新型肝选择性聚腺苷酸化聚合酶抑制剂及其使用方法
文献发布时间：2024-04-18 19:58:53
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年4月4日提交的美国临时专利申请第63/170,561号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
技术领域
本发明描述了可用作肝选择性聚腺苷酸化聚合酶5和7(PAPD 5&7)抑制剂的化合物和方法，其可用于治疗乙型肝炎和相关病症。本发明还描述了用于治疗肝癌和其它涉及聚腺苷酸化聚合酶5和7活性的疾病的新化学型。
背景技术
患者血清中高水平的乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)是慢性乙型肝炎(CHB)的常见特征，慢性乙型肝炎(CHB)感染全世界2.58亿人，并且由于肝硬化，肝细胞癌(HCC)和肝衰竭每年导致88万人死亡。减少HBsAg抗原血症(血液中的HBsAg)已成为CHB治疗主要终点的三个目标之一，另外还有减少病毒血症和肝源性转氨酶血液水平正常化。部分原因是HBsAg除了是完成病毒生命周期所必需的蛋白质外，还被认为在免疫抑制和维持慢性感染状态中发挥作用。尽管目前使用聚乙二醇化干扰素α或核苷(酸)类似物(NUC)的护理药物标准可以抑制病毒复制，但没有一种药物能可靠地诱导HBsAg丢失。因此，非常需要开发新的HBV治疗剂。
最近，据报道，二氢喹嗪酮(DHQ)化合物RG-7834(DHQ-1)能够可靠地降低组织培养物和动物模型中多种HBV基因产物(包括HBsAg和HBeAg)以及HBV DNA的水平。对携带人肝细胞的HBV感染uPA-SCID小鼠口服RG-7834(DHQ-1)治疗，导致循环中HBsAg减少1个对数。此外，在慢性感染土拨鼠肝炎病毒(WHV)的土拨鼠中，口服给药RG-7834诱导血液中WHV和表面蛋白的多对数减少。
DHQ-1的作用机制现在是已知的。它是细胞(病毒宿主)聚腺苷酸化聚合酶5和7(PAPD 5&7)的抑制剂。PAPD 5和7是非典型的多聚腺苷酸化聚合酶，它们介导短腺苷化作用，并为异常细胞转录本的降解和非编码转录子集的成熟提供信号。我们和其他人还发现，PAPD 5和7的抑制是其抗-HBV活性的基础。用DHQ-1抑制PAPD5和或7会导致HBV RNA水平下降，这表明HBV mRNA的行为与大多数宿主mRNA非常不同。这为抗病毒药物开发提供了新的机会。
被这种新颖的化学型和独特的机制所吸引，自DHQ-1首次报告以来的过去五年中，一些公司和机构已经根据发表的DHQ-1结构提出了专利申请。然而，由于毒性问题，特别是从DHQ-1观察到的急性神经毒性倾向，DHQ-1的开发受到阻挠。由于PAPD 5和7是参与宿主RNA合成和衰变的细胞酶，因此PAPD5/7抑制剂的系统使用对宿主功能的影响并不令人惊讶。因此，具有对作为HBV靶向细胞的肝细胞更具选择性的药物是最小化或消除由DHQ向其它组织的不适当分布导致的不必要的副作用的一种方式。因此，肝选择性PAPD5/7抑制剂具有改善用作抗HBV疗法的PAPD5/7抑制剂的安全性的潜力。
发明内容
本发明涉及新的PAPD 5和7的肝选择性抑制剂，式(I)的化合物，
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、同位素异构体、前药和复合物，其中：
X
当X
当X
Z
Z
Z
X
X
X
X
当X
当X
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在一些实施方案中，R
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R
在一些实施方案中，R
在一些实施方案中，R
R
R
在一些实施方案中，R
当X
当X
R
本发明还涉及组合物，其包括：
有效量的一种或多种本发明化合物和赋形剂。
本发明还涉及用于治疗或预防涉及PAPD 5和7的疾病(包括例如乙型肝炎)的方法，该方法包括向受试者施用有效量的根据本发明的化合物或组合物。
本发明还涉及用于治疗或预防涉及PAPD 5和7的疾病(包括例如乙型肝炎)的方法，其中该方法包括向受试者施用包括有效量的一种或多种根据本发明的化合物和赋形剂的组合物。
本发明还涉及治疗或预防与乙型肝炎相关的疾病或病症以及涉及PAPD 5和7的疾病的方法。该方法包括向受试者施用有效量的根据本发明的化合物或组合物。
本发明还涉及用于治疗或预防与乙型肝炎相关的疾病或病症以及涉及PAPD 5和7的疾病的方法，其中该方法包括向受试者施用包括有效量的一种或多种根据本发明的化合物和赋形剂的组合物。
本发明还涉及治疗或预防与PAPD 5和7相关的疾病或病症的方法。该方法包括向受试者施用有效量的根据本发明的化合物或组合物。
本发明还涉及用于治疗或预防与PAPD 5和7相关的疾病或病症的方法，其中该方法包括向受试者施用包括有效量的一种或多种根据本发明的化合物和赋形剂的组合物。
本发明还涉及制备本发明的肝选择性PAPD 5和7抑制剂的方法。
通过阅读以下详细描述和所附权利要求，这些和其它目的、特征和优点对于本领域普通技术人员将变得显而易见。除非另有说明，本文中的所有百分比、比率和比例均以重量计。除非另有说明，所有温度均为摄氏度(℃)。所有引用的文献均在相关部分中，通过引用结合到本文中；任何文献的引用不应被解释为承认其是关于本发明的现有技术。
附图说明
图1描绘了在CD1小鼠中3mg/kg IV和8mg/kg PO后65042-E-OH(实施例6)的平均血药浓度与时间的曲线。
图2描绘了在CD1小鼠中8mg/kg PO后65042-E-OH(实施例6)的平均血浆和肝脏浓度与时间的曲线。
具体实施方式
本发明的PAPD 5和7药剂的肝选择性抑制剂能够治疗和预防与乙型肝炎病毒表面抗原有关的疾病，例如乙型肝炎。已经发现本公开的化合物是PAPD 5和7的抑制剂。此外，已经确定本公开的化合物是有机阴离子转运多肽蛋白1B1(OATP1B1)和有机阴离子转运多肽蛋白1B3(OATP1B3)的底物，这一特征在相关化合物如DHQ-1中未见到。已经进一步确定，与全身循环相比，本公开的化合物充当OATP1B1和OATP1B3的底物的能力导致化合物在肝脏中意外的，优先的浓度。
在整个说明书中，在组合物被描述为具有、包含或包括特定组分的情况下，或在方法被描述为具有、包含或包括特定方法步骤的情况下，预期本发明的组合物还基本上由所述组分组成或由所述组分组成，并且本发明的方法还基本上由所述处理步骤组成或由所述处理步骤组成。
在本申请中，当元件或组分被描述为包括在列举的元件或组分的列表中和/或从列举的元件或组分的列表中选择时，应当理解，元件或组分可以是列举的元件或组分中的任一种，并且可以选自由列举的元件或组分中的两种或更多种。
除非另外特别说明，本文中单数的使用包括复数(反之亦然)。此外，当术语“约”在定量值之前使用时，除非另外具体说明，本发明还包括具体的定量值本身。
应当理解，只要本发明保持可操作，步骤的顺序或执行某些动作的顺序是不重要的。此外，可以同时进行两个或更多个步骤或动作。
本文所用的术语“卤素”是指氯、溴、氟和碘。
如本文所用，除非另外指明，否则“烷基”和/或“脂族基”无论单独使用或作为取代基的一部分使用均是指具有1至20个碳原子或在此范围内的任何数目，例如1至6个碳原子或1至4个碳原子的直链和支链碳链。指定的碳原子数(例如C
如本文所用，术语“烯基”和“炔基”，无论单独使用或作为取代基的一部分使用，是指具有2个或更多个碳原子，优选2至20个碳原子的直链和支链碳链，其中烯基链在链中具有至少一个双键并且炔基链在链中具有至少一个三键。烯基和炔基可任选被取代。烯基的非限制性实例包括乙烯基、3-丙烯基、1-丙烯基(也称为2-甲基乙烯基)、异丙烯基(也称为2-甲基乙烯-2-基)、丁烯-4-基等。取代烯基的非限制性实例包括2-氯乙烯基(也包括2-氯乙烯基)、4-羟基丁烯-1-基、7-羟基-7-甲基辛-4-烯-2-基、7-羟基-7-甲基辛-3,5-二烯-2-基等。炔基的非限制性实例包括乙炔基、丙-2-炔基(也包括炔丙基)、丙炔-1-基和2-甲基-己-4-炔-1-基。取代炔基的非限制性实例包括5-羟基-5-甲基己-3-炔基、6-羟基-6-甲基庚-3-炔-2-基、5-羟基-5-乙基庚-3-炔基等。
如本文所用，“环烷基”，无论单独使用或作为另一基团的一部分使用，是指包括环化烷基，烯基和炔基的非芳族含碳环，例如具有3至14个环碳原子，优选3至7或3至6个环碳原子，或甚至3至4个环碳原子，并且任选地含有一个或多个(例如1、2或3个)双键或三键。环烷基可以是单环(例如环己基)或多环(例如含有稠合、桥接和/或螺环体系)，其中碳原子位于环体系的内部或外部。环烷基的任何合适的环位置可共价连接至所定义的化学结构。环烷基环可以任选地被取代。环烷基的非限制性实例包括：环丙基、2-甲基-环丙基、环丙烯基、环丁基、2,3-二羟基环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环戊二烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、十氢萘基、2,5-二甲基环戊基、3,5-二氯环己基、4-羟基环己基、3,3,5-三甲基环己-1-基、八氢并环戊二烯基、八氢-1H-茚基、3a,4,5,6,7,7a-六氢-3H-茚-4-基、十氢薁基；双环[6.2.0]癸基、十氢萘基和十二氢-1H-芴基。术语“环烷基”还包括为双环烃环的碳环，其非限制性实例包括双环-[2.1.1]己烷基、双环[2.2.1]庚烷基、双环[3.1.1]庚烷基、1,3-二甲基[2.2.1]庚-2-基、双环[2.2.2]辛烷基和双环[3.3.3]十一烷基。
“卤代烷基”旨在包括被1个或多个卤素取代的具有指定碳原子数的支链和直链饱和脂族烃基。卤代烷基包括全卤代烷基，其中烷基的所有氢已被卤素替代(例如-CF
术语“烷氧基”是指基团-O-烷基，其中烷基如上所定义。烷氧基任选可以被取代。术语C
“卤代烷氧基”是指基团-O-烷基，其中烷基如上所定义，其中-O-烷基被1个或多个卤素取代。卤代烷氧基包括全卤代烷基，其中烷氧基的所有氢已被卤素替代(例如-OCF
术语“芳基”，其中单独或作为另一基团的一部分使用，在本文中定义为6个碳成员的不饱和芳族单环或10至14个碳成员的不饱和芳族多环。芳基环可以是例如苯基或萘基环，其各自任选被一个或多个能够替代一个或多个氢原子的部分取代。芳基的非限制性实例包括：苯基、亚萘基-1-基、亚萘-2-基、4-氟苯基、2-羟基苯基、3-甲基苯基、2-氨基-4-氟苯基、2-(N,N-二乙基氨基)苯基、2-氰基苯基、2,6-二叔丁基苯基、3-甲氧基苯基、8-羟基亚萘-2-基、4,5-二甲氧基亚萘-1-基和6-氰基-亚萘-1-基。芳基还包括例如与一个或多个饱和或部分饱和的碳环稠合的苯基或萘基环(例如双环[4.2.0]辛-1,3,5-三烯基，茚满基)，其可以在芳族和/或饱和或部分饱和的环的一个或多个碳原子处被取代。
术语“芳基烷基”或“芳烷基”是指基团-烷基-芳基，其中烷基和芳基如本文所定义。本发明的芳烷基任选被取代。芳基烷基的实例包括例如苄基、1-苯基乙基、2-苯基乙基、3-苯基丙基、2-苯基丙基、芴基甲基等。
术语“杂环的”和/或“杂环”和/或“杂环基”，无论单独使用或作为另一基团的一部分，在本文中被定义为具有3至20个原子的一个或多个环，其中至少一个环中的至少一个原子是选自氮(N)、氧(O)或硫(S)的杂原子，并且其中进一步包括杂原子的环是非芳族的。在包括2个或更多个稠环的杂环基团中，非携带杂原子的环可以是芳基(例如，二氢吲哚基、四氢喹啉基、苯并二氢吡喃基)。示例性的杂环基团具有3至14个环原子，其中1至5个是独立地选自氮(N)、氧(O)或硫(S)的杂原子。杂环基团中的一个或多个N或S原子可被氧化。杂环基团可以任选地被取代。
具有单环的杂环单元的非限制性实例包括：二吖丙啶基、吖丙啶基、脲唑基、氮杂环丁烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、恶唑烷基、异恶唑啉基、异恶唑基、噻唑烷基、异噻唑基、异噻唑啉基、噻唑烷酮基、恶唑烷酮基、乙内酰脲基、四氢呋喃基、吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、哌啶-2-酮基(戊内酰胺)、2,3,4,5-四氢-1H-氮杂环庚烯基(azepinyl)、2,3-二氢-1H-吲哚和1,2,3,4-四氢-喹啉。具有2个或更多个环的杂环单元的非限制性实例包括：六氢-1H-吡咯啉基、3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-苯并[d]咪唑基,3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-吲哚基、1,2,3,4-四氢喹啉基、苯并二氢吡喃基、异苯并二氢吡喃基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基和十氢-1H-芳辛并[b]吡咯基。
术语“杂芳基”，无论单独使用或作为另一基团的一部分使用，在本文中定义为具有5至20个原子的一个或多个环，其中至少一个环中的至少一个原子为选自氮(N)、氧(O)或硫(S)的杂原子，并且其中另外至少一个包括杂原子的环是芳族的。在包括2个或更多个稠环的杂芳基中，非杂原子连接环可以是碳环(例如，6,7-二氢-5H-环五嘧啶)或芳基(例如，苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基)。示例性杂芳基具有5至14个环原子并且含有1至5个独立地选自氮(N)、氧(O)或硫(S)的环杂原子。杂芳基中的一个或多个N或S原子可被氧化。杂芳基可被取代。含有单个环的杂芳基环的非限制性实例包括：1,2,3,4-四唑基、[1,2,3]三唑基、[1,2,4]三唑基、三嗪基、噻唑基、1H-咪唑基、恶唑基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、2-苯基嘧啶基、吡啶基、3-甲基吡啶基和4-二甲基氨基吡啶基。含有2个或更多个稠环的杂芳基环的非限制性实例包括：苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、噌啉基、萘啶基、菲啶基、7H-嘌呤基、9H-嘌呤基、6-氨基-9H-嘌呤基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、吡啶并[2,3-d]嘧啶基、2-苯基苯并[d]噻唑基、1H-吲哚基、4,5,6,7-四氢-1-H-吲哚基、喹喔啉基、5-甲基喹喔啉基、喹唑啉基、喹啉基、8-羟基-喹啉基和异喹啉基。
上述杂芳基的一个非限制性实例是C
除非另外指明，否则当两个取代基一起形成具有指定数目的环原子的环(例如，R
出于本发明的目的，包括单个杂原子的稠环单元以及螺环，双环等将被认为属于对应于含杂原子的环的环状家族。例如，具有下式的1,2,3,4-四氢喹啉：
为了本发明的目的，被认为是杂环单元。6,7-二氢-5H-环五嘧啶，其具有下式：
为了本发明的目的，被认为是杂芳基单元。当稠环单元在饱和环和芳环中都含有杂原子时，芳环将占主导地位并确定环所指定类别的类型。例如，具有下式的1,2,3,4-四氢-[1,8]萘啶：
为了本发明的目的，被认为是杂芳基单元。
每当术语或其前缀词根出现在取代基的名称中时，该名称应解释为包括本文提供的那些限制。例如，每当术语“烷基”或“芳基”或它们的前缀词根出现在取代基(例如，芳基烷基、烷基氨基)的名称中时，该名称应被解释为包括以上对于“烷基”和“芳基”给出的那些限制。
在整个说明书中使用术语“取代的”。术语“取代的”在本文中定义为非环状或环状的部分，其具有一个或多个氢原子被下文定义的取代基或几个(例如1至10个)取代基替代。取代基能够一次置换单个部分的一个或两个氢原子。此外，这些取代基可以置换两个相邻碳上的两个氢原子以形成所述取代基，新部分或单元。例如，需要单个氢原子取代的取代单元包括卤素，羟基等。两个氢原子的取代包括羰基、肟基等。来自相邻碳原子的两个氢原子置换包括环氧基等。术语“取代的”在术语“取代的”表示部分可具有一个或多个被取代基取代的氢原子。当部分被描述为“取代的”时，任何数目的氢原子可被替换。例如，二氟甲基是取代的C
本文定义的可变基团，例如本文定义的烷基、烯基、炔基、环烷基、烷氧基、芳氧基、芳基、杂环和杂芳基、无论单独使用或作为另一基团的一部分使用，可任选被取代。任选取代的基团将如此指出。
以下是可以取代部分上的氢原子的取代基的非限制性实例：卤素(氯(Cl)、溴(Br)、氟(F)和碘(I))、–CN、–NO
在一些实施方案中，取代基选自
i)–OR
ii)–C(O)R
iii)–C(O)OR
iv)–C(O)N(R
v)–N(R
vi)卤素:–F、–Cl、–Br和–I；
vii)–CH
viii)–SO
ix)C
x)氰基
xi)硝基；
xii)N(R
xiii)氧代(＝O)；
xiv)杂环；以及
xv)杂芳基。
其中每个R
在本说明书的不同位置，化合物的取代基以组或范围公开。具体地，本说明书包括这些组和范围的成员的每个单独的子组合。例如，术语“C1-6烷基”具体地旨在单独地公开C
出于本发明的目的，术语“化合物”、“类似物”和“物质组合物”同样适用于本文所述的肝选择性聚腺苷酸化聚合酶5和7(PAPD 5&7)抑制剂，包括所有对映异构体形式、非对映异构体形式、盐等，并且术语“化合物”、“类似物”和“物质组合物”在整个本说明书中可互换使用。
本文所述的化合物可含有不对称原子(也称为手性中心)，并且一些化合物可含有一个或多个不对称原子或中心，其可因此产生光学异构体(对映异构体)和非对映异构体。本发明和本文公开的化合物包括这样的对映异构体和非对映异构体，以及外消旋和拆分的对映异构体纯的R和S立体异构体，以及R和S立体异构体的其他混合物及其药学上可接受的盐。光学异构体可以通过本领域技术人员已知的标准程序以纯形式获得，所述程序包括但不限于非对映异构体盐形成，动力学拆分和不对称合成。本发明还包括含有烯基部分(例如，烯烃和亚胺)的化合物的顺式和反式异构体。还应当理解，本发明包括所有可能的区域异构体及其混合物，其可以通过本领域技术人员已知的标准分离程序以纯形式获得，并且包括但不限于柱色谱法，薄层色谱法和高效液相色谱法。
可以具有酸性部分的本发明的化合物的药学上可接受的盐可以使用有机碱和无机碱形成。根据可用于去质子化的酸性氢的数目，考虑单阴离子盐和多阴离子盐。与碱形成的合适的盐包括金属盐，例如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾或镁盐；铵盐和有机胺盐，例如与吗啉、硫代吗啉、哌啶、吡咯烷、单-、二-或三-低级烷基胺(例如乙基-叔丁基-、二乙基-、二异丙基-、三乙基-、三丁基-或二甲基丙胺)或单-、二-或三羟基低级烷基胺(例如单-、二-或三乙醇胺)形成的那些。无机碱的具体非限制性实例包括NaHCO
当任何变量在任何组分或任何式中出现多于一次时，其在每次出现时的定义独立于其在每隔一次出现时的定义(例如，在N(R
本文所用的术语“治疗(treat)”和“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”是指部分或完全减轻、抑制、改善和/或缓解患者怀疑患有的病症。
如本文所用，“治疗有效”和“有效剂量”是指引起所需生物活性或作用的物质或量。
除非另有说明，术语“受试者”或“患者”可互换使用，并且是指哺乳动物，例如人类患者和非人类灵长类动物，以及实验动物，例如兔、大鼠和小鼠，以及其它动物。因此，本文所用的术语“受试者”或“患者”是指可以给予本发明化合物的任何哺乳动物患者或受试者。在本发明的示例性实施方案中，为了鉴定用于根据本发明方法治疗的受试者患者，采用可接受的筛选方法来确定与目标或疑似疾病或病症相关的风险因素或确定受试者中现有疾病或病症的状态。这些筛选方法包括例如常规的检查以确定可能与目标或疑似疾病或病症相关的风险因素。这些和其它常规方法允许临床医生使用本发明的方法和化合物选择需要治疗的患者。
肝选择性聚腺苷酸化聚合酶5和7抑制剂
本发明的肝选择性聚腺苷酸化聚合酶5和7抑制剂是官能化的吡啶-4(1H)-酮，并且包括具有式(I)的所有对映异构体和非对映异构体形式及其药学上可接受的盐：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药和复合物，其中：
X
当X
当X
Z
Z
Z
X
X
X
X
当X
当X
当X
当X
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R
R
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R
在一些实施方案中，R
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在一些实施方案中，R
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在一些实施方案中，R
当X
当X
R
本发明的化合物包括具有式(II)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。
本发明的化合物包括具有式(III)的化合物：
/>
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。
本发明的化合物包括具有式(IV)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(V)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(VI)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(VII)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(VIII)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(IX)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(X)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XI)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XII)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XIII)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XIV)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XV)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XVI)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XVII)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XVIII)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XIX)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。本发明的化合物包括具有式(XX)的化合物：
包括其水合物、溶剂化物、药学上可接受的盐、前药、同位素异构体和复合物。
在一些实施方案中，X
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为了说明本发明化合物在本文中命名和提及的方式，所述化合物具有下式：
具有化学名称(S)-9-((5-羧基戊基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸。
为了说明本发明化合物在本文中命名和提及的方式，所述化合物具有下式：
具有化学名称(S)-9-(3-(羧基甲氧基)丙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸。
出于本发明的目的，由外消旋式描绘的化合物，例如：
对于具有下式的两种对映体中的任一种将同样适用：
或式：
或其混合物，或在存在第二手性中心的情况下，所有非对映异构体。
在本文提供的所有实施方案中，合适的任选取代基的实例不旨在限制要求保护的本发明的范围。本发明的化合物可以含有本文提供的任何取代基或取代基的组合。
示例性实施方案包括具有式(XXI)的化合物或其药学上可接受的盐形式：
其中X
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示例性实施方案包括具有式(XXII)的化合物或其药学上可接受的盐形式：
其中R、R
表2：式(XXII)的示例性化合物
示例性实施方案包括具有式(XXIII)的化合物或其药学上可接受的盐形式：
其中X
表3：式(XXII)的示例性化合物
示例性实施方案包括具有式(XXIV)的化合物或其药学上可接受的盐形式：
其中X
表4：式(XXIV)的示例性化合物
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示例性实施方案包括具有式(XXVI)的化合物或其药学上可接受的盐形式：
其中X
表5：式(XXVII)的示例性化合物
方法
本发明还涉及制备本公开的化合物的方法。
本发明的化合物可以根据本文概述的程序，从可商购的起始材料，文献中已知的化合物或容易制备的中间体，通过使用本领域技术人员已知的标准合成方法和程序来制备。用于制备有机分子和官能团转化和操作的标准合成方法和程序可以容易地从相关科学文献或从本领域的标准教科书获得。应理解，在给予的典型的或优选的工艺条件下(即，反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力，等等)，还可以使用其它工艺条件，除非另有说明。最佳反应条件可以随所使用的具体反应物或溶剂而变化，但这种条件可以由本领域技术人员通过常规优化过程来确定。有机合成领域的技术人员将认识到，所呈现的合成步骤的性质和顺序可以改变所呈现的合成步骤的性质和顺序。
本文所述的方法可根据本领域已知的任何合适的方法监测。例如，产物形成可通过光谱手段如核磁共振光谱(例如
化合物的制备可涉及各种化学基团的保护和脱保护。本领域技术人员可以容易地确定适当保护基的选择可由本领域技术人员容易地确定。保护基的化学可以在例如Greene等人，《有机合成中的保护基》(Protective Groups in Organic Synthesis)，第2版，(Wiley&Sons，1991)中找到，其全部公开内容通过引用并入本文用于所有目的。
本文所述的反应或方法可在适合的溶剂中进行，所述溶剂可由有机合成领域的技术人员容易地选择。合适的溶剂通常在进行反应的温度(即，可在溶剂的凝固温度至溶剂的沸点温度的范围内的温度)下基本上不与反应物，中间体和/或产物反应。给定的反应可以在一种溶剂或多于一种溶剂的混合物中进行。根据具体反应步骤，可以选择用于具体反应步骤的合适溶剂。
这些教导的化合物可以通过有机化学领域已知的方法制备。用于制备这些教导的化合物的试剂可以是商业获得的或者可以通过文献中描述的标准方法制备。例如，本发明的化合物可以根据通用合成方案中说明的方法制备：
用于制备化合物的一般合成方案。
用于制备本发明化合物的试剂可以商购获得或可以通过文献中描述的标准方法制备。根据本发明，该类化合物可通过以下反应方案之一制备。
本发明方法的第一方面涉及制备本公开的具有式(I)的新化合物的方法。式(I)化合物可根据方案1-41中概述的方法制备。
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(1)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(5)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(9)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(10)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(13)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(14)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(17)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(18)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(21)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(22)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(25)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(26)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(29)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(30)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(33)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(34)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(37)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(38)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(41)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(42)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(45)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(46)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(49)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(50)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在碱如碳酸钠、碳酸钾、碳酸锂、三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等的存在下以及在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺、二氯甲烷、二氯乙烷、甲醇、乙醇等中，将化学式(53)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(54)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，在有机膦如2-双环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯、2-双环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)联苯、2-双环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯、2-二叔丁基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯、(2-联苯)二环己基膦、(2-联苯)二叔丁基膦、2-双环己基膦基-2’,6’-二异丙氧基联苯、2-二叔丁基膦基-3,4,5,6-四甲基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联苯、2’-二环己基膦基-2,6-二甲氧基-1,1’-联苯-3-磺酸钠、2-二叔丁基膦基-2’-甲基联苯基、2-二环己基膦基-2’-甲基联苯、2’-(二叔丁基膦基)-N,N-二甲基联苯-2-胺、2’-(二苯基膦基)-N,N’-二甲基-(1,1’-联苯)-2-胺等存在下，在碱如碳酸钠、碳酸锂、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、2,6-二甲基吡啶等的存在下，在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、1,2-二甲氧基乙烷等中，式(57)化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与式(58)化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，在有机膦如2-双环己基膦基-2’,6’-二甲氧基联苯、2-双环己基膦基-2’-(N,N-二甲基氨基)联苯、2-双环己基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯、2-二叔丁基膦基-2’,4’,6’-三异丙基联苯、(2-联苯)二环己基膦、(2-联苯)二叔丁基膦、2-双环己基膦基-2’,6’-二异丙氧基联苯、2-二叔丁基膦基-3,4,5,6-四甲基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联苯、2’-二环己基膦基-2,6-二甲氧基-1,1’-联苯-3-磺酸钠、2-二叔丁基膦基-2’-甲基联苯基、2-二环己基膦基-2’-甲基联苯、2’-(二叔丁基膦基)-N,N-二甲基联苯-2-胺、2’-(二苯基膦基)-N,N’-二甲基-(1,1’-联苯)-2-胺等存在下，在碱如碳酸钠、碳酸锂、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化钠、氢氧化锂、氢氧化钾、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶、2,6-二甲基吡啶等的存在下，在溶剂如四氢呋喃、1,4-二氧六环、乙腈、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷、1,2-二甲氧基乙烷等中，式(61)化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与式(62)化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在溶剂如乙醇、甲醇、乙腈、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等的存在下，任选在酸如乙酸、三氟乙酸、盐酸等的存在下，任选在碱如碳酸钠、碳酸锂、碳酸钾、碳酸铯等的存在下，式(65)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与1-氟-4-甲基-1,4-二氮鎓双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)反应，任选地加热，任选地微波辐射以提供式(66)的化合物。
在溶剂如甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环等的存在下，任选在加热下，任选在微波辐射下，使式(67)化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与三氯异氰脲酸反应，得到式(68)化合物。或者，在溶剂如甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环等的存在下，任选在加热下，任选在微波辐射下，使式(67)化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与N-氯代琥珀酰亚胺反应，得到式(68)化合物。
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，任选在加热下，任选在微波辐射下，使式(69)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(73)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，任选在加热下，任选在微波辐射下，使式(76)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(80)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(83)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(84)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(87)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(88)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(91)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与式(92)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(94)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(95)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(98)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，与式(99)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(101)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(102)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(105)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，与式(106)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(108)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(109)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(112)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，与式(113)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(115)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(116)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(119)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，与式(120)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(122)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(123)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(126)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)，与式(127)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(129)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(130)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙胺等的存在下反应，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(133)的化合物与化学式(134)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(136)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)与化学式(137)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(140)的化合物，与式(141)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
在锌的存在下，在碘化钠的存在下，在碘化镍(II)的存在下，在1,10-菲咯啉的存在下，在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使化学式(143)的化合物与化学式(144)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
任选在碘化钠存在下，任选在碘化镍(II)存在下，任选在1,10-菲咯啉存在下，任选地在钯催化剂如钯催化剂如乙酸钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、二氯双(三苯基膦)钯(II)、钯/碳、双(乙腈)二氯钯(II)等的存在下，任选地在碱如吡啶、三乙胺、二异丙基乙基胺等的存在下、在溶剂如二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二氧六环、二甲基甲酰胺等的存在下，使式(147)的化合物，与式(148)的化合物(已知化合物或通过已知方法制备的化合物)反应，其中Y
制备本公开化合物所需的其它方法描述于WO2017016960、WO2019123285、WO2020106816A1、WO2018022282、WO2017216685和WO2018130152中，其通过引用并入本文。
以下提供的实施例提供了用于制备本发明的示例性化合物的代表性方法。本领域技术人员将知道如何替换本领域技术人员已知的适当试剂、原料和纯化方法，以制备本发明的化合物。
在300MHz INOVA VARIAN光谱仪上记录
实施例
实施例1-8提供了制备式(I)代表性化合物的方法。本领域技术人员将知道如何替换本领域技术人员已知的适当试剂、原料和纯化方法，以制备本发明的另外的化合物。
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实施例1：(S)-9-(羧基甲氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65042-A-OH)的合成：将(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯(15mg，0.0420mmol)和碳酸钾(17mg，0.126mmol)溶解于2mL N,N-二甲基甲酰胺中。加入2-溴乙酸甲酯(4μL，0.0462mmol)，并将反应搅拌18小时。将反应物在乙酸乙酯和水之间分配，然后将水相用乙酸乙酯萃取三次。合并有机相，除去溶剂，并通过HPLC纯化残余物。将纯化的中间体溶于2mL四氢呋喃并加入3eq.的1M的LiOH。2小时后，将反应浓缩并用0.1％TFA的MeCN/H
实施例2：(S)-9-(3-羧基丙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65042-C-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(3-羧基丙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用4-溴丁酸甲酯代替2-溴乙酸甲酯。
实施例3：(S)-9-(4-羧基丁氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65042-D-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(4-羧基丁氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用5-溴戊酸甲酯代替2-溴乙酸甲酯。
实施例4：(S)-9-(5-羧基戊基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65025-B-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(5-羧基戊基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用6-溴己酸乙酯代替2-溴乙酸甲酯。
实施例5：(S)-9-(3-羧基甲氧基)丙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65025-C-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(3-羧基甲氧基)丙氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用2-(3-溴丙氧基)乙酸甲酯代替2-溴乙酸甲酯。
实施例6：(S)-9-(6-羧基己基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65042-E-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(6-羧基己基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用7-溴庚酸甲酯代替2-溴乙酸甲酯。
实施例7：(S)-9-(7-羧基庚基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65063-A-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(7-羧基庚基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用8-溴辛酸乙酯代替2-溴乙酸甲酯。
实施例8：(S)-9-(8-羧基辛基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸(65063-B-OH)的合成：根据实施例1的程序制备(S)-9-(8-羧基辛基)氧基)-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸，不同的是用(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯代替(S)-9-羟基-6-异丙基-10-甲氧基-2-氧代-6,7-二氢-2H-吡啶并[2,1-a]异喹啉-3-羧酸乙酯且用9-溴壬酸乙酯代替2-溴乙酸甲酯。
配方
本发明还涉及包括本发明的肝选择性聚腺苷酸化聚合酶5和7(PAPD 5&7)抑制剂的组合物或制剂。通常，本发明的组合物包括有效量的一种或多种本发明的化合物及其盐，其有效治疗或预防涉及聚腺苷酸化聚合酶5和7活性的疾病，例如乙型肝炎和肝癌；以及一种或多种赋形剂。
为了本发明的目的，术语“赋形剂”和“载体(carrier)”在本发明的整个说明书中可互换使用，并且所述术语在本文中定义为“用于配制安全有效的药物组合物的实践中的成分”。
配制人员将理解，赋形剂主要用于递送安全，稳定和功能性的药物，其不仅作为用于递送的整个承载体(vehicle)的一部分，而且作为实现接受者有效吸收活性成分的手段。赋形剂可作为简单和直接的惰性填料起作用，或者如本文所用的赋形剂可以是pH稳定系统或包衣的一部分以确保成分安全递送至胃。配方设计师还可以利用本发明的化合物具有改善的细胞效力，药代动力学性质以及改善的口服生物利用度的事实。
本发明还提供了药物组合物，其包括至少一种本文所述的化合物和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。这类载体的实例是本领域技术人员熟知的，并且可以根据可接受的药学程序制备，例如雷明顿药物科学(Remington’s PharmaceuticalSciences)，第17版，Alfonoso R.Gennaro编，马克出版公司(Mack Publishing Company)，Easton，PA(1985)中描述的那些，其全部公开内容在此引入作为参考用于所有目的。如本文所用，“药学上可接受的”是指从毒理学角度看可接受用于药物应用并且不会不利地与活性成分相互作用的物质。因此，药学上可接受的载体是与制剂中的其它成分相容并且是生物学上可接受的那些。补充活性成分也可掺入药物组合物中。
本发明的化合物可以口服或胃肠外，单独或与常规药物载体组合施用。适用的固体载体可包括一种或多种还可用作调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填充剂、助流剂、压缩助剂、粘合剂或片剂崩解剂或包封材料的物质。化合物可以以常规方式配制，例如以类似于用于已知肝炎疗法和癌症疗法的方式配制。含有本文公开的化合物的口服制剂可以包括任何常规使用的口服形式，包括片剂、胶囊、含服形式、含片、锭剂和口服液体、悬浮液或溶液。在粉剂中，载体可以是与细分化合物混合的细分固体。在片剂中，本文公开的化合物可以与具有必要的压缩性质的载体以合适的比例混合并压制成所需的形状和大小。粉剂和片剂可含有高达99％的化合物。
胶囊可以含有本文公开的一种或多种化合物与惰性填充剂和/或稀释剂的混合物，所述惰性填充剂和/或稀释剂例如药学上可接受的淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、糖、人工甜味剂、粉状纤维素(例如结晶纤维素和微晶纤维素)、面粉、明胶、树胶等。
可用的片剂制剂可通过常规压缩、湿法制粒或干法制粒方法制备，并利用药学上可接受的稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面改性剂(包括表面活性剂)、助悬剂或稳定剂、包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、月桂基硫酸钠、滑石、糖、乳糖、糊精、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷、海藻酸、阿拉伯胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、蔗糖、山梨醇、磷酸二钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露醇、氯化钠、低熔点蜡和离子交换树脂。表面改性剂包括非离子和阴离子表面改性剂。表面改性剂的代表性实例包括但不限于泊洛沙姆188、苯扎氯铵、硬脂酸钙、鲸蜡硬脂醇、聚西托醇乳化蜡、脱水山梨糖醇酯、胶态二氧化硅、磷酸盐、十二烷基硫酸钠、硅酸镁铝和三乙醇胺。本文的口服制剂可利用标准延迟或时间释放制剂来改变化合物的吸收。口服制剂还可以由施用在水或果汁中的本文公开的化合物组成，根据需要含有适当的增溶剂或乳化剂。
液体载体可用于制备溶液剂、混悬剂、乳剂、糖浆剂、酏剂和用于吸入递送。本发明的化合物可以溶解或悬浮在药学上可接受的液体载体如水，有机溶剂或两者的混合物，或药学上可接受的油或脂肪中。液体载体可以含有其它合适的药物添加剂，例如增溶剂、乳化剂、缓冲剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、悬浮剂、增稠剂、着色剂、粘度调节剂、稳定剂和渗透调节剂。用于口服和胃肠外给药的液体载体的实例包括但不限于水(特别是含有如本文所述的添加剂，例如纤维素衍生物，如羧甲基纤维素钠溶液)、醇(包括一元醇和多元醇，例如二醇)和它们的衍生物，以及油(例如分馏的椰子油和花生油)。对于胃肠外给药，载体可以是油性酯，例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。无菌液体载体以无菌液体形式组合物用于胃肠外给药。用于加压组合物的液体载体可以是卤代烃或其它药学上可接受的推进剂。
作为无菌溶液或悬浮液的液体药物组合物可通过例如肌内、腹膜内或皮下注射使用。无菌溶液也可以静脉内给药。用于口服给药的组合物可以是液体或固体形式。
优选地，药物组合物为单位剂型，例如片剂、胶囊剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂或栓剂。在这种形式中，药物组合物可以细分为含有适量化合物的单位剂量。单位剂型可以是包装的组合物，例如包装的粉剂、小瓶、安瓿、预填充的注射器或含有液体的小袋。或者，单位剂型可以是胶囊或片剂本身，或者它可以是包装形式的适当数量的任何这样的组合物。此类单位剂型可含有约1mg/kg化合物至约500mg/kg化合物，并且可以单一剂量或以两个或更多个剂量给予。这样的剂量可以以用于将化合物导向受体血流的任何方式给包括口服、通过植入物、胃肠外(包括静脉内、腹膜内和皮下注射)、直肠、阴道以及经皮。
当给药用于治疗或抑制特定的疾病状态或病症时，应当理解，有效剂量可以根据所用的特定化合物、给药方式所治疗病症的严重程度以及与所治疗个体相关的各种身体因素而变化。在治疗应用中，可以向已经患有疾病的患者提供足以治愈或至少部分改善疾病症状及其并发症的量的本发明的化合物。用于治疗特定个体的剂量通常必须由主治医师主观确定。所涉及的变量包括具体病症及其状态以及患者的大小、年龄和反应模式。
在一些情况下，可能期望使用诸如但不限于计量剂量吸入器、呼吸操作的吸入器、多剂量干粉吸入器、泵、挤压致动的雾化喷雾分配器、气雾剂分配器和气雾剂喷雾器的装置将化合物直接给药至患者的气道。对于通过鼻内或支气管内吸入给药，本发明的化合物可以配制成液体组合物、固体组合物或气雾剂组合物。作为说明，液体组合物可以包括溶解、部分溶解或悬浮在一种或多种药学上可接受的溶剂中的一种或多种本发明的化合物，并且可以通过例如泵或挤压致动的雾化喷雾分配器施用。溶剂可以是例如等渗盐水或抑菌水。作为说明，固体组合物可以是粉末制剂，其包括与乳糖或其它支气管内使用可接受的惰性粉末混合的一种或多种本发明的化合物，并且可以通过例如气雾剂分配器或破坏或刺穿包封固体组合物的胶囊并递送固体组合物用于吸入的装置施用。作为说明，气溶胶组合物可以包括一种或多种本发明的化合物、推进剂、表面活性剂和共溶剂，并且可以通过例如计量装置施用。推进剂可以是氯氟烃(CFC)、氢氟烷烃(HFA)或生理上和环境上可接受的其它推进剂。
本文所述的化合物可以胃肠外或腹膜内施用。这些化合物或其药学上可接受的盐，水合物或酯的溶液或悬浮液可以在与表面活性剂如羟基-丙基纤维素适当混合的水中制备。也可以在甘油，液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散体。在通常的储存和使用条件下，这些制剂通常含有防腐剂以防止微生物的生长。
适于注射的药物形式可包括无菌水溶液或分散体和用于临时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。在一些实施方案中，所述形式可以是无菌的并且其粘度允许其流过注射器。该形式优选在制造和储存条件下是稳定的，并且可以防止微生物如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)，其合适的混合物和植物油的溶剂或分散介质。
本文所述的化合物可以经皮施用，即，跨身体表面和身体通道的内衬(包括上皮组织和粘膜组织)施用。此类给药可以使用本发明的化合物(包括其药学上可接受的盐，水合物或酯)在洗剂、霜剂、泡沫剂、贴剂、混悬剂、溶液剂和栓剂(直肠和阴道)中进行。
经皮给药可以通过使用含有化合物(例如本文公开的化合物)和载体的经皮贴剂来实现，所述载体可以对所述化合物是惰性的，可以对皮肤是无毒的，并且可以允许将用于全身吸收的化合物经由皮肤递送到血流中。载体可以采取任何形式，例如乳膏和软膏、糊剂、凝胶和闭塞装置。霜剂和软膏剂可以是水包油或油包水型的粘性液体或半固体乳剂。由分散在含有化合物的石油或亲水性石油中的吸收性粉末组成的糊剂也可以是合适的。可使用装置可用于将化合物释放到血流中，例如覆盖含有化合物(有或没有载体)的贮库的半透膜，或含有化合物的基质。其它闭塞装置在文献中是已知的。
本文所述的化合物可以常规栓剂的形式经直肠或阴道施用。栓剂制剂可由传统材料制成，包括可可脂，加入或不加入蜡以改变栓剂的熔点，和甘油。也可以使用水溶性栓剂基质，例如各种分子量的聚乙二醇。
脂质制剂或纳米胶囊可用于在体外或体内将本发明的化合物引入宿主细胞。脂质制剂和纳米胶囊可通过本领域已知的方法制备。
为了增加本发明的化合物的有效性，可能期望将化合物与有效治疗靶疾病的其它药剂组合。例如，有效治疗靶疾病的其它活性化合物(即，其它活性成分或试剂)可以与本发明的化合物一起施用。其它药剂可以与本文公开的化合物同时或在不同时间施用。
本发明的化合物可用于治疗或抑制哺乳动物(例如人类受试者)中的病理学病状或病症。因此，本发明提供了通过向哺乳动物提供本发明的化合物(包括其药学上可接受的盐)或包括与药学上可接受的载体组合或联合的一种或多种本发明的化合物的药物组合物来治疗或抑制病理状况或病症的方法。本发明的化合物可以单独施用或与其它治疗有效的化合物或疗法组合施用，用于治疗或抑制病理状况或病症。
根据本发明的组合物的非限制性实例包括约0.001mg至约1000mg的一种或多种根据本发明的公开内容的化合物和一种或多种赋形剂；约0.01mg至约100mg的一种或多种本发明的化合物和一种或多种赋形剂；以及约0.1mg至约10mg的一种或多种本发明公开的化合物；以及一种或多种赋形剂。
程序
下列方法可用于评价和选择作为肝选择性聚腺苷酸化聚合酶5和7(PAPD 5&7)抑制剂的化合物。
PAPD 5/7生物化学测定：PAPD5(登录号：NM_001040285)和PAPD7(登录号：NM_0069999)开放阅读框重组到带有Flag标记的pCDNA3.1载体(carrier)上，分别构建成载体(carrier)pCMV-FlagD5和pCMV-FlagD7。然后用5μg的pCMV-FlagD5或pCMV-FlagD7瞬时转染在10cm培养皿中生长的HEK293细胞。转染后两天，制备细胞裂解物(细胞信号转导目录号：9803S)并用M2抗-Flag抗体(Sigma目录号：A2220)沉淀标记的PAPD5和PAPD7多肽。直接利用固定在琼脂糖珠上的PAPD5或PAP7在含有10mM Tris-HCl(pH 8.0)、100mM KCl、3.2mMMgCl
为了评价本公开的化合物对PAPD5/7的酶功能的抑制活性，将本公开的化合物以8个连续稀释的浓度溶解在DMSO中，并将1μl本公开的化合物的溶液加入到8μl聚腺苷酸化反应缓冲液中，最终浓度为1μM至0.4nM。在加入1μl的P
细胞测定法1：细胞测定：将产生HBV的细胞系HepG2.2.15在含有10％胎牛血清(FBS)、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Invitrogen)的DMEM/F12中培养。当细胞达到100％汇合时，将DMSO中的本公开的化合物添加至培养基中。将DMSO的最终浓度调节至0.5％。在两天内更换培养基，并在化合物的存在下再培养细胞两天。然后用FitzgeraldInternanative公司生产的10-H05H和60C-CR2100RB抗HBsAg抗体，用AlphaLisa法检测培养上清液中的HBsAg抑制情况。为了检测核酸的变化，用Trizol试剂提取总RNA并在乙二醛琼脂糖凝胶中解析。用P32标记的核糖探针测定印迹到硝酸纤维素膜上的HBV RNA。病毒RNA的减少和缩短表明受试化合物的靶向效应。此外，使用Promega的CellTiter-Glo(目录号：G7570)监测了化合物诱导的细胞毒性。HepG2.2.15细胞首先接种于96孔板(Corning，目录号：CLS3595)中，密度为10,000个/孔，接种于含10％胎牛血清的100ul的DMEM/F12培养液中。当细胞达到100％汇合时，开始用本公开的化合物处理，并以如针对HBsAg抑制研究所述的方式培养细胞。药物处理后4天，将100μl的CellTiter-Glo试剂(Promega，目录号G7570)加入到每个孔中，并将混合物在23℃孵育12分钟，然后在Tecan的Infinite 200PRO中读取发光信号。使用Graphpad prism计算化合物对HBsAg的IC
细胞测定法2：将HepG2.2.15细胞以1.5×10
还可使用WO2017016960、WO2019123285、WO2020106816A1、WO2018022282、WO2017216685和WO2018130152中所述的方法评估本公开的化合物以确定其作为PAPD 5和7抑制剂的效用，所述专利以引用的方式并入本文中。
本公开的化合物的示例性结果示于表6中。
表6：本公开的化合物的示例性体外筛选数据
药代动力学和组织分布研究方案。在静脉内(IV)和口服管饲法(PO)给药后在CD1小鼠中研究化合物的药代动力学。以3mg/kg(IV)和8mg/kg(PO)进行小鼠PK研究。在10个时间点，包括给药后5、15和30分钟以及1、1.5、2、4、6、8和24小时处理成血浆，通过一步蛋白质沉淀法将含有IS混合物(拉贝洛尔、丙咪嗪和双氯芬酸)的乙腈200μL加入50μL单个受试者样本的等分试样中，制备用于分析给药动物的血浆样本。样本通过涡旋混合均匀，然后以4000rpm离心10分钟。收集上清液(200μL)并注射到LC-MS/MS中用于分析。使用已确立的非房室法计算药代动力学参数。在PO组中研究化合物的肝脏分布，并且在PO给药后的每个时间点收集肝组织。将精确称重的全肝组织收集在50mL管中，并加入3体积/重量的水。将组织样本匀浆，并将50μL匀浆物与上述血浆样本一起处理。
本公开的化合物的PK研究的示例性结果示于表7至11中。表7和8提供了向CD1小鼠以3mg/kg IV给药65042-E-OH(实施例6)后的药代动力学数据和计算的PK性质。表9和10提供了在向CD1小鼠以8mg/kg口服给药65042-E-OH(实施例6)后的药代动力学数据和计算的PK性质。表11提供了在向CD1小鼠以8mg/kg口服给药65042-E-OH(实施例6)后CD1小鼠中血药浓度与肝脏浓度的比较。7到11中的结果显示了一个令人惊讶和意想不到的结果，即公开的化合物被肝脏摄取，这一特征在前几代PAPD 5和7抑制剂中没有观察到。
表7：CD1小鼠中3mg/kg IV剂量的65042-E-OH(实施例6)的PK数据
*BLOQ＝低于较低水平的定量。
表8：CD1小鼠中3mg/kg IV剂量的65042-E-OH(实施例6)的计算的PK参数
表9：CD1小鼠中8mg/kg口服剂量的65042-E-OH(实施例6)的PK数据。
*BLOQ＝低于较低水平的定量。
表10：CD1小鼠中8mg/kg口服剂量的65042-E-OH(实施例6)的计算的PK参数
表11：8mg/kg口服剂量的65042-E-OH(实施例6)后CD1小鼠中65042-E-OH(实施例6)的肝脏和血药浓度的比较
鉴定作为转运蛋白OATP1B1和OATP1B3底物的化合物的方案。将转染的HEK293和带菌体(vector)对照HEK293细胞在24孔聚-D-赖氨酸或胶原包被的组织培养板(适当时)中培养，并用两种浓度(0.5和5μM)的测试化合物在转运缓冲液(HBSSg，pH7.4，预热至37℃)中分别处理2和10分钟。在确定的时间点，通过除去给药溶液，然后用冰冷的HBSSg缓冲液洗涤两次来停止摄取实验。用含有适当内标(当可用时)的75％ACN裂解细胞2分钟。将裂解缓冲液冷却至-20℃，并在裂解期间将板保持在冰上。将细胞裂解物转移到96孔板中，用LC-MS/MS分析进行样本分析，以确定细胞裂解物中测试化合物的浓度。根据制造商的方案，使用BCA蛋白测定试剂盒，通过总细胞蛋白标准化测试化合物的摄取。抑制剂利福霉素SV用于阻断OATP1B1和OATP1B3转运蛋白活性以确定摄取率。
本公开的示例性化合物，DHQ-1和阳性对照雌二醇17-β葡糖苷酸的OATP1B1和OATP1B3转运蛋白研究的结果示于表12和表13中。本公开的化合物和使用Mock细胞(未转染OATP1B1和OATP1B3转运蛋白的HEK293细胞)测试的阳性对照的数据也显示在表12和13中。表12和13中的结果证明了本公开的化合物是OATP1B1和OATP1B3转运蛋白的底物的令人惊讶和出乎意料的结果，这一特征在前几代PAPD 5和7抑制剂中没有观察到。
表12：来自在OATP1B1-HEK293细胞中使用的本公开的化合物的OATP1B1转运蛋白活性的数据
Mock细胞是正常HEK293。
表13：在OATP1B3-HEK293细胞中使用的本公开的化合物的OATP1B3转运蛋白活性的数据
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