，6，9-三氧杂-12-氮杂十八烷-18-基)-3，3-二甲基-3H-114-吲哚-2-基)乙烯基)-2-氨环戊-2-烯-1-亚基)亚乙基)-3，3-二甲基吲哚啉-1-基)-N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)己酰胺(48)。向20ml琥珀色小瓶中加入含有216mg N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-6-(2，3，3-三甲基-3H-114-吲哚-1-基)己酰胺(2.0eq.，0.45mmol)、36mg 2-氯环戊烷-1，3-二甲醛(1.0eq.，0.23mmol)和56mg无水乙酸钠(3.0eq.，0.68)的9ml无水乙醇。将该小瓶用氮气覆盖，密封并且置于70℃的油浴中90分钟。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到140mg(产率57％)纯七甲川菁染料。

6-((E)-2-((E)-2-(3-((E)-2-(1-(1-叠氮基-13-氧代-3，6，9-三氧杂-12-氮杂十八烷-18-基)-3，3-二甲基-3H-1l4-吲哚-2-基)乙烯基)-2-氯环己-2-烯-1-亚基)亚乙基)-3，3-二甲基吲哚啉-1-基)-N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)己酰胺(49)。向20ml琥珀色小瓶中加入含有182mg N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-6-(2，3，3-三甲基-3H-114-吲哚-1-基)己酰胺(2.0eq.，0.38mmol)、26mg 2-氯环己烷-1，3-二甲醛(1.0eq.，0.19mmol)和47mg无水乙酸钠(3.0eq.，0.57)的8ml无水乙醇。将该小瓶用氮气冲洗，密封并且置于70℃的油浴中90分钟。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到109mg(产率53％)纯七甲川菁染料。

6-(2-((E)-2-((E)-3-((E)-2-(3-(1-叠氮基-13-氧代-3，6，9-三氧杂-12-氮杂十八烷-18-基)-1，1-二甲基-1，3-二氢-2H-苯并[e]吲哚-2-亚基)亚乙基)-2-氯环戊-1-烯-1-基)乙烯基)-1，1-二甲基-1H-3l4-苯并[e]吲哚-3-基)-N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)己酰胺。向20ml琥珀色小瓶中加入含有80mg N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-6-(1，1，2-三甲基-1H-3l4-苯并[e]吲哚-3-基)己酰胺(2.0eq.，0.15mmol)、12mg 2-氯环戊烷-1，3-二甲醛(1.0eq.，0.076mmol)和19mg无水乙酸钠(3.0eq.，0.23)的7ml无水乙醇。将该小瓶用氮气吹扫，密封并且置于70℃的油浴中90分钟。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到44mg(产率49％)纯七甲川菁染料。

3-((E)-2-((E)-2-(3-((E)-2-(1-(1-叠氮基-13-氧代-3，6，9-三氧杂-12-氮杂十八烷-18-基)-3，3-二甲基-3H-1l4-吲哚-2-基)乙烯基)-2-氯环戊-2-烯-1-亚基)亚乙基)-1，1-二甲基-1，2-二氢-3H-苯并[e]吲哚-3-基)丙烷-1磺酸(54)。向20ml琥珀色小瓶中加入含有100mg N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-6-(2，3，3-三甲基-3H-114-吲哚-1-基)己酰胺(1.0eq.，0.21)、70mg 3-(1，1，2-三甲基-1H-3l4-苯并[e]吲哚-3-基)丙烷-1-磺酸(1.0eq.，0.21)、33mg 2-氯环戊烷-1，3-二甲醛(1.0eq.，0.21mmol)和52mg无水乙酸钠(3.0eq.，0.63)的12ml无水乙醇。将该小瓶用氮气冲洗，密封并且置于70℃的油浴中90分钟。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到76mg(产率39％)纯非对称七甲川菁染料。

(Z)-N-(2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)-1-(5-(3-(5-(4-((2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酰基)-1l4-哌啶-1-亚基)噻吩-2(5H)-亚基)-2-羟基-4，5-二氧代环戊-1-烯-1-基)噻吩-2-基)哌啶_4-甲酰胺。向500mg(Z)-5-(5-(4-羧基-114-哌啶-1-亚基)噻吩-2(5H)-亚基)-2-(5-(4-羧基哌啶-1-基)噻吩-2-基)-3，4-二氧代环戊-1-烯-1-油酸酯(1.0eq.，0.95mmol)在30ml无水DMF中的溶液中加入301mg DSC(1.2eq.，1.14mmol)和174mg DMAP(1.5eq.，1.43mmol)，将反应用氮气覆盖并且在室温搅拌，直至酯形成完全(如通过HPLC所确定)(15分钟)。然后加入249mg2-(2-(2-(2-叠氮基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-胺(1.2eq，1.14mmol)，并且将反应在氮气下于室温搅拌18小时。依次通过制备型HPLC和冻干，以得到652mg(产率74％)纯叠氮化物。

在一些实施例中，式(XIV)的点击缀合物可根据本领域普通技术人员已知的任何方法进行合成。在一些实施例中，包含所需反应性官能团和接头的试剂仅与酪酰胺或其衍生物或其类似物偶联，如以下反应方案所示。例如，酪酰胺(具有末端胺基团)可以与包含胺反应性基团的化合物(例如，活性酯诸如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或磺基-NHS、异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、磺酰氯、醛、乙二醛、环氧化物、环氧乙烷、碳酸酯、芳基卤化物、酰亚胺酯、酸酐等)偶联。

在以下一些具体实例中，具有NHS-酯基团的点击配偶体与酪酰胺偶联。在一些实施例中，反应发生在DMSO中，并且使其反应60分钟。然后将反应用甲醇稀释，并且通过制备型HPLC直接纯化。

在其他实施例中，式(XIV)的点击缀合物可根据本领域普通技术人员已知的任何方法进行合成。在一些实施例中，包含所需反应性官能团和接头的试剂仅与醌甲基化物前体或其衍生物或其类似物偶联，如以下反应方案所示。例如，具有末端胺基团的醌甲基化物前体可以与包含胺反应性基团的化合物(例如，活性酯诸如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)或磺基-NHS、异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、磺酰氯、醛、乙二醛、环氧化物、环氧乙烷、碳酸酯、芳基卤化物、酰亚胺酯、酸酐等)偶联。

在下面的一些具体实例中，具有NHS-酯基团的点击配偶体与具有末端胺的醌甲基化物前体偶联。在一些实施例中，反应发生在DMSO中，并且使其反应60分钟。然后将反应用甲醇稀释，并且通过制备型HPLC直接纯化。

方法

本公开还提供了一种使用本文所述的任何缀合物检测生物学样品内的靶标(例如，蛋白质靶标或核酸靶标)的方法。在一些实施例中，本公开提供了使用本文所述的任何缀合物检测生物学样品内的两个或更多靶标的方法。

在一些实施例中，缀合物(包括可检测部分)被共价沉积到生物学样品上。在一些实施例中，包含可检测部分的缀合物的共价沉积使用酪酰胺信号放大(TSA)完成的，该方法也称为催化报告沉积(CARD)。美国专利第5,583,001号公开了一种使用分析物依赖性酶活化系统检测和/或定量分析物的方法，该系统依赖催化报告沉积来放大可检测标记物信号。通过使带标记的苯酚分子与酶反应来增强CARD或TSA方法中酶的催化作用。利用TSA的现代方法有效地增加了从IHC和ISH测定中获得的信号，同时不产生显著的背景信号放大(参见例如美国申请公开第2012/0171668号，其有关与酪酰胺扩增试剂的公开内容据此通过引用全文并入本文)。用于这些扩增方法的试剂正被应用于临床上重要的靶标，以提供先前无法实现的稳定的诊断能力(VENTANA OptiView扩增试剂盒，Ventana Medical Systems，Tucson AZ，目录号760-099)。

TSA利用作用于酪酰胺的辣根过氧化物酶(HRP)所催化的反应。在H

在其他实施例中，使用醌甲基化物化学进行包含可检测部分的缀合物的共价沉积。于2019年1月1日授权的名称为″Quinone Methide Analog Signal Amplification″的美国专利第10,168,336号描述了一种与TSA一样可用于增加信号放大而不显著增加背景信号的技术(″QMSA″)。特别地，美国专利第10,168,336号描述了新颖的醌甲基化物类似物前体以及使用这些醌甲基化物类似物前体检测生物学样品中的一个或多个靶标的方法。在特定实施例中，检测方法包括使样品与检测抗体或探针接触，然后使样品与包含碱性磷酸酶(AP)和结合部分的标记缀合物接触，其中该结合部分识别抗体或探针(例如，通过与半抗原或物种特异性抗体表位或其组合结合)。标记缀合物的碱性磷酸酶与包含可检测部分的醌甲基化物类似物前体相互作用，从而形成反应性醌甲基化物类似物，该反应性醌甲基化物类似物与生物学样品近端或直接在靶标上共价结合。然后检测(诸如目视或通过成像技术)可检测标记物。美国专利第10,168,336号全文以引用方式并入本文。

另一种用于沉积包含可检测部分的缀合物的技术采用“点击”化学，以在样品中的可检测部分与生物标志物之间形成共价键。“点击化学”是一种化学原理，其由Sharpless和Meldal的研究组独立地定义，描述了定制以通过将小单元连接在一起而快速可靠地生成物质的化学过程。“点击化学”已应用于一组可靠并且自主的有机反应(Kolb，H.C.；Finn，M.G.；Sharpless，K.B.Angew.Chem.Int.Ed.2001，40，2004-2021)。在将可检测标记物共价沉积到生物学样品上的背景下，US2019/0204330中描述了一种点击化学技术，其通过引用并入本文。在该技术中，利用如上所述的酪酰胺沉积或同样如上所述的醌甲基化物沉积将能够参与点击化学反应的第一反应性基团共价锚定至生物学样品。该检测系统的第二组分具有对应的能够参与点击化学反应的第二反应性基团，其然后与第一反应基团反应以将使该第二组分与生物学样品共价结合。在特定实施例中，所述技术包括使生物学样品与特定于第一靶标的第一检测探针接触。第一检测探针可以为一抗探针或核酸探针。随后，使样品与第一标记缀合物接触，该第一标记缀合物包含第一酶。在一些实施例中，第一标记缀合物为二抗，该二抗特定于一抗(诸如由其获得抗体的物种)或缀合至核酸探针的标记物(诸如半抗原)。接下来，使生物学样品与点击缀合物对的第一成员接触。第一酶切割具有酪酰胺或醌甲基化物前体的点击缀合物对的第一成员，从而将该第一成员转化为反应性中间体，该反应性中间体与生物学样品近端或直接在第一靶标上共价结合。接下来，使点击缀合物对的第二成员与生物学样品接触，该对点击缀合物的第二成员包括第一报告部分(例如，发色团)和第二反应性官能团，其中第点击缀合物对的第二成员的第二反应性官能团能够与该对点击缀合物的第一成员的第一反应性官能团反应。最后，检测来自第一报告部分的信号。

在本公开的一些实施例中，本文描述了两种检测生物学样品中的靶标的方法。第一种方法利用缀合至酪酰胺或醌甲基化物前体部分(直接缀合或通过一个或多个接头间接缀合)的可检测部分(包括本文所述的那些中的任意一者)。第二种方法利用缀合(直接缀合或通过一个或多个接头间接缀合)至能够参与点击化学反应的反应性官能团的可检测部分(包括本文所述的那些中的任意一者)。美国专利第10,041,950号以及美国专利公开第2019/0204330、2017/0089911和2019/0187130号中描述了使用酪酰胺化学、醌甲基化物化学和点击化学检测生物学样品中的靶标的方法和试剂，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

在两种方法中，首先用酶标记生物学样品中的靶标。换句话说，这两种方法的第一步都是形成靶标-酶复合物。在一些实施例中，靶标-酶复合物用作本文所述的两种方法中的任意一种的进一步反应的中间体。用于标记靶标-酶复合物的合适的酶包括但不限于辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸苷酶或β-内酰胺酶。在一些实施例中，用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记靶标-酶复合物。

为了便于用酶标记靶标，在一些实施例中，将特定于靶标的特异性结合实体引入生物学样品中。参照图1A和1B，在一些实施例中，一种或多种特定于靶标的特异性结合实体为一抗(步骤101、111)。在引入一抗后，可以引入缀合至标记物(直接缀合或通过接头间接缀合)的二抗，其中该二抗特定于一抗(例如，二抗为抗一抗抗体)(步骤102、112)。在一些实施例中，二抗的标记物为酶，包括上述那些中的任意一种(参见图1B的步骤112)。

在其他实施例中，二抗的标记物为半抗原(参见图1A的步骤102)。半抗原的非限制性实例包括噁唑、吡唑、噻唑、苯并呋咱、三萜烯、脲、除罗丹明硫脲外的硫脲、除二硝基苯基或三硝基苯基外的硝基芳基、类鱼藤酮、环木脂体、杂联芳基、偶氮芳基、苯二氮

在一些实施例中，特异性结合实体为一抗缀合物或核酸探针缀合物。在一些实施例中，特异性结合实体为偶联至酶的一抗缀合物。在一些实施例中，一抗缀合物缀合至辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。在其他实施例中，特异性结合实体为缀合至酶(例如，辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶)的核酸探针缀合物。缀合至酶的特异性结合实体的引入有利于靶标-酶复合物的形成。

在一些实施例中，特异性结合实体为偶联至半抗原的一抗缀合物或特异性缀合至半抗原(包括美国专利第8，846，320号中所述的那些半抗原中的任意一种，该美国专利的公开内容通过引用全文并入本文)的核酸探针缀合物。在这些实施例中，缀合至半抗原的特异性结合实体的引入有利于半抗原标记的靶标的形成。在这些实施例中，将特定于半抗原标记的靶标的抗半抗原抗体-缀合物引入生物学样品中，以便用酶标记半抗原标记的靶标，以得到靶标-酶复合物。一抗缀合物、二抗和/或核酸探针可根据本领域普通技术人员已知的程序引入样品中，以用酶并且如本文所示对生物学样品中的靶标进行标记。

使用酪酰胺或醌甲基化物前体缀合物检测样品中的靶标的方法

在一些实施例中，本公开提供了使用可检测缀合物标记一个或多个靶标的方法，该可检测缀合物包含：(i)酪酰胺和/或醌甲基化物前体部分，以及(ii)可检测部分，其包括本文所述的任何可检测部分。在一些实施例中，样品内的两个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的三个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的四个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的五个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的六个或更多靶标可以用三种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的七个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的八个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的九个或更多靶标可以用三种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，样品内的十个或更多靶标可以用两种或更多种包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物进行比较。在一些实施例中，可检测缀合物具有式(VIII)。

在一些实施例中，并且参照图2，将具有第一靶标的生物学样品用第一酶标记(步骤201)，以形成第一靶标-酶复合物。用第一酶标记第一靶标的方法如上所述，并且还在图1A和1B中示出。然后使生物学样品与第一可检测缀合物接触(步骤202)，该第一可检测缀合物包括第一可检测部分(包括本文所述的那些中的任意一种)和酪酰胺、醌甲基化物前体或其衍生物或类似物。本文描述了包括酪酰胺部分、醌甲基化物前体部分或其衍生物或类似物的可检测缀合物的实例(参见例如，式(VIII)和(VIIIA)至(VIIIF))。在第一靶标-酶复合物的第一酶与第一可检测缀合物的酪酰胺或醌甲基化物前体部分相互作用时，该可检测缀合物的至少第一可检测部分沉积在第一靶标的近端或该第一靶标上(另外参见图3和4，其中示出可检测部分在生物学样品内的靶分子近端或靶分子上的沉积)。最后，检测来自第一可检测部分的信号(例如，使用明场显微镜)(步骤203)。检测来自一个或多个可检测部分的一个或多个信号的方法描述于PCT申请第WO/2014/143155号中，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

图3和4进一步示出在引入生物学样品的各种组分之间发生的反应。参照图4，首先将特异性结合实体15引入具有靶标5的生物学样品中，以形成靶标-检测探针复合物。在一些实施例中，特异性结合实体15为一抗。随后，将标记缀合物25引入生物学样品中，该标记缀合物25包含至少一种与其缀合的酶。在所示实施例中，标记缀合物25为二抗，其中该二抗为缀合至酶的抗物种抗体。接下来，引入可检测缀合物10，诸如包括本文所述的直接或间接偶联至醌甲基化物前体部分或其衍生物或类似物的任何可检测部分的可检测缀合物。在酶(例如，AP或β-Gal)与可检测缀合物10相互作用时，可检测缀合物10经历结构、构象或电子变化20，以形成组织反应性中间体30。在该特定实施例中，可检测缀合物包含醌甲基化物前体部分，该醌甲基化物前体部分在与(标记缀合物25的)碱性磷酸酶相互作用时，导致氟离去基团放出，得到相应的醌甲基化物中间体30。然后醌甲基化物中间体30与组织近端或直接在组织上形成共价键，以形成可检测部分复合物40。然后，来自可检测部分复合物40的信号可根据本领域普通技术人员已知的方法进行检测，诸如美国专利第10,041,950号以及美国专利公开第2019/0204330、2017/0089911和2019/0187130号以及PCT公开第WO/2014/143155号中所述的那些，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

参照图4，首先将特异性结合实体55引入具有靶标50的生物学样品中，以形成靶标-检测探针复合物。在一些实施例中，特异性结合实体55为一抗。随后，将标记缀合物60引入生物学样品中，该标记缀合物60包含至少一种与其缀合的酶。在所示实施例中，标记缀合物为二抗，其中该二抗为缀合至酶的抗物种抗体。接下来，引入可检测缀合物70，诸如包括本文所述的直接或间接偶联至酪酰胺部分或其衍生物或类似物的任何可检测部分的可检测缀合物。在酶与可检测缀合物70相互作用时，形成组织反应性中间体80。在该特定实施例中，可检测缀合物70包含酪酰胺部分，该酪酰胺部分在与辣根过氧化物酶相互作用时，引起自由基物种80的形成。然后自由基物质80与组织近端或直接在组织上形成共价键，以形成可检测部分复合物90。然后，来自可检测部分复合物90的信号可根据本领域普通技术人员已知的方法进行检测，诸如美国专利第10,041,950号以及美国专利公开第2019/0204330、2017/0089911和2019/0187130号以及PCT公开第WO/2014/143155号中所述的那些，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

在一些实施例中，将生物学样品用酶灭活组合物预处理，以基本上或完全灭活内源性过氧化物酶活性。例如，一些细胞或组织含有内源性过氧化物酶。使用HRP缀合的抗体可能导致高的、非特异性背景染色。该非特异性背景可通过用本文所公开的酶灭活组合物对样品进行预处理来减小。在一些实施例中，将样品仅用过氧化氢(约1重量％至约3重量％的适当的预处理溶液)进行预处理，以降低内源性过氧化物酶活性。一旦内源性过氧化物酶活性降低或失活，即可加入检测试剂盒，然后灭活检测试剂盒中存在的酶(如上所述)。所公开的酶失活组合物和方法也可用作灭活内源性酶过氧化物酶活性的方法。另外的灭活组合物描述于美国专利公开第2018/0120202号中，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

在一些实施例中，如果标本是嵌入石蜡中的样品，则可使用一种或多种适当的去石蜡液对该样品进行脱蜡。在废物清除器去除去石蜡流体后，可连续地将任意数量的物质施加至标本上。这些物质可以用于预处理(例如蛋白质交联、暴露核酸等)、变性、杂交、洗涤(如严格洗涤)、检测(如将显示或标志物分子与探针连接)、扩增(如扩增蛋白质、基因等)、复染、盖玻片等。

在其中检测多个靶标的实施例中(即，其中重复上述方法的步骤以检测样品中的多个靶标)，选择包括不同可检测部分(包括本文所述或任何具有本文所述的任何吸光度和/或FWHM的特性的那些中的任意一种)的可检测缀合物。例如，在一些实施例中，选择第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分，使得该第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，并且其不存在实质性重叠(例如，该不同的峰吸收波长相差至少约20nm、相差至少约25nm、相差至少约30nm、相差至少约40nm、相差至少约50nm、相差至少约60nm、相差至少约70nm、相差至少约80nm、相差至少约90nm、相差至少约100nm、相差至少约110nm、相差至少约120nm、相差至少约130nm、相差至少约140nm、相差至少约150nm、相差至少约170nm、相差至少约190nm、相差至少约210nm、相差至少约230nm、相差至少约250nm、相差至少约270nm、相差至少约290nm、相差至少约310nm等)。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测部分包含香豆素核。在一些实施例中，第二可检测部分在可见光谱范围内或红外光谱范围内。在一些实施例中，第二可检测部分在紫外光谱范围内。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有相隔至少20nm的最大吸收波长(λmax)。

在一些实施例中，第一可检测部分包含吩噁嗪酮核、4-羟基-3-吩噁嗪酮核、7-氨基-4-羟基-3-吩噁嗪酮核、硫堇鎓核、吩噁嗪核、吩噁噻-3-酮核或氧杂蒽核。在一些实施例中，第二可检测部分在紫外光谱范围内或红外光谱范围内。在一些实施例中，第二可检测部分在可见光谱范围内。在一些实施例中，其中第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有相隔至少20nm的最大吸收波长(λmax)。

在一些实施例中，第一可检测部分包含七甲川菁核或克酮酸盐核。在一些实施例中，第二可检测部分在可见光谱范围内或紫外光谱范围内。在一些实施例中，第二可检测部分在红外光谱范围内。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有相隔至少20nm的最大吸收波长(λmax)。

使用点击缀合物对检测样品中的靶标的方法

本公开还提供了使用点击缀合物对检测生物学样品内的一个或多个靶标(例如，两个或更多靶标、三个或更多靶标、四个或更多靶标、五个或更多靶标、六个或更多靶标、七个或更多靶标、八个或更多靶标、九个或更多靶标、十个或更多靶标等)，其中该点击缀合物对的一个成员为具有式(XII)的化合物。

在一些实施例中，任何包括本文所述的点击缀合物对的试剂盒都可以用于促进本文所公开的方法。虽然本文公开的某些实施例可涉及在IHC测定中结合使用点击缀合物，但本领域技术人员将认识到，点击缀合物也可以用于原位杂交(ISH)测定或IHC与ISH测定的任意组合。

在这些测定中，点击缀合物对的一个成员包含可检测缀合物，该可检测缀合物包含：(i)能够参与点击化学反应的第一官能团，以及(ii)可检测部分，包括本文所述的任何可检测部分。合适的可检测缀合物的非限制性实例如本文所述。点击缀合物对(以下称为“组织反应性缀合物”)的另一成员包含缀合物，该缀合物包含：(i)酪酰胺部分、醌甲基化物前体部分或酪酰胺部分或醌甲基化物前体部分的衍生物类似物；以及(ii)能够与可检测缀合物的第一官能团反应的第二官能团。偶联至可检测缀合物和组织反应性缀合物的合适的第一官能团和第二官能团中描述于本文的表1中。合适的组织反应性缀合物的非限制性实例如本文所述(参见式XIV)。其他合适的“组织反应性缀合物”描述于美国专利公开第2019/0204330、2017/0089911和2019/0187130号中，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

一般来说，作为用可检测部分(诸如本文所述的那些中的任意一种)标记靶标的第一步，包括使用醌甲基化物信号放大(″QMSA″)和/或酪酰胺信号放大(″TSA″)将组织反应性缀合物共价沉积到组织上。组织反应性缀合物的引入将反应性官能团对的第一成员引入生物学样品内的靶标中。这些扩大程序描述于美国专利公开第2019/0204330、2017/0089911和2019/0187130号中，其公开内容各自据此通过引用全文并入本文。然后，将可检测缀合物引入组织中。在两种“点击”缀合物(即，包含能够彼此反应的官能团组织反应性缀合物和可检测缀合物)之间迅速发生“点击”反应，将可检测部分共价结合至组织上如QMSA或TSA化学所指示的位置处。本文将更详细地描述这些步骤中的每一者。

在一些实施例中，并且参照图5，将具有第一靶标的生物学样品用第一酶标记(步骤501)，以形成第一靶标-酶复合物。用第一酶标记第一靶标标志物的方法如上所述，并且还在图1A和1B中示出。然后使生物学样品与第一组织反应性缀合物接触(步骤502)，该第一组织反应性缀合物包含能够参与点击化学反应的第一官能团(包括本文表1中所述的那些中的任意一种)和酪酰胺、醌甲基化物前体或其衍生物或类似物(参见例如，式(XIV)化合物)。在第一靶标标志物-酶复合物的第一酶与第一组织反应性缀合物的酪酰胺或醌甲基化物前体部分相互作用时，至少第一固定化组织-点击缀合物复合物沉积在第一靶标的近端或该第一靶标上(另外参见图6和7，其进一步示出可能发生的“点击化学”反应以及所得“第一固定化组织-点击缀合物复合物”和“第一固定化组织-点击加合物复合物”的形成)。在形成第一固定化组织-点击缀合物复合物后，然后使生物学样品与第一可检测缀合物接触，该第一可检测缀合物包含：(i)能够与第一固定化组织-点击缀合物复合物的第一反应性官能团反应的第二官能团，以及(ii)第一可检测部分(步骤503)。第一固定化组织-点击缀合物复合物与第一可检测缀合物的反应产物产生可检测的第一固定化组织-点击加合物复合物。最后，检测来自第一可检测部分的信号(例如，使用明场显微镜)(步骤504)。检测来自一个或多个可检测部分的一个或多个信号的方法描述于美国专利第10,778,913号中，其公开内容据此通过引用全文并入本文。

图6和7进一步示出具有组织反应性部分的点击缀合物对的第一成员10、20与靶标结合酶11、21之间的反应，以形成固定化组织-点击缀合物复合物13、23。该扩大方法的第一部分类似于QMSA和TSA扩大方法中所用的部分。图7和8示出固定化组织-点击缀合物13、23复合物与点击缀合物对的第二成员14、24之间的后续反应，以得到包含可检测报告部分的固定化组织-点击加合物复合物15、25。

参照图6，使包含反应性官能团的组织反应性缀合物10与靶标结合酶11接触，以产生反应性中间体12。在该实例中，反应性中间体醌甲基化物前体与生物学样品上或生物学样品内的亲核试剂形成共价键，从而得到固定化组织点击-缀合物复合物13。然后，固定化组织-点击缀合物复合物可以与具有本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物14反应，前提条件是该组织反应性缀合物10和可检测缀合物14具有可以彼此反应以形成共价键的反应性官能团。固定化组织-点击缀合物复合物13与点击缀合物14的反应产物产生固定化组织-点击加合物复合物15。组织-点击加合物15可借助由连接的可检测部分所发射的信号来检测。

类似地并且参照图7，使包含反应性官能团的组织反应性缀合物20与靶标结合酶21接触，以产生反应性中间体22，即酪酰胺自由基物种(或其衍生物)。然后，酪酰胺自由基中间体可以与生物学样品形成共价键，从而得到固定化组织-点击缀合物复合物23。然后，固定化组织-点击缀合物复合物可以与包含本文所述的任何可检测部分的可检测缀合物24反应，前提条件是组织反应性缀合物与可检测缀合物20和24分别具有可以彼此反应以形成共价键的反应性官能团。固定化组织-点击缀合物复合物23与点击缀合物24的反应产物产生组织-点击加合物复合物25。

在其中检测多个靶标的实施例中(即，其中重复上述方法的步骤以检测样品中的多个靶标)，选择包括不同可检测部分(包括本文所述或任何具有本文所述的任何吸光度和/或FWHM的特性的那些中的任意一种)的可检测缀合物。例如，在一些实施例中，选择第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分，使得该第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，并且其不存在实质性重叠(例如，该不同的峰吸收波长相差至少约20nm、相差至少约25nm、相差至少约30nm、相差至少约40nm、相差至少约50nm、相差至少约60nm、相差至少约70nm、相差至少约80nm、相差至少约90nm、相差至少约100nm、相差至少约110nm、相差至少约120nm、相差至少约130nm、相差至少约140nm、相差至少约150nm、相差至少约170nm、相差至少约190nm、相差至少约210nm、相差至少约230nm、相差至少约250nm、相差至少约270nm、相差至少约290nm、相差至少约310nm等)。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于200nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于130nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于100nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于80nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少20nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少30nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少40nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少50nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有不同的峰吸收波长，其中该第一可检测部分和第二可检测部分的不同峰吸收波长相隔至少70nm，并且其中第一可检测部分和第二可检测部分中的任一者具有小于60nm的FWHM。

在一些实施例中，第一可检测部分包含香豆素核。在一些实施例中，第二可检测部分在可见光谱范围内或红外光谱范围内。在一些实施例中，第二可检测部分在紫外光谱范围内。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有相隔至少20nm的最大吸收波长(λmax)。

在一些实施例中，第一可检测部分包含吩噁嗪酮核、4-羟基-3-吩噁嗪酮核、7-氨基-4-羟基-3-吩噁嗪酮核、硫堇鎓核、吩噁嗪核、吩噁噻-3-酮核或氧杂蒽核。在一些实施例中，第二可检测部分在紫外光谱范围内或红外光谱范围内。在一些实施例中，第二可检测部分在可见光谱范围内。在一些实施例中，其中第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有相隔至少20nm的最大吸收波长(λmax)。

在一些实施例中，第一可检测部分包含七甲川菁核或克酮酸盐核。在一些实施例中，第二可检测部分在可见光谱范围内或紫外光谱范围内。在一些实施例中，第二可检测部分在红外光谱范围内。在一些实施例中，第一可检测缀合物和第二可检测缀合物的第一可检测部分和第二可检测部分具有相隔至少20nm的最大吸收波长(λmax)。

自动化

本公开的测定和方法可以是自动化的，并且可以与标本处理设备组合。标本处理设备可以是自动化设备，例如Ventana Medical Systems，Inc.销售的BENCHMARK XT仪器和DISCOVERY XT仪器。VentanaMedical Systems，Inc.是多项美国专利的代理人，这些专利公开了执行自动分析的系统和方法，包括美国专利第5,650,327号、第5,654,200号、第6,296,809号、第6,352,861号、第6,827,901号和第6,943,029号，以及美国已公布的专利申请第20030211630号和第20040052685号，其各自据此通过引用全文并入本文。替代地，还可以人工处理标本。

该标本处理设备可以将固定剂涂在标本上。固定剂可以包括交联剂(例如醛类，如甲醛、聚甲醛和戊二醛，以及非醛类交联剂)、氧化剂(如金属离子和络合物，例如四氧化二锇和铬酸)、蛋白质变性剂(如乙酸、甲醇和乙醇)、机理不明的固定剂(如氯化汞、丙酮和苦味酸)、组合试剂(如Camoy固定剂、Methacarn、Bouin液、B5固定剂、Rossman液和Gendre液)、微波以及其他固定剂(如排除体积固定和蒸汽固定)。

如果标本为嵌入石蜡中的样品，可通过标本处理设备使用相应的去石蜡流体对样品进行去石蜡。在废物清除器去除去石蜡流体后，可连续地将任意数量的物质施加至标本上。这些物质可以用于预处理(例如蛋白质交联、暴露核酸等)、变性、杂交、洗涤(如严格洗涤)、检测(如将显示或标志物分子与探针连接)、扩增(如扩增蛋白质、基因等)、复染、盖玻片等。

标本处理设备可以将各种不同的化学物质应用到标本。这些化学物质包括但不限于染色剂、探针、试剂、漂洗剂和/或调节剂。这些化学物质可以是流体(如气体、液体或气体/液体混合物)或类似物质。所述流体可以是溶剂(如极性溶剂、非极性溶剂等)、溶液(如水溶液或其他类型的溶液)或类似物质。试剂可以包括但不限于染色剂、润湿剂、抗体(如单克隆抗体、多克隆抗体等)、抗原回收液(如水基或非水基抗原修复液、抗原回收缓冲液等)或类似物质。探针可为分离的核酸或分离的合成寡核苷酸，其连接至可检测标记。标记可以包括放射性同位素、酶底物、辅助因子、配体、化学发光或荧光剂、半抗原和酶。

样本处理完毕后，用户可以将样本载片运送到成像设备上。本文所用的成像设备为明视野成像器幻灯扫描仪。一种明场成像器是由Ventana Medical Systems，Inc.销售的iScan Coreo

复染

复染是在样品已经用试剂染色以检测一个或多个靶标后对样品进行后处理，使得可以在显微镜下更容易地观察它们的结构的方法。例如，在盖玻片之前可任选地使用复染剂，以使免疫组织化学染色更明显。复染剂的颜色不同于初染剂。许多复染剂是众所周知的，诸如苏木素、曙红、甲基绿、亚甲蓝、姬姆色素、阿尔新蓝和核固红。可使用DAPI(4′，6-二脒基-2-苯基吲哚)为荧光染色剂。

在一些实例中，可将一种以上的染色剂混合在一起以得到复染剂。这提供了灵活性和选择染色剂的能力。例如，可针对具有特定属性但不具有其他所需属性的混合物选择第一染色剂。可以将第二染色剂添加至混合物中，其显示缺少的所需属性。例如，可将甲苯胺蓝、DAPI和滂胺天蓝混合在一起以形成复染剂。

检测和/或成像

本发明所公开的实施例的某些方面或全部可实现自动化，并且由计算机分析和/或图像分析系统带来便利。在一些应用中，测量精确的颜色或荧光比率。在一些实施例中，利用光学显微镜进行图像分析。某些公开的实施例涉及采集数字图像。这可以通过将数码相机耦接至显微镜来完成。使用图像分析软件对获得的染色样品的数字图像进行分析。可以通过多种不同的方法来测量颜色或荧光。例如，颜色可以用红色、蓝色和绿色值以及色相、饱和度和强度值来衡量；和/或通过使用光谱成像相机测量特定的波长或波长范围。还可对样品进行定性和半定量评估。定性评估包括评估染色强度、鉴定阳性染色细胞和参与染色的细胞内结构以及评估总体样品或载玻片质量。对检测样品进行单独评估，并且该分析可包括与已知平均值的比较，以确定样品是否代表异常状态。

合适的检测方法描述于PCT申请第WO/2014/143155号和美国专利第10,778,913号中，其公开内容据此通过引用全文并入本文。在一些实施例中，合适的检测系统包括成像设备、一个或多个镜头以及与成像设备通信的显示器。成像设备包括用于顺序发射能量的装置和用于捕获图像/视频的装置。在一些实施例中，定位用于捕获的装置以捕获标本图像，这些图像各自对应于暴露于能量的标本。在一些实施例中，用于捕获的装置可包括一个或多个定位在带有生物学样品的显微镜载玻片的正面和/或背面的相机。在一些实施例中，显示装置包括显示器或屏幕。在一些实施例中，用于顺序发射能量的装置包括多个能量发射器。每个能量发射器可包括一个或多个IR能量发射器、UV能量发射器、LED光发射器、它们的组合或其他类型的能量发射装置。成像系统可进一步包括用于基于通过用于捕获的装置所捕获的标本图像来产生对比度增强的彩色图像数据的装置。显示装置显示基于对比度增强的彩色图像数据来显示标本。

样品和靶标

样品包括生物成分，并且通常怀疑其包含一种或多种感兴趣的靶分子。靶分子可以在细胞表面，并且细胞可以在悬液或组织切片中。靶分子也可以在细胞内，并且在细胞裂解或通过探针穿透细胞后进行检测。本领域的普通技术人员将认识到，检测样品中靶分子的方法将根据样品类型和所用探针而变化。采集和制备样品的方法是本领域已知的。

可使用本领域的普通技术人员已知的任何方法来制备用于该方法的实施例中并且具有本文所公开的组合物的样品，诸如组织或其他生物学样品。样品可得自接受常规筛查的受试者，或得自疑似患有病症的受试者，诸如遗传异常、感染或瘤形成。本发明所公开的方法的所述实施例还可应用于无遗传异常、疾病、病症等的样品，这些样品称为“正常”样品。此类正常样品在诸多用途之外可用作与其他样品进行比较的对照。可出于多种不同的目的对样品进行分析。例如，样品可用于科学研究中，或用于诊断可疑的疾病，或用作治疗成功、生存期等的预后指标。

样品可能包含可由探针或报告分子特异性结合的多种靶标。靶标可以是核酸序列或蛋白质。在整个本公开中，当提及靶蛋白时，应当理解，与该蛋白质相关联的核酸序列也可用作靶标。在一些实例中，靶标为来自病原体(诸如病毒、细菌)或细胞内寄生物(诸如来自病毒基因组)的蛋白质或核酸分子。例如，靶蛋白可以由与疾病相关(例如，关联、存在因果关系等)的靶核酸序列产生。

靶核酸序列的大小可存在实质性差异。不受限制地，核酸序列可具有可变数量的核酸残基。例如，靶核酸序列可具有至少约10个核酸残基或至少约20、30、50、100、150、500、1000个残基。类似地，靶多肽的大小可存在实质性差异。不受限制地，靶多肽将包括至少一个与肽特异性抗体或其片段结合的表位。在一些实施例中，该多肽可包括至少两个与肽特异性抗体或其片段结合的表位。

在具体的非限制性实例中，靶蛋白由与肿瘤(例如，癌症)相关联的靶核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生。在肿瘤细胞中，尤其是在癌细胞(诸如B细胞和T细胞白血病、淋巴瘤、乳腺癌、结肠癌、神经系统癌等)中，已经鉴定出许多染色体异常(包括易位及其他重排、扩增或缺失)。因此，在一些实例中，靶分子的至少一部分由样品中的至少细胞亚群中扩增或缺失的核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生。

已知癌基因是导致若干人恶性肿瘤的原因。例如，涉及位于染色体18q11.2断点区的SYT基因的染色体重排常见于滑膜肉瘤软组织肿瘤中。可使用具有不同标记物的探针来鉴别t(18q11.2)易位：第一探针包括从SYT基因向远侧延伸的靶核酸序列所产生的FPC核酸分子，第二探针包括从延伸至SYT基因3′端或近侧的靶核酸序列所产生的FPC核酸。当与这些靶核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)对应的探针用于原位杂交程序时，在SYT基因区缺乏t(18q11.2)的正常细胞表现出两个融合(由非常接近的两个标记物产生)信号，反映SYT的两个完整拷贝。具有t(18q11.2)的异常细胞表现出单一融合信号。

在其他实例中，选择的由核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生的靶蛋白为肿瘤细胞中缺失(丢失)的肿瘤抑制基因。例如，在某些膀胱癌中，位于染色体9p21上的p16区(包括D9S1749、D9S1747、p16(INK4A)、p14(ARF)、D9S1748、p15(INK4B)和D9S1752)缺失。涉及染色体1的短臂的远端区域(包括例如SHGC57243、TP73、EGFL3、ABL2、ANGPTL1和SHGC-1322)和19号染色体(包括MAN2B1、ZNF443、ZNF44、CRX、GLTSCR2和GLTSCR1)的着丝粒区域(例如19p13-19q13)的染色体缺失是某些类型的中枢神经系统实体瘤的特征性分子特征。

上述实例仅出于举例说明的目的提供，并非旨在进行限制。与致瘤性转化和/或生长相关的许多其他细胞遗传学异常是本领域的普通技术人员所知的。由核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生的与致瘤性转化相关并且可用于本发明所公开的方法中的靶蛋白还包括EGFR基因(7p12；例如，GENBANK

在其他实例中，靶蛋白选自与疾病或病症相关联的病毒或其他微生物。检测细胞或组织样品中的病毒或微生物来源的靶核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)，指示该生物体的存在。例如，靶肽、多肽或蛋白质可选自致癌或病源病毒、细菌或细胞内寄生虫(诸如恶性疟原虫和其他疟原虫种类、利什曼原虫种、细小隐孢子虫、溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫以及弓形虫、艾美耳球虫、泰勒氏虫和巴贝虫种)。

在一些实例中，靶蛋白由来自病毒基因组的核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生。示例性病毒和相应的基因组序列(括号中为GENBANK

在某些实例中，靶蛋白由致癌病毒(例如，爱泼斯坦-巴尔病毒病毒(EBV)或人乳头瘤病毒(HPV，例如，HPV16、HPV18)的核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生。在其他实例中，由核酸序列(例如，基因组靶核酸序列)产生的靶蛋白来自病源病毒，诸如呼吸道合胞病毒、肝炎病毒(例如，丙型肝炎病毒)、冠状病毒(例如，SARS病毒)、腺病毒、多瘤病毒、巨细胞病毒(CMV)或单纯疱疹病毒(HSV)。

实例

载玻片上吸收光谱

在钨灯照明下，记录放置在Olympus BX-63显微镜载物台上的载玻片固定的标本的沉积色原和常规染色剂的吸收光谱。使用Pryor ScientificInc.(Rockland，MA)Lumaspec 800功率计测量在350nm与800nm之间(增量为大约0.5nm)的透射光。将该功率计升级为Ocean HDX UV至NIR光谱仪，其允许测量在200nm与1100nm之间的光谱。将通过载玻片染色区透射的光谱除以通过未染色区域透射的光谱以得到透射率(T)光谱，使用关系A＝log10(1/T)将其转换为色原吸光度(A)光谱。

免疫组织化学

为获得单个色原的载玻片上吸收光谱，利用IHC对扁桃体上的Ki67进行染色。使用Discovery Universal Procedure创建用于IHC的方案。在37℃进行IHC，如下所述。通过将载玻片温热至70℃进行3次循环(各8分钟长)，对载玻片固定的石蜡切片进行脱蜡。通过应用细胞前处理清洗1(VMSI目录号950-124)进行抗原修复，将载玻片温热至94℃持续64分钟。Ki67的染色在连续步骤中进行，包括：与靶向生物标志物的一抗一起孵育，在反应缓冲液中洗涤以去除未结合抗体，与缀合至靶向一抗的HRP的抗物种抗体(山羊抗兔抗体)一起孵育，用反应缓冲液洗涤，与酪酰胺或酪酰胺DBCO一起孵育，用反应缓冲液洗涤，与色原叠氮化物一起孵育(如果适用)，以及用反应缓冲液洗涤。然后将载玻片在环境温度下通过系列乙醇系列(2x80％乙醇，各1分钟；2x90％乙醇，各1分钟；3x100％乙醇、3x二甲苯，各1分钟)手动脱水，并且使用Sukura自动封片机盖玻片。

实例-可检测部分及其在多重明场免疫组织化学中的用途

前言

方法

全自动化多重分析IHC在Ventana Discovery Ultra system(Ventana MedicalSystems，Inc.)上执行。单标志物DAB染色使用Benchmark XT或Benchmark Ultra系统和ultraView通用DAB检测试剂盒(目录号760-500)根据制造商的建议(Ventana MedicalSystems，Inc.)完成。单独使用3种可检测部分中的每一种进行单一IHC。利用AMC-tyr和HC-tyr，使用抗HER2一抗和过氧化物酶-抗兔IgG二抗对Calu-3异种移植物上的HER2进行染色。每种色原作为1mM在10％DMSO的溶液来使用(Bill Day笔记本)。使用Cy7-QM进行IHC，以检测具有若干不同浓度(200μg、400μg和800μg)和pH值(pH 8和10)的扁桃体组织中的Ki67(JuliaAshworth-Sharpe笔记本)。在未滤光的钨灯照明(典型的明场观察)以及在使用透射每种色原的吸收区域的光的带通滤光片的条件下观察染色载玻片。用于AMC-tyr、HC-tyr和C7-QM的滤光片分别为376nm(30nm)、405nm(30nm)和725nm(48nm)，其中第一各数字是透射谱带的中心波长，并且括号中的数字为最大透射率一半处的谱带全宽(FWHM)。将滤光片固定在位于灯与Olympus BX-51显微镜(Olympus，Waltham，MA)照明端口之间的SutterLambda 10-310位滤光轮(SutterInstruments，Novato，CA)中。使用PhotometricsEZ2CoolSnap黑白CCD相机记录数字图像(Teledyne Photometrics，Tucson，AZ)。使用Micromanager软件控制单个显微镜视野图像的采集，并且使用ImageJ进行图像处理。

使用Discovery Universal Procedure通用程序创建用于多重IHC和苏木精的方案。一般来说，除非另有说明，否则多重IHC在37℃进行，如下所述。通过将载玻片温热至70℃进行3次循环(各8分钟长)，对载玻片固定的石蜡切片进行脱蜡。通过应用细胞前处理清洗l(VMSI目录号950-124)进行抗原修复，将载玻片温热至94℃持续64分钟。各生物标志物的染色在连续步骤中进行，包括：与靶向该生物标志物的一抗一起孵育，在反应缓冲液中洗涤以去除未结合抗体，与缀合至过氧化物酶或碱性磷酸酶(具体取决于色原是酪酰胺还是醌甲基化物衍生物)靶向一抗的抗物种抗体(抗小鼠或抗兔抗体)一起孵育，用反应缓冲液洗涤，与酪酰胺或醌甲基化物前体显色试剂孵育，以及用反应缓冲液洗涤。在依次应用下一生物标志物之前，将载玻片与细胞前处理清洗2(VMSI目录号950-123)在100℃孵育8分钟，然后在反应缓冲液中洗涤。然后用稀释的苏木精II(VMSI目录号790-2208)和蓝化液(VMSI目录号760-2037)对载玻片复染4分钟，并且用反应缓冲液洗涤。然后将载玻片在环境温度下通过系列乙醇系列(2x80％乙醇，各1分钟；2x90％乙醇，各1分钟；3x100％乙醇、3x二甲苯，各1分钟)手动脱水，并且固定在Cytoseal xyl(ThermoFisher Scientific，Waltham，MA)中。使用以下滤光片评价多重分析IHC，以对7种色原和苏木精(单带通滤光片中心波长和括号中的FWHM)中的每一者进行成像：AMCA 376nm(30nm)、Dabsyl 438nm(29.5)、Rhod110510(15)、TAMRA 549(17.6)、SRhod110 580(21.2)、HTX 620(19.3)、Cy5 676(39.9)和Cy7725(48)。使用为ImageJ编写的宏对图像进行分解以校正光谱重叠(8、9)并且进行彩色合成。

结果

将AMCA-tyr和Cy7-QM与5种可见酪酰胺和QM色原以及苏木精核复染一起用于前列腺组织的多重IHC。多重IHC由基底细胞生物标志物P504s(AMACR)、Ki67、CD8、ERG、PSMA和PTEN的一抗以及过氧化物酶和碱性磷酸酶缀合的抗物种抗体组成。分别用5种可见共价沉积的色原磺酰罗丹明101-酪酰胺、TAMRA-酪酰胺、Dabsyl-醌甲基化物、罗丹明110-酪酰胺、Cy5-醌甲基化物和2种可检测部分AMCA-酪酰胺和Cy7-醌甲基化物来检测生物标志物。多重IHC采用苏木精处理以对细胞核进行染色。使用钨灯照明和8种不同的单带通滤光片对若干显微镜场进行成像，以突出显示7种不同的色原和苏木精复染，并且将图像在光谱上分解(参见图13A至20A)。将前列腺肿瘤标本的七个不同系列切片分别用其中一个生物标志物染色并且用DAB进行检测。多重分析图像的相应区域的图像如图13B至20B所示。图21示出由多重IHC的8张分解的色原图像所构建的彩色合成图像。用于检测各生物标志物的色原、用于对各色原进行成像的带通滤光片的中心波长以及各分解色原图像的伪颜色分配和加权因子(增益)列于表2中。

结论

表2.用于图5至13的多重IHC生物标志物、色原、滤光片和伪彩色化方案。

本说明书中提到的和/或申请数据表中列出的所有美国专利、美国专利申请公开、美国专利申请、国外专利、国外专利申请以及非专利公开均通过引用整体并入本文。如有必要，可对实施例的各个方面进行修改，从而采用各类专利、应用和公开的概念来提供其他进一步的实施例。

尽管本文已参考具体实施方案描述本公开，但应当理解，这些实施例仅说明性地表示本公开的原理和应用。因此，应当理解，可以对说明性实施例进行许多修改，并且可以在不脱离所附权利要求所限定本公开的精神和范围的情况下设计其他布置方式。