一种头孢曲松钠聚合物杂质的检测方法

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种头孢曲松钠聚合物杂质的检测方法。

背景技术

头孢曲松钠是一种长效、广谱的半合成头孢菌素类药物，由瑞士罗氏公司(Roche)于1978年合成，1982年在瑞士首次上市，并于1984年获得美国FDA批准而开始大批使用。目前头孢曲松钠的剂型为注射用无菌粉末，英国、瑞士和日本均有上市品种。

头孢曲松钠的致敏性与其聚合物杂质含量有一定关系，头孢曲松钠聚合物包括7-ACA二聚物、7-ACA三聚物、脱乙酰基头孢噻肟内酯二聚物、7-ACT二聚物和7-ACT三聚物等。头孢曲松钠分子于高温条件下易降解产生聚合物，聚合物含量的控制对于本品质量情况的体现至关重要。目前仅有中国药典对本品聚合物进行了方法描述。中国药典用于测定聚合物的方法采用葡聚糖凝胶G-10为填充剂，该方法专属性较差，且理论板数较低，峰型差。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷和不足，本发明提供了一种稳定性好、重复性好、操作简单、理论塔板数高、准确快速的头孢曲松钠聚合物杂质的检测方法，该方法专属性高，且可操作性强，具有较高的准确度及精密度。

具体来说，本发明提供了如下技术方案。

一种头孢曲松钠聚合物杂质的检测方法，包括以下步骤：取头孢曲松钠原料药配制供试品溶液，进行HPLC检测，检测条件如下：

固定相采用球状蛋白亲水改性硅胶为填充剂的色谱柱；

流动相采用体积比为93～97:7～3的流动相A和流动相B构成的混合溶液，所述流动相A为0.1～0.2％的三乙胺溶液，用磷酸溶液调节pH值至5.5～6.5，所述流动相B为乙腈。

优选的，上述的检测方法中，所述HPLC检测的检测波长为249nm～259nm。

优选的，上述的检测方法中，所述HPLC检测的柱温为25℃～35℃。

优选的，上述的检测方法中，所述HPLC检测的流速为0.6mL～1.0mL/min。

优选的，上述的检测方法中，所述供试品溶液的浓度为0.3～0.7mg/mL。

优选的，上述的检测方法中，所述供试品溶液的浓度为0.5mg/mL。

优选的，上述的检测方法中，所述供试品溶液由头孢曲松钠原料药与稀释剂组成。

优选的，上述的检测方法中，所述稀释剂为水。

优选的，上述的检测方法中，所述球状蛋白亲水改性硅胶的分子量范围为1000～10000。

优选的，上述的检测方法中，所述HPLC检测采用以下条件：

色谱柱：用球状蛋白亲水改性硅胶为填充剂；

流动相A：0.14％的三乙胺溶液，用磷酸溶液调节pH值至6.0；

流动相B：乙腈；

柱温：30℃；

检测波长：254nm；

流速：0.8mL/min；

进样体积：20μL。

优选的，上述的检测方法中，所述聚合物杂质包括7-ACA二聚物、7-ACA三聚物、脱乙酰基头孢噻肟内酯二聚物、7-ACT二聚物和7-ACT三聚物中的一种或两种以上。

本发明所取得的有益效果：

利用本发明的检测方法，可实现快速定量测定头孢曲松钠中聚合物的含量，操作性强且具有良好的准确度及精密度。对本发明方法进行考察，经研究，该含量测定方法具有良好专属性、线性、精密度和耐用性。

附图说明

图1为本发明试验例1所提供的空白溶剂色谱图；

图2为本发明试验例1所提供的系统适用性溶液色谱图；

图3为本发明试验例1所提供的对照品溶液色谱图；

图4为本发明试验例1所提供的供试品溶液色谱图；

图5为本发明试验例2所提供的线性回归图。

具体实施方式

以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，实施例中，加入的各原料除特别说明外，均为市售常规原料。

本发明中用语“本品”如无特殊说明均指头孢曲松钠原料药，本发明使用的液相色谱仪主要配备紫外检测器，色谱柱选择球状亲水硅胶为填充剂。

实施例1

1.溶液配置

供试品溶液：取头孢曲松钠原料药，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含头孢曲松0.5mg的溶液，作为供试品溶液。

对照品溶液：取头孢曲松钠对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含5μg的溶液作为对照品溶液。

2.色谱条件

色谱柱：TSKgel G2000SWXL 7.8×300mm，5μm；

流动相A：0.14％的三乙胺溶液，用磷酸溶液调节pH值至6.0；

流动相B：乙腈；

流动相A：B＝95：5；

柱温：30℃；

检测波长：254nm；

流速：0.8mL/min。

3.样品测定

分别取20μl供试品溶液和对照品溶液按照上述色谱条件进行HPLC检测，然后按照下述公式计算聚合物杂质的含量：

式中：A

C

P：对照品含量；

A

C

试验例1专属性研究

空白溶剂：纯化水。

供试品溶液：取头孢曲松钠原料药，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含头孢曲松0.5mg的溶液，作为供试品溶液。

系统适用性溶液：取供试品溶液10mL，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1mL，室温放置10分钟，再加0.1mol/L盐酸溶液1mL，摇匀，即得。

对照品溶液：取头孢曲松钠对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含5μg的溶液作为对照品溶液。

量取上述溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，色谱条件同实施例1，记录色谱图，图1为空白溶剂的色谱图；图2为系统适用性溶液的色谱图；图3为对照品溶液的色谱图；图4为供试品溶液的色谱图；系统适应性结果见表1。

表1头孢曲松钠聚合物测定方法学验证-专属性系统适用性结果

由表1中数据可知，本发明提供的测定方法有良好专属性，能有效分离头孢曲松钠与其聚合物。

试验例2线性研究

线性贮备液的制备：

取头孢曲松钠对照品10mg，精密称定，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为线性贮备液。

精密量取线性贮备液5mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为线性-200％溶液。

分别精密量取线性-200％溶液0.05mL、0.25mL、0.5mL、1mL、2.5mL、4mL、5mL、6mL、7.5mL，分别置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为线性-1％溶液、线性-5％溶液、线性-10％溶液、线性-20％溶液、线性-50％溶液、线性-80％溶液、线性-100％溶液、线性-120％溶液、线性-150％溶液。

精密量取线性-1％溶液0.5mL，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液。

精密量取上述各线性溶液各20μL，注入色谱仪，色谱条件同实施例1，记录色谱图，图5为线性回归图，线性结果见表2。

表2头孢曲松钠聚合物测定方法学验证-线性结果

由表2中试验结果数据可知，本发明提供的测定方法线性结果良好。

试验例3精密度研究

对照品溶液：取头孢曲松钠对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含5μg的溶液作为对照溶液。

精密量取对照品溶液2μL，连续进样5次，色谱条件同实施例1，记录色谱图，进样精密度结果见表3。

表3头孢曲松钠聚合物测定方法学验证-进样精密度结果

由表3结果表明，本发明提供的测定精密度良好。

试验例4耐用性研究

空白溶剂：纯化水。

供试品溶液：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含头孢曲松0.5mg的溶液，作为供试品溶液(临用新制)。

系统适用性溶液：取供试品溶液10mL，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1mL，室温放置10分钟，再加0.1mol/L盐酸溶液1mL，摇匀，即得。

对照品溶液：取头孢曲松钠对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含5μg的溶液作为对照溶液。平行配制2份。

在流速变化±0.2ml/min、检测波长变化±5nm、柱温±5℃、流动相中乙腈的比例变化±2％条件下，精密量取上述溶液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，耐用性系统适用性结果见表4，耐用性供试品测定结果见表5，其中正常条件为实施例1所记载的色谱检测条件。按外标法以峰面积计算。所述正常条件为实施例1的色谱条件。

表4头孢曲松钠聚合物测定方法学验证-耐用性系统适用性结果

表5头孢曲松钠聚合物测定方法学验证-耐用性供试品测定结果

根据本试验例4的耐用性测试结果表明，本发明提供的色谱条件在流动相比例93～97:7～3；检测波长：249nm～259nm，柱温：25℃～35℃，流速：每分钟0.6ml～1.0ml范围内，测定结果不受上述条件变化的影响，色谱条件耐用性良好。

对比例1

在本试验例4的正常条件基础上，改变流动相A-B比例为91:9、99:1；或调整三乙胺浓度为0.05％、0.25％；或调整流动相A的pH为5.0、7.0，考察本方法的适用性。

空白溶剂：纯化水。

供试品溶液：取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含头孢曲松0.5mg的溶液，作为供试品溶液(临用新制)。

系统适用性溶液：取供试品溶液10mL，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1mL，室温放置10分钟，再加0.1mol/L盐酸溶液1mL，摇匀，即得。

精密量取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，考察头孢曲松钠与聚合物的分离情况，结果见表6。

表6聚合物测定方法学验证-耐用性系统适用性结果

由表6可知，色谱条件经上述调整，较正常条件相比，分离度严重变差或聚合物峰峰型变差，无法满足定量测定需求。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对其作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。