药物组合物及其医疗用途

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种配伍药物的医疗用途。

背景技术

主动脉夹层(Aortic Dissection AD)是心血管学科中最凶险的疾病。其多由主动脉中层病变导致内膜破裂，并继续扩大分离,致使分离的内膜将主动脉腔分隔成真腔和假腔而形成。国外的统计数据显示，AD发病率为5-10/10万,病死率1.5/10万，21％的AD患者在入院前死亡，68.2％的住院AD患者在入院48h内即死亡。

目前AD发病的细胞分子机制尚未明确。传统观念认为AD主要是由于患者长期高血压，导致血流动力学改变，增加了血管壁的应力，致使血管壁内弹性纤维和胶原纤维形态和比例发生改变，增加了主动脉壁内膜撕裂的几率。到目前为止尚没有有效的治疗AD的药物，医生的处理方法仅限于镇痛和控制心率和血压两个方面，具体而言，通过肌注或静脉注射阿片类药物例如吗啡、哌替啶等进行镇痛，用静脉注射β受体阻滞剂(例如美托洛尔、艾司洛尔等)与硝普钠联用进行血压和心率调控。

近年研究发现，炎症在AD的发病过程中扮演着重要角色。Ju等在应用血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导AD实验中，发现白细胞介素(IL)-6缺乏组小鼠AD发生率低于正常组小鼠。IL-6是重要的促炎因子，可以诱导下游一系列的级联反应扩大炎症，提示AD形成的过程也是一个炎症发展的过程。朱晓峰等(中华老年心脑血管病杂志2019年9月，第21卷第9期，pp967-970)报道了消退素D1在小鼠主动脉夹层中的作用和机理研究，得出消退素可以降低主动脉夹层发生率的结论。但是从动物试验看，该受试药物对AD的治疗有效率有待提高。

脂氧素(lipoxin,LX)是来源于花生四烯酸、经脂氧合酶催化合成的一类生物活性物质。在哺乳动物中，其主要包括脂氧素A4(LXA4)和脂氧素B4(LXB4)。研究表明，在炎症过程中，LX能够抑制白细胞向炎症部位的趋化并促进巨噬细胞吞噬局部凋亡的粒细胞及其他损伤细胞,从而抑制炎症的进程，促进炎症的消退。由于其在炎性疾病中所发挥的独特的抗炎和促进炎症消退的功能而被关注。但是，到目前为止，还没有将脂氧素用于治疗AD的报道。

发明内容

本发明的目的是提出一种有效治疗主动脉夹层的药物。由此提出一种复合药剂，其同时包含消退素和脂氧素作为治疗成分，取得了很好的治疗效果。

根据本发明，消退素和脂氧素的质量比为1:0.5-1.3，优选1:0.7-1.0。在一种实施方式中，消退素和脂氧素用A、B包分开包装。在其他的方式中，它们被制备成混合制剂。

本发明的药物为通过静脉注射给药、注射到组织给药、腹膜内给药、口服给药、或鼻内给药的形式。

在本发明的典型实施例中，注射液被制备成PBS注射液。

本发明中，脂氧素A4(LXA4)、消退素被配制在药学上可接受的载体中。所述药学上可接受的载体选自由口腔冲洗液、口香槽，食品添加剂、糖果绽剂、片剂、可咀嚼的胶囊、口腔传递装置和被包覆在生物或者合成来源的可吸收的载体纳米颗粒所组成的组中。

本发明首次提出将消退素和脂氧素结合，专门治疗主动脉夹层。动物试验显示可以对主动脉夹层患者带来根本性治疗。

附图说明

图1是各组小鼠死亡率率统计图。

图2是小鼠主动脉超声影像分析图。

图3是各组小鼠主动脉血管21d组HE染色结果的照片。

图4是各组小鼠主动脉血管21d组Masson染色结果的照片。

图5是各组小鼠主动脉血管21d组EVG染色结果的照片。

图6A至图6E显示出各组小鼠5天、14天和21天时各类细胞因子的表达结果。

具体实施方式

本发明中，以消退素和脂氧素为活性成分联合治疗主动脉夹层，通过动物试验显示出特别优势的效果。

本发明中的消退素包括源自ω3-二十碳五烯酸(EPA)的E类消退素(RvE1和RvE2)、源自ω3-二十二碳六烯酸(DHA)的D类消退素(RvD1、RvD2、RvD3、RvD4)和阿司匹林触发消退素(AT-RevD1、AT-RevD2、AT-RevD3、AT-RevD4)等类型。本发明中的脂氧素是指LXA4。

在典型实施例中，消退素使用的是RvD1。消退素和脂氧素的质量比控制在1:0.5-1.3范围内，例如1:0.5-1.0的范围。优选的比例是1:0.7-1.0。

本发明的药物可以在一起混合包装，也可以分开包装。典型的实施方式是分开包装。

本发明的药物(本文中，药物是指消退素和脂氧素的联合)可以药物组合物的形式使用，其中包含治疗有效量的本文所限定的本发明化合物和可药用载体、赋形剂或稀释剂。

可药用载体选自由口腔冲洗液、口香槽，食品添加剂、糖果绽剂、片剂、可咀嚼的胶囊、口腔传递装置和被包覆在生物或者合成来源的可吸收的载体纳米颗粒所组成的组中。

可以调整根据本发明的药物组合物的剂型，以适于用多种给药途径向需要治疗的患者例如哺乳动物如人患者给药，例如口服给药、鼻内给药、腹膜内给药、或非消化道给药、通过静脉内、肌内、局部或皮下路径给药、或通过注射入组织给药。这种组合物和制剂应该包含至少0.1％的消退素和脂氧素合剂。组合物和制剂的百分数当然可以变化，例如是给定单元剂型的约0.5％至约10％重量。

本发明的药物可全身给药，如口服、与可药用载体如惰性稀释剂或可同化的食用载体组合、或通过吸入或吹入。它们可被包封在硬或软壳胶囊中、可被压成片剂、或可与病人食用的食品直接混合。对于口服治疗给药，本发明的药物可与一种或多种赋形剂组合和以可摄取的片剂、口含片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、干胶片(wafer))等的形式使用。药物可与细的惰性粉状载体组合和由患者吸入或吹入。这种组合物和制剂应该包含至少0.1％的一种或多种本发明药物。

片剂、锭剂、丸剂、胶囊等也可包含:粘合剂如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂如磷酸二钙；崩解剂如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂如硬脂酸镁；和甜味剂如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦，或可加入芳香剂如薄荷、冬青油或樱桃调味剂。当单元剂型是胶囊时，除了以上类型的材料，它还可包含液体载体如植物油或聚乙二醇。各种其它材料可存在作为涂层或以其它方式改变固体单元剂型的外形(physical form)。例如，片剂、丸剂或胶囊可涂有明胶、蜡、虫胶、糖等。糖浆或酏剂可包含活性化合物、作为甜味剂的蔗糖或果糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料、和调味剂如樱桃或橙子调味剂。当然，用于制备任何单元剂型的任何材料在用量上应该是可药用的和实质上无毒的。另外，本发明药物可引入持续释放制剂和设备。例如，药物可引入延时释放(timerelease)胶囊、延时释放片剂和延时释放丸剂。

本发明药物也可通过输注或注射而静脉内或腹膜内给药。药物的溶液可在水中制备，任选地与非毒性表面活性剂混合。适用于注射或输注的药物剂型可包括无菌水溶液或分散体或无菌粉末。液体载体可以是溶剂或液体介质，包括例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、非毒性甘油酯、和其合适的混合物。在使用水的情况下，通常配制成PBS缓冲体系。

本发明药物用于治疗所需的量不仅随着所选的特定盐变化，而且随着给药路径、正在治疗的病况的性质以及病人的年龄和病况而变化，且最终由主治医师或临床医师决定。

本发明药物给药的有效剂量和路径是常规的。试剂的精确量(有效剂量)因患者不同而变化，取决于例如患者的种类、年龄、重量和一般或临床状态、正在治疗的任何病症的严重性或机理、所用的特定试剂或载体、给药的方法和进度等。治疗有效剂量可通过本领域技术人员已知的常规程序经验地确定。

一般来说，本发明药物合适的剂量可以是约10至约200μg/kg/天，如约10至约100μg/kg体重/天，如约20至约80μg/千克受者体重/天。

本发明药物便利地以单元剂型给药；例如，每单元剂型包含约0.0005至约500mg、约0.01至约50mg、约0.05至约10mg、或约5mg活性成分。

可给药本发明药物以实现例如约0.5至约75μM、约1至50μM、约2至约30μM、或约5至约25μM的血浆浓度峰值。示例性的期望血浆浓度包括至少或不超过0.25、0.5、1、5、10、25、50、75、100或200μM。这可例如通过以下实现:静脉注射本发明药物的0.05-5％溶液(任选地在盐水中)，或以包含约1-1000mg该药物的大丸剂口服给药。期望的血液水平可通过连续输注以提供约0.0005至约25mg/kg体重/小时，例如至少或不超过0.0005、0.005、0.05、0.5、5或25mg/kg/小时而保持。或者，这种水平可通过包含约0.002至约100mg/kg体重，例如至少或不超过0.002、0.02、0.2、2、20、50或100mg药物/kg体重的间歇输注而得到。

下面描述本发明药物的动物试验测试结果。

试验材料和制剂:

12周龄野生型(wild-type WT)雄性C57BL/6小鼠，由北京华阜康有限公司卫生研究所动物实验中心提供；脂氧素(溶于PBS稀释剂中，浓度10ug/ml)由Cayman(美国)提供；消退素(溶于PBS稀释剂中，浓度10ug/ml)由Cayman(美国)提供。BAPN水溶液Sigma(美国)提供。

12周龄的野生型(wild-type WT)雄性C57BL/6小鼠136只，予以正常饮食。随机分为4组，AD组32只、AD+RVD1组32只、AD+LXsA4组32只、AD+药物合剂组32只、空白对照组8只。予以小鼠皮下埋置微量泵(ALZET osmotic minipump)，持续泵入AngⅡ1ug/kg/min，同时予以BAPN水溶液，AngⅡ+RVD1组同时经阴茎静脉注射RVD150ug/kg/日，AngⅡ+LXsA4组同时经阴茎静脉注射LXsA450ug/kg/日，AD+药物合剂组同时经阴茎静脉注射RVD140ug/kg/日和+LXs A430ug/kg/日。分别于7、14和21天处死AngⅡ组和AngⅡ+RVD1组小鼠各8只,空白组小鼠2只。

应用尾袖法(Tail-cuff Method)进行血压测定。分别在实验前、药物干预2天和处死前测量，每只大鼠测三次，求平均值。记录小鼠分别于7、14和21天死亡率。

处死小鼠，自主动脉根部截取主动脉，至肾动脉分岔处为止，去除主动脉弓分支。留取病变主动脉(对照组或AngⅡ+RVD1组取相同部位主动脉)，组织学切片分别行苏木素-伊红(hematoxylin and eosin HE)染色、Masson三染、EVG(Elastica van Gieson)染色，应用病理图像分析软件(MacSCOPE)计算主动脉的绝对直径，观察对比不同组别的胶原纤维和弹性纤维的破损。

取全主动脉标本研磨，并裂解细胞，酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、MIP-α、KC、MMP-2、MMP-9的含量，应用反转录聚合酶链反应(Real-time PCR)检测以上炎症标志物的转录活性。

图1是各组小鼠死亡率率统计图。图中显示，随着喂养时间的延长，各组小鼠主动脉夹层发生率随之增加，各组夹层小鼠存活率均逐渐减少。其中在21d组中，模型组夹层死亡率为50％，RvD1组为35.71％，LXsA4组为31.25％，药物合剂组为14.29％，各组比较有统计学意义(P<0.05)。可见，将两种药物联用，对主动脉夹层发生、发展的阻止效应现在优于单独给药。

在小鼠深度麻醉之后，胸腹部去毛，使用动物超声测量小鼠升主动脉血管直径，在测量过程中务必轻柔小心，仔细辨认小鼠升主动脉位置，从而进行准确的测量。动物超声结果如下：21d对照组小鼠升主动脉血管直径平均为0.873±0.064mm；模型组的平均为1.309±0.113mm；RvD1组的平均为1.120±0.162mm；LXsA4组的平均为1.135±0.152mm；药物合剂组的平均为1.033±0.1065mm。药物合剂组改善最为明显。图2是小鼠主动脉超声影像分析图。

HE染色：随着实验进展，LXsA4+RVD1组、RVD1组和模型组炎症细胞浸润程度均随时间推移而加重。21天模型组主动脉壁结构破坏明显，可见大量胶原纤维以及弹性蛋白崩解，可见炎症细胞浸润。RVD1组、LXsA4组血管壁破坏程度和炎性细胞浸润较对照组轻，LXsA4+RVD1组病理改变最轻。图3是各组小鼠主动脉血管21d组HE染色结果的照片，各图分别是(A)空白组、(B)模型组、(C)RvD1组、(D)LxsA4组、(E)药物合剂组。

Masson染色：随着实验进展，LXsA4+RVD1组、RvD1组和模型组中胶原蛋白和肌纤维均可见到不同程度的破坏，但模型组血管壁结构改变更为严重。21天模型组主动脉壁结构可见大量胶原纤维以及弹性蛋白崩解,LXsA4+RVD1组较RvD1组和模型组病变较轻。图4是各组小鼠主动脉血管21d组Masson染色结果的照片，它们分别是(A)空白组、(B)模型组、(C)RvD1组、(D)LxsA4组、(E)药物合剂组

EVG染色：EVG中的特殊染料可将弹性纤维染成黑色，另外还可以使胶原纤维染成红色。本实验EVG染色结果显示，21d组，RVD1组、LXsA4组可见主动脉弹性纤维和胶原蛋白少量崩解，主动脉结构比较清晰，模型组可见主动脉内膜撕裂，弹性纤维断裂，LXsA4+RVD1组较RvD1组和模型组病变显著变轻。图5是各组小鼠主动脉血管21d组EVG染色结果的照片，它们分别是(A)空白组、(B)模型组、(C)RvD1组、(D)LxsA4组、(E)药物合剂组。

IL-6、TNF-α是最为常见的炎症细胞因子之一，在炎症反应中有较高的灵敏性；MMP-2、MMP-9提示主动脉壁可能发生严重的破坏；MCP-1是单核细胞趋化和激活因子，在单核细胞的募集和活化起着关键作用。在炎症细胞浸润的早期和中期和后期，可见模型组各类细胞因子较RVD1组、LXsA4组和药物合剂组表达水平显著增高。提示对照组主动脉壁可能发生严重的炎症反应，造成血管壁破坏，胶原纤维分解，巨噬细胞等炎症细胞向病变部位聚集。而药物合剂组较对照组、RVD1组、LXsA4组各类细胞因子分泌较少，提示病变最轻(P＜0.05)。图6A至图6E显示出各组小鼠5天、14天和21天时各类细胞因子的表达结果。

通过上述实验，我们得出结论，联合应用消退素和脂氧素在主动脉损伤早期可明显延缓主动脉扩张和破裂，抑制巨噬细胞和中性粒细胞的浸润；可显著下调血清IL-6、MIP-1α、MMP-2和MMP-9的表达水平，可显著降低组织IL-6和TNF-a的分泌量，减少主动脉细胞外基质的降解，明显改善主动脉血管重构，抑制主动脉夹层炎症反应。这些结果也提示消退素和脂氧素作为一种内源性消退炎症介质联合用药方案，具有应用于临床的潜在价值。