含海参复合多糖粉的组合物、复方制剂及其应用

技术领域

本发明属于医疗保健及新药研制技术领域，公开了含海参复合多糖粉的系列海参复方制剂及其制备方法，具有降血脂、降血糖和增强免疫作用。

背景技术

海参为刺参科动物刺参或其他种海参的全体。海参捕得后，除去内脏，洗净腔内泥沙，入适当的盐水中烧煮约1小时，捞起放冷，经曝晒或烘焙至八、九成干时，再入蓬叶液中略煮，至颜色转黑时，取出晒干。功能主治为：补肾益精，养血淘燥。治精血亏损，虚弱劳怯，阳痿，梦遗，小便频数，肠燥便艰。

海参是高蛋白、低脂肪、无胆固醇的滋补品，富含多种氨基酸、微量元素及维生素，具有很高的营养价值。海参体壁是海参的主要食用部位，也是海参各种营养成分富集的重要部位。除此之外,海参内脏及性腺中也含有部分营养物质，是海参胶囊、海参口服液等海参相关保健品的重要原材料。

海参中还含有丰富的活性成分，如：海参多糖、海参皂苷、胶原蛋白、海参肽以及脑苷酯等，这些活性物质在抗肿瘤、抗真菌、抗凝血、降血压、降血脂以及增强机体免疫功能等方面都有着良好的功效。

海参多糖是海参体壁中主要功效成分之一，占干基6％以上，但结构复杂，目前发现的主要有2类：一类是海参糖胺聚糖或黏多糖，由D-N-乙酰胺基半乳糖、D-葡萄糖醛酸、L-岩藻糖、硫酸酯基组成的杂多糖，相对分子量4～5万；另一类是海参岩藻多糖，相对分子量8～10万。近年来，有关海参多糖生物活性的研究取得了积极进展，大量研究表明海参多糖有抗肿瘤、抗血栓、抗凝血、提高免疫功能、延缓衰老的作用。

海参皂苷为海参所特有的一类三萜皂苷，主要有苷元和寡糖链2部分组成，是海参的主要次生代谢产物，也是其进行生理防御的化学物质基础。海参皂苷根据结构不同可分为海参烷型和非海参烷型两大类。现代药理学研究表明,海参皂苷是海参的主要活性物质之一，具有抗转移、抗肿瘤、抗真菌以及降脂减肥等多种生物活性功能。

海参中除了含有海参多糖和海参皂苷这2种主要活性成分之外,还含有胶原蛋白、海参肽及脑苷酯等活性物质。胶原蛋白是海参中含量最丰富的活性物质之一,具有良好的生物相容性、生物降解性和低抗原性等生理功能。海参肽是海参经蛋白酶水解并分离提纯后所得的小分子肽,具有抗氧化、降血脂、抗肿瘤及抗疲劳的作用。有学者采用海参酶解液喂养大鼠以此研究海参肽对大鼠血脂的影响，结果显示海参肽显著提高了大鼠血清中的高密度脂蛋白水平，并降低甘油三酯的含量，充分证明了海参肽具有降低血脂的作用。

干制品是海参加工产品的主要形式。海参体内有活性很强的自溶酶，出水后极易自溶。因此，90％的海参被加工成干制品或其他形式的产品供给市场。目前，干制海参产品主要包括盐渍海参、盐干海参、淡干海参、冻干海参、半干海参等。盐渍海参是重要的海参产品，通过水煮和发制使海参能够充分吸收水分，以减少海参中的苦涩味，改善口感。传统海参加工技术由于水平低，加工方法易导致水溶性物质破坏和流失，且易受自然条件的影响，可控性小，因此新兴技术不断应用于海参加工工艺中，如真空冷冻干燥技术等。冻干对易氧化和热敏性营养物质没有破坏，水分在真空条件下直接升华，所以冻干后的海参形体大而饱满，极易复水。

海参制品的产品形式日益丰富。有些学者利用含气调理加工、生物酶解等技术，将新鲜海参或盐渍海参加工成即食海参，方便消费者食用。在传统的常压加热下，逐渐衍生出超高压、高压、低压真空蒸煮等不同的加热方式，为即食海参的加工和贮藏提供了诸多参考；热泵干燥、微波干燥以及各种干燥方式相结合的新型食品干燥技术也越来越多地应用于海参加工。即食海参、海参罐头、海参酒等深加工产品逐渐出现，海参奶、海参口服液、海参营养胶囊、海参果冻等高端产品也逐渐进入人们的生活。

目前，广大人群仍以食补的方式服用海参，这种服用方式会导致海参不能够完全被人体吸收利用，海参利用率低，同时在传统的加工工艺中，海参损失量比较大。

另外，据报道，刺参低聚肽对四氧嘧啶致糖尿病小鼠的降血糖作用，如腹腔注射四氧嘧啶造小鼠糖尿病模型,连续6周灌胃不同剂量的刺参低聚肽(0.1、0.2、0.5g/kg),记录灌胃(王祖马普，左爱华，刺参低聚肽对糖尿病小鼠降血糖作用的研究，食品研究与开发.2019年08期第85-90页)，其他文献也有报道其降血脂作用，但是所有这些研究都停留在较初级阶段，处于临床前研究探讨阶段，能否一定支持临床效果尚不清楚，且具体到海参多肽、多糖、脂类等成分，虽具备一定的降血糖和降血脂作用，成分单一，非复合成分，但很显然，中药具体活性成分得率较低，制备成本较高，能否口服吸收尚还不清楚，且单用这些活性成分或具备一定的副作用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供海参组合物复方制剂及其应用。本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

针对现有技术缺点，本发明以海参多糖蛋白粉作为原料，其产物具备多糖也含蛋白类两类成分，且通过和传统中药配比其活性大大增加，远大于单用海参类成分的效果。且该复方在现有文献中没有报道。另外，关于海参及复方壮阳作用，本专利为首次报道。

本发明旨在提供一种方法简单，便于操作，同时充分增加海参吸收率、利用率，并且具有多种功效海参组合物、其复方制剂及其应用，包含三组组合物。

技术方案1：一种含海参复合多糖蛋白粉的降血糖组合物，所述的组合物由活性成分和辅料制成，所述的活性成分由海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘和葛根组成，每1000g组合物中各活性成分的含量分别如下：海参复合多糖蛋白粉200-300g，山药10-50g，百合10-50g，枸杞子10-50g，桑叶10-50g，沙棘10-50g，葛根150-250g。

方药分析：

山药健脾，补肺，固肾，益精。治脾虚泄泻，久痢，虚劳咳嗽，消渴，遗精、带下，小便频数。补脾养胃，生津益肺，补肾涩精。用于脾虚食少、久泻不止、肺虚喘咳、肾虚遗精、带下、尿频、虚热消渴。山药具有提高免疫功能、改善消化功能、降血糖、降血脂、抗氧化、延缓衰老、抗肿瘤、抗突变、促进肾脏再生修复、调节酸碱平衡等药理作用。山药多糖是山药的主要活性成分，具有调节免疫、降血糖、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等作用。

百合具有养阴润肺，清心安神之功效。常用于阴虚燥咳，劳嗽咳血，虚烦惊悸，失眠多梦，精神恍惚。百合所含的百合多糖能修复胰岛细胞，增强分泌胰岛素，降低肾上腺皮质激素分泌。以及促进肝脏中血糖转化为糖原的联合作用，从而使血糖降低。百合多糖的降糖机制目前研究为促进胰岛素分泌，拮抗升糖激素，促进外围组织和靶细胞的作用，促进糖原合成或抑制糖原分解，增加胰岛素受体或提高其亲和力，并提高对胰岛素的敏感性，防止脂质过氧化；改善微循环，以及对葡萄糖的转运、受体和血糖浓度都有一定影响，从而发挥了一定的辅助降糖作用。

枸杞子滋肾，润肺，补肝，明目。治肝肾阴亏，腰膝酸软，头晕，目眩，目昏多泪，虚劳咳嗽，消渴，遗精。枸杞子可以增强免疫功能、延缓衰老、保肝、降血脂、降血糖、抗疲劳，现代应用中可用于治疗肿瘤、老年高脂血症、糖尿病等。枸杞子提取物能有效地保护视网膜，同时还具有降血糖、降压、抗肿瘤和抗疲劳等作用。

桑叶疏散风热，清肺润燥，平肝明目，凉血止血。用于风热感冒，温病初起，肺热咳嗽，肝阳上亢眩晕，目赤昏花，血热妄行之咳血、吐血。桑叶中含有N-糖化合物，具有抑制血糖上升的药理作用，可用于防治和治疗糖尿病。

沙棘健脾消食，止咳祛痰，活血散瘀。用于脾虚食少，食积腹痛，咳嗽痰多，胸痹心痛，瘀血经闭，跌扑瘀肿。沙棘黄酮能有效的控制高血糖水平，降低高血糖病理状态下果糖胺含量，增强胰岛素敏感指数，改善胰岛素抵抗，对胰岛B细胞损伤有一定的修复保护作用；能够增强机体抗氧化能力；调节高血糖所致脂质代谢紊乱和蛋白质代谢紊乱；改善高血糖患者的体重、饮食水平。

葛根解肌退热，透疹，生津止渴，升阳止泻。用于表证发热，项背强痛，麻疹不透，热病口渴，阴虚消渴，热泻热痢，脾虚泄泻。葛根素有明显的降低血糖的作用，葛根所含的黄酮类化合物有降血脂作用，能降低血清胆固醇，降低油三酯，用于治疗高血糖，高血脂病症，有显著疗效。

技术方案2：一种含海参复合多糖粉的降血脂组合物，所述的组合物由活性成分和辅料制成，所述的活性成分由海参复合多糖蛋白粉、荷叶、菊苣、槐米、葛根和山楂组成，每1000g组合物中各活性成分的含量分别如下：海参复合多糖蛋白粉200-300g，荷叶50-100g，菊苣50-100g，槐米50-100g，葛根100-150g，山楂50-100g。

方药分析：

荷叶清暑化湿，升发清阳，凉血止血。荷叶炭则有收涩化瘀止血的功能。用于暑热烦渴，暑湿泄泻，脾虚泄泻，血热吐衄，便血崩漏。荷叶炭用于出血症和产后血晕。荷叶碱是荷叶中提取的生物碱，荷叶碱可扩张血管，清热解暑，有降血压的作用，同时还是减肥的良药。荷叶中的生物碱有降血脂作用，且临床上常用于肥胖症的治疗。荷叶生物碱减肥原理，即服用后在人体肠壁上形成一层脂肪隔离膜，有效阻止脂肪的吸收，从根本上减重，并更有效的控制反弹。

菊苣清肝利胆，健胃消食，利尿消肿。用于湿热黄疸，胃痛食少，水肿尿少。菊苣天然产物药效主要有降血糖、降血脂、降尿酸作用，保肝作用以及对消化系统和心血管系统的影响作用，并促进对钙的吸收，提高机体免疫力，在抗过敏、抗菌、抗病原微生物等方面有一定作用；其主要化学成分有糖类、有机酸类、生物碱类、三萜类、倍半萜类和香豆素等。

槐米凉血止血，清肝泻火。用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕。槐米所含的槲皮素有一定的平喘作用，此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性、降血脂，扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。槐米多糖具有抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、降血糖、抗凝血等药理作用。

葛根解肌退热，透疹，生津止渴，升阳止泻。用于表证发热，项背强痛，麻疹不透，热病口渴，阴虚消渴，热泻热痢，脾虚泄泻。葛根汤具有明显的抗血栓形成作用，对血小板聚集有显著的抑制作用。葛根素能使血管内壁糖和氨基酸代谢减慢，胶原纤维相对减少，有益于防治动脉粥样硬化，血小板黏附和血栓形成。

山楂消食健胃，行气散瘀，化浊降脂。用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，心腹刺痛，胸痹心痛，疝气疼痛，高脂血症。焦山楂消食导滞作用增强。用于肉食积滞，泻痢不爽。山楂有强心、抗心律失常、增加冠脉流量、降血脂、扩张血管、降低血压作用。山楂所含的黄酮类物质能舒张外周血管，具有缓慢而持久的降压作用，并能扩张冠状动脉、降脂、强心。

技术方案3：一种含海参复合多糖粉的壮阳和增强免疫组合物，所述的组合物由活性成分和辅料制成，所述的活性成分由海参复合多糖蛋白粉、牡蛎粉、益智仁和黄精组成，每1000g组合物中各活性成分的含量分别如下：海参复合多糖蛋白粉200-300g，牡蛎粉200-300g，益智仁10-50g，黄精100-200g。

方药分析：

牡蛎功能主治为：敛阴，潜阳，止汗，涩精，化痰，软坚。治惊痫，眩晕，自汗，盗汗，遗精，淋浊，崩漏，带下，瘰疬，瘿瘤。用于惊悸失眠，眩晕耳鸣，瘰疠痰核，瘕痞块，自汗盗汗，遗精崩带，胃痛泛酸。煅牡蛎收敛固涩。用于自汗盗汗，遗精崩带，胃痛吞酸。牡蛎壳粉含18种氨基酸、肝糖元、B族维生素、牛磺酸和钙、磷、铁、锌等营养成分，常吃可以提高机体免疫力。牡蛎壳粉所含牛磺酸降血脂、降血压。在古希腊神话里牡蛎壳粉是代表爱的食物。从中医角度牡蛎壳粉通水气，滋润肺部，利于肾水。西医验证它是含锌最多的天然食品之一(每百克蚝肉含量高达100mg)，也就是每天只吃2～3个牡蛎壳粉就提供你全天所需的锌。锌的巨大价值体现在它是男性生殖系统里至关重要的矿物质，尤其是近五十年男性的精子数量下降明显，更需补充足够的锌。

益智仁温脾止泻摄涎，暖肾缩尿固精。用于脾胃虚寒，呕吐，泄泻，腹中冷痛，口多唾涎，肾虚遗尿，尿频，遗精，白浊。历代医家及本草论著都说益智仁能补肾壮阳，固精缩尿，温脾止泄，悦色延年，提高记忆力。而且是"久服轻身"，的确是一味补肾防衰良药。据现代药理研究证实，益智仁含有多种化合物、能够增强阳虚动物的脾脏和增加胸腺重量，并能改善阳虚动物的营养、体重和耐受力等，对阳虚怕冷的病人有明显的强壮和治疗作用。

黄精补气养阴，健脾，润肺，益肾。用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴。黄精具有显著的滋阴润肺、生津止渴等作用，主要适用于肺燥肺热以及肺阴不足而引起的一系列症状，比如干咳痰少、口干舌燥以及咳喘不止等，还能有效消除产生的疲倦头晕、食欲不振和健忘心悸等症。黄精除了对肺脏有调理作用之外，也可入肾经，能够起到补肾强肾和固精锁精的药物功效，对于肾虚和肾阴不足引起的腰膝酸软、盗汗自汗等多种症状都有显着的治疗效果，还有助于提高男性性能力，达到壮阳的目的。黄精具有很好的滋补作用，还有着增强免疫力和延缓衰老的作用。黄精含有黄精多糖、低聚糖、赖氨酸等多种活性成分，具有增强免疫力、延缓衰老、抗病毒、降血糖等作用。

技术方案4：提供了含海参复合多糖蛋白粉的降血糖组合物的复方制剂，所述的药物制剂为片剂或胶囊剂，所述的组合物中的辅料为食用或药用辅料，所述的食用或药用辅料包括以下中的任意一种或多种：稀释剂、助悬剂、抗氧化剂、乳化剂、崩解剂、黏合剂和防腐剂(主要包括麦芽糊精、硬脂酸镁、淀粉、二氧化硅等)，所述的片剂或胶囊剂中，多糖的含量0.56％～1.18％，蛋白质的含量3.18％～3.76％。

本发明的含海参复合多糖蛋白粉的降血糖组合物的片剂或胶囊剂，原料以原粉入药，原粉可以采用市售品，或者购买药材进行粉碎、过筛而得。本发明在上述成分的基础上，直接或者再加入适当的食用或药用辅料，可以制成片剂、胶囊剂等。上述可以加入的食用或药用辅料包括：稀释剂、助悬剂、抗氧化剂、乳化剂、崩解剂、黏合剂和防腐剂。

例如：

含海参复合多糖蛋白粉的降血糖组合物的片剂制备工艺：按配方将海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘、葛根、木糖醇(或水苏糖)、低聚果糖、麦芽糊精和硬脂酸镁投入混合机中混合均匀(混合约15分钟)，加入乙醇，制成软材，将软材投入颗粒机中进行造粒，过24目筛网粉碎制粒；于50℃鼓风干燥6小时，水分控制在5％左右；过20目筛整粒；将经过整粒的颗粒与处方量的硬脂酸镁进行总混，混合均匀，压片制成海参降血糖片，包装；

含海参复合多糖蛋白粉的降血糖组合物的胶囊剂制备工艺：按配方取海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘、葛根、淀粉和二氧化硅；海参复合多糖蛋白粉过100目筛，与淀粉投入混合机内混合30分钟，加入乙醇作为湿润剂，混合10分钟，混合后的物料用20目筛制粒，放入干燥设备内干燥，加入干燥颗粒总量的10g二氧化硅，整粒，装胶囊充填，包装。

技术方案5：提供了含海参复合多糖蛋白粉的降血脂组合物的复方制剂，所述的药物制剂为片剂或胶囊剂，所述的组合物中的辅料为食用或药用辅料，所述的食用或药用辅料包括以下中的任意一种或多种：稀释剂、助悬剂、抗氧化剂、乳化剂、崩解剂、黏合剂和防腐剂(主要包括麦芽糊精、硬脂酸镁、淀粉、二氧化硅等)，所述的片剂或胶囊剂中，多糖的含量1.21％～1.76％，蛋白质的含量3.08％～4.11％。片剂和胶囊剂的制备工艺同上。

技术方案6：提供了含海参复合多糖粉的壮阳和增强免疫组合物的复方制剂，所述的药物制剂为片剂或胶囊剂，所述的组合物中的辅料为食用或药用辅料，所述的食用或药用辅料包括以下中的任意一种或多种：稀释剂、助悬剂、抗氧化剂、乳化剂、崩解剂、黏合剂和防腐剂(主要包括麦芽糊精、硬脂酸镁、淀粉、二氧化硅等)，所述的片剂或胶囊剂中，多糖的含量1.26％～1.79％，蛋白质的含量3.04％～4.52％。片剂和胶囊剂的制备工艺同上。

技术方案7：提供了含海参复合多糖蛋白粉的降血糖组合物在制备降血糖药物或保健品中的应用。

技术方案8：提供了含海参复合多糖蛋白粉的降血脂组合物在制备降血脂药物或保健品中的应用。

技术方案9：提供了含海参复合多糖蛋白粉的壮阳和增强免疫组合物在制备壮阳和增强免疫药物或保健品中的应用。

本发明具有如下技术效果：

本发明根据中医配伍理论和中西医相结合理论配制的海参复方，以海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘和葛根(或海参复合多糖蛋白粉、荷叶、菊苣、槐米、葛根和山楂，或海参复合多糖蛋白粉、牡蛎粉、益智仁和黄精)为主要原料，再加入适当的食用或药用辅料，制成片剂、胶囊剂等，并制定了相应的工艺和质量标准，其功效具有抗凝、降血脂、降血糖、壮阳和增强免疫作用。本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。该发明专利涉及到新配方研制、该配方新的制备工艺，其产品特征性进行主要成分的清晰界定，具有显著的功能学作用，因此，从制剂配方，制备方法，产品特征性及其作用，均为国内外首次报道。

具体来说：

1、本发明所用到的海参复合多糖蛋白粉是以干海参为原料，经清洗、提取(酶解)、浓缩、干燥(加适度辅料淀粉或糊精等便于干燥)等生产工艺制成的，所制得的海参复合多糖蛋白粉中低分子量多糖含量≥5％，蛋白质(小分子肽)含量≥15％。(付学军,朴亮均.酶解法综合制备海参多肽、多糖工艺研究[J].食品科技,2007(09):116-118.)

2、本发明的海参降血糖组合物是根据海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘、葛根各自具有的功能特点进行搭配组合，海参中海参多糖有抗肿瘤、抗血栓、抗凝血、提高免疫功能、延缓衰老的作用；山药多糖是山药的主要活性成分，具有调节免疫、降血糖、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等作用；百合多糖的降糖机制目前研究为促进胰岛素分泌，拮抗升糖激素，促进外围组织和靶细胞的作用，促进糖原合成或抑制糖原分解，增加胰岛素受体或提高其亲和力，并提高对胰岛素的敏感性，防止脂质过氧化；改善微循环，以及对葡萄糖的转运、受体和血糖浓度都有一定影响，从而发挥了一定的辅助降糖作用；枸杞子提取物能有效地保护视网膜，同时还具有降血糖、降压、抗肿瘤和抗疲劳等作用；桑叶中含有N-糖化合物，具有抑制血糖上升的药理作用，可用于防治和治疗糖尿病；沙棘黄酮能有效的控制高血糖水平，降低高血糖病理状态下果糖胺含量，增强胰岛素敏感指数，改善胰岛素抵抗，对胰岛B细胞损伤有一定的修复保护作用；能够增强机体抗氧化能力；调节高血糖所致脂质代谢紊乱和蛋白质代谢紊乱；改善高血糖患者的体重、饮食水平。

3、本发明的海参降血脂组合物是根据海参复合多糖蛋白粉、荷叶、菊苣、槐米、葛根、山楂各具有的功能特点进行搭配组合，海参中海参多糖有抗肿瘤、抗血栓、抗凝血、提高免疫功能、延缓衰老的作用；荷叶中的生物碱有降血脂作用，且临床上常用于肥胖症的治疗。荷叶生物碱减肥原理，即服用后在人体肠壁上形成一层脂肪隔离膜，有效阻止脂肪的吸收，从根本上减重，并更有效的控制反弹；槐米所含的槲皮素有一定的平喘作用，此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性、降血脂，扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用。

4、本发明的海参壮阳增强免疫组合物是根据海参复合多糖蛋白粉、牡蛎粉、益智仁、黄精各具有的功能特点进行搭配组合，海参中海参多糖有抗肿瘤、抗血栓、抗凝血、提高免疫功能、延缓衰老的作用；牡蛎壳粉所含牛磺酸降血脂、降血压；益智仁含有多种化合物、能够增强阳虚动物的脾脏和增加胸腺重量，并能改善阳虚动物的营养、体重和耐受力等，对阳虚怕冷的病人有明显的强壮和治疗作用；黄精含有黄精多糖、低聚糖、赖氨酸等多种活性成分，具有增强免疫力、延缓衰老、抗病毒、降血糖等作用。

5、本发明的含有上述组合物的片剂或胶囊剂中，对组合物主要成分的进行了清晰界定。对海参的主要活性成分多糖和蛋白质进行了含量测定：紫外分光光度法作为多糖的含量测定方法，采用凯氏定氮法作为蛋白质的含量测定方法。

6、本发明提供了上述三种组合物在分别制备抗凝降血脂、降血糖、壮阳和增强免疫药物或保健品中的应用。

具体实施方式

下面结合实施例详细说明本发明的技术方案。

本发明所用到的海参复合多糖蛋白粉是以干海参为原料，经清洗、提取(酶解)、浓缩、干燥(加适度辅料淀粉或糊精等便于干燥)等生产工艺制成的，所制得的海参复合多糖蛋白粉中低分子量多糖含量≥5％，蛋白质(小分子肽)含量≥15％。具体参考：付学军,朴亮均.酶解法综合制备海参多肽、多糖工艺研究[J].食品科技,2007(09):116-118.

实施例1海参降血糖复方制剂配方及制备工艺

1)海参降血糖片的制备

A：海参复合多糖蛋白粉200g、山药10g、百合10g、枸杞子10g、桑叶10g、沙棘10g、葛根150g、木糖醇(或水苏糖)100g、低聚果糖100g、麦芽糊精390g、硬脂酸镁10g；按配方将海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘、葛根、木糖醇(或水苏糖)、低聚果糖、麦芽糊精投入混合机中混合均匀(混合约15分钟)，加入乙醇，制成软材，将软材投入颗粒机中进行造粒，过24目筛网粉碎制粒；于50℃鼓风干燥6小时，水分控制在5％左右；过20目筛整粒；将经过整粒的颗粒与处方量的硬脂酸镁进行总混，混合均匀，压片制成海参降血糖片，包装。(样品批号：20190601)

B：海参复合多糖蛋白粉300g、山药50g、百合50g、枸杞子50g、桑叶50g、沙棘50g、葛根250g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精90g、硬脂酸镁10g；按配方将海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘、葛根、木糖醇(或水苏糖)、低聚果糖、麦芽糊精投入混合机中混合均匀(混合约15分钟)。制剂方法同海参降血糖片A。(样品批号：20190602)

C：海参复合多糖蛋白粉250g、山药25g、百合25g、枸杞子25g、桑叶25g、沙棘25g、葛根200g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g；按配方将海参复合多糖蛋白粉、山药、百合、枸杞子、桑叶、沙棘、葛根、木糖醇(或水苏糖)、低聚果糖、麦芽糊精投入混合机中混合均匀(混合约15分钟)。制剂方法同海参降血糖片A。(样品批号：20190603)

2)海参降血糖胶囊

A：海参复合多糖蛋白粉200g、山药10g、百合10g、枸杞子10g、桑叶10g、沙棘10g、葛根150g、淀粉590g、二氧化硅10g、海参复合多糖蛋白粉过100目筛，与淀粉投入混合机内混合30分钟，加入乙醇作为湿润剂，混合10分钟，混合后的物料用20目筛制粒，放入干燥设备内干燥，加入干燥颗粒总量的1％二氧化硅，整粒，装胶囊充填，包装。(样品批号：20190604)

B：海参复合多糖蛋白粉300g、山药50g、百合50g、枸杞子50g、桑叶50g、沙棘50g、葛根250g、淀粉190g、二氧化硅10g。制剂方法同海参降血糖胶囊A。(样品批号：20190605)

C：海参复合多糖蛋白粉250g、山药25g、百合25g、枸杞子25g、桑叶25g、沙棘25g、葛根200g、淀粉415g、二氧化硅10g。制剂方法同海参降血糖胶囊A。(样品批号：20190606)

实施例2海参降血脂复方制剂配方及制备工艺

1)海参降血脂片

A：海参复合多糖蛋白粉200g、荷叶50g、菊苣50g、槐米50g、葛根100g、山楂50g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精390g、硬脂酸镁10g；制剂方法同海参降血糖片。(样品批号：20190801)

B：海参复合多糖蛋白粉300g、荷叶100g、菊苣100g、槐米100g、葛根150g、山楂100g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g；制剂方法同海参降血糖片。(样品批号：20190802)

C、海参复合多糖蛋白粉250g、荷叶75g、菊苣75g、槐米75g、葛根125g、山楂75g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精215g、硬脂酸镁10g；制剂方法同海参降血糖片。(样品批号：20190803)

2)海参降血脂胶囊

A：海参复合多糖蛋白粉200g、荷叶50g、菊苣50g、槐米50g、葛根100g、山楂50g、淀粉490g、二氧化硅10g；制剂方法同海参降血糖胶囊。(样品批号：20190804)

B：海参复合多糖蛋白粉300g、荷叶100g、菊苣100g、槐米100g、葛根150g、山楂100g、淀粉140g、二氧化硅10g；制剂方法同海参降血糖胶囊。(样品批号：20190805)

C：海参复合多糖蛋白粉250g、荷叶75g、菊苣75g、槐米75g、葛根125g、山楂75g、淀粉315g、二氧化硅10g；制剂方法同海参降血糖胶囊。(样品批号：20190806)

实施例3海参增强免疫复方制剂配方及制备工艺

1)海参壮阳增强免疫片(压片糖果)

A：海参复合多糖蛋白粉200g、牡蛎粉200g、益智仁10g、黄精100g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精380g、硬脂酸镁10g；制剂方法同海参降血糖片。(样品批号：20190901)

B：海参复合多糖蛋白粉300g、牡蛎粉300g、益智仁50g、黄精200g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g；制剂方法同海参降血糖片。(样品批号：20190902)

C：海参复合多糖蛋白粉250g、牡蛎粉250g、益智仁25g、黄精150g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精215g、硬脂酸镁10g；制剂方法同海参降血糖片。(样品批号：20190903)

2)海参壮阳增强免疫胶囊

A：海参复合多糖蛋白粉200g、牡蛎粉200g、益智仁10g、黄精100g、淀粉480g、二氧化硅10g；制剂方法同海参降血糖胶囊。(样品批号：20190904)

B：海参复合多糖蛋白粉300g、牡蛎粉300g、益智仁50g、黄精200g、淀粉140g、二氧化硅10g；制剂方法同海参降血糖胶囊。(样品批号：20190905)

C：海参复合多糖蛋白粉250g、牡蛎粉250g、益智仁25g、黄精150g、淀粉315g、二氧化硅10g；制剂方法同海参降血糖胶囊。(样品批号：20190906)实施例4海参降血糖组合物含量测定实验

分别取对照品溶液和实施例制备的样品，采用紫外分光光度法作为多糖的含量测定方法，采用凯氏定氮法作为蛋白质的含量测定方法。

I、紫外分光光度法测定多糖

取一定量的样品，加入到一定pH的水溶液中，水浴提取，过滤，离心，减压浓缩，醇沉得沉淀，离心后取沉淀冷冻干燥，即得多糖。取一定量的多糖溶解，定容到50mL。取一定体积溶液，加入80％的重蒸苯酚溶液和浓硫酸，摇匀，放置冷却到室温，分光光度计测定吸光度，再根据多糖标准曲线计算多糖的含量。II、凯氏定氮法测定蛋白质含量

按照GB5009.5《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》的方法测定。

III、含量测定结果

表1海参降血糖复方的含量测定结果

实施例5海参降血脂抗凝复方含量测定

分别取对照品溶液和实施例制备的样品，采用紫外分光光度法作为多糖的含量测定方法，采用凯氏定氮法作为蛋白质的含量测定方法。

I、紫外分光光度法测定多糖

取一定量的样品，加入到一定pH的水溶液中，水浴提取，过滤，离心，减压浓缩，醇沉得沉淀，离心后取沉淀冷冻干燥，即得多糖。取一定量的多糖溶解，定容到50mL。取一定体积溶液，加入80％的重蒸苯酚溶液和浓硫酸，摇匀，放置冷却到室温，分光光度计测定吸光度，再根据多糖标准曲线计算多糖的含量。II、凯氏定氮法测定蛋白质含量

按照GB5009.5《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》的方法测定。

III、含量测定结果

实施例6海参增强免疫复方含量测定

分别取对照品溶液和实施例制备的样品，采用紫外分光光度法作为多糖的含量测定方法，采用凯氏定氮法作为蛋白质的含量测定方法。

I、紫外分光光度法测定多糖

取一定量的样品，加入到一定pH的水溶液中，水浴提取，过滤，离心，减压浓缩，醇沉得沉淀，离心后取沉淀冷冻干燥，即得多糖。取一定量的多糖溶解，定容到50mL。取一定体积溶液，加入80％的重蒸苯酚溶液和浓硫酸，摇匀，放置冷却到室温，分光光度计测定吸光度，再根据多糖标准曲线计算多糖的含量。II、凯氏定氮法测定蛋白质含量

按照GB5009.5《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》的方法测定。

III、含量测定结果

功能试验

实施例7降血糖试验

1、材料、试剂与仪器

昆明种雄性小鼠，体重(20.0±2.0)g，购自新疆医科大学动物实验中心[生产许可证XYXK(新)2019-0001]。盐酸二甲双胍；柠檬酸；柠檬酸钠；链脲佐菌素；小鼠血清胰岛素检测试剂盒(ELISA法)；糖化血清蛋白(GSP)测试盒；本发明样品组。水浴锅；电子天平；酶标仪；安稳血糖仪。

2、动物造模与分组

取昆明种雄性小鼠140只，适应性饲养7d后，随机抽取10只为正常对照组，其余130只小鼠腹腔注射65mg/kgSTZ溶液(STZ粉末用pH值4.5的构椽酸缓冲溶液溶解)，3d后腹腔注射90mg/kg STZ溶液，7d后尾静脉采血测定血糖，血糖值＞11.1mmol/L者即为造模成功。

将130只糖尿病模型小鼠随机分为：

模型组；

阳性组(盐酸二甲双胍150.00mg/kg)；

本发明样品组(20190601、20190602、20190603)，给药剂量477.75mg/kg；

海参复合多糖蛋白粉组，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物A(海参复合多糖蛋白粉285g、山药58g、百合58g、枸杞子58g、桑叶58g、沙棘58g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物A在实施例1的样品20190603基础上减去葛根这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物B(海参复合多糖蛋白粉255g、山药29g、百合29g、枸杞子29g、桑叶29g、葛根204g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物B在实施例1的样品20190603基础上减去沙棘这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物C(海参复合多糖蛋白粉255g、山药29g、百合29g、枸杞子29g、沙棘29g、葛根204g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物C在实施例1的样品20190603基础上减去桑叶这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物D(海参复合多糖蛋白粉255g、山药29g、百合29g、桑叶29g、沙棘29g、葛根204g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物D在实施例1的样品20190603基础上减去枸杞子这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物E(海参复合多糖蛋白粉255g、山药29g、枸杞子29g、桑叶29g、沙棘29g、葛根204g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物E在实施例1的样品20190603基础上减去百合这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物F(海参复合多糖蛋白粉255g、百合29g、枸杞子29g、桑叶29g、沙棘29g、葛根204g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物F在实施例1的样品20190603基础上减去山药这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg；

对比组合物G(山药66g、百合66g、枸杞子66g、桑叶66g、沙棘66g、葛根245g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精315g、硬脂酸镁10g，对比组合物G在实施例1的样品20190603基础上减去海参复合多糖蛋白粉这一活性成分，制备方法与实施例1的20190603一致，组合物中活性成分的总含量与20190603组合物中活性成分的总含量一样)，给药剂量477.75mg/kg。

每组10只；正常对照组和模型组给予0.1mL/(10g体重)蒸馏水，连续给药28d。

3、指标测定

记录给药前及给药后28d内的小鼠体重，并每7d检测小鼠禁食12h后空腹血糖值。末次给药后，小鼠灌胃葡萄糖水溶液(2g/kg)进行葡萄糖负荷，分别在负荷前(0min)及负荷后30min、60min、120min剪鼠尾取血，用血糖仪测定血糖值。将小鼠麻醉后颈动脉取血，分离血清，检测GSP和INS水平。

4、统计分析

采SPSS 20.0软件进行数据处理，数据以x±s表示。组间比较采用t检验，P＜0.01为差异极显著，P＜0.05为差异显著，表示差异具有统计学意义。

5、结果

A、本发明样品对糖尿病小鼠体重的影响(表1)

从表1可知，与正常对照组比较，给药7d后，模型组小鼠体重显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，给药28d后，盐酸二甲双胍组、本发明样品组(20190601、20190602、20190603)、海参复合多糖蛋白粉组和对比组合物组(A、B、C、D、E、F、G)小鼠体重明显增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)，并且本发明样品组(20190601、20190602、20190603)小鼠体重增加最为显著。

说明本发明样品组的组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表1本发明样品对糖尿病小鼠体重的影响(x±s，n＝10)

注：与正常对照组比较，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；与模型组比较，#表示P＜0.05。下表同。

B、本发明样品对糖尿病小鼠空腹血糖值的影响(表2)

从表2可知，与正常对照组比较，模型组小鼠的空腹血糖值极显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)；与模型组比较，给药28d后，盐酸二甲双胍组、本发明样品组(20190601、20190602、20190603)、海参复合多糖蛋白粉组和对比组合物组(A、B、C、D、E、F、G)小鼠的空腹血糖值明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，并且本发明样品组(20190601、20190602、20190603)空腹血糖值降低最为显著。

说明本发明样品组的组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表2本发明样品对糖尿病小鼠空腹血糖值的影响(x±s，n＝10)

C、本发明样品对糖尿病小鼠口服葡萄糖耐量的影响(表3)

从表3可知，与正常对照组比较，模型组小鼠的血糖值、曲线下面积(AUC)极显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.01)；与模型组比较，本发明样品组(20190601、20190602、20190603)、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D、E、F、G)小鼠的血糖值、AUC值均明显下降，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，并且本发明样品组(20190601、20190602、20190603)小鼠的血糖值、AUC值下降最为显著。

说明本发明样品组的组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表3本发明样品对糖尿病小鼠口服葡萄糖耐量的影响(x±s，n＝10)

D、本发明样品对糖尿病小鼠GSP、INS水平的影响(表4)

从表4可知，与模型组比较，本发明样品各组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D、E、F、G)小鼠GSP水平明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；并且发明样品组(20190601、20190602、20190603)小鼠INS水平显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

说明本发明样品组的组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表4本发明样品对糖尿病小鼠GSP、INS水平的影响(x±s，n＝10)

结果表明，与模型组比较，给药28d后，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组小鼠、对比组合物组(A、B、C、D、E、F、G)体重显著增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)，并且本发明样品组小鼠体重增加最为显著；本发明样品组小鼠FBG值显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，并且本发明样品组空腹血糖值降低最为显著；本发明样品组小鼠GT显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；本发明样品组小鼠GSP水平显著降低，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；本发明样品组小鼠INS水平显著升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)。本发明样品对糖尿病小鼠FBG值、GT、GSP水平有降低作用，提高INS水平，对链脲佐菌素所致糖尿病小鼠有一定的治疗作用。

上述研究结果充分体现出了本发明组合物的降血糖作用，并且本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用实施例8降血脂试验

1、动物实验

仪器及试剂：解剖器械、分光光度计，自动生化分析仪，胆固醇、胆酸钠、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒。

健康成年雄性大鼠，适应期结束时，体重200±20g，首选SD大鼠，每组8－12只。

模型饲料：在维持饲料中添加20.0％蔗糖、15％猪油、1.2％胆固醇、0.2％胆酸钠，适量的酪蛋白、磷酸氢钙、石粉等。除了粗脂肪外，模型饲料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、钙、磷、钙：磷均要达到维持饲料的国家标准。(具体配方参考《保健食品检验与评价技术规范》2003版22-24页)。

实验设：本发明样品组(20190801、20190802、20190803)、空白对照组、模型组和对照组；

对照组包括：

海参复合多糖蛋白粉组；

对比组合物A(海参复合多糖蛋白粉320g、荷叶120g、菊苣120g、槐米120g、葛根170g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物A在实施例2的样品20190802基础上减去山楂这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物B(海参复合多糖蛋白粉330g、荷叶130g、菊苣130g、槐米130g、山楂130g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物B在实施例2的样品20190802基础上减去葛根这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物C(海参复合多糖蛋白粉320g、荷叶120g、菊苣120g、葛根170g、山楂120g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物C在实施例2的样品20190802基础上减去槐米这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物D(海参复合多糖蛋白粉320g、荷叶120g、槐米120g、葛根170g、山楂120g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物D在实施例2的样品20190802基础上减去菊苣这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物E(海参复合多糖蛋白粉320g、菊苣120g、槐米120g、葛根170g、山楂120g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物E在实施例2的样品20190802基础上减去荷叶这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物F(荷叶160g、菊苣160g、槐米160g、葛根210g、山楂160g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物F在实施例2的样品20190802基础上减去海参复合多糖蛋白粉这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D、E、F)以人体推荐量的5倍900mg/kg为剂量，给予时间为30天，必要时可延长至45天。

适应期：于屏障系统下大鼠喂饲维持饲料观察5-7天。

造模期：按体重随机分成2组，10只大鼠给予维持饲料作为空白对照组，40只给予模型饲料作为模型对照组。每周称量体重1次。模型对照组给予模型饲料1-2周后，空白对照组和模型对照组大鼠不禁食采血(眼内眦或尾部)，采血后尽快分离血清，测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。根据TC水平将模型对照组随机分成4组，分组后空白对照组和模型对照组比较TC、TG、LDL-C、HDL-C差异均无显著性。受试样品给予分组后，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D、E、F)每天经-口给予受试样品，空白对照组和模型对照组同时给予同体积的相应溶剂，空白对照组继续给予维持饲料，模型对照组及本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D、E、F)继续给予模型饲料，并定期称量体重，于实验结束时不禁食采血，采血后尽快分离血清，测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平。

体重摄食量的测定：饲养期间，隔日准确记录进食量，每周称量体重。

血清TC、TG、LDL-C的测定：按试剂盒要求的测定条件和程序测定；HDL-C按Friedewald公式计算，HDL-C＝TC-TG-LDL-C*0.456

同时计算动脉粥样硬化指数(AI)和抗动脉粥样硬化指数(AAI)：AI＝(TC-HDL-C)/HDL-C，AAI＝HDL-C/TC

结果见表2、表3。

表2各组大鼠平均摄食量及体重变化(x±s，n＝10)

注：与高脂模型组比较，*P＜0.05

结果表明，普通对照组，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组大鼠的体重与高脂模型组比较，各组在第4周时大鼠体重均低于高脂模型组，且与高脂模型组比较差异有显著性(P＞0.05)，普通对照组与用药组体重差异无显著性(P＞0.05)。各组摄食量差异无显著性(P＞0.05)，说明本发明样品组不影响小鼠的食欲及生长。

表3本发明样品对大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、AI和AAI的影响(x±s，n＝10)

注：

结果表明，高脂模型组大鼠TC和TG二项指标较普通对照组显著升高(P＜0.01)，说明大鼠高血脂模型的建立比较成功。本发明样品组血清TC、TG比高脂模型组明显降低(P＜0.01)，比普通对照组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D、E、F)高，但无显著性差异(P＞0.05)。HDL-C值显著高于高脂模型组(P＜0.05)，LDL-C值显著低于高脂模型组(P＜0.01)，而动脉粥样硬化指数(AI)也显著低于高脂模型组(P＜0.01)，抗动脉粥样硬化指数(AAI)显著高于高脂模型组(P＜0.01)。说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

2、人体实验

受试者纳入标准：在正常饮食情况下，检测禁食12-14小时后的血脂水平，半年内至少有两次血脂检测，血清总胆固醇在5.18-6.21mmol/L，并且血清甘油三酯在1.70-2.25mmol/L，可作为辅助降低血脂功能备选对象；血清甘油三酯在1.70-2.25mmol/L，并且血清总胆固醇≦6.21mmol/L，可作为辅助降低甘油三酯功能备选对象；血清总胆固醇在5.18-6.21mmol/L，并且血清甘油三酯≦2.25mmol/L，可作为辅助降低胆固醇功能备选对象，在参考动物实验结果基础上，选择相应指标者为受试对象。采用自身和组间两种对照设计。根据随机盲法的要求进行分组。按受试者血脂水平随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。试食组服用受试样品(本发明样品组20190801)，对照组可服用安慰剂或采用空白对照。试验周期45天，不超过6个月。功效性指标：血清总胆固醇(TC)水平及降低百分率、甘油三酯(TG)水平及降低百分率、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及上升幅度、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。功效判定标准

有效：TC降低>10％；TG降低>15％；HDL-C上升>0.104mmol/L。

无效：未达到有效标准者。

观察血清总胆固醇(TC)有效率、甘油三酯(TG)有效率、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)有效率及总有效率。

病例选取：共选取符合高血脂诊断标准的病例206例

疗效统计：无效14例，有效146例，显效46例

总有效率(有效和显效之和)为93.2％。

实施例9抗凝试验

1、实验材料

动物：100只SPF级健康SD实验大鼠，体质量(245.41±5.97)g，由南昌大学动科部提供，实验前适应性喂养，自由摄食、饮水，1周后用于实验造模。

仪器：手术器械：手术刀片、手术刀柄、持针器、有齿镊、血管钳、缝合丝线、眼科剪、眼科镊、显微剪、显微镊、手术拉勾、医用电钻、1mm克氏针、尺子，BrillianceiCTSP型DR摄片机，全自动凝血分析仪，AL104电子分析天平，医用低速离心机，YH-X-4A手术电子显微镜。

药物与试剂：

本发明样品组(20190801、20190802、20190803)；

海参复合多糖蛋白粉组；

对比组合物A(海参复合多糖蛋白粉320g、荷叶120g、菊苣120g、槐米120g、葛根170g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物A在实施例2的样品20190802基础上减去山楂这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物B(海参复合多糖蛋白粉330g、荷叶130g、菊苣130g、槐米130g、山楂130g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物B在实施例2的样品20190802基础上减去葛根这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物C(海参复合多糖蛋白粉320g、荷叶120g、菊苣120g、葛根170g、山楂120g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物C在实施例2的样品20190802基础上减去槐米这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物D(海参复合多糖蛋白粉320g、荷叶120g、槐米120g、葛根170g、山楂120g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物D在实施例2的样品20190802基础上减去菊苣这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物E(海参复合多糖蛋白粉320g、菊苣120g、槐米120g、葛根170g、山楂120g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物E在实施例2的样品20190802基础上减去荷叶这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物F(荷叶160g、菊苣160g、槐米160g、葛根210g、山楂160g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物E在实施例2的样品20190802基础上减去荷叶这一活性成分，制备方法与实施例2的20190802一致，组合物中活性成分的总含量与20190802组合物中活性成分的总含量一样)；

生理盐水；

低分子肝素钠注射液：1mL：2500抗Xa因子国际单位；

注射用青霉素钠：160万单位每支；戊巴比妥钠、双氧水、酒精、0.9％氯化钠。

2、实验方法

动物造模腹腔注射标准为0.2mL/100g的戊巴比妥钠对大鼠进行麻醉，取俯卧位，于大鼠右侧大转子下股骨干3cm处切1cm切口，逐层切开，暴露股骨中段，将1.0mm克氏针在此处钻3个小孔，止血钳细微扭转制造骨折，将1mm克氏针钻入骨髓腔，自股骨干断端逐步达近端，利用手持C臂机透视克氏针观察其位置是否合适，而后于股骨远端处将克氏针折弯1cm，置于皮下，伤口消毒后，缝合并用石膏固定，造模后第1、2天皮下注射青霉素钠预防感染。

造模后将110只大鼠随机分为实验组(100只)、对照组(10只)，实验组大鼠采用灌胃针从嘴角分别注射本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D、E、F)900mg/kg，2次/d，2mL/只，连续1周；对照组大鼠的颈后缘皮肤提起后，注射器沿纵轴方向剌入皮肤注射低分子肝素钠注射液，2次/d，1mL/只，连续1周。于造模后1d、3d、7d采用眼眶取血，监测凝血指标D-二聚体(D-D)、凝血酶原时间(PT)、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)水平。

统计学方法

数据录入采用Excel，数据分析采用SPSS21.0软件，P＜0.05表示差异有统计学意义，具有可比性，计数资料用百分比表示，采用х

3、结果

1)各组大鼠造模后D-二聚体水平比较

造模后第1天各组大鼠D-二聚体水平差异无统计学意义(P＞0.05)，造模后第3天D-二聚体水平升高，且造模后第7天D-二聚体水平显著降低，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D、E、F)组大鼠D-二聚体水平均明显低于对照组(P＜0.05)，并且本发明样品组降低最为显著。说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。见表1。

表1各组大鼠造模后D-二聚体水平比较(x±s，μg/mL)

2)各组大鼠造模后PT比较

造模后第1天各组大鼠PT差异无统计学意义(P＞0.05)，造模后第3天PT减少，且造模后第7天PT显著增加，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D、E、F)组PT均明显高于对照组(P＜0.05)，并且本发明样品组PT增加最为显著。说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。见表2。

表2各组大鼠造模后PT水平比较(x±s，s)

3)各组大鼠造模后AT-Ⅲ水平比较

造模后第1天各组大鼠AT-Ⅲ水平差异无统计学意义(P＞0.05)，造模后第3天AT-Ⅲ水平降低，且造模后第7天AT-Ⅲ水平显著升高，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D、E、F)组AT-Ⅲ水平均明显高于对照组(P＜0.05)，并且本发明样品组AT-Ⅲ升高最为显著。说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用见表3。

表3各组大鼠造模后AT-Ⅲ水平比较(x±s，μg/mL)

由本次实验数据可知，大鼠造模后第1天，D-二聚体水平异常高，凝血酶原时间异常短，抗凝血酶Ⅲ异常高，主要由于机体产生了应激反应，红细胞聚集，内皮细胞紧密排列，血流变缓，凝血因子活性增强，促进凝血。造模后3d，情况进一步加重，由于造模后，大鼠组织创伤处于修复状态，炎症因子释放增多，血管进一步收缩，血细胞进一步在组织内凝聚，大量附着在血管壁上，血栓的长度和体积扩大。造模7d后，抗凝药物的作用逐渐发挥，血栓溶解，静脉血流慢慢恢复。本发明样品抗凝效果明显，能够显著降低D-二聚体水平，延长凝血酶原时间，升高抗凝血酶Ⅲ水平，有效抑制静脉血栓及凝血。

上述研究结果充分体现出了本发明组合物的抗凝作用，同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

实施例10增强免疫-壮阳试验

A补肾试验

取110只雄性大鼠，体重为120～160g，用12.5％乌拉坦0.6mL/只注射使其麻醉，消毒阴囊皮肤，摘取双侧睾丸。术后肌注青霉素钠2万U/kg，共3d。3d后，将110只大鼠随机均分为10组，每组10只。

其中

模型组，每天给等容积的生理盐水，灌胃；

丙酸睾丸素组，每天2mg/kg皮下注射；

本发明样品组(20190901、20190902、20190903)；

海参复合多糖蛋白粉组；

对比组合物A(海参复合多糖蛋白粉368g、牡蛎粉366g、益智仁116、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物A在实施例3的样品20190902基础上减去黄精这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物B(海参复合多糖蛋白粉318g、牡蛎粉316g、黄精216g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物B在实施例3的样品20190902基础上减去益智仁这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物C(海参复合多糖蛋白粉400g、益智仁150g、黄精300g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物C在实施例3的样品20190902基础上减去牡蛎粉这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物D(牡蛎粉400g、益智仁150g、黄精300g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物D在实施例3的样品20190902基础上减去海参复合多糖蛋白粉这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

每天分别给予0.27g/kg灌胃给药；

另取同批大鼠10只不做任何处理作为对照组，每天给等容积的生理盐水灌胃。各组连续30d灌胃后，末次给药后24h，分别处死并解剖各组大鼠，立即称取精囊腺、包皮腺和前列腺、提肛肌质量，计算脏器系数，结果见表1。

表1对肾虚型大鼠生殖器官脏器系数的影响(

注：与正常组比较，

表1结果显示：与正常组对比，模型组大鼠各生殖器官脏器系数均具有极显著的差异性(P＜0.001)，表明造模方法取得成功；与模型组对比，本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D)和阳性丙酸睾丸素组的试验用大鼠，其各个生殖器官的脏器系数均达到了明显的疗效差异(P＜0.001)，并且本发明组疗效最为显著；表明本发明样品组，均能够对试验中模型大鼠具有显著的治疗效果，说明各试验组均具有较强的补肾、强肾的治疗作用，同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

B壮阳试验

本试验的造模、分组及其给药方式同上述“1补肾试验”中的方法，将各组试验用大鼠连续给药30d，于末次给药后1h后，将电刺激器的刺激电极放置于大鼠阴茎部位，给予表面部电刺激，其中电流强度4mA，周期50ms，脉宽1ms。记录从刺激开始至阴茎勃起时间(勃起潜伏期)和阴茎勃起持续时间，结果见表2。

表2对肾虚型大鼠阴茎勃起功能的影响(

注：与正常组比较，

表2结果显示：模型造模是成功的，补阳试验启示：本发明样品组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物组(A、B、C、D)对于阴茎勃起功能具有明显的治疗作用，并且本发明样品组治疗作用最为显著。说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

上述研究结果充分体现出了本发明组合物的补肾壮阳作用，同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

实施例11增强免疫试验

所述试验包括体重、脏器/体重比值、足跖厚度(细胞免疫功能试验)、淋巴细胞的增值能力(细胞免疫功能试验)、抗体生成细胞数(体液免疫功能试验)、半数溶血值(HC50)(体液免疫功能试验)、碳廓清指数(单核-巨噬细胞功能试验)、吞噬细胞的吞噬率和吞噬指数(单核-巨噬细胞功能)、NK细胞活性(NK细胞活性试验)。

以下研究依据《保健食品检验与评价技术规范(2003版)》内容进行试验。

其中，试验样品、动物、药物与试剂、仪器、剂量设置、实验动物与给药等如下：

1、本发明样品人体口服推荐摄入量为每日三次，每次三粒/片，每粒/片0.5g(体重按60kg计)，4.5g/60kg·BW，取片剂内容物进行试验。

海参复合多糖蛋白粉人体口服推荐摄入量为每日三次，每次0.15g(体重按60kg计)，1.35g/60kg·BW。

对比组合物A(海参复合多糖蛋白粉368g、牡蛎粉366g、益智仁116、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物A在实施例3的样品20190902基础上减去黄精这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物B(海参复合多糖蛋白粉318g、牡蛎粉316g、黄精216g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物B在实施例3的样品20190902基础上减去益智仁这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物C(海参复合多糖蛋白粉400g、益智仁150g、黄精300g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物C在实施例3的样品20190902基础上减去牡蛎粉这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物D(牡蛎粉400g、益智仁150g、黄精300g、木糖醇(或水苏糖)50g、低聚果糖50g、麦芽糊精40g、硬脂酸镁10g，对比组合物D在实施例3的样品20190902基础上减去海参复合多糖蛋白粉这一活性成分，制备方法与实施例3的样品20190902一致，组合物中活性成分的总含量与20190902组合物中活性成分的总含量一样)；

对比组合物(A、B、C、D)人体口服推荐摄入量为每日三次，每次三粒/片，每粒/片0.5g(体重按60kg计)，4.5g/60kg·BW，取片剂内容物进行试验。

2、动物昆明种小鼠，清洁级，全雌，体重18～22g

3、药物与试剂

ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验(MTT法)：RPMIl640培养液、小牛血清、2-ME、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、盐酸、异丙醇、MTT、Hank’s液(pH7.2-7.4)

迟发型变态反应(绵羊红细胞SRBC诱导小鼠DTH：足趾增厚法)：绵羊红细胞(SRBC)抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)：Hank’s液、绵羊红细胞(SRBC)、补体(豚鼠血清)、SA缓冲液、琼脂糖、RPMIl640培养液。

血清溶血素的测定(半数溶血值的测定HC50法)：绵羊红细胞(SRBC)、SA缓冲液、都氏试剂(碳酸氢钠1.0g，高铁氰化钾0.2g，氰化钾0.05g，加蒸馏水至1000mL)

碳廓清指数(单核-巨噬细胞功能试验)：印度墨汁、0.1％Na

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验：甲醇、丙酮、鸡红细胞、生理盐水、Giemsa染液NK细胞活性测定：RPMIl640培养液、、YAC-1细胞、乳酸锂、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸盐、氧化型辅酶I、0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液(pH8.2)、1％NP40

4、仪器

ES-2100A电子天平、BS223S电子天平、755分光光度计、酶标仪、二氧化碳培养箱、低速离心机、恒温水浴、显微镜、倒置显微镜、螺旋测微仪、洁净工作台、无菌手术器械、微量注射器(25μL)、细胞计数器、24孔和96孔平底细胞培养板、96孔U型细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸管、载玻片等。

5、剂量设置

剂量设置原则：本保健食品推荐剂量为成人(按60kg体重计)，人拟用剂量为4.5g/60kg·BW·日。实验设人体推荐量的5倍，即本发明样品组(20190901、20190902)每日0.375g/kg·BW，配制浓度分别为0.375，海参复合多糖蛋白粉组浓度0.375g/kg·BW，对比组合物(A、B、C、D)组浓度0.375g/kg·BW，另设蒸馏水为阴性对照组。

6、实验动物与给药

将360只昆明种小鼠随机分成9批，每批随机分为4组，每组10只。

(1)免疫Ⅰ组进行迟发型变态反应实验、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数的测定；

(2)免疫Ⅱ组进行碳廓清实验；

(3)免疫Ⅲ组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；

(4)免疫Ⅳ组进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。每日经口服饮用给予各实验组保健食品一次，空白组给予蒸馏水，连续饲喂30天。

7、判断标准

《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)规定：在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面任两个方面结果阳性，可判定该受试样品具有增强免疫力功能作用。其中细胞免疫功能测定项目中的两个实验，即小鼠脾淋巴细胞转化实验、迟发型变态反应实验，结果均为阳性，或任一实验的两个组结果阳性，可判定细胞免疫功能测定结果阳性。体液免疫功能测定项目中的两个实验，即抗体生成细胞检测、血清溶血素测定，结果均为阳性，或任一实验的两个组结果阳性，可判定体液免疫功能测定结果阳性。单核-巨噬细胞功能测定项目中的两个实验，即小鼠碳廓清实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验，结果均为阳性，或任一实验的两个组结果阳性，可判定单核-巨噬细胞功能结果阳性。NK细胞活性测定实验的一个以上组结果阳性，可判定NK细胞活性结果阳性。

8、数据处理

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性，F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

9、具体实验数据如下表2至13所示

表2对免疫Ⅰ组小鼠体重的影响

表3对免疫II组小鼠体重的影响

表4对免疫III组小鼠体重的影响

表5对免疫IV组小鼠体重的影响

由表2～5可见，本发明各组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组实验初期、实验中期、实验末期小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与空白对照组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组比较，差异均无显著性(P＞0.05)，即本发明样品对小鼠体重无不良影响，安全性高。

表6对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

由表6可见，经口给予小鼠不同剂量的本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值均无显著影响(P＞0.05)。

表7小鼠淋巴细胞转化能力试验结果

从表7中可以看出，经口给予小鼠不同剂量的本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，各组小鼠淋巴细胞转化能力与对照组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组比较，均无显著影响(P＞0.05)。

表8小鼠迟发型变态反应(DTH)试验结果

由表8可知，经口给予小鼠本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，本发明样品组足跖肿胀度明显高于对照组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组(P＜0.05)。同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表9小鼠抗体生成细胞检测结果

由表9可知，经口给予小鼠本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，本发明样品组小鼠抗体生成细胞数明显高于空白组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组，差异具有显著性(P＜0.05)。同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表10小鼠半数溶血值(HC50)试验结果

由表10可见，经口给予小鼠本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，本发明样品组小鼠半数血值与对照组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组比较，差异有显著性(P＜0.05)。同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表11小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力试验结果

由表11可见，经口给予小鼠本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，本发明样品组小鼠吞噬指数显著高于空白组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组，差异有显著性(P＜0.05)。同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

表12小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数试验结果

由表12可见，经口给予小鼠本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，各剂量本发明样品组与空白组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组比较，无显著性差异(P＞0.05)。即本发明样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无明显影响。

表13小鼠NK细胞活性试验结果

由表13可见，经口给予小鼠本发明样品、海参复合多糖蛋白粉、对比组合物(A、B、C、D)30天，本发明样品组对小鼠NK细胞活性与空白组、海参复合多糖蛋白粉组、对比组合物(A、B、C、D)组比较，有显著性差异(P<0.05)。同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

综上所述，通过本发明的组分配方及制备方法制得的组合物在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能、NK细胞活性四个方面中细胞免疫和体液免疫两个方面结果为阳性，并且优于海参复合多糖蛋白粉和对比组合物(A、B、C、D)，可判定其具有增强免疫力功能，同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

结论：口服本发明的组合物具有增强免疫力功能且安全、方便等优点。同时说明本发明样品组合物组方精良，各药味缺一不可，这些药味组合在一起具有明显的协同增效作用。

实施例12海参复方组合物的急性毒理实验

预实验：按急性毒理实验方法，选用昆明小鼠50只，禁食、不禁水12h。把实施例1(批号：20190601)中提取物配制成最大浓度的混悬液，含生药3.678g/mL(以不堵塞灌胃器为限度)。每只小鼠每次灌胃约为1.1mL/20g(体重)，24h内灌胃3次，间隔4h。然后按常规饲养，并观察小鼠的毒性反应情况(外观、活动、呼吸、分泌物、排便、死亡等)，且连续称重7天。因以最大给药浓度、最大给药容量，均未测出半数致死量(LD

最大给药量实验：在预试验的基础上，采用最大给药量法，选用昆明种小白鼠50只，雌雄各半，体重(20±2)g。给药前均禁食、不禁水12h。并按预实验方法配药，以每只小鼠给予最大生药浓度4.536g/mL，最大体积1.1mL/20g的药液灌胃，以观察14天内小鼠的外观、饮食、活动、排泄、死亡等情况。14天后以颈椎脱臼法处死小鼠，解剖后观察其重要脏器(心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等)的变化。

1)一般表现

给药后14天内，实验组小鼠均饮食正常，皮毛光滑，活动自如，大小便正常，无异常分泌物，其呼吸系统、心血管系统、神经系统、消化系统与泌尿系统均未见异常，小鼠全部存活。

2)体重变化情况

给药后14天内，2组小鼠体重均增加，通过分析给药后7天、14天2个时间内中药组与对照组的体重变化，发现2组体重无显著性差异(P＞0.05)。

3)主要脏器观察

2组小鼠经大体解剖并通过肉眼观察，未见脏器肿大、萎缩、坏死等异常现象，主要脏器均无任何不良病变，与空白对照组相近。说明实施例1(批号：20190601)中组合物无毒。以实施例1其他批号和实施例2-3的所有批号的提取物为样品，重复上述实验，发现所有样品均无毒。

综上所述，提示本药无毒，其临床用药量是一个安全的剂量，临床用药安全。