用于多发伤患者的创伤相关并发症预后的PRO-ADM

技术领域

本发明涉及一种用于多发伤患者的继发创伤相关并发症的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层的方法，其包含提供所述患者的样品，其中在所述多发伤后从所述患者中分离出所述样品，确定所述样品中proADM或其片段的水平，其中proADM或其片段的所述水平与继发创伤相关并发症的可能性相关。

背景技术

多发性创伤后严重损伤的患者的治疗给医疗保健提供方带来了越来越大且重大的负担[1-3]，且全身性炎症的继发发展对败血症的早期识别造成问题[4,5]。尽管由于初始创伤降低了死亡率，但作为继发并发症的败血症的发病率保持不变，并且可能导致长期的重症监护治疗和较高死亡率[3]。因此，对患者继发败血症发生的可能进行早期和准确识别具有重要的临床价值。相反，排除败血症发生在不使用抗生素或进行另外的败血症相关研究(如病灶清除)方面具有同等重要的意义。

此外，多发伤患者往往会发生其它创伤相关并发症，所述并发症不一定与感染有关，包括横纹肌溶解症和器官衰竭，这可能导致长期的重症监护治疗和较高死亡率。对于这种非感染相关并发症，也迫切需要一种用于早期识别有发生此类并发症风险的多发伤患者的方法。

使用生物标志物来区分明显存在全身性炎症与败血症发生或非感染相关并发症的早期阶段，可允许开始个性化治疗策略，如更早地开始抗生素疗法。如C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)和白细胞介素(IL)-6的生物标志物已被纳入常规临床使用[6,7]，其中其它生物标志物和临床评分(如乳酸)、序贯器官衰竭评定(SOFA)评分以及最近提出的快速SOFA评分构成了最近修订的败血症定义的关键部分[8]。尽管存在这些既定的生物标志物和评分，但是在临床上仍然需要更早和更准确的工具，以帮助预测和识别严重损伤的患者和特别是多发伤患者中是否发生感染和非感染相关并发症。

因此，在治疗严重损伤的患者(如多发伤患者)的领域中，需要用于继发创伤相关并发症的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层的其它手段。

采用proADM代表此类手段，尤其是中位肾上腺髓质素前体(MR-proADM)。最近的研究已展示烧伤和神经损伤后发生败血症的患者中浓度较早升高[9][10]，先前公布的大量证据表明其可用于识别已感染患者的疾病严重程度[11-13]。

Wang等人(《中华创伤杂志(英文版)(Chinese Journal Of Traumatology(English Edition))》,第13卷,第3期,2010年6月1日,第152-157页)已展示proADM可用作ICU患者败血症严重程度和死亡率的指标。然而，Wang等人没有叙述使用proADM来预测多发伤患者的特定亚组中的败血症，并且因此也没有研究用于此患者集体的具体截止值。此外，WO2018/029214A1描述了一种预测受试者中并发症的方法，其中所述受试者可以是例如健康受试者或患有呼吸系统疾病、尿路感染或恶性肿瘤的受试者。

因此，先前尚未对严重创伤后患者中proADM的表现进行研究，所述患者为如损伤严重程度评分(ISS)≥17分的患者或多发伤患者。但是，患者的具体亚组的选择可能会对生物标志物(如proADM)的表现产生巨大影响，因此，一定水平的生物标志物的预测影响取决于患者参考组。

美国专利申请US2013/203612A1和US2012/094314A1涉及用除proADM以外的标志物预测多发伤患者的败血症的方法。US2013/203612A1涉及胰石蛋白的用途，并且US2012/094314A1描述NT-CNP的用途。这两种生物标志物都与proADM完全无关，并且没有证据表明proADM可以在类似于这些公开中描述的方法的方法中用作这些标志物的替代物。

本文公开的数据将MR-proADM的表现与已既定的生物标志物(PCT、CRP和乳酸)和临床严重程度评分(SOFA)进行比较，以便：(i)比较创伤后即刻的浓度，(ii)评估在识别有发生感染相关并发症风险的患者方面的表现，(iii)识别发生任何继发败血症风险较低的患者，和(iv)识别有发生非感染相关并发症风险的患者。

发明内容

鉴于现有技术中的困难，作为本发明的基础的技术问题是提供用于多发伤患者的继发创伤相关并发症的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层的手段。

因此，本发明力图提供方法、试剂盒和其它手段，所述方法、试剂盒和其它手段基于来自患者的样品中所确定的肾上腺髓质素(ADM)(特别是proADM或MR-proADM)水平对多发伤患者的继发创伤相关并发症进行诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层。因此，本发明的一个目标是使用生物标志物或生物标志物的组合来区分更有可能或有较高风险出现继发创伤相关并发症(如败血症或横纹肌溶解症)的多发伤患者与有较低风险出现继发创伤相关并发症的多发伤患者。

在独立权利要求中提供了对本发明的技术问题的解决方案。在从属权利要求中提供了本发明的优选实施例。

因此，本发明涉及一种用于多发伤患者的继发创伤相关并发症的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层的方法，其包含

-提供所述患者的样品，其中在所述多发伤后从所述患者中分离出所述样品，

-确定所述样品中proADM或其片段的水平，

-其中proADM或其片段的所述水平与继发创伤相关并发症的可能性相关。

本发明为医疗保健从业人员(如医生、护士、急诊室人员等)提供了新的快速且可靠的测试，以快速评定多发伤患者发生创伤相关并发症(如败血症)的风险。由于多发伤后许多炎症标志物和其它炎症征象非特异性地增加，医护人员难以区分炎症与创伤相关并发症的发生，所述创伤相关并发症也可能与炎症征象有关，如感染、败血症、器官衰竭、休克和横纹肌溶解症。出人意料的是，本发明提供了通过确定从患者中分离出的样品中的proADM或其片段的水平来识别出发生创伤相关并发症的风险增加或较高的患者，并且还识别出较不可能发生此类并发症或此类并发症的发生可实际上被排除的患者的手段。

在本发明的实施例中，患者可以是严重损伤的患者而不是多发伤患者。在本发明的实施例中，严重损伤的患者可以是多发伤患者。在本发明的实施例中，多发伤患者可以被认为是严重损伤的。根据本发明，创伤相关并发症可以被认为是患者健康中的不良事件。

一个很大的优点是，这一点通过以下方式是可能实现的：在发生多发伤后尽早分离出样品，为医护人员提供有关患者病况进展的早期指导，并且由此实现针对性和改进的治疗决策，例如关于治疗措施中具体药物的施用。另一个优点是，proADM的水平也可在多发伤后的较晚时间点确定，并且因此实现对患者健康状况的监测。

在本发明的实施例中，在多发伤后的48小时内、优选24小时内、更优选6小时内从所述患者中分离出样品。

在实施例中，在多发伤后的约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、42小时、48小时、60小时、72小时、84小时、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天或28天内从所述患者中分离出样品。

在本发明的实施例中，可以在多发伤后的多个时间点从患者中分离出多于一个样品，用于确定proADM或其片段。

在本发明的其它实施例中，可能是严重损伤和/或多发伤患者的患者具有≥17分的损伤严重程度评分(ISS)。在优选实施例中，多发伤患者具有≥17分的ISS。已展示，本发明的方法在ISS≥17的严重损伤患者中特别准确，这是非常有用的，因为这种患者特别不稳定并且创伤相关并发症可能对这些患者的健康状况有害。因此，本发明的方法实现对患者的改进管理，关注实际需求，同时有可能排除潜在发生的并发症。通过排除潜在发生的并发症，可以调整或停止某种疗法，以避免多发伤患者可能面临的严重副作用的出现。

此外，在一些实施例中，本发明的方法涉及的严重损伤和/或多发伤患者组不包括ISS小于15、小于16、小于17、小于18、小于19或小于20的患者。此外，在一些实施例中，本发明的患者可能不包含烧伤的总身体表面积(TBSA)低于40％、39％、38％、37％、36％或35％的烧伤患者。此外，在一些实施例中，ISS为9、10、11、12、13或14的创伤患者可以被排除在本发明的方法之外。在本发明的实施例中，所述方法涉及ISS为15或更大、16或更大、17或更大、18或更大、19或更大或20或更大的患者。

创伤(如烧伤)的严重程度可能会影响proADM的水平和其对创伤相关并发症的预测价值，因此选择正确的多发伤患者组可能对成功执行本发明的方法具有决定性作用。因此，对具有创伤但不符合本发明意义上的多发伤患者的患者执行所述方法可能导致错误或误导性结果。然而，在本发明意义上，多发伤患者并不一定必须遭受多发性损伤，如在身体的至少两个部位中有两种或更多种损伤或一个病况有多发性损伤，即在一个身体部位中有两种或更多种严重损伤。还有可能的是，多发伤患者仅遭受一种符合多发伤的严重损伤，如超过TBSA的40％的烧伤。

在本发明的优选实施例中，proADM或其片段的水平等于或高于1.54nmol/l±20％、优选等于或高于1.54nmol/l±10％、更优选等于或高于1.54nmol/l指示继发创伤相关并发症。

在其它实施例中，proADM或其片段的水平低于1.54nmol/l±20％、优选低于1.54nmol/l±10％、更优选低于1.54nmol/l指示不存在继发创伤相关并发症。

本发明的方法的一个很大优点是，通过使用1.54nmol/l±20％的截止值，有可能识别出有较高风险发生创伤相关并发症的患者和/或还识别出不太可能发生此类并发症或此类并发症实际上可以被排除的患者，无关于具体时间点或发生多发伤后样品分离的受限时间窗口，且无关于具体创伤相关并发症。

根据本发明，术语“指示”在“指示继发不良事件”、“指示继发创伤相关并发症”、“指示不存在继发不良事件”和“指示不存在继发创伤相关并发症”的上下文中旨在作为风险和/或可能性的量度。优选地，存在或不存在不良事件的“指示”旨在作为风险评定，并且通常不以限制性方式解释为明确地指向所述事件的绝对存在或不存在。

因此，术语“指示继发不良事件”、“指示继发创伤相关并发症”、“指示不存在继发不良事件”和“指示不存在继发创伤相关并发症”可被理解为分别指示不良事件/创伤相关并发症发生的低风险或高风险。在一些实施例中，低风险涉及与检测到高于指示值的proADM水平相比更低的风险。在一些实施例中，高风险涉及与检测到低于指示值的proADM水平相比更高的风险。

然而，记住上述内容，当使用本文公开的截止值时，相对于确定继发不良事件的存在与否，proADM的高和低严重程度水平的确定是非常可靠的，使得风险的估计满足医学专业人员能够进行适当的措施。

完全出人意料的是，在多发伤患者的背景下，proADM或其片段的水平可能与是否存在继发创伤相关并发症的可能性相关。来自本发明的多发伤患者的样品中的proADM水平可以优选地指定为proADM的至少两种不同的严重程度水平(高和低)。proADM的高水平指示高严重程度水平，且低水平指示低严重程度水平。确定可用于指定相应严重程度水平的截止值的相应浓度可能取决于多个参数，如多发伤后样品分离的时间点、由方法评定的创伤相关并发症和用于确定所述样品中proADM或其片段水平的方法。

本文公开的截止值优选是指通过Thermo Scientific BRAHMS KRYPTOR测定从患者获得的血液样品(优选地全血样品)或血浆或血清样品中的proADM或其片段的蛋白质水平的测量值。因此，本文所公开的值可以根据所采用的检测/测量方法而在一定程度上变化，并且本文所公开的具体值还旨在理解由其它方法确定的相应值。

在本发明的实施例中，可以定义从低严重程度水平转变到高严重程度水平的proADM或其片段的极限值或截止值可以是0.1nmol/l和4nmol/l范围内的任何值。此范围内的任何值可被认为是高和低proADM严重程度水平的适当截止值。此外，低于所述截止值的值可以指示不存创伤相关并发症，并且等于或高于所述截止值的值可以指示创伤相关并发症。可在本发明的背景下使用的适当截止水平包含但不限于0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1.0、1.05、1.1、1.15、1.2、1.25、1.3、1.35、1.4、1.45、1.5、1.55、1.6、1.65、1.7、1.75、1.8、1.85、1.9、1.95、2.0、2.05、2.1、2.15、2.2、2.25、2.3、2.35、2.4、2.45、2.5、2.55、2.6、2.65、2.7、2.75、2.8、2.85、2.9、2.95、3.0、3.05、3.1、3.15、3.2、3.25、3.3、3.35、3.4、3.45、3.5、3.55、3.6、3.65、3.7、3.75、3.8、3.85、3.9、3.95、4.0nmol/l。

在本发明的实施例中，还要求与这些可能的截止值的偏差，例如±30％、29％、28％、27％、26％、25％、24％、23％、22％、21％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％。

在本发明的方法的某些实施例中，创伤相关并发症包含感染相关并发症，如感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。在本发明的方法的某些实施例中，创伤相关并发症包含感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。在其它实施例中，创伤相关并发症由感染相关并发症组成，如感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。在实施例中，创伤相关并发症是败血症。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.97nmol/l±20％、优选等于或高于0.97±10％、更优选等于或高于0.97nmol/l指示继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于1.35nmol/l±20％、优选等于或高于1.35nmol/l±10％、更优选等于或高于1.35nmol/l指示继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平低于0.97nmol/l±20％、优选低于0.97±10％、更优选低于0.97nmol/l指示不存在继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平低于1.35nmol/l±20％、优选低于1.35nmol/l±10％、更优选低于1.35nmol/l指示不存在继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.8nmol/l、优选等于或高于0.9nmol/l、更优选等于或高于0.97nmol/l指示继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于1.2nmol/l、优选等于或高于1.3nmol/l、更优选等于或高于1.35nmol/l指示继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离的样品中proADM或其片段的水平低于0.8nmol/l、优选低于0.9nmol/l、更优选低于0.97nmol/l指示不存在继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离的样品中proADM或其片段的水平低于1.2nmol/l、优选低于1.3nmol/l、更优选低于1.35nmol/l指示不存在继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克。

特别有利的是，将在本发明的方法的背景下使用的proADM或其片段的截止值可以根据样品分离的时间点调整以及根据待检测或排除的创伤相关并发症调整。因此，所述方法能够根据样品分离的情形和当时可用的其它信息(例如发生具体创伤相关并发症的风险增加)来更准确地评定患者的预后/风险。

在本发明的其它实施例中，创伤相关并发症包含非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭。在实施例中，创伤相关并发症是横纹肌溶解症。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.82nmol/l±20％、优选等于或高于0.82nmol/l±10％、更优选等于或高于0.82nmol/l指示继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.97nmol/l±20％、优选等于或高于0.97nmol/l±10％、更优选等于或高于0.97nmol/l指示继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平低于0.82nmol/l±20％、优选低于0.82nmol/l±10％、更优选低于0.82nmol/l指示不存在继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平低于0.97nmol/l±20％、优选低于0.97nmol/l±10％、更优选低于0.97nmol/l指示不存在继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.7nmol/l、优选等于或高于0.8nmol/l、更优选等于或高于0.82nmol/l指示继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.8nmol/l、优选等于或高于0.9nmol/l、更优选等于或高于0.97nmol/l指示继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭。

在本发明的实施例中，

-在严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平低于0.7nmol/l、优选低于0.8nmol/l、更优选低于0.82nmol/l指示不存在继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭，和/或

-在严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平低于0.8nmol/l、优选低于0.9nmol/l、更优选低于0.97nmol/l指示不存在继发非感染相关并发症，如横纹肌溶解症和/或器官衰竭。

根据本发明的方法的其它实施例，创伤相关并发症包含死亡。在实施例中，创伤相关并发症是死亡、优选在多发伤后28天内的死亡。优选地，在本发明的方法的背景下，创伤相关并发症(待预测)将在多发伤后28天内发生。

在其它实施例中，创伤相关并发症(待预测)将在多发伤后28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2天或1天内发生。

本发明的一个很大优点是，有可能不仅估计创伤后并发症的风险，而且提供发生此类并发症的时间范围，使得可以估计采取对抗措施的紧急程度和一些措施的适合性。

取决于本发明的方法的结果，所述方法的实施例可以包含后续治疗决策和/或治疗作用。此类治疗决策可以包括医学治疗的开始、改变或修改。例如，如果本发明的方法指示继发创伤相关并发症，则可以开始适当治疗措施，如某种药物、外科手术或输液疗法的开始或改变。在本发明的方法的上下文中，本文所公开的任何疗法、医学治疗或治疗作用可用作后续治疗决策或治疗作用，特别是如果治疗措施对并发症是特定的，例如在败血症的情况下进行抗生素治疗，或在作为创伤相关并发症的横纹肌溶解症情况下进行静脉输液疗法、透析、电解质异常控制(尤其是钾、钙和磷)。此外，可能指示在延长的时间段(如几天、几周甚至几个月)内维持对患者的重症观察和监护。这可能涉及将患者留在ICU或移至ICU和/或延长患者住在ICU中的时间。

另一方面，如果本发明方法的结果指示不存在创伤相关并发症，则可能不需要针对此类并发症的具体治疗措施。

相反，如果本发明的方法指示不存在继发创伤相关并发症，则这可能指示停用或改变不必要的药物，如对于(静脉内)抗生素疗法，和/或让重症监护病房的病人较早出院。

如果本发明的方法指示感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克，则可以开始抗生素疗法或可以修改或改变正在进行的抗生素疗法。

在一个实施例中，本发明还包含将本文所述的诊断方法的结果告知患者。在本发明的实施例中，患者为至少18岁。

在本发明的实施例中，样品选自由血液样品、血清样品、血浆样品和/或尿液样品组成的组。确定血液、血清或血浆中的proADM或其片段是特别有利的，因为其已经展示为特别准确的。此外，这些样品非常准确地反映了给定时间点患者的实际状况。

在本发明的实施例中，确定proADM或其片段的水平包含确定样品中MR-proADM的水平。确定MR-proADM的使用对于文本描述的任何给定实施例是优选的，并且因此可以在每个实施例的上下文中考虑。在优选实施例中，“ADM片段”可被认为是MR-proADM。

在本发明的其它实施例中，proADM或其片段的水平与所述患者中继发创伤相关并发症的可能性相关。在优选实施例中，proADM或其片段的水平与所述患者中继发创伤相关并发症的可能性正相关。换句话说，所确定的proADM水平越高，继发创伤相关并发症的可能性越大。

根据某些实施例，本发明的方法另外包含

-确定来自所述患者的样品中至少一种额外生物标志物或其片段的水平，其中所述至少一种额外生物标志物优选是PCT或其片段和/或乳酸，和/或

-确定至少一项临床评分，其中所述至少一项临床评分优选是SOFA，

-其中所述至少一种额外生物标志物的水平和/或至少一项临床评分以及proADM或其片段的所述水平指示继发创伤相关并发症。

在本发明的上下文中可以确定的其它额外标志物包含乳酸和CRP。在本发明的上下文中可以确定的临床评分包含SI评分(全身性炎症评分)、SOFA、qSOFA、SIRS、SAPS II、APACHE II，优选SOFA。

在本发明的方法的上下文中确定proADM或其片段和SOFA被证明在继发创伤相关并发症的预测和/或预后方面提供进一步的准确性，特别是在创伤相关并发症是或包含败血症时。

在本发明的方法的另一个实施例中，额外标志物是乳酸。出乎意料的是，在本发明的方法的上下文中，proADM和乳酸的组合确定提供了对继发非感染相关并发症(特别是横纹肌溶解症)特别准确的预测。

在其它实施例中，至少一种额外生物标志物是横纹肌溶解症的至少一种标志物，如肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸酐、肌红蛋白、醛缩酶、肌钙蛋白、碳酸酐酶3型、脂肪酸结合蛋白(FABP)、转氨酶或钾。

在本发明的实施例中，所述方法另外包含

-确定从多发伤患者分离出的第一样品中proADM或其片段的严重程度水平，和/或

-确定从所述患者分离出的第二样品中proADM或其片段的严重程度水平，其中所述第二样品在第一样品之后已分离出来，

-其中proADM或其片段的水平低于1.54nmol/l±20％对应于低严重程度水平，并且proADM或其片段的水平等于或高于1.54nmol/l±20％对应于高严重程度水平。

优选地，在多发伤后24小时或更优选在6小时内从多发伤患者中分离出第一样品。在本发明的方法的上下文中，可以在针对样品分离所公开的任何时间点分离第一样品。

此外，可以在分离出第一样品后的24小时内从所述患者中分离出第二样品。然而，可以在分离出第一样品之后的约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、30小时、36小时、42小时、48小时、60小时、72小时、84小时、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天或28天内分离出第二样品。

在本发明的实施例中，第二样品中proADM或其片段的高严重程度水平指示继发创伤相关并发症。在本发明的其它实施例中，与第一样品相比，第二样品中proADM或其片段的严重程度水平增加指示继发创伤相关并发症。

在其它实施例中，第一和第二样品中proADM或其片段的低严重程度水平指示不存在继发创伤相关并发症，如优选败血症和/或败血性休克。

此外，第二样品中proADM或其片段的低严重程度水平可以指示不存在继发创伤相关并发症，如优选败血症和/或败血性休克。

在本发明的实施例中，proADM或其片段的持续低严重程度水平指示不存在感染相关并发症，特别是败血症，并且在proADM严重程度水平持续较低的情况下，优选可以排除败血症的发生(优选在多发伤后28天内)。

此外，本发明涉及一种用于实施本发明的方法的试剂盒，其包含

-检测试剂，其用于确定来自受试者的样品中proADM或其片段的水平，并且任选地另外用于确定所述样品中至少一种额外生物标志物(如PCT或其片段和/或乳酸)的水平，和

-参考数据，如参考水平，其对应于

i.在所述严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.97nmol/l±20％，用于继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层，

ii.在所述严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于1.35nmol/l±20％，用于继发感染、医院内感染、败血症和/或败血性休克的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层，

iii.在所述严重损伤后24小时内分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.82nmol/l±20％，用于继发非感染相关并发症(如横纹肌溶解症和/或器官衰竭)的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层，

iv.在所述严重损伤后24至48小时之间分离出的样品中proADM或其片段的水平等于或高于0.97nmol/l±20％，用于继发非感染相关并发症(如横纹肌溶解症和/或器官衰竭)的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层，和/或

v.proADM或其片段的高和/或低严重程度水平，其中所述低严重程度水平是低于1.54nmol/l±20％，并且所述高严重程度水平是等于或高于1.54nmol/l±20％，

-其中所述参考数据优选地存储在计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式采用，所述计算机可执行代码被配置用于将所述确定的proADM或其片段的水平和任选地另外所述确定的至少一种额外生物标志物(如PCT或其片段和/或乳酸)的水平与所述参考数据进行比较。

用于确定proADM或其片段的水平和任选地用于确定PCT、乳酸和/或C-反应蛋白或其片段的水平的检测试剂优选地选自进行所述方法所必需的那些，例如针对ADM的抗体；合适的标签，如荧光标签，优选适用于KRYPTOR测定的两种单独的荧光标签；样品收集管。

在本发明的方法的上下文中所公开的实施例和特征也适用于本发明的试剂盒且反之亦然。

在本文所述方法的一个实施例中，proADM或其片段和任选地另外其它生物标志物(例如PCT或其片段)的水平使用选自由以下组成的组的方法确定：质谱(MS)、发光免疫测定(LIA)、放射免疫测定(RIA)、化学发光免疫测定和荧光免疫测定、酶免疫测定(EIA)、酶联免疫测定(ELISA)、基于发光的珠阵列、基于磁珠的阵列、蛋白质微阵列测定、快速测试形式(如免疫层析条测试)、稀有穴状化合物测定和自动化系统/分析仪。

根据本发明的方法还可以体现为均相方法，其中由一种或多种抗体和待检测的标志物(例如proADM或其片段)形成的夹心复合物保持悬浮于液相中。在这种情况下，优选的是，当使用两种抗体时，两种抗体都用检测系统的部分标记，如果两种抗体整合至一个夹心物中，则导致信号的生成或信号的触发。

此类技术将特别体现为荧光增强或荧光猝灭检测方法。一个特别优选的方面涉及成对使用的检测试剂的使用，例如在US 4 882 733 A、EP-B1 0 180 492或EP-B1 0 539477和其中引用的现有技术中所述的那些。以这种方式，仅在反应混合物中检测在单个免疫复合物中直接包含两种标记组分的反应产物的测量成为可能。

例如，这些技术以商标名

在本文所述方法的一实施例中，所述方法为免疫测定，并且其中所述测定在均相或非均相中进行。

在本文所述方法的其它实施例中，所述方法还包含对来自所述患者的样品进行分子分析以检测感染。用于检测感染的分子分析的样品优选是血液样品。在优选实施例中，分子分析是旨在检测源自病原体的一种或多种生物分子的方法。所述一种或多种生物分子可为核酸、蛋白质、糖、碳水化合物、脂质和/或其组合，例如，糖基化蛋白质、优选核酸。所述生物分子优选对一种或多种病原体具有特异性。根据优选实施例，通过一种或多种用于分析生物分子的方法来检测此类生物分子，所述方法选自包含以下的组：核酸扩增方法(诸如PCR、qPCR、RT-PCR、qRT-PCR或等温扩增)、质谱法、酶活性检测和基于免疫测定的检测方法。分子分析的其它方法是本领域技术人员已知的，并且包含在本发明的方法中。

在本文所述方法的一实施例中，第一抗体和第二抗体分散存在于液体反应混合物中，并且其中作为基于荧光或化学发光消除或扩增的标记系统的一部分的第一标记组分与第一抗体组合，并且所述标记系统的第二抗体组分与第二抗体组合，使得在两种抗体与待检测的所述proADM或其片段结合之后，产生可检测的信号，其允许在测量溶液中检测所得夹心复合物。

在本文所述方法的一实施例中，标记系统包含稀土穴状化合物或螯合物以及荧光或化学发光染料，特别是花青类型的染料。

在本文所述方法的一实施例中，所述方法还包含将所确定的proADM或其片段的水平与参考水平、阈值和/或对应于已被诊断为危重症且正在接受医学治疗的患者中的proADM或其片段的群体平均值进行对比，其中所述对比在计算机处理器中使用计算机可执行代码进行。

本发明的方法可以部分地是计算机实现的。例如，可以在计算机系统中执行将检测到的标志物(例如proADM或其片段)的水平与参考水平进行对比的步骤。在计算机系统中，确定的标志物水平可以与受试者的其它标志物水平和/或参数结合以便计算评分，所述评分指示诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层。例如，所确定的值可以被输入(由健康专业人员手动地输入或者从已经确定了相应标志物水平的装置自动地输入)至计算机系统中。所述计算机系统可以直接位于护理点(例如，初级护理部、ICU或ED)，或者其可以位于经由计算机网络(例如，经由因特网或专用医疗云系统，任选地可与如医院信息系统(HIS)的其它IT系统或平台组合)连接的远程位置。通常，计算机系统将值(例如标志物水平或参数，如年龄、血压、体重、性别等，或临床评分系统，如SOFA、qSOFA、BMI等)存储在计算机可读介质上，并基于预定义和/或预先存储的参考水平或参考值计算评分。所得评分将为用户(通常是健康专业人员，如医师)显示和/或打印。可替代地或附加地，相关的预后、诊断、评定、治疗指导、患者管理指导或分层将为用户(通常是健康专业人员，如医师)显示和/或打印。

在本发明的一个实施例中，可采用软件系统，其中机器学习算法是明显的、优选地使用来自电子健康记录(EHR)的数据来识别具有败血症、严重败血症和败血性休克风险的住院患者。可以使用来自患者的EHR数据(诸如实验室、生物标志物表达、生命力和人口统计资料)在随机森林分类器上训练机器学习方法。机器学习是一种人工智能，它使计算机能够学习数据中的复杂模式而无需进行显式编程，这与基于较简单规则的系统不同。早期的研究通常使用电子健康记录数据来触发警报以检测总体上的临床恶化在本发明的一个实施例中，proADM水平的处理可以结合到适当的软件中，用于与现有数据集进行对比，例如proADM水平也可以在机器学习软件中处理，以帮助诊断或预测不良事件的发生。

proADM或其片段与另一种生物标志物(如PCT或CRP)的组合应用可以在单一多重测定中实现，或者在对来自患者的样品进行的两种单独测定中实现。所述样品可以涉及相同样品或不同样品。用于检测和确定proADM和例如PCT的测定法也可以相同或不同，例如免疫测定法可以用于测定上述标志物之一。下面提供合适的测定的更详细说明。

被诊断为危重症并处于治疗中的患者中的proADM或其片段的截止值和其它参考水平可以通过前述方法确定。例如，为了建立参考值和/或截止值，本领域技术人员已知使用变异系数来评定定量测定的可变性的方法(George F.Reed等人,《临床和诊断实验室免疫学(Clin Diagn Lab Immunol.)》2002；9(6):1235-1239)。

另外，可以确定功能测定灵敏度，以便根据确立的技术指示用作参考水平或截止值的统计学上显著的值。实验室能够根据临床相关方案独立确立测定的功能灵敏度。“功能灵敏度”可以被认为是导致变异系数(CV)为20％(或其它一些预定的％CV)的浓度，并因此是在低分析物水平下测定精密度的一种度量。因此，CV是标准偏差(SD)的标准化，它允许至少在测定的大部分工作范围内，与分析物浓度的大小无关地比较变异性估计值。

此外，基于ROC分析的方法可用于确定两个临床患者群组之间的统计学显著差异。接受者操作特征(ROC)曲线衡量模型拟合概率的分类效率，以对应答级别进行分类。ROC曲线还可以帮助设置诊断测试中的标准点。对角线的曲线越高，拟合越好。如果逻辑拟合具有两个以上的应答水平，则其会产生广义的ROC曲线。在此类图中，每个应答级别都有一条曲线，其是所述级别相对于所有其它级别的ROC曲线。可以使用能够进行此类分析以确立合适的参考水平和截止值的软件，例如SAS的JMP 12、MP 13和Statistical Discovery。

可以类似地确定PCT的截止值。技术人员可参考文献来确定适当的截止值，例如Philipp Schuetz等人(《BMC医学(BMC Medicine).》2011年；9:107)描述了PCT的截止值为0.1ng/mL时，具有很高的灵敏度以排除感染。Terence Chan等人(《分子诊断学专家综述(Expert Rev.Mol.Diagn.)》2011年；11(5),487.496)描述了基于灵敏度和特异性计算的诸如正似然比和负似然比之类的指标也可用于评估诊断测试的优势。通常将多个截止值(CV)的值绘制成曲线，作为接受者操作特征曲线。曲线值下的面积用于确定最佳的诊断相关CV。所述文献描述了CV的变化(截止值，其取决于测定和研究设计)以及用于确定截止值的合适方法。

proADM或其片段的总体平均值也可以用作参考值，例如平均proADM总体值，由此诊断为危重症的患者可以与对照群体进行对比，其中对照组优选包含多于10，20，30，40，50或更多个受试者。

在本发明的一实施例中，当使用例如Luminex MAC Pix E-Bioscience Assay或BRAHMS PCT-kryptor Assay时，血清样品中PCT的截止水平可以为0.01-100.00ng/mL的值。在优选实施例中，PCT的截止水平可以为0.01-100，0.05-50，0.1-20或0.1-2ng/mL，且最优选>0.05-0.5ng/mL。在这些范围内的任何值可以被认为是适当的截止值。例如可以采用0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100ng/mL。在一些实施例中，健康受试者的PCT水平约为0.05ng/mL。

具体实施方式

本发明涉及一种用于多发伤患者的继发创伤相关并发症的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层的方法，其包含提供所述患者的样品，其中在严重损伤后从患者中分离出所述样品，确定所述样品中proADM或其片段的水平，其中proADM或其片段的所述水平与继发创伤相关并发症的可能性相关。

从本文提供的数据显而易见，多发伤患者中存在或不存在创伤相关并发症的可能性由proADM或其片段的水平指示。

本发明与常规方法相比具有以下优势：本发明的方法和试剂盒快速、客观、易于使用并且精确。本发明的方法和试剂盒涉及在医院常规方法中易于测量的标志物和临床评分，因为ADM、PCT、乳酸、C-反应蛋白、SOFA、qSOFA、APACHE II、SAPS II的水平可以在常规获得的血液样品或从受试者获得的其它生物液体或样品中确定。

如本文所用，“患者”或“受试者”可为脊椎动物。在本发明的上下文中，术语“受试者”包括人和动物，特别是哺乳动物和其它生物。

在本发明的意义上，“多发伤患者”是严重损伤并已遭受多发伤的受试者。术语“多发伤”涉及与多发性创伤或严重创伤相关的病况。通常，所述术语描述遭受创伤性损伤、优选遭受超过一种创伤性损伤(例如除了严重烧伤之外还遭受严重头部损伤)的人的病况。

术语多发伤还可以指与特定损伤严重程度评分(ISS)相关的损伤，如大于12、13、14、15、16、17、18、19、20，优选大于16的ISS。多发伤通常与事故相关，所述事故可能涉及导致多发性损伤的高速事故，如机动车碰撞(摩托车碰撞、汽车碰撞)。多发伤的特征通常在于多发性头部损伤、视力和听力丧失、神经损害、多发性骨折、未愈合的身体伤口和感染，其中的任一种都可能危及生命。其它损伤可能包括断肢或脊髓损害，其中大多数患者经历一定程度的创伤性脑部损伤。

损伤严重程度评分(ISS)是用于评定创伤和多发伤严重程度的既定医学评分(Baker SP等人(1974).“损伤严重程度评分：一种描述多发性创伤患者并评估急救护理的方法(The Injury Severity Score:a method for describing patients with multipleinjuries and evaluating emergency care)”.《创伤杂志(The Journal of Trauma)》.利平科特·威廉斯·威尔金斯出版社(Lippincott Williams&Wilkins).14(3):187-196；Copes WS等人(1988).“损伤严重程度评分再研究(The Injury Severity Scorerevisited)”.《创伤杂志》.利平科特·威廉斯·威尔金斯出版社.28(1):69-77)。其与损伤后的死亡率、发病率和住院时间相关。其用于定义术语重大创伤或多发伤。重大创伤(或多发伤)定义为损伤严重程度评分大于15、优选大于16。简明损伤量表(AIS)用于计算ISS评分，并且是基于解剖学共识得出的全球严重程度评分系统，所述系统根据六点顺序量表上其相应的严重程度对每一身体部位的每一损伤进行分类：轻度-1、中度-2、重度-3、严重-4、危重-6、最重(当前不可治疗)-7。有对应于九个身体部位的九个AIS章节：头部、面部、颈部、胸部、腹部、脊柱、上肢、下肢、体表和其它。

ISS是基于(参见下文)简明损伤量表(AIS)的，并且为受到损伤的人员计算ISS，将身体分为六个ISS身体部位：头部或颈部-包括颈椎；面部-包括面部骨架、鼻子、嘴巴、眼睛和耳朵；胸部-胸椎和胸膈膜；腹部或骨盆内容物-腹部器官和腰椎；四肢或骨盆带-骨盆骨架；体表。为了计算ISS，对三个受损伤最严重的ISS身体部位中的每一部位采用最高AIS严重程度代码对每个AIS代码进行平方处理并为ISS将三个平方数相加(ISS＝A

在本发明的实施例中，多发伤患者包括符合多发伤患者的烧伤患者。此类烧伤患者要么具有等于或高于17的ISS评分，要么除了烧伤之外还具有至少一种额外创伤。在实施例中，多发伤患者不包含ISS小于17的烧伤患者，和/或没有共存多发伤并且烧伤的总身体表面积(TBSA)低于40％、优选低于39％、低于38％、低于37％或低于36％的烧伤患者。

多发伤患者的初步管理/治疗和诊断通常由急诊科(ED)提供。创伤患者在ED中评估所需的时间被称作治疗时间。在进入医院或其它提供医疗服务的机构后，创伤患者应立即进行彻底检查，包括对其颈椎、胸部和骨盆(通常被称为“创伤系列”)进行X射线诊断，以确定可能危及生命的损伤。实例将为颈椎骨折、骨盆严重骨折或血胸。一旦完成此初步检查，就可以对四肢进行X射线检查，以评定其它骨折的可能性。在严重创伤中，如果患者需要紧急治疗，将其直接送至CT或外科手术室也很常见。多发伤的不太明显的征象可能包括注意力、集中力、记忆力障碍、头痛、耳鸣、头晕、易怒和决策障碍。

多发伤患者的治疗可能涉及“损害控制”整形外科手术，其可能涉及长骨骨折的治疗，持久性代谢酸中毒、体温过低和凝血病的“致死三联征”的早期恢复表示以下主要目标：生存、在稳定生命机能以恢复生理参数后在最早时间点将患者转移至ICU、避免长时间的外科手术干预以防止这些患者遭受致命的“二次打击”。多发伤患者的治疗可能包括评定和管理的四个不同阶段：(1)挽救生命的外科手术，尽早识别出那些需要损害控制的创伤患者(“归零”识别阶段)；(2)抢救手术，以控制出血和污染(“OR”阶段)；(3)重症监护管理，以恢复生理和免疫基线功能(“ICU阶段”)；(4)预定的确定性外科手术(“重建阶段”)。管理多发伤患者的其它措施是本领域技术人员已知的，并且在文献中已多次总结，例如由Stahel PF等人(Stahel PF等人“多发伤管理的当前概念(Current Concepts of PolytraumaManagement)”.《欧洲创伤杂志(European Journal of Trauma)》2005；31:200-11)所总结。

在本发明的上下文中，多发伤患者健康中“创伤相关并发症”或“不良事件”涉及指示多发伤患者健康状况的并发症或恶化的事件，所述事件可能由多发伤事件引起。此类创伤相关并发症可能会导致远端器官(主要是未损伤的器官)和生命系统的功能障碍或衰竭。此类不良事件包括但不限于患者死亡和多发伤后28天内患者死亡、术后肺功能不全、静脉血栓形成/肺栓塞、蜂窝组织炎或褥疮性溃疡、术后出血或血肿、术后肺炎、外科手术部位再打开、伤口感染、术后感染、不是肺炎/伤口的术后感染、术后胃肠道出血或溃疡、术后中风、术后急性心肌梗死、术后心脏异常、休克或心肺骤停、吸入性肺炎、术后尿路并发症、术后身体和代谢紊乱、中枢或周围神经系统、与麻醉剂/CNS剂相关的并发症。

创伤相关并发症可分为感染相关并发症和非感染相关并发症。此外，不良事件和创伤相关并发症的实例包括临床症状恶化指示需要治疗措施的情况，如病灶清除程序、血液制品输注、胶体输注、有创机械通气、无创机械通气、紧急外科手术、器官替代疗法(如肾脏或肝脏替代)和血管加压药疗法。感染相关并发症包含但不限于感染或新感染、医院内感染、败血症、败血性休克和/或败血病的发生。

非感染相关并发症包含但不限于横纹肌溶解症、器官衰竭和患者的一般临床征象或症状的恶化，如低血压或高血压、心动过速或心动过缓。在实施例中，术语创伤相关并发症可能明确地不涉及作为创伤相关并发症的结果的条件或参数。例如，患者的细胞外体积状态、流体平衡、盐平衡和/或球状体积状态的改变可能不符合创伤相关并发症，因为这种改变也可以表示患者状态的改善，并且因此本身并不是并发症。此外，这种改变本身可能不被认为是并发症，而是并发症的结果。例如，在本发明的意义上，可以被认为是创伤相关并发症的肾衰竭或感染性疾病或败血症可能导致流体失衡。因此，在实施例中，本发明的方法不涉及用于患者的细胞外体积状态、流体平衡、盐平衡和/或球状体积状态的改变的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层。

横纹肌溶解症是受损骨骼肌迅速分解的疾病。症状包括肌肉疼痛、无力、呕吐和神志不清、深色(或“茶色”)尿液和/或心律不齐。一些肌肉分解产物(如蛋白质肌红蛋白)对肾脏有害，并可能导致肾衰竭。

遭受创伤、挤压损伤或长时间固定的任何人都可能会疑似诊断有横纹肌溶解症，但也可能因肾功能恶化(肌酐和尿素水平异常升高或增加和尿量下降)或尿液红褐色变色而在后期得到识别。横纹肌溶解症的可靠诊断测试是血液中的肌酸激酶(CK)水平。CK由受损的肌肉释放，并且水平超过1000U/L(正常上限(ULN)的5倍)指示横纹肌溶解症)并且超过5,000U/L指示严重疾病，但取决于横纹肌溶解症的程度，浓度高达100,000U/l并不罕见。原始肌肉损伤后，CK浓度通常稳定上升12小时，保持升高持续1-3天，并且然后逐渐下降。血液或尿液中升高的肌红蛋白水平的检测可用于横纹肌溶解症的诊断，并且与有肾脏损害的较高风险有关。升高的乳酸脱氢酶(LDH)浓度还指示横纹肌溶解症，以及肌肉损害的标志物，如醛缩酶、肌钙蛋白、碳酸酐酶3型和脂肪酸结合蛋白(FABP)。此外，在横纹肌溶解症中转氨酶通常也增加。可用于检测横纹肌溶解症的其它诊断标志物包括高钾水平、心电图(ECG)(其可能展示升高的钾水平是否影响心脏的传导系统)、低钙水平。

横纹肌溶解症的治疗可包含施用大量静脉注射液、透析或血液滤过、施用碳酸氢钠、甘露醇、钙、胰岛素和/或沙丁胺醇。

本文所述的多发伤患者可以在急诊科或重症监护病房或在如重大创伤中心的专用临床点，或在其它护理环境点，如在紧急运输装置(如救护车)，或在面对具有所述症状的患者的全科医师处。

术语“ICU患者”患者涉及但不限于已被送往重症监护病房的患者。重症监护病房也可以称为重症治疗病房或重症处理病房(ITU)或危症监护病房(CCU)，是提供重症治疗医学的医院或医疗保健机构的特殊科室。ICU患者通常患有严重且危及生命的疾病和损伤，为了确保正常的身体功能，其需要来自专业设备和药物的持续、密切的监测和支持。在ICU内治疗的常见病况包括但不限于多发伤、急性或成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、创伤、器官衰竭和败血症。

如本文所用，在本发明的上下文中，“诊断”涉及识别和(早期)检测与多发伤有关的受试者的临床病况。此外，多发伤严重程度的评定可以涵盖在术语“诊断”中。

“预后”涉及基于多发伤预测受试者的结果或特定风险。这还可以包括对所述受试者的恢复机会或不利结果机会的估计。

本发明的方法还可以用于监测、疗法监测、疗法指导和/或疗法控制。“监测”涉及追踪多发伤患者和潜在发生的并发症，例如分析愈合过程的进展或特定治疗或疗法对多发伤患者健康状况的影响。

在本发明的上下文中，术语“疗法监测”或“疗法控制”是指例如通过获得疗法功效的反馈来监测和/或调整所述多发伤受试者的治疗方法。如本文所用，术语“疗法指导”是指基于一种或多种生物标志物的值/水平和/或临床参数和/或临床评分应用某些疗法、治疗作用或医学干预。这包括疗法的调整或疗法的中断。

在本发明中，术语“风险评定”和“风险分层”涉及根据受试者的进一步预后将其分组为不同的风险组。风险评定还涉及采取预防和/或疗法措施的分层。术语“疗法分层”特别涉及将患者分组或分类为不同的群组，如根据其分类而接受某些不同的疗法措施的风险群组或疗法群组。术语“疗法分层”还涉及将感染或具有感染疾病症状的患者分组或分类成不需要接受某些疗法措施的群组。

应当理解，在本发明的上下文中，“确定proADM或其片段的水平”等是指确定proADM或其片段的任何手段。所述片段可以具有任何长度，例如至少约5个、10个、20个、30个、40个、50个或100个氨基酸，只要所述片段允许明确确定proADM或其片段的水平。在本发明特别优选的方面，“确定proADM的水平”是指确定中位肾上腺髓质素前体(MR-proADM)的水平。MR-proADM是proADM的片段和/或区域。

发现肾上腺髓质素(ADM)肽为包含52个氨基酸的降血压肽，其分离自人嗜铬细胞瘤(Kitamura等人，1993)。肾上腺髓质素(ADM)被编码为包含185个氨基酸的前体肽(“前肾上腺髓质素前体”或“前proADM”)。ADM的示例性氨基酸序列在SEQ ID NO：1中给出。

SEQ ID NO：1：前pro-ADM的氨基酸序列：

1MKLVSVALMY LGSLAFLGAD TARLDVASEF RKKWNKWALS RGKRELRMSS

51SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSP EDSSPDAARI RVKRYRQSMN

101NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDK DKDNVAPRSK ISPQGYGRRR

151RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGS APHFL

ADM包含前proADM氨基酸序列的95-146位，且为其剪接产物。“肾上腺髓质素前体”(“proADM”)是指没有信号序列(1-21位氨基酸)的前proADM，即前proADM的22-185位氨基酸残基。“中位肾上腺髓质素前体”(“MR-proADM”)指前proADM的42-95位氨基酸。MR-proADM的示例性氨基酸序列在SEQ ID NO：2中给出。

SEQ ID NO：2：MR-pro-ADM的氨基酸序列(前pro-ADM的AS 45-92)：

ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMK GASRSPEDSS PDAARIRV

本文还设想前proADM或MR-proADM的肽及其片段可用于本文所述的方法。例如，所述肽或其片段可包括前proADM(PAMP肽)的22-41位氨基酸或前proADM的95-146位氨基酸(成熟的肾上腺髓质素，包含生物活性形式，也称为bio-ADM)。proADM的C端片段(前proADM的153-185位氨基酸)称为肾上腺升压素。proADM肽的片段或MR-proADM的片段可包含例如至少约5个、10个、20个、30个或更多个氨基酸。因此，proADM的片段可以例如选自由MR-proADM、PAMP、肾上腺升压素和成熟肾上腺髓质素组成的组，优选地，本文所述片段为MR-proADM。

确定这些各种形式的ADM或proADM及其片段还包括测量和/或检测这些分子的特定亚区域，例如通过使用针对分子的特定部分的抗体或其它亲和试剂，或者通过使用质谱法测量蛋白质的一部分来确定分子的存在和/或量。

因此，除了ADM之外，本发明的方法和试剂盒还可以包含确定至少一种其它生物标志物、标志物、临床评分和/或参数。

如本文所用，参数是可以帮助定义特定系统的特征、特点或可测量因素。参数是与健康和生理相关的评定的重要元素，如疾病/紊乱/临床状况风险、优选器官功能障碍。此外，将参数定义为客观测量并评估为正常生物过程、致病过程或对治疗干预的药理反应的指标的特征。示例性参数可选自由急性生理学和慢性健康评估II(APACHE II)、简化的急性生理学评分(SAPSII评分)、序贯器官衰竭评定评分(SOFA评分)、快速序贯器官衰竭评定评分(qSOFA)、身体质量指数、体重、年龄、性别、IGS II、液体摄入、白细胞计数、钠、钾、体温、血压、多巴胺、胆红素、呼吸率、氧分压、世界神经外科联合会(WFNS)分级和格拉斯哥昏迷量表(GCS)组成的组。

如本文所用，术语例如“标志物”、“替代物”、“预后标志物”、“因子”或“生物标志物(biomarker)”或“生物标志物(biological marker)”可互换使用，且涉及可测量且可定量的生物标志物(例如，特定蛋白质或酶浓度或其片段，特定激素浓度或其片段或生物物质或其片段的存在)，其用作健康和生理学相关评定的指标，例如疾病/病症/临床状况风险、优选不良事件。标志物或生物标志物定义为可以客观测量和评估的特征，作为正常生物学过程、发病过程或对治疗干预的药理学应答的指标。可以在样品中测量生物标志物(如血液、血浆、尿液或组织测试)。

所述受试者的至少一种其它标志物和/或参数可以选自由以下组成的组：所述样品中的乳酸水平、所述样品中降钙素原(PCT)的水平、所述受试者的序贯器官衰竭评定评分(SOFA评分)、所述受试者的简化急性生理学评分(SAPSII)、所述受试者的急性生理学和慢性健康评估II(APACHE II)评分和可溶性fms样酪氨酸激酶-1(sFlt-1)水平、组蛋白H2A、组蛋白H2B、组蛋白H3、组蛋白H4、降钙素、内皮素-1(ET-1)、精氨酸加压素(AVP)、心房利钠肽(ANP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肌钙蛋白、脑钠肽(BNP)、C-反应蛋白(CRP)、胰石蛋白(PSP)、髓样细胞表达的触发受体1(TREM1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1、白细胞介素-24(IL-24)、白细胞介素-22(IL-22)、白细胞介素(IL-20)、其它IL、Presepsin(sCD14-ST)、脂多糖结合蛋白(LBP)、α-1-抗胰蛋白酶、基质金属蛋白酶2(MMP2)、金属蛋白酶2(MMP8)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、基质金属蛋白酶7(MMP7)、胎盘生长因子(PlGF)、嗜铬粒蛋白A、S100A蛋白、S100B蛋白和肿瘤坏死因子α(TNFα)、新喋呤、α-1-抗胰蛋白酶、前精氨酸加压素(AVP、proAVP或和肽素(Copeptin))、降钙素原、心房利钠肽(ANP、Pro-ANP)、内皮素-1、E-选择素、ICAM-1、VCAM-1、IP-10、CCL1/TCA3、CCL11、CCL12/MCP-5、CCL13/MCP-4、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17/TARC、CCL18、CCL19、CCL2/MCP-1、CCL20、CCL21、CCL22/MDC、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL3L3、CCL4、CCL4L1/LAG-1、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CX3CL1、CXCL1、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCL17、CXCL2/MIP-2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7/Ppbp、CXCL9、IL8/CXCL8、XCL1、XCL2、FAM19A1、FAM19A2、FAM19A3、FAM19A4、FAM19A5、CLCF1、CNTF、IL11、IL31、IL6、瘦蛋白、LIF、OSM、IFNA1、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA2、IFNA4、IFNA7、IFNB1、IFNE、IFNG、IFNZ、IFNA8、IFNA5/IFNaG、IFNω/IFNW1、BAFF、4-1BBL、TNFSF8、CD40LG、CD70、CD95L/CD178、EDA-A1、TNFSF14、LTA/TNFB、LTB、TNFa、TNFSF10、TNFSF11、TNFSF12、TNFSF13、TNFSF15、TNFSF4、IL18、IL18BP、IL1A、IL1B、IL1F10、IL1F3/IL1RA、IL1F5、IL1F6、IL1F7、IL1F8、IL1RL2、IL1F9、IL33或其片段。

如本文所用，“降钙素原”或“PCT”涉及跨越降钙素原肽的氨基酸残基1-116、2-116、3-116或其片段的肽。PCT是激素降钙素的肽前体。因此，降钙素原片段的长度为至少12个氨基酸、优选大于50个氨基酸、更优选地大于110个氨基酸。PCT可包含翻译后修饰，如糖基化、脂质化或衍生化。降钙素原是降钙素和抗钙素的前体。因此，在正常状况下，循环中的PCT水平非常低(<约0.05ng/ml)。

受试者样品中的PCT水平可以通过如本文所述的免疫测定来确定。如本文所用，还可以确定编码“降钙素原”或“PCT”的核糖核酸或脱氧核糖核酸的水平。PCT的测定方法是本领域技术人员已知的，例如通过使用从Thermo Fisher Scientific/B·R·A·H·M·SGmbH获得的产品。

乳酸(lactate或lactic acid)是一种具有式CH

C-反应蛋白(CRP)是一种五聚体蛋白，其可以在体液(如血浆)中找到。CRP水平可以因炎症而升高。测量和绘制CRP值可以证明对确定疾病进展或治疗效果很有帮助。

如本文所用，“序贯器官衰竭评定评分”或“SOFA评分”是用于追踪在重症监护室(ICU)住院期间患者状态的一个评分。SOFA评分是一种评分系统，用于确定一个人的器官功能范围或衰竭率。所述评分基于六种不同的评分，每种评分分别针对呼吸、心血管、肝、凝血、肾和神经系统。平均和最高SOFA评分都是结果的预测指标。在ICU的最初24到48小时内，SOFA评分的增加预测死亡率至少为50％，最高可达95％。评分低于9时预测死亡率为33％，高于14时可接近或高于95％。

如本文所用，快速SOFA评分(qSOFA)是一种评分系统，其可指示患者的器官功能障碍或死亡风险。所述评分基于以下三个标准：1)精神状态的改变；2)收缩压降低小于100mmHg；3)呼吸速率大于每分钟22次呼吸。具有上述两种或更多种疾病的患者更有可能出现器官功能障碍或死亡。

如本文所用，“APACHE II”或“急性生理与慢性健康评估II”是疾病严重程度分类评分系统(Knaus等人，1985年)。它可以在患者进入重症监护室(ICU)的24小时内使用，并且可以根据12种不同的生理参数来确定：AaDO2或PaO2(取决于FiO2)、温度(直肠)、平均动脉压、动脉pH、心率、呼吸率、钠(血清)、钾(血清)、肌酐、血细胞比容、白细胞计数和格拉斯哥昏迷量表。

如本文所用，“SAPS II”或“简化的急性生理学评分II”涉及用于对疾病或紊乱的严重程度进行分类的系统(参见Le Gall JR等人基于欧洲/北美多中心研究的新的简化的急性生理学评分(A new Simplified Acute Physiology Score(SAPS II)based on aEuropean/North American multicenter study)(SAPS II)-《美国医学会杂志(JAMA)》.1993年；270(24):2957-63.)。SAPS II评分由12个生理变量和3个与疾病相关的变量组成。所述评分是通过12项常规生理测量、既往健康状况信息和一些ICU入院时获得的信息计算得出。所述SAPS II评分可以在任何时间确定、优选在第2天。“最差”测量值定义为与最高点数相关的度量。SAPS II评分在0到163分的范围内。分类系统包括以下参数：年龄、心率、收缩压、温度、格拉斯哥昏迷量表、机械通气或CPAP、PaO2、FiO2、尿量、血尿素氮、钠、钾、碳酸氢盐、胆红素、白细胞、慢性疾病和入院类型。死亡率和SAPS II总评分之间存在S型关系。SAPSII评分为29分时，受试者的死亡率为10％，SAPSII评分为40分时，死亡率为25％，SAPSII评分为52分时，死亡率为50％，SAPSII评分为64分时，死亡率为75％，SAPSII评分为77分时，死亡率为90％(Le Gall loc.cit.)。

如本文所用，术语“样品”是从患者或受试者获得或分离的生物学样品。如本文所用的“样品”可以例如是指为了分析、诊断、预后或评估感兴趣的受试者(如患者)而获得的体液或组织样品。在本文中优选地，样品是体液(如血液、血清、血浆，脑脊液、尿液、唾液、痰、胸腔积液)、细胞、细胞提取物、组织样品、组织活检、粪便样品等的样品。特别地，样品为血液、血浆、血清或尿液。

本发明的实施例涉及第一样品的分离和第二样品的分离。在本发明方法的上下文中，术语“第一样品”和“第二样品”涉及本发明方法中使用的样品分离顺序的相对确定。当术语第一样品和第二样品用于具体说明本方法时，这些样品不被认为是取样数目的绝对确定。因此，可以在分离第一和/或第二样品之前、之时或之后，或在第一或第二样品之间从患者分离其它样品，其中这些其它样品可以或不可以用于本发明的方法中。因此，第一样品可以被认为是任何先前获得的样品。第二样品可以被认为是任何其它或后续的样品。

本发明上下文中，“血浆”是离心后获得的含有抗凝剂的血液的几乎无细胞的上清液。示例性的抗凝剂包括钙离子结合化合物，如EDTA或柠檬酸盐，以及凝血酶抑制剂(诸如肝素盐或水蛭素)。通过将抗凝血液(例如柠檬酸、EDTA或肝素化血液)离心例如至少15分钟(在2000至3000g下)，可获得无细胞血浆。

在本发明的上下文中，“血清”是在使血液凝结之后收集的全血的液体部分。当离心凝结的血液(coagulated blood)(凝结的血液(clotted blood))时，可获得血清作为上清液。

如本文所用，“尿液”是肾脏通过称为排尿(或撒尿)的过程而分泌并通过尿道排泄的身体的液体产物。

在本发明的实施例中，创伤相关并发症可以是败血症、严重的败血症和/或败血性休克。在本发明的上下文中，“败血症”是指感染的全身应答。可替代地，败血症可被视为SIRS与确诊的感染过程或感染的组合。败血症的特征可能是由同时存在感染和全身炎症应答限定的临床综合征(Levy MM等人2001年SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS国际败血症定义会议(2001SCCM/ESICM/ACCP/ATS/SIS International Sepsis Definitions Conference).《重症监护医学(Crit Care Med)》.2003年4月；31(4):1250-6)。本文使用的术语“败血症”包括但不限于败血症、严重的败血症和败血性休克。

本文使用的术语“败血症”包括但不限于败血症、严重的败血症和败血性休克。严重败血症是指与器官功能障碍、灌注不足异常或败血症诱导的低血压相关的败血症。灌注不足异常包括乳酸性酸中毒、少尿和精神状态的急性改变。败血症诱导的低血压定义为在没有其它低血压原因(例如心源性休克)的情况下，收缩压小于约90mm Hg或比基线降低约40mm Hg或更多。败血性休克被定义为严重的败血症，尽管有足够的液体复苏，但败血症诱导的低血压持续存在，同时存在灌注不足异常或器官功能障碍(Bone等人《胸(CHEST)》101(6):1644-55，1992年)。

术语败血症可替代地定义为由宿主对感染的应答失调引起的危及生命的器官功能障碍。对于临床操作化，器官功能障碍可优选通过序贯器官衰竭评定(SOFA)评分增加2分或更多来表示，其与院内死亡率大于10％有关。败血性休克可定义为败血症的一个子集，其中与单独的败血症相比，特别严重的循环、细胞和代谢异常与更高的死亡率风险相关。在没有血容量不足的情况下，可以通过血管加压药的需求(以维持平均动脉压为65mm Hg或更高，血清乳酸水平大于2mmol/L(>18mg/dL))在临床上识别败血性休克的患者。

本文使用的术语“败血症”涉及败血症发生中的所有可能阶段。根据SEPSIS-2定义，术语“败血症”还包括严重的败血症或败血性休克(Bone等人，2009年)。术语“败血症”还包括属于SEPSIS-3定义的受试者(Singer等人，2016年)。本文使用的术语“败血症”涉及败血症发生中的所有可能阶段。

如本文所用，在本发明范围内的“感染”是指由病原体(pathogenic agent)或潜在病原体(pathogenic agent)/病原体(pathogen)、生物和/或微生物入侵正常无菌组织或体液而引起的病理过程，并且优选地涉及被细菌、病毒、真菌和/或寄生虫感染。因此，感染可以是细菌感染、病毒感染和/或真菌感染。感染可以是局部感染或全身感染。为了本发明的目的，病毒感染可被认为是微生物感染。

此外，感染相关并发症可以是“医院内”感染。医院内感染也称为医院获得性感染(HAI)，是在医院或其它医疗保健机构中获得的感染。为了强调医院和非医院环境，有时也将其称为医疗保健相关感染(HAI或HCAI)。此类感染可以在医院、疗养院、康复机构、门诊或其它临床环境中获得。在临床环境中，医院内感染可以通过各种方式传播到易感患者。除了受污染的设备、床单或空气飞沫外，医疗保健人员也可以传播感染。感染可能来自外部环境、另一位被感染的患者、可能被感染的工作人员，或者在一些情况下，无法确定感染源。在一些情况下，微生物来源于患者自身的皮肤微生物群，在外科手术或其它损害保护性皮肤屏障的程序后变成机会性的。尽管患者可能是从自己的皮肤患上感染，但由于这种感染是在医疗保健环境中发生的，因此仍被认为是医院内感染。

此外，患上感染的受试者可同时具有一种以上的感染源。例如，感染的受试者可具有细菌感染和病毒感染；病毒感染和真菌感染；细菌感染和真菌感染，以及细菌感染、真菌感染和病毒感染，或患有包括本文列出的一种或多种感染的混合感染，包含潜在的超级感染，例如结合一种或多种病毒感染和/或一种或多种真菌感染的一种或多种细菌感染。

如本文所用，“感染性疾病”包含与细菌和/或病毒和/或真菌感染有关的所有疾病或病症。

根据本发明，多发伤患者在生命机能和/或器官保护的监测方面可能需要非常严格的控制，并且可能正在接受医学治疗。

在本发明的上下文中，术语“医学治疗”或“治疗”包含各种治疗和治疗策略，其包含但不限于抗炎策略、施用ADM拮抗剂(如治疗性抗体、si-RNA或DNA)、体外血液净化或通过血液分离、透析、吸附剂去除有害物质以防止细胞因子风暴、去除炎性介质、血浆单采、施用维生素(如维生素C)、外科手术、紧急外科手术、通气(如机械通气和非机械通气)以给身体提供足够的氧，例如，病灶清除程序、血液制品输注、胶体输注、器官替代(如肾脏或肝脏替代)、抗生素治疗、有创机械通气、无创机械通气、血管加压药使用、液体疗法、单采和器官保护措施。

本发明的进一步治疗包含施用细胞或细胞制品，如干细胞、血液或血浆，以及稳定患者循环和保护内皮糖萼，例如通过最佳的体液管理策略，例如达到正常血容量和预防或治疗高血容量或血容量不足。此外，血管加压药或例如儿茶酚胺以及白蛋白或乙酰肝素酶通过未分级肝素或N-脱硫重-N-乙酰化肝素的抑制是支持循环和内皮细胞层的有用治疗。

另外，本发明的医学治疗包含但不限于血液凝固的稳定、抗血纤蛋白溶解治疗、iNOS抑制剂、抗炎剂(如氢化可的松)、镇静剂和镇痛剂以及胰岛素。

人工和机械通气是加强适当的气体交换和通气的有效方法，旨在在严重低氧血症期间挽救生命。人工通气涉及辅助或刺激受试者的呼吸。人工通气可选自由机械通气、手动通气、体外膜氧合(ECMO)和无创通气(NIV)组成的组。机械通气涉及一种机械辅助或替代自发呼吸的方法。这可能涉及称为呼吸机的机器。机械通气可以是高频振荡通气或部分液体通气。

医学治疗还包含避免体温过低的方法，所述方法包括使用温热的静脉输液和温的空气毯。

医学治疗还包含伤口管理，包括出血控制、使用或不使用止血带的出血控制技术、伤口清洁、局部麻醉应用、伤口闭合技术，其中可以使用皮肤粘合带、组织粘合胶、缝合线、钉书钉和伤口敷料。

“体液管理”是指例如通过口服、肠内或静脉输液，监测和控制受试者的体液状态和液体给药以稳定循环或器官活力。它包含体液的稳定和电解质的平衡，或者预防或纠正高血容量或血容量不足以及血液产品的供应。

如果受试者具有医学紧急情况，则需要外科急救/紧急外科手术，并且可能需要立即进行外科干预以保持存活或健康状况。需要紧急外科手术的受试者可选自由经历急性创伤、活动性失控感染、器官移植、器官预防或器官稳定外科手术或癌症的受试者组成的组。

清洁程序是防止受试者感染，尤其是医院内感染的卫生方法，包含对可能与患者接触的所有有机和无机表面的消毒，例如皮肤、患者房间内的物体、医疗装置、诊断装置或室内空气。清洁程序包括使用防护服和装备，如口罩、隔离衣、手套或卫生锁，以及采取如限制患者探望的行为。此外，清洁程序包含对患者自身以及衣服或患者的清洁。

在优选实施例中，术语“医学治疗”或“治疗”包含抗生素治疗，如静脉内抗生素、口服抗生素或局部抗生素。

对于多发伤患者，早期诊断以及对创伤相关并发症的发生进行预后和风险评定以找到最佳疗法和患者管理非常重要，因为此类患者通常不稳定且需要早期疗法干预以防出现并发症。治疗方法需要非常个体化，并因情况而异。最佳实践疗法需要进行治疗监测，并受治疗时间、组合疗法的使用以及药物剂量的优化影响。错误或遗漏的疗法或管理方法将增加每小时死亡率。

本发明的医学治疗可以是抗生素治疗，其中如果已通过本发明的方法诊断或预测出感染，则可以施用一种或多种“抗生素”或“抗生素药剂”。根据本发明的抗生素或抗生素药剂还可能包含用于治疗诊断的感染或败血症的抗真菌或抗病毒化合物。通常用于治疗任何给定感染的抗生素药剂，按病原体分类如下:

革兰氏阳性覆盖度：青霉素(氨苄青霉素、阿莫西林)、耐青霉素酶(双氯西林、奥沙西林)、头孢菌素(第1代和第2代)、大环内酯类(红霉素、克拉霉素、阿奇霉素)、喹诺酮(加替沙星、莫西沙星、左氟沙星)、万古霉素、磺胺类药/甲氧苄氨嘧啶、克林霉素、四环素、氯霉素、利奈唑胺、达福普汀。

革兰氏阴性菌覆盖度：广谱青霉素(羟基噻吩青霉素、克拉维酸、哌拉西林、他唑巴坦)、头孢菌素(第2代、第3代和第4代)、氨基糖甙类、大环内酯类、阿奇霉素、喹诺酮(环丙沙星)、单菌霉素(氨曲南)、磺胺类药/甲氧苄氨嘧啶、碳青霉烯(亚胺培南)、氯霉素。

假单胞菌覆范围：环丙沙星、氨基糖苷、一些第3代头孢菌素、第4代头孢菌素、广谱青霉素、碳青霉烯。

真菌治疗：烯丙胺、两性霉素B、氟康唑和其它唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、雷夫康唑、棘白菌素、氟胞嘧啶、粪壳菌素(sordarins)、几丁质合成酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、脂肽、普拉霉素、脂质体制霉菌素、伏立康唑、Echinocanidins、咪唑、三唑、噻唑、多烯。

抗病毒治疗：阿巴卡韦、阿昔洛韦(Aciclovir)、活化的胱天蛋白酶寡聚物、阿德福韦、金刚烷胺、安普那韦(Agenerase)、安普利近、阿比朵尔、阿扎那韦、立普妥、Balavir、西多福韦、可比韦、度鲁特韦、地瑞那韦、地拉韦啶、地达诺新、双链RNA、二十二烷醇、依度尿苷、依法韦仑、恩曲他滨、恩夫韦地、恩替卡韦、依可立维(Ecoliever)、泛昔洛韦、固定剂量组合(抗逆转录病毒药物)、福米韦生、膦沙那韦、膦甲酸、膦乙酸盐(Fosfonet)、融合抑制剂、更昔洛韦、伊巴他滨、Imunovir、疱疹净、咪喹莫特、茚地那韦、肌苷、整合酶抑制剂、III型干扰素、II型干扰素、I型干扰素、干扰素、拉米夫定、洛匹那韦、洛韦胺、马拉韦罗、吗啉胍、甲吲噻腙、吗啉类化合物、奈非那韦、那韦拉平、奈沙韦、硝唑尼特、核苷类似物、Novir、奥司他韦(特敏福)、聚乙二醇干扰素α-2a、喷昔他韦、帕拉米韦、普拉康纳利、鬼臼毒素、蛋白酶抑制剂(药理学)、雷特格韦、逆转录酶抑制剂、利巴韦林、核糖酶、利福平、金刚烷乙胺、利托那韦、核糖核酸酶H、蛋白酶抑制剂、Pyramidine、沙奎那韦、索非布韦、司他夫定、协同增效剂(抗逆转录病毒)、特拉匹韦、替诺福韦、替诺福韦酯、替拉那韦、曲氟尿苷、三协唯、曲金刚胺、特鲁瓦达、伐昔洛韦(维德思)、缬更昔洛韦、维利维洛(Vicriviroc)、阿糖腺苷、盐酸塔利韦林(Viramidine)、扎西他滨、扎那米韦(瑞乐沙)、齐多夫定。

此外，抗生素包含用于治疗细菌感染的噬菌体、合成的抗微生物肽或铁拮抗剂/铁螯合剂。此外，针对致病结构的治疗性抗体或拮抗剂(如抗VAP抗体)、抗耐药性克隆疫苗接种、免疫细胞(如体外引发或调节的T效应细胞)的施用是代表危重患者(如脓毒症患者)的治疗方案的抗生素。针对感染或预防新感染的另一些抗生素药剂/治疗或治疗策略包括使用防腐剂、去污产品、抗病毒药剂(如脂质体)、卫生设施、伤口护理、外科手术。

也可以将几种前述抗生素药剂或治疗策略组合。

根据本发明，ADM和任选的PCT和/或其它标志物或临床评分用作用于多发伤患者的继发创伤相关并发症的诊断、预后、预测、风险评定和/或风险分层的标志物。

技术人员能够根据标准分子生物学实践获得或开发用于识别、测量、确定和/或定量上述ADM分子中的任何一个或其片段或变体，以及本发明的其它标志物的手段。

proADM或其片段的水平以及本发明的其它标志物的水平可以通过可靠地确定标志物浓度的任何测定来确定。特别地，如所附实例中所举例说明的，可以采用质谱(MS)和/或免疫测定。如本文所用，免疫测定是一种生化测试，其通过使用抗体或抗体结合片段或免疫球蛋白来测量溶液中大分子/多肽的存在或浓度。

在本发明的上下文中使用的确定ADM或其它标志物(如PCT)的方法也包括在本发明中。例如，可以使用选自由以下组成的组的方法：质谱(MS)、发光免疫测定(LIA)、放射免疫测定(RIA)、化学发光免疫测定和荧光免疫测定、酶免疫测定(EIA)、酶联免疫测定(ELISA)、基于发光的珠阵列、基于磁珠的阵列、蛋白质微阵列分析、快速测试形式例如免疫层析条测试、稀有穴状化合物测定和自动化系统/分析仪。

基于抗体识别确定ADM和任选地其它标志物是本发明的优选实施例。如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫学活性部分，即，含有与抗原特异性结合(与之免疫反应)的抗原结合位点的分子。根据本发明，抗体可以是单克隆抗体以及多克隆抗体。特别地，使用与至少proADM或其片段特异性结合的抗体。

如果抗体对相关分子例如ADM或其片段的亲和力比对包含在含有相关分子的样品中的其它分子高至少50倍、优选高100倍，最优选高至少1000倍，则认为所述抗体是特异性的。如何开发和选择具有给定特异性的抗体是本领域众所周知的。在本发明的上下文中、优选单克隆抗体。抗体或抗体结合片段特异性结合本文定义的标志物或其片段。特别地，抗体或抗体结合片段与本文定义的ADM或proADM肽结合。因此，本文定义的肽也可以是抗体特异性结合的表位。此外，在本发明的方法和试剂盒中使用特异性结合ADM或proADM，特别是MR-proADM的抗体或抗体结合片段。

此外，抗体或抗体结合片段用于本发明的方法和试剂盒中，其特异性结合proADM或其片段以及任选地结合本发明的其它标志物，例如PCT。示例性免疫测定可以是发光免疫测定(LIA)、放射免疫测定(RIA)、化学发光免疫测定和荧光免疫测定、酶免疫测定(EIA)、酶联免疫测定(ELISA)、基于发光的珠阵列、基于磁珠的阵列、蛋白质微阵列分析、快速测试形式、稀有穴状化合物测定。进一步地，可以采用适用于护理点测试和快速测试形式(例如免疫层析试纸条测试)的测定。还打算进行自动免疫测定，如KRYPTOR测定。

或者，代替抗体、特异性和/或选择性识别ADM的其它捕获分子或分子支架也涵盖在本发明的范围内。本文中，术语“捕获分子”或“分子支架”包含可用于结合来自样品的靶分子或相关分子，即分析物(例如ADM、proADM、MR-proADM和PCT)的分子。因此，捕获分子必须在空间和表面特点(如表面电荷、疏水性、亲水性、路易斯供体和/或受体的存在或不存在)的方面充分地成形，以特异性结合靶分子或相关分子。因此，结合可例如通过离子、范德华、π-π、σ-π、疏水或氢键相互作用或捕获分子或分子支架与靶分子或相关分子之间的两个或更多个上述相互作用或共价相互作用的组合来介导。在本发明的上下文中，捕获分子或分子支架可例如选自由以下组成的群组：核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白、肽和糖蛋白。例如，捕获分子或分子支架包括核酸适体、重复蛋白(设计的锚蛋白重复蛋白)。包括Affimer等在内。

在本发明的某些方面，所述方法是免疫测定，其包含以下步骤：

a)使样品与以下接触

i.对所述proADM的第一表位具有特异性的第一抗体或其抗原结合片段或衍生物，以及

ii.对所述proADM的第二表位具有特异性的第二抗体或其抗原结合片段或衍生物；以及

b)检测两种抗体或其抗原结合片段或衍生物与所述proADM的结合。

优选地，抗体之一可以被标记，而另一种抗体可以与固相结合或者可以选择性地与固相结合。在所述测定的一个特别优选的方面，抗体之一被标记，而另一种或者与固相结合或者可以选择性地与固相结合。第一抗体和第二抗体可以分散存在于液体反应混合物中，并且其中作为基于荧光或化学发光消除或扩增的标记系统的一部分的第一标记组分与第一抗体结合，以及所述标记系统的第二标记组分与第二抗体结合，使得在两种抗体与待检测的所述proADM或其片段结合之后，产生可测量的信号，其允许检测测量溶液中的所得夹心复合物。标记系统可以包含稀土穴状化合物或螯合物以及荧光或化学发光染料，特别是花青类型的染料。

在一个优选的实施例中，所述方法作为异质夹层免疫测定执行，其中一种抗体固定在任意选择的固相上，例如，包被的试管(例如聚苯乙烯试管；包被的管；CT)壁或微量滴定板(例如由聚苯乙烯组成)，或固定在颗粒上(例如磁性颗粒)，从而另一种抗体具有类似于可检测标签或能够选择性附着于标签的基团，并用于检测形成的夹层结构。使用合适的固相的暂时延迟或后续的固定也是可能的。

根据本发明的方法还可以体现为匀相法，其中由待检测的一种或多种抗体和标志物、ADM或其片段形成的夹心复合物保持悬浮在液相中。在这种情况下、优选的是，当使用两种抗体时，两种抗体都使用检测系统的一部分标记，如果两种抗体都整合到单个的夹层中，则会导致信号的生成或信号的触发。此类技术将特别体现为荧光增强或荧光猝灭检测方法。一个特别优选的方面涉及成对使用的检测试剂的使用，例如在US4882733、EP0180492或EP0539477以及其中引用的现有技术中所述的那些。以这种方式，仅在反应混合物中检测在单个免疫复合物中直接包含两种标记组分的反应产物的测量成为可能。例如，这些技术以商标名

本发明的标志物，例如proADM或其片段、PCT或其片段，或其它标志物的水平也可通过基于质谱(MS)的方法来确定。这样的方法可以包含检测所述生物样品中或来自所述样品的蛋白质消化物(例如胰蛋白酶消化物)中一种或多种修饰的或未修饰的片段肽(例如ADM或PCT)的存在、量或浓度，以及任选地用色谱法分离样品，并将制备的和任选分离的样品进行MS分析。例如，选择的反应监测(SRM)、多重反应监测(MRM)或平行反应监测(PRM)质谱可以用于MS分析，特别是测定proADM或其片段的量。

本文中，术语“质谱”或“MS”是指通过其质量鉴定化合物的分析技术。为了增强质谱法的质量解析和质量确定能力，可以在MS分析前对样品进行处理。因此，本发明涉及可以与免疫富集技术、涉及样品制备的方法和/或色谱方法组合的MS检测方法、优选与液相色谱法(LC)、更优选与高效液相色谱法(HPLC)或超高效液相色谱法(UHPLC)组合。样品制备方法包含用于将样品裂解、分离、消化成肽、消耗、富集、透析、脱盐、烷基化和/或肽还原的技术。然而，这些步骤是任选的。可以用串联质谱法(MS/MS)进行分析物离子的选择性检测。串联质谱法的特征在于质量选择步骤(如本文所用，术语“质量选择”表示分离具有特定m/z或m/z′s窄范围的离子)，然后将所选离子破碎，并对所得产物(片段)离子进行质量分析。

技术人员知道如何通过质谱法定量样品中标志物的水平。例如，如上所述，可以采用相对定量“rSRM”或绝对定量。

此外，水平(包括参考水平)可以通过基于质谱法的方法确定，例如确定相关蛋白或其片段的相对定量或确定绝对定量的方法。

相对定量“rSRM”可以通过以下方法实现：

1.通过将样品中检测到的给定靶片段肽的SRM(选定的反应监测)特征峰面积与至少第二、第三、第四或更多个生物样品中靶片段肽的相同SRM特征峰面积进行比较，确定目标蛋白存在的增加或减少。

2.通过比较样品中检测到的给定靶肽的SRM特征峰面积与在来自不同和单独生物来源的其它样品中来自其它蛋白质的片段肽产生的SRM特征峰面积，确定靶蛋白的存在的增加或减少，其中两个样品之间的肽片段的SRM标记峰面积比较例如对于每个样品中分析的蛋白质的量归一化。

3.通过将给定靶肽的SRM特征峰面积与来自同一生物学样品中不同蛋白的其它片段肽的SRM特征峰面积进行比较以将组蛋白的变化水平标准化为在各种细胞状况下不会改变其表达水平的其它蛋白的水平，确定靶蛋白存在的增加或减少。

4.这些测定可以应用于靶蛋白的未修饰片段肽和修饰片段肽两者，其中修饰包括但不限于磷酸化和/或糖基化、乙酰化、甲基化(单、二、三)、瓜氨酸化、泛素化，并且其中以与确定未修饰肽的相对量相同的方式确定修饰肽的相对水平。

给定肽的绝对定量可通过以下方法实现：

1.将来自单个生物样品中靶蛋白的给定片段肽的SRM/MRM特征峰面积与掺入来自生物样品的蛋白裂解物中的内部片段肽标准物的SRM/MRM特征峰面积进行对比。内部标准物可为来自待研究的靶蛋白或标记的重组蛋白的片段肽的标记的合成形式。在消化之前(对于重组蛋白是必需的)或之后，将所述标准物以已知量掺入样品中，并且可以分别测定生物样品中内部片段肽标准物和天然片段肽的SRM/MRM特征峰面积，后续对比两个峰面积。这可以应用于未修饰的片段肽和修饰的片段肽，其中修饰包括但不限于磷酸化和/或糖基化、乙酰化、甲基化(例如单、二或三甲基化)、瓜氨酸化，泛素化，并且其中修饰肽的绝对水平可以与确定未修饰肽的绝对水平相同的方式确定。

2.肽也可以使用外部校准曲线进行定量。正态曲线法使用恒定量的重肽作为内部标准品，并使用掺入到样品中的变化量的轻合成肽。需要使用与测试样品相似的代表性基质来构建标准曲线，以考虑基质效应。此外，反向曲线方法避免基质中内源性分析物的问题，其中将恒定量的轻肽掺入到内源性分析物的顶部以创建内部标准品，并添加不同量的重肽以创建一组浓度标准品。将与正态或反向曲线进行比较的测试样品掺入与内部标准品相同量的标准肽，且所述内部标准品掺入到用于创建校准曲线的基质中。

本发明进一步涉及试剂盒、所述试剂盒的用途以及使用此类试剂盒的方法。本发明涉及用于实施本文上文和下文提供的方法的试剂盒。本文提供的定义，例如关于方法提供的定义，也适用于本发明的试剂盒。特别地，本发明涉及用于治疗监测的试剂盒，其包含患者健康中继发不良事件的预后、风险评定或风险分层，其中所述试剂盒包含

-检测试剂，其用于确定来自受试者的样品中proADM或其片段的水平，并且任选地另外用于确定所述样品中PCT、乳酸和/或C-反应蛋白或其片段的水平，和检测试剂，其用于确定所述受试者的所述样品中所述ADM的水平，和

-参考数据，如参考水平，其对应于ADM的高和/或低严重程度水平，以及任选地PCT、乳酸和/或C-反应蛋白水平，其中低严重程度水平为低于4nmol/l、优选低于3nmol/l、更优选低于2.7nmol/l，并且高严重程度水平为高于6.5nmol/l、优选高于6.95nmol/l、更优选高于10.9nmol/l，其中所述参考数据优选地存储于计算机可读介质上和/或以计算机可执行代码的形式使用，所述计算机可执行代码被配置用于将确定的proADM或其片段的水平，以及任选地另外确定的PCT、乳酸和/或C-反应蛋白或其片段的水平与所述参考数据进行对比。

如本文所用，“参考数据”包含ADM和任选的PCT、乳酸、C-反应蛋白和/或本文公开的其它合适的标志物(例如横纹肌溶解症的标志物)的参考水平。受试者的样品中ADM和任选地其它标志物(如PCT、乳酸和/或C-反应蛋白)的水平可以与试剂盒的参考数据中包含的参考水平进行对比。参考水平在本文上文中进行了描述，并且在所附实例中也进行了举例说明。参考数据还可以包括与ADM和任选的PCT、乳酸和/或C-反应蛋白的水平进行对比的参考样品。参考数据还可包括如何使用本发明试剂盒的说明书。

试剂盒可另外包含用于获得样品的物品，如血液样品，例如试剂盒可包含容器，其中所述容器包含用于将所述容器附接到套管或注射器的装置，是适合于血液分离的注射器，表现出小于大气压的内部压力，如适于将预定体积的样品吸入所述容器中，和/或另外包含去污剂、离液盐、核糖核酸酶抑制剂、螯合剂，如异硫氰酸胍、盐酸胍、十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯、核糖核酸酶抑制剂蛋白及其混合物，和/或含有硝化纤维素、二氧化硅基质、铁磁球、杯检索溢出物、海藻糖、果糖、乳糖、甘露糖、聚乙二醇、甘油、EDTA、TRIS、柠檬烯、二甲苯、苯甲酰、苯酚、矿物油、苯胺、吡咯、柠檬酸盐及其混合物的过滤系统。

如本文所用，“检测试剂”等是适于确定本文所述标志物(例如ADM、PCT、乳酸和/或C-反应蛋白)的试剂。例如，此类示例性检测试剂是配体，例如特异性地结合到本文描述的标志物的肽或表位上的抗体或其片段。此类配体可用于如上所述的免疫测定中。免疫测定中用于确定标志物水平的另一些试剂也可以包含在试剂盒中，且在本文中被视为检测试剂。检测试剂还可以涉及用于通过基于MS的方法检测标志物或其片段的试剂。这样的检测试剂因此也可以是用于制备用于MS分析的样品的试剂，例如酶、化学品、缓冲液等。质谱仪也可以被认为是检测试剂。根据本发明的检测试剂也可以是例如可以用来确定和比较标志物的水平的校准溶液。

诊断和/或预后测试的灵敏度和特异性不仅取决于测试的分析“质量”，其还取决于构成异常结果的定义。实际上，接受者操作特征曲线(ROC曲线)通常是通过绘制在“正常”即没有感染的明显健康的个体和“疾病”群体(例如具有感染的受试者)中变量值与其相对频率的关系来计算的。对于任何特定标志物(如ADM)，患有和未患有疾病/病症的受试者的标志物水平分布将可能重叠。在这样的条件下，测试不能以100％的准确度绝对区分正常和疾病，且重叠区域可能指示测试不能区分正常和疾病的位置。选择一个阈值，在所述阈值之下，则测试被认为是异常的，在所述阈值之上，则测试被认为是正常的，或者在所述阈值之下或之上，则测试指示例如感染的特定状况。ROC曲线下的面积是感知的测量将允许正确识别状况的概率的度量。即使测试结果不一定提供准确的数字，也可以使用ROC曲线。只要可以对结果进行排名，就可以创建ROC曲线。例如，可以根据程度对“疾病”样品的测试结果进行排名(例如1＝低、2＝正常，以及3＝高)。可以将所述排名与“正常”群体中的结果相关联，并创建ROC曲线。这些方法是本领域众所周知的，例如，参见Hanley等人1982年《放射学(Radiology)》143:29-36。优选地，选择一个阈值以提供一个大于约0.5的ROC曲线面积、更优选地大于约0.7，更加优选地大于约0.8，甚至更优选地大于约0.85，且最优选地大于约0.9的ROC曲线区域。在所述上下文中，术语“约”是指给定测量值的+/-5％。

ROC曲线的水平轴代表(1-特异性)，其随着假阳性率的增加而增加。曲线的垂直轴表示灵敏度，其随真阳性率的增加而增加。因此，对于选择的特定截止值，可以确定(1-特异性)的值，并且可以获得相应的灵敏度。ROC曲线下的面积是所测量的标志物水平允许正确识别疾病或状况的概率的度量。因此，ROC曲线下的面积可用于确定测试的有效性。

因此，本发明包含基于通过本文所述方法获得的信息施用适于治疗的抗生素。

如本文所用，术语“包含”和“包括”或其语法变体被视为指定所陈述的特征、整数、步骤或组分，但不排除添加一个或多个附加特征、整数、步骤、组分或其组。所述术语包含术语“由……组成”和“基本上由……组成”。

因此，术语“包含”/“包括”/“具有”表示可以/可能存在任何另一组分(或同样的特点、整数、步骤等)。术语“由……组成”表示不存在另一组分(或同样的特点、整数、步骤等)。

当在本文中使用时，术语“基本上由……组成”或其语法变体应被视为指定所陈述的特点、整数、步骤或组分，但不排除添加一个或多个另外的特点、整数、步骤、组分或群组，但是，只有当附加的特点、整数、步骤、组分或群组没有对所述组合物、装置或方法的基本和新特征产生重大影响时，才可以使用。

因此，术语“基本上由……组成”是指可以存在那些特别的进一步组分(或同样的特点、整数、步骤等)，即那些不会实质性地影响组合物、装置或方法的基本特征的组分。换句话说，术语“基本上由……组成”(在本文中可以与术语“基本上包含”可互换使用)允许在组合物、装置或方法中存在强制组分之外的其它组分(或类似的特点、整数、步骤等)，前提是装置或方法的基本特征不受其它组分的存在的重大影响。

术语“方法”是指完成一项特定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于化学、生物和生物物理领域工作者已知的或从已知的方式、手段、技术和程序发展的那些方式、手段、技术和程序。

通过参考以下非限制性实例进一步描述本发明。

实例

实例的方法：

这是对《综合临床转录组学技术改善重伤患者的预后能力：一种转化方法(Improvement of prognostic performance in severely injured patients byintegrated clinico-transcriptomics:a translational approach study)》研究的二次分析[14]，所述研究于2009年12月至2012年3月在苏黎世大学医院(University Hospitalof Zurich)创伤外科(Division of Trauma Surgery，一级创伤中心)收治的患者中进行。患者纳入准则包括年龄≥18岁、损伤严重程度(ISS)评分≥17分且从受伤到入院的时间<6小时。先前已经对原始研究设计的更多细节进行了描述[14]。

在创伤发生后的前6小时内(基线)以及在之后的第1天、第2天、第3天、第5天、第7天、第10天、第14天和第24天收集来自创伤患者的血液样品。在初始创伤之后的前28天内记录临床结果，包括医院内感染、败血症发生和非感染相关的并发症。根据美国胸科医师学会与美国重症医学会联席委员会(American College of Chest Physicians/Society ofCritical care Medicine Consensus Conference)的准则，定义了全身性炎症[15,16]。全身性炎症评分(SI评分)[17]用于评定创伤引起的全身性炎症的严重程度。创伤患者的继发败血症发生定义为在存在感染性病灶或阳性血液培养物的情况下，两个连续时间点之间增加≥2SI分。在所有时间点计算序贯器官衰竭评定(SOFA)评分。

回顾性测量降钙素原(PCT)和中位肾上腺髓质素前体(MR-proADM)浓度(

取决于分布正态性，对分类变量使用χ

随后创建基线与第1天之间的生物标志物和临床评分动力学模型，以评定创伤后的前28天内败血症发生或非感染相关的并发症的可能性。MR-proADM(<1.54nmol/L)[SIDED]、PCT(<0.5ng/mL)、乳酸(<2.0mmol/L)[8]和SOFA(<5分)的预先设定的截止值在两个时间点都使用。所得比值比(OR)评定不同患者亚组之间不良事件的可能性。

实例1：患者特征

表1总结了患者的特征。

共有77名患者具有可用于生物标志物测量的样品，其可以进行回顾性分析，其中74.0％(N＝57)是男性，平均年龄为41.4(17.3)岁，并且28天死亡率为6.5％(N＝5)。入院时的平均格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分为12.3(4.0)分，其中16(20.8％)名患者的GCS<10分。所有患者均收入ICU，其中ICU的中值时间和总住院时间分别为12[4-21]天、25[16-38]天。

初始创伤后的前28天内患者平均进行了4.3(2.7)例手术，其中在基线时有71(92.2％)名患者接受了紧急外科手术。在第1天进行了另外20例手术，其中16(80.0％)例为重复外科手术，并且4(20.0％)名患者在基线时未接受手术。在整个住院期间，只有2名(2.6％)患者不需要任何形式的外科手术干预。平均外科手术时间为116.2(92.0)分钟。

实例2：败血症和非感染相关并发症发生

共有44(57.9％)名患者在28天内发生了非感染相关并发症，其中横纹肌溶解症发生是最常见的并发症(N＝15；34.1％)。相反，有48(64.9％)名患者发生了医院内感染，其中外科手术和非外科手术感染分别占19(38.0％)和27(54.0％)例。在12(44.4％)名患者中发现了非外科呼吸机相关的肺炎。在48名发生医院内感染的患者中，有12(24.0％)名发生败血症，其中平均诊断时间为9.5(4.7)天，其中10(83.3％)名演变为败血性休克。表1列出了败血症发生的患者特征。

在基线时将抗生素施用给44(57.1％)名患者，在基线或第1天施用给45(58.4％)名，且在住院期间的前7天内施用给55(71.4％)名。在基线或第1天被施用抗生素的45名患者中，11(24.4％)名后续未发生任何感染的患者开始使用抗生素，而32(71.1％)名发生了医院内感染的患者开始使用抗生素。在治疗的前七天内，共有11(91.7％)名发生败血症的患者被施用了抗生素。

实例3：基线时生物标志物与临床评分的相关性

入院时任何生物标志物与SOFA评分之间均无显著相关性，而可发现乳酸、SOFA和MR-proADM与ISS评分之间的相关性低却显著。在基线时SOFA和乳酸与住在ICU的时间具有最大的相关性，而与PCT或CRP均无显著相关性。有趣的是，乳酸与患者住院总时间的相关性也最高。

实例4：基线和第1天时对败血症发生的预测

MR-proADM和SOFA是在基线(AUROC[95％CI]：0.71[0.56-0.86]和0.73[0.56-0.90])和第1天(AUROC[95％CI]：0.85[0.76-0.94]和0.84[0.70-0.98])与预测败血症发生显著相关的仅有的两个参数，尽管创伤之后一天所有参数均展示出改进的表现(表2)。

在非感染相关并发症的发生中也可以发现相似之处，其中MR-proADM和乳酸是在基线和第1天均具有显著关联的仅有的两个参数。相反，CRP在两个时间点展示出无显著关联(表3)。

实例5：预测败血症和创伤相关并发症的动力学模型

随后根据生物标志物和临床评分在基线和第1天的预测性表现，识别出生物标志物和临床评分，以便在28天内确认/排除败血症的发生，或在相同时间段内识别出有较高风险发生非感染相关并发症的患者人群。

实例6：28天内的败血症发生

随后对乳酸和MR-proADM进行研究，以预测28天内创伤相关并发症的发生。与发生败血症的患者相比，基线与第1天之间的乳酸水平<2mmol/L可以比持续低水平的MR-proADM(N＝16；40.0％)识别出更少数量的创伤相关并发症(N＝7；28.0％)。相反，递增(14名患者，87.5％并发症发生率)或持续升高的(8名患者，88.9％并发症发生率)MR-proADM浓度可以准确地识别出有潜在风险发生并发症的亚组。

实例讨论

此回顾性分析比较了严重多发伤后败血症早期确认或排除中的既定和新型生物标志物和临床评分的表现。维持持续低的MR-proADM或高的SOFA水平以分别确认或排除败血症发生，可能有助于基于由感染引起的继发性并发症的特定治疗策略的开发。

表格

表1基于继发败血症发生状况在基线时的患者特征.

表2.用于预测28天内败血症发生的在基线和第1天时的生物标志物和临床评分表现.

表3.用于预测28天内非感染相关并发症的在基线和第1天时的生物标志物和临床评分表现.

表4.根据生物标志物和临床评分值的败血症发生的可能性.

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