一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法

技术领域

本发明属于食品加工领域，具体涉及一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法。

背景技术

大鲵的肝脏占体重的3％～5％，含有丰富的蛋白质、糖、脂肪酸和金属元素，肝脏颜色深、腥味重难以利用，通过酶解成小分子肽，脱色和减轻腥味，并具有促进肝脏中酒精分解而解酒作用。但肽肝粉固体在贮存一段时间后，肝肽由白色变成棕褐色，产生腥味、结块，其抗氧化、对酶活性下降。危媚研究表明复合氨基酸注射液变蓝的原因(复方氨基酸注射液的变色原因探讨[J].中国医药指南,2012,10(26):400-402。)是发生了氧化反应，生成醌式化合物靛蓝。国外有学者指出肽类脱酰胺肽键裂解，与还原糖产生羰基反应产生褐色。

大鲵肝脏颜色为紫红色，是由血红蛋白中血红素辅基形成的。血红素是由一个亚铁原子和四个卟啉环偶联构成的一种铁卟啉化合物，呈深褐色，光照时产生兰色反光，血红素的卟啉化合物易溶于碱而难溶于酸。现有技术中血红素的脱色物理方法是利用如活性炭、羧甲基淀粉等吸附血红素，活性炭脱使用量多在1.5-2％，但蛋白质肽损失率大。化学脱色是破坏血红蛋白的结构，从而达到脱色的效果，用硫性丙酮处理珠蛋白和血红素之间的络合键解断裂,抽滤过滤去血红素，得到灰白色的全血蛋白颗粒，血球蛋白酶解法释放出大量血红素，氧化后呈深褐色乃至黑褐色；血红素氧化酶可降解血红素成一氧化碳、铁和胆绿素。综上所述，现有技术的大鲵肝在脱色后蛋白质肽的损失率和稳定性差，因此，急需开发出一种脱色率高、损失率低、稳定性好的大鲵肝酶解肽脱色方法。

发明内容

本发明提供了一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法，解决了现有技术在脱色后损失率高和稳定性差的问题。

一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法，具体包括以下步骤：

S1.制备大鲵肝肽酶解液；

S2.依次用活性炭、阳离子树脂对肝肽酶解液进行脱色，并冻干成粉；所述活性炭用量为肝肽酶解液质量的0.5-1％，脱色时间为50～60min；所述阳离子树脂为AAS树脂和D113树脂的混合物。

优选的，所述S1中制备肝肽酶解液的方法为：将大鲵肝用胰蛋白酶酶解灭酶后，离心除去残渣和脂肪，分离出肝肽酶解离心液。

优选的，所述胰蛋白酶用量为大鲵肝湿重的1-1.5％，酶解条件为：56-60℃，pH为7-8，条件下酶解5-7h。

优选的，所述灭酶条件为90℃，15-20min。

优选的，所述离心条件为5000-6000转/min、离心15-20min。

优选的，所述加入AAS树脂和D113树脂的重量比为(1-2):1。

优选的，S2中使用阳离子树脂层析时，所述流动相为水，流速为30～50mL/min。

优选的，S2中所述冻干条件为-54～35℃、45～48h。

优选的，S1中所述大鲵肝肽酶解液使用人工养殖的大鲵肝制备。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明是先用活性炭脱色、再用AAS树脂和D113树脂按比例混合脱除肝脏酶解肽，肝肽脱色率达98.5％，脱除肝肽中铁离子99.6％，铜离子97.6％，减少肝肽中酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和精氨酸45.4％，28.4％，17.1％，8.3％，与常规活性炭脱色肝肽的损失减少了29.3％，且颜色为白色，无腥味，粉末状。同时，本发明能够稳定酶解肽在温度，光线，有无氧包装下肝肽颜色、气味和形态的稳定性，防止固体肝肽变色，产生臭味和结块；稳定酶解肝肽抗氧化性、对乙醇脱氢酶、乙醛脱酶的活性。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明中使用的AAS树脂为德国巴斯夫公司，D113树脂为天津南开和成科技有限公司所生产。

实施例1

一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法，具体包括以下步骤：

S1.人工养殖大鲵肝用1％重量的胰蛋白酶酶解，酶解条件为56℃，pH为7条件下，酶解5h，在90℃灭酶15min后，离心除去残渣和脂肪，离心条件为5000转/min、15min，分离出肝肽酶解离心液。

S2.取S1中得到的离心液2000mL，加入0.5％质量的活性炭，在0.08Pa真空下，50℃脱色50min，并以5000转/min离心15min，得到活性炭脱色的离心液。

S3.将AAS和D113树脂按质量比1:1混合，将S2中得到的离心液进行混合树脂脱色，以水为流动相层析提纯，流速为30mL/min，然后冻干肝肽成粉，冻干条件为-54℃、45h，作为阳离子树脂脱色的肝肽。

实施例2

一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法，具体包括以下步骤：

S1.人工养殖大鲵肝用1.2％重量的胰蛋白酶酶解，酶解条件为58℃，pH为8条件下，酶解6h，在90℃灭酶18min后，离心除去残渣和脂肪，离心条件为5500转/min、18min，分离出肝肽酶解离心液。

S2.取S1中得到的离心液2000mL，加入0.7％质量的活性炭，在0.08Pa真空下，53℃脱色55min，并以5500转/min离心18min，得到活性炭脱色的离心液。

S3.将AAS和D113树脂按质量比1.5:1混合，将S2中得到的离心液进行混合树脂脱色，以水为流动相层析提纯，流速为40mL/min，然后冻干肝肽成粉，冻干条件为-15℃、47h，作为阳离子树脂脱色的肝肽。

实施例3

一种提高大鲵肝酶解肽脱色率及稳定性的方法，具体包括以下步骤：

S1.人工养殖大鲵肝用1.5％重量的胰蛋白酶酶解，酶解条件为60℃，pH为8条件下，酶解7h，在90℃灭酶20min后，离心除去残渣和脂肪，离心条件为转速6000转/min、20分钟，分离出肝肽酶解离心液。

S2.取S1中得到的离心液2000mL，加入1％质量的活性炭，在0.08Pa真空下，55℃脱色60min，并以6000转/min离心20min，得到活性炭脱色的离心液。

S3.将AAS和D113树脂按质量比2:1混合，将S2中得到的离心液进行混合树脂脱色，以水为流动相层析提纯，流速为50mL/min，然后冻干肝肽成粉，冻干条件为35℃、48h，作为阳离子树脂脱色的肝肽。

对比例1

l)人工养殖大鲵肝用1.5％重量的胰蛋白酶酶解，酶解条件为60℃，pH为8条件下，酶解7h，在90℃灭酶20min后，离心除去残渣和脂肪，离心条件为转速6000转/min、20分钟，分离出肝肽酶解离心液。

2)在上述离心液中加入1％质量的活性炭，在0.08Pa真空下，55℃脱色60min，然后冻干肝肽粉。

对比例2

l)人工养殖大鲵肝用1.5％重量的胰蛋白酶酶解，酶解条件为60℃，pH为8条件下，酶解7h，在90℃灭酶20min后，离心除去残渣和脂肪，离心条件为转速6000转/min、20分钟，分离出肝肽酶解离心液。

2)用AAS树脂对上述所得的离心液进行脱色，以水为流动相层析提纯，流速为50mL/min，然后冻干肝肽粉，冻干条件为35℃、48h，。

对比例3

l)人工养殖大鲵肝用1.5％重量的胰蛋白酶酶解，酶解条件为60℃，pH为8条件下，酶解7h，在90℃灭酶20min后，离心除去残渣和脂肪，离心条件为转速6000转/min、20分钟，分离出肝肽酶解离心液。

2)用D113树脂对上述所得的离心液进行脱色，以水为流动相层析提纯，流速为50mL/min，然后冻干肝肽粉，冻干条件为35℃、48h，。

表1不同脱色方法脱色效果

由表1可以看出，实施例1～3的脱色率、脱除Fe

表2在有氧包装下不同温度，肝肽贮存180D颜色、形态的稳定性

由表2可以看出，肝肽用一般袋包装在不同温度下贮存180D，对比例1脱色后容易变色，随着温度升高，颜色更深色，腥味变重，形态结块，不稳定；对比例2、对例3较为稳定；实施例1最稳定，实施例2～3脱色肝肽颜色较稳定，气味无明显变化。

表3有氧包装下，25℃下贮存180D肝肽对光的稳定性

由表3可以看出，在有氧包装25℃下，肝肽贮存180D，对比例1脱色肝肽颜色变深棕色，对光线不稳定，对比例2和对比3较稳定；实施例1～3脱色肝肽颜色无变化，对光线稳定。

表4不同包装在25℃下贮存180D，对不同脱色肝肽的稳定性影响

由表4可以看出，在有氧包装条件下，肝肽在25℃下贮存180D后，对比例1脱色肽肝变棕褐色，腥味变浓，真空包装变色变变化小，对例2和对例3变化小；实施例1～3脱色肝肽颜色无变化，对氧气影响较小。

表5在0℃，真空包装下贮存180D，不同脱色方式中肝肽生化指标的影响

表5是在0℃，真空包装下贮存180D后，不同脱色方式中肝肽生化指标对抗氧化性、乙醇脱氢酶活性、乙醛脱氢酶活性的影响，由表5可以看出，在0℃下贮存180D后，与贮存前相比，对比例1中肝肽的抗氧化性、对乙醇脱氢酶活性及对乙醛脱氢酶活性下降幅度较大，对比例2、对比例3也有所下降，但降幅较小，实施例1～3降幅最小。

尽管已描述了本发明的优选实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。