同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基及其制备方法
文献发布时间：2024-04-18 19:53:33
技术领域
本发明涉及环境微生物技术领域，具体涉及同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基及其制备方法。
背景技术
甘蔗，又名薯蔗、竿蔗、糖梗、干蔗、菅蔗、竹蔗、接肠草等，属禾本科，蜀黍族，甘蔗属，是热带、亚热带生势旺盛植株高大的高秆单子叶一年生或多年生草本植物。甘蔗的茎杆实心，像竹子一样有规律地生，有节，每节有一个芽。甘蔗紧密丛生，叶形优美，似剑，与玉米的叶相似。叶鞘裹在茎上，保护着芽。甘蔗的茎杆内汁液丰富且味甜，是制造蔗糖的原料，且可提炼乙醇作为能源替代品。
土壤酸铝毒害是一个在世界范围内普遍存在的严重的农业生产问题，它影响着全世界40%耕地的作物生产。酸性土壤对植物生长发育存在着一定的障碍，不但影响植物的产量、品质，还影响植物的一切生命活动规律，其主要表现为：(1)H
为减轻甘蔗所受酸铝毒害，可以选择从土壤筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，借助固氮菌的固氮作用及耐酸铝特性固氮菌的固氮作用及对酸性土壤活性铝的吸收、吸附及其分泌物对铝离子的螯合作用，可以有效缓解酸铝对甘蔗的毒害，这一措施可收到效果长、成本低的效果；目前尚未见能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌、成本低且制备方法简单的同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.2～1.5g/L的活性炭粉、0.4～0.7g/L的甘蔗渣粉末、0.3～0.5g/L的甘蔗叶粉末、35～40ml/L的菠菜汁、40～45ml/L的油菜汁，将pH控制在5.5～6.5，余量为水；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
进一步地，同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.3～1.5g/L的活性炭粉、0.5～0.7g/L的甘蔗渣粉末、0.4～0.5g/L的甘蔗叶粉末、37～40ml/L的菠菜汁、42～45ml/L的油菜汁，将pH控制在5.5～6.5，余量为水；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
进一步地，同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.4g/L的活性炭粉、0.6g/L的甘蔗渣粉末、0.45g/L的甘蔗叶粉末、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁，将pH控制在5.5～5.8，余量为水；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
进一步地，所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁。
进一步地，所述培养基还包括0.4～0.6g/L的藜麦粉。
进一步地，所述培养基还包括0.5g/L的藜麦粉。
本发明还提供了一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，过滤，得到的菠菜汁；
1.2）选取新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，过滤，得到油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.5～6.5，得到混合液；
（4）灭菌：对所述混合液灭菌处理，即得所述培养基。
进一步地，所述步骤（1）中制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁。
进一步地，所述步骤（1）中制备菠菜汁及油菜汁所用的过滤膜为0.22μm无菌过滤膜。
进一步地，所述步骤（4）中于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
本发明同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基及其制备方法，以氯化铝、菠菜汁、油菜汁中铝元素及较低pH值模拟酸铝环境，菠菜汁、油菜汁提供了丰富的铝元素、微量营养成分、生理活性物质及生长激素物质，使得该酸铝环境不会对固氮菌产生毒害影响，能够同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，且筛出的耐酸铝特性固氮菌的最高耐总铝含量达5000～5500μg/g；加入适量的活性炭粉、甘蔗渣粉末、甘蔗叶粉末，能有效提高琼脂培养基的通气问题，同时能够有效吸附固氮和耐酸铝特性固氮菌排出的代谢废物，避免代谢废物对固氮和耐酸铝特性固氮菌产生毒害作用，便于同时筛选出固氮和耐酸铝特性固氮菌，明显提升固氮和耐酸铝特性固氮菌的获得率。
本发明同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基及其制备方法，所述培养基中还加入了适量的藜麦粉，可以提高固氮菌的固氮能力。
具体实施方式
下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。
实施例1
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.2g/L的活性炭粉、0.4g/L的甘蔗渣粉末、0.3g/L的甘蔗叶粉末、35ml/L的菠菜汁、40ml/L的油菜汁、0.4g/L的藜麦粉，将pH控制在5.5，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.5，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌。
实施例2
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.5g/L的活性炭粉、0.7g/L的甘蔗渣粉末、0.5g/L的甘蔗叶粉末、40ml/L的菠菜汁、45ml/L的油菜汁、0.6g/L的藜麦粉，将pH控制在6.5，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在6.5，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌。
实施例3
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.3g/L的活性炭粉、0.5g/L的甘蔗渣粉末、0.4g/L的甘蔗叶粉末、37ml/L的菠菜汁、42ml/L的油菜汁、0.56g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌。
实施例4
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.4g/L的活性炭粉、0.6g/L的甘蔗渣粉末、0.45g/L的甘蔗叶粉末、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁、0.5g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌。
实施例5
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.4g/L的活性炭粉、0.6g/L的甘蔗渣粉末、0.45g/L的甘蔗叶粉末、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基能同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌。
对比例1
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁、0.5g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基无法筛选出耐酸铝特性固氮菌。
对比例2
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.2g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、1.4g/L的活性炭粉、0.6g/L的甘蔗渣粉末、0.45g/L的甘蔗叶粉末、0.5g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（2）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（3）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基无法筛选出耐酸铝特性固氮菌。
对比例3
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、2.45g/L的活性炭粉、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁、0.5g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基无法筛选出耐酸铝特性固氮菌。
对比例4
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、2.45g/L的甘蔗渣粉末、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁、0.5g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基无法筛选出耐酸铝特性固氮菌。
对比例5
同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基，所述培养基的成分包括：15g/L的琼脂、8g/L的葡萄糖、3g/L的蔗糖、4g/L的蛋白胨、1g/L的可溶性淀粉、0.5g/L的尿素、1.2g/L的氯化钠、0.4g/L的硫酸镁、1.3g/L的磷酸二氢钾、0.2g/L的氯化钙、0.1g/L的氯化铝、0.1g/L的氯化锰、0.1g/L的钼酸钠、2.45g/L的甘蔗叶粉末、38ml/L的菠菜汁、43ml/L的油菜汁、0.5g/L的藜麦粉，将pH控制在5.8，余量为水；所述的菠菜汁为鲜榨菠菜汁，所述的油菜汁为鲜榨油菜汁；
所述培养基利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值；
所述菠菜汁中铝含量在80～100㎎/㎏，所述油菜汁中铝含量在60～80㎎/㎏。
一种同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌的培养基的制备方法，包括以下步骤：
（1）制备菠菜汁及油菜汁：
1.1）选取铝含量在120㎎/㎏左右的新鲜菠菜，剪根，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在80～100㎎/㎏的菠菜汁；
1.2）选取铝含量在100㎎/㎏左右的新鲜油菜，清洗干净，压榨成汁，用0.22μm无菌过滤膜过滤，得到铝含量在60～80㎎/㎏的油菜汁；
（2）称量：按配比称取组成所述培养基的各原料；
（3）混合调配：将组成所述培养基的各原料混合均匀，利用柠檬酸和柠檬酸钠控制pH值在5.8，得到混合液；
（4）灭菌：于温度为115℃、压力为0.5Mpa条件下，对所述混合液灭菌处理30min，即得所述培养基。
利用所述培养基同时筛选固氮和耐酸铝特性固氮菌，包括以下步骤：
（1）采集甘蔗根际土壤，并制备甘蔗根际土壤悬液；
（2）将甘蔗根际土壤悬液放入所述培养基中培养，形成菌落，获得菌株；
（3）对菌株进行纯化，鉴定，表明通过所述培养基无法筛选出耐酸铝特性固氮菌。
对实施例1-5及对比例1-5中的分离筛选出结果进行统计，统计结果如下表1所示。
表1
对筛选出的耐酸铝固氮菌进行耐总铝含量测定，测定结果显示，筛出的耐酸铝特性固氮菌的最高耐总铝含量达5000～5500μg/g；上述统计结果中，固氮菌含氮量、耐酸铝固氮菌含氮量的测定中，菌数统一控制在2.0X10
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。