一种中药口服液体制剂中多种防腐剂的快速检测方法

技术领域

本发明涉及一种防腐剂检测方法，特别是涉及一种中药口服液体制剂中多种防腐剂的快速检测方法。

背景技术

中药口服液体制剂在自然状态下很容易发霉而导致不能使用，一般会在制剂中添加防腐剂以延长中药制剂的有效期。

防腐剂选择不当，不但会直接影响到防腐效果，还容易影响中药口服液体制剂的质量和疗效。为了最大限度的延长中药口服液体制剂的有效期，生厂商有时会添加过量的防腐剂或者添加多种防腐剂，过多的防腐剂容易对饮用者造成进一步损伤，因此，检测中药口服液体制剂中防腐剂(主要是苯甲酸钠、山梨酸钾和羟苯乙酯)的含量和种类是中药口服液体制剂质检的重点，传统防腐剂含量的检测方式为防腐剂分别检测，不但检测效率低，且检测误差大。

因此本领域技术人员致力于开发一种中药口服液体制剂中多种防腐剂的快速检测方法，实现多种防腐剂的快速检测，且检测精度较高。

发明内容

有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种中药口服液体制剂中多种防腐剂的快速检测方法，实现多种防腐剂快速检测，且检测精度较高。

为实现上述目的，本发明提供了一种中药口服液体制剂中多种防腐剂的快速检测方法，包括以下步骤：

1)分别称取苯甲酸钠、山梨酸钾和羟苯乙酯，以浓度为50％的甲醇为溶剂制成每1ml含有苯甲酸钠0.2mg、山梨酸钾0.04mg、羟苯乙酯0.04mg的混合对照品溶液；

2)精密量取中药口服液体制剂2ml，加甲醇稀释，定容至10ml，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液；

3)吸取相同体积的混合对照品溶液和续滤液，分别注入超高液相色谱仪中进行测定，根据续滤液与混合对照品溶液相同保留时间色谱峰的DAD光谱图进行比对，判定防腐剂种类；

4)测定混合对照品溶液和续滤液的相同保留时间色谱峰的峰面积，根据混合对照品溶液和续滤液的色谱峰的峰面积比值，计算防腐剂的含量。

进一步的，步骤2)中，甲醇的浓度为50％。

进一步的，步骤2)中，中药口服液体过滤前，还包括中药口服液体离心，离心转速为6000r/min，离心时间为5min，并吸取中药口服液体上清液。

进一步的，步骤3)中，根据续滤液与混合对照品溶液相同保留时间色谱峰的DAD光谱图进行比对，以两者的DAD光谱图相似度为判断依据，相似度越高者，即为相同种类的防腐剂。

进一步的，步骤3)中，所述超高液相色谱仪的超高液相色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱内径2.1mm，甲醇和0.025mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相，并用磷酸调pH至3.7，检测波长为200nm～400nm，定量检测波长240nm，流速为0.2ml/min～0.4ml/min，柱温为30℃～40℃，流动相梯度及平衡时间为0min～5min时，甲醇溶液的体积分数为35％，磷酸二氢钠溶液的体积分数为65％，流动相梯度及平衡时间为5min～10min时，甲醇溶液的体积分数由35％逐渐过渡到80％，磷酸二氢钠溶液的体积分数为由65％逐渐过渡到20％。

本发明的有益效果是：本发明先对中药口服液体制剂进行提纯除杂处理，随后与防腐剂对照品溶液通过超高效液相色谱测定的色谱图和DAD光谱图来判定防腐剂的种类和含量，能同时测定多种防腐剂的含量，检测项和专属性均无差异，检测效率高、准确较高，且能适用于不同的中药口服液体制剂。

附图说明

图1是本发明具体实施方式一中混合对照品溶液的超高液相液相色谱图

图2是图1中苯甲酸钠对照品溶液的超高液相液相DAD光谱图。

图3是图1中山梨酸钾对照品溶液的超高液相液相DAD光谱图。

图4是图1中羟苯乙酯对照品溶液的超高液相液相DAD光谱图。

图5是本发明具体实施方式一中第1批次麦味地黄口服液超高液相液相色谱图。

图6是图5中第1批次麦味地黄口服液超高液相液相DAD光谱图。

图7是本发明具体实施方式一中第2批次麦味地黄口服液超高液相液相色谱图。

图8是图7中第2批次麦味地黄口服液超高液相液相DAD光谱图。

图9是本发明具体实施方式一中第3批次麦味地黄口服液超高液相液相色谱图。

图10是图9中第3批次麦味地黄口服液超高液相液相第一次出峰DAD光谱图。

图11是图7中第2批次麦味地黄口服液超高液相液相第二次出峰DAD光谱图。

具体实施方式

一种中药口服液体制剂中多种防腐剂的快速检测方法，包括以下步骤：

1)分别称取苯甲酸钠、山梨酸钾和羟苯乙酯，以浓度为50％的甲醇为溶剂制成每1ml含有苯甲酸钠0.2mg、山梨酸钾0.04mg、羟苯乙酯0.04mg的混合对照品溶液。

2)精密量取中药口服液体制剂2ml，加甲醇稀释，甲醇的浓度为50％，定容至10ml，摇匀、离心。离心转速为6000r/min，离心时间为5min，并吸取中药口服液体上清液，再用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液。

3)吸取相同体积的混合对照品溶液和续滤液，分别注入超高液相色谱仪中进行测定，超高液相色谱仪的超高液相色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱内径2.1mm，甲醇和0.025mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相，并用磷酸调pH至3.7，检测波长为200nm～400nm，定量检测波长240nm，流速为0.2ml/min～0.4ml/min，柱温为30℃～40℃，流动相梯度及平衡时间为0min～5min时，甲醇溶液的体积分数为35％，磷酸二氢钠溶液的体积分数为65％；

流动相梯度及平衡时间为5min～10min时，甲醇溶液的体积分数由35％逐渐过渡到80％，磷酸二氢钠溶液的体积分数为由65％逐渐过渡到20％。

4)根据续滤液与混合对照品溶液相同保留时间色谱峰的DAD光谱图进行比对，以两者的DAD光谱图相似度为判断依据，相似度越高者，即为相同种类的防腐剂。

5)测定混合对照品溶液和续滤液的相同保留时间色谱峰的峰面积，根据混合对照品溶液和续滤液的色谱峰的峰面积比值，计算防腐剂的含量。

实施例一：

以某厂家生产的3个不同批次的麦味地黄口服液为供试品溶液，测定溶液中苯甲酸钠、山梨酸钾和羟苯乙酯的含量，包括以下步骤:

1)分别称取苯甲酸钠(纯度99.9％，批号为LC25650V，SUPELCO提供)、山梨酸钾(纯度99.7％，批号为101075-201602，中国食品药品检定研究院提供)和羟苯乙酯(纯度99.9％，批号为100847-201604，中国食品药品检定研究院提供)对照品，以50％甲醇为溶剂制成每1ml均含有苯甲酸钠0.2mg、山梨酸钾0.04mg、羟苯乙酯0.04mg的混合对照品溶液。

2)精密量取麦味地黄口服液2ml，加甲醇稀释，定容至10ml，摇匀、离心，离心机的转速6000r/min，离心时间5min，取上清液。用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液续滤液。

分别精密吸取混合对照品溶液与续滤液各1μl，注入超高液相色谱仪后测定，超高液相色谱仪可采用Waters ACQUITY超高效液相色谱仪，并配有ACQUITY

流动相梯度及平衡时间为0min～5min时，甲醇溶液的体积分数为35％，磷酸二氢钠溶液的体积分数为65％，流动相梯度及平衡时间为5min～10min时，甲醇溶液的体积分数由35％逐渐过渡到80％，磷酸二氢钠溶液的体积分数为由65％逐渐过渡到20％。

如图1所示，为超高液相色谱仪测定的防腐剂混合对照品色谱图，图5、图7和图9分别表示3个批次的的麦味地黄口服液超高液相液相色谱图，均以相对保留时间为横坐标，吸收值强度为纵坐标，图2、图3、图4、图6、图8、图10、图11为色谱峰的DAD色谱图，均以检测波长为横坐标，吸收值强度为纵坐标。

将第1批次测定的麦味地黄口服液防腐剂的色谱图(图5)与混合对照品溶液(图1)的色谱对比，图5中出峰时间(2.602min)与图1的第一个出峰时间(2.584min)接近，并结合相应色谱峰的DAD光谱图(图6)的波峰(227.9nm)与图2的波峰(227.9nm)可知，批号1麦味地黄口服液添加的防腐剂为苯甲酸钠。

根据超高液相色谱仪测定的混合对照溶液和供试品色谱图峰面积(图1中第一次出峰峰面积与图5中的峰面积)对比，混合对照溶液和供试品色谱图峰面积均由超高液相色谱仪自动积分求得，依据计算公式

将第2批次测定的麦味地黄口服液防腐剂的色谱图(图7)与混合对照品溶液(图1)的色谱对比，图7中出峰时间(3.196min)与图1的第二个出峰时间(3.194min)接近，并结合相应色谱峰的DAD光谱图(图8)的波峰(261.0nm)与图3的波峰(261.0nm)可知，批号2麦味地黄口服液添加的防腐剂为山梨酸钾。

根据超高液相色谱仪测定的混合对照溶液和供试品色谱图峰面积(图1中第二次出峰峰面积与图7中的峰面积)对比，混合对照溶液和供试品色谱图峰面积均由超高液相色谱仪自动积分求得，依据计算公式

将第3批次测定的麦味地黄口服液防腐剂的色谱图(图9)与混合对照品溶液(图1)的色谱对比，图9中出峰时间(2.603min和7.303min)分别与图1的第一个出峰时间(2.584min)和第三个出峰时间(7.250min)接近，并分别结合相应色谱峰的DAD光谱图(图10)的波峰(227.9nm)与图2的波峰(227.9nm),色谱峰的DAD光谱图(图11)的波峰(256.3nm)与图4的波峰(256.3nm)可知，批号3麦味地黄口服液添加的防腐剂为苯甲酸钠和羟苯乙酯。

根据超高液相色谱仪测定的混合对照溶液和供试品色谱图峰面积(图1中第一次出峰峰面积与图9中的峰面积)对比，混合对照溶液和供试品色谱图峰面积均由超高液相色谱仪自动积分求得，依据计算公式

依据《中国药典》2015年版四部合剂项下的规定“山梨酸和苯甲酸的质量用量不得超过0.3％(其钾盐、钠盐的用量分别按酸计)，羟苯酯类的质量用量不得超过0.05％。”因此某厂家生产3个批次的麦味地黄口服液，防腐剂含量未超过以上规定，但批号3中同时含有两种防腐剂，即山梨酸钾和羟苯乙酯。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。