金感胶囊在制备抗乳腺癌药物中的应用

技术领域

本发明属于生物药学技术领域，尤其涉及一种金感胶囊在制备抗乳腺癌药物中的应用。

背景技术

乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤，是全球女性最常见的恶性肿瘤之一。每年中国乳腺癌新发数量和死亡数量分别占全世界的12.2％和9.6％。从90年代以来，中国的乳腺癌发病率增长速度是全球的两倍多，城市地区尤为显著。目前，乳腺癌是中国女性发病率最高的癌症。化学治疗是乳腺治疗的三大基本手段之一，尽管目前乳腺癌的化学治疗已取得诸多进展，然而，目前这些抗癌药物毒副作用大，使乳腺癌治疗不能达到预期疗效。因此，开发安全性高、副作用小的治疗乳腺癌新药剂具有较大的现实意义。

金感胶囊，是一种中成药，由贵州百灵企业集团制药股份有限公司生产制造，成分包括金银花、穿心莲、板蓝根、蒲公英、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏。本品为胶囊剂，内容物为棕黄色至棕褐色的颗粒剂粉末，气微，味苦。金感胶囊的功效是清热解毒，疏风解表，用于普通感冒，流行性感冒，外感风热证，症见发热，头疼，鼻塞，流涕，咳嗽，咽痛。但是没有将金感胶囊用于防治乳腺癌的相关记载。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供金感胶囊在制备抗乳腺癌药物中的应用，可显著抑制乳腺癌细胞的活性和增殖作用，并促进癌细胞凋亡，在防治乳腺癌或乳腺癌细胞增殖抑制方面具有潜在的价值。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

金感胶囊在制备治疗乳腺癌的药物制剂中的应用。

本发明还提供了金感胶囊在制备抑制乳腺癌细胞活力的药物制剂中的应用。

本发明还提供了金感胶囊在制备抑制乳腺癌细胞增殖的药物制剂中的应用。

本发明还提供了金感胶囊在制备促进乳腺癌细胞凋亡的药物制剂中的应用。

优选的，所述乳腺癌细胞包括人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞和小鼠乳腺癌细胞4T1。

优选的，所述药物制剂包括注射剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、软膏剂、硬膏剂、贴剂、栓剂、滴剂或滴丸剂。

本发明还提供了一种治疗乳腺癌的药物制剂，所述药物制剂包括金感胶囊或金感胶囊的有效成分。

优选的，所述药物制剂还包括所述金感胶囊的内容物生理盐水溶出液。

优选的，所述金感胶囊的内容物生理盐水溶出液浓度为0.25～2mg/ml。

本发明还提供了所述药物制剂的制备方法，包括以下步骤：将所述金感胶囊直接制备成治疗乳腺癌的药物制剂，或者将所述金感胶囊与其他抗乳腺癌的药物复配制备成复方药物制剂，或者将所述金感胶囊的有效成分与药学上可接受的载体制备成治疗乳腺癌的药物制剂。

本发明提供了金感胶囊在制备治疗乳腺癌的药物制剂中的应用，具体涉及抑制乳腺癌细胞活力、抑制乳腺癌细胞的增殖并促进乳腺癌细胞凋亡，改变乳腺癌细胞形态，从而达到治疗乳腺癌的作用。

在本发明实施例中，利用金感胶囊内容物的生理盐水溶出液对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468和小鼠乳腺癌细胞4T1进行实验，证实不同浓度的样品溶液均能抑制MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞的活力，并且具有浓度依赖性，IC50分别为0.16±0.03mg/ml、0.15±0.01和0.41±0.04mg/ml；不同浓度的样品溶液均能抑制MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞的增殖，并且随着浓度的增加，MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞的生长速度逐渐减慢，且呈浓度和时间依赖性；随着样品溶液浓度的增加，MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞的数目明显减少，并且样品溶液作用MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞后，细胞形态有所改变，由长梭形转变成椭圆形；不同浓度的样品溶液对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人乳腺癌细胞MDA-MB-468凋亡影响显著；不同浓度的样品溶液对人乳腺癌细胞MDA-MB-231和人乳腺癌细胞MDA-MB-468周期影响显著，并阻滞细胞周期于S期，并且药物浓度越高，其阻滞越明显。因此金感胶囊在制备防治乳腺癌药物或乳腺癌细胞增殖抑药物制剂方面具有潜在价值。且金感胶囊是已用于临床的中成药，能直接应用于人体而不再需要进行临床安全评估，具有很好的应用前景，可迅速提高此产品的市场占有率。

附图说明

图1为不同浓度金感胶囊对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468和小鼠乳腺癌细胞4T1的抑制率；

图2为不同浓度金感胶囊对人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468形态学的影响生长的影响；

图3为不同浓度金感胶囊对人乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的影响；

图4为不同浓度金感胶囊对人乳腺癌细胞MDA-MB-468生长的影响；

图5为不同浓度金感胶囊作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞24h以及48h后流式细胞仪对凋亡的检测；

图6为不同浓度金感胶囊作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-468细胞24h以及48h后流式细胞仪对凋亡的检测；

图7为不同浓度金感胶囊作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞24h以及48h后流式细胞仪对周期的检测；

图8为不同浓度金感胶囊作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-468细胞24h以及48h后流式细胞仪对周期的检测。

具体实施方式

本发明还提供了金感胶囊在制备治疗乳腺癌的药物制剂中的应用。

本发明所述金感胶囊为贵州百灵企业集团制药股份有限公司生产制造。本发明在实施例中优选以人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞和小鼠乳腺癌细胞4T1进行实验，但不能将其认定为本发明专利的具体保护范围。本发明对所述人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞和小鼠乳腺癌细胞4T1的来源并没有特殊限定，可为商业购买，也可实验室冻存，本发明实施例中所述人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞和小鼠乳腺癌细胞4T1均为贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室留存。本发明实施例证实，以金感胶囊的内容物生理盐水溶出液(0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml)处理上述两种乳腺癌细胞72h后，MTT法检测不同浓度样品溶液对MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞的抑制率，结果显示不同浓度的样品溶液均能抑制MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞的活力，并且具有浓度依赖性，IC

本发明对所述药物制剂的剂型并没有特殊限定，优选包括注射剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂、喷雾剂、气雾剂、粉雾剂、软膏剂、硬膏剂、贴剂、栓剂、滴剂或滴丸剂；所述片剂优选包括舌下片剂。

本发明提供了金感胶囊在制备抑制乳腺癌细胞活力的药物制剂中的应用。本发明所述应用中，所述金感胶囊的来源、乳腺癌细胞的来源和药物制剂的剂型等优选与上述相同，在此不再赘述。

本发明还提供了金感胶囊在制备抑制乳腺癌细胞增殖的药物制剂中的应用。本发明所述应用中，所述金感胶囊的来源、乳腺癌细胞的来源和药物制剂的剂型等优选与上述相同，在此不再赘述。

本发明还提供了金感胶囊在制备促进乳腺癌细胞凋亡的药物制剂中的应用。本发明所述应用中，所述金感胶囊的来源、乳腺癌细胞的来源和药物制剂的剂型等优选与上述相同，在此不再赘述。

本发明还提供了一种治疗乳腺癌的药物制剂，所述药物制剂包括金感胶囊或金感胶囊的有效成分。本发明所述应用中，所述金感胶囊的来源、乳腺癌细胞的来源和药物制剂的剂型等优选与上述相同，在此不再赘述。

本发明还提供了所述药物制剂的制备方法，包括以下步骤：将所述金感胶囊直接制备成治疗乳腺癌的药物制剂，或者将所述金感胶囊与其他抗乳腺癌的药物复配制备成复方药物制剂，或者将所述金感胶囊的有效成分与药学上可接受的载体制备成治疗乳腺癌的药物制剂。

下面结合实施例对本发明提供的金感胶囊在制备抗乳腺癌药物中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

细胞活力测试

样品溶液的配制：将金感胶囊内容物用生理盐水分别配制成浓度为0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml的样品溶液。

MTT溶液的配制：称取MTT粉末0.2g，加入灭菌的双蒸水40ml，60℃溶解，浓度为5mg/ml，0.2μm过滤膜过滤除菌，4℃保存。

细胞系：人乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞和小鼠乳腺癌细胞4T1，均为贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室留存。细胞于37℃、5％CO

收集对数期细胞，MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞按照6×10

抑制率的计算方法：抑制率＝(对照组OD值－处理组OD值)/对照组OD值。半数抑制率(IC

采用倒置显微镜对各组细胞进行观察拍照(200×)。

结果如图1所示，用0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml的样品溶液处理MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞72h后，MTT法检测不同浓度样品溶液对MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞的抑制率。不同浓度的样品溶液均能抑制MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞和4T1细胞的活力，并且具有浓度依赖性，IC

结果如图2所示，用0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml的样品溶液处理MDA-MB-231细胞、MDA-MB-468细胞24h后，倒置显微镜观察可见细胞数量变少且形态发生明显改变。

实施例2

细胞生长曲线测定

分别收集对数期MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞，按照6×10

结果如图3以及图4所示，与对照组相比，不同浓度的样品溶液均能抑制MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞的增殖，并且随着浓度的增加，MDA-MB-231细胞和MDA-MB-468细胞的生长速度逐渐减慢，说明样品溶液能够抑制MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞的增殖，且呈浓度和时间依赖性。

实施例3

细胞凋亡检测

将MDA-MB-231细胞按4×10

MDA-MB-468细胞凋亡实验与MDA-MB-231细胞相同。

结果如图5所示，金感胶囊对人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡影响显著。

结果如图6所示，金感胶囊对人乳腺癌细胞MDA-MB-468凋亡影响显著。

实施例4

细胞周期检测

将MDA-MB-231细胞按4×10

MDA-MB-468细胞周期检测实验与MDA-MB-231细胞相同。

结果如图7所示，金感胶囊在加药24h以及48h时对人乳腺癌细胞MDA-MB-231周期影响显著，并阻滞细胞周期于S期，并且药物浓度越高，其阻滞越明显。

结果如图8所示，金感胶囊在加药24h以及48h时对人乳腺癌细胞MDA-MB-468周期影响显著，并阻滞细胞周期于S期，并且药物浓度越高，其阻滞越明显。

以上实施例中，每个实验独立重复三次，所有数据用mean±SD进行表示，用GraphPad Prism 7进行Student’s t-test检验，P<0.05被认为具有统计学意义，*P<0.05，**P<0.01。

由以上结果可知，金感胶囊在制备防治乳腺癌药物或乳腺癌细胞增殖抑药物制剂方面具有潜在价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。