一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法

技术领域

本发明涉及食用菌技术领域，更具体的说是涉及一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法。

背景技术

平菇(也叫糙皮侧耳)原基形成是从营养生长(菌丝生长)到生殖生长(子实体生长发育)转变的重要标志，也是最终形成产量和经济效益的关键步骤。原基形成的外界条件主要是营养条件和环境条件，营养条件主要包括碳、氮源、碳氮比、无机盐、生长激素等，环境条件主要包括温度、光照、湿度、酸碱度、氧气和二氧化碳等。研究发现，糙皮侧耳中很多化学物质，如黎芦醇、beta-腺苷酸、细胞溶血蛋白、生长素等均可以诱导原基形成。碳源是平菇生长发育的重要能量来源，是合成碳水化合物和氨基酸的原料。在很多研究中，原基形成过程中糖类代谢途径异常活跃，果糖是一种最常见的单糖和还原糖，极易溶解于水。果糖促进糙皮侧耳原基形成还未见报道。

因此，提供一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法，在PDA培养基中加入1.5～3.5g/L的果糖。

进一步，所述的一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化培养

将4℃低温保藏或液氮保藏的平菇菌株P99取出，接种在含有PDA培养基的平板上，25℃活化培养5～7d；再重复活化1次；

(2)培养基制作

去皮马铃薯200g，切成0.5～1cm的小块，放入盛有800ml煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g葡萄糖，15g琼脂粉，加热使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀，获得PDA培养基；然后在250ml容量的三角瓶中加入100ml所述PDA培养基，再在所述三角瓶中加入1.5～3.5g/L的果糖，透气膜封口，获得含有果糖的PDA培养基；121℃灭菌30min；将灭菌后的三角瓶置于超净台中，在无菌平板中倒入20ml灭菌后的含有果糖的PDA培养基，冷却后备用；

(3)菌丝培养

用直径5mm的打孔器在步骤(1)活化后的菌丝平板边缘上打取菌种块，然后接入到步骤(2)冷却后的平板培养基中央，置于25℃培养箱暗处培养5-7d，至菌丝直径4～5cm；

(4)原基诱导

将步骤(3)培养至菌丝直径4～5cm的平板移至15℃培养箱诱导原基，光照10h，黑暗14h，观察原基的形成。

进一步，所述平菇为平菇菌株P99。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法，不仅可以加快平菇平板培养基中原基的诱导(如G4处理，基础培养基中加入2.5g/L的果糖，诱导8天平菇即可出现原基)，而且可以提高平菇平板出现原基的比例(如诱导18天，G2-G6处理出现原基的平板比例介于20-100％，而对照即不加果糖，则出现原基的平板比例为0)。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1附图为本发明添加2.5g/L果糖(G4)诱导18天原基出现的情况。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种利用果糖加快诱导平菇原基形成的方法，包括以下步骤：

(1)菌种活化培养

将4℃低温保藏或液氮保藏的平菇菌株P99取出，接种在含有PDA培养基的平板上，25℃活化培养5～7d；再重复活化1次；

(2)培养基制作

去皮马铃薯200g，切成0.5～1cm的小块，放入盛有800ml煮沸的去离子水的锅中，煮沸10min～15min；然后用4层纱布过滤，在滤液中加入20g葡萄糖，15g琼脂粉，加热使之完全溶解；用去离子水定容至1000mL，搅拌混匀，获得PDA培养基；然后在250ml容量的三角瓶中加入100ml PDA培养基，再在不同的三角瓶中分别加入0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0g/L的果糖，透气膜封口，获得含有不同浓度果糖的PDA培养基；121℃灭菌30min；将灭菌后的三角瓶置于超净台中，在无菌平板中倒入20ml灭菌后的含有不同浓度果糖的PDA培养基，冷却后备用；

(3)菌丝培养

用直径5mm的打孔器在步骤(1)活化后的菌丝平板边缘上打取菌种块，然后接入到步骤(2)冷却后的平板培养基中央，置于25℃培养箱暗处培养5-7d，至菌丝直径4～5cm；

(4)原基诱导

将步骤(3)培养至菌丝直径4～5cm的平板移至15℃培养箱诱导原基，光照10h，黑暗14h，观察原基的形成，结果见表1。

表1不同处理条件下平菇平板出现原基的比例

表1结果表明，添加果糖(G4)下，诱导8天即有40％的平板出现原基。诱导18天，该处理平板100％出现原基(图1)，G2-G4出现原基比例在40％～100％之间，G5-G6出现原基比例又下降，为20％-40％。诱导25天，对照(CK)仅有10％的平板出现原基。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。