2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇的新盐以及包含其的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇的新盐以及包含其的新用途的药物组合物。更具体地，本发明涉及一种2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇的富马酸盐或半富马酸盐以及包含其的新用途的药物组合物。

背景技术

2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇化合物(以下，称为化合物1)选择性地与每种S1P亚型的受体(receptor)结合，可以有用地用作预防或治疗多发性硬化症(multiple sclerosis)或脑缺血(ischemic storke)的用途。

然而，化合物1具有非常高的吸湿性，并且在暴露于高湿度条件后具有物理不稳定性，尚未发现比化合物1的游离碱或其盐酸盐具有更高稳定性的新盐。因此，需要开发一种容易配制的化合物的新盐，其解决上述游离碱以及其盐酸盐的缺点，并且在自然状态下具有优异的固态特性以及改善的稳定性，其通过抑制吸湿性，即使当长期储存时也保持规定的纯度。

现有技术文献

专利文献

韩国公开专利公报第10-2017-0087813号(2017年07月31日)

发明内容

技术问题

本发明的目的在于，提供一种2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(化合物1)的新盐、其制备方法以及包含其作为有效成分的新用途的药物组合物，其在自然状态下通过抑制吸湿性，即使当长期储存时也保持规定的纯度，并通过改善稳定性，从而容易作为药物开发，可以应用于大量生产，可以得到高纯度以及均质的质量。

技术方案

为了解决上述问题，本发明提供一种2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(化合物1)的半富马酸盐(化合物1a，NXC736)以及包含其作为药效成分的药物组合物，上述半富马酸盐为如下述化学式1所示的化合物。

化学式1a：

在本发明一具体例中，上述半富马酸盐为晶型。

在本发明一具体例中，化合物1a表现出在2θ值为6.3±0.2°、9.4±0.2°、18.5±0.2°、19.0±0.2°、19.9±0.2°、20.7±0.2°、25.5±0.2°、28.7±0.2°,以及29.0±0.2°处具有主要衍射峰的x射线粉末衍射(XRPD)图谱。

在本发明一具体例中，化合物1a在差示扫描量热分析(DSC)中表现出起始熔点为约82℃(82.42℃)的熔融吸热反应起始点。

在本发明一具体例中，化合物1a在动态蒸气吸附分析(DVS)中90％相对湿度(RH)条件下表现出小于2％的吸湿率。

在本发明一具体例中，化合物1a在高湿度(40℃/75±5％RH或60℃/75±5％RH)条件下，即使在2周后也仍保持原来的晶型并保持99％以上的纯度。

在本发明一具体例中，化合物1a在pH6.8的酸缓冲液/40±2℃条件下，2周后表现出98％以上的纯度。

在本发明一具体例中，化合物1a可以作为结晶组合物存在。

在本发明一具体例中，提供一种包含化合物1a作为有效成分的药物组合物，上述药物组合物还可以包含一种以上药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。

并且，本发明提供一种2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(化合物1)的富马酸盐(化合物1b)以及包含其作为有效成分的药物组合物，上述富马酸盐为如下述化学式1所示的化合物。

化学式1b：

在本发明一具体例中，上述富马酸盐为晶型。

在本发明一具体例中，化合物1a表现出在2θ为13.9±0.2°、18.9±0.2°、19.4±0.2°、22.1±0.2°以及22.5±0.2°处具有主要衍射峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱。

在本发明一具体例中，化合物1a在DVS中90％RH条件下表现出大于3％且小于5％的吸湿率。

在本发明一具体例中，本发明的化合物1的新盐，例如，包含化合物1的半富马酸盐或富马酸盐作为有效成分的本发明的药物组合物可以有用地用于预防或治疗多发性硬化症(multiple sclerosis)、脑缺血(ischemic storke)、局灶节段性肾小球硬化(focalsegmental glomerulosclerosis，FSGS)、炎症性肠病(inflammatory bowel disease)、间质纤维化和肾小管萎缩(Interstitial fibrosis and tubular atrophy，IFTA)或斑秃(alopecia areata，AA)。

在本发明一具体例中，炎症性肠病可以为溃疡性结肠炎(UC，ulcerativecolitis)或克罗恩病(CD，crohn’s disease)。

在上述药物用途中，与多发性硬化症以及脑缺血相关的药理效果记载于韩国专利(KR)授权号10-1830244中，并且后述对于其他药物用途的药理效果。

有机化学领域的普通技术人员应理解，许多有机化合物可以与反应、沉淀或结晶的溶剂形成络合物。这种络合物被称为“溶剂化物”。例如，与水的络合物被称为“水合物”。本发明的化合物的药学上可接受的溶剂化物在本发明的范畴内。

与化合物1的盐酸盐以及其他盐相比，本发明的化合物1的新盐在低吸湿性、标准溶液稳定性、光稳定性、氧化稳定性、根据pH的稳定性、溶解度等方面均表现出优异的效果，因此可以稳定地保持，而没有长期的含量变化以及杂质的增加。

本发明的化合物1的新盐可以得到高纯度的原料物质，即使当长期储存时有关物质的增加也显著地低，因此具有长期保持高纯度并在相对湿度范围内表现出低吸湿性的优点。因此，在药物的加工以及储存中非常有利以容易配制，并且即使在制备包含其的制剂后也保持相同的状态，从而可以长期稳定地保持制剂的含量均匀性，因此可以容易应用于大量生产。

将本发明的化合物1的新盐口服给药到小鼠以及大鼠的结果，确认到表现出免疫抑制作用，并且在单侧尿路梗阻(Unilateral Urinary Obstruction，UUO)肾纤维化模型、腺嘌呤(Adenine)诱导肾纤维化模型中表现出优异的抗纤维化效果，因此可以有用地用作可以预防或治疗多发性硬化症、脑缺血、局灶节段性肾小球硬化、炎症性肠病、间质纤维化和肾小管萎缩或斑秃的药物组合物的有效成分。

在本发明一具体例中，上述药物组合物中包含的化合物1的新盐可以为晶型，更具体地，可以为表现出在2θ值为6.3±0.2°、9.4±0.2°、18.5±0.2°、19.0±0.2°、19.9±0.2°、20.7±0.2°、25.5±0.2°、28.7±0.2°以及29.0±0.2°处具有主要衍射峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱的晶型。

在本发明一具体例中，除了作为有效成分的化合物1的新盐以外，本发明的药物组合物还可以包含一种以上药学上可接受的载体用于给药。药学上可接受的载体可以为食盐水、灭菌水、林格氏液、缓冲盐水、葡萄糖溶液、麦芽糖糊精溶液、甘油、乙醇以及混合这些成分中的一种以上来使用，并且可以根据需要添加抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂等其他常规添加剂。并且可以通过进一步添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂以及润滑剂来配制成如水溶液、悬浮液等注射用剂型、药丸、胶囊、颗粒或片剂。因此，本发明的组合物可以为贴片剂、液剂、药丸、胶囊、颗粒、片剂、栓剂等。这些制剂可以通过本领域用于配制的常规方法或记载于Remington's Pharmaceutical Science(最新版)，Mack Publishing Company，Easton PA中的方法来制备，并且可以根据每种疾病或成分配制成各种制剂。

在本发明一具体例中，本发明的药物组合物可以根据所需方法口服给药或肠胃外给药，例如静脉内、皮下、腹腔内或局部给药，给药量的范围根据患者的体重、年龄、性别、健康状态、饮食、给药时间、给药方法、排泄率以及疾病的严重程度等而异。

在本发明一具体例中，提供一种用于治疗多发性硬化症、脑缺血、局灶节段性肾小球硬化、炎症性肠病、间质纤维化和肾小管萎缩或斑秃的方法，上述方法包括将药学上有效量的本发明的化合物1的新盐给药到个体的步骤。

在本发明一具体例中，用于上述方法的本发明的化合物1的新盐可以为晶型，更具体地，可以为表现出在2θ值为6.3±0.2°、9.4±0.2°、18.5±0.2°、19.0±0.2°、19.9±0.2°、20.7±0.2°、25.5±0.2°、28.7±0.2°以及29.0±0.2°处具有主要衍射峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱的晶型。

在本发明一具体例中，提供一种本发明的化合物1的新盐在制备用于治疗多发性硬化症、脑缺血、局灶节段性肾小球硬化、炎症性肠病、间质纤维化和肾小管萎缩或斑秃的药物中的用途。

在本发明一具体例中，用于上述用途的本发明的化合物1的新盐可以为晶型，更具体地，可以为表现出在2θ值为6.3±0.2°、9.4±0.2°、18.5±0.2°、19.0±0.2°、19.9±0.2°、20.7±0.2°、25.5±0.2°、28.7±0.2°以及29.0±0.2°处具有主要衍射峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱的晶型。

发明的效果

与化合物1的盐酸盐以及其他盐相比，本发明的2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(化合物1)的新盐在吸湿性、标准溶液稳定性、光稳定性、氧化稳定性、根据pH的稳定性、溶解度等方面均表现出优异的效果，包含上述新盐作为有效成分的本发明的药物组合物可以有用地用作预防或治疗多发性硬化症、脑缺血、局灶节段性肾小球硬化、炎症性肠病、间质纤维化和肾小管萎缩或斑秃的用途。

附图说明

图1示出化合物1a的DSC数据。

图2示出化合物1a的DVS数据。

图3示出化合物1a的XRPD数据。

图4为示出口服给药化合物1a(3mg/kg/d天(day))后，小鼠的总T细胞以及T细胞亚型的细胞数量变化的曲线图。

图5为示出口服给药化合物1a(10mg/kg/天(day))后，大鼠的总T细胞以及T细胞亚型的细胞数量变化的曲线图。

图6为示出化合物1a(5mg/kg/天(day)、10mg/kg/天(day))在DSS诱导结肠炎小鼠模型中对炎症性肠病的抑制产生的影响的曲线图。

图7为评价试验化合物1a(1μM、3μM、10μM、30μM)对过表达hERG基因(hERG gene)的HEK293细胞产生的影响的表。

图8为示出口服给药化合物1a(12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg)后测定比格犬的心率的结果的曲线图。

图9为示出化合物1a(10mg/kg/天(day)、30mg/kg/天(day)、90mg/kg/天(day))在UUO小鼠模型中对肾纤维化产生的影响的曲线图。

图10为示出化合物1a(10mg/kg/天(day)、30mg/kg/天(day)、90mg/kg/天(day))在腺嘌呤诱导慢性肾病(CKD)小鼠模型中对肾纤维化产生的影响的曲线图。

图11为将化合物1的游离碱、化合物1a以及化合物1的盐酸盐分别置于60℃/75％RH条件下后观察初期以及2周后的性质变化的图像。

图12为将化合物1的游离碱、化合物1a以及化合物1的盐酸盐与样品一起在60℃的条件下储存2周后确认样品的腐蚀性程度的图像。

图13示出将30mg/kg的化合物1a口服给药到诱导斑秃的10～16周龄的C3H/HeJ小鼠连续12周后测定斑秃病变区(AA lesion area)的结果。

图14示出将30mg/kg的化合物1a口服给药到诱导斑秃的10～16周龄的C3H/HeJ小鼠连续12周后测定无病生存率(Disease free ratio)的结果。

图15为将化合物1a给药到诱导斑秃的10～16周龄的C3H/HeJ小鼠后与诱导斑秃比较的图像。

图16示出化合物1b的DSC数据。

图17示出化合物1b的DVS数据。

具体实施方式

常规定义以及术语

除非另有具体定义，否则比例(包括百分比)或份数在本发明中基于重量进行计算。

作为本发明中使用的表述的“包括”或其同义词“包含”、“含有”或“具有”等为开放性，不排除其他未记载的因素、步骤或成分。

术语“约”的使用本身包括并表示值或参数。例如，“约x”包括并表示“x”本身。在一些方面，除非另有说明，否则与测定结合使用或用于定义值、单位、常数或值的范围的术语“约”是指±1％至±10％的偏差。例如，在一些方面，“约82℃”包括82℃至83℃。

术语“药物组合物”是指与一种以上药学上可接受的成分(例如，未限制的载体和/或赋形剂)任意组合的活性成分。活性成分的例子为化学式I的化合物或其半富马酸盐、一种以上本发明的晶型或一种以上本发明的结晶组合物。

术语“给药”或“给药的”等是指可以将化合物或组合物递送至目标生物作用位点的方法。这种方法包括口服、肠胃外(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌肉内、血管内注射或注入)、局部、直肠给药等，但不限于此。

在药学或药理学活性剂中，术语“有效量”是指足以达到所需效果而没有毒性的药物或作用剂(agent)的量。在本发明中关于口服剂型，对于组合物中活性物质的“有效量”是指与组合物中其他活性物质一起要求达到所需效果的量。有效量可以单独确定，并且可以根据接受者、特定活性物质的材龄(age)以及常规条件而异。在特定情况下，有效量可以通过常规试验由本领域的普通技术人员确定。

术语“活性成分”、“治疗剂”、“活性物质”或“活性剂”是指有利于治疗或预防靶标障碍、疾病或病症的化学实体(chemical entity)。本发明中这种术语可以是指，例如化学式I的化合物或其半富马酸盐、一种以上本发明的晶型或一种以上本发明的结晶组合物。

本发明中使用的术语“低吸湿性”是指物质不吸收或吸附空气中的水分的性质，是与从物质的周围环境中吸引水分子并保留的吸湿性(hygroscopicity)相反的概念。

本发明中使用的术语“稳定性(stability)”是表现出如本发明的化学式1所示的化合物的盐或包含其的组合物在特定条件以及时间下的化学或物理稳定程度的术语。稳定性试验的目的在于，提供本发明的盐在如温度、湿度以及光等各种环境因素的影响下，其质量随着时间如何变化的根据，并且用于在后续利用其制备药物时设定成品药物的使用期限(或有效期限)以及建议的储存条件。

根据韩国食品药品安全处告示的药品等稳定性试验标准，规定用于确认在恶劣条件下药品等的分解过程以及分解产物的“苛刻试验”，记载有考虑到测试样品的特性设定光线、温度、湿度条件作为其试验条件，但当测试样品为原料时包括水溶液状态的试验条件，并且应评价氧化及光分解对原料药产生的影响以及根据pH值范围的水解敏感性。

因此，在本发明的稳定性试验标准中，“标准溶液稳定性”为通过将本发明的盐溶于标准溶液中后，在特定温度以及湿度条件下储存特定时间以及期间后确认其纯度以测定是否发生有关物质(杂质)。并且，根据以下实施例中规定的特定条件，评价本发明的盐的“光稳定性”、“氧化稳定性”以及“根据pH的稳定性”。

在X射线粉末衍射(XRPD或XRD)图谱中，从结晶化合物得到的衍射图谱通常对特定晶型具有特征性，其中，(尤其是在低角度)谱带(band)的相对强度可以根据结晶条件、粒子直径以及由其他测定条件的差异导致的显性取向效应(orientation effect)而异。因此，衍射峰的相对强度对所定的晶型没有特征性。当测定晶型是否与本领域公知的晶型相同时，更重要的是关注峰的相对位置而不是峰的相对强度。并且，任意所定的晶型的峰位置可能存在一些误差(error)，这也公知于结晶学领域。例如，在样品分析过程中，由于温度、样品移动或仪器校准的变化可能导致峰的位置移动；往往2θ值的测定误差可能为约±0.2°，典型地可能为约±0.1°。因此，当测定晶体结构时，应考虑到这种误差。如果本发明的晶型如附图所示地被实质性地记载，则术语“实质性地”也旨在包括衍射峰中的这种差异。

在XRPD图谱中，峰位置通常表示为角2θ或晶面(crystal surface)距离d，d与θ之间的简单换算(simple conversion)为d＝λ/2sinθ，其中，d表示晶面距离，λ表示入射X射线(incident X-ray)的波长，θ为衍射角(diffraction angle)。对于相同化合物的相同晶型，XRPD图谱的峰位置整体相似，相对强度误差可能大。并且，对于混合物的鉴定，由于如含量减少等因素可能导致部分衍射线(diffraction line)消失，因此，其不必依赖于高纯度样品中观察到的整个谱带，应该留意甚至1个谱带可能对所定的晶体具有特征性。

差示扫描量热法(Differential scanning calorimetry：DSC)用于测量晶体由于其晶体结构或晶体熔融时的变化而吸收或释放热量时的转变温度。对于连续分析中相同化合物的相同晶型，热转变温度以及熔点(melting point)的误差典型地为约5℃，通常为约3℃以内。当化合物被记载为具有所定的DSC峰或熔点(melting point)时，其意味着DSC峰或熔点±5℃。提供通过DSC的辅助方法，以鉴定不同晶型。不同的晶型可以根据其不同的转变温度特性进行鉴定。混合物的DSC峰或熔点可以在广泛的范围内各种各样。并且，熔点与物质在熔融过程中的分解所引起的温度上升速度有关。

动态蒸气吸附分析(DVS，Dynamic Vapor Sorption)为一种长期以来用于研究原料药(API，Active Pharmaceutical Ingredient)以及药物制备物与水分之间的相互作用的方法，为了在特定温度下分析试样的吸湿率，利用DVS吸湿设备(吸湿性分析装置)将试样暴露于所需的相对湿度下直到试样的重量变化稳定来进行测定。

本发明的盐的制备方法以及通过其的盐的鉴定过程如下。首先，确认到化合物1的游离碱在自然状态下具有轻微的碱性(pKa＝8.12)，对此使用各种方法，以筛选酸性的抗衡离子中可以适当匹配的酸。具体地，用计算机计算与上述化合物1的游离碱的pKa适当匹配的酸，确认到这些酸为主要在pKa2至pKa5附近的酸。

因此，将上述范围的酸与各种类型的溶剂一起进行各种实验并得到总共22种晶型固体，确认它们各自的结晶度，并进行DSC以及DVS分析。结果，确认到半富马酸盐或富马酸盐为在结晶度、熔点、吸湿性等方面最优异的盐。

1-磷酸鞘氨醇(S1P)受体1-5组成具有7个跨膜结构域的G蛋白偶联受体家族。被称为S1P1至S1P5的这些受体通过与由鞘氨醇激酶催化导致的鞘氨醇的磷酸化而产生的1-磷酸鞘氨醇结合来被激活。S1P1、S1P4以及S1P5受体激活Gi但不激活Gq，而S1P2以及S1P3受体激活Gi以及Gq。S1P3受体随着细胞中钙的增加来对激动剂做出反应，但S1P1受体则不会。

2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇化合物(以下，称为化合物1)选择性地与每种S1P亚型的受体(receptor)结合，并充当能性拮抗剂(functional antagonist)以减少外周血液中的淋巴细胞(lymphocyte)。

化合物1有利于治疗多发性硬化症以及脑缺血，其参考通过引用并入本发明的韩国专利公开公报10-2017-0087813。

另一方面，炎症性肠病是一种肠道内反复产生异常炎症的慢性疾病。其由对肠道菌群的免疫反应引起，代表性的例子为“溃疡性结肠炎”以及“克罗恩病”。主要发生于西方人，但随着亚洲人的饮食逐渐西方化，在韩国的患者数量也不断增加。溃疡性结肠炎是一种在以肉食为主的欧洲及北美地区发病率高的疾病，但由于近年来西方化的饮食习惯，在包括韩国在内的东亚地区的发病率也不断增加。克罗恩病是一种可以发生于从口腔至肛门的整个消化道的任何地方的慢性炎症性肠病，目前尚无可以完全治愈溃疡性结肠炎的药物治疗方法。

并且，2015年的全球器官移植量为约120700例，比上一年增加5.8％，其中约60％为肾移植。肾移植1年后，约25％的患者会出现间质纤维化和肾小管萎缩(Interstitialfibrosis and tubular atrophy，IFTA)。由于移植的肾脏的组织病理学变化而导致间质部位(interstitial space)扩大并代替正常组织，从而产生肾小管的萎缩以及间质的纤维化状态，并导致肾小球滤过率降低以及蛋白尿增加。移植后第5年的发病率为66％，移植后第10年的发病率高达90％，这种症状早期主要由免疫学因素引起，但后期主要由作为免疫抑制剂的钙调神经磷酸酶(Calcineurin)抑制剂的毒性引起。

主要用作移植后免疫抑制维持疗法的钙调神经磷酸酶(Calcineurin)抑制剂的IFTA诱导机制尚不清楚，但已知为通过诱导血管收缩、氧化应激(oxidative stress)、TGF-β来引起纤维化。

目前，除了钙调神经磷酸酶(Calcineurin)抑制剂以外，对于慢性移植排斥反应使用抗代谢药物、类固醇联合疗法等，但对IFTA至今还没有明确确立的治疗方法，因此如果开发一种可以同时表现出免疫抑制功能以及抗纤维化效果的药物，则有望可以改善移植后患者的生活质量。

局灶节段性肾小球硬化(FSGS，focal segmental glomerular sclerosis)是一种由作为肾脏的过滤系统的肾小球足细胞的结构损伤(例如硬化症)等引起的过滤障碍以及蛋白尿诱导症，是终末期肾衰竭的最常见原因。全球患者数量为约30万名以上，美国患者数量为约8万名，占成人肾病综合征的1/3。目前使用类固醇、免疫抑制剂、血管紧张素受体阻滞剂等，但由于导致肾衰竭、贫血等严重的并发症，因此有必要开发一种改善现有FSGS治疗剂的副作用以及药效的药物。

斑秃是一种毛发呈圆形脱落的疾病，可能在一个或两个部位发生圆形的脱发，严重时可能在多个部位同时发生，脱发部位可能会融合在一起并出现除头皮的毛发以外的眉毛或胡须的毛发也脱落的现象。将整个头皮的毛发脱落的情况称为全秃，将头皮以及全身的毛发都脱落的情况称为普秃。将沿着侧头部及后头部的外围呈带状发生的情况称为蛇形斑秃。斑秃是一种由于免疫体系发生变化而导致免疫细胞攻击毛囊并引起炎症的自身免疫性疾病，被认为是由压力以及遗传原因引起的。低于约10％的斑秃患者可能伴有特应性皮炎、甲状腺疾病以及恶性贫血等其他自身免疫疾病，虽然发生于男女所有年龄段，但是在儿童以及青年中最常见的疾病，患病率为总人口的约1～2％。

斑秃的代表性治疗为类固醇。类固醇注射、类固醇口服药物、免疫抑制剂等被认可为治疗剂，但当长期治疗时，初始会表现出一定程度的效果，但随后会更加恶化或引起头皮发炎、头皮凹陷、高血压、体重增加、胃灼热、胃炎等副作用，并且还容易复发。目前在全球已知为类风湿关节炎治疗剂的作为口服用JAK抑制剂的Olumiant(成分名为巴瑞替尼(Baricitinib))在2022年6月被美国食品药品FDA批准为第一个斑秃全身治疗剂。随后，全球第一位制药公司的辉瑞公司也在完成JAK抑制剂之一的PF-06651600(成分名为利特昔替尼(Ritlecitinib))的3期临床试验后发表与Olumiant相似的功效数据，尤其在安全性方面没有观察到长期给药JAK抑制剂时所担心的主要心脏不良事件(MACE)以及感染副作用，并基于这种结果向FDA申请上市许可。因此，持续需要开发一种可以用于治疗斑秃且具有优异的药物功效且在副作用以及毒性方面安全的药物。

对此，本发明人为了开发鞘脂类化合物中选择性地作用于S1P亚型受体的独立化合物而正在锐意努力的过程中，本发明的化合物特异性结合S1PR1受体以及S1PR4受体并充当功能性拮抗剂(antagonist)，从而确认到不引起由于对S1PR亚型的非选择性而引起的心血管疾病副作用，同时具有预防以及治疗局灶节段性肾小球硬化的效果、预防以及治疗间质纤维化和肾小管萎缩的效果、预防或治疗炎症性肠病的效果、预防或治疗斑秃的效果，从而完成了本发明。

以下，将通过实施例更详细地说明本发明。然而，下述实施例用于更具体地说明本发明，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的普通技术人员可以在本发明的范围内对下述实施例进行适当修改以及改变。

实施例1：制备2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(化合物1)的半富马酸盐

在25mL的甲基异丁基酮(Methyl Isobutyl Ketone，MIBK)(23.9mg/mL)中添加98mg的富马酸(0.55倍当量)和500mg的化合物1-游离碱并在常温下搅拌混合5分钟。该悬浮液经过如下冷却结晶过程。首先，将悬浮液在40℃的温度下加热10小时，接着在5℃的温度下搅拌12小时。反应完成后，形成粘稠的白色悬浮液。通过离心悬浮液的柜体物质来分离沉淀物，并在常温下以真空状态(-700mm Hg条件)干燥16小时以得到25.5mg(89.2％)的最终产物。

所制备的半富马酸盐表现出在2θ值为6.3±0.2°、9.4±0.2°、18.5±0.2°、19.0±0.2°、19.9±0.2°、20.7±0.2°、25.5±0.2°、28.7±0.2°以及29.0±0.2°处具有主要衍射峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱。

1

在上述

实施例2：制备2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(NXC736)的富马酸盐

在25mL的丙酮中添加196mg的富马酸(1.1倍当量)和500mg的NXC736-游离碱并在常温下搅拌混合5分钟。通过与实施例1相同的冷却结晶过程处理该悬浮液并以真空状态(-700mm Hg条件)干燥以得到562mg的最终产物。

作为最终产物的富马酸盐表现出在2θ值为13.9±0.2°、18.9±0.2°、19.4±0.2°、22.1±0.2°以及22.5±0.2°处具有主要衍射峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱。

比较实施例1至比较实施例6：制备化合物1的其他盐

通过混合各种酸和化合物1的游离碱来制备化合物1的盐，并将所使用的酸以及溶剂示于表1中。

实验例1：吸湿性试验

通过DVS方法对比较实施例1至比较实施例6中制备的盐以及本发明的新盐进行特性分析，并将其结果示于如下表1中。

表1

比较本发明的实施例与其他盐之间的吸湿性

根据化合物1的盐酸盐(比较实施例1)的DVS分析结果，上述化合物在90％RH条件下表现出49.5％的吸湿率，并在自然状态下表现出潮解性。而且，比较实施例2至比较实施例6的盐也表现出比较高的吸湿性。

相反，与上述比较实施例1至比较实施例6相比，根据DVS评价结果，确认到实施例1在90％RH条件下表现出小于2％的吸湿率，因此具有非常优异的低吸湿性。

并且，根据多次反复实验的DVS评价结果，实施例2也在90％RH条件下表现出大于3％且小于5％的吸湿率，因此评价为具有优异的吸湿性。

实验例2：研究化合物1a的溶解度

在pH1.2的盐酸缓冲液、pH3.0的柠檬酸盐缓冲液、pH4.7的醋酸盐缓冲液、pH6.8的磷酸盐缓冲液、模拟胃液、空腹状态下的模拟肠液、餐后状态下的模拟肠液以及水等各种其他培养基中对实施例1中制备的化合物1a的溶解度进行评价。在2mL的透明玻璃小瓶中放入每种培养基约2.17mg的试样(基于化合物1-游离碱)并添加0.5mL的培养基(将盐的组成成分视为化合物1：抗衡离子＝1:0.5；目标浓度：2mg/mL)。利用磁力搅拌器将混合物在25℃的温度下以250RPM搅拌24小时。然后，记录混合物的pH以及外观，并利用

表2

化合物1a在水溶性溶液中的溶解度评价结果

化合物1a在除了磷酸盐缓冲液(pH6.8)以外的上述中所有水溶性培养基中均表现出2mg/mL以上的溶解度，实质上全部试样完全溶解，但在相同条件下观察到化合物1的盐酸盐在部分试样中呈不溶解的悬浮液。

实验例3：稳定性研究

在如下各种条件下确认化合物1a的标准溶液、pH、盐度、光以及氧化稳定性。

实验例3-1：标准溶液稳定性研究-40℃/75±5％RH条件

在40℃/75±5％RH条件下研究上述结晶化合物的稳定性。通过比较分析试验前后的XRPD确认物理稳定性，并通过HPLC法确认化学稳定性。在化合物1a的稳定性试验过程中使用的实验条件以及试验结果如下。

稳定性条件以及试验方法：

40℃/75±5％RH：打开小瓶的盖子并直立状态下的条件

将所需量(～1mg)的固体物质溶于1mL的稀释液(1:1的甲醇/水)中，并通过HPLC对所制备的溶液进行分析。

表3

化合物1的盐酸盐的标准溶液稳定性试验结果

/>

表4

化合物1a的标准溶液稳定性试验结果

在表3中，化合物1的盐酸盐在高湿度(40℃/75±5％RH)条件下经过一周后变成被认为物理不稳定的液体，并且部分样品表现出潮解性。然而，根据表4，化合物1a在高湿度(40℃/75±5％RH)条件下即使经过2周后也仍然保持原来的晶型并保持99％以上的纯度，因此可知标准溶液稳定性非常优异。

实验例3-2：标准溶液稳定性研究-60℃/75±5％RH条件

在60℃/75±5％RH条件下研究上述结晶组合物的稳定性，并通过HPLC法确认纯度。在化合物1a的稳定性试验过程中使用的实验条件以及试验结果如下。

稳定性条件以及试验方法：

60℃/75±5％RH：打开小瓶的盖子并直立状态下的条件

将所需量(～1mg)的固体物质溶于1mL的稀释液(1:1的甲醇/水)中，并通过HPLC对所制备的溶液进行分析。

表5

化合物1a的标准溶液稳定性试验结果

在表5中，与化合物1的游离碱相比，化合物1a在高湿度(60℃/75±5％RH)条件下经过1周以及2周后产生的有关物质以及含量的变化非常低，并且纯度保持在98％以上，因此可知标准溶液稳定性相对优异。

图11为将化合物1的游离碱、化合物1a以及化合物1的盐酸盐分别置于60℃/75±5％RH条件下后观察初期以及2周后的性质变化的图像，可以看出由于盐酸盐吸收水分而变成液体。并且，在图12中，将化合物1的游离碱、化合物1a以及化合物1的盐酸盐与样品一起在60℃的条件下储存2周后确认样品的腐蚀性程度的结果，确认到盐酸盐发生腐蚀，因此可知发生由盐酸盐导致的水分吸收。

实验例3-3：pH稳定性以及盐度稳定性

在2mg/mL的初始目标浓度条件下进行化合物1-半富马酸盐的pH以及盐度稳定性试验。用于评价化合物1-半富马酸盐的pH以及盐度稳定性条件以及评价结果如下。

稳定性条件以及试验方法：

40±2℃：盖上小瓶的盖子并直立状态的条件

为了稳定性使用的储存容器：2mL的螺口透明玻璃瓶(制造商：La-Pha-Pack公司)

目标浓度：～2mg/mL(在1mL的培养基中添加试样后涡旋混合30秒钟)

将500μL的试验混合液溶于500μL的稀释液中(1:1的甲醇/水)，并且在没有过滤过程的情况下通过HPLC对所制备的溶液进行分析。

表6

化合物1的盐酸盐的pH稳定性以及盐度稳定性评价

表7

化合物1a的pH稳定性以及盐度稳定性评价

可以从上述表7中看出，化合物1a在pH6.8的酸缓冲液/40±2℃条件下经过2周后表现出大于98％的纯度，并且除此以外尽管pH变化多样以及添加盐分，但表现出大部分纯度仍然保持原样，因此表现出整体优异的pH稳定性以及盐度稳定性。

然而，查看表6作为化合物1的盐酸盐在相同条件下的数据，确认到在pH6.8的磷酸盐缓冲液/40±2℃条件下经过2周后表现出纯度低于98％，即使在添加盐分后经过1周后表现出纯度为98％以下。

因此，可以确认与化合物1的盐酸盐相比，化合物1a具有相对优异的pH稳定性以及盐度稳定性。

实验例3-3：光稳定性以及氧化稳定性

为了光稳定性试验，将10mg的化合物1a在室温下暴露于120万勒克斯小时(1.2million lux hours)条件的紫外线以及可见光线下。为了氧化稳定性试验，在2mL的小瓶中添加0.2mL的30％H

表8

化合物1的盐酸盐的光以及氧化稳定性试验结果

表9

化合物1a的光以及氧化稳定性试验结果

可以从上述表9中看出，即使暴露于120万勒克斯小时(1.2million lux hours)条件的紫外线以及可视光线下，化合物1a的纯度以及物理性质没有明显变化，因此可以确认优异的光稳定性，并且即使在氧化应激条件下，经过24小时后才观察到分解。然而，可以从表8中看出，当化合物1的盐酸盐暴露于120万勒克斯小时(1.2million lux hours)条件的紫外线以及可视光线下时，观察到一些纯度的变化，并且在氧化应激条件下，从20小时后开始表现出约8％以上的分解率。因此，可以确认与化合物1的盐酸盐相比，化合物1a具有相对优异的光稳定性以及氧化稳定性。

综上所述，与化合物1的盐酸盐以及其他盐相比，本发明的2-氨基-2-(2-(1-癸基-1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基)丙烷-1,3-二醇(化合物1)的半富马酸盐在低吸湿性、标准溶液稳定性、光稳定性、氧化稳定性、根据pH的稳定性、溶解度等方面均表现出优异的效果，即使基于固体状态下的特性(结晶度、熔点、低吸湿性)进行判断，也可以确认具有最优异的物理性质。

并且，经确认，本发明的化合物1a是满足下述所有条件的盐，其用于临床的大量生产以及用于储存的最低条件：1)低吸湿性条件，在DVS中90％RH条件下吸湿率低于2％；以及2)标准溶液稳定性条件，在高湿度(40℃/75％RH等)条件下稳定2周以上；以及溶解度条件，应在所有水溶性培养基中具有2mg/mL以上的溶解度，其用于顺利进行临床试验的最低条件。

并且，经确认，本发明的化合物1b也不过是在吸湿率方面表现出略微差异，整体表现出与化合物1a相似的物理、化学性质。

实验例4：确认化合物1a对小鼠免疫细胞的抑制效果

FTY720(芬戈莫德，Fingolimod)是一种具有减少到达大脑的活化淋巴细胞的数量的作用机制的多发性硬化症治疗剂，其可以在淋巴结或骨髓中可逆转地捕获部分淋巴细胞，从而通过将淋巴细胞隔离在次级淋巴器官中来抑制进入中枢神经系统或减少血液中循环的淋巴细胞的个体数量。

评价化合物1对免疫细胞产生的影响，以确认作用于S1P受体的化合物1也是否表现出减少淋巴细胞的效果。将化合物1以3mg/kg/天(day)的量口服给药到小鼠后，将外周血液(PB，peripheral blood)、骨髓(BM，Bone marrow)中的淋巴细胞的变化分为T细胞(Tcells)、CD4T细胞(T cells)、CD8T细胞(T cells)，并在给药试验物质后的0小时、4小时、8小时、12小时、24小时、36小时分别进行FACS分析。测定细胞数量(cell number)并表示为基于0小时(time)的百分比(对照组的百分比(％of control))。

参考图4，可以确认通过给药3mg/kg的化合物1a，4小时后开始外周血液(PB)中的T细胞(T cells)、CD4T细胞(T cells)、CD8T细胞(T cells)均相比0小时减少至40.6％/41.6％、16.4％/17.6％、5.9％/9.3％水平。保持减少直到12小时，然后开始恢复并在36小时时恢复到88.9％。给药后24小时，在T细胞(T cells)中表现出剂量依赖性，在CD4T细胞(Tcells)、CD8T细胞(T cells)的情况下，从给药后4小时开始到24小时可以确认剂量依赖性的减少效果。

在骨髓(BM)中，在给药3mg/kg的化合物1a后，4小时后可以确认135％、120％的T细胞(T cells)分布，24小时后可以确认131％、118％的T细胞(T cells)分布。判断这是由于化合物1发生受体内化(Receptor internalization)且T细胞(T cells)的游离被抑制而出现的现象。

可以确认给药3mg/kg的化合物1a后，从4小时开始出现T细胞(T cells)中的细胞数量(cell number)减少的现象，并且一定程度上保持抑制效果直到24小时而后恢复。综上所述，可以确认通过给药化合物1a减少血液中循环的淋巴细胞(lymphocyte)个体数量并表现出免疫抑制效果。

实验例5：确认化合物1a对大鼠免疫细胞的抑制效果

为了评价化合物1a对大鼠免疫细胞产生的影响，将化合物1a以10mg/kg/天(day)的量口服给药到SD大鼠后，分为外周血液(PB)以及骨髓(BM)中的T细胞(T cells)、CD4T细胞(T cells)、CD8T细胞(T cells)，并在给药试验物质后的0小时、4小时、8小时、12小时、24小时、36小时、48小时分别进行FACS分析。测定细胞数量(cell number)并表示为基于0小时(time)的百分比(对照组的百分比(％of control))，测定T细胞(T cells)、CD4T细胞(Tcells)、CD8T细胞(T cells)的数量并基于0小时(time)表示为对照组的百分比(％ofcontrol)。

参考图5，可以确认给药化合物1a后，从4小时开始外周血液(PB)中的T细胞(Tcell)减少。可以确认抑制效果表现出剂量依赖性(70％、80％、87％)，通过给药10mg/kg的化合物1来保持抑制效果直到24小时。相反，在骨髓(BM)中，可以确认没有变化或增加的趋势。

通过本研究，可以确认口服给药化合物1a后，通过减少外周血液(PB)中的淋巴细胞数量来表现出免疫抑制效果。并且，可以在骨髓(BM)中确认没有变化或增加的趋势。判断这种效果与化合物1作为存在于淋巴结(lympHnode)、骨髓(BM)等中的S1P受体的功能性拮抗剂起作用并抑制淋巴细胞游离的机制相关。

实验例6：利用小鼠DSS诱导模型确认炎症性肠病的抑制功效

利用聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎(Dextran Sulfate Sodium(DSS)inducedColitis)模型评价化合物1a对炎症性肠病的有效性。上述小鼠模型通过饮水将浓度为2.5％的DSS给药到小鼠以诱导炎症性肠病。治疗组由给药化合物1a的试验组、给药奥扎莫德(Ozanimod)或甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)的阳性对照组、溶剂对照组(Vehicle)以及正常对照组组成，各组为n＝10。以诱导上述炎症性肠病的模型为对象，将化合物1作为本发明的化合物分别以5mg/kg、10mg/kg的量每天口服给药1次持续7天，将奥扎莫德(Ozanimod)作为阳性对照物质以5mg/kg的量每天口服给药1次，将甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)作为阳性对照物质以3mg/kg的量每周腹腔注射给药3次。

图6示出DSS诱导结肠炎小鼠的疾病活动指数(DAI)以及DSS诱导结肠炎小鼠的疾病活动指数曲线下面积(AUC)。DAI表示与小鼠的初始体重相比的体重减少、分辨浓度(Stool consistency)以及肠道出血程度的总分。DAI的计算标准如下述表10所示，在第0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天以及第8天评价DAI。

表10

参考图6，可以确认与阴性对照组(Vehicle)相比，作为阳性对照物质的3mg/kg的MTX、5mg/kg的奥扎莫德(Ozanimod)、5mg/kg的化合物1以及10mg/kg的化合物1给药组均具有统计显著性的减少效果。

尤其，给药5mg/kg的化合物1a以及10mg/kg的化合物1a的结果，可以确认与以往用作溃疡性结肠炎的靶向治疗剂的奥扎莫德(Ozanimod)相比，根据体重减少量、粪便浓度以及肠道出血程度的临床指标表现出相当或更好。

通过上述评价结果，进行阴性对照组与试验组或2个试验组之间的统计分析，在用于比较的学生t检验(Student’s t-test)或曼-惠特尼U检验(Mann Whitney U test)中，p值为0.05以下表现出显著水平。

由此，可以确认化合物1a为对炎症性肠病具有抑制效果的物质。

实验例7：评价化合物1a对心血管系统产生的影响

1)评价化合物1a对过表达hERG基因(hERGgene)的HEK293细胞(cell)产生的影响

将化合物1a应用于通过导入人类ether-a-go-go相关基因(human Ether-a-go-goRelated Gene，hERG)来稳定地表达hERG钾离子通道的HEK-293细胞以评价对hERG通道电流(hERG channel currents)产生的影响。将化合物1a的浓度设为1μm、3μm、10μm以及30μm。并且，在每个实验日，处理到完成对阴性对照物质或不同浓度的试验物质的hERG通道电流(hERG channel currents)的记录的任意1个细胞。

参考图7，浓度为1μm、3μm、10μm以及30μm的化合物1(B组至E组(group))对hERG通道电流(hERG channel currents)的抑制率(补偿抑制率，Compensated suppressionrate，％)分别为9.94±1.96、13.98±4.48、35.03±12.09以及82.62±7.31％(n＝3)，阴性对照(A组(group))对hERG通道电流(hERG channel currents)的补偿抑制率(Compensatedsuppression rate，％)表现出0±4.12(n＝3)值。即，可以确认与阴性对照组(A组(group))相比，浓度为10μM以及30μM的NCX736(D组以及E组(group))表现出具有统计显著性的值差。

在与此相同条件下用0.1μm浓度的E-4031作为阳性对照组(F组(group))处理。表现出hERG通道电流(hERG channel currents)的补偿抑制率(Compensated suppressionrate，％)为92.64±1.66％(n＝5)的高值。通过这种结果，判断本试验方法为适合用于评价化合物1对hERG通道电流(hERG channel currents)产生的影响的方法。

在上述条件下利用导入hERG基因的HEK-293细胞评价对hERG通道电流(hERGchannel currents)产生的影响中，用浓度最高至30μm的化合物1a作为试验物质处理的结果，表现出hERG通道电流(hERG channel currents)的补偿抑制率(Compensatedsuppression rate，％)为82.62±7.31％，算出K

2)利用比格犬确认对心血管系统产生的影响

将化合物1a口服给药到4只植入有远程发射器的未麻醉且未束缚状态的雄性比格犬。然后，通过测定4只比格犬的心率来评价化合物1对心血管系统产生的影响，并用肉眼观察是否存在异常症状的表达

在本实验中，将实验物质分4个步骤分别给药到4只比格犬。在第1次给药步骤(10mg/kg的化合物)中，给药作为赋形剂的0.5％MC水溶液作为对照物质，在第2次给药步骤中，给药12.5mg/kg的化合物1a，在第3次给药步骤中，给药25mg/kg的化合物1a，在第4次给药步骤中，给药50mg/kg的化合物1a。每隔一周进行第1次至第4次给药。并且，给药实验物质前0小时(hours)、给药实验物质0.5小时(hours)、1小时(hours)、2小时(hours)、3小时(hours)、4小时(hours)、6小时(hours)、8小时(hours)、12小时(hours)以及24小时(hours)后测定比格犬的心率。

参考图8，可以确认即使以12.50mg/kg、250mg/kg、50mg/kg的用量给药化合物1，心率(Heart rate)也没有出现变化。

并且，用肉眼观察比格犬的一般症状的结果，当以12.50mg/kg、20mg/kg 5、50mg/kg的用量给药化合物1a时没有观察到异常症状。

如上所述，根据利用小鼠DSS诱导模型评价炎症性肠病抑制功效的结果、测定给药化合物1的比格犬的心率的结果以及用肉眼确认是否存在异常症状的表达的结果，可以确认包含本发明的如化学式1所示的化合物、其旋光异构体或其药学上可接受的盐作为有效成的药物组合物作用为针对S1PR1以及S1PR4的功能性拮抗剂具有预防或治疗炎症性肠病的效果。并且，可以确认本发明的药物组合物作用为针对S1P受体的亚型(S1P1、S1P2、S1P3、S1P4以及S1P5)中S1PR1以及S1PR4的功能性拮抗剂，具有预防或治疗炎症性肠病的效果，并且具有不引起心血管疾病副作用的效果。

实验例8：利用小鼠肾纤维化(Kidney fibrosis)模型确认纤维化抑制功效

利用作为肾纤维化疾病模型的单侧尿路梗阻(Unilateral Ureteralobstruction，UUO)模型评价化合物1a在肾病中的抗纤维化功效。通过结扎小鼠一侧尿路来诱导肾纤维化后，将化合物1a以10mg/kg/天(day)、30mg/kg/天(day)、90mg/kg/天(day)，将作为阳性对照物质的替米沙坦(Telmisartan)以30mg/kg/天(day)的量每天口服给药1次持续2周。

参考图9，可以确认与阴性对照组(假手术(sham))相比，溶剂对照组(Vehicle)中的纤维化部位(天狼星红阳性区域，Sirius red positive area(％))以及肾羟脯氨酸显著增加，从而诱导神纤维化。用作阳性对照物质的替米沙坦(Telmisartan)统计上显著减少肾羟脯氨酸(p<0.0001)。可以确认以10mg/kg/天(day)、30mg/kg/天(day)、90mg/kg/天(day)的量给药化合物1a的所有组的肾羟脯氨酸均在统计上显著减少(p<0.05，p<0.01，P<0.001)，尤其，90mg/kg/天(day)的药化合物1a给药组的肾羟脯氨酸在统计上显著减少(p<0.05)。由此，可以确认化合物1是具有纤维化抑制效果的物质，并且可以确认化合物1在由UUO诱导的小鼠肾纤维化模型中表现出剂量依赖性的神纤维化抑制效果。

实验例9：利用由腺嘌呤诱导的肾衰竭(Adenineinducedrenalfailure)小鼠模型

利用由腺嘌呤诱导的慢性肾疾病模型评价化合物1a的抗纤维化效果。将0.5％的腺嘌呤(在0.5％的CMC中(in 0.5％CMC))口服给药到小鼠持续4周以诱导慢性肾病综合征(chronic kidney disease)，并将化合物1a以10mg/kg/天(day)、30mg/kg/天(day)、90mg/kg/天(day)的量以及将作为阳性对照物质的替米沙坦(Telmisartan)以10mg/kg/天(day)的量口服给药持续3周，然后进行血清肌酐、血清BUN、肾羟脯氨酸测量以及组织病理学检查。并且，基于上述测量结果导出肾小管间质指数(Tubular-interstitial index)值。

生物化学(Biochemical)分析结果，在由腺嘌呤诱导的CKD模型中，与对照组(control)相比，溶剂对照组(vehicle)的血清肌酐水平显著增加至1.15±0.25(mg/dl)、血清BUN水平显著增加至202.3±32.1(mg/dl)。与溶剂对照组(Vehicle)相比，90mg/kg/天(day)的化合物1a给药组的血清肌酐水平减少0.90±0.12mg/dl，并且与溶剂对照组(Vehicle)相比，血清BUN水平减少至157.4±32.3(mg/dl)，并且与对照组相比，30mg/kg/天(day)的化合物1a给药组的肾羟脯氨酸水平在统计上显著减少。参考图10，根据肾小管间质指数(Tubular-interstitial index)，可以确认肾纤维化在以90mg/kg/天(day)的量口服给药化合物1a的组以及替米沙坦(Telmisartan)给药组中具有统计显著性的减少。综上所述，可以在由腺嘌呤诱导的慢性肾纤维化模型中确认化合物1的抗纤维化效果。

实验例10：利用小鼠斑秃模型确认斑秃抑制功效

利用自发性(Spontaneous)斑秃模型(C3H/HeJ)进行化合物1a对斑秃的有效性评价。用于试验的C3H/HeJ小鼠是一种随着周龄的增加自然出现斑秃的动物。将取自自然诱导斑秃的20周龄以上的C3H/HeJ小鼠的淋巴结细胞进行增殖并注射到未诱导斑秃的10～16周龄的C3H/HeJ小鼠以诱导斑秃，将化合物1a以30mg/kg的量口服给药持续12周后测定无病生存率(Disease free ratio)、斑秃病变区(AA lesion area)。

未确认到化合物1a给药组与对照组(control)之间显著的体重差异，并且在化合物1a给药组中晚期观察到斑秃(100％斑秃观察天数：对照组：56天，化合物1a给药组：84天)。并且，可以看出在化合物1a给药组中观察到斑秃的部位统计上显著少于对照组。(第84天斑秃病变区(AA lesion area)-对照组：约80％，化合物1a给药组：约10％)。

作为参考，在本说明说中使用的缩写词的列表如下：

表11

缩写词列表

/>