乳铁蛋白及饲料在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用和方法

技术领域

本发明涉及动物饲料添加剂领域，特别是涉及乳铁蛋白及饲料在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用和方法。

背景技术

豆粕是大豆提油后的副产品，是畜禽饲料的主要蛋白源。大豆蛋白含有大量的抗原蛋白又称致敏因子，是大豆产品中重要的抗营养因子之一，现有技术还难以达到完全钝化或消除的程度。

大豆抗原蛋白引起肉食性鱼类肠道过敏反应，主要临床症状为肠道粘膜屏障受损，肠道通透性增加，发生豆粕型肠炎。石斑鱼是我国重要的海水养殖鱼类，作为肉食性鱼类对豆粕较为敏感，在摄食高含量豆粕饲料后易发生豆粕型肠炎，降低对营养物质的消化吸收能力，因此高豆粕饲料会引起石斑鱼明显的生长和饲料利用率下降及肠炎症状。由此可见，寻找一种能够改善高含量豆粕饲料引起的生长问题和肠道问题的饲料添加剂是十分重要的。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了乳铁蛋白及饲料在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用和方法。采用乳铁蛋白能够提高饲料利用率，促进水产动物的生长，还能解决水产动物的肠道健康问题。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了乳铁蛋白在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用。

优选的，所述乳铁蛋白的每日用量为0.002～0.02g/30尾。

优选的，所述水产动物包括鱼类。

优选的，所述鱼类包括广盐性鱼类。

优选的，所述广盐性鱼类包括石斑鱼和海鲈。

本发明提供了一种改善水产动物生长性能和/或肠道生态的饲料，所述饲料包括以下质量份的组分：鱼粉15～25份、酪蛋白11～16份、豆粕40～55份、豆油6～10份、大豆卵磷脂1～3份、玉米淀粉2～5份、海藻酸钠0.7～1.3份、磷酸二氢钙1～2份、氯化胆碱0.2～0.6份、维生素C 0.01～0.05份、维生素预混物0.2～0.6 份、矿物质预混料0.3～0.6份、牛磺酸0.2～1.2份和乳铁蛋白0.2～1份；

优选的，所述饲料包括以下质量份的组分：鱼粉22份、酪蛋白14份、豆粕47份、豆油7.02份、大豆卵磷脂2份、玉米淀粉3.05～3.25份、海藻酸钠1 份、磷酸二氢钙1.5份、氯化胆碱0.4份、维生素C 0.03份、维生素预混物0.4 份、矿物质预混料0.5份、牛磺酸0.8份和乳铁蛋白0.2～1份。

本发明提供了一种改善水产动物生长性能和/或肠道生态的方法，包括以下步骤：

利用上述饲料饲喂水产动物。

优选的，所述饲料的饲喂频率为2次/d。

有益效果：本发明提供了乳铁蛋白在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用。本发明实施例中在高豆粕饲料中添加乳铁蛋白后进行了模拟实验，试验结果表明：在高豆粕饲料中添加乳铁蛋白能够提高饲料的利用率、促进水产动物的生长、维持相对稳定的脂代谢稳态、增强肠道蛋白酶活力、机体免疫功能和肠道抗氧化能力、促进水产动物对饲料蛋白质的消化，改善肠粘膜功能、维持肠道组织形态稳定、下调肠促炎因子基因的表达、上调肠抗炎因子基因的表达。

附图说明

图1为对比例1的斜带石斑鱼后肠组织切片图20x(20倍)，其中a为杯状细胞，b为固有层，c为肌层；

图2为阳性对照的斜带石斑鱼后肠组织切片图20x(20倍)，其中a为杯状细胞，b为固有层，c为肌层；

图3为实施例1的斜带石斑鱼后肠组织切片图20x(20倍)，其中a为杯状细胞，b为固有层，c为肌层；

图4为实施例2的斜带石斑鱼后肠组织切片图20x(20倍)，其中a为杯状细胞，b为固有层，c为肌层；

图5为实施例3的斜带石斑鱼后肠组织切片图20x(20倍)，其中a为杯状细胞，b为固有层，c为肌层。

具体实施方式

本发明提供了乳铁蛋白在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用。在本发明中，所述乳铁蛋白的每日用量优选为0.002～0.02g/30尾，更优选为0.005～0.01g/30尾；所述水产动物优选包括鱼类，更优选包括广盐性鱼类，最优选包括石斑鱼和海鲈。本发明实施例中以斜带石斑鱼为例对所述乳铁蛋白的效果进行说明，但不能单纯将其认定为本发明的保护范围。

本发明所述乳铁蛋白能够促进水产生物的生长、增强肠道蛋白酶活力、机体免疫功能和肠道抗氧化能力、改善肠粘膜功能、维持肠道组织形态稳定、下调肠促炎因子基因的表达、上调肠抗炎因子基因的表达，因此乳铁蛋白能够用于改善水产动物生长性能和肠道生态。

本发明实施例中以高含量豆粕饲料为例对所述乳铁蛋白的效果进行说明，但不能单纯将其认定为本发明的保护范围。

本发明提供了一种改善水产动物生长性能和/或肠道生态的饲料，所述饲料包括以下质量份的组分：鱼粉15～25份、酪蛋白11～16份、豆粕40～55份、豆油6～10份、大豆卵磷脂1～3份、玉米淀粉2～5份、海藻酸钠0.7～1.3份、磷酸二氢钙1～2份、氯化胆碱0.2～0.6份、维生素C 0.01～0.05份、维生素预混物0.2～0.6 份、矿物质预混料0.3～0.6份、牛磺酸0.2～1.2份和乳铁蛋白0.2～1份。

本发明对上述组分的来源没有特殊限定，优选的，所述鱼粉、豆粕、鱼油、大豆磷脂、玉米淀粉、牛磺酸、磷酸二氢钙、氯化胆碱和维生素C购自厦门嘉康饲料有限公司，所述酪蛋白和明胶购自甘肃华羚乳品股份有限公司，所述维生素预混物和微量元素预混料购自广州飞禧特水产科技有限公司，所述乳铁蛋白购自福建福润药业有限公司，所述海藻酸钠购自厦门嘉康饲料有限公司；所述鱼粉优选为秘鲁蒸汽鱼粉；所述酪蛋白和明胶优选为食品级酪蛋白和食品级明胶。

本发明所述饲料的原料中包括鱼粉15～25质量份，更优选为22质量份。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括酪蛋白11～16质量份，更优选为14质量份。本发明所述酪蛋白能够提供优质蛋白质。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括豆粕40～55质量份，更优选为47质量份。本发明所述豆粕用于替代部分动物蛋白，但含量＞45％会诱导石斑鱼肠炎。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括豆油6～10质量份，更优选为7.02质量份。本发明所述豆油提供石斑鱼生长所需脂肪酸。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括大豆卵磷脂1～3质量份，更优选为2质量份。本发明所述大豆卵磷脂提供石斑鱼生长所需磷脂。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括玉米淀粉2～5质量份，更优选为3.05～3.25质量份。本发明所述玉米淀粉提供碳水化合物供能。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括海藻酸钠0.7～1.3质量份，更优选为1质量份。本发明所述海藻酸钠用作饲料粘合剂。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括磷酸二氢钙1～2质量份，更优选为1.5质量份。本发明所述磷酸二氢钙提供石斑鱼生长所需钙磷。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括氯化胆碱0.2～0.6质量份，更优选为0.4质量份。本发明所述氯化胆碱提供石斑鱼生长所需胆碱。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括维生素C 0.01～0.05质量份，更优选为0.03质量份。本发明所述维生素C提供石斑鱼生长所需维生素 C。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括维生素预混物0.2～0.6 质量份，更优选为0.4质量份。本发明所述维生素预混物提供除维生素C之外的石斑鱼生长所需的维生素。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括矿物质预混料0.3～0.6 质量份，更优选为0.5质量份。本发明所述矿物质预混料提供石斑鱼生长所需微量元素。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括牛磺酸0.2～1.2质量份，更优选为0.8质量份。本发明所述牛磺酸是鱼类的条件性必需氨基酸，肉食性鱼类及幼龄鱼合成牛磺酸的能力极差，其内源牛磺酸合成量通常满足不了生长所需，要靠外源(食物)供给。

以所述鱼粉的质量份为基准，本发明提供的饲料包括乳铁蛋白为0.2～1质量份，优选为0.3～0.6质量份，即本发明所述乳铁蛋白的用量以所述鱼、酪蛋白、豆粕、豆油、大豆卵磷脂、玉米淀粉、海藻酸钠、磷酸二氢钙、氯化胆碱、维生素C、维生素预混物、矿物质预混料和牛磺酸的总质量的0.2％～1％。本发明所述乳铁蛋白能够促进水产动物的生长和解决水产动物肠炎问题。

由上述可知，本发明所述饲料能够促进水产动物生长的同时，还能改善水产动物的肠道生态；而且相较于常规饲料不会对鱼体成分产生影响。

本发明提供了一种改善水产动物生长性能和/或肠道生态的方法，包括以下步骤：

利用上述饲料饲喂水产动物。在本发明中，所述饲料的饲喂频率优选为2 次/d；所述饲料的用量优选为饲喂至鱼不再上浮采食为止。本发明所述水产动物优选包括鱼类，更优选包括广盐性鱼类，最优选包括石斑鱼。

为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的乳铁蛋白及饲料在改善水产动物生长性能和/或肠道生态中的应用和方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种改善鱼类生长缓慢和/或肠道疾病的饲料，所述饲料的组分为：鱼粉22g (22份)、酪蛋白14g(14份)、豆粕47g(47份)、豆油7.02g(7.02份)、大豆卵磷脂2g(2份)、乳铁蛋白0.2g(0.2份)、玉米淀粉3.25g(3.25份)、海藻酸钠1g(1份)、磷酸二氢钙1.5g(15份)、氯化胆碱0.4g(0.4份)、维生素C 0.03g(0.03份)、维生素预混物0.4g(0.4份)、矿物质预混料0.5g(0.5 份)、牛磺酸0.8g(0.8份)。

实施例2

一种改善鱼类生长缓慢和/或肠道疾病的饲料，所述饲料的组分为：鱼粉(22 份)、酪蛋白14g(14份)、豆粕47g(47份)、豆油7.02g(7.02份)、大豆卵磷脂2g(2份)、乳铁蛋白0.6g(0.6粉)、玉米淀粉3.15g(3.15份)、海藻酸钠1g(1份)、磷酸二氢钙1.5g(15份)、氯化胆碱0.4g(0.4份)、维生素C 0.03g(0.03份)、维生素预混物0.4g(0.4份)、矿物质预混料0.5g(0.5 份)、牛磺酸0.8g(0.8份)。

实施例3

一种改善鱼类生长缓慢和/或肠道疾病的饲料，所述饲料的组分为：鱼粉(22 份)、酪蛋白14g(14份)、豆粕47g(47份)、豆油7.02g(7.02份)、大豆卵磷脂2g(2份)、乳铁蛋白1g(1份)、玉米淀粉3.05g(3.05份)、海藻酸钠1g(1份)、磷酸二氢钙1.5g(15份)、氯化胆碱0.4g(0.4份)、维生素C 0.03g(0.03份)、维生素预混物0.4g(0.4份)、矿物质预混料0.5g(0.5份)、牛磺酸0.8g(0.8份)。

对比例1

一种石斑鱼饲料，所述饲料的组分为：鱼粉52g、酪蛋白14g、豆油4.32g、大豆卵磷脂2g、玉米淀粉23.35g、海藻酸钠1g、磷酸二氢钙1.5g、氯化胆碱0.4g、维生素C 0.03g、维生素预混物0.4g、矿物质预混料0.5g、牛磺酸0.5g。

应用例1

斜带石斑鱼购自漳州当地的一家苗种场，运回后放在诏安大北农海康养殖基地水泥池(30m

小组设置：分别采用实施例1～3、对比例1和阳性对照提供的饲料饲喂，共 5组试验，每组试验重复3次。其中阳性对照的石斑鱼饲料的组分为：鱼粉22g、酪蛋白14g、豆粕47g、豆油7.02g、大豆卵磷脂2g、乳铁蛋白1g、玉米淀粉3.35g、海藻酸钠1g、磷酸二氢钙1.5g、氯化胆碱0.4g、维生素C 0.03g、维生素预混物 0.4g、矿物质预混料0.5g、牛磺酸0.8g。

试验期为56d，试验期间，每天饱食投喂两次(8:00和17:00)，投料30min 后收集各桶残饵，饲料的用量为饲喂至鱼不再上浮采食为止。每天换水1次，换水量约为养殖水体的1/5，补加新海水到原有水桶刻度。观察鱼体摄食情况和健康状况，记录死亡鱼的数目和重量。养殖期间水温为28.5℃，溶氧为大于 5.7mg/L。

试验结束后，调查石斑鱼的生长性能、鱼体成分变化、血脂含量变化、肠道抗氧化能力、肠道消化酶活性、肠粘膜功能、肠形态学观察、血浆免疫因子以及肠道抗炎性因子基因的表达水平，调查结果见表1～9。

具体的检测方法如下：生长性能中增重率的计算公式为：增重率(％)＝100× (鱼末重-鱼初重)/鱼初重，式Ⅰ，饲料效率＝(鱼末重-鱼初重)/采食量，式Ⅱ；鱼体成分变化的调查方式采用的方法为水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分分别按照GB/T6435-2014、GB/T6432-2018、GB/T6433-2006、GB/T6438-2007的方法进行测定；血脂含量变化的调查方式采用的方法为高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、总胆固醇、甘油三酯含量用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定；肠道抗氧化能力的调查方式采用的方法为超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、总抗氧化能力、丙二醛含量用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定；肠道消化酶活性的调查方式采用的方法为脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶、蛋白酶活性用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定；肠粘膜功能的调查方式采用的方法为二胺氧化酶活性、D-乳酸、内皮素、内毒素含量用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定；肠形态学观察的调查方式采用的方法为所有的组织切片用正置荧光显微镜(LeicaDM5500B)进行观察，并在5倍镜下用LAS V4.7软件进行测量和拍照；血浆免疫因子的调查方式采用的方法为血浆IgM、C3、IgA含量均采用南京建成生物工程研究所生产的酶联免疫检测试剂盒测定；肠道抗炎性因子基因的表达水平的调查方式采用的方法为荧光定量PCR，荧光定量PCR结果计算公式为：ΔΔCt＝(Ct

表1石斑鱼生长性能

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表1记载的可知，与对比例1(未添加乳铁蛋白的高豆粕饲料组)相比，饲喂实施例1～实施例3提供的饲料(添加乳铁蛋白的高豆粕饲料组)提高了石斑鱼的生长速度，达到了对比例1的水平，饲料利用率也有提高，从而改善生长性能。

表2鱼体成分变化(％)

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表2记载的可知，饲喂阳性对照、对比例1和实施例1～实施例3提供的饲料 (高豆粕饲料中添加乳铁蛋白与否)不会对鱼体成分产生明显影响。

表3石斑鱼血脂含量变化

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表3记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)虽然不影响石斑鱼血浆高密度脂蛋白和甘油三酯含量，却能够降低石斑鱼血浆低密度脂蛋白和总胆固醇含量，维持了相对稳定的脂代谢稳态。

表4石斑鱼肠道抗氧化能力

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表4记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)虽然不影响肠道超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力，但一定程度上提高了肠道谷胱甘肽过氧化物酶活性，降低了丙二醛含量，从而增强肠道抗氧化能力。

表5石斑鱼肠道消化酶活性

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表5记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)没有明显影响肠脂肪酶和淀粉酶活性，但却明显提高了肠道胰蛋白酶和蛋白酶酶活性，因而有助于促进饲料蛋白质的消化。

表6石斑鱼肠粘膜功能

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表6记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)虽然不影响肠二胺氧化酶活性和内皮素含量，却能有效降低肠粘膜的D- 乳酸含量和内毒素含量，显示出良好的肠道粘膜保护作用。

表7石斑鱼后肠形态学观察

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表7、图1～图5记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)虽然没有明显增加粘膜褶皱数，但明显增加了肠肌层厚度，一定程度上增加了粘膜褶皱高度，从而改善肠道形态。

表8石斑鱼血浆免疫因子

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表8记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)虽不影响血浆IgA含量，却降低了血浆C3和IgM含量，减轻了高豆粕所致的机体免疫应激。

表9石斑鱼后肠道炎性因子基因的表达水平

注：同列数值上标小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，同列数值没有上标字母或相同小写字母表示没有差异(P>0.05)。试验数据以平均值±标准误(Mean±S.E.)表示。数据用SPSS22.0进行one-wayANOVA 分析，若差异显著时，采用Student-Newmnan-Keuls法进行多重比较，显著性差异水平表示为P＜0.05。

由表9记载的可知，饲喂实施例1～3提供的饲料(高豆粕饲料中添加乳铁蛋白)降低了肠道促炎因子基因(IL-1β、IL-8、TNF-α)的表达水平，提高了抗炎因子基因(TGF-1β、IL-10)的表达水平(表10)，缓解了高豆粕所致的肠炎症状。

由上述实施例记载的可知，乳铁蛋白能够改善高含量豆粕饲料引起的生长问题和肠炎问题。

虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。