含有马拉色氏霉菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的光防护性组合物

本发明要求2018年4月12日提交的美国临时申请第62/656,769号、2018年5月7日提交的美国临时申请第62/668,007号、2018年6月15日提交的美国临时申请第62/685,800号、2018年6月19日提交的美国临时申请第62/686,912号、2018年8月24日提交的美国临时申请第62/722,412号以及2018年10月8日提交的美国临时申请第62/742,657号的权益。前述申请的全部内容在此参考并入。

发明领域

本发明涉及由马拉色氏霉菌属(Malassezia)酵母产生或衍生的化合物，以及其化学类似物。本发明的化合物以及含有所述化合物的组合物具有光防护特性以及其它有益特性。本公开还涵盖了使用本发明的化合物和组合物的方法。

背景技术

世界上的个体都使用亮肤剂实现许多美容目标，包括产生抗老化效果、调整太阳晒伤以及满足某些文化审美标准。许多市售亮肤产品虽然在不同程度上有效，但含有有害成分，其中有一些已与癌症有关。因此，对于比当前市场上的亮肤剂具有更高的安全和/或功效水平的新亮肤剂和配制物存在着需求。

马拉色氏霉菌属是通常存在于人皮肤的正常菌群中的亲脂性酵母属。马拉色氏霉菌属造成许多皮肤病，包括花斑癣(花斑糠疹)、脂溢性皮炎和异位性皮炎。

糠秕马拉色氏霉菌(M.furfur)的天然栖息地是上表皮。然而，曝露于紫外光摧毁了其天然栖息地中的有机体。因此，UV过滤剂对于有机体的存活可能是必要的。已经鉴别出生物体所产生的两种此类UV过滤性吲哚：糠疹曲素(pityriacitrin)和糠疹内酯(pityrialactone)。最初由Mayser等人(2002)描述的糠疹曲素是由糠秕马拉色氏霉菌合成。它是稳定的黄色亲脂性化合物，在UVA、UVB和UVC光谱中显示广泛的吸收。已经从副球菌属(Paracoccus)分离出类似化合物并且作为UV防护剂已申请专利。(Zhang等人，2018)。

Gambichler等人(2007)使用体外和体内测试方法研究了人体中糠疹曲素对UV的防护作用。在290到400nm波长范围内，对糠疹曲素面霜和媒剂进行了分光光度测定。评估了不同面霜配方的UV透射率和防晒系数(“SPF”)。在照射健康受试者的经面霜防护和未经防护的皮肤之后，作者利用比色法评估了红斑和色素沉着。UVB以及UVA透射率随着糠疹曲素浓度增加而减小。糠疹曲素浓度增加1.25％、2.5％和5％，相应地SPF分别稍微增加了1.4、1.5和1.7。体内测试证实了体外所测定的5％糠疹曲素的面霜的SPF的有效性。总体而言，糠疹曲素的UV防护作用非常弱，表明在曝露于阳光之后，在白色花斑糠疹病灶的色素沉着不足的发展中，糠疹曲素可能只是一种较弱的辅因子。

针对人皮肤微生物菌群还研究了糠疹曲素的UV过滤效应。(Machowinski等人，2006)。作者确定，糠疹曲素对测试范围内无毒性的白色念珠菌(Candida albicans)和葡萄球菌(staphylococci)具有UV防护作用。糠疹内酯的UV防护特性也已在酵母模型中得到证实。(Mayser等人，2003)。糠疹内酯似乎造成了在伍德氏灯检(Wood's Light examination)下的花斑癣的黄色荧光。

花斑癣是由马拉色氏霉菌属过度生长引起的局部改变色素沉着水平的非触染性皮肤病。马拉色氏霉菌属酵母有两种代谢路径用于合成黑色素和色氨酸衍生的吲哚色素。马拉色菌素(Malassezin)和靛玉红(Indirubin)是马拉色氏霉菌属的色氨酸代谢物，其可能导致了马拉色氏霉菌属过度生长的脱色素特征。

本文公开的发明利用由马拉色氏霉菌属酵母所产生或衍生的化合物(包括马拉色菌素、靛玉红，和其化学类似物)作为安全且有效亮肤和暗肤组合物的基础。本文还公开了包含马拉色菌素、靛玉红和其化学类似物的光防护性组合物。

发明内容

本发明的一个实施方式是用于亮肤的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是用于调节黑色素细胞活性的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于使芳烃受体(AhR)激动的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于改善色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是用于调节黑色素产生的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是用于调节黑素体生物合成的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是用于调节黑素体转移的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含马拉色氏霉菌属酵母和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含从马拉色氏霉菌属酵母中分离出的或可分离的化合物以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含本文所公开的任一种化合物(包括类似物)，以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是调节受试者的黑色素细胞活性的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一实施方式是使受试者中的芳烃受体(AhR)激动的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种改善有需要的受试者的色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素产生的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑素体生物合成的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施例是一种调节受试者的黑素体转移的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：

R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组，并且R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中的至少一个是甲基；或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组，且R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10中的至少一个是甲基；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于亮肤的化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于亮肤的化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于使芳烃受体(AhR)激动的化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是用于使芳烃受体(AhR)激动的化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有式(II)结构的化合物：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有式(III)结构的化合物：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(II)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组。

本发明的另一实施方式是使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(III)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组。

本发明的另一个实施方式是诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(II)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组。

本发明的另一个实施方式是诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(III)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组。

本发明的另一实施方式是使受试者中的芳烃受体(AhR)激动的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(II)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组。

本发明的另一实施方式是使受试者中的芳烃受体(AhR)激动的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(III)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组。

本发明的一个实施方式是一种化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

本发明的另一个实施方式是一种化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

本发明的另一实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：R

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：R

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：

其中：X选自由NR

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含选自由以下组成的群组的化合物：

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与选自由以下组成的群组的化合物接触：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与选自由以下组成的群组的化合物接触：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与选自由以下组成的群组的化合物接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物接触或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与选自由以下组成的群组的化合物接触：

本发明的另一个实施例是方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与具有下式结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与选自由以下组成的群组的化合物接触：

本发明的一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种包含化合物的组合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一实施方式是一种组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

本发明的另一实施方式是一种组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于亮肤的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含马拉色氏霉菌属酵母和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：

其中：

X选自由NR

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐，

以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：

其中：

R

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐，

以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。组合物包含表5或图130中所列的化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，

以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一个实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的皮肤损伤的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的红斑的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的皮肤老化的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种治疗或预防受试者的晒伤的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的色素沉着过度的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

附图说明

本专利或申请文件含有至少一个彩制图。附有彩图的本专利或专利申请公开副本将在请求和支付必要费用之后由专利局提供。

图1A是皮肤组成层的示意图。插图显示了表皮和真皮的细胞组成。图1B是显示了色素沉着不足促成剂的潜在作用机制的示意图。

图2是马拉色菌素和马拉色菌素衍生物的一组合成流程：图2A：马拉色菌素和吲哚并[3,2-b]咔唑；图2B：化合物I和IV；图2C：化合物II。

图3A是一览表，其显示了本发明的某些化合物在MeWo和WM115细胞中的膜联蛋白V诱导的EC

图4A-4D是图表，其显示了在暴露于不同浓度的所列化合物6、24、48和72小时之后，MeWo和WM115细胞中的相对膜联蛋白V水平(％)。图4E-4J是直方图，其显示了图4A-4D的结果。图4K和4L是直方图，其显示了在暴露于所示浓度的所列化合物6小时之后，经膜联蛋白V标记的MeWo(图4K)和WM115(图4L)细胞的百分比。

图5A-5K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素(staurosporine)处理6小时之后的MeWo细胞形态。

图6A-6K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理24小时后的MeWo细胞形态。

图7A-7K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理48小时后的MeWo细胞形态。

图8A-8K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理72小时后的MeWo细胞形态。

图9A-9K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理6小时之后的WM115细胞形态。

图10A-10K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理24小时后的WM115细胞形态。

图11A-11K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理48小时之后的WM115细胞形态。

图12A-12K是显微照片，其显示了在不同浓度的CV-8684、CV-8685、CV-8688、DMSO和星形孢菌素处理72小时之后的WM115细胞形态。

图13A-13D是图表，其显示了在不同浓度的CV-8684(图13A)、CV-8685(图13B)、CV-8688(图13C)或星形孢菌素(图13D)处理6、24、48和72小时之后，剩余的MeWo和WM115活细胞的百分比。使用

图14A-14D是图表，其显示了在不同浓度的CV-8684(图14A)、CV-8685(图14B)、CV-8688(图14C)或星形孢菌素(图14D)处理6、24、48和72小时之后，从MeWo和WM115细胞中释放的乳酸脱氢酶(“LDH”)的水平。图14E-14J是显示图14A-14D的结果的直方图。图14K和14L是直方图，其显示了MeWo(图14K)和WM115(图14L)细胞在暴露于所列浓度的马拉色菌素、咔唑、化合物II和星形孢菌素24小时之后的乳酸脱氢酶水平。

图15A-15E显示了在暴露于不同浓度的奥美拉唑(omeprazole)(图15A)、CV-8684(图15B)、CV-8685(图15C)、CV-8686(图15D)和CV-8688(图15E)之后，经AhR响应性荧光素酶报道基因质粒稳定转染的HepG2细胞中的芳烃受体(“AhR”)活化的原始资料和折线图。图15F显示了每种测试化合物的EC

图16A-16K是MelanoDerm

图17A-17K是MelanoDerm

图18A-18F是暴露于以下各物的斑马鱼的照片：不处理(图18A)、DMSO(图18B)、苯硫脲(“PTU”)(图18C)，以及2.5μM(图18D)、5μM(图18E)和10μM(图18F)的化合物II。红色箭头表示正常的黑色素细胞。

图19A-19F是暴露于以下各物的斑马鱼的照片：不处理(图19A)、DMSO(图19B)、苯硫脲(“PTU”)(图19C)，以及0.3μM(图19D)、1μM(图19E)和3μM(图19F)的化合物II。红色箭头表示正常的黑色素细胞。黄色箭头表示异常的小黑色素细胞。

图20是一览表，其显示了在暴露于所列条件之后，皮肤色素沉着减少的斑马鱼的数目和百分比。最后六行显示了不同浓度的化合物II的效应。

图21A-21E是经以下各物处理的斑马鱼的照片：不处理(图21A)、DMSO(图21B)、PTU(图21C)、0.5μM(图21D)和1.5μM(图21E)。底图包括彩色示意图颠倒的区域。

图22A和22B是直方图，其显示了色素沉着密度，如根据图21A-21E所示例的斑马鱼胚照片的着色像素/mm

图23A-23C是DMSO(图23A)、RPMI培养基(图23B)和DMEM(图23C)中的CV-8684的质谱。图23D-23F是DMSO(图23D)、RPMI培养基(图23E)和DMEM(图23F)中的CV-8686的质谱。图23G-23I是DMSO(图23G)、RPMI培养基(图23H)和DMEM(图23I)中的CV-8688的质谱。图23J是一览表，其显示了2小时培育之后，所列溶剂中剩余的测试化合物的百分比。

图24A-24S显示了本发明的马拉色菌素衍生物的合成流程：图24A：化合物C(CV-8802)；图24B：化合物K(CV-8803)；图24C：化合物A(CV-8804)；图24D：化合物E(AB12508)；图24E：化合物A5(CV-8819)；图24F：化合物H(AB12509)；图24G：化合物B(CV-8877)；图24H：化合物B10；图24I：化合物AB11644；图24J：O52(AB12976)；图24K：马拉色菌吲哚A(AB17011)；图24L：糠疹曲素(AB17014)；图24M：AB17151；图24N：化合物VI(AB17225)；图24O：马拉色菌乳酸(AB17227)；图24P：AB12507；图24Q：化合物V(AB17219)；图24R：化合物VIII(AB17220)，以及图24S：化合物VII(AB17221)。

图25A-25D显示了数据表，所述数据表含有在暴露于所示处理之后的第6小时(图25A)、第24小时(图25B)、第48小时(图25C)和第72小时(图25D)时的膜联蛋白V阳性细胞的百分比。

图26A-26D显示了数据表，所述数据表含有在暴露于所示处理之后的第6小时(图26A)、第24小时(图26B)、第48小时(图26C)和第72小时(图26D)时的半胱氨酸蛋白酶3/7的诱导倍数。

图27A-27B显示了MeWo(图27A)和WM115(图27B)细胞在暴露于AB12508(化合物E)之后的剩余细胞存活率百分比。

图28A-28B显示了MeWo(图28A)和WM115(图28B)细胞在暴露于未知组合物之后的剩余细胞存活率百分比。

图29A-29B显示了MeWo(图29A)和WM115(图29B)细胞在暴露于CV-8803(化合物K)之后的剩余细胞存活率百分比。

图30A-30B显示了MeWo(图30A)和WM115(图30B)细胞在暴露于CV-8804(化合物A)之后的剩余细胞存活率百分比。

图31A-31B显示了MeWo(图31A)和WM115(图31B)细胞在暴露于CV-8684(马拉色菌素)之后的剩余细胞存活率百分比。

图32A-32B显示了MeWo(图32A)和WM115(图32B)细胞在暴露于CV-8685(吲哚并[3,2-b]咔唑)之后的剩余细胞存活率百分比。

图33A-33B显示了MeWo(图33A)和WM115(图33B)细胞在暴露于CV-8686(化合物I)之后的剩余细胞存活率百分比。

图34A-34B显示了MeWo(图34A)和WM115(图34B)细胞在暴露于CV-8688(化合物II)之后的剩余细胞存活率百分比。

图35A-35B显示了MeWo(图35A)和WM115(图35B)细胞在暴露于星形孢菌素之后的剩余细胞存活率百分比。

图36A显示了暴露于不同浓度的奥美拉唑后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图36B显示了图36A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图37A显示了暴露于不同浓度的CV-8684(马拉色菌素)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图37B显示了图37A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图38A显示了暴露于不同浓度的CV-8685(吲哚并[3,2-b]咔唑)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图38B显示了图38A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图39A显示了暴露于不同浓度的CV-8686(化合物I)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图39B显示了图39A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图40A显示了暴露于不同浓度的未知组合物后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图40B显示了图40A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图41A显示了暴露于不同浓度的CV-8803(化合物K)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图41B显示了图41A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图42A显示了暴露于不同浓度的CV-8804(化合物A)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图42B显示了图42A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图43A显示了暴露于不同浓度的AB12508(化合物E)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图43B显示了图43A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图44A显示了暴露于不同浓度的CV-8688(化合物II)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图44B显示了图44A的数据的折线图，而插图显示了实测EC50。

图45A显示了暴露于不同浓度的奥美拉唑后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图45B显示了图45A的数据的折线图。

图46A显示了暴露于不同浓度的未知组合物后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图46B显示了图46A的数据的折线图。

图47A显示了暴露于不同浓度的2,3,7,8-四氯二苯并二氧杂环己烯(TCDD)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图47B显示了图47A的数据的折线图。

图48A显示了暴露于不同浓度的CV-8819(化合物A5)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图48B显示了图48A的数据的折线图。

图49A显示了暴露于不同浓度的CV-8684(马拉色菌素)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图49B显示了图49A的数据的折线图。

图50A显示了暴露于不同浓度的AB12508(化合物E)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图50B显示了图50A的数据的折线图。

图51A显示了暴露于不同浓度的CV-8686(化合物I)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图51B显示了图51A的数据的折线图。

图52A显示了暴露于不同浓度的AB12509(化合物H)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图52B显示了图52A的数据的折线图。

图53A显示了暴露于不同浓度的CV-8688(化合物II)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图53B显示了图53A的数据的折线图。

图54A显示了暴露于不同浓度的CV-8877(化合物B)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图54B显示了图54A的数据的折线图。

图55A显示了暴露于不同浓度的CV-8685(吲哚并[3,2-b]咔唑)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图55B显示了图55A的数据的折线图。

图56A显示了暴露于不同浓度的化合物B10后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图56B显示了图56A的数据的折线图。

图57A显示了暴露于不同浓度的CV-8687(化合物IV)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图57B显示了图57A的数据的折线图。

图58A显示了暴露于不同浓度的奥美拉唑后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图58B显示了图58A的数据的折线图。

图59A显示了暴露于不同浓度的TCDD后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图59B显示了图59A的数据的折线图。

图60A显示了暴露于不同浓度的马拉色菌素前体后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图60B显示了图60A的数据的折线图。

图61A显示了暴露于不同浓度的AB11644后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图61B显示了图61A的数据的折线图。

图62A显示了暴露于不同浓度的3-甲基胆蒽(3-MC)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图62B显示了图62A的数据的折线图。

图63A显示了暴露于不同浓度的AB12976(O52)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图63B显示了图63A的数据的折线图。

图64A显示了暴露于不同浓度的AB17011(马拉色菌吲哚A)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图64B显示了图64A的数据的折线图。

图65A显示了暴露于不同浓度的AB17014(糠疹曲素)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图65B显示了图65A的数据的折线图。

图66A显示了暴露于不同浓度的AB17151后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图66B显示了图66A的数据的折线图。

图67A显示了暴露于不同浓度的AB17225后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。图67B显示了图67A的数据的折线图。

图68是一个表格，其显示了从MelanoDerm

图69是一个表格，其显示了从MelanoDerm

图70显示了暴露于CV-8686(化合物I)和AB11644的MelanoDerm

图71显示了暴露于CV-8686(化合物I)和AB11644的MelanoDerm

图72显示了暴露于CV-8686(化合物I)和曲酸的MelanoDerm

图73显示了暴露于CV-8686(化合物I)和曲酸的MelanoDerm

图74显示了暴露于CV-8686(化合物I)和曲酸的MelanoDerm

图75是一个表格，其显示了从MelanoDerm

图76显示了暴露于所示处理的MelanoDerm

图77显示了暴露于所示处理的MelanoDerm

图78显示了暴露于所示处理的MelanoDerm

图79显示了暴露于所示处理的MelanoDerm

图80-87显示了暴露于所示处理的MelanoDerm

图88是一个表格，其显示了从MelanoDerm

图89A-89X显示了所示处理之后，B16黑色素细胞的存活率百分比和黑色素变化百分比的直方图。在图89M-89N中，在化合物名称是空白的情况下，样品是未知组合物。

图90A、90C和90E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于星形孢菌素之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图90A)、MeWo细胞(图90C)和WM115细胞(图90E)的百分比。图90B、90D和90F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于星形孢菌素之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图90B)、MeWo细胞(图90D)和WM115细胞(图90F)的百分比。

图91A、91C和91E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物H(AB12509)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图91A)、MeWo细胞(图91C)和WM115细胞(图91E)的百分比。图91B、91D和91F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物H(AB12509)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图91B)、MeWo细胞(图91D)和WM115细胞(图91F)的百分比。

图92A、92C和92E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于马拉色菌素(CV-8684)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图92A)、MeWo细胞(图92C)和WM115细胞(图92E)的百分比。图92B、92D和92F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于马拉色菌素(CV-8684)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图92B)、MeWo细胞(图92D)和WM115细胞(图92F)的百分比。

图93A、93C和93E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物B(CV-8877)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图93A)、MeWo细胞(图93C)和WM115细胞(图93E)的百分比。图93B、93D和93F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物B(CV-8877)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图93B)、MeWo细胞(图93D)和WM115细胞(图93F)的百分比。

图94A、94C和94E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物I(CV-8686)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图94A)、MeWo细胞(图94C)和WM115细胞(图94E)的百分比。图94B、94D和94F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物I(CV-8686)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图94B)、MeWo细胞(图94D)和WM115细胞(图94F)的百分比。

图95A、95C和95E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物B10之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图95A)、MeWo细胞(图95C)和WM115细胞(图95E)的百分比。图95B、95D和95F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物B10之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图95B)、MeWo细胞(图95D)和WM115细胞(图95F)的百分比。

图96A、96C和96E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物II(CV-8688)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图96A)、MeWo细胞(图96C)和WM115细胞(图96E)的百分比。图96B、96D和96F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物II(CV-8688)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图96B)、MeWo细胞(图96D)和WM115细胞(图96F)的百分比。

图97A、97C和97E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于马拉色菌素前体之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图97A)、MeWo细胞(图97C)和WM115细胞(图97E)的百分比。图97B、97D和97F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于马拉色菌素前体之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图97B)、MeWo细胞(图97D)和WM115细胞(图97F)的百分比。

图98A、98C和98E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于吲哚并[3,2-b]咔唑(CV-8685)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图98A)、MeWo细胞(图98C)和WM115细胞(图98E)的百分比。图98B、98D和98F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于吲哚并[3,2-b]咔唑(CV-8685)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图98B)、MeWo细胞(图98D)和WM115细胞(图98F)的百分比。

图99A、99C和99E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17151之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图99A)、MeWo细胞(图99C)和WM115细胞(图99E)的百分比。图99B、99D和99F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17151之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图99B)、MeWo细胞(图99D)和WM115细胞(图99F)的百分比。

图100A、100C和100E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物IV(CV-8687)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图100A)、MeWo细胞(图100C)和WM115细胞(图100E)的百分比。图100B、100D和100F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物IV(CV-8687)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图100B)、MeWo细胞(图100D)和WM115细胞(图100F)的百分比。

图101A、101C和101E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17011之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图101A)、MeWo细胞(图101C)和WM115细胞(图101E)的百分比。图101B、101D和101F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17011之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图101B)、MeWo细胞(图101D)和WM115细胞(图101F)的百分比。

图102A、102C和102E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB11644之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图102A)、MeWo细胞(图102C)和WM115细胞(图102E)的百分比。图102B、102D和102F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB11644之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图102B)、MeWo细胞(图102D)和WM115细胞(图102F)的百分比。

图103A、103C和103E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17014之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图103A)、MeWo细胞(图103C)和WM115细胞(图103E)的百分比。图103B、103D和103F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17014之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图103B)、MeWo细胞(图103D)和WM115细胞(图103F)的百分比。

图104A、104C和104E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于未知组合物之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图104A)、MeWo细胞(图104C)和WM115细胞(图104E)的百分比。图104B、104D和104F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于未知组合物之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图104B)、MeWo细胞(图104D)和WM115细胞(图104F)的百分比。

图105A、105C和105E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17225之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图105A)、MeWo细胞(图105C)和WM115细胞(图105E)的百分比。图105B、105D和105F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB17225之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图105B)、MeWo细胞(图105D)和WM115细胞(图105F)的百分比。

图106A、106C和106E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物A5(CV-8819)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图106A)、MeWo细胞(图106C)和WM115细胞(图106E)的百分比。图106B、106D和106F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物A5(CV-8819)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图106B)、MeWo细胞(图106D)和WM115细胞(图106F)的百分比。

图107A、107C和107E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB12976之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图107A)、MeWo细胞(图107C)和WM115细胞(图107E)的百分比。图107B、107D和107F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于AB12976之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图107B)、MeWo细胞(图107D)和WM115细胞(图107F)的百分比。

图108A、108C和108E显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物E(AB12508)之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性B16F1细胞(图108A)、MeWo细胞(图108C)和WM115细胞(图108E)的百分比。图108B、108D和108F显示了数据表，所述数据表含有在暴露于化合物E(AB12508)之后的第6、24、48和72小时时的碘化丙锭(PI)阳性B16F1细胞(图108B)、MeWo细胞(图108D)和WM115细胞(图108F)的百分比。

图109A、109B和109C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于星形孢菌素之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图110A、110B和110C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于马拉色菌素(CV-8684)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图111A、111B和111C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物I(CV-8686)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图112A、112B和112C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物II(CV-8688)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图113A、113B和113C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于吲哚并[3,2-b]咔唑(CV-8685)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图114A、114B和114C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物IV(CV-8687)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图115A、115B和115C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于AB11644之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图116A、116B和116C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于未知组合物之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图117A、117B和117C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物A5(CV-8819)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图118A、118B和118C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物E(AB12508)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图119A、119B和119C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物H(AB12509)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图120A、120B和120C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物B(CV-8877)之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图121A、121B和121C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于化合物B10之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图122A、122B和122C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于马拉色菌素前体之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图123A、123B和123C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于AB17151之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图124A、124B和124C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于AB17011之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图125A、125B和125C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于AB17014之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图126A、126B和126C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于AB17225之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图127A、127B和127C显示了数据表，所述数据表含有B16F1细胞、MeWo细胞和WM115细胞分别在暴露于AB12976之后的第6、24、48和72小时，半胱氨酸蛋白酶3/7诱导相较于媒剂对照的百分比。

图128-129是表格，所述表格显示了由使用经不同浓度的所示测试物处理的MelanoDerm

图130显示了由马拉色氏霉菌属产生的化合物。

图131-132是表格，所述表格显示了由使用经不同浓度的所示测试物/测试组合物处理的MelanoDerm

图133A-133B显示了AB17590(图133A)以及AB17653、AB17654、AB17655、AB17656、AB17657和AB17658(图133B)的合成流程。

图134是显示皮肤类型IV患者的皮肤处理模板的示意图。数值表示指定区域的UV剂量(mJ/cm

图135是一个表格，所述表格显示了皮肤类型I-VI的Dualight量表。

图136是一个表格，所述表格显示了第7天照射之后，在第8天对黑色素和红斑进行的Mexameter MX 16测量。

图137是一个表格，所述表格显示了第14天照射之后，在第15天对黑色素和红斑进行的Mexameter MX 16测量。

图138是一个表格，所述表格显示了与不同程度的红斑相关的红斑数值量表。

图139是一个照片，其显示了根据图7中所示的皮肤处理模板用不同水平的UV照射之后24小时的受试者皮肤。照射之后的24小时，最小红斑剂量(“MED”)是120mJ UVB。

图140是一张照片，其显示了第7天时的受试者皮肤测试部位。

图141是一张照片，所述照片显示了第8天(120mJ UVB照射后的24小时)时的受试者皮肤测试部位。

图142是一张照片，所述照片显示了额外一周的马拉色菌素疗法之后的第14天，受试者皮肤的测试部位。处理区域给予120mJ UVB。

图143是一张照片，所述照片显示了第15天(120mJ UVB照射后的24小时)时的受试者皮肤测试部位。记录第7天和第9天的媒剂部位的红斑。还记录第14天、第10天和第8天时，经1％马拉色菌素处理的部位的最低程度至轻度红斑，第1天和第3天出现了微量红斑。

具体实施方式

本发明的一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施例的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素细胞活性的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一个实施方式是一种用于使芳烃受体(AhR)激动的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一个实施方式是一种用于改善色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素产生的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑素体生物合成的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所属化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑素体转移的化合物。所述化合物是马拉色氏霉菌属酵母所产生的化合物的化学类似物，或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物具有式(I)的结构：

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物是马拉色菌素的化学类似物。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含马拉色氏霉菌属酵母和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含从马拉色氏霉菌属酵母中分离出的或可分离的化合物以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含本文所公开的任一种化合物(包括类似物)，以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素细胞活性的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种使芳烃受体(AhR)激动的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种改善有需要的受试者的色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素产生的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑素体生物合成的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑素体转移的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种化合物或组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组，且R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11中的至少一个是甲基；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组，且R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10中的至少一个是甲基；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物是：

本发明的另一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于使芳烃受体(AhR)激动的化合物。所述化合物具有式(II)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于使芳烃受体(AhR)激动的化合物。所述化合物具有式(III)的结构：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有式(II)结构的化合物

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐；以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有式(III)结构的化合物：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组；或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐；以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(II)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(III)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(II)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(III)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种使受试者中的芳烃受体(AhR)激动的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(II)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10和R11独立地选自由氢和甲基组成的群组。

在此实施方式的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种使受试者中的芳烃受体(AhR)激动的方法。所述方法包含：使所述受试者与具有式(III)结构的化合物或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10独立地选自由氢和甲基组成的群组。

在此实施例的一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的一个实施方式是一种化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种化合物。所述化合物具有以下结构：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，如果R

本发明的另一实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有下式：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，R

本发明的另一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，如果R

本发明的另一实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物，即具有下式的化合物：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，R

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，如果R

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，R

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，如果R

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物具有下式：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，R

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，如果R

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物具有下式：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

在此实施方式的另一个方面中，R

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种包含化合物的组合物。所述化合物具有下式结构：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种包含化合物的组合物。所述化合物具有下式：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种包含化合物的组合物。所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施例是方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施例方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与化合物(选自由以下组成的群组的化合物)接触：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与化合物(选自由以下组成的群组的化合物)接触：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与化合物(选自由以下组成的群组的化合物)接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与化合物(选自由以下组成的群组的化合物)接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：X选自由NR

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有以下结构：

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一方面中，X是NH。

在此实施方式的另一方面中，Y是CR

CR

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

R

R

在此实施方式的另一个方面中，X是NH；Y是CR

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式的化合物)或其结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐接触：

其中：R

在此实施方式的一个方面中，所述化合物具有根据式(II)的结构，

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐。

在此实施方式的另一个方面中，R

优选地，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，R

在此实施方式的另一个方面中，所述化合物选自由以下组成的群组：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与化合物(选自由以下组成的群组的化合物)接触：

本发明的一个实施方式是一种用于亮肤的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素浓度的化合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种包含化合物的组合物。所述化合物具有下式结构：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与化合物(具有下式结构的化合物)或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一实施方式是一种组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

在此实施方式的一个方面中，组合物包含具有下式结构的第一化合物：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐；以及具有下式结构的第二化合物：

或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

在此实施方式的一个方面中，使受试者与具有下式结构的第一化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

以及与具有下式结构的第二化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

在此实施方式的一个方面中，使受试者与具有下式结构的第一化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

以及与具有下式结构的第二化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

在此实施方式的一个方面中，使受试者与具有下式结构的第一化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

以及与具有下式结构的第二化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

在此实施方式的一个方面中，使受试者与具有下式结构的第一化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

以及与具有下式结构的第二化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触。

在此实施方式的一个方面中，使受试者与具有下式结构的第一化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

以及与具有下式结构的第二化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐接触：

本发明的另一实施方式是一种组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于亮肤的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于诱导黑色素细胞发生细胞凋亡的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种用于调节芳烃受体(AhR)活性的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种用于调节黑色素生成的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种调节黑色素浓度的组合物。组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与组合物接触，所述组合物包含表5或图130中所列的一种或多种化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

在优选实施方式中，本发明的组合物包含表7中列出的化合物。

在其它优选实施方式中，本发明的组合物包含表8中列出的化合物。

在其它优选实施方式中，本发明的组合物包含表9中列出的化合物。

在其它优选实施方式中，本发明的组合物包含表10中列出的化合物。

在其它优选实施方式中，本发明的组合物包含表11中所列的化合物。

在其它优选实施方式中，本发明的方法包含使受试者与包含表7中所列的化合物的组合物接触。

在其它优选实施方式中，本发明的方法包含使受试者与包含表8中所列的化合物的组合物接触。

在其它优选实施方式中，本发明的方法包含使受试者与包含表9中所列的化合物的组合物接触。

在其它优选实施方式中，本发明的方法包含使受试者与包含表10中所列的化合物的组合物接触。

在其它优选实施方式中，本发明的方法包含使受试者与包含表11中所列的化合物的组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。所述组合物包含马拉色氏霉菌属酵母和化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：

其中：

X选自由NR

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐，

以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一实施方式是一种组合物。所述组合物包含具有下式结构的化合物：

其中：

R

或其结晶形态、水合物，或化妆品上或药学上可接受的盐，

以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

本发明的另一个实施方式是一种组合物。组合物包含表5或图130中所列的化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或化妆品上或药学上可接受的盐，

以及化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂或载剂。

在优选实施方式中，本发明的任一种组合物预防受试者的由UV诱导的红斑。

在优选实施方式中，本发明的任一种组合物使受试者的表皮黑色素减少。

在优选实施方式中，本发明的任一种组合物对受试者产生了光防护或UV防护作用。

在优选实施方式中，本发明的任一种组合物过滤、吸收或反射UV。

在优选实施方式中，本发明的任一种组合物预防色素沉着过度和/或促进色素沉着不足。

在优选实施方式中，本发明的任一种组合物是防晒剂、光防护剂和/或UV防护剂。

本发明的另一个实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的皮肤损伤的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的红斑的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的皮肤老化的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种治疗或预防受试者的晒伤的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种治疗或预防受试者的由UV诱导的色素沉着过度的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是使受试者的皮肤增亮的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是诱导受试者的黑色素细胞发生细胞凋亡的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一实施方式是一种调节受试者中的芳烃受体(AhR)活性的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施方式是一种调节受试者的黑色素生成的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

本发明的另一个实施发生是一种调节受试者的黑色素浓度的方法。所述方法包含使受试者与本文公开的任一种组合物接触。

定义

如本文所用，术语“化合物”是指通过一或多个化学键连接的两个或更多个原子。在本发明中，化学键包括(但不限于)共价键、离子键、氢键，和范德华力相互作用(van derWaals interactions)。本发明的共价键包括单键、双键和三键。本发明化合物包括(但不限于)有机分子。

本发明的有机化合物/分子包括具有或不具有官能基的直链、支链和环状烃。术语“C

如本文所用，术语“脂族”是指由碳和氢原子构成的不含芳香族环的基团。因此，脂肪族基团包括烷基、烯基、炔基和碳环基基团。

如本文所用，术语“烷基”是指非环状直链和支链烃基，例如“C

如本文所用，“烯基”是指具有一个或多个不饱和碳碳双键的任何直链或支链烃链，所述不饱和碳碳双键可以存在于沿着所述链的任何稳定点，例如“C

如本文所用，“炔基”是指具有直链或支链构形的任何烃链，其在沿着所述链的任何稳定点具有一个或多个碳碳三键，例如“C

如本文所用，术语“环烷基”是指非芳香族饱和环基，例如“C

如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘。

如本文所用，“芳香族化合物”、“芳香族”或含有“芳香族环”的化合物是芳基或杂芳基化合物。如本文所用，术语“芳基”包括被取代或未被取代的单环芳香族基团，其中所述环的每个原子是碳。所述环优选3元到8元环，更优选6元环。术语“芳基”还包括具有两个或更多个环的多环体系，其中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是芳香族环，例如，其它环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。芳基包括苯、萘、菲、苯酚、苯胺等等。术语“杂芳基”包括被取代或未被取代的芳香族单环结构，优选3元到8元环，更优选5元到7元环，甚至更优选5元到6元环，其环结构包括至少一个杂原子，优选一个到四个杂原子，更优选一个或两个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有两个或更多个环的多环体系，其中两个或更多个碳为两个邻接环所共用，其中至少一个环是芳香族环，例如，其它环可以是环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基和/或杂环基。杂芳基包括例如吡咯、呋喃、噻吩、吲哚、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶等等。本发明的某些化合物优选包括至少一个(优选两个)吲哚基团以及至少一个醛基。

术语“取代”是指主链的一个或多个碳上的氢原子被至少一个取代基替换的部分。应理解，“取代”或“被取代”包括以下隐含的限制条件：此类取代符合被取代原子和取代基的允许价数，并且取代产生了稳定化合物，例如不会自发地经历转化(例如重排、环化、消去等)的化合物。对于适当的有机化合物来说，可容许的取代基可以是一个或多个并且可以相同或不同。

如本文所用，术语“杂环”或“杂环的”是指含有至少一个杂原子的单环、双环或三环环体系。杂原子包括(但不限于)氧、氮和硫。

单环杂环由例如含有至少一个杂原子的3、4、5、6、7、8、9或10元环组成。单环杂环的代表性实例包括(但不限于)氮杂环丁烷基、氮杂环庚烷基、氮杂环丙烷基、二氮杂环庚烷基、1,3-二噁烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,3-二硫杂环戊烷基、1,3-二噻烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、异噻唑啉基、异噻唑烷基、异噁唑啉基、异噁唑烷基、吗啉基、噁二唑啉基、噁二唑烷基、噁唑啉基、噁唑烷基、哌嗪基、哌啶基、吡喃基、吡唑啉基、吡唑烷基、吡咯啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、噻二唑啉基、噻二唑烷基、噻唑啉基、噻唑烷基、硫代吗啉基、1,1-二氧离子基硫代吗啉基(硫代吗啉砜)、硫代吡喃基和三噻烷基。

作为非限制性实例，双环杂环是单环杂环与远端芳基环稠合，或单环杂环与远端环烷基环稠合，或单环杂环与远端环烯基环稠合，或单环杂环与远端单环杂环稠合，或单环杂环与远端单环杂芳基环稠合。双环杂环的代表性实例包括(但不限于)1,3-苯并间二氧杂环戊烯基、1,3-苯并二硫杂环戊烯基、2,3-二氢-1,4-苯并间二氧杂环己烯基、2,3-二氢-1-苯并呋喃基、2,3-二氢-1-苯并噻吩基、2,3-二氢-1H-吲哚基、和1,2,3,4-四氢喹啉基。

作为非限制性实例，三环杂环是双环杂环与苯基稠合，或双环杂环与环烷基稠合，或双环杂环与环烯基稠合，或双环杂环与另一个单环杂环稠合。三环杂环的代表性实例包括(但不限于)2,3,4,4a,9,9a-六氢-1H-咔唑基、5a,6,7,8,9,9a-六氢二苯并[b,d]呋喃基和5a,6,7,8,9,9a-六氢二苯并[b,d]噻吩基。

作为非限制性实例，本发明的杂环能够被独立地选自以下的取代基取代：烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基炔基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷氧基-NH＝C(烷基)-、烷基、烷基羰基、烷基羰基烷基、烷基羰氧基、烷基磺酰基、烷基硫基、炔基、芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、芳氧基、羧基、羧基烷基、氰基、氰基烷基、环烷基、羰基、环烷基烷基、甲酰基、卤素、卤烷基、羟基、羟基烷基、羟基环烷基、巯基、硝基、氧代和苯基。

如本文所用，“调节皮肤色素沉着”和其语法变化形式通常指本发明化合物和组合物的皮肤增亮以及皮肤暗化作用。

如本文所用，“皮肤增亮”和其语法变化形式通常指皮肤色素沉着的任何实际减少或所感知的减少。皮肤增亮方法已经用于减少因年龄、太阳曝露或色素沉着过度病症引起的皮肤色素沉着过度区域的色素沉着。本发明的化合物和组合物施加于例如受试者的皮肤能够减少色素沉着，使得皮肤比所述施加之前显得更亮或更白。皮肤色素沉着能够以许多方式评估，包括(但不限于)使用例如von Luschan色彩量表、Fitzpatrick皮肤分型测试(Fitzpatrick等人，1988)和Taylor色素沉着过度量表(Taylor等人，2005)和反射分光光度测定方法(Zonios等人，2001)进行的目测评估。举例来说，Fitzpatrick皮肤分型测试包括六种类型的皮肤(I-VI)，并且VI型皮肤变成V型或更低则已经是本文中所用的“增亮”。如下文中进一步论述，皮肤增亮能够归因于多种现象，包括(但不限于)调节黑色素细胞活性、诱导黑色素细胞发生细胞凋亡，或调节芳烃受体(AhR)活性、黑色素生成、黑素体生物合成、黑素体转移或黑色素浓度。

同样，如本文所用，“皮肤暗化”和其语法变化形式通常指皮肤色素沉着的任何实际增加或所感知的增加。皮肤暗化方法已经用于增加皮肤的色素沉着不足区域的色素沉着，所述色素沉着由例如色素沉着不足病症引起。本发明的化合物和组合物施加于例如受试者的皮肤能够增加色素沉着，使得皮肤比所述施加之前显得更暗。

本发明的某些化合物是从马拉色氏霉菌属酵母产生的、衍生的、分离出的或可分离的。马拉色氏霉菌属酵母是马拉色氏霉菌属的酵母且包括(但不限于)球形马拉色菌(Malassezia globosa)、限制性马拉色菌(Malassezia restricta)、糠秕马拉色菌(Malassezia furfur)、合轴马拉色菌(Malassezia sympodialis)、斯洛菲马拉色菌(Malassezia slooffiae)、钝型马拉色菌(Malassezia obtusa)、厚皮马拉色菌(Malassezia pachydermatis)、皮肤马拉色菌(Malassezia dermatis)、日本马拉色菌(Malassezia japonica)、娜娜马拉色菌(Malassezia nana)、大和马拉色菌(Malasseziayamatoensis)、马科动物马拉色菌(Malassezia equine)、山羊马拉色菌(Malasseziacaprae)，以及兔马拉色菌(Malassezia cuniculi)。(Guého等人，1996；Gaitanis等人，2013)。马拉色氏霉菌属酵母是正常人类皮肤菌群的一部分并且通常不产生致病效应。然而，马拉色氏霉菌属酵母能够导致许多疾病，包括(但不限于)花斑糠疹(色素沉着过度和色素沉着不足种类)、脂溢性皮炎、皮屑、异位性皮炎、马拉色菌滤泡炎、牛皮癣，以及融合和网状乳头瘤病。(Gaitanis等人，2013)。

如本文所用，术语“化学类似物”是指在结构上与母体化合物有关且含有不同官能团或取代基的化合物。举例来说，本发明的母体化合物包括马拉色菌素和靛玉红，并且马拉色菌素和靛玉红的化学类似物含有分别不同于马拉色菌素和靛玉红的某些官能团和取代基。本发明的化学类似物可以具有优于给定母体化合物的显著优点，包括适合于化妆品或医药用途的药物动力学特征曲线。在一些实施方式中，化学类似物是由母体分子通过一种或多种化学反应产生。在其它实施方式中，能够利用并非起始于母体化合物的替代合成流程产生本发明的化学类似物。

如果马拉色氏霉菌属酵母在其生命周期的过程中、在适当生长条件下合成、分泌、积累或以其它方式产生本发明化合物，则所述化合物由马拉色氏霉菌属酵母产生。取决于生长培养基补充物，马拉色氏霉菌属酵母会分泌不同的化合物。(Nazzaro-Porro等人，1978)。本发明包括马拉色氏霉菌属酵母在任何生长条件下产生的任何化合物，但优选的化合物包括例如马拉色菌素、靛玉红和其化学类似物。

如果在马拉色氏霉菌属酵母生命周期过程中的任何时间，本发明化合物存在于所述酵母上或酵母中，则所述化合物衍生自马拉色氏霉菌属酵母。

马拉色菌素是由本发明的马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物的一个实例。马拉色菌素，也称为2-(1H-吲哚-3-基甲基)-1H-吲哚-3-甲醛，是最初从糠秕马拉色菌中分离出的色氨酸代谢物。马拉色菌素是已知的芳烃受体(AhR)(一种涉及细胞生长、分化和基因表达的受体)激动剂。(Wille等人，2001)。马拉色菌素还诱导原代人类黑色素细胞发生细胞凋亡。(

靛玉红是由本发明的马拉色氏霉菌属酵母产生的化合物的另一个实例。靛玉红是从糠秕马拉色菌中分离出的代谢物。靛玉红是已知的芳烃受体(AhR)(涉及细胞生长、分化和基因表达的受体)激动剂。

如本文所用，术语“黑色素细胞”是指表皮的树突状细胞，其通常合成酪氨酸酶且在黑素体内合成色素黑色素。本发明的黑色素细胞展现某些基因的上调，包括(但不限于)以下中的一种或多种：酪氨酸酶(眼皮肤白化病IA)、小眼球相关转录因子、α-2-巨球蛋白、酪氨酸酶相关蛋白1、溶质运载家族16、GS3955蛋白、v-kit Hardy-Zuckerman 4猫肉瘤、眼白化病1、Rag D蛋白、糖原蛋白2、G蛋白偶联受体、家族C眼皮肤白化病II、食道癌缺失基因1、黑色素A、SRY-box 10、三磷酸腺苷酶、V类10C型基质金属蛋白酶1、潜在转化生长因子βb、ATP结合盒、亚家族C、羟基前列腺素脱氢酶15、跨膜7超家族成员1、谷酰胺酰基肽环化转移酶，以及Lee和同事鉴别出的其它基因。(Lee等人，2013)。

如许多其它细胞类型，黑色素细胞经历程序性细胞死亡或细胞凋亡。黑色素细胞的细胞凋亡路径是所属领域的技术人员已知的(Wang等人，2014)，并且细胞凋亡路径大体已经被Elmore综述(Elmore，2007)。本发明的化合物或组合物“诱导”黑色素细胞发生细胞凋亡，例如在黑色素细胞中促使某些促细胞凋亡信号转导路径活化或促使某些抗细胞凋亡路径被抑制。设想本发明的化合物或组合物能够直接活化/抑制细胞凋亡相关路径，这是通过与路径中的信号传导分子直接相互作用或通过与路径中的分子间接相互作用(经由与所述路径内通常不发挥作用的一种或多种中间分子直接相互作用)来实现的。

黑色素细胞活性能够以本发明所涵盖的许多方式调节，包括(但不限于)诱导黑色素细胞发生细胞凋亡或改变黑色素细胞基因表达、细胞活动性、细胞生长、黑色素产生、黑素体生物合成或黑素体转移。

如本文所用，术语“调节”(modulate和modulating)和其语法变化形式是指将生物活性或现象调整到所期望的水平。设想本发明的“调节”包括增加或降低生物活性或现象的水平的调整。

如本文所用，术语“激动剂”、“激动”和其语法变化形式是指一种分子，其触发(例如引发或促进)、部分或完全地增强、刺激或活化一种或多种生物活性。本发明的激动剂可以与受体相互作用以及活化受体，借此引发该受体的生理学或药理学响应特征。本发明的激动剂包括天然存在的物质以及合成的物质。

如本文所用，术语“拮抗剂”、“拮抗”和其语法变化形式是指部分或完全地遏制、抑制一种或多种生物活性或使一种或多种生物活性失活的分子。本发明的拮抗剂可以与激动剂竞争性地结合到受体的相同位点，但不活化由受体的活性形式引发的细胞内响应。本发明的拮抗剂可以抑制激动剂或部分激动剂的细胞内响应。

本发明的芳烃受体(AhR)是天然地存在于受试者中的如本文所述的任何芳烃受体。芳烃受体是所属领域的技术人员已知的。(Noakes，2015)。芳烃受体的激动剂包括(但不限于)色氨酸相关化合物，例如犬尿氨酸、犬尿酸、朱砂精酸和6-甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑(FICZ)。马拉色菌素又称为芳烃受体激动剂。(Wille等人，2001)。

如本文所用，本发明的化合物、组合物和方法能够用于改善色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度，例如通过降低色素沉着过度病症所影响的区域中的色素沉着过度水平、减缓进一步的色素沉着过度或预防进一步的色素沉着过度的发生来实现。然而，由于每个受试者可能对特定给药方案、疗法或方法不响应，因此改善色素沉着过度病症所引起的色素沉着过度不需要在每个受试者或受试者群体中达成所期望的生理学响应或结果。因此，某个指定的受试者或受试者群体可能对给药不响应或响应不充分，但其它个体或受试者群体可能响应并且因此经历其色素沉着过度病症的改善。

如本文所用，术语“色素沉着过度”是实际的或所感知的皮肤颜色过暗病症。皮肤受损可以是实际的，例如归因于年龄、过度太阳曝露或引起暗皮肤区域的疾病或病状。暗皮肤区域可以呈斑点、污点或相对较大暗颜色区域形式。皮肤受损还能够被感知，例如他/她皮肤色度太暗的个体的感知。个体可以有皮肤色度变亮的美容需求。

色素沉着过度病症是其中色素沉着过度为原发症状的病症和那些色素沉着过度作为继发症状发生的病症。本发明的色素沉着过度病症包括(但不限于)先天色素沉着过度病症和后天色素沉着过度病症。本发明的先天色素沉着过度病症包括(但不限于)涉及表皮色素沉着过度的病症(痣细胞性痣、施皮茨痣(Spitz nevus)和斑痣)、真皮色素沉着过度(蓝痣、太田痣(nevus Ohta)、真皮黑变病、伊藤痣(nevus Ito)和蒙古斑)、雀斑、网状肢端色素沉着、施皮茨色素沉着/肢端色素沉着、以及着色斑病(全身性着色斑病、LEOPARD综合症、遗传性图案化着色斑病、卡雷复合症(Carney complex)、普-杰二氏综合症(Peutz-Jeghers syndrome)、劳-亨-巴三氏综合症(Laugier-Hunziker-Baran syndrome)以及克-加二氏综合症(Cronkhite-Canada综合症)。(Yamaguchi等人，2014)。本发明的后天色素沉着过度病症包括(但不限于)老年雀斑/老年斑、黑斑/黃褐斑、里耳氏黑变病(Riehl'smelanosis)、唇黑色素斑、阴茎/外阴阴道黑变病、北村面颈部毛囊性红斑黑变病(erythromelanosis follicularis faciei Kitamura)、UV诱导的色素沉着(晒黑和光线性花瓣状色素沉着)、发炎后色素沉着(摩擦性黑变病和灰色皮肤病)、化学/药物诱导的色素沉着(多氯联苯、砷、5-FU、博莱霉素(bleomycin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、甲胺喋呤(methotrexate)、氯丙嗪(chlorpromazine)、苯妥英(phenytoin)、四环素(tetracycline)和氯奎(chloroquine))、色素性分界线和外来物质沉积(例如胡萝卜素、银、金、汞、铋和纹身)。与全身病症相关的色素沉着过度包括代谢/酶紊乱(血色沉着病、韦尔逊氏病(Wilson's disease)、高雪氏病(Gaucher's disease)、尼曼-皮克病(Niemann-Pick's disease)、淀粉样变性、褐黄病、黑棘皮病(acanthosis nigricans)和迟发性皮肤卟啉症(porphyriacutanea tarda))、内分泌病症(艾迪森氏病(Addison's disease)、库辛综合症(Cushingsyndrome)和甲状腺高能症)、营养紊乱(糙皮病、维生素B12缺乏症、叶酸缺乏症、瓦加班氏病(vagabond's disease)和色素性痒疹)、肥大细胞增多症、胶原蛋白疾病、肝功能异常和肾功能异常。色素沉着过度还可以与感染性疾病(麻疹、梅毒和糠秕马拉色菌)和综合症(冯雷克豪生疾病(von Recklinghausen's disease)、索托氏综合症(Sotos syndrome)、POEMS综合症、纳吉尼综合症(Naegeli syndrome)、康图综合症(Cantu syndrome)、马科恩-奥尔布赖特综合症(McCune-Albright syndrome)、沃森综合症(Watson syndrome)和布鲁姆综合症(Bloom syndrome))。(Yamaguchi等人，2014)。

黑色素是将颜色赋予皮肤和毛发的天然产生的色素。皮肤示意图显示于图1A中。黑色素是由黑色素细胞中的称为黑素体的细胞器通过称为黑色素生成的过程而产生。本发明的化合物或组合物通过例如调节黑素体生物合成和直接或间接地在酶水平抑制黑色素合成来调节受试者的黑色素产生(又称为黑色素生成)。

黑素体生物合成经由四个阶段发生：阶段I以前黑素体为特征，前黑素体是基本上未着色的囊泡。在阶段II，前黑素体发育出条纹，黑色素在阶段III沉积于所述条纹上。阶段IV产生了富含黑色素的成熟黑素体。本发明的化合物和组合物通过抑制或减弱通常促进这些阶段中的任一或所有阶段的生物过程来调节黑素体生物合成。(Wasmeier等人，2008)。

黑色素合成主要涉及三种酶：酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白-1，和多巴色素互变异构酶。影响这些酶在细胞内输送的其它因子包括(但不限于)BLOC-1、OA1和SLC45A2。本发明的化合物和组合物能够通过例如抑制或减弱这些酶或因子中的任一种的活性来调节黑色素产生。(Yamaguchi等人，2014)。

一旦黑色体已形成并且黑色素已合成，则需要将黑素体从表皮黑色素细胞转移到皮肤和毛发角质细胞。黑素体在黑色素细胞核附近产生并且沿着微管和肌动蛋白纤丝运输到黑色素细胞的周边。本发明的化合物和组合物通过干扰引起黑素体从核周区域运输到黑色素细胞周边并且进入邻近角质细胞中的任一种生物过程来调节黑素体转移。黑色素合成、黑色素运输和黑色素细胞的细胞凋亡的示意图显示于图1B中。

可以通过例如增加或减少受试者的黑色素生成或促进受试者的黑色素降解或消除来调节黑色素浓度。

从本发明的马拉色氏霉菌属酵母中分离出的化合物在分离之前必然存在于马拉色氏霉菌属酵母中，或由马拉色氏霉菌属酵母产生。因此，从马拉色氏霉菌属酵母中分离出的化合物衍生自实际的酵母细胞。用于从细胞材料中萃取化合物的标准方案是所属领域的技术人员已知的。

可从马拉色氏霉菌属酵母中分离的化合物不一定衍生自实际的酵母细胞。可以改用合成反应生成酵母中所产生的化合物而不涉及实际的酵母细胞。有机合成反应为所属领域的技术人员所熟知并且可以用于此方面。

如本文所用，术语“表皮黑色素”是指表皮中所产生、运输到表皮或以其它方式存在于表皮中的黑色素。

如本文所用，术语“减少”和其语法变化形式意指促使所指定的生物学现象或物种的水平降低。举例来说，本发明的化合物和组合物减少受试者的表皮黑色素，意味着本发明的化合物和组合物诱发受试者的表皮黑色素水平降低。术语“减少”和其语法变化形式可以指例如将指定现象或物种的水平降低至少5％、10％、25％、50％、75％或100％。

如本文所用，术语“接触”和其语法变化形式是指使得两种或更多种材料足够接近以便其能够相互作用。因此，仅出于说明性目的，本发明化合物能够通过例如与黑色素细胞表面上的受体相互作用来接触黑色素细胞。类似地，本发明的组合物能够通过例如直接施加于受试者的皮肤来接触人类受试者。

如本文所用，“受试者”是指哺乳动物细胞、组织、生物体或其群体。本发明的受试者优选人类，包括人类细胞、组织和人，但还包括灵长类动物、农畜、家畜、实验动物等等。农业动物的一些实例包括奶牛、猪、马、山羊等等。家畜的一些实例包括犬、猫等等。实验动物的一些实例包括灵长类动物、大鼠、小鼠、兔、天竺鼠等等。

如本文所用，“需要”改善因色素沉着过度病症所致的色素沉着过度的受试者包括具有真实的或所感知的改善需求的受试者。

如本文所用，术语“治疗”(treat、treating和treatment)和其语法变化形式意指对个别受试者进行方案、疗法、方法或医治，以期望在该受试者(例如患者)中获得生理学响应或结果。具体地说，本发明的方法和组合物可以用于减缓疾病症状的发展，或延迟疾病或病状的发作，或中断疾病发展的进程。然而，由于每个被治疗的受试者可能对特定治疗方案、疗法、方法或医治无响应，因此治疗不要求在每个受试者或受试者群体(例如患者群体)中达成所期望的生理学响应或结果。因此，所指定的受试者或受试者群体(例如患者群体)可能对治疗不响应或响应不充分。

如本文所用，术语“预防”(prevent、preventing和prevention)和其语法变化形式意指本发明化合物当施用于在施药时尚未诊断为可能患有病症或疾病、但通常预期会出现病症或疾病或病症或疾病风险增加的患者时，是有用的。例如，本发明的化合物和组合物减缓病症或疾病症状的发展、延迟病症或疾病的发作或从根本上预防个体出现病症或疾病。预防还包括将本发明化合物施用于因年龄、家族性病史、基因或染色体异常和/或因存在所述病症或疾病的一种或多种生物学标志物而被认为易患所述病症或疾病的那些个体。

如本文所用，术语“促进”和其语法变化形式意指允许、增强、容许、有助于、促进、鼓励、诱导或以其它方式帮助产生。

如本文所用，术语“产生”和其语法变化形式意指促使特定的结果发生、出现或存在。作为非限制性实例，本发明的化合物和组合物对受试者产生光防护或UV防护作用。

如本文所用，术语“红斑”是指皮肤发红。红斑可能由浅表毛细管的扩张和/或刺激引起。术语“UV诱导的红斑”是指曝露于UV而导致的皮肤发红。如本文所用，“晒伤”和其语法变化形式是指通过曝露于阳光或人造UV源(例如晒黑床)而引起的UV诱导红斑。

如本文所用，术语“色素沉着过度”通常是指一个皮肤区域中的色素沉着多于皮肤相邻区域的色素沉着(例如色素斑点、老年斑、痣等等)。本发明的色素沉着过度包括(但不限于)黑色素细胞活性过高引起的局部色素沉着过度、良性黑色素细胞活性过高和增殖引起的其它局域化色素沉着过度、疾病相关的色素沉着过度，以及意外的色素沉着过度，例如由于光过敏、基因构成、化学摄入或其它曝露(例如UV曝露)、年龄和病变后疤痕所致的色素沉着过度。如本文所用，“UV诱导的色素沉着过度”是指曝露于天然或人造UV所引起的任何色素沉着过度。

如本文所用，术语“色素沉着不足”通常是指一个皮肤区域中的色素沉着少于皮肤相邻区域的色素沉着。本发明的色素沉着不足包括(但不限于)白斑病、脱色素、白色糠疹、病灶性色素沉着不足、炎症后色素沉着不足、斑驳病、白化病、花斑癣、光过敏、白化基因病、黑色素过少症、异位性皮炎、牛皮癣等等。

如本文所用，“UV诱导的皮肤损伤”是指因曝露于UV(包括UVA、UVB和UVC)而引起的皮肤损伤。本发明的UV诱导皮肤损伤包括(但不限于)皱纹、色素沉着过度、发育异常、光化性角化症和皮肤癌。

如本文所用，“UV诱导的皮肤老化”是指因曝露于UV(包括UVA、UVB和UVC)而引起的皮肤老化。本发明的UV诱导的皮肤老化本身表现为例如皱纹、细线、老年斑、痣、干燥、薄、或皮肤弹性减少、肤色不均匀、以及完全或部分地因UV曝露引起的皮肤光亮度、纹理、弹性、硬度、松垂和清晰度的其它减少。

如本文所用，当用于描述本发明化合物和组合物的作用时，术语“光防护”和其语法变化形式意指本文所述的化合物和组合物预防和/或减轻光(尤其阳光)引起的损伤。同样，本发明的“光防护剂”是本文所述的那些化合物和组合物，其预防和/或减轻光(尤其阳光)引起的损伤。

如本文所用，当用于描述本发明化合物和组合物的作用时，术语“UV防护”和其语法变化形式意指本文所述的化合物和组合物预防和/或减轻紫外(“UV”)光引起的损伤。同样，本发明的“UV防护剂”是本文所述的那些化合物和组合物，其预防和/或减轻UV引起的损伤。本发明的紫外光包括例如UVA(320-240nm)、UVB(290-320nm)和UVC(200-290nm)。

如本文所用，术语“滤光”和其语法变化形式意指阻滞、反射、吸收或散射UV。本发明的“防晒剂”包括阻滞、反射、吸收或散射UV的本发明的所有化合物和组合物。

如本文所用，术语“吸收”和其语法变化形式意指吸收UV或将UV转化成热能。作为非限制性实例，本发明的化合物和组合物能够吸收UV并且作为结果将热能辐射到其周围环境中。

如本文所用，术语“反射”和其语法变化形式，当在UV的上下文中使用时，意指将UV投射或反弹回去而非吸收UV。

如本文所用，术语“组合物”是指包含一种或多种本发明的化合物的实体，以及由一种或多种本发明的化合物与其它成分的组合直接或间接产生的任何实体。本发明的组合物能够用作例如体外或体内研究试剂。本发明的组合物还能够直接施加于人类或非人类受试者的皮肤上以获得美容或医药作用。另外，本发明的组合物包含一种或多种表5或图130中所列的化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。

本发明的组合物可以在体外和体内的应用中以任何所期望的有效方式施用：对于口服摄取、或肠胃外或其它施药来说，可以任何适当方式施用，例如腹膜内、皮下、体表、皮内、吸入、肺内、直肠、阴道、舌下、肌肉内、静脉内、动脉内、鞘内或淋巴内。另外，本发明的组合物可以联合其它组合物施用。必要时，本发明的组合物可以针对胃或其它分泌物加以囊封或以其它方式保护。

本发明的组合物包含一种或多种活性成分和化妆品上或药学上可接受的一种或多种载剂以及任选地一种或多种其它化合物、成分和/或材料的混合物。不论所选施药途径，本发明的化合物和组合物通过所属领域的技术人员已知的传统方法配制成化妆品上或药学上可接受的剂型。

化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂和载剂在所属领域中已众所周知，其包括适于与人类和非人类组织接触，而没有不当毒性、不相容性、不稳定性、刺激、过敏反应等等的材料。化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂和载剂包括基本上无毒性的任何物质，其传统上可用于例如体表、口腔、腹膜或皮下施用化妆品或医药，其中本发明的化合物和组合物当施加、摄入、注射或以其它方式施用于人类或非人类受试者时保持稳定和生物可用性。适于体表应用的化妆品上或药学上可接受的载剂是所属领域的技术人员已知的，其包括化妆品上或药学上可接受的液体、面霜、油剂、洗剂、软膏、凝胶或固体，例如传统化妆晚霜、粉底霜、防晒乳、防晒剂、护手霜、粉底和隔离霜、面膜等等。适于所选剂型和预定施药途径的载剂在所属领域中已众所周知，并且针对所选剂型和施药方法的可接受的载剂能够使用所属领域中的一般技能确定。

本发明的组合物能够含有化妆品中的其它传统成分，包括香料、雌激素、维生素A、C和E、α-羟基或α-酮酸(例如丙酮酸、乳酸或乙醇酸)、羊毛脂、凡士林、芦荟、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、色素等等。本发明的非限制性的化妆品上或药学上可接受的媒剂、稀释剂和载剂包括糖类(例如乳糖、蔗糖、甘露糖醇和山梨糖醇)、淀粉、纤维素制剂、磷酸钙(例如磷酸二钙、磷酸三钙和磷酸氢钙)、柠檬酸钠、水、水溶液(例如盐水、氯化钠注射剂、林格氏注射剂(Ringer's injection)、右旋糖注射剂、右旋糖和氯化钠注射剂、乳酸化林格氏注射剂)、醇类(例如乙醇、丙醇和苯甲醇)、多元醇(例如丙三醇、丙二醇和聚乙二醇)、有机酯(例如油酸乙酯和三酸甘油酯)、可生物降解的聚合物(例如聚丙交酯-聚乙交酯、聚(原酸酯)和聚(酸酐))、弹性体基质、脂质体、微球体、油剂(例如玉米、胚芽、橄榄、蓖麻、芝麻、棉籽和花生)、可可脂、蜡(例如栓剂蜡)、石蜡、硅酮、滑石、水杨酸酯等等。

本发明的组合物可以任选地含有化妆品组合物中常用的额外成分和/或材料。这些成分和材料在所属领域中是众所周知的，其包括例如(1)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；(2)粘合剂，例如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和阿拉伯胶；(3)保湿剂，例如甘油；(4)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸盐、乙醇酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠和碳酸钠；(5)溶解阻滞剂，例如石蜡；(6)吸收促进剂，例如季铵化合物；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(8)吸收剂，例如高岭土和膨润土；(9)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇和月桂基硫酸钠；(10)悬浮剂，例如乙氧基化异十八烷醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄芪胶；(11)缓冲剂；(12)赋形剂，例如乳糖、奶糖、聚乙二醇、动物和植物脂肪、油剂、蜡、石蜡、可可脂、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石、水杨酸酯、氧化锌、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末；(13)惰性稀释剂，例如水或其它溶剂；(14)防腐剂；(15)表面活性剂；(16)分散剂；(17)控制释放或吸收延迟剂，例如羟丙基甲基纤维素、其它聚合物基质、可生物降解的聚合物、脂质体、微球体、单硬脂酸铝、明胶和蜡；(18)遮光剂；(19)佐剂；(20)润湿剂；(21)乳化剂和悬浮剂；(22)增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油剂(具体地说，棉籽、花生、玉米、胚芽、橄榄、蓖麻和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯；(23)推进剂，例如氯氟烃和挥发性未取代烃，例如丁烷和丙烷；(24)抗氧化剂；(25)使配制物对于预定接受者的血液具有等张性的制剂，例如糖类和氯化钠；(26)增稠剂；(27)包衣材料，例如卵磷脂；以及(28)甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。每种此类成分或材料在与配制物的其它成分相容且对受试者无害的方面来说必须是“可接受的”。适于所选剂型和预定施药途径的成分和材料在所属领域中是众所周知的，并且用于所选剂型和施药方法的可接受成分和材料可以使用所属领域中的一般技能确定。

适于口服施用的本发明组合物可以呈以下形式：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、粉末、颗粒、水性或非水性液体中的溶液或悬浮液、水包油或油包水型液体乳液、酏剂或糖浆、片剂、团注、舐剂或糊剂。这些配制物可以通过所属领域中已知的方法制备，例如借助于传统的盘式涂覆、混合、造粒或冻干工艺来制备。

用于口服施用的固体剂型(胶囊、片剂、丸剂、糖衣药丸、粉末、颗粒等等)可以例如通过混合活性成分和以下各物来制备：一种或多种化妆品上或药学上可接受的载剂以及任选地，一种或多种填充剂、增量剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、溶解阻滞剂、吸收促进剂、润湿剂、吸收剂、润滑剂和/或着色剂。相似类型的固体组合物可以在使用适合赋形剂的软填充和硬填充明胶胶囊中用作填充剂。片剂可以通过压缩或成型，任选地使用一种或多种辅助成分制备。压缩型片剂可以使用适合的粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂、表面活性或分散剂制备。成型片剂可以通过在适合机器中进行成型来制备。片剂和其它固体剂型，例如胶囊、丸剂和颗粒，可以任选地刻痕或制备成有包衣和外壳，例如肠溶包衣和化妆品配制领域中众所周知的其它包衣。其还可为了提供其中活性成分的缓慢或控制释放而进行配制。可以通过例如经由细菌截留型过滤器过滤来进行灭菌。这些组合物还可以任选地含有遮光剂和可具有使得其仅释放活性成分或优先在胃肠道的某一部分释放、任选地以延迟方式释放活性成分的组成。活性成分还能够呈微囊封形式。

用于口服施用的液体剂型包括化妆品上或药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。液体剂型可以含有所属领域中常用的适合的惰性稀释剂。除惰性稀释剂之外，口服组合物还可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂。悬浮液可以含有悬浮剂。

用于直肠或阴道施用的本发明组合物可以作为栓剂提供，其可以通过混合一种或多种活性成分与一种或多种适合的无刺激性载剂来制备，所述载剂在室温下是固体，但在体温下是液体，因此，将在直肠或阴道腔中熔融且释放活性化合物。适于阴道施用的本发明的组合物还包括含有所属领域中已知的适当的此类化妆品上或药学上可接受的载剂的阴道栓剂、棉塞、面霜、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾配制物。

用于体表或经皮施用的剂型包括粉末、喷雾剂、软膏、糊剂、面霜、洗剂、凝胶、溶液、贴片、滴剂、乳剂、悬浮液、气溶胶和吸入剂。可以将任何所期望的传统媒剂、助剂和任选存在的其它活性成分添加到配制物中。

优选的助剂来源于包含以下各物的群组：防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、助溶剂、维生素、着色剂、气味改进剂、成膜剂、增稠剂和保湿剂。

溶液和乳剂能够包含传统媒剂，例如溶剂、助溶剂和乳化剂，例如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油剂(具体地说，棉籽油、花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物。

乳剂可以不同形式存在。因此，其可以是例如油包水(W/O)型或水包油(O/W)型乳剂或微乳剂，或多重乳剂，例如水包油包水(W/O/W)型乳剂。

根据本发明的组合物还可以呈不含乳化剂的分散制剂形式。其可以是例如含水分散液或皮克林乳剂(Pickering emulsions)。

悬浮液可以包含传统媒剂，例如液体稀释剂，例如水、乙醇或丙二醇、悬浮介质(例如乙氧基化异十八烷醇、聚氧化乙烯山梨糖醇酯和聚氧化乙烯脱水山梨糖醇酯)、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂-琼脂和黄芪胶，或这些物质的混合物。

糊剂、软膏、凝胶和面霜可以包含传统媒剂，例如动物和植物脂肪、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或这些物质的混合物。

面部和身体用油剂可以包含传统媒剂，例如合成油剂，例如脂肪酸酯、脂肪醇、硅酮油、天然油(例如植物油和油性植物萃取物)、石蜡油、羊毛脂油，或这些物质的混合物。

喷雾剂可以包含传统推进剂，例如氯氟碳化物、丙烷/丁烷或二甲醚。

适用于肠胃外施药的本发明组合物包含一种或多种化合物与一种或多种化妆品上或药学上可接受的无菌等张水溶液或非水溶液、分散液、悬浮液或乳剂或无菌粉末的组合，所述无菌粉末可以在临使用之前复原成无菌可注射溶液或分散液，这些溶液可含有抗氧化剂、缓冲剂、使配制物对于预定接受者的血液具有等张性的溶质，或悬浮剂或增稠剂。能够维持适当的流动性，例如通过使用包衣材料，在分散液的情况下通过维持所需粒度以及通过使用表面活性剂来维持。这些组合物还可以含有适合的佐剂，例如润湿剂、乳化剂和分散剂。包含有等张剂也是被期待的。另外，通过包含吸收延迟剂可以实现可注射化妆品形式的延长吸收。

在一些情况下，为了延长作用时间，希望减缓在皮下或肌肉内注射中的吸收。这可以通过使用水溶性不良的结晶或无定形材料的液体悬浮液来实现。

活性剂/药物的吸收速率则取决于其溶出速率，溶出速率继而可以取决于晶体尺寸和结晶形态。或者，可以通过将活性组合物溶解或悬浮于油媒剂中来实现肠胃外施用的组合物的延迟吸收。通过在可生物降解聚合物中形成活性成分的微胶囊基质来制备可注射积存形式。根据活性成分与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，能够控制活性成分释放速率。还通过将药物截留于与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备积存可注射配制物。可以对可注射材料进行灭菌，例如经由细菌截留过滤器进行过滤。

本发明的组合物可以单位剂量或多剂量密封容器(例如安瓿和小瓶)提供，并且可以在冻干条件下储存，从而仅需在即将使用前添加无菌液体载剂，例如注射用水。即用型注射溶液和悬浮液可以从上述类型的无菌粉末、颗粒和片剂来制备。

在本发明中，术语“结晶形态”是指化合物的晶体结构。化合物可以以一种或多种结晶形态存在，其可以具有不同结构、物理、药理学或化学特征。不同结晶形态可以利用成核、生长动力学、聚结和断裂的变化来获得。当相变能量势垒被克服时，引起成核，从而允许颗粒从过饱和溶液中形成。晶体生长是化合物在现有的晶体表面上沉积而引起的晶体颗粒扩大。成核和生长的相对速率决定了所形成的晶体的尺寸分布。对于成核与生长，热力学驱动力是过饱和，过饱和定义为对热力学平衡的偏离。聚结是较大颗粒的形成，其经由两个或更多个颗粒(例如晶体)粘在一起且形成较大晶体结构来实现。

如本文所用，术语“水合物”是指分子复合物中含有水的呈固体或半固体形式的化合物。水相对于化合物通常以化学计算量存在。

如本文所用，“化妆品上或药学上可接受的盐”是指本文公开的化合物的衍生物，其中通过制备其酸或碱式盐来修饰所述化合物。化妆品上或药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性残基(例如胺)的无机或有机酸盐；酸性残基(例如羧酸)的碱金属或有机盐；等等。举例来说，此类盐包括以下各物的盐：氨、L-精氨酸、甜菜碱、苄苯乙胺(benethamine)、苄星青霉素(benzathine)、氢氧化钙、胆碱、丹醇(deanol)、二乙醇胺(2,2'-亚胺基双(乙醇))、二乙胺、2-(二乙氨基)-乙醇、2-氨基乙醇、乙二胺、N-乙基-葡糖胺、海卓胺(hydrabamine)、1H-咪唑、赖氨酸、氢氧化镁、4-(2-羟乙基)-吗啉、哌嗪、氢氧化钾、1-(2-羟基-乙基)-吡咯啶、氢氧化钠、三乙醇胺(2,2',2"-次氮基三(乙醇))、氨丁三醇、氢氧化锌、乙酸、2.2-二氯乙酸、己二酸、褐藻酸、抗坏血酸、L-天冬氨酸、苯磺酸、苯甲酸、2,5-二羟基苯甲酸、4-乙酰胺基-苯甲酸、(+)-樟脑酸、(+)-樟脑-10-磺酸、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、环己胺磺酸、癸酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙烷磺酸、2-羟基-乙烷磺酸、乙二氨四乙酸、甲酸、反丁烯二酸、龙胆酸、D-葡糖庚酸、D-葡萄糖酸、D-葡糖醛酸、谷氨酸、谷酰氨酸、戊二酸、2-氧代-戊二酸、甘油磷酸、甘氨酸、乙醇酸、己酸、马尿酸、氢溴酸、盐酸、异丁酸、DL-乳酸、乳糖酸、月桂酸、赖氨酸、顺丁烯二酸、(-)-L-苹果酸、丙二酸、DL-杏仁酸、甲烷磺酸、半乳糖二酸、萘-1,5-二磺酸、萘-2-磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟碱酸、硝酸、辛酸、油酸、乳清酸、乙二酸、棕榈酸、双羟萘酸(恩波酸(embonic acid))、磷酸、丙酸、(-)-L-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、癸二酸、硬脂酸、丁二酸、硫酸、鞣酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、对甲苯磺酸和十一碳烯酸。化妆品上或药学上可接受的其它盐能够使用金属阳离子形成，如铝、钙、锂、镁、钾、钠、锌等等。

本发明的化妆品上或药学上可接受的盐能够由本文公开的含有碱性或酸性部分的化合物通过传统化学方法来合成。一般来说，可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与足量的适当碱或酸在水中或在有机稀释剂(如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈或其混合物)中反应来制备此类盐。

设想本发明的化合物和组合物可以包括于化妆品或医药组合物中以用于体外和体内应用。

设想本发明的化合物和组合物(包括一种或多种表5或图130中所列的化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐)可以共同施用于受试者以实现本发明的皮肤色素沉着调节的目的。

还设想本发明的组合物可以包含一种或多种表5或图130中所列的化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。举例来说，本发明的组合物可以包含靛玉红或其化学类似物与马拉色菌素或其化学类似物的组合。

另外，设想本发明化合物包括马拉色氏霉菌属产生的化合物或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。另外，设想本发明的组合物和方法可以包括一种或多种马拉色氏霉菌属产生的化合物，或其化学类似物、结晶形态、水合物或药学上或化妆品上可接受的盐。举例来说，由马拉色氏霉菌属产生的或衍生的化合物包括(但不限于)图130中所示的化合物。

进一步设想，本发明的方法可以包括共同施用本发明的两种或更多种化合物和/或组合物以实现本文所述的皮肤色素沉着调节的目的。

共同施用的本发明化合物和组合物可以例如基本上同时或依次接触受试者。

按照多种功效标准(包括但不限于平均组织存活率、黑色素浓度、皮肤增亮、皮肤暗化、诱导黑色素细胞的细胞凋亡和调节芳烃(AhR)活性、黑色素生成或黑色素浓度)，含有一种或多种马拉色氏霉菌属衍生化合物或其化学类似物的本发明组合物相对于单独的组成化合物可以展现出协同效应。

本文所用的术语仅为了描述特定实施方式的目的，而不希望具有限制性。除非上下文另有明确规定，否则如说明书和权利要求书中所用，单数形式“一(a/an)”、“所述(the)”包括复数的提及物。

对于本文中记载的数值范围，明确涵盖其间的具有相同精确度的每个中间数。举例来说，当范围为6-9时，除了6和9外，还涵盖数字7和8；并且当范围为6.0-7.0时，明确涵盖数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9和7.0。

以下实施例是为了进一步说明本发明的方法而提供。这些实施例仅具有说明性，而不希望以任何方式限制本发明的范围。

使用例如Wille等人(2001)概述的程序分离出马拉色菌素。方案简要概述如下。

培养基

对由吐温80(30mL)、环己酰亚胺(0.5g)、氯胺苯醇(chloramphenicol)(0.05g)、琼脂(20g)和足以获得1000mL混合物的体积的水组成的培养基进行灭菌，并且与0.3％无菌过滤L-色氨酸(0.3g％的浓度)在50℃下混合。将10mL部分倒入10cm皮氏培养皿(Petri dish)中，并且使用0.1M HCl将pH调节到5.5。

培养糠秕马拉色菌以及分离出由糠秕马拉色菌产生的化合物

将糠秕马拉色菌涂抹在上述培养基上并且在30℃下培育14天。提纯皮氏培养皿的内容物并且用乙酸乙酯萃取12小时。在玻璃棉上过滤萃取物，蒸发到干燥，并溶解于甲醇中。随后以甲醇作为洗脱剂、通过Sephadex LH-20色谱来分级萃取物。使用甲苯:甲酸乙酯:甲酸(10:5:3)、通过制备型薄层色谱实现进一步分离。将主要区带分溶于水与乙酸乙酯之间。分析级分的目标活性。通过HPLC从目标级分中分离出化合物。

根据Wille等人(2001)所述的方案合成马拉色菌素。根据新颖合成方案以及Winston-McPherson等人(2014)所述的合成方案合成马拉色菌素的化学类似物。

使用所属领域的技术人员已知的筛选方案和新颖筛选方法评估有效的亮肤化合物。举例来说，通过如上文所述的酪氨酸酶生物分析来评估马拉色菌素和其化学类似物。使用涉及体外细胞与体内组织模型的其它筛选方案，包括芳烃受体(AhR)结合分析。

酪氨酸酶生物分析

酪氨酸酶生物分析如Wille等人(2001)所述进行。简单来说，将左旋多巴(L-DOPA)与酪氨酸酶混合。历时1分钟测量消光，指示有多巴醌(dopaquinone)形成。使用例如上文所论述的级分，将这些级分溶解于DMSO中，并直接添加到酪氨酸酶反应物中，以纯DMSO作为对照。酪氨酸酶抑制活性测量为相比于对照消光增加的降低。

芳烃受体结合分析

AhR结合分析是根据例如Song等人(2002)所述的方案进行的。简单来说，使用例如TnT快速耦联网织红细胞溶胞物系统反应(普洛麦格公司(Promega)，威斯康星州麦迪逊(Madison,WI))，在体外表达人类和鼠类AhR。利用如Karchner等人(1999)所述的基于蔗糖梯度的速度沉降来研究受体配体结合。

EROD分析

还使用所属领域的技术人员已知的乙氧基试卤灵-O-脱乙基酶(EROD)分析来评估本发明的化合物、组合物和配制物。(Donato等人，1993；Whyte等人，2000；Wille等人，2001)。

黑色素细胞的细胞凋亡分析

评估候选化合物对黑色素细胞的细胞凋亡诱导活性。在补充有人类黑色素细胞生长补充剂(HMGS)(赛默飞世尔科技公司(Thermo-Fisher Scientific)，马萨诸塞州沃尔瑟姆(Waltham,MA))的培养基254中或真皮细胞基础培养基(ATCC，弗吉尼亚州马纳萨斯(Manassas,VA))中培养人类表皮黑色素细胞。人类黑色素细胞生长培养基的其它组分能够包括(但不限于)胰岛素(5μg/ml)、抗坏血酸(50μg/ml)、L-谷氨酰胺(6mM)、肾上腺素(1.0μM)和氯化钙(0.2mM)。维持人类黑色素细胞培养物在37℃、5％CO

将候选化合物在DMSO中稀释且直接混合到黑色素细胞培养物中。使用等体积的纯DMSO作为对照。根据制造商说明书进行所属领域的技术人员已知的细胞毒性分析。本发明中使用的细胞毒性分析包括(但不限于)CellTox

使用评估细胞凋亡的其它方式，包括针对膜联蛋白V的FACS分析和针对半胱氨酸蛋白酶-9表达的蛋白质印迹。根据所属领域的技术人员已知的方法进行蛋白质印迹法。

小鼠异种移植物分析

根据所属领域中已知的方案产生人类皮肤的小鼠异种移植物模型。(Black等人，1985；Manning等人，1973；Reed等人，1973；Plenat等人，1992；Scott等人，1998；Otulakowski等人，1994)。小鼠异种移植物模型一经建立，即暴露于本发明的化合物，并且相较于对照，观察到色素沉着发生变化。使用所属领域的技术人员已知的多种色素沉着量表，包括(但不限于)Fitzpatrick皮肤分型测试和Taylor色素沉着过度量表，来评估皮肤色素沉着的变化。(Taylor等人，2005)。

人类分析

将本发明的化合物、组合物和配制物施加于人类，例如施加于人类皮肤上，并且与对照物进行比较。使用所属领域的技术人员已知的多种色素沉着量表，包括(但不限于)Fitzpatrick皮肤分型测试和Taylor色素沉着过度量表，来评估皮肤色素沉着的变化。

预期本发明的化合物和组合物将展现例如类似于马拉色菌素的酪氨酸酶抑制和AhR激动剂活性。预期本发明的化合物和组合物展现例如比马拉色菌素更强的酪氨酸酶抑制和更强的AhR激动作用。同样，预期本发明的某些化合物和组合物是有效性低于马拉色菌素的酪氨酸酶抑制剂和AhR激动剂。与更强效化合物相比，此类化合物、组合物和配制物可以具有更有利的毒性特征。

预期本发明的化合物和组合物将诱导黑色素细胞发生细胞凋亡，并调节黑色素细胞活性、黑色素产生、黑素体生物合成和/或黑素体转移到至少与马拉色菌素一样强。还考虑了本发明的某些化合物和组合物对这些生物过程的影响不如马拉色菌素强。与更强效物质相比，此类化合物和组合物可以具有更有利的毒性特征。

预期本发明的化合物和组合物至少与用于亮肤和改善色素沉着过度疾病所引起的色素沉着过度的马拉色菌素一样有效。另外预期本发明的化合物和组合物就例如半衰期和吸收而言将展现有利的药代动力学特征。某些化合物将展现较长半衰期，而其它将展现较短半衰期。类似地，某些化合物将展现不同吸收特征，其中一些化合物耗费较长时间被完全吸收，而其它耗费较少时间被完全吸收。

根据图2A中所示的流程合成马拉色菌素(“CV-8684”)和其环化衍生物吲哚并[3,2-b]咔唑(“CV-8685”)。

合成(2-碘-苯基)氨基甲酸叔丁酯，化合物1

在0℃下，历时40分钟向2-碘苯胺(25.0g，0.114mol)于四氢呋喃(250mL)中的溶液中缓慢添加LiHMDS(251.0mL，1M于THF中，0.251mol)，同时维持内部温度低于5℃。在0℃下搅拌30分钟之后，历时40分钟缓慢添加BOC酸酐(27.0g，0.125mol)于THF(50mL)中的溶液，同时维持内部温度低于5℃。使反应混合物升温到环境温度并搅拌1小时。添加饱和NH

合成化合物2

在环境温度下，将碘化铜(0.95g，10％mol)和PdCl

合成化合物3

向烘干的烧瓶中添加含PtCl

使用不同批次的化合物2(2.6g，0.01mol)重复此反应。将两批粗化合物合并且通过柱色谱(10％乙酸乙酯/己烷)提纯。获得呈浅棕色固体状的化合物3(3.8g，55％)。

合成化合物4

在环境温度下，将碳酸钾(4.6g，0.0329mol)添加到化合物3(3.8g，0.0109mol)于甲醇(150mL)和水(50mL)混合物中的溶液中。将所得悬浮液加热到回流过夜。反应完成之后(使用20％乙酸乙酯/己烷，通过TLC监测)，将反应混合物冷却到环境温度，真空浓缩溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(200mL)中并且用水和盐水洗涤，随后干燥(硫酸钠)，过滤，真空浓缩溶剂，得到棕色固体。通过柱色谱(20％乙酸乙酯/己烷)提纯粗化合物。获得呈橙色固体状的化合物4(2.2g，81％)。

合成化合物——马拉色菌素(CV-8684)

在0℃、在氩气下，向干燥的100mL双颈圆底烧瓶中添加二甲基甲酰胺(20mL)。历时10分钟缓慢添加POCl

HPLC纯度：97.8％(面积％)。

合成化合物吲哚并[3,2-b]咔唑(CV-8685)

在环境温度下，将浓HCl(0.25mL)添加到马拉色菌素(0.75g)于四氢呋喃(120mL)中的溶液中。将所得混合物加热到回流过夜。反应完成之后(使用40％乙酸乙酯/己烷，通过TLC监测)，将反应混合物冷却到环境温度并且搅拌1小时。过滤固体，用四氢呋喃(20mL)洗涤，干燥，得到浅黄色固体吲哚并[3,2-b]咔唑(CV-8685)(0.55g，78％)。

HPLC纯度：96.22％(面积％)。

根据图2B中所示的流程合成化合物I(“CV-8686”)和化合物IV(“CV-8687”)。

合成化合物5

向烘干的烧瓶中添加含PtCl

合成化合物6

在环境温度下，将碳酸钾(7.4g，0.054mol)添加到化合物5(6.5g，0.018mol)于甲醇(150mL)和水(50mL)混合物中的溶液中。将所得悬浮液加热到回流过夜。反应完成之后(使用20％乙酸乙酯/己烷，通过TLC监测)，将反应混合物冷却到环境温度，真空浓缩溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(200mL)中并且用水和盐水洗涤，然后干燥(硫酸钠)，过滤，真空浓缩溶剂，得到棕色固体。粗化合物通过柱色谱(20％乙酸乙酯/己烷)提纯。获得呈橙色固体状的化合物6(3.3g，72％)。

合成化合物——化合物I(CV-8686)

在0℃、在氩气下，向干燥的100mL双颈圆底烧瓶中添加二甲基甲酰胺(20mL)。历时10分钟缓慢添加POCl

HPLC纯度：97.01％(面积％)。

合成化合物——化合物IV(CV-8687)

在环境温度下，将浓HCl(0.3mL)添加到化合物I(1.0g)于四氢呋喃(125mL)中的溶液中。将所得混合物加热到回流过夜。反应完成之后(使用40％乙酸乙酯/己烷，通过TLC监测)，将反应混合物冷却到环境温度并且搅拌1小时。过滤固体，用四氢呋喃(20mL)洗涤，干燥，得到化合物IV(CV-8687)浅黄色固体(0.84g，89％)。

HPLC纯度：98.4％(面积％)。

根据图2C中所示的流程合成化合物II(“CV-8688”)。

合成化合物7

在环境温度下，将碘化铜(0.53g，10％mol)和PdCl

合成化合物8

向烘干的烧瓶中添加含PtCl

合成化合物9

在环境温度下，将碳酸钾(3.8g，0.027mol)添加到化合物8(3.3g，0.0091mol)于甲醇(75mL)和水(25mL)混合物中的溶液中。将所得悬浮液加热到回流过夜。反应完成之后(使用20％乙酸乙酯/己烷，通过TLC监测)，将反应混合物冷却到环境温度，真空浓缩溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(200mL)中，用水和盐水洗涤，随后干燥(硫酸钠)，过滤，真空浓缩溶剂，得到棕色固体。粗化合物通过柱色谱(20％乙酸乙酯/己烷)提纯。获得呈橙色固体状的化合物9(2.1g，88％)。

合成化合物——化合物II(CV-8688)

在0℃、在氩气下，向干燥的100mL双颈圆底烧瓶中添加二甲基甲酰胺(20mL)。历时10分钟缓慢添加POCl

HPLC纯度：98.94％(面积％)。

不同处理之后的典型细胞形态如图5A-5K、6A-6K、7A-7K、8A-8K、9A-9K、10A-10K、11A-11K和12A-12K所示。在处理6小时时，100μM的CV-8684和CV-8688以及星形孢菌素对两种细胞系的形态产生了显著的影响。CV-8685似乎仅在100μM下影响WM115。

材料和试剂

膜联蛋白V-FITC分析试剂盒购自Beyotime Biotechnology，RPMI 1640培养基和杜尔贝科氏改进的伊格尔培养基(“DMEM”)购自Gibco，胎牛血清(“FBS”)购自英杰公司，稳定化抗生素抗霉菌溶液(100x)购自西格玛，并且0.25％胰蛋白酶-EDTA(1X)、酚红购自英杰公司。

细胞培养

MeWo(

研究概述

在细胞凋亡的中间阶段，磷脂酰丝氨酸(“PS”)从内部转位到细胞膜外层，使得PS暴露于细胞外环境，在细胞外环境中能够检测到PS。高度荧光的膜联蛋白V偶联物为研究PS的外部化提供了快速且可靠的检测方法。

在第一组研究期间，从100μM开始，以3倍稀释度，用10种剂量的测试化合物处理MeWo与WM115细胞。星形孢菌素用作阳性对照。6小时处理之后，利用膜联蛋白V分析来评估细胞凋亡。所评估的测试化合物是CV-8684、CV-8685、CV-8686、CV-8687和CV-8688。

分析程序

对于细胞接种来说，收集细胞且使用

为了制备化合物源培养板，将各种测试化合物溶解于DMSO中，得到10mM储备液。使用EVO200

对于化合物处理而言，使用液体处置器Echo550(LabCyte有限公司)从化合物源培养板中转移40nL化合物到384孔培养板中。6小时培育之后，从培育箱移出培养板进行检测。

对于初步膜联蛋白V分析来说，从培育箱中移出培养板并且允许其在室温下平衡15分钟。然后去除培养基。向每个孔中添加20μL预混合的膜联蛋白V-FITC和Hoechst33342染料工作溶液。随后在室温下培育细胞20分钟。密封培养板，以1,000RPM离心1分钟以去除气泡。然后使用Acumen eX3读板仪读板。根据下式计算相对活性：活性(％)＝100％×(计数

结果

在上文所论述的初步筛选中，CV-8688使MeWo细胞的膜联蛋白V染色明显增加，EC

研究概述

为了进一步研究测试化合物对细胞凋亡的影响，对MeWo与WM115细胞均执行涵盖细胞凋亡的不同阶段的多次读出。两种细胞类型均用3种剂量(100μM、10μM和1μM)的测试化合物加以处理。星形孢菌素用作阳性对照。所期望的处理期(6、24、48或72小时)之后，通过测量暴露于测试化合物之后的展现出膜联蛋白V结合的细胞的百分比来评估细胞凋亡。所评估的测试化合物是CV-8684、CV-8685和CV-8688。

分析程序

如上文所论述进行细胞接种，但有以下例外：用于6小时和24小时检测的最终细胞密度是4,000个细胞/孔，而48小时和72小时检测则使用2,000个细胞/孔。每个时间点制备384孔透明底培养板(Corning 3712)和实心白色底培养板(Corning 3570)。培养板如上文所论述培育。

为了制备化合物源培养板，将各种测试化合物溶解于DMSO中，得到10mM储备液。通过10倍稀释到1mM和0.1mM来产生两种其它浓度。星形孢菌素用作阳性对照，而1％DMSO用作媒剂(阴性)对照。化合物源培养板在室温下以1,000RPM旋转1分钟，使用培养板摇动器搅拌2分钟。

使用Echo550液体处置器从化合物源培养板中转移400nL测试化合物到384孔培养板中。6、24、48和72小时之后，从培育箱移出培养板进行检测。

对于膜联蛋白V分析来说，从培育箱中移出培养板，并且在室温下平衡15分钟。去除培养基并且用PBS洗涤细胞两次。向每个孔中添加20μL预混合的膜联蛋白V-FITC工作溶液。在室温下培育细胞20分钟。使用Acumen eX3读板以便对FITC阳性细胞数目计数。相对活性根据下式计算：相对活性(％)＝100％×(计数

结果

CV-8684处理MeWo与WM115细胞6小时之后，在最高测试浓度下诱导细胞凋亡。CV-8685处理WM115细胞24小时时，显示诱导效应，而处理48小时时，似乎对两种细胞类型均诱发细胞凋亡。最后，CV-8688在处理6小时内，以剂量依赖性方式对两种细胞类型均显示诱导效应。(图4A-4L)。

分析程序

对于

结果

CV-8684对所测试的两种细胞系的细胞存活率均显示剂量依赖性抑制，但是对MeWo细胞的抑制效应似乎更强。CV-8685仅在处理24小时之后，以剂量依赖性方式对WM115细胞存活率展现抑制效应。CV-8688以剂量依赖性方式抑制两种细胞类型的存活率。阳性对照物星形孢菌素在处理24小时之后，对两种细胞系的细胞存活率发挥100％抑制。(图13A-13K)。

研究概述

LDH分析定量地测量从受损细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶(“LDH”)，所述乳酸脱氢酶是细胞毒性和细胞溶解的生物标志物。

分析程序

CytoTox-ONE

对于LDH释放分析来说，从培育箱中移出培养板并且在室温下平衡15分钟。随后，培养板以1,000RPM离心1分钟。将20μL细胞培养基转移到新的384孔黑色实心板中。然后向每个孔中添加20μL的CytoTOX-ONE

结果

在72小时培育之后，CV-8684不诱导任一种细胞系的显著释放。处理24小时之后，CV-8685对WM115释放LDH显示出剂量依赖性的诱导效应，但对MeWo细胞则不然。CV-8688在最高测试浓度下诱导LDH释放。(图14A-14L)。

分析程序

HepG2-AhR-Luc细胞购自Pharmaron，One-Glo荧光素酶分析系统购自普洛麦格公司，DMEM购自Hyclone，青霉素/链霉素购自Solabio。

用于稳定转染的HepG2细胞的培养基是通过用高葡萄糖和L-谷氨酰胺以及10％FBS补充DMEM来制备的。

在T-75烧瓶中、在37℃、5％CO

经培育的细胞用5mL PBS冲洗。将PBS抽吸掉，向烧瓶中添加1.5mL胰蛋白酶，并且在37℃下培育细胞约5分钟或直至细胞脱离且漂浮。通过添加过量的含血清培养基来使胰蛋白酶灭活。

将细胞悬浮液转移到锥形管中并且以120g离心10分钟以使细胞集结。将细胞以恰当密度再悬浮于接种培养基中。将40μL细胞转移到384孔培养板(5×10

然后，制备测试化合物和奥美拉唑阳性对照物的储备溶液。使用Echo550将40nL化合物溶液转移到分析板中。然后将培养板放回到培育箱中进行化合物处理。

随后，在处理24小时之后，从培育箱中移出培养板并且允许在环境温度下冷却。将与培养基的等量的30μL的One-Glo试剂添加至每个孔中。使细胞溶解至少3分钟，然后用光度计测量。

利用非线性回归分析，通过XLfit将剂量响应作图，并计算EC

结果

AhR-荧光素酶分析结果显示于图15A-15F中。

研究概述

本研究的目的是评估在后续研究中，根据剂量选择进行重复暴露之后，测试物对MelanoDerm

此研究中将使用MatTek公司(马萨诸塞州亚什兰)提供的MelanoDerm

本研究的实验设计由以下组成：如果可能则测定纯净测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH，以及重复暴露之后用决定性分析测定相对组织存活率。MelanoDerm

材料

MelanoDerm

分析程序

测试物通常以纯净形式测试或按照赞助商说明(参见方案附件1)来测试。将十微升(10μL)或25μL的各种测试物直接施加于组织上以便覆盖上表面。视测试物的性质(液体、凝胶、面霜、泡沫等)而定，可能需要使用给药装置、筛网或其它辅助手段将测试物均一展布于组织表面上。

给药当天，使用适当体积的EPI-100-LLMM(或替代溶剂，如在溶解性测试期间所确定)将各种测试物稀释至少200倍。每次给药时，在EPI-100-LLMM中制备新鲜稀释液。根据上述溶解性评估来确定为了制备给药溶液而进行的最终稀释度，并在研究工作手册上记录。

在EPI-100-LLMM中稀释为0.5％(v/v)的DMSO用作媒剂对照，基于测试物和分析对照所用的相同程序，施用于组织(10μL和25μL剂量)。

在7天试验期间，每48小时(在距离前一次处理的48±2小时时间范围内)将测试物局部施加于MelanoDerm

如果可能，则测定纯净液体测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH。使用pH纸测定pH(例如用于估测的pH范围为0-14，和/或用于测定较精确值的pH范围为5-10)。较窄范围的pH纸上的典型pH增量是约0.3到0.5pH单位。pH纸上的最大增量是1.0pH单位。

决定性分析将包括阴性对照和阳性对照。标示为分析阴性对照的MelanoDerm

需要评估各种测试物直接还原MTT的能力。在如下文所述的MTT添加培养基中制备1.0mg/mL MTT溶液。将约25μL测试物添加到1mL MTT溶液中，在黑暗中、在37℃±1℃下培育混合物一至三个小时。同时测试阴性对照物：25μL的无菌去离子水。如果MTT溶液颜色变成蓝色/紫色，则推测测试物已经将MTT还原。水不溶性测试材料可以显示仅在测试物与培养基之间的界面处的直接还原(暗化)。

测试物的MTT直接还原测试可以预先在独立研究中进行。在此类情况下，MTT直接还原测试结果可以用于此特异性研究并且将参考初始研究。

组织暴露：在开始培养之后的至少16小时，使用数码相机对两个MelanoDerm

在开始培养之后的至少16小时，将组织移到含有0.9mL新制、预升温的EPI-100-LLMM的新6孔培养板上。在7天时间范围内进行试验。两个组织在第一天局部处理，并且每48小时(在距离前一次处理48+/-2小时的时间范围内)，分别用10和25微升各种测试物处理。培养基每日更新(在距离前一次馈加的24+/-2小时的时间范围内)；将组织移到含有0.9mL新制、预升温的EPI-100-LLMM的新6孔培养板中。

两个组织将在第一天局部处理，并且每48小时(在距离前一次处理的48+/-2小时的时间范围内)分别用25μL阳性和阴性对照物处理。培养基每日更新(在距离前一次馈加的24+/-2小时的时间范围内)；将组织移到含有0.9mL新制、预升温的EPI-100-LLMM的新6孔培养板中。组织在含有5±1％CO2的增湿空气气氛中、在37±1℃(标准培养条件)下培育适当的暴露时间。

给药当天，首先使用约500μL CMF-DPBS轻轻地冲洗MelanoDerm

在7天试验结束时，使用数码相机对给予阴性/溶剂或阳性对照物，和经各种测试物处理的MelanoDerm

MTT分析：将制备的MTT于PBS中的10X储备液(在分批制备时过滤)解冻，用温热的MTT添加培养基稀释以在使用前不超过两小时产生1.0mg/mL溶液。将三百微升的MTT溶液添加到预标记的24孔培养板的各标示孔中。

在暴露时间之后，标示为MTT分析的每个MelanoDerm

在3±0.1小时之后，将MelanoDerm

在其中测试物显示可还原MTT的情况下，只有在冲洗之后保持结合到组织、从而产生假MTT还原信号的测试物存在问题。为了证明可能的残余测试物不具有直接还原MTT的作用，在决定性分析中进行功能检查，以表明测试材料不结合至组织和产生假MTT还原信号。

为了确定残余测试物是否具有直接还原MTT的作用，使用冷冻杀灭的对照组织。在IIVS，通过将未处理的MelanoDerm

如果在经测试物处理的杀灭对照物中观察到很少MTT还原或未观察到MTT还原，则在测试物处理的存活组织中观察到的MTT还原可能归因于活细胞。如果在经处理的杀灭对照物中存在明显的MTT还原(相对于经处理的存活组织中的量)，则必须考虑促成化学还原的其它步骤或可以认为测试物在这一系统中是不可测试的。如下文所述分析来自杀灭的对照的OD550值。

捕获原始吸光度数据并且作为打印文档保存，并且输入Excel电子表格中。将计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从阴性对照组的平均OD550值中减去，来确定阴性对照组的平均OD550校正值。通过从每一者中减去空白孔的平均OD550值来确定个别测试物暴露和阳性对照物暴露的OD550校正值。使用Excel电子表格进行所有计算。虽然所论述的算法是为了计算处理组水平的最终终点分析而执行，但是能够将相同计算应用于个别重复实验。

校正的测试物暴露OD550＝测试物暴露OD550-空白平均OD550

如果使用杀灭对照物(KC)，则执行以下额外计算以对测试物残余物直接还原的MTT的量进行校正。从每一个经测试物处理的杀灭对照物的原始OD550值中减去经阴性对照物处理的杀灭对照物的原始OD550值，以确定经测试物处理的杀灭对照物的OD550净值。

每种测试物KC的净OD550＝测试物KC的原始OD550-阴性对照物KC的原始OD550

OD550净值表示由于测试物残余物在特定暴露时间直接还原而引起的还原的MTT的量。一般来说，如果OD550净值大于0.150，则从经处理的存活组织的OD550校正值中减去MTT还原的净数量，以获得最终的OD550校正值。然后利用这些最终OD550校正值确定对照组存活率的百分比。

最终校正的OD550＝校正的测试物OD550(存活)-测试物(KC)净OD550

最后，产生对照组计算的以下百分比：

存活率％＝[(测试物或阳性对照物的最终OD550校正值)/(阴性对照物的平均OD550校正值)]×100

结果

MelanoDerm

分析程序

化合物：化合物将由研究赞助商以母储备液(MS)溶液的方式提供，其中化合物以在水/PBS或DMSO中的最高溶解浓度存在。

收集胚的标准程序：通过天然配对或使用大规模胚生产系统(MEPS，水生栖息地)产生Phylonix AB斑马鱼。每个雌性斑马鱼将产生约50条斑马鱼。在28℃鱼浸液中维持斑马鱼。清洗斑马鱼(去除死斑马鱼)，并且根据发育阶段来分类。由于斑马鱼从所附着的卵黄囊接收滋养，因此生育后的6天(dpf)无需喂食。

化合物溶解性：将母储备液(MS)(使用最高浓度)在纯DMSO中稀释到亚储备溶液(SS)，即：10、50、100、200、300mM等。将Phylonix提供的鱼浸液[每升去离子水存在200mgInstant Ocean Sea盐(Aquarium Systems)；pH 6.6-7.0，使用2.5mg/升的中性调节剂维持(Seachem实验室有限公司)；电导率850-950μS]以4ml/容器分配到测试容器中。

为了产生测试化合物溶液(TS)，向鱼浸液中直接添加4μl的各种SS。实例：添加到鱼浸液中的4μl的10mM SS将产生10μM TS；最终DMSO浓度将是0.1％。或者，为了获得相同的最终TS和DMSO浓度，可以将10μl SS添加到每个容器10ml的鱼浸液中。对于能够耐受高达1％DMSO的分析来说，可以使用40μl SS产生100μM TS。如果使用10ml鱼浸液，则应该按比例增加SS体积，以获得相同的最终TS和DMSO浓度。溶液将在28℃下培育针对每种分析所指定的时间长度，并且每日目测检查沉淀物的存在。

最大可耐受浓度(MTC)：MTC(LC10)用作化合物致死率的标准准则，其使用10种化合物浓度测定。确定可溶性化合物最高浓度之后，研究赞助商将选择10种浓度。

将生育后约2天的三十条具有绒毛膜的Phylonix野生型AB斑马鱼分配到6孔微量培养板的各孔中，所述孔含有每孔4ml鱼浸液和浓度在0.1-1％范围内的DMSO，此视化合物溶解性而定。

首先测试10种浓度(即：0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100和500μM(或高达化合物溶解性所允许的浓度)。必要时，测试其它较高(高达2000μM)或较低(低至0.001μM)浓度。

斑马鱼将在黑暗中、在28℃下用各种浓度的测试化合物培育3天。未处理以及经0.1-1％DMSO处理的斑马鱼将用作分析和媒剂对照。为了计算致死率百分比，在处理之后，每日将对死斑马鱼数目计数和去除。在生育后第5天，对死去的动物计数，以计算致死率％(＝死斑马鱼总数/30)。注意，如果死斑马鱼分解，则将通过活斑马鱼数目的计数来推导死斑马鱼数目。

为了估测MTC，通过使用EXCEL软件对致死率％相对于浓度作图来产生致死率曲线。为了获得MTC的平均值和SD，实验将进行3次。

目测评估化合物对斑马鱼皮肤色素沉着的影响：斑马鱼皮肤色素细胞包括来源于神经脊细胞的黄色素细胞、虹色素细胞和载黑素细胞(黑色素细胞)。斑马鱼中的分化皮肤色素前体细胞在生育后约第24天表达色素。本研究的焦点是表达黑色素(皮肤表面上的黑色色素)的黑色素细胞。黑色素细胞最初在背侧头部区域中显现为黑色的小斑块。随着斑马鱼发育，斑块数目增加并融合而形成延伸到尾区的色带。相比之下，突变型白化体斑马鱼展现稀疏的皮肤色素沉着。在生育后第2天施用化合物，以评估化合物是否阻滞胚胎色素沉着的连续过程，胚胎色素沉着的连续过程截至生育后第5天完成。测试每种化合物的三种浓度：MTC、50％MTC和25％MTC。

用各个浓度的化合物处理生育后第2天的三十条自孵出的Phylonix野生型AB斑马鱼达3天。未处理以及经0.1％DMSO处理的斑马鱼将用作对照。阳性对照：苯硫脲(PTU，0.03％)。

每日使用解剖光学显微镜目测检查斑马鱼；将经化合物和PTU处理的斑马鱼与未处理和经媒剂处理的对照斑马鱼进行比较。每日对展现出色素沉着减少的斑马鱼的数目计数，并且以测试动物的百分比表示；提供代表性影像。为了鉴别出针对减少的色素沉着的最优化合物浓度和处理时间，通过对展现出减少的皮肤色素沉着的斑马鱼％相对于时间(dpf)作图来产生动力学曲线。利用费雪精确检验(Fisher's exact test)来确定化合物效应是否显著(P<0.05)。

用0.1、1和3μM处理之后，针对化合物对斑马鱼皮肤色素沉着的影响进行额外的目测评估。用各个浓度的化合物处理生育后第2天的三十条自孵出的Phylonix野生型AB斑马鱼达3天。未处理以及经0.1％DMSO处理的斑马鱼用作对照。阳性对照：苯硫脲(PTU，0.003％)。每日使用解剖光学显微镜目测检查斑马鱼；将经化合物和PTU处理的斑马鱼与未处理和经媒剂处理的对照斑马鱼进行比较。

在生育后第5天，对展现出色素沉着减少的斑马鱼的数目计数并且以测试动物的百分比表示；提供代表性影像。为了鉴别出针对减少的色素沉着的最优化合物浓度和处理时间，通过对展现出减少的皮肤色素沉着的斑马鱼％相对于浓度作图来产生动力学曲线。将利用费雪精确检验来确定化合物效应是否显著(P<0.05)。

定量化合物对斑马鱼皮肤色素沉着的影响：基于目测评估结果，我们利用最优条件(浓度、化合物处理时间)来定量化合物对斑马鱼皮肤色素沉着的影响。

用最优浓度的化合物处理根据目测评估结果确定的处于最优阶段的二十条Phylonix野生型AB斑马鱼。未处理以及经0.1％DMSO处理的斑马鱼将用作对照。阳性对照：苯硫脲(PTU，0.03％)。

使用SPOT相机捕获完整斑马鱼的2X背视图影像。使用Adobe Photoshop选择功能将背侧头部和躯干区域定义为目标区域(ROI)。将使用Photoshop突显功能突出显示ROI中的黑色皮肤色素沉着。像素中的总色素信号(PS)将使用Photoshop直方图功能来测定。

如果化合物影响斑马鱼生长，则身体长度(L)和躯干宽度(W)将更小，这会影响ROI面积和最终PS。因此，我们使用FS＝PS/LxW将最终信号(FS)的测量结果归一化。

预期未处理以及经媒剂处理的斑马鱼展现出类似FS，以证明媒剂不具有影响。预期经PTU处理的斑马鱼展现出低FS，从而验证了分析。将化合物处理的斑马鱼与媒剂处理的对照斑马鱼进行比较。

为了确定化合物影响是否显著(P<0.05)，利用史都登氏t检验(Student's ttest)将化合物处理的斑马鱼的平均FS与媒剂处理的斑马鱼的平均FS进行比较。

用0.5和1.5μM浓度的化合物处理之后，针对化合物对斑马鱼皮肤色素沉着的影响进行额外的定量。

用0.5和1.5μM浓度的化合物处理生育后第2天的二十条Phylonix野生型AB斑马鱼。未处理以及经0.1％DMSO处理的斑马鱼将用作对照。阳性对照：苯硫脲(PTU，0.003％)。

使用SPOT相机捕获完整斑马鱼的2X背视图影像。使用Adobe Photoshop选择功能将背侧头部区域定义为目标区域(ROI)。使用Photoshop突显功能突出显示ROI中的黑色皮肤色素沉着。使用Photoshop直方图功能测定像素中的总色素信号(PS)。

如果化合物影响斑马鱼生长，则身体长度(L)将更短且和躯干宽度(W)将更小，这会影响ROI面积和最终PS。因此，我们使用FS＝PS/LxW将最终信号(FS)测量结果归一化。

预期未处理和经媒剂处理的斑马鱼展现出类似FS，以证明媒剂无影响。预期PTU处理的斑马鱼展现出低FS，从而验证了分析。将化合物处理的斑马鱼与媒剂处理的对照斑马鱼进行比较。

为了确定化合物影响是否显著(P<0.05)，利用史都登氏t检验将化合物处理的斑马鱼的平均FS与媒剂处理的斑马鱼的平均FS进行比较。

结果

暴露于化合物II的斑马鱼的目测评估结果显示于图18A-18F以及图19A-19F中。概述研究的目测评估部分的结果的图表显示于图20中。

对暴露于化合物II的斑马鱼的目标区域的定量评估和结果显示于图21A-21E以及图22A-22B中。

在DMSO和培养基中制备100μM测试化合物。在室温下培育溶液2小时且使用LC-MS分析。利用峰面积评估溶剂中残余的化合物。

结果

LC-MS结果显示于图23A-23J中。结果表明2小时培育之后，所述化合物在培养基中是稳定的。

根据美国专利申请第15/455,932号(作为美国专利公开第2017/0260133A1号公开)所述的方案，合成马拉色菌素(CV-8684)、其环化衍生物吲哚并[3,2-b]咔唑(CV-8685)、化合物I(CV-8686)、化合物IV(CV-8687)、化合物II(CV-8688)和马拉色菌素前体，这两个文献均以引用的方式全部并入本文中。

合成化合物C(CV-8802)

合成化合物10

如图24A中所示，在0℃下，历时30分钟向2-碘-4-甲基苯胺(10g，0.0429mol)于四氢呋喃(200mL)中的溶液中缓慢添加NaHMDS(94.42mL，1M于THF中，0.0944mol)，同时维持内部温度低于5℃。在0℃下搅拌30分钟之后，历时30分钟缓慢添加BOC酸酐(10.29g，0.0472mol)于THF(50mL)中的溶液，同时维持内部温度低于5℃。将反应混合物升温到室温并且搅拌1小时。添加饱和NH

合成化合物11

在0℃下，将溶解于DMF(100mL)中的丁-3-炔-2-醇(25mL，0.319mol)添加到含有NaH(19.2g，0.478mol)的DMF(100mL)中。历时30分钟将DMS(45.2mL，0.478mol)添加到反应混合物中且在0℃下搅拌30分钟。使反应混合物升温到室温且搅拌1小时，随后冷却到10℃且历时10分钟添加乙酸(19.2mL，0.319mol)且搅拌1小时。反应混合物用水(600mL)稀释且用乙醚(400mL)萃取。分离出有机层并且用无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。在64-68℃下蒸馏出所期望的化合物，获得7gm纯化合物11(23％产率)。

合成化合物12

在室温下，向化合物10(6.0g，0.018mol)和化合物11(1.81g，0.0216mol)于三乙胺(100mL)中的脱气溶液中添加碘化铜(0.34g，0.0018mol)和PdCl

合成化合物13

向圆底烧瓶中装入含PtCl

合成化合物14

在环境温度下，将碳酸钾(2.3g，0.0166mol)添加到化合物13(2.0g，0.0055mol)于甲醇(30mL)和水(10mL)混合物中的溶液中。将所得悬浮液加热到回流隔夜。将反应混合物冷却到环境温度，真空浓缩溶剂。将残余物溶于乙酸乙酯(100mL)中并且用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后干燥(硫酸钠)，过滤，真空浓缩溶剂，得到棕色固体。粗化合物通过柱色谱(20％乙酸乙酯/己烷)提纯。获得呈灰白色固体状的化合物14(0.8g，54％)。

合成化合物C

在0℃、在氩气下，向干燥的100mL双颈圆底烧瓶中添加二甲基甲酰胺(5mL)。历时10分钟缓慢添加POCl

在一些实验中，此方案的结果是包含化合物C、化合物C1化合物C2中的一种或多种的组合物(“未知组合物”)。

合成化合物K(CV-8803)

如图24B中所示，将马拉色菌素(40mg，0.146mmol)于MeOH(5mL)中的溶液冷却到0℃。在0℃下向此溶液中添加NaBH

合成化合物A(CV-8804)

如图24C中所示，将化合物II(120mg，0.417mmol)于MeOH(5mL)中的溶液冷却到0℃。在0℃下向此溶液中添加NaBH

合成化合物E(AB12508)

如图24D中所示，向含有吲哚1(10g，85.4mmol)的MeOH(350mL)中添加环丙基醛2(2.5g，35.6mmol)，随后添加1N HCl水溶液(178mL)并且加热至70℃，维持1小时。去除溶剂且用DCM萃取(2次)，经Na

在0℃下，将含有前述混合物(1.44g，5.0mmol)的DMF(10mL)添加到含有POCl

[M+H]+＝315；[M-H]-＝313.

合成化合物A5(CV-8819)

合成化合物3

如图24E中所示，将1-(苯基磺酰基)吲哚(1，1gm，0.00389mol)于THF(20mL)中的溶液冷却到-78℃。向其中添加t-BuLi(2.52mL，0.00428mol)并且搅拌30分钟。将反应混合物缓慢升温到0℃。达到0℃之后，将反应混合物冷却回到-78℃。历时30分钟向此混合物中添加N-BOC-3-甲酰基吲哚(0.953gm，0.00389mol)于THF(5mL)中的溶液。使反应混合物升温到0℃并且在0℃下用水(5mL)淬灭。用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤反应混合物且用乙酸乙酯(250mL)萃取。分离出有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗反应混合物通过柱色谱(0-15％乙酸乙酯/己烷)提纯。将所期望的级分合并且浓缩，获得1.7克呈灰白色固体状的纯化合物3(产率87％)。

合成化合物4

在室温下向化合物3(500mg，0.996mmol)于DMSO(5mL)中的溶液中添加IBX(334.6mg，1.195mmol)且搅拌18小时。用乙酸乙酯(25mL)稀释反应混合物并且用水(2×25mL)和盐水(25mL)洗涤。分离出有机层并且经无水硫酸钠干燥，过滤并且浓缩(获得444mg，产率89％)。粗反应混合物足够纯，并且用于下一步骤而不纯化。

合成化合物5

使化合物4(110mg，0.22mmol)、TBAF(1M于THF中)(220μL，0.22mmol)和THF(3mL)的溶液回流1小时并且冷却到室温。通过旋转蒸发仪去除挥发物，用乙酸乙酯(25mL)稀释并且用水(25mL)和盐水(25mL)洗涤。分离出有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗反应混合物通过柱色谱(0-10％乙酸乙酯/己烷)提纯。将所期望的级分合并，浓缩，获得60mg呈灰白色固体状的纯化合物5(产率75％)。

合成化合物6

将化合物5(500mg，1.388mmol)、CMMC(472.2mg，2.79mmol)于二氯乙烷(10mL)中的溶液加热到50℃维持30分钟。将反应混合物冷却到室温且倒入冰冷水(50mL)中，用0.5MNaOH(15mL)和盐水(25mL)洗涤且用二氯甲烷(25mL)萃取。分离出有机层并用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗反应混合物通过柱色谱(0-20％乙酸乙酯/己烷)提纯。将所期望的级分合并，浓缩，获得198mg呈灰白色固体状的纯化合物6(产率36.5％)。

合成化合物A5

将化合物6(198mg，0.5103mmol)溶解于甲醇(5ml)中。向此溶液中添加K

合成化合物H(AB12509)

如图24F中所示，在-78℃下，将正丁基锂(2.5M于己烷中，5.5mL，13.7mmol)逐滴添加到1-苯基磺酰基吲哚2(3.05g，11.9mmol)于无水THF(75mL)中的溶液。在室温下搅拌溶液1小时之后，将溶液再次冷却到-78℃，并且缓慢添加含3-甲酰基吲哚1(3.35g，13.7mmol)的无水THF(45mL)。将反应物升温到室温过夜。然后，添加MeI(15eq，11.1mL)并且使反应混合物升温到50℃，维持9小时。用H

向双吲哚3(2g，3.9mmol)于THF(20mL)中的溶液中添加TBAF(1M于THF中，5.9mL，1.5eq)，加热到70℃维持14小时。用饱和NH

在室温下，历时1.5小时将前述粗物质缓慢添加到POCl

将双吲哚5(350mg)于MeOH:H

合成化合物B(CV-8877)

合成化合物7

如图24G中所示，将化合物II(1gm，0.0034mol)于THF(10mL)中的溶液冷却到0℃。向此溶液中添加BOC酸酐(1.51gm，0.0069mol)和DMAP(848mg，0.0069mol)并且在0℃下搅拌。将反应混合物升温到室温并且搅拌15小时。通过旋转蒸发仪去除挥发物。用乙酸乙酯(100mL)稀释残余物且用1N HCl(50mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)和盐水(50mL)洗涤。分离出有机层并且用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗反应混合物通过柱色谱(0-10％乙酸乙酯/己烷)提纯。将所期望的级分合并，浓缩，获得1.4gm呈灰白色固体状的纯化合物7(产率83％)。

合成化合物8

将化合物7(250mg，0.512mmol)于t-BuOH(10mL)中的溶液冷却到0℃。向此溶液中添加2-甲基-2-丁烯(10mL)，随后添加NaClO

合成化合物9

在0℃下，向化合物8(100mg，0.198mmol)于丙酮(10mL)中的溶液中添加K

合成化合物B

将化合物9(70mg，0.135mmol)溶解于甲醇(5ml)中。向此溶液中添加K

合成化合物B10

如图24H中所示，将化合物8(21mg，0.041mmol)溶解于甲醇(3ml)中。向此溶液中添加K

合成AB11644

如图24I中所示，向吲哚1(1.0g，8.54mmol)于CH

[M-H]

合成O52(AB12976)

如图24J中所示，在0℃下，向化合物1(3.8g)于DCM(38mL)中的溶液中添加TEA、DMAP，然后添加Boc

向化合物2(6.6g，25.7mmol，1.0eq)于丙酮/H

在0℃下，向化合物3(9.3g，31.9mmol，1.0eq)于MeCN(80mL)中的溶液中添加TEA(9.68g，95.9mmol，3.0eq)，然后添加n-C

在0℃下，向化合物5(1.84g，15.7mmol，1.0eq)于DCM(18mL)中的溶液中逐滴添加MeMgBr(3M)(10.47mL，31.4mmol，2.0eq)并且搅拌溶液30分钟。然后将溶液冷却到-20℃并且添加含有化合物4(3g，10.99mmol，0.7eq)的DCM(18mL)。将混合物在-20℃下搅拌3小时，然后升温到室温且搅拌1小时。反应用NH

向化合物6(3.2g，8.21mmol，1.0eq)于DCM(300mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin)(9.05g，21.33mmol，2.6eq)。将混合物加热到45℃并且搅拌过夜。反应混合物用饱和NaHCO

在0℃下，向化合物7(830mg，2.14mmol，1.0eq)于DCM(16mL)中的溶液中添加TFA(4.876g，42.8mmol，20eq)。使混合物升温到室温并且在室温下搅拌1.5小时。真空去除溶剂且用DCM(15mL)溶解残余物。向溶液中添加碳酸氢钠水溶液直至无气泡出现为止。用DCM(30mL*3)萃取溶液。合并有机相且用Na

TLC:PE:EA＝,Rf(

(d,J＝7.8Hz,2H),7.31(d,J＝8.1Hz,2H),7.20(t,J＝7.5Hz,2H),7.11(dd,J＝7.8,7.1Hz,2H),6.97(d,J＝1.8Hz,2H),3.90(s,4H)。

合成马拉色菌吲哚A(AB17011)

如图24K中所示，向化合物1(20g，0.106mol，1.0eq)于DCM(20mL)中的溶液中依次添加Boc

在0℃下，向化合物2(5g，17.30mmol，1.0eq)和DBU(13.17g，86.51mmol，5.0eq)于MeCN(50mL)中的溶液中添加P-ABSA(8.3g，34.60mmol，2.0eq)。使混合物升温到室温，并且在室温下搅拌100分钟。反应混合物的TLC分析显示完全转化成所期望的产物。然后，在减压下浓缩混合物并且通过硅胶色谱提纯残余物，得到化合物3(3.5g，63％)。

向化合物3(100mg，0.316mmol，1.0eq)于MeOH(6mL)中的溶液中添加LiOH(7mg，0.316mmol，1.0eq)于H

在氮气气氛下，向得自前一步骤的粗化合物4于DMSO(2mL)中的溶液中添加HATU(156mg，0.410mmol，1.3eq)。然后添加化合物4a(81mg，0.316mmol，1.0eq)和DIEA(123mg，0.950mmol，3.0eq)。在室温下搅拌混合物15小时。反应混合物的TLC分析显示完全转化成所期望的产物。然后用水稀释混合物并且用乙酸乙酯萃取。有机层经无水Na

向搅拌的化合物AB10758(161.3mg，0.432mmol，1.0eq)于MeOH(5mL)中的溶液中添加含LiOH·H

合成糠疹曲素(AB17014)

如图24L中所示，在氮气气氛下，在0℃下，向化合物1(5g，42.74mmol，1.0eq)于无水Et

在氮气气氛下，在0℃下，向粗化合物2(8g，38.28mmol，1.0eq)于无水EA(30mL)中的溶液中添加含Bu

向化合物3a(1.53g，7.51mmol，1.3eq)和TsOH(1.29g，7.51mmol，1.3eq)于MeOH(10mL)中的溶液中添加化合物3(1g，5.78mmol，1.0eq)。在50℃下搅拌混合物2小时。反应混合物的LCMS分析显示完全转化成所期望的产物。然后在减压下浓缩混合物。残余物通过硅胶色谱和制备型TLC(PE:丙酮＝4:1)来提纯，得到呈黄色固体状的化合物AB17014(261mg，9％)。

合成AB17151

如图24M中所示，向化合物1(40.0g，341mmol，1.0eq)于MeOH(1400mL)中的混合物中添加化合物2(9.95g，142mmol，0.417eq)，随后添加1N HCl水溶液(712mL)并且将混合物加热至70℃，维持1小时。然后真空去除MeOH并且用DCM溶解残余物。用水洗涤混合物并且用DCM萃取水。合并的有机相经Na

在0℃下，向化合物3(7.0g，24.5mmol，1.0eq)于DMF(48.6mL)中的混合物中添加POCl

将AB12508(4.5g，14.33mmol，1.0eq)、Boc

在室温(13-18℃)下，向化合物4(5.4g，10.5mmol，1.0eq)于THF(50mL)中的混合物中添加H

在室温(13-18℃)下，向化合物5(2.5g，4.717mmol，1.0eq)和K

化合物6(1.8g，3.3mmol，1.0eq)于3.0M HCl/MeOH(20mL)中的混合物在60℃下搅拌2小时。通过TLC监测反应。然后真空去除MeOH并且用DCM溶解残余物。用水洗涤混合物并且用DCM萃取水。合并的有机相经Na

合成化合物VI(AB17225)

如图24N中所示，在氮气气氛下，向化合物1(600mg，2.308mmol，1.0eq)于MeOH(10mL)中的搅拌溶液中依次添加MeSO

马拉色菌乳酸(AB17227)

如图24O中所示，向化合物1(15.0g，57.5mmol，1.0eq)于二噁烷(200mL)中的混合物中添加吲哚(13.5g，115.0mol，2.0eq)、三(五氟苯基)膦(6.1g，11.4mmol，0.2eq)、Na

在室温下，向化合物2(7.4g，21.4mmol，1.0eq)于MeOH(350mL)和水(125mL)中的溶液中添加K

在N

向化合物5(690mg，1.95mmol，1.0eq)于MeOH(40mL)和水(10mL)中的溶液中添加NaOH(0.15g，3.9mmol，2.0eq)。在室温下搅拌混合物2.5小时。通过TLC监测反应。将反应物干燥(Na

TLC:DCM:MeOH＝10:1,Rf

合成AB12507

如图24P中所示，在氮气氛围下，在0℃下，向化合物1(25g，357mmol，1.0eq)于THF(250ml)中的溶液中添加含有NaH(17g，428.4mmol，1.2eq)的DMF(200mL)。30分钟后，在0℃下向混合物中添加硫酸二甲酯(81g，642mmol，1.8eq)。添加之后，在环境温度下搅拌反应混合物30分钟，然后缓慢添加乙酸。从反应混合物中直接蒸馏产物。获得化合物2(25g，83％)。

在0℃下，向化合物3(20g，86mmol，1.0eq)于THF(200ml)中的溶液中添加2MNaHMDS(94.6mL，189.2mmol，2.2eq)。在0℃下搅拌混合物30分钟。在0℃下，历时40分钟向混合物中添加含有Boc

将CuI(57mg，0.3mmol，0.1eq)和PdCl

化合物5(5g，17mmol，1.0eq)、PtCl

在室温下，向化合物6(3g，8mmol，1.0eq)于甲醇(75mL)和水(25mL)中的溶液中添加K

在0℃下搅拌POCl

合成化合物V(AB17219)

如图24Q中所示，在0℃下，在氮气气氛下，向化合物1(20g，91.32mmol，1.0eq)于THF(200mL)中的溶液中缓慢添加NaHMDS(2M，于THF中，94.6mL，0.201mol，2.2eq)。在0℃下搅拌0.5小时之后，在0℃下缓慢添加(Boc)

在室温下，在氮气气氛下，向化合物2(1g，3.13mmol，1.0eq)和化合物2a(0.24g，3.43mmol，1.1eq)于TEA(10mL)中的溶液中依次添加CuI(60mg，0.316mmol，0.1eq)和Pd(PPh

在氮气气氛下，向化合物3(1g，3.83mmol，1.0eq)于二噁烷(25mL)中的溶液中添加10％PtCl

向化合物4(785mg，2.18mmol，1.0eq)于MeOH/H

在氮气气氛下，向搅拌的化合物5(0.85g，3.27mmol，1.0eq)于MeOH(10mL)中的溶液中依次添加MeSO

合成化合物VIII(AB17220)

如图24R中所示，在-5℃下，向CrO

向不纯化合物2(1.9g，6.64mmol，1.0eq)于Ac

合成化合物VII(AB17221)

如图24S中所示，将化合物1(348mg，2.1mmol，2.1eq)、化合物2(246mg，1mmol，1eq)、等分试样(20mg，0.05eq)、碳酸钾水溶液(773mg，5.6mg，2M)、Pd(PPh

然后，将化合物3(30mg，0.073mmol)和亚磷酸三乙酯(122mg，0.73mmol，10eq)的混合物脱气三次，加热至152℃，维持48小时。冷却后，将反应混合物添加到0.5mL EtOH和0.2mL H

试剂

Alexa Fluor 488膜联蛋白V/死细胞凋亡套组、胎牛血清(FBS)和0.25％胰蛋白酶-EDTA(1x)、酚红购自英杰公司(Invitrogen)。半胱氨酸蛋白酶-Glo 3/7分析(Caspase-Glo 3/7Assay)购自普洛麦格公司(Promega)。RPMI 1640培养基和杜尔贝科氏改进的伊格尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium)购自吉毕科公司(Gibco)。抗生素抗霉菌溶液(100x)购自西格玛公司(Sigma)。

细胞系MeWo(

实验方法

收集细胞并且使用Countess细胞计数器测定细胞数量。用培养基将细胞稀释到所期望的密度。6小时和24小时处理的最终细胞密度是4,000个细胞/孔，而48小时和72小时处理的最终细胞密度是2,000个细胞/孔。膜联蛋白V分析是使用384孔透明底培养板(Corning3712)，而半胱氨酸蛋白酶-Glo分析则使用384孔实心白底培养板(Corning3570)。所有培养板用盖子覆盖并且在37℃和5％CO

将测试化合物溶解于DMSO中，得到30mM储备液。进行10倍稀释以产生3mM和0.3mM浓度。0.9mM星形孢菌素用作阳性对照，而DMSO用作阴性对照(NC)。使用液体处置器Echo550，从化合物源培养板转移132.5nL化合物到384孔细胞培养板。指定的培育时间之后，从培育箱中移出培养板用于检测。

对于膜联蛋白V分析来说，从培育箱中移出培养板并且去除培养基。用40uL PBS和15uL预混合的膜联蛋白V-FITC洗涤细胞两次，并且每孔添加Hoechst 33342染料工作溶液。培养板在室温下培育20分钟，密封且以1,000rpm离心1分钟以去除气泡。使用ImageXpressNano读板。

对于半胱氨酸蛋白酶-Glo分析来说，从培育箱中移出培养板并且在室温下平衡15分钟。实验之前，还将半胱氨酸蛋白酶-Glo 3/7试剂解冻并且平衡至室温。将半胱氨酸蛋白酶-Glo试剂以与培养基的1:1比率添加到所需孔中。培养板在室温下培育15分钟且使用EnSpire

膜联蛋白V分析结果

图25A-25D中示出的数据表含有暴露于处理之后的第6、24、48和72小时时的膜联蛋白V阳性细胞的百分比。图90A-108F中显示了来自一组独立实验的数据。

膜联蛋白V染色数据显示了100uM马拉色菌素诱导所有三种细胞系都发生细胞死亡。虽然WM115细胞的响应比MeWo和B16F1细胞慢，但是相较于MeWo，马拉色菌素对于WM115和B16F1细胞是更强的细胞凋亡诱导剂。

半胱氨酸蛋白酶3/7分析结果

图26A-26D中示出的数据表含有暴露于处理之后的第6、24、48和72小时时的半胱氨酸蛋白酶3/7的诱导倍数。图109A-127C中显示了来自一组独立实验的数据。

马拉色菌素在100uM下使WM115和MeWo细胞中的半胱氨酸蛋白酶3/7活化。马拉色菌素触发WM115细胞中的半胱氨酸蛋白酶3/7路径的速度比MeWo细胞快，这与膜联蛋白V染色数据一致。

试剂

实验方法

对于CellTiter-Glo分析来说，在10mM DMSO溶液中制备测试化合物。化合物连续稀释成12种浓度。从100,000个细胞/毫升的悬浮液中分配40uL细胞到384孔培养板(Corning3570)的每个孔中。培养板在37℃、5％CO

结果

图27A-27B、图28A-28B、图29A-29B、图30A-30B、图31A-31B、图32A-32B、图33A-33B、图34A-34B和图35A-35B中分别显示了MeWo和WM115细胞在暴露于AB12508(化合物E)、未知组合物、CV 8803(化合物K)、CV-8804(化合物A)、CV-8684(马拉色菌素)、CV-8685(吲哚并[3,2-b]咔唑)、CV-8686(化合物I)、CV-8688(化合物II)和星形孢菌素之后的细胞存活率百分比。暴露于测试化合物的样品的所有数据都相对于使用相同培育时间的相应媒剂对照归一化。

分析程序

HepG2-AhR-Luc细胞购自Pharmaron，One-Glo荧光素酶分析系统购自普洛麦格公司，DMEM购自Hyclone，青霉素/链霉素购自Solabio。

用于稳定转染的HepG2细胞的培养基是通过用高葡萄糖和L-谷氨酰胺以及10％FBS补充DMEM来制备的。

在T-75烧瓶中、在37℃、5％CO

经培育的细胞用5mL PBS冲洗。将PBS抽吸掉，向烧瓶中添加1.5mL胰蛋白酶，并且在37℃下培育细胞约5分钟或直至细胞脱离且漂浮。通过添加过量含血清培养基来使胰蛋白酶灭活。

将细胞悬浮液转移到锥形管中并且以120g离心10分钟以使细胞集结。将细胞以恰当密度再悬浮于接种培养基中。将40μL细胞转移到384孔培养板(5×10

然后，制备测试化合物和奥美拉唑阳性对照物的储备溶液。使用Echo550将化合物溶液转移到分析板中。然后将培养板放回到培育箱中进行化合物处理。

随后，在处理24小时之后，从培育箱中移出培养板并且允许在环境温度下冷却。将与培养基的等量的30μL的One-Glo试剂添加至每个孔中。使细胞溶解至少3分钟，然后用光度计测量。

利用非线性回归分析，通过XLfit将剂量响应作图，并计算EC

结果

图36A-36B、37A-37B、38A-38B、39A-39B、40A-40B、41A-41B、42A-42B、43A-43B和44A-44B中分别显示了暴露于不同浓度的奥美拉唑、CV-8684(马拉色菌素)、CV-8685(吲哚并[3,2-b]咔唑)、CV-8686(化合物I)、未知组合物、CV-8803(化合物K)、CV-8804(化合物A)、AB12508(化合物E)和CV-8688(化合物II)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。

图45A-45B、46A-46B、47A-47B、48A-48B、49A-49B、50A-50B、51A-51B、52A-52B、53A-53B、54A-54B、55A-55B、56A-56B和57A-57B中分别显示了暴露于不同浓度的奥美拉唑、未知组合物、2,3,7,8-四氯二苯并二氧杂环己烯(TCDD)、CV-8819(化合物A5)、CV-8684(马拉色菌素)、AB12508(化合物E)、CV-8686(化合物I)、AB12509(化合物H)、CV-8688(化合物II)、CV-8877(化合物B)、CV-8685(吲哚并[3,2-b]咔唑)、化合物B10和CV-8687(化合物IV)后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。

图58A-58B、59A-59B、60A-60B、61A-61B、62A-62B、63A-63B、64A-64B、65A-65B、66A-66B和67A-67B中分别显示了暴露于不同浓度的奥美拉唑、TCDD、马拉色菌素前体、AB11644、3-甲基胆蒽(3-MC)、AB12976(O52)、AB17011(马拉色菌吲哚A)、糠疹曲素、AB17151和AB17225后，得自HepG2-AhR-荧光素酶分析的AhR活性读数。

下述表1和2中汇总了两组实验的结果。

研究概述1

此研究的目的是评估测试物作为皮肤黑色素生成调节剂在重复暴露之后的MelanoDerm

MTT(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)转化分析是根据NAD(P)H依赖性微粒体酶将MTT还原(并且就较轻微程度来说，琥珀酸脱氢酶将MTT还原)为蓝色甲臜沉淀物进行测量，用于评估暴露于测试物之后的细胞代谢。(Berridge等人，1996)。测试物对组织的毒性是潜在真皮刺激的证据，此通过测量相对存活率(相对于经阴性对照物处理的组织的MTT转化率)来测定。

材料和方法

MelanoDerm

签收MelanoDerm

从签收日期开始培育组织之后的至少16小时，使用数码相机(佳能相机，PowerShot SX130IS，12x光学变焦，人工设置)对标示分别用于MTT(2个组织-为了此报告的目的，命名为“未处理日”0)和黑色素分析(3个组织)的八个MelanoDerm

随后，未处理的MelanoDerm

测试物制备

测试物CV-8686和AB11644以在DMSO中的储备溶液(各自约100mM)的形式提供。将测试物的50μM和200μM无菌EPI-100-LLMM稀释液施用于测试系统。将测试物DMSO(媒剂对照)的0.2％无菌EPI-100-LLMM稀释液施用于测试系统。

测试物各自使用如下程序制备：以所提供的储备浓缩物为起始物，首先用适当体积的EPI-100-LLMM将2μl各测试物稀释到200μM的最终浓度。将250μL的200μM稀释液(对应于各种测试物)添加到750μL的EPI-100-LLMM中以制备研究中所用的50μL稀释液。将测试物稀释液涡旋至少1分钟，在37℃±1℃下(水浴中)加热15分钟且再次涡旋至少1分钟，随后以25μL的体积施加到组织上。

用EPI-100-LLMM稀释溶剂对照物DMSO到0.2％(v/v)的最终浓度。将被稀释的溶剂对照物涡旋至少1分钟，随后以25μL的体积施加到组织上。

评估测试物对MTT的直接还原

将各测试物稀释液添加到含有1.0mg/mL MTT(西格玛)溶液、含有2mM L-谷氨酰胺的温热的杜尔贝科氏改进伊格尔氏培养基(DMEM)(MTT添加培养基)中以评估其直接还原MTT的能力。向1mL的MTT溶液中添加约25μL的各种测试物，并且在标准培养条件下培育混合物约一小时。同时测试阴性对照物：25μL的无菌去离子水(Quality Biological)。如果MTT溶液颜色变成蓝色/紫色，则推测测试物已经将MTT还原。

在缺乏活细胞的情况下，未观察到测试物CV-8686、AB11644和DMSO将MTT直接还原。

pH测定

使用pH纸(EMD密理博公司(EMD Millipore Corporation))测量各种测试物的pH。首先将各种测试物添加到pH范围为0-14、增量为1.0pH单位的pH纸中，以估计窄pH范围。接下来，将各种测试物添加到范围更窄的5-10个pH单位、增量为0.5pH单位的pH纸中，以获得更精确的pH值。测量施加到组织上的每次剂量的各种测试物的pH(第0、2、4、6、10、12、14天-适当时)。

决定性分析

测试物处理：7TD组＝7天分析(隔日处理)

在7天时间段期间，每48±2小时，用剂量体积为25μL的测试物(指定浓度的CV-8686和AB11644)对八个MelanoDerm

测试物处理：7TD+7NTD＝隔日处理7天，随后停止处理7天(恢复)

在7天时间段期间，每48±2小时，用测试物(方案中指定浓度的CV-8686)以25μL的剂量药体积局部处理八个MelanoDerm

测试物处理：14TD组＝隔日处理14天

在7天时间段期间，每48±2小时，用测试物(方案指定浓度的CV-8686和DMSO)以25μL的剂量体积对八个MelanoDerm

每日‘再馈加’经处理的MelanoDerm

每次48±2小时暴露时间之后，MelanoDerm

在每次个别试验(分别为7TD；7TD+7NTD；以及14TD)结束时，每个处理组(测试物、阴性对照和阳性对照)的组织用不含Ca++Mg++的DPBS轻轻地冲洗，在无菌吸附纸上吸收干燥并且清除过量液体。然后使用数码相机(佳能相机，PowerShot SX130IS，12x光学变焦，人工设置)拍摄组织，以助于在分析开始时对组织的色素沉着程度进行目测评估。从MelanoDerm

随后用CMF-DPBS冲洗来自各处理组的三个组织，在无菌吸附纸上吸收干燥，且清除过量液体。使用无菌手术刀从插件中移出组织，放入经标记的1.5mL微量离心管中并且在<-60℃下储存过夜用于后续的如黑色素分析章节中所述的黑色素分析。然后用无菌的不含Ca++和Mg++的杜尔贝科氏磷酸盐缓冲盐水(CMF-DPBS)轻轻地冲洗各处理组(测试物、阴性对照和阳性对照)的两个MelanoDerm

MTT分析

使用之前2小时内制备MTT于温热的MTT添加培养基中的1.0mg/mL溶液。适当暴露时间之后，用CMF-DPBS充分冲洗标示MTT终点的MelanoDerm

在MTT溶液存在下的培育期之后，使MelanoDerm

在萃取期结束时，将细胞培养插件内的液体倾析到孔中，从孔中取出细胞培养插件。将萃取物溶液混合并且转移200μL到标示每个样品的96孔板的两个孔中，将200μL异丙醇放入标示为空白的两个孔中。使用Molecular Devices Vmax读板仪测量每个孔的550nm吸光度(OD550)。

黑色素分析

在萃取黑色素的当天，将切除的组织在室温下解冻约20分钟。将250μL Solvable添加到每个微量离心管中，并且将管与黑色素标准物一起在干浴器中、在60±2℃下培育至少16小时。将同一天制备的25μL各测试物稀释液连同样品一起与250μL Solvable混合并且在干浴器(仅用于研发目的)中、在60±2℃下培育至少16小时。通过将黑色素溶解于Solvable中来制备1mg/mL黑色素标准储备溶液。从1mg/mL制备一系列黑色素标准物。通过将0.6mL的1mg/mL黑色素标准储备溶液添加到1.2mL Solvable中，然后制备一系列五种以上稀释液(3倍稀释)，以制备标准物系列。Solvable用作零标准物。

黑色素萃取开始之后至少16小时，将含有样品(代表从MelanoDerm

数据的呈现

MTT数据-第0天

捕获原始吸光度数据。计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从未处理组织的OD550值中减去来确定未处理组织的OD550校正值。通过将个别OD550校正值除以针对未处理组织所计算的所有OD550值的平均值来将每个个别组织的各％存活率值列入表格。计算总体平均存活率百分比。最后，将未处理组织的平均存活率值绘制于条形图上(±1个标准差的误差条形图)。

MTT数据-第7天、第14天

捕获原始吸光度数据。计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从阴性对照组的平均OD550值中减去来确定阴性对照组的平均OD550校正值。通过从每一者中减去空白孔的平均OD550值来确定各测试物暴露、阳性对照物暴露和阴性对照物暴露的OD550校正值。

校正的测试物暴露时间OD550＝测试物暴露时间OD550-空白平均OD550

针对测试物处理的组织和阳性对照物处理的组织产生以下对照计算百分比：

存活率％＝[(测试物或阳性对照物的最终OD550校正值)/(阴性/溶剂对照物的平均OD550校正值)]×100

针对测试物处理的组织产生以下对照计算百分比，其中测试物是DMSO(溶剂对照物)：

存活率％＝[(测试物(溶剂对照物)的最终OD550校正值)/(阴性对照物的平均OD550校正值)]×100

为了计算对照物相对于各种测试物或阳性对照物的平均百分比，获取对照值的各百分比的平均值。计算MTT存活率的总体平均值。最后，将平均存活率值绘制于条形图上(±1个标准差的误差条形图)。

黑色素数据

捕获原始吸光度数据。测定每种黑色素标准物的OD490值。利用各种黑色素标准物的平均OD490值制备标准曲线。通过将空白孔的OD490值从黑色素标准浓缩物的OD490值中减去来确定各种黑色素标准浓缩物的OD490校正值。绘制标准物浓度(mg/mL)(y轴)相对于对应的校正吸光度(OD490值)的标准曲线。经测试物或阳性对照物处理的组织中的黑色素的量是利用数学方法从标准曲线(二次)中以内插值替换而获得。

结果和论述

在黑色素生成调节剂筛选分析中，使用亚洲MelanoDerm

在无菌的EPI-100-LLMM中制备测试物的v/v稀释液以施用于测试系统。将测试物CV-8686和AB11644的200μM和50μM稀释液施用于测试系统。将测试物DMSO(媒剂对照物)的0.2％(v/v)稀释液施用于测试系统。将测试物的每种稀释液局部施用于五个MelanoDerm

图68-69汇总了测试物、阴性对照和阳性对照的平均组织存活率和黑色素浓度结果。图70-74含有所拍摄的组织的代表性宏观和微观照片(仅15x放大率)以有助于对组织在第0天、第7天和第14天的色素沉着程度进行目测评估。其视为代表各处理组内的复制品组织且与后续数据解释相关。宏观图像显示组织中的总体黑色素产生以及其在组织表面上的分布。微观图像提供了黑色素细胞的关于黑色素产生的生理状态、树突的存在或与测试物/对照物处理有关的任何形态变化的总图。

组织存活率的评估是用于在方案指定的时间段重复暴露之后，评估测试物对MelanoDerm

针对经测试物处理的组织在方案指定的时间段重复暴露之后的黑色素产生情况进行的评估是用于评估测试物作为皮肤黑色素生成调节剂的潜力。相较于阴性对照物处理的组织(55.8μg/mL)，阳性对照物1％曲酸使阳性对照物处理的组织(7TD)中的黑色素浓度降低到23.3μg/mL。相较于阴性对照物处理的组织(174.0μg/mL)，阳性对照物1％曲酸使阳性对照物处理的组织中的黑色素浓度降低到29.1μg/mL(14TD)。经DMSO处理的组织中所测定的黑色素浓度是135.8μg/mL(14TD)，从而表明媒剂对照物就其自身而言不影响黑色素产生。经测试物处理的组织中的黑色素浓度低于经阴性对照物处理的组织(14TD期被突显)。一般来说，基于研究期间所拍摄的宏观和微观图像的分析得到的主观观察结果支持了通过执行黑色素分析所得的客观结果。

在缺乏活细胞的情况下，测试物CV-8686、DMSO和AB11644将MTT直接还原。因此，不进行杀灭对照实验。

研究概述2

此研究的目的是评估测试物作为皮肤黑色素生成调节剂在7天处理期间在重复暴露之后，在MelanoDerm

MTT(3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基四唑鎓溴化物)转化分析是根据NAD(P)H依赖性微粒体酶将MTT还原(并且就较轻微程度来说，琥珀酸脱氢酶将MTT还原)为蓝色甲臜沉淀物来进行测量，用于评估暴露于测试物1之后的细胞代谢。测试物对组织的毒性是潜在真皮刺激的证据，此通过测量相对存活率(相对于经阴性对照物处理的组织的MTT转化率)来测定。

材料和方法

MelanoDerm

签收MelanoDerm

从签收日期开始培育组织之后的至少16小时，标示MTT(2个组织-为了此报告的目的，命名为“未处理日”0)和黑色素(3个组织)终点的五个MelanoDerm

然后将两个未处理的MelanoDerm

测试物制备

通过用EPI-100-LLMM将储备液浓度稀释到200μM和500μM的最终浓度来制备测试物马拉色菌素(CV-8684)、化合物B(CV-8877)、化合物E(AB12508)、化合物H(AB12509)、未知组合物、化合物A5(CV-8819)和O52(AB12976)。通过将储备液浓度稀释到500μM来制备测试物化合物I(CV-8686)。将所有稀释液涡旋至少1分钟，然后在37℃±1℃水浴中加热15分钟。然后将稀释液再次涡旋至少1分钟，随后施用于组织。测试物和溶剂对照物DMSO在EPI-100-LLMM中制备成0.5％(v/v)稀释液。将测试物稀释液涡旋至少1分钟，然后再次涡旋至少1分钟，随后施加于组织上。测试物化合物I配制物在不稀释(纯净)的情况下测试。

评估测试物对MTT的直接还原

将所稀释的最高浓度的各种测试物添加到含有1.0mg/mL MTT(西格玛)溶液、含有2mM L-谷氨酰胺的温热的杜尔贝科氏改进伊格尔氏培养基(DMEM)(MTT添加培养基)中以评估其直接还原MTT的能力。向1mL的MTT溶液中添加约25μL的各种测试物，并且在标准培养条件下培育混合物约一小时。同时测试阴性对照物：25μL的无菌去离子水(QualityBiological)。如果MTT溶液颜色变成蓝色/紫色，则推测测试物已经将MTT还原。

在缺乏活细胞的情况下，未观察到测试物DMSO、化合物I(CV-8686)、马拉色菌素(CV-8684)、化合物B(CV-8877)、化合物E(AB12508)、化合物H(AB12509)、未知组合物、化合物A5(CV-8819)、O52(AB12976)和化合物I配制物直接还原MTT。

pH测定

使用pH纸(EMD密理博公司)测量各种测试物和阳性对照物的pH。首先将各种测试物或阳性对照物添加到pH范围为0-14、增量为1.0pH单位的pH纸中，以估计窄pH范围。接下来，将各种测试物或阳性对照物添加到范围更窄的0-6或5-10个pH单位、增量为0.5pH单位的pH纸中，以获得更精确的pH值。适当时测量施加到组织(第0、2、4、6天)上的每剂量的各种测试物或阳性对照物的pH。

决定性分析

测试物处理

在7天时间段期间，每48±2小时，用测试物溶剂对照物(DMSO)、化合物I(CV-8686)、马拉色菌素(CV-8684)、化合物B(CV-8877)、化合物E(AB12508)、化合物H(AB12509)、未知组合物、化合物A5(CV-8819)、O52(AB12976)和化合物I配制物、以25uL体积的指定浓度局部处理五个MelanoDerm

每48±2小时，用阴性对照物，即25μL的无菌去离子水(Quality Biological)，局部处理一个MelanoDerm

每日‘再馈加’经处理的MelanoDerm

每次48±2小时暴露时间之后，用约500μL的不含Ca++Mg++的DPBS轻轻地冲洗MelanoDerm

在7天暴露期结束时，用不含Ca++Mg++的DPBS轻轻地冲洗每个处理组(测试物、阴性对照、阳性对照和溶剂对照)的组织，在无菌吸附纸上吸收干燥并且清除过量液体。然后使用数码相机(佳能相机，PowerShot SX130IS，12x光学变焦，人工设置，和Ricoh WG-50，显微镜模式，1cm变焦)拍摄组织，以助于在分析开始时对组织的色素沉着程度进行目测评估。从MelanoDerm

就各种测试物浓度、阳性对照和溶剂对照而言，用CMF-DPBS冲洗两个组织，在无菌吸附纸上吸收干燥并且清除过量液体。就阴性对照而言，用CMF-DPBS冲洗单个组织，在无菌吸附纸上吸收干燥并且清除过量液体。使用无菌手术刀从插件中移出组织，放入经标记的1.5mL微量离心管中并且在<-60℃下储存过夜用于后续黑色素分析。

随后用无菌的不含Ca++和Mg++的杜尔贝科氏磷酸盐缓冲盐水(CMF-DPBS)轻轻地冲洗测试物DMSO、化合物I(CV-8686)、马拉色菌素(CV-8684)、化合物B(CV-8877)、化合物E(AB12508)、化合物H(AB12509)、未知组合物、化合物A5(CV-8819)(500μM)、O52(AB12976)(500μM)、化合物I配制物和阳性对照物用的两个MelanoDerm

MTT分析

使用之前2小时内制备MTT于温热的MTT添加培养基中的1.0mg/mL溶液。适当暴露时间之后，用CMF-DPBS充分冲洗标示MTT终点的MelanoDerm

在MTT溶液存在下的培育期之后，使MelanoDerm

在萃取期结束时，将细胞培养插件内的液体倾析到孔中，从孔中取出细胞培养插件。将萃取物溶液混合并且转移200μL到标示每个样品的96孔板的两个孔中且将200μL异丙醇放入标示为空白的两个孔中。使用Molecular Devices Vmax读板仪测量每个孔的550nm吸光度(OD550)。

黑色素分析

在萃取黑色素的当天，将切除的组织在室温下解冻约15分钟。将250μL Solvable添加到每个微量离心管中并且将管与黑色素标准物一起在干浴器中、在60±2℃下培育至少16小时。通过将黑色素溶解于Solvable中来制备1mg/mL黑色素标准储备溶液。从1mg/mL储备溶液制备一系列黑色素标准物。通过将0.6mL的1mg/mL黑色素标准储备溶液添加到1.2mL Solvable中，然后制备一系列五种以上稀释液(3倍稀释)，以制备标准物系列。Solvable用作零标准物。

黑色素萃取开始之后至少16小时，将含有样品(代表从MelanoDerm

数据的呈现

MTT数据-第0天

捕获原始吸光度数据。计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从未处理组织的OD550值中减去来确定每个未处理组织的OD550校正值。通过将个别OD550校正值除以针对未处理组织所计算的所有OD550值的平均值来将每个个别组织的各％存活率值列入表格。计算总体平均存活率百分比。最后，将未处理组织的平均存活率值绘制于条形图上(±1个标准差的误差条形图)。

MTT-第7天

捕获原始吸光度数据。使用

校正的测试物暴露时间OD550＝测试物暴露时间OD550-空白平均OD550

针对测试物处理的组织和阳性对照物处理的组织产生以下对照计算百分比：

存活率％＝[(测试物或阳性对照物的最终OD550校正值)/(阴性/溶剂对照物的平均OD550校正值)]×100

为了计算对照物相对于各种测试物或阳性对照物的平均百分比，获取对照值的各百分比的平均值。计算MTT存活率的总体平均值。最后，将平均存活率值绘制于条形图上(±1个标准差的误差条形图)。

黑色素数据

捕获原始吸光度数据。测定每种黑色素标准物的OD490值。利用各种黑色素标准物的平均OD490值制备标准曲线。通过将空白孔的OD490值从黑色素标准浓缩物的OD490值中减去来确定各种黑色素标准浓缩物的OD490校正值。绘制标准物浓度(mg/mL)(y轴)相对于对应的校正吸光度(OD490值)的标准曲线。经测试物、阳性对照物处理的组织或阴性对照物处理的组织中的黑色素的量是利用数学方法从标准曲线(二次)中以内插值替换而获得。

结果和论述

在黑色素生成调节剂筛选分析中，使用亚洲MelanoDerm

测试物以纯净形式或在无菌的EPI-100-LLMM中制备成v/v稀释液施用于测试系统。测试物马拉色菌素(CV-8684)、化合物B(CV-8877)、化合物E(AB12508)、化合物H(AB12509)、未知组合物、化合物A5(CV-8819)和O52(AB12976)作为500μM和200μM稀释液施用于测试系统。将测试物化合物I(CV-8686)的500μM稀释液施用于测试系统。将测试物DMSO(媒剂对照物)的0.5％(v/v)稀释液施用于测试系统。测试物化合物I配制物以纯净形式进行测试。将测试物的各个稀释液局部施加于五个MelanoDerm

图75汇总了测试物、阴性对照和阳性对照的平均组织存活率和黑色素浓度结果。图76-87含有所拍摄的组织的代表性宏观和微观照片(仅15x放大率)以有助于对组织在第0天和第7天的色素沉着程度进行目测评估。其视为代表各处理组内的复制品组织且与后续数据解释相关。宏观图像显示组织中的总体黑色素产生以及其在组织表面上的分布。微观图像提供了黑色素细胞的关于黑色素产生的生理状态、树突的存在或与测试物/对照物处理有关的任何形态变化的总图。

针对经测试物处理的组织在7天时间段重复暴露之后的黑色素产生情况进行的评估是用于评估测试物作为皮肤黑色素生成调节剂的潜力。相较于溶剂对照物处理的组织(53.82μg/mL)，阳性对照物1％曲酸使阳性对照物处理的组织中的黑色素浓度降低到22.01μg/mL。一般来说，基于研究执行期间所拍摄的宏观和微观图像的分析得到的主观观察结果支持了通过执行黑色素分析所得的客观结果。

在缺乏活细胞的情况下，测试物DMSO、化合物I(CV-8686)、马拉色菌素(CV-8684)、化合物B(CV-8877)、化合物E(AB12508)、化合物H(AB12509)、未知组合物、化合物A5(CV-8819)、O52(AB12976)和化合物I配制物不使MTT直接还原。因此，不进行杀灭对照实验。

相较于DMSO处理的组织，测试物使其相应组织中的黑色素浓度减小到类似于经阳性对照物处理的组织所得的水平。举例来说，相较于分析中的经阳性对照物处理的组织中的浓度(22.01μg/mL)，经测试物化合物B(CV-8877)(500μM)处理的组织中的黑色素浓度是25.99μg/mL，经测试物化合物E(AB12508)(500μM)处理的组织中的浓度是25.26μg/mL。

其它研究

图88中显示了AB17151、化合物B10、马拉色菌素前体、AB17011、AB17014、DMSO、CV-8484、化合物E和曲酸的Melanoderm

马拉色菌素和马拉色菌素衍生物的黑色素生成潜力

此研究的目的是观察和报告暴露于马拉色菌素和马拉色菌素衍生物的B16黑色素细胞的黑色素生成和存活率。

材料和试剂

接种培养基包括不含L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺的DMEM。分析培养基包括不含酚红和L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺和aMSH的DMEM。其它试剂包括曲酸、DMSO和MTT。测试细胞是B16细胞(ATCC CRL-6475)。

方案

培养B16黑色素细胞直至70％汇合，收集细胞。细胞以4000个细胞/孔的密度接种于96孔培养板中并允许附着过夜。次日，在B16分析培养基中稀释测试物和对照物。抽吸过夜的培养基，施加200μL测试物和对照物。在37℃和10％CO

结果

图89A-89X中显示了黑色素的变化百分比和存活率结果。

0.1％马拉色菌素配制物

使用以下成分配制0.1％马拉色菌素的组合物：水、辛酸/癸酸三甘油酯、甘油、牛油果(乳木果)油脂、十一碳烯酸庚酯、橄榄油鲸蜡酯、鲸蜡醇、二甲基异山梨糖醇、二甲基硅酮、脱水山梨糖醇橄榄油酯、马拉色菌素、角鲨烯、甘草酸二钾、乙二胺二丁二酸三钠、菌类植物胶、三仙胶、辛酰基乙二醇、氯苯甘油醚和苯氧基乙醇。

所得组合物是一种不透明、粘稠、灰白色面霜，其具有pH 5.72和14,000cp的粘度。

0.1％化合物I配制物

使用上文针对0.1％马拉色菌素配制物所述的相同成分、但用化合物I替代马拉色菌素来配制0.1％化合物I的组合物。

所得组合物是一种不透明、粘稠、灰白色面霜，其具有pH 5.66和14,000cp的粘度。

1％马拉色菌素配制物

使用以下成分配制1％马拉色菌素的组合物：水、二甲基异山梨糖醇、橄榄油甘油聚醚-8酯、甘油、椰子烷烃、丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、马拉色菌素、生育酚、戊二醇、椰油基辛酸酯/癸酸酯、氢氧化钠、EDTA二钠、辛酰基乙二醇、氯苯甘油醚和苯氧基乙醇。

所得组合物是一种不透明、粘稠、灰白色面霜，其具有pH 6.27和2,000cp的粘度。

1％化合物I配制物

使用上文针对1％马拉色菌素配制物所述的相同成分、但用化合物I替代马拉色菌素来配制1％化合物I的组合物。

所得组合物是一种不透明、粘稠、灰白色面霜，其具有pH 6.00和30,000cp的粘度。

化合物II配制物

使用以下成分配制化合物II的组合物：水、辛酸/癸酸三甘油酯、甘油、牛油果(乳木果)油脂、十一碳烯酸庚酯、戊二醇、橄榄油鲸蜡酯、鲸蜡醇、二甲基硅酮、脱水山梨糖醇橄榄油酯、化合物II、甘草酸二钾、角鲨烯、菌类植物胶、三仙胶、乙二胺二丁二酸三钠、氢氧化钠、辛酰基乙二醇、氯苯甘油醚和苯氧基乙醇。

所得组合物是一种不透明、半粘性液体，其具有灰白色、pH 5.80和8,000cp的粘度。

试剂

Alexa Fluor 488膜联蛋白V/死细胞凋亡试剂盒、胎牛血清(FBS)、0.25％胰蛋白酶-EDTA(1x)、半胱氨酸蛋白酶-Glo 3/7分析、RPMI 1640培养基、杜尔贝科氏改进的伊格尔培养基，和抗生素抗霉菌溶液(100x)。

细胞系MeWo(

实验方法

收集细胞并且使用Countess细胞计数器测定细胞数量。用培养基将细胞稀释到所期望的密度。举例来说，最终细胞密度对于6小时和24小时处理而言可以是4,000个细胞/孔，并且对于48小时和72小时处理而言可以是2,000个细胞/孔。膜联蛋白V分析是使用384孔透明底培养板(Corning 3712)，而半胱氨酸蛋白酶-Glo分析则使用384孔实心白底培养板(Corning 3570)。所有培养板用盖子覆盖并且在37℃和5％CO

将测试化合物溶解于DMSO中，得到30mM储备液。进行10倍稀释以产生3mM和0.3mM浓度。0.9mM星形孢菌素用作阳性对照，而DMSO用作阴性对照(NC)。使用液体处置器Echo550，从化合物源培养板转移132.5nL化合物到384孔细胞培养板。指定的培育时间之后，从培育箱中移出培养板用于检测。

对于膜联蛋白V分析来说，从培育箱中移出培养板并且去除培养基。用40μL PBS洗涤细胞两次，并且每孔添加15μL预混合的膜联蛋白V-FITC和Hoechst 33342染料工作溶液。培养板在室温下培育20分钟，密封且以1,000rpm离心1分钟以去除气泡。使用ImageXpressNano读板。

对于半胱氨酸蛋白酶-Glo分析来说，从培育箱中移出培养板并且在室温下平衡15分钟。实验之前，还将半胱氨酸蛋白酶-Glo 3/7试剂解冻并且平衡至室温。将半胱氨酸蛋白酶-Glo试剂以与培养基的1:1比率添加到所需孔中。培养板在室温下培育15分钟且使用EnSpire

膜联蛋白V分析和半胱氨酸蛋白酶3/7分析结果

预期本发明的化合物和组合物(包括靛玉红和其化学类似物)将诱导细胞死亡。预期靛玉红的化学类似物展现出例如比靛玉红更强的细胞凋亡诱导活性。同样，预期靛玉红的某些化学类似物展现出的有效细胞凋亡诱导活性例如小于靛玉红。与更强效化合物相比，此类化合物可以具有更有利的毒性特征。

试剂

实验方法

对于CellTiter-Glo分析来说，在10mM DMSO溶液中制备测试化合物。化合物连续稀释成12种浓度。从100,000个细胞/毫升的悬浮液中分配40μL细胞到384孔培养板(Corning3570)的每个孔中。培养板在37℃、5％CO

结果

预期本发明的化合物和组合物(包括靛玉红和其化学类似物)将诱导细胞死亡。预期靛玉红的化学类似物展现出例如比靛玉红更强的细胞凋亡诱导活性。同样，预期靛玉红的某些化学类似物展现出的有效细胞凋亡诱导活性例如小于靛玉红。与更强效化合物相比，此类化合物可以具有更有利的毒性特征。

分析程序

用于稳定转染的HepG2细胞的培养基是通过用高葡萄糖和L-谷氨酰胺以及10％FBS补充DMEM来制备的。

在T-75烧瓶中、在37℃、5％CO

经培育的细胞用5mL PBS冲洗。将PBS抽吸掉，向烧瓶中添加1.5mL胰蛋白酶，并且在37℃下培育细胞约5分钟或直至细胞脱离且漂浮。通过添加过量含血清培养基来使胰蛋白酶灭活。

将细胞悬浮液转移到锥形管中并且以120g离心10分钟以使细胞集结。将细胞以恰当密度再悬浮于接种培养基中。将40μL细胞转移到384孔培养板(5×10

然后，制备测试化合物和奥美拉唑阳性对照物的储备溶液。使用Echo550将化合物溶液转移到分析板中。然后将培养板放回到培育箱中进行化合物处理。

随后，在处理24小时之后，从培育箱中移出培养板并且允许在环境温度下冷却。将与培养基的等量的30μL的One-Glo试剂添加至每个孔中。使细胞溶解至少3分钟，然后用光度计测量。

利用非线性回归分析，通过XLfit将剂量响应作图，并计算EC

结果

预期本发明的化合物和组合物(包括靛玉红和其化学类似物)将调节AhR活性。预期靛玉红的化学类似物展现出例如比靛玉红更强的AhR激动剂活性。同样，预期靛玉红的某些化学类似物展现出的有效AhR激动剂活性例如小于靛玉红。

此研究的目的是评估测试物作为皮肤黑色素生成调节剂在重复暴露于测试物之后的MelanoDerm

测试物和分析对照物

分析对照物包括：阳性对照物-1％曲酸；阴性对照物-无菌去离子水；以及溶剂对照物-在EPI-100-LLMM中制备的DMSO(二甲亚砜)。

此研究不使用阴性对照物。替代地，使用溶剂对照物(17AA70)分别校正与经阳性对照物处理的组织和经测试物处理的组织有关的数据。

另外，将测试物和对照物分别施加于各组4个组织，其中2个用于组织存活率(MTT)终点，2个用于黑色素终点。

测试系统

此研究中使用由MatTek公司(马萨诸塞州亚什兰(Ashland,MA))提供的MelanoDerm

实验设计和方法

此研究的实验设计由以下组成：如果可能则测定纯净测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH，以及用决定性分析测定相对组织存活率和测试物作为皮肤黑色素生成调节剂对重复暴露之后的MelanoDerm

所用方法是MatTek公司提供的程序的修改。

培养基和试剂

MelanoDerm

测试物的制备和递送

除非此方案内另外说明，否则将二十五微升的各种测试物直接施加于组织上以便覆盖上表面。视测试物的性质(液体、凝胶、面霜、泡沫等)而定，可能需要使用给药装置、筛网或其它辅助手段将测试物均一展布于组织表面上。

施用途径

在7天试验期间，每48小时(在距离前一次处理的48+2小时时间范围内)将测试物局部施加于MelanoDerm

pH测定

如果可能，则测定纯净液体测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH。使用pH纸(例如用于估测的pH范围为0-14，和/或用于测定较精确值的pH范围为5-10)测定pH。较窄范围的pH纸上的典型pH增量是约0.3到0.5pH单位。pH纸上的最大增量是1.0pH单位。

对照

决定性分析包括阴性对照、阳性对照和一个溶剂对照(DMSO)。标示为分析阴性对照的MelanoDerm

评估测试物对MTT的直接还原

需要评估各种测试物直接还原MTT的能力。在MTT添加培养基中制备1.0mg/mL MTT溶液。将约25μL的测试物添加到1mL MTT溶液中并且在黑暗中、在37±1℃下培育混合物一至三小时。同时测试阴性对照物：25μL的无菌去离子水。如果MTT溶液颜色变成蓝色/紫色，则推测测试物已经将MTT还原。水不溶性测试材料可能已经显示了仅在测试物与培养基之间的界面处直接还原(暗化)。

MelanoDerm

签收MelanoDerm

接收当天(施用的前一天)，移出适当体积的MelanoDerm

决定性分析

组织暴露：在开始培养之后的至少16小时，使用数码相机对五个MelanoDerm

开始培养之后的至少16小时，将组织的其余部分转移到新的6孔培养板上，所述培养板含有每孔0.9mL新制的预升温的EPI-100-LLMM。在7天时间范围内进行试验。五个组织在第一天加以局部处理，并且每48小时(在距离前一次处理的48+2小时的时间范围内)用25μL各种测试物处理。每日更新培养基(在距离前一次再馈加的24+2小时的时间范围内)；将组织转移到新的6孔培养板中，所述培养板含有每孔0.9mL新制的预升温的EPI-100-LLMM。

第一天，局部处理五个组织，并且每48小时(在距离前一次处理的48+2小时的时间范围内)分别用25μL阳性对照物和阴性/溶剂对照物处理。每日更新培养基(在距离前一次再馈加的24+2小时的时间范围内)；将组织转移到新的6孔培养板中，所述培养板含有每孔0.9mL新制的预升温的EPI-100-LLMM。组织在含有5±1％CO2的增湿空气气氛中、在37±1℃(标准培养条件)下培育适当的暴露时间。

施用当天，首先使用每次冲洗约500μL的CMF-DPBS轻轻地冲洗MelanoDerm

在7天试验结束时，使用数码相机对经阴性/溶剂或阳性对照物处理和经各种测试物处理的MelanoDerm

MTT分析：将PBS中制备的MTT的10X储备液(在分批制备时过滤)解冻且在温热的MTT添加培养基中稀释，以在使用之前两小时内产生1.0mg/mL溶液。将三百微升的MTT溶液添加到预标记的24孔培养板的各标示孔中。

在暴露时间之后，标示用于MTT分析的各MelanoDerm

在3±0.1小时之后，将MelanoDerm

黑色素分析：在适当的暴露时间结束时，使用每次冲洗约500μL的CMF-DPBS将标示用于黑色素分析的MelanoDerm

在黑色素萃取分析的当天，将切除的组织在室温下解冻约10分钟。将250μLSolvable添加到每个微量离心管中，并且在60+2℃下培育管至少16小时。通过将黑色素溶解于Solvable中来制备1mg/mL黑色素标准储备溶液。由1mg/mL储备液制备一系列0mg/mL到0.33mg/mL范围的黑色素标准物。通过将0.6mL的1mg/mL黑色素标准储备溶液添加到1.2mLSolvable中，然后制备一系列五种以上稀释液(3倍稀释)来制备标准物系列。Solvable用作零标准物。黑色素标准物系列和Solvable在60+2℃下培育至少16小时。

黑色素萃取开始之后至少16小时，将含有样品(代表从MelanoDerm

用于评估残余测试物还原MTT的杀灭对照

为了证明可能的残余测试物不具有直接还原MTT的作用，在决定性分析中进行功能检查，以表明测试材料不结合至组织和产生假MTT还原信号。

为了确定残余测试物是否具有直接还原MTT的作用，使用冷冻杀灭的对照组织。通过将未处理的MelanoDerm

如果在经测试物处理的杀灭对照物中观察到很少MTT还原或未观察到MTT还原，则在测试物处理的存活组织中观察到的MTT还原可能归因于活细胞。如果在经处理的杀灭对照物中存在明显的MTT还原(相对于经处理的存活组织中的量)，则必须考虑促成化学还原的其它步骤或可以认为测试物在这一系统中是不可测试的。

数据分析

计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从阴性/溶剂对照组的平均OD550值中减去来确定阴性/溶剂对照组的平均OD550校正值。通过从每一者中减去空白孔的平均OD550值来确定个别测试物暴露和阳性对照物暴露的OD550校正值。使用Excel电子表格进行所有计算。虽然所论述的算法是为了计算处理组水平的最终终点分析而执行，但是能够将相同计算应用于个别重复实验。

校正的测试物暴露OD

如果使用杀灭对照物(KC)，则执行以下额外计算以对测试物残余物直接还原的MTT的量进行校正。从每一个经测试物处理的杀灭对照物的原始OD550值中减去经阴性对照物处理的杀灭对照物的原始OD550值，以确定经测试物处理的杀灭对照物的OD550净值。

每种测试物KC的净OD

OD550净值表示由于测试物残余物在特定暴露时间直接还原而引起的还原的MTT的量。一般来说，如果OD550净值大于0.150，则从经处理的存活组织的OD550校正值中减去MTT还原的净数量，以获得最终的OD550校正值。然后利用这些最终OD550校正值测定对照组存活率的百分比。

最终校正的OD

最后，产生对照组计算的以下百分比：

存活率％＝[(测试物或阳性对照物的最终OD550校正值)/(阴性/溶剂对照物的平均OD550校正值)]×100

黑色素分析：捕获原始吸光度数据，作为打印文件保存，并输入Excel电子表格。测定每个测试样品(代表第0天从未处理的MelanoDerm

结果

图128汇总了测试物、阴性对照和未处理组织的平均组织存活率和黑色素浓度结果。初步结果表明，应用于本发明的咔唑化合物的某些配制物可以独立地展现中等亮肤作用，其使咔唑的皮肤暗化活性减弱。

图129汇总了在独立实验中所观察的测试物和未处理组织的平均组织存活率和黑色素浓度结果。包含例如马拉色菌素和靛玉红的组合处理展现了比任一化合物本身更有效的亮肤作用。

此研究的目的是观察和报告暴露于靛玉红和靛玉红衍生物的B16黑色素细胞的黑色素生成和存活率。

材料和试剂

接种培养基将包括不含L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺的DMEM。分析培养基将包括不含酚红和L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺和aMSH的DMEM。其它试剂将包括曲酸、DMSO和MTT。测试细胞将是B16细胞(ATCC CRL-6475)。

方案

培养B16黑色素细胞直至70％汇合，收集细胞。细胞以4000个细胞/孔的密度接种于96孔培养板中且允许附着过夜。次日，在B16分析培养基中稀释测试物和对照物。抽吸过夜的培养基，施加200μL测试物和对照物。在37℃和10％CO

结果

预期本发明的化合物和组合物(包括靛玉红和其化学类似物)将抑制黑色素生成。预期靛玉红的化学类似物展现出例如比靛玉红更强的黑色素生成抑制活性。同样，预期靛玉红的某些化学类似物展现出的有效黑色素生成抑制活性例如小于靛玉红。

预期本发明的化合物和组合物将诱导黑色素细胞发生细胞凋亡，和调节黑色素细胞活性、黑色素产生、黑素体生物合成和/或黑素体转移到至少与靛玉红一样强。还考虑了本发明的某些化合物和组合物对这些生物过程的影响不如靛玉红强。与更强效物质相比，此类化合物和组合物可以具有更有利的毒性特征。

预期本发明的化合物和组合物至少与用于调节皮肤色素沉着的靛玉红一样有效，包括亮肤以及改善由不同病症引起的色素沉着过度/色素沉着不足。另外预期本发明的化合物和组合物就例如半衰期和吸收而言将展现有利的药代动力学特征。某些化合物将展现较长半衰期，而其它将展现较短半衰期。类似地，某些化合物将展现不同吸收特征，其中一些化合物耗费较长时间被完全吸收，而其它耗费较少时间被完全吸收。

下表5显示了本发明化合物的结构和名称。

试剂

Alexa Fluor 488膜联蛋白V/死细胞凋亡试剂盒、胎牛血清(FBS)、0.25％胰蛋白酶-EDTA(1x)、半胱氨酸蛋白酶-Glo 3/7分析、RPMI 1640培养基、杜尔贝科氏改进的伊格尔培养基，和抗生素抗霉菌溶液(100x)。

细胞系MeWo(

实验方法

收集细胞并且使用Countess细胞计数器测定细胞数量。用培养基将细胞稀释到所期望的密度。举例来说，最终细胞密度对于6小时和24小时处理而言可以是4,000个细胞/孔，而对于48小时和72小时处理而言可以是2,000个细胞/孔。膜联蛋白V分析是使用384孔透明底培养板(Corning 3712)，而半胱氨酸蛋白酶-Glo分析则使用384孔实心白底培养板(Corning 3570)。所有培养板用盖子覆盖并且在37℃和5％CO

将测试化合物溶解于DMSO中，得到30mM储备液。进行10倍稀释以产生3mM和0.3mM浓度。0.9mM星形孢菌素用作阳性对照物，而DMSO用作阴性对照物(NC)。使用液体处置器Echo550，从化合物源培养板转移132.5nL化合物到384孔细胞培养板。指定的培育时间之后，从培育箱中移出培养板用于检测。

将测试组合物溶解于DMSO、EPI-100-LLMM或任何适当溶剂中，并且可以根据下表2-7中的说明制备。适当溶剂已为所属领域的技术人员所众所周知。

对于膜联蛋白V分析来说，从培育箱中移出培养板并且去除培养基。用40μL PBS洗涤细胞两次，并且每孔添加15μL预混合的膜联蛋白V-FITC和Hoechst 33342染料工作溶液。培养板在室温下培育20分钟，密封且以1,000rpm离心1分钟以去除气泡。使用ImageXpressNano读板。

对于半胱氨酸蛋白酶-Glo分析来说，从培育箱中移出培养板并且在室温下平衡15分钟。实验之前，还将半胱氨酸蛋白酶-Glo 3/7试剂解冻并且平衡至室温。将半胱氨酸蛋白酶-Glo试剂以与培养基的1:1比率添加到所需孔中。培养板在室温下培育15分钟且使用EnSpire

膜联蛋白V分析和半胱氨酸蛋白酶3/7分析结果

预期本发明的化合物和组合物(包括组合物#1-5)将诱导细胞死亡。预期本发明的组合物展现出例如比单独的至少一种组分化合物更强的细胞凋亡诱导活性。同样，预期本发明的组合物展现出的有效细胞凋亡诱导活性小于例如单独的至少一种组分化合物的。与更强效组合物相比，此类组合物可以具有更有利的毒性特征。

试剂

实验方法

对于CellTiter-Glo分析来说，在10mM DMSO溶液中制备测试化合物。化合物连续稀释成12种浓度。从100,000个细胞/毫升的悬浮液中分配40μL细胞到384孔培养板(Corning3570)的每个孔中。培养板在37℃、5％CO

将测试组合物溶解于DMSO、EPI-100-LLMM或任何适当溶剂中并且可以根据下表2-7中的说明制备。适当溶剂已为所属领域的技术人员所众所周知。

结果

预期本发明的化合物和组合物(包括组合物#1-5)将诱导细胞死亡。预期本发明的组合物展现出例如比单独的至少一种组分化合物更强的细胞凋亡诱导活性。同样，预期本发明的组合物展现出的有效细胞凋亡诱导活性小于例如单独的至少一种组分化合物的。与更强效组合物相比，此类组合物可以具有更有利的毒性特征。

分析程序

用于稳定转染的HepG2细胞的培养基是通过用高葡萄糖和L-谷氨酰胺以及10％FBS补充DMEM来制备的。

在T-75烧瓶中、在37℃、5％CO

经培育的细胞用5mL PBS冲洗。将PBS抽吸掉，向烧瓶中添加1.5mL胰蛋白酶，并且在37℃下培育细胞约5分钟或直至细胞脱离且漂浮。通过添加过量的含血清培养基来使胰蛋白酶灭活。

将细胞悬浮液转移到锥形管中并且以120g离心10分钟以使细胞集结。将细胞以恰当密度再悬浮于接种培养基中。将40μL细胞转移到384孔培养板(5×10

然后，制备测试化合物、测试组合物和奥美拉唑阳性对照物的储备溶液。使用Echo550将化合物和组合物溶液转移到分析板中。然后将培养板放回到培育箱中进行化合物/组合物处理。

随后，在处理24小时之后，从培育箱中移出培养板并且允许在环境温度下冷却。将与培养基的等量的30μL的One-Glo试剂添加至每个孔中。使细胞溶解至少3分钟，然后用光度计测量。

利用非线性回归分析，通过XLfit将剂量响应作图，并计算EC

结果

预期本发明的化合物和组合物(包括组合物#1-5)将调节AhR活性。预期本发明的组合物展现出例如比单独的至少一种组分化合物更强的AhR激动剂活性。同样，预期本发明的组合物展现出的有效AhR激动剂活性小于例如单独的至少一种组分化合物的。还预期本发明的组合物展现出例如比单独的至少一种组分化合物更强的AhR拮抗剂活性。同样，还预期本发明的组合物展现出的有效AhR拮抗剂活性小于例如单独的至少一种组分化合物的。

此研究的目的是评估测试物作为皮肤黑色素生成调节剂在重复暴露于测试物之后的MelanoDerm

测试物和分析对照物

分析对照物包括：阳性对照物-马拉色菌素(CV-8684)(500μM)(17AJ41)和溶剂对照物-在EPI-100-LLMM中制备的DMSO(二甲亚砜)。

另外，将测试物和对照物分别施加于各组4个组织，其中2个用于组织存活率(MTT)终点，2个用于黑色素终点。

测试系统

此研究中使用由MatTek公司(马萨诸塞州亚什兰)提供的MelanoDerm

实验设计和方法

此研究的实验设计由以下组成：如果可能则测定纯净测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH，以及用决定性分析测定相对组织存活率和测试物作为皮肤黑色素生成调节剂对重复暴露之后的MelanoDerm

所用方法是MatTek公司提供的程序的修改。

培养基和试剂

MelanoDerm

测试物的制备和递送

除非此方案内另外说明，否则将二十五微升的各种测试物直接施加于组织上以便覆盖上表面。视测试物的性质(液体、凝胶、面霜、泡沫等)而定，可能需要使用给药装置、筛网或其它辅助手段将测试物均一展布于组织表面上。

施用途径

在7天试验期间，每48小时(在距离前一次处理的48+2小时时间范围内)将测试物局部施加于MelanoDerm

pH测定

如果可能，则测定纯净液体测试物(和/或给药溶液，适当时)的pH。使用pH纸(例如用于估测的pH范围为0-14，且/或用于测定较精确值的pH范围为5-10)测定pH。较窄范围的pH纸上的典型pH增量是约0.3到0.5pH单位。pH纸上的最大增量是1.0pH单位。

对照

决定性分析包括阴性对照、阳性对照和一个溶剂对照(DMSO)，或阳性对照和溶剂对照(DMSO)。标示为分析阴性/溶剂对照的MelanoDerm

评估测试物对MTT的直接还原

需要评估各种测试物直接还原MTT的能力。在MTT添加培养基中制备1.0mg/mL MTT溶液。将约25μL的测试物添加到1mL MTT溶液中并且在黑暗中、在37±1℃下培育混合物一至三小时。同时测试阴性对照物25μL无菌去离子水或溶剂对照物25μL DMSO。如果MTT溶液颜色变成蓝色/紫色，则推测测试物已经将MTT还原。水不溶性测试材料可能已经显示了仅在测试物与培养基之间的界面处直接还原(暗化)。

MelanoDerm

签收MelanoDerm

接收当天(施用的前一天)，移出适当体积的MelanoDerm

决定性分析

组织暴露：在开始培养之后的至少16小时，使用数码相机对五个MelanoDerm

开始培养之后的至少16小时，将组织的其余部分转移到新的6孔培养板上，所述培养板含有每孔0.9mL新制的预升温的EPI-100-LLMM。在7天时间范围内进行试验。四个或五个组织在第一天加以局部处理并且每48小时(在距离前一次处理的48+2小时时间范围内)用25μL各种测试物处理。每日更新培养基(在距离前一次再馈加的24+2小时的时间范围内)；将组织转移到新的6孔培养板中，所述培养板含有每孔0.9mL新制的预升温的EPI-100-LLMM。

第一天，局部处理四个或五个组织，并且每48小时(在距离前一次处理的48+2小时时间范围内)分别用25μL阳性对照物和阴性/溶剂对照物加以处理。每日更新培养基(在距离前一次再馈加的24+2小时的时间范围内)；将组织转移到新的6孔培养板中，所述培养板含有每孔0.9mL新制的预升温的EPI-100-LLMM。组织在含有5±1％CO2的增湿空气气氛中、在37±1℃(标准培养条件)下培育适当的暴露时间。

施用当天，首先使用每次冲洗约500μL的CMF-DPBS轻轻地冲洗MelanoDerm

在7天试验结束时，使用数码相机对经阴性/溶剂或阳性对照物处理和经各种测试物处理的MelanoDerm

MTT分析：将PBS中制备的MTT的10X储备液(在分批制备时过滤)解冻且在温热的MTT添加培养基中稀释，以在使用之前两小时内产生1.0mg/mL溶液。将三百微升的MTT溶液添加到预标记的24孔培养板的各标示孔中。

在暴露时间之后，标示用于MTT分析的各MelanoDerm

在3±0.1小时之后，将MelanoDerm

黑色素分析：在适当的暴露时间结束时，使用每次冲洗约500μL的CMF-DPBS将标示用于黑色素分析的MelanoDerm

在黑色素萃取分析的当天，将切除的组织在室温下解冻约10分钟。将250μLSolvable添加到每个微量离心管中，并且在60+2℃下培育管至少16小时。通过将黑色素溶解于Solvable中来制备1mg/mL黑色素标准储备溶液。由1mg/mL储备液制备一系列0mg/mL到0.33mg/mL范围的黑色素标准物。通过将0.6mL的1mg/mL黑色素标准储备溶液添加到1.2mLSolvable中，然后制备一系列五种以上稀释液(3倍稀释)来制备标准物系列。Solvable用作零标准物。黑色素标准物系列和Solvable在60+2℃下培育至少16小时。

黑色素萃取开始之后至少16小时，将含有样品(代表从MelanoDerm

用于评估残余测试物还原MTT的杀灭对照

为了证明可能的残余测试物不具有直接还原MTT的作用，在决定性分析中进行功能检查以表明测试材料不结合至组织和产生假MTT还原信号。

为了确定残余测试物是否具有直接还原MTT的作用，使用冷冻杀灭的对照组织。通过将未处理的MelanoDerm

如果在经测试物处理的杀灭对照物中观察到很少MTT还原或未观察到MTT还原，则在测试物处理的存活组织中观察到的MTT还原可能归因于活细胞。如果在经处理的杀灭对照物中存在明显的MTT还原(相对于经处理的存活组织中的量)，则必须考虑促成化学还原的其它步骤或可以认为测试物在这一系统中是不可测试的。

数据分析

计算空白孔的平均OD550值。通过将空白孔的平均OD550值从阴性/溶剂对照组的平均OD550值中减去来确定阴性/溶剂对照组的平均OD550校正值。通过从每一者中减去空白孔的平均OD550值来确定个别测试物暴露和阳性对照物暴露的OD550校正值。使用Excel电子表格进行所有计算。虽然所论述的算法是为了计算处理组水平的最终终点分析而执行，但是能够将相同计算应用于个别重复实验。

校正的测试物暴露OD

如果使用杀灭对照物(KC)，则执行以下额外计算以对测试物残余物直接还原的MTT的量进行校正。从每一个经测试物处理的杀灭对照物的原始OD550值中减去经阴性对照物处理的杀灭对照物的原始OD550值，以确定经测试物处理的杀灭对照物的OD550净值。

每种测试物KC的净OD

OD550净值表示由于测试物残余物在特定暴露时间直接还原而引起的还原的MTT的量。一般来说，如果OD550净值大于0.150，则从经处理的存活组织的OD550校正值中减去MTT还原的净数量，以获得最终的OD550校正值。然后利用这些最终OD550校正值测定对照组存活率的百分比。

最终校正的OD

最后，产生对照组计算的以下百分比：

存活率％＝[(测试物或阳性对照物的最终OD550校正值)/(阴性/溶剂对照物的平均OD550校正值)]×100

黑色素分析：捕获原始吸光度数据，作为打印文件保存，并输入Excel电子表格。测定每个测试样品(代表第0天从未处理的MelanoDerm

结果

图131汇总了测试物、测试组合物、阳性对照物和溶剂对照物的平均组织存活率和黑色素浓度结果。包含化合物的组合物#1和#2展现了当化合物组合成单一组合物时的协同作用。

图132汇总了测试物、测试组合物、阳性对照物和溶剂对照物的平均组织存活率和黑色素浓度结果。包含化合物的组合物#2、#3、#4和#5展现了当化合物组合成单一组合物时的协同作用。

本研究的目的是观察以及报告暴露于含有马拉色氏霉菌属衍生的化合物和/或其化学类似物的组合物的B16黑色素细胞的黑色素生成和存活率。

材料和试剂

接种培养基将包括不含L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素和L-谷氨酰胺的DMEM。分析培养基将包括不含酚红和L-谷氨酰胺、FBS、青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺和aMSH的DMEM。其它试剂将包括曲酸、DMSO和MTT。测试细胞将是B16细胞(ATCC CRL-6475)。

方案

培养B16黑色素细胞直至70％汇合，收集细胞。细胞以4000个细胞/孔的密度接种于96孔培养板中且允许附着过夜。次日，在B16分析培养基中稀释测试物、测试组合物和对照物。抽吸过夜培养基，施加200μL测试物和对照物。在37℃和10％CO

结果

预期本发明的化合物和组合物(包括组合物#1-5)将抑制黑色素生成。预期本发明的组合物展现出例如比单独的至少一种组分化合物更强的黑色素生成抑制活性。同样，预期某些组合物展现出的有效黑色素生成抑制活性例如小于至少一种组分化合物。

预期本发明的化合物和组合物将诱导黑色素细胞发生细胞凋亡，和调节黑色素细胞活性、黑色素产生、黑色素浓度、黑素体生物合成和/或黑素体转移。还考虑了本发明的某些化合物和组合物对这些生物过程的影响不太强。与更强效物质相比，此类化合物和组合物可以具有更有利的毒性特征。

预期本发明的化合物和组合物将调节皮肤色素沉着，包括亮肤以及改善由不同病症引起的色素沉着过度/色素沉着不足。另外预期本发明的化合物和组合物就例如半衰期和吸收而言将展现有利的药代动力学特征。某些化合物将展现较长半衰期，而其它将展现较短半衰期。类似地，某些化合物将展现不同吸收特征，其中一些化合物耗费较长时间被完全吸收，而其它耗费较少时间被完全吸收。

AB17590的合成

如图133A中所示，在0℃下，向化合物1a(25.0g，0.357mol，1.0eq)于四氢呋喃(250mL)中的溶液中添加乙炔基溴化镁(0.5M，于THF中，1.07L，0.535mol，1.5eq)，并且使反应混合物升温到室温，搅拌2小时。然后，混合物用氯化铵饱和水溶液淬灭且用乙酸乙酯萃取。有机层经无水Na

在氮气气氛下，在0℃下，向化合物1b(9.5g，98.96mmol，1.0eq)于四氢呋喃(100mL)中的混合物中添加60％氢化钠(4.7g，0.119mol，1.2eq)于二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液。30分钟之后，在0℃下添加硫酸二甲酯(22.4g，0.178mol，1.8eq)。添加之后，使反应混合物升温到室温，并且在室温下搅拌30分钟，然后缓慢添加乙酸(1ml)。从反应混合物中直接蒸馏产物。由此获得化合物1c(10.0g，91％产率)。

在室温下，在氮气气氛下，向化合物1(8.0g，24.02mmol，1.0eq)和化合物1c(2.9g，26.43mmol，1.1eq)于三乙胺(80mL)中的溶液中添加碘化亚铜(456mg，2.40mmol，0.1eq)和Pd(PPh

向烘干的烧瓶中添加二氯化铂(694mg，2.06mmol，0.1eq)、碳酸钠(3.3g，30.95mmol，1.5eq)、三(五氟苯基)膦(2.2g，4.13mmol，0.2eq)、6-甲基吲哚(4.8g，41.27mmol，2.0eq)和化合物2(6.5g，20.63mmol，1.0eq)于二噁烷(650mL)中的混合物。烧瓶用氮气脱气，密封并且加热到100℃，维持16小时。通过TLC监测反应混合物的进度。在减压下浓缩溶剂。用乙酸乙酯稀释残余物并且用水、饱和盐水萃取。有机层经无水硫酸钠干燥并且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱(0到10％乙酸乙酯/石油醚)来提纯，得到化合物3(3.0g，36％)。TLC：PE:EA＝10:1，254nm；R

在0℃下，向化合物3(3.0g，7.50mmol，1.0eq)于四氢呋喃(30mL)中的溶液中添加甲醇钠(5M，于MeOH中，6.0mL，29.98mmol，4.0eq)。使反应混合物升温到室温并且搅拌2小时。通过TLC监测反应混合物的进度。在减压下浓缩反应混合物。残余物通过硅胶色谱(0到10％乙酸乙酯/石油醚)来提纯，得到化合物4(1.5g，66％)。TLC：PE:EA＝5:1，254nm；R

在0℃下，在氩气下，向干燥的500mL三颈圆底烧瓶中添加二甲基甲酰胺(10mL)。然后，历经10分钟缓慢添加氧氯化磷(1.2g，7.60mmol，1.2eq)，同时维持内部温度低于5℃。在0℃下搅拌30分钟之后，历经10分钟缓慢添加化合物4(1.9g，6.33mmol，1.0eq)于二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液，同时维持内部温度低于5℃。所得混合物在室温下搅拌16小时。反应完成之后(通过使用20％乙酸乙酯/己烷的TLC监测)，将反应混合物倾入饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)中并且搅拌1小时。用乙酸乙酯(2×100mL)萃取所得混合物。合并的有机层用水、饱和盐水洗涤，且经硫酸钠干燥。过滤溶剂并且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱(10-50％乙酸乙酯/石油醚)提纯，获得化合物5(1.8g，89％)。TLC：PE:EA＝1:1，254nm；R

在0℃下，向化合物5(1.8g，5.49mmol，1.0eq)于四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(3.0g，13.72mmol，2.5eq)和4-二甲氨基吡啶(1.4g，11.25mol，2.05eq)。使反应混合物升温到室温，搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物的进度。在减压下浓缩反应混合物，且用乙酸乙酯稀释残余物，用1N盐酸、饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)和盐水(300mL)洗涤。分离出有机层并且用无水硫酸钠干燥，过滤浓缩。残余物通过硅胶色谱(0-10％乙酸乙酯/石油醚)提纯，获得化合物6(2.4g，82％)。TLC：PE:EA＝10:1，254nm；R

在0℃下，向化合物6(2.4g，4.55mmol，1.0eq)于叔丁醇(60mL)中的溶液中添加2-甲基-2-丁烯(30mL)，随后添加亚氯酸钠(8.2g，90.91mmol，20.0eq)、磷酸二氢钠(14.2g，90.91mmol，20.0eq)和水(60mL)。将混合物缓慢升温到室温，并且在室温下搅拌15小时。通过TLC监测反应混合物的进度。用二氯甲烷(100mL)稀释反应混合物且分离。有机层用水(80mL)、盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，且在减压下浓缩，获得粗化合物7(2.5g，99％)。TLC：PE:EA＝2:1，254nm；R

在0℃下，向化合物7(2.5g，4.60mmol，1.0eq)于二甲基甲酰胺(30mL)中的溶液中添加碳酸钾(952mg，6.89mmol，1.5eq)和碘甲烷(978mg，6.89mmol，1.5eq)。使反应混合物升温到室温且搅拌2小时。通过TLC监测反应混合物的进度。用乙酸乙酯(100mL)稀释反应混合物并且用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，并且在减压下浓缩。残余物通过硅胶色谱(5-17％乙酸乙酯/石油醚)提纯，获得化合物8(2.3g，89％)。TLC：PE:EA＝5:1，254nm；R

化合物8(1.3g，2.33mmol，1.0eq)于盐酸(3M，于EA中，30mL)中的混合物在室温下搅拌16小时。通过TLC监测反应。然后在减压下浓缩混合物。残余物通过硅胶色谱(10-25％乙酸乙酯/石油醚)来提纯，得到呈黄色固体状的化合物AB17590(502mg，61％)。TLC:PE:EA＝3:1,254nm；R

AB17653的合成

如图133B中所示，将含化合物1(721mg，3.20mmol，1.0eq)、化合物1a(560mg，3.20mmol，1.0eq)和碳酸钠(866mg，8.17mmol，2.55eq)混合物的甲醇(10mL)在室温下、在氮气气氛下搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，过滤混合物且用甲醇和水洗涤滤饼，得到呈红色固体状的化合物AB17653(979mg，89％)。TLC:PE/EA＝3/1,254nm；R

AB17654的合成

如图133B中所示，将含化合物AB17653(979mg，2.88mmol，1.0eq)和羟胺盐酸盐(520mg，7.49mmol，2.6eq)混合物的吡啶(30mL)在120℃下、在氮气气氛下搅拌2小时。通过LCMS监测反应混合物的进度。反应完成之后，在减压下浓缩混合物且添加1N HCl直至固体出现为止。过滤混合物并且将滤饼溶解于1N NaOH中。然后添加3N HCl以调节pH＝5，过滤。用1N HCl洗涤滤饼，得到呈红色固体状的化合物AB17654(500mg，48％)。LC-MS:357.95(M+1)

AB17655的合成

如图133B中所示，将含化合物2(637mg，3.86mmol，1.0eq)、化合物1a(676mg，3.86mmol，1.0eq)和碳酸钠(1044mg，9.84mmol，2.55eq)混合物的甲醇(10mL)在室温下、在氮气气氛下搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，过滤混合物并且用甲醇和水洗涤滤饼，得到呈红色固体状的化合物AB17655(1027mg，95％)。LC-MS:281.05(M+1)

AB17656的合成

如图133B中所示，化合物AB17655(1027mg，3.67mmol，1.0eq)和羟胺盐酸盐(663mg，9.54mmol，2.6eq)于吡啶(30mL)中的混合物在110℃下、在氮气气氛下搅拌2小时。通过LCMS监测反应混合物的进度。反应完成之后，在减压下浓缩混合物且添加1N HCl直至固体出现为止。过滤混合物并且将滤饼溶解于1N NaOH中。然后添加3N HCl以调节pH＝5，过滤。用1N HCl洗涤滤饼，得到呈红色固体状的化合物AB17656(500mg，48％)。LC-MS:296.00(M+1)

AB17657的合成

如图133B中所示，化合物3(362mg，2.46mmol，1.0eq)、化合物1a(431mg，2.46mmol，1.0eq)和碳酸钠(666mg，6.28mmol，2.55eq)于甲醇(10mL)中的混合物在室温下、在氮气气氛下搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，过滤混合物并且用甲醇和水洗涤滤饼，得到化合物4(606mg，93％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；R

化合物4(606mg，2.31mmol，1.0eq)和羟胺盐酸盐(418mg，6.01mmol，2.6eq)于吡啶(20mL)中的混合物在120℃下、在氮气气氛下搅拌2小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，在减压下浓缩混合物且添加1N HCl直至固体出现为止。过滤混合物并且将滤饼溶解于1N NaOH中。然后添加3N HCl以调节pH＝5，过滤。用1N HCl洗涤滤饼，得到呈棕色固体状的化合物AB17657(500mg，78％)。TLC:PE/EA＝1/1,254nm；R

AB17658的合成

如图133B中所示，化合物5a(337mg，1.73mmol，1.0eq)、化合物5b(554mg，1.73mmol，1.0eq)和氢氧化钾(1114mg，3.46mmol，2.0eq)于乙腈(10mL)中的混合物在35℃下、在氮气气氛下搅拌1.5小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，在减压下浓缩混合物，残余物通过硅胶色谱来提纯，得到化合物5c(436mg，99％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；R

化合物5(330mg，1.72mmol，1.0eq)、化合物5c(436mg，1.72mmol，1.0eq)和碳酸钠(465mg，4.38mmol，2.55eq)于甲醇(10mL)中的混合物在室温下、在氮气气氛下搅拌3小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，过滤混合物并且用甲醇和水洗涤滤饼，得到化合物6(617mg，93％)。TLC：PE/EA＝1/1，254nm；R

化合物6(617mg，1.60mmol，1.0eq)和羟胺盐酸盐(290mg，4.17mmol，2.6eq)于吡啶(20mL)中的混合物在110℃下、在氮气气氛下搅拌2小时。通过TLC监测反应混合物的进度。反应完成之后，在减压下浓缩混合物且添加1N HCl直至固体出现为止。过滤混合物并且将滤饼溶解于1N NaOH中。然后添加3N HCl以调节pH＝5，过滤。用1N HCl洗涤滤饼，得到呈红色固体状的化合物AB17658(500mg，78％)。TLC:PE/EA＝1/1,254nm；R

1％马拉色菌素配制物

本研究中所用的1％马拉色菌素配制物含有以下成分：水(aqua)-65.939％；二甲基异山梨糖醇-20.000％；橄榄油甘油聚醚-8酯-3.000％；甘油-2.991％；椰子烷烃-2.700％；丙烯酸羟乙酯/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物-1.700％；马拉色菌素-1.000％；戊二醇-1.000％；苯氧基乙醇-0.640％；椰油基辛酸酯/癸酸酯-0.300％；辛酰基乙二醇-0.200％；氯苯甘油醚-0.160％；脱水山梨糖醇异硬脂酸酯-0.140％；生育酚-0.100％；聚山梨醇酯60-0.080％；以及EDTA二钠-0.050％。

实验设计

此概念验证型研究中包括39岁皮肤类型IV女性。

实验第1天，评估受试者，使用针对性宽频Dualight UVB装置确定最低红斑剂量(“MED”)。将6个方形模板放在受试者的后背左下方(1.5cm×1.5cm)。参见图134。

图135中列出了针对受试者皮肤类型的MED光测试剂量(mJ/cm

随后，将1％马拉色菌素施加于受试者的右背的上测试方块中，每日两次，历时7天。第二个右下方方块从第4天到第7天每日处理两次，第三个中间方块在第7天施用一次。左背上每日施加媒剂产物两次，历时7天。参见图140。受试者在第7天返回研究中心接受照射。参见图136。每个测试部位均用120mJ的UVB暴露量照射。受试者在24小时后返回进行光毒性/光防护评估。参见图141。

受试者继续参加实验，接受1％马拉色菌素共14天。图142-143显示了暴露于以下处理的受试者皮肤的区域：在部位14施加1％马拉色菌素，一日两次，历时14天；在部位10施加1％马拉色菌素，一日两次，历时11天；在部位8施加1％马拉色菌素，一日两次，历时8天；在部位3施加1％马拉色菌素，一日两次，历时3天；在部位1施加1％马拉色菌素一次；且在媒剂部位施加媒剂，一日两次，分别历时7天和9天。

结果

如图141中所示，在UVB暴露之后的24小时，受试者的媒剂测试部位展现了1+到2+个红斑。参见图138中的红斑量表。相比之下，在1％马拉色菌素7天处理部位处注意到较小红斑(轻度)。评估显示处理3天的部位出现最小红斑，而施用1天的部位则无红斑。使用Mexameter MX16获取每个部位的比色测量值，并支持临床观察结果。在媒剂部位中，在马拉色菌素7天处理部位中观察到最多红斑读数。对于马拉色菌素3天和1天部位来说分别观察到最低值。参见图136。

受试者继续参加实验且在第14天返回接受重复UVB照射，第15天解译。参见图142。第15天的临床评估揭露媒剂部位在第7天出现中度红斑，而在第9天显著减少。参见图143。在1％马拉色菌素处理的部位(包括第14天、第10天和第8天部位)注意到较少红斑(轻度)。第1天和第3天注意到1％马拉色菌素部位出现最小红斑。获取每个部位的比色读数以测量红斑和黑色素指数。结果支持临床观察结果，即1％马拉色菌素处理的部位出现的红斑较少。参见图137。

第9天从媒剂部位获取切片，并且第1天和第3天从1％马拉色菌素处理的部位获取切片。用苏木精和曙红、Fontana Masson染色和MART I进行黑色素细胞定量和affymetrix研究，以分析试样。

诊断：(A)皮肤-第1天处理(1％马拉色菌素)：篮式编织状角质层，正常出现的黑色素细胞(根据Mart-1免疫过氧化酶染色来确认)，和表皮黑色素(根据Fontana Masson免疫过氧化酶染色来确认)。

诊断：(B)皮肤-第3天处理(1％马拉色菌素)：篮式编织状角质层，与C和D相比，树突状黑色素细胞更少(根据MART-1/Melan A免疫过氧化酶染色来确认)，和表皮黑色素稍微减少，呈跳跃区域状(根据Fontana Masson免疫过氧化酶染色来确认)。

诊断：(C)皮肤-媒剂：正常出现的表皮黑色素细胞(根据Mart-1免疫过氧化酶染色来确认)和表皮黑色素(根据Fontana Masson免疫过氧化酶染色来确认)。

诊断：(D)皮肤-正常：正常出现的表皮黑色素细胞(根据Mart-1免疫过氧化酶染色来确认)和表皮黑色素(根据Fontana Masson免疫过氧化酶染色来确认)。

结论

此概念验证型研究的结果证明马拉色菌素具有UV防护特性。

据设想，涉及其它患者的其它研究将证明马拉色菌素具有等效或更有效的UV防护特性。还设想，其它研究将阐明与马拉色菌素诱导的光防护作用有关的分子信号传导路径。

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