食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸的测定方法

技术领域

本发明涉及食品中添加剂检测的技术领域，具体涉及食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸的测定方法。

背景技术

食品添加剂在改善食品品质和色、香、味等方面具有非常重要的作用，随着食品工业的发展，其应用也越来越广泛，但是大部分食品添加剂对人体具有一定的危害性，有些超量或超范围使用后甚至会引发癌症，因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要。GB 2760《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对食品添加剂的种类和使用范围做了明确规定，防腐剂和甜味剂是较常见的食品添加剂，而苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸是防腐剂和甜味剂中较为常见的种类；为了食用安全，建立能够准确、高效测定糕点中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法十分重要。

检索到专利号为CN201710080261.2，专利名称为苯甲酸、山梨酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾的快速检测方法的公开材料，通过分析可知，采用色谱建立、配制标准溶液，绘制标准曲线，例如，将上述100mg/L的混合标准溶液用一级水依次稀释成浓度为100mg/L，50mg/L,20mg/L，10mg/L，5mg/L，2mg/L的混合标准系列溶液于进样小瓶中，在方法设定的仪器条件下于高效液相色谱仪分析，各标准物质以峰面积对应标准浓度绘制标准曲线，对照样品色谱图。

检索到专利号为CN201910058005.2，专利名称为一种同时测定高油脂糕点中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法的公开材料，通过分析可知，包括以下步骤：

(1)将高油脂糕点样品加水超声均匀，然后依次加入10％的碳酸钠水溶液、乙酸铅和亚铁氰化钾混匀，加水定容后加入正己烷，震荡、离心3～5min后，取水相层。(2)将步骤(1)的水相层加入到装有无水硫酸镁和氯化钠的离心管中，再依次加入乙腈和10％的硫酸水溶液，震荡后离心5～8min，取上清液。(3)将步骤(2)得到的上清液加水摇匀后，用滤膜过滤并上机测试。

检索到专利号为CN201910776484.1，专利名称为一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法的公开材料，通过分析可知，包括如下步骤：1)制备混合标准溶液：分别称取苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的标准品，配制成具有浓度梯度的混合标准液；2)制备待测样品溶液：含有蛋白质的样品，称取2.5g样品于25mL比色管中，分别加入0.25mol/L亚铁氰化钾溶液和0.5mol/L乙酸锌溶液各1mL，用10％甲醇-水溶液定容，震荡2min，混匀，取10mL溶液4000rpm离心5min，取上层清液过0.22um聚醚砜滤膜得滤液备用；不含蛋白质的样品：称取2.5g样品于25mL比色管中，用10％甲醇-水定容至10mL，涡旋震荡2min，混匀，取上层清液过0.22um聚醚砜滤膜得滤液备用3)检测仪器及检测条件：仪器：高效液相色谱仪；检测器：UV检测器；色谱柱：C18柱，流动相：0.02mol/L乙酸铵和甲醇按体积比80：20混合而成；流速：1mL/min；进样量：20μL；检测波长：220nm；色谱柱温度：25℃；4)绘制标准曲线：将步骤1)配制的系列混合标准溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤(3)的色谱条件下进行洗脱和检测，以保留时间定性，根据各浓度所测峰面积的大小与其浓度的对应关系绘制标准曲线，并评估标准曲线线性度；5)待测样品检测:取步骤2)中待测样品溶液注入高效液相色谱仪中，在步骤3)的色谱条件下进行检测，测得滤液中各目标物的峰面积，以保留时间定性，根据4)中制作的标准曲线定量，计算出待测样品中苯乳酸、苯甲酸、山梨酸的含量。

通过以上公开材料的分析可知，检测方法的操作过于复杂，精密度差，准确性较差。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，而提供一种检测准确、效率高、准确定量和精密度高的食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸的测定方法。

本发明的目的是这样实现的：食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸的测定方法，其特征在于：包括，

试剂配制：分别配制氨水溶液、亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液、乙酸铵溶液和氢氧化钠溶液。

标准溶液配制：分别配制安赛蜜标准储备溶液、苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液；脱氢乙酸标准储备溶液；安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液；安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准系列工作溶液。

试样制备：取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力等采用50℃～60℃加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4℃保存，其他试样于-18℃保存；

试样提取：准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀；取适量上清液过0.22μm滤膜，待液相色谱测定；

试样溶液的测定：将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠的质量浓度；

进一步的，所述试样提取还包括准确称取约2g试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于70℃水浴加热溶解试样，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀；取适量上清液过0.22μm滤膜，待液相色谱测定。

进一步的，所述试样提取还包括准确称取约2g试样于50mL具塞离心管中，加正己烷10mL，于60℃水浴加热约5min，并不时轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液25mL，乙醇1mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，弃去有机相，水相转移至50mL容量瓶中。

进一步的，所述安赛蜜标准储备溶液为准确称取安赛蜜标准品0.1000g，用水溶解并分别定容至100mL，于4℃贮存，保存期为3个月。

进一步的，所述苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液：分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠0.118g、0.134g和0.117g，用水溶解并分别定容至100mL，于4℃贮存，保存期为6个月，当使用苯甲酸和山梨酸标准品时，需要用甲醇溶解并定容。

进一步的，所述脱氢乙酸标准储备溶液：准确称取脱氢乙酸标准品0.1000g于100mL容量瓶中，用10mL氢氧化钠溶液溶解，用水定容，于4℃贮存，保存期为3个月。

进一步的，所述安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液：分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容；于4℃贮存，保存期为1个月。

进一步的，所述安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准系列工作溶液：分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL用水定容至10mL，配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合标准系列工作溶液。

本发明的有益效果：本发明的优点在于：

1、准确定量，定量限均为0.01g/kg。

2、精密度高，在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10％。

3、通常根据国标方法检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸时，需分别依据GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》、GB/T5009.140-2003《饮料中乙酰磺胺酸钾的测定》、GB5009.121-2016《食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定》，分三次对上述待测物进行测定，分别做3次前处理，并分3次用液相色谱仪进行测定，本方法通过一次前处理，一次液相色谱仪测定，便可检测5个参数。

4、常规方法分三次检测时，往往会忽略安赛蜜、脱氢乙酸与山梨酸、苯甲酸、糖精钠重峰的问题，也就说在液相色谱图中待测物出峰没有完全分离，由于不在一个图中，往往忽略这个问题，导致检测出现假阳性。本方法对上述5种物质实现完全分离，且保留时间稳定，同时检出限和结果精密度符合国标要求。

5、脱氢乙酸检测时，受样品酸碱度影响较大，导致出峰拖尾或保留时间漂移，本方法完美解决了该问题，适用于食品中上述5种待测物的检测，不会应为待测物的酸碱性导致出峰漂移或拖尾。其他有益效果在具体实施例中详细说明。

附图说明

图1是安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠的液相色谱图；

图2是安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠的标准曲线；

图3是安赛蜜的10倍定量限(0.1g/kg)添加浓度及其回收率的试验数据；

图4是苯甲酸的10倍定量限(0.1g/kg)添加浓度及其回收率的试验数据；

图5是脱氢乙酸的10倍定量限(0.1g/kg)添加浓度及其回收率的试验数据；

图6是山梨酸的10倍定量限(0.1g/kg)添加浓度及其回收率的试验数据；

图7是糖精钠的10倍定量限(0.1g/kg)添加浓度及其回收率的试验数据；

图8是10倍定量限的空白样品加标图谱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本发明，本说明书所使用的术语如“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合；此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。

实施例1

本实施例中样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂，高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。

用到的试剂有：氨水(NH3·H2O)、亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]、乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]、无水乙醇(CH3CH2OH)、正己烷(C6H14)、甲醇(CH3OH)：色谱纯、乙酸铵(CH3COONH4)：色谱纯、氢氧化钠(NaOH)。

试剂配制的方法为：氨水溶液(1+99)：取氨水1mL，加到99mL水中，混匀。亚铁氰化钾溶液(92g/L)：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000mL。乙酸锌溶液(183g/L)：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL。乙酸铵溶液(20mmol/L)：称取1.54g乙酸铵，加入适量水溶解，用水定容至1000mL，用氨水调节pH至9-10(约加入氨水1mL)，经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。氢氧化钠溶液(20g/L)：称取20g氢氧化钠，溶于水并稀释至1L。

材料：

水相微孔滤膜：0.22μm。

塑料离心管：50mL。

仪器和设备：

高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。

分析天平：感量为0.001g和0.0001g。

涡旋振荡器。

离心机：转速>8000r/min。

匀浆机。

恒温水浴锅。

超声波发生器。

仪器参考条件：

色谱柱：XBP-C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或等效色谱柱。

流动相：甲醇+乙酸铵溶液＝5+95。

流速：1mL/min。

检测波长：230nm。

柱温：35℃。

进样量：5μL。

食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜、脱氢乙酸的测定方法，其特征在于：包括，

试剂配制：分别配制氨水溶液、亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液、乙酸铵溶液和氢氧化钠溶液。

标准溶液配制：分别配制安赛蜜标准储备溶液、苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液；脱氢乙酸标准储备溶液；安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液；安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准系列工作溶液。

试样制备：取多个预包装的饮料、液态奶等均匀样品直接混合；非均匀的液态、半固态样品用组织匀浆机匀浆；固体样品用研磨机充分粉碎并搅拌均匀；奶酪、黄油、巧克力等采用50℃～60℃加热熔融，并趁热充分搅拌均匀。取其中的200g装入玻璃容器中，密封，液体试样于4℃保存，其他试样于-18℃保存；

试样提取：准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀；取适量上清液过0.22μm滤膜，待液相色谱测定；

试样溶液的测定：将试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠的质量浓度。

标准曲线的绘制：将混合标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

计算公式：

试样中安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠(以糖精计)的含量按式计算：

式中：

X———试样中待测组分含量，单位为克每千克(g/kg)；

ρ———由标准曲线得出的试样液中待测物的质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)；

V———试样定容体积，单位为毫升(mL)；

m———试样质量，单位为克(g)；

1000———由mg/kg转换为g/kg的换算因子。

结果保留3位有效数字。

实施例2

进一步的，准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，将水相转移至50mL容量瓶中，于残渣中加水20mL，涡旋混匀后超声5min，于8000r/min离心5min，将水相转移到同一50mL容量瓶中，并用水定容至刻度，混匀。取适量上清液过0.22μm滤膜，待液相色谱测定；其中碳酸饮料、果酒、果汁、蒸馏酒等测定时可以不加蛋白沉淀剂。

实施例3

进一步的，准确称取约2g(精确到0.001g)试样于50mL具塞离心管中，加正己烷10mL，于60℃水浴加热约5min，并不时轻摇以溶解脂肪，然后加氨水溶液(1+99)25mL，乙醇1mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min，冷却至室温后，加亚铁氰化钾溶液2mL和乙酸锌溶液2mL，混匀，于8000r/min离心5min，弃去有机相，水相转移至50mL容量瓶中。

实施例4

进一步的，所述安赛蜜标准储备溶液为准确称取安赛蜜标准品0.1000g，用水溶解并分别定容至100mL，于4℃贮存，保存期为3个月。

实施例5

进一步的，所述苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液：分别准确称取苯甲酸钠、山梨酸钾和糖精钠0.118g、0.134g和0.117g，用水溶解并分别定容至100mL，于4℃贮存，保存期为6个月，当使用苯甲酸和山梨酸标准品时，需要用甲醇溶解并定容。

实施例6

进一步的，所述脱氢乙酸标准储备溶液：准确称取脱氢乙酸标准品0.1000g于100mL容量瓶中，用10mL氢氧化钠溶液溶解，用水定容，于4℃贮存，保存期为3个月。

实施例7

进一步的，所述安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液：分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液各10.0mL于50mL容量瓶中，用水定容；于4℃贮存，保存期为1个月。

实施例8

进一步的，所述安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准系列工作溶液：分别准确吸取安赛蜜、苯甲酸、脱氢乙酸、山梨酸和糖精钠混合标准中间溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL用水定容至10mL，配制成质量浓度分别为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合标准系列工作溶液。

具体实施方式是对本发明的进一步说明而非限制，对本领域普通技术人员来说在不脱离本发明实质内容的情况下对结构做进一步变换，而所有这些变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。