一种用于固定组织切片的试剂盒及其应用

本申请是申请日为2015年07月16日、申请号为201510419068.8、发明名称为《一种组织切片的固定方法及其用途》的分案申请。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于固定组织切片的试剂盒及其应用。

背景技术

组织切片脱落始终是病理染色过程中不可避免的问题。目前已有的切片预防掉片的方法主要包括火棉胶涂覆、多聚赖氨酸及铬钒明胶处理玻片等。硬组织切片虽然也可以防止掉片，但其切片过厚(约40～100μm)，组织重叠不易观察，无法进行病理染色。石蜡及冰冻切片可达到10μm以内，可以较好的观察细胞形态，但始终存在一些组织贴片不牢，在染色时易掉片的问题，尤其在蚕丝以及人工韧带等组织工程材料的切片染色中，掉片现象更加突出。同时在HE、丽春红三色和免疫组化等染色中，由于染色步骤繁琐，组织浸泡时间过长等原因，组织掉片现象尤为严重。

发明内容

本发明的目的在于提供一种组织切片的固定方法及其应用。

为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案。

一种组织切片的固定方法，包括以下步骤：

1)将实验取材或手术病理标本用多聚甲醛固定，若实验取材或手术病理标本为骨组织，则在多聚甲醛固定后进行脱钙处理；

2)将经过步骤1)处理后的实验取材或手术病理标本用阿拉伯树胶溶液浸泡24～48小时，然后用冰冻切片机切至5～10μm，得组织切片；

3)将速干胶均匀涂覆于载玻片上，然后将组织切片固定在载玻片上均匀涂覆速干胶的区域上，然后自然风干或用烤片机于55～65℃烤片1～2小时。

所述组织切片取材自容易掉片的所有实验取材或手术病理标本。

所述实验取材或手术病理标本为蚕丝组织工程韧带。

所述将速干胶均匀涂覆于载玻片上具体包括以下步骤：滴若干滴速干胶于载玻片A上，然后立即用载玻片B覆盖在载玻片A上面，使滴在载玻片A上的速干胶水平铺展，从而使速干胶均匀涂覆于载玻片A以及载玻片B上。

上述组织切片的固定方法在组织染色中的应用。

所述组织切片用于HE染色、丽春红三色染色或免疫组化染色。

所述组织切片取材于蚕丝组织工程韧带。

本发明的有益效果体现在：

本发明在普通载玻片上均匀涂覆薄层速干胶后，将冰冻组织切片贴片，组织切片与载玻片结合紧密，且制作方便、操作简单，需要处理的时间短，成本低，有效避免了染色过程中出现的掉片现象，彻底解决了病理染色的掉片问题，尤其适用于易脱落的蚕丝材料、组织工程韧带或其他组织工程材料的切片染色，且有效解决了硬组织切片过厚，无法清晰显示细胞等结构的问题。

附图说明

图1为在经铬钒明胶处理玻片上固定蚕丝韧带切片并进行HE染色结果；

图2为在涂覆速干胶的玻片上固定蚕丝韧带切片并进行HE染色结果。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作详细说明。

取经多聚甲醛固定、脱钙的蚕丝韧带组织，使用阿拉伯树胶溶液(含质量分数10％阿拉伯树胶和30％的蔗糖的水溶液)浸泡24～48小时，得到样本，利用冰冻切片机将样本切成5～10μm厚的组织切片，在普通载玻片上滴1滴速干胶(例如，义乌市绿洁日用品厂，大象卡胶水)，利用另外一张载玻片采用迅速压片的方法，将速干胶均匀地涂覆于两片载玻片上，再迅速将组织片粘附于其中一片载玻片上涂覆速干胶的区域上；然后自然风干或烤片机上(60℃)烤片1～2小时。对照组使用经铬钒明胶处理玻片粘附组织切片，同时进行HE染色。

参见图1以及图2，图1中可见染色后组织掉片严重(铬钒明胶处理玻片)；图2中染色色泽正常(本发明方法处理的玻片)，几乎无掉片现象。

本发明所述组织切片固定方法可以有效避免组织染色过程中的掉片(脱片)现象。