一种预防癌症及神经退行性疾病的奇楠艾制品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种奇楠艾制品，尤其涉及一种预防癌症及神经退行性疾病的奇楠艾制品及其制备方法。

背景技术

沉香是瑞香科沉香属(Aquilaria)植物带有树脂的木材。奇楠是沉香中最上等和最珍贵的品种，又名奇楠、伽南、伽楠、伽羅等，英文名有Kanankoh、Kyara、Chi-Nan、Qi-Nan等，因其神秘优雅的香味和丰富的油脂含量，野生市场上价格最为昂贵。目前，发现白木香新品种，受伤后可快速产生沉香，并且结香1-3年后，所产沉香具有奇楠沉香的品质，油脂丰厚、香味浓郁，而且其化学成分与奇楠沉香一致，种植周期比普通白木香周期短，市场认可度非常高，现在种植面积比较大，资源较丰富，价格实惠，可以量化生产。

奇楠沉香中的主要成分是倍半萜类和色酮类化合物，尤其是单体化合物2-(2-苯乙基)色酮和单体化合物2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]色酮的含量比较大，研究发现，这两个单体化合物具有很好的肿瘤细胞毒活性，特别是对人肝癌肿瘤细胞BEL-7401的生长有较强的抑制活性。而奇楠沉香中的倍半萜类成分，则表现出很好的乙酰胆碱酯酶抑制活性，也可说明奇楠沉香对神经系统具有保护作用。

艾叶是菊科蒿属艾蒿亚属艾植物，性辛、苦、温，归肝、脾、肾经，功能主治散寒止痛，温经止血。可用于安神助眠、缓解压力、祛风散寒、扶正祛邪、温经通络、有助于缓解宫寒、经痛等虚寒疼痛、还可以保养脾胃，改善消化不良等症状，还能预防感冒，增强免疫力，被广泛应用于人体的理疗和保健。

奇楠沉香作为一种香料，与艾叶结合，制成艾制品，可用于安神助眠、缓解压力、祛风散寒、温经通络、预防感冒，增强免疫力，市场上已经有沉香相关的艾制品，但由于沉香市场混乱，沉香品质无法保证，市面上很多沉香均为假冒伪劣产品。种植奇楠品质保证，价格实惠，产量大，可以预防癌症及神经退行性疾病，也可为癌症患者和神经退行性疾病的芳香疗法提供了一种新的视角，同时，大力开发奇楠沉香制品，带动奇楠沉香产业发展，市场前景广阔。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种预防癌症及神经退行性疾病的奇楠艾制品及其制备方法。

本发明的第一个方面是提供一种预防癌症及神经退行性疾病的奇楠艾制品，按照重量份数计，其组成成分包括：艾叶60-80份，奇楠20-40份，羧甲基淀粉1-5份。

其中，所述奇楠是指现在人工种植的白木香新品种所产生的奇楠沉香。

其中，所述奇楠的乙醇提取物得率大于20％，所述奇楠的乙醇提取物中单体化合物2-(2-苯乙基)色酮的相对含量大于25％，单体化合物2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]色酮的相对含量大于25％，倍半萜类成分的相对含量大于10％。

其中，所述艾叶为无霉变的干燥艾叶。

其中，所述奇楠艾制品可以为艾条、艾段、艾柱、艾贴、药包或香囊等，本发明不作特别限定，本领域技术人员可根据实际需求，灵活制备。

本发明的第二个方面是提供一种本发明第一个方面所述的奇楠艾制品的制备方法，包括以下步骤：(1)艾叶加工：将干燥艾叶碾碎至棉絮状；(2)奇楠加工：将奇楠沉香粉碎，过100目筛；(3)混匀：将艾绒、奇楠粉和羧甲基淀粉混匀，既得。

优选地，所述制备方法还包括步骤(4)制作：采用常规的方式将混合物制成艾条、艾柱、艾贴、药包或香囊。

本发明的第三个方面是提供本发明第一个方面所述的奇楠艾制品在制备预防癌症、和/或防治神经退行性疾病的制剂中的应用。

其中，所述癌症为白血病、和/肺癌、和/胃癌、和/肝癌。

其中，所述神经退行性疾病为老年痴呆。

本发明的第四个方面是提供本发明第一个方面所述的奇楠艾制品在制备抑制人慢性髓原白血病细胞K562、和/或人肺癌细胞株A549、和/或人胃癌细胞SGC-7901、和/或人肝癌细胞SMMC-7721的制剂中的应用。

本发明的第四个方面是提供本发明第一个方面所述的奇楠艾制品在制备抑制乙酰胆碱酯酶的制剂中的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明选择优质奇楠沉香，保证具有癌细胞毒性的单体化合物2-(2-苯乙基)色酮和2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]色酮的含量，以及具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的倍半萜类化合物的含量，将其和艾叶作为主要原料，制作工艺简单，二者协同作用，制成的奇楠艾制品香味比普通的沉香艾制品香韵更丰富，使人在身心更放松的状态下，更好地吸收艾制品的精华，同时具有良好的预防癌症、阿尔茨海默氏病等神经退行性疾病的功效，也为癌症患者和神经退行性疾病的芳香疗法提供了一种新的视角。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

准备8公斤无霉变干燥的艾叶、2公斤奇楠和100克羧甲基淀粉。将艾叶碾碎至戎状，再将奇楠粉碎并过100目筛，三种原料混匀后，用卷艾机卷成奇楠艾条。奇楠沉香品质见下述表1。

实施例2

准备6公斤无霉变干燥的艾叶，4公斤奇楠和200克羧甲基淀粉。将艾叶碾碎至戎状，再将奇楠粉碎并过100目筛，三种原料混匀后，用卷艾机卷成奇楠艾条。奇楠品质见下述表1。

实施例3

准备7公斤无霉变干燥的艾叶，3公斤奇楠沉香和500克羧甲基淀粉。将艾叶碾碎至戎状，再将奇楠粉碎并过100目筛，三种原料混匀后，用卷艾机卷成奇楠艾条。奇楠品质见下述表1。

对比例1：

本对比例所用的奇楠品质与实施例1-3均不同，其余与实施例1一样，奇楠品质见下述表1。

对比例2：

本对比例所用的奇楠品质与实施例1-3和对比例1均不同，其余与实施例1一样，奇楠品质见下述表1。

对比例3：

在实施例1基础上，将艾叶用量增加至10公斤，羧甲基淀粉用量增加至120克，其余不变，制得奇楠艾条。

对比例4：

根据专利申请号201610447915.6号专利文件制作沉香艾条，奇楠品质见下述表1。

奇楠中成分测试

采用GC-MS对实施例1-3和对比例1-2、4所采用的奇楠沉香进行测试，具体测试条件如下，测试结果见表1。

奇楠沉香采用乙醇回流提取，提取时间1.5h，提取温度80℃，提取3次，滤液浓缩得到浸膏，计算提取得率。再取适量浸膏用乙醇溶解，按照每克奇楠溶1mL乙醇比例即可，待测。

质谱条件：电子轰击(EI)离子源；电子能量70eV；离子源温度230℃；四极杆温度150℃；接口温度280℃；发射电流34.6μA；倍增器电压1434V；质量扫描范围20-550m/z。对总离子流图中的各峰经质谱数据系统检索及核对Nist2005和Wiley275标准质谱图，并借鉴前人和本研究组前期的鉴定方法，比对鉴定化合物。

色谱条件：色谱柱为弹性石英毛细管柱HP-5MS 5％Phenyl Methyl Siloxane(30m×0.25mm×0.25μm)；升温程序：柱温50℃，保持2min，以5℃/min升温至310℃，保持10min；汽化室温度250℃；载气为高纯He(99.999％)；载气流量1.0mL/min；不分流；溶剂延迟时间：3.0min。

表1奇楠乙醇提取得率及其乙醇提取物中成分检测结果

表1结果显示，实施例1～3奇楠乙醇提取得率范围在20.81-48.63％，奇楠乙醇提取物中倍半萜类相对含量为10.26-17.35％，2-(2-苯乙基)色酮相对含量为25.91-53.73％，2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]色酮的相对含量为25.07-51.32％。而对比例1所用奇楠沉香乙醇提取的得率、2-(2-苯乙基)色酮相对含量和2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]色酮相对含量均不满足本发明的要求。对比例2中采用的奇楠中倍半萜类成分和乙醇提取物含量不达标。对比例4中选用沉香乙醇提取率达到15.45％，说明是质量较好的沉香，但普通沉香中2-(2-苯乙基)色酮和2-[2-(4-甲氧基)苯乙基]色酮的成分含量很低，达不到本专利对奇楠的要求。说明根据本发明制艾制品，可以保证奇楠沉香的品质，能保证艾制品的质量。

一、细胞毒活性测试

1)将慢性髓原白血病细胞K562、人肺癌细胞株A549、人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞BEL-7402在培养箱37℃，5％CO

2)采用MTT法检测抗肿瘤活性，实验设试验组、阴性对照组(艾叶提取物)、阳性对照组(丝裂霉素C溶液)、空白组(DMSO试剂)，试验组采用本发明实施例1-3和对比例1-4任一项提供的制品的提取物及其相应的奇楠或沉香提取物。

3)实施例1-3和对比例1-4的制品提取物、实施例1-3和对比例1-4相应的奇楠或沉香提取物、以及艾叶提取物的提取方法：取100克样品，150mL乙醇加热80℃回流提取1h，提取2次，提取液过滤后浓缩至无溶剂。用DMSO溶解提取物，每个样品设8个浓度梯度，浓度依次为：10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL，1280μg/mL。

4)选取对数生长期的细胞，用RPMI1640完全培养基将四种细胞株分别培养制成单细胞悬浮液，用血球计数板计数，按50000个/mL的浓度分别接种90μL于96孔平底细胞培养板，每种细胞皆设阴性对照组、阳性对照组和试验组，在培养箱37℃，5％CO

5)直接向人慢性髓原白血病细胞K562细胞株和人肺癌细胞株A549中，分别加入10μL艾叶提取物、10μL丝裂霉素C溶液、10μL本发明实施例1-3和对比例1-4任一项提供的制品的提取物、以及相应的沉香提取物。

人胃癌细胞SGC-7901和人肝癌细胞SMMC-7721肿瘤细胞经培养24h后，分别加入10μL艾叶提取物、10μL丝裂霉素C溶液、10μL本发明实施例1-3和对比例1-4任一项提供的制品的提取物、以及相应的沉香提取物。

各细胞株中加入样品后继续培养72h，培养条件为37℃，5％CO

6)然后加入5mg/mL的MTT溶液15μL，37℃反应4h后，吸弃上清，再向各孔加入100μLDMSO，充分溶解，用ELX-800酶标仪测量各孔的OD值(测量波长为490nm)，按(公式1)计算抑制率。

7)以样品浓度为横坐标，样品的抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50％时样品的浓度(IC

表2各样品对四种细胞株的细胞半数抑制浓度检测结果

注：/表示无抑制活性。

如表2可知，实施例1-3所制备的制品提取物及其相应的奇楠提取物对四种细胞株均具有一定的细胞毒活性，而且实施例1-3所制备的制品提取物的抑制效果优于其相应的奇楠提取物。而对比例1-4的制品提取物及其相应的奇楠或沉香提取物对四种细胞株表现出的抑制活性均弱于实施例1-3。对比例1的艾制品提取物对慢性髓原白血病细胞K562、人肺癌细胞株A549和人肝癌细胞BEL-7402的抑制活性大大减弱，对人胃癌细胞SGC-7901甚至表现无抑制活性；对比例2的艾制品提取物对慢性髓原白血病细胞K562和人肝癌细胞BEL-7402的抑制活性大大减弱，对人肺癌细胞株A549和人胃癌细胞SGC-7901甚至表现无抑制活性；对比例4的沉香提取物对慢性髓原白血病细胞K562和人肝癌细胞BEL-7402有微弱抑制活性，其制备的沉香艾条提取物只对慢性髓原白血病细胞K562有微弱抑制活性，对其他三种细胞株均无活性。由此表明控制奇楠沉香的品质和比例非常重要，本发明提供的奇楠和艾制品具有良好的抗肿瘤的作用，可达到保健的目的。

二、抗乙酰胆碱酯酶活性测试

采用改良Ellman法测定实施例1-3和对比例1-4的制品提取物及其相应的奇楠/沉香提取物的抗乙酰胆碱酯酶活性。

实施例1-3和对比例1-4的制品提取物及其相应的奇楠或沉香提取物：取100克样品，150ml乙醇加热80℃回流提取1h，提取2次，提取液过滤后浓缩至无溶剂。每个样品设8个浓度梯度，用DMSO试剂进行溶解，浓度依次为：10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL、320μg/mL、640μg/mL，1280μg/mL。

在96孔板里加入150μL Buffer pH＝8、15μL的乙酰胆碱酯酶溶液、10μL样品溶液和20μL乙/丁酰胆碱酯酶溶液(浓度为0.1U/mL)，混合均匀后，置于冰盒里放置15min，然后先后加入10μL的DTNB溶液(浓度为2mM)和10μL的ATCI溶液(浓度为10mM)，混合均匀后，置于37℃培养箱灭灯培养20min，后立即用酶标仪在412nm、37℃下测定吸光值，重复测定3次。以他克林作为阳性对照，用DMSO稀释至0.02μg/mL、0.04μg/mL、0.06μg/mL、0.08μg/mL、0.10μg/mL、0.12μg/mL，DMSO试剂作为阴性对照，20μLBuffer pH＝8作为空白对照组，试验重复操作3次。按下面公式计算各浓度下的抑制率，并计算得到测试样对乙酰胆碱酯酶的半抑制浓度(IC

表3抗乙酰胆碱酯酶活性测试结果

注：/表示无抑制活性。

试验结果表明，实施例1-3所用的奇楠提取物具有较好的抑制乙酰胆碱酯酶活性，制成本发明的奇楠艾制品后，乙酰胆碱酯酶抑制程度增强，而对比例1-4的制品提取物及其相应的奇楠或沉香提取物对乙酰胆碱酯酶表现出的抑制活性均弱于实施例1-3。综上表明，根据本发明制得的奇楠艾制品具有较好的预防老年痴呆的功效。

三、案例

实验对象：从海口市某医院选取54名患有精神类疾病的患者，其中阿尔茨海默病18名，年龄50-65岁，平均58.2岁，平均病程2.3年；抑郁症18名，年龄20-45岁，平均32.3岁，平均病程1.8年；精神分裂症18名，年龄22-42岁，平均30.5岁，平均病程5.3年。

治疗方法：将这60名患者分别按照疾病随机分为3组，每组各有不同疾病6人，共18人。每组患者分别使用本发明实施例1、2、3的艾条进行艾灸治疗：每天艾灸双足三里、双合谷、双太冲各5-10分钟，每天一次。在治疗时，可以同时配合以下按摩手法促进疗效：补脾经10次，清肝经40次，补肾经10次，补肺经30次。连续治疗三个月。

疗效标准及结果：

显著：病情明显好转，阿尔茨海默患者有清醒意识，生活可以自理，认识亲朋好友；抑郁患者情绪明显好转，无轻生、绝望、自残、报复社会等负面情绪，思想积极，精力恢复或基本恢复正常、无头痛头晕乏力等病症；精神分裂症患者幻觉或妄想情况明显好转，情绪失控情况明显改善，行为或认知能力恢复正常或基本恢复正常，PANSS减分率高于70％。

有效：病情有所好转，阿尔茨海默患者意识有变好，有时可以照顾自己，偶尔认识亲朋好友；抑郁患者绝望、轻声等情绪有所好转，精力疲惫有所缓解、无头痛头晕乏力等病症；精神分裂症患者幻觉或妄想情况有所好转，情绪失控情况有所改善，行为或认知能力有所好转，PANSS减分率在40％-70％范围内。

无效：患者病情及症状与之前相比无改善。

治疗结果见表4。

表4患者治疗结果

以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。