一种II型聚酮化合物Actketone及其制备方法和应用
文献发布时间:2024-04-18 19:58:21
技术领域
本发明涉及医药技术领域,是来自放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC15665菌株所产的,具体涉及一种来源于放线菌的一种II型聚酮化合物actketone及其制备方法和应用。
背景技术
天然产物是自然界生物体在进化过程中为了适应环境、竞争拮抗、沟通交流、抵御外侵、传递信号等而产生的代谢产物。从这个意义上讲,天然产物本身就赋予了特定的生物活性。天然产物也一直被认为是新药发现的重要源泉。
目前,缺乏一种来源于放线菌的一种II型聚酮化合物actketone及其制备方法和应用。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的问题,而提出的一种来源于放线菌的一种II型聚酮化合物actketone及其制备方法和应用。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:本发明的一种II型聚酮类化合物actketone,所述的II型聚酮类化合物actketone的化学结构式如式(I)所示:
本发明所述的II型聚酮类化合物actketone的制备方法,包括如下步骤:
(1)将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株,采用38#平板发酵培养;
(2)将步骤(1)所得培养基切成小块,放入F培养基中,30℃摇床120rpm培养7天;
(3)将步骤(2)所得培养基采用乙酸乙酯萃取,浓缩得到浸粗膏F1;
(3)对浸粗膏F1进行正向硅胶柱层析,先采用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱,再用二氯甲烷和甲醇洗脱,共获得10个组分;
(4)再将第四出峰组分,分别经反向硅胶、凝胶柱层析和HPLC分离纯化,制得的II型聚酮类化合物actketone。
进一步地,在步骤(1)中,38#平板发酵培养的培养条件为26~30℃培养7天。
进一步地,在步骤(4)中,HPLC色谱条件为:使用反相色谱柱,流动相A:水,流动相B:乙腈,梯度洗脱程序为:流动相A的质量百分比为5%,流动相B的质量百分比为95%,时间为18min;HPLC分离纯化过程如下:semi-HPLC半制备反相高效液相色谱:ODS-2Hypersilcolum,5μm,250mm×10mm,流动相为:乙腈和水体积比为4:1,以2mL/min流速梯度洗脱18min,泵的型号为Hitachi pump L-7100,紫外灯的型号为UV detector L-7400。
本发明所述的II型聚酮类化合物actketone在制备治疗乳腺癌药物中的应用。
进一步地,所述的II型聚酮类化合物actketone在制备治疗乳腺癌疾病的先导药物中的应用。
进一步地,所述的II型聚酮类化合物actketone能够显著的抑制乳腺癌MCF-7细胞。
有益效果:本发明首次从放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株的发酵产物中,发现了一种II型聚酮化合物actketone,其细胞毒活性数据表明,actketone能够显著的抑制乳腺癌MCF-7细胞,其IC50值为26.8μM,可进一步作为用于治疗乳腺癌疾病的先导药物。
附图说明
图1为
图2位
图3为DEPT-135NMR谱图。
图4为HSQC NMR谱图。
图5为
图6为HMBC NMR谱图。
图7为NOESY NMR谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
实施例1
本发明的一种II型聚酮化合物actketone,所述的II型聚酮类化合物actketone的化学结构式如式(I)所示:
本发明所述的一种II型聚酮化合物actketone的制备方法,包括如下步骤:
(1)将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株,采用38#平板发酵培养;放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株是从日本NBRC菌种保藏中心购买。
(2)将步骤(1)所得培养基切成小块,放入F培养基中,30℃摇床120rpm培养7天;
(3)将步骤(2)所得培养基采用乙酸乙酯萃取,浓缩得到浸粗膏F1;
(3)对浸粗膏F1进行正向硅胶柱层析,先采用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱,再用二氯甲烷和甲醇洗脱,共获得10个组分;
(4)再将第四出峰组分,分别经反向硅胶、凝胶柱层析和HPLC分离纯化,制得一种II型聚酮化合物actketone。HPLC色谱条件为:使用反相色谱柱,流动相A:水,流动相B:乙腈,等度洗脱程序为:流动相A的质量百分比为5%,流动相B的质量百分比为95%,时间为18min。HPLC分离纯化过程如下:semi-HPLC半制备反相高效液相色谱:ODS-2 Hypersilcolum,5μm,250mm×10mm,流动相为:乙腈-水体积比=4:1,以2mL/min流速梯度洗脱18min;泵的型号可以为Hitachi pump L-7100,紫外灯的型号可以为UV detector L-7400。
本发明所述的一种II型聚酮化合物actketone在制备治疗乳腺癌疾病的先导药物中的应用。
本发明所述的II型聚酮化合物actketone能够显著的抑制乳腺癌MCF-7细胞,其IC50值为26.8μM。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于:
本发明所述的一种II型聚酮化合物actketone的制备方法,包括如下步骤:
在步骤(1)中,将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株,采用38#平板发酵培养;38#平板发酵培养的培养条件为30℃培养7天。
试验例1
Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株的活化。
将放线菌Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株的冻存干粉涂布于38#平板培养基(蛋白胨:20.0g,磷酸氢二钾:1.5g,硫酸镁:1.5g,琼脂:15.0g,水1L)中,置于30℃恒温箱中培养,得到该放线菌。
试验例2
Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665菌株F培养基发酵
将菌株Actinokineospora diospyrosa NBRC 15665转接至平板38#培养基上,在30℃恒温箱中进行培养7天。待菌丝体铺满平板后,将其切成小方块,转入F培养基中,30℃摇床120rpm培养7天。
试验例3
actketone的提取与分离
试验例2中所得的F培养基加入乙酸乙酯萃取,浓缩得到浸膏F1。对浸膏F1进行正向硅胶柱层析,先用石油醚和乙酸乙酯进行洗脱,再用二氯甲烷和甲醇洗脱,得到10个组分;再将第四出峰组分,分别经反向硅胶、凝胶柱层析和semi-HPLC(色谱柱:AllsphereODS-2.5mm column),乙腈-水体系,以2mL/min流速,乙腈-水体积比=14:1等度洗脱18min,制得本发明所述actketone(6.0mg)。泵的型号可以为Hitachi pump L-7100,紫外灯的型号可以为UV detector L-7400。
试验例4
actketone的结构鉴定详见附图1-7。acautalides A
表1
actketone结构如下:
试验例5
细胞毒活性试验
用含有体积分数为10%胎牛血清的MEM完全培养液,在含有体积分数5%CO
本发明的细胞毒活性实验表明,actketone具有显著的抑制乳腺癌细胞毒活性,可进一步作为开发治疗乳腺癌疾病的先导药物。本发明所述actketone的结构是基于质谱、核磁共振谱确定的。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
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