奥德昔巴特的药物制剂
文献发布时间:2023-06-19 09:44:49
相关申请的交叉引用
本申请主张2018年6月20日提交的瑞典申请第1850761-6号及2018年6月20日提交的的瑞典申请第1850762-4号的优先权,所述申请的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及奥德昔巴特(odevixibat)的药物制剂,例如儿科制剂,其包含多个小颗粒。所述制剂可以用于治疗肝病,例如胆汁酸依赖性肝病,特别是胆汁淤积性肝病(例如,胆道闭锁、进行性家族性肝内胆汁淤积(PFIC)、阿拉杰里综合征(Alagille syndrome,ALGS)和小儿胆汁淤积瘙痒症)。本发明还涉及制备所述药物制剂的方法。
背景技术
化合物1,1-二氧代-3,3-二丁基-5-苯基-7-甲硫基-8-(N-{(R)-α-[N-((S)-1-羧丙基)氨甲酰基]-4-羟基苯甲基}氨甲酰基甲氧基)-2,3,4,5-四氢-1,2,5-苯并硫杂二氮杂
作为回肠胆汁酸转运体(IBAT)机制的抑制剂,奥德昔巴特抑制胆汁酸从回肠天然再吸收进入肝门静脉循环中。未从回肠再吸收的胆汁酸改为分泌至粪便中。胆汁酸自肠肝循环全部移除导致血清及肝脏中的胆汁酸水平降低。因此,奥德昔巴特或其药学上可接受的盐用于治疗与升高的胆汁酸水平相关的肝病,尤其是治疗罕见的小儿胆汁淤积性肝病。
奥德昔巴特呈现出高效力,并且应以低剂量(例如范围从约40至约120μg/kg)给药。这对应于当用于治疗体重约5至20kg的儿科患者(例如婴儿和学步幼儿)时,剂量低至200至800μg。期望的是向年幼患者以小尺寸剂型给药奥德昔巴特的制剂。还期望的是,此类制剂具有良好的适口性,不会感觉到砂砾感,并且能被婴儿和小孩良好耐受。
如果用液体向新生婴儿给药,可以向其给药多颗粒(multiparticulates)。对于年龄接近6个月或以上(例如断奶后)的儿童,所述多颗粒可以它们的固体形式直接给药到口中或与半固体食物混合给药。已有报道,颗粒尺寸、形状、质地、硬度、味道和剂量体积(即颗粒数量)对于婴儿和儿童对多颗粒的可接受程度十分重要(Kozarewicz,Int.J.Pharm.2014,第469卷,第245-248页)。有关不同口服剂型在儿科患者和老年患者中的可接受程度已有大量文献综述(参见例如Liu等人,Drugs 2014,第74卷,第1871-1889页;Drumond等人,Int.J.Pharm.2017,第521卷,第294-305页;Mistry等人,J.Pharm.Pharmacol.2017,第69卷,第361-376页;Walsh等人,Int.J.Pharm.2017,第536卷,第547-562页),但是这些综述罕有报道所研究的多颗粒的尺寸和/或剂量体积(量)。
对砂砾感的感觉可受到一系列因素的影响,所述因素包括颗粒尺寸、量和给药载体(参见Mishra等人,Yakugaku Zasshi 2009,第129卷,第1537-1544页;Lopez等人,Eur.J.Pharm.Sci.2016,第92卷,第156-162页),以及颗粒的硬度和形状(Tyle,ActaPsychologica 1993,第84卷,第111-118页),其中不规则颗粒被感知为比相同尺寸的圆形(球形)颗粒要大(Engelen等人,J.Text.Studies 2005,第36卷,第373-386页)。砂砾感研究已经表明,随着多颗粒的尺寸和剂量的增加,砂砾感评分会增加,而随着载体黏度增加,砂砾感评分会下降(Lopez等人,Eur.J.Pharm.Sci.2016,第92卷,第156-162页)。
胶囊可以被年龄接近6周岁的儿童接受。该胶囊的可吞咽性取决于剂型大小(即,尺寸)和儿童的能力。尺寸、形状、口感和余味是可以影响患者可接受程度的重要胶囊属性(Kozarewicz,Int.J.Pharm.2014,第469卷,第245-248页)。在一些实施方案中,所述胶囊的尺寸要保持得足够小,每一剂所需的胶囊的数目保持在最少,例如不超过1-3个胶囊。
鉴于上述情况,存在对容易以小剂量给药的奥德昔巴特的制剂的需求,所述剂量适配于患者体重。在一些实施方案,所述制剂适用于治疗非常年幼的患者,应当易吞咽以及不应当感觉到砂砾感。
附图说明
图1显示干燥晶体修饰物1的X射线粉末衍射图。
图2显示晶体修饰物1的过度水合样品的X射线粉末衍射图。
图3显示晶体修饰物1的干燥,其中底部为晶体修饰物1的过度水合样品的X射线粉末衍射图,且顶部为干燥样品的X射线粉末衍射图(2θ范围为5-13°)。
图4显示晶体修饰物1的干燥,其中底部为晶体修饰物1的过度水合样品的X射线粉末衍射图,且顶部处为干燥样品的X射线粉末衍射图(2θ范围为18-25°)。
图5显示自乙醇及水的混合物(70:30%v/v)获得的晶体修饰物2A的X射线粉末衍射图。
图6显示具有约50%结晶分数(在预加热及冷却之后)的奥德昔巴特样品的DSC曲线。
发明内容
本发明提供了包含低剂量奥德昔巴特的多颗粒制剂。在一些实施方案中,制剂是儿科制剂。在一些实施方案中,制剂可实现基于体重的给药并可洒在食物上。所述制剂可被设计为具有良好的适口性,并且在颗粒尺寸和剂量体积间具有最佳平衡。
在第一个方面,本发明涉及包含多个颗粒的奥德昔巴特的药物制剂,其中各颗粒包含基于该颗粒总重量的约0.1%w/w至约5.0%w/w的量的奥德昔巴特或其药学上可接受的盐。
由于所给药的奥德昔巴特是低剂量,并且由于本申请的多颗粒形式,所述制剂的各颗粒仅包含非常少量的活性成分。例如,基于该颗粒的总重量,各颗粒中的奥德昔巴特或其药学上可接受的盐的量可以从约0.2%w/w至约3.5%w/w,优选地从约0.3%w/w至约3.0%w/w,更优选地从约0.4%w/w至约2.5%w/w,以及最优选地从约0.5%w/w至约2.0%w/w。在一个优选实施方案中,各颗粒包含基于该颗粒的总重量的约0.5%w/w的量的奥德昔巴特或其药学上可接受的盐。在另一个优选实施方案中,各颗粒包含基于该颗粒的总重量的约1.0%w/w的量的奥德昔巴特或其药学上可接受的盐。在再另一个优选实施方案中,各颗粒包含基于该颗粒的总重量的约1.5%w/w的量的奥德昔巴特或其药学上可接受的盐。
如本文所用,术语“颗粒”是指小颗粒尺寸范围从约0.1至约1.5mm。此类颗粒优选地基本是球形,但是细长或长圆形颗粒也可以使用。颗粒可以是例如,团粒、珠粒、微颗粒、微球、小粒或小型片剂,并且颗粒可以优选地覆盖有一层或多层围绕每一此类团粒、珠粒、微颗粒、微球、小粒或小型片剂的包衣层。
在一些实施方案中,制剂的颗粒小到可以将它们洒在食物上或易于吞服。在一些实施方案中,可吞服所述微粒而不引起砂砾感。在一些实施方案中,所述颗粒不会使得患者有咀嚼所述颗粒的冲动。因此,所述颗粒尺寸优选地在约0.1至约1.5mm之间,更优选地在约0.1至约1.0mm之间,更优选地在约0.1至约0.8mm之间,例如约0.2mm、约0.3mm、约0.4mm、约0.5mm、约0.6mm、或约0.7mm。在更优选的实施方案中,所述颗粒介于约0.4至约0.8mm之间,例如约0.5mm,或例如约0.6mm,或例如约0.7mm。在本发明的具体实施方案中,所述颗粒为约0.7mm。
在一些实施方案中,本发明涉及奥德昔巴特的制剂,其中各颗粒包含核和围绕该核的包衣层。各颗粒的核可以是团粒、小粒、小型片剂、珠粒、微颗粒或微球。
在一些实施方案中,各颗粒的核包含活性药物成分(奥德昔巴特),而各颗粒的包衣层不包含该活性药物成分。在一些实施方案中,各颗粒的核包含基于该颗粒总重量的从约0.1%至约5%w/w的活性药物成分,例如基于所述颗粒总重量的从约0.1%至约2%w/w,例如从约0.1%至约1%w/w,或例如从约0.1%至约0.5%w/w的活性药物成分。
在一些实施方案中,各颗粒的包衣层包含活性药物成分(奥德昔巴特),而各颗粒的核不包含该活性药物成分。在一些实施方案中,各颗粒的包衣层包含基于该颗粒总重量的从约0.1%至约5%w/w的活性药物成分,例如基于所述颗粒总重量的从约0.1%至约2%w/w,例如从约0.1%至约1%w/w,或例如从约0.1%至约0.5%w/w的活性药物成分。
核可为口服可分散的且包含可溶成分,例如,糖(如蔗糖)或可溶性聚合物(例如,羟丙基甲基纤维素),或者可为非口服可分散的且包含非可溶性成分,例如非可溶性聚合物(例如,微晶纤维素)。在本发明的优选的实施方案中,所述核包含微晶纤维素。在一个更优选的实施方案中,所述核是微晶纤维素球。
包衣层可进一步包含成膜聚合物,诸如基于纤维素的聚合物、基于多糖的聚合物、基于N-乙烯吡咯烷酮的聚合物、丙烯酸酯、丙烯酰胺,或其共聚物。合适的成膜聚合物的实例包括聚乙烯醇(PVA)、聚乙酸乙烯酯邻苯二甲酸酯(PVAP)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、甲基丙烯酸共聚物、淀粉、羟丙基淀粉、壳聚糖、虫胶、甲基纤维素、羟丙基纤维素(HPC)、低取代羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素(HPMC;或羟丙甲纤维素)、羟丙基甲基纤维素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、乙酸纤维素邻苯二甲酸酯(CAP)、乙酸纤维素偏苯三酸酯(CAT)以及其组合,诸如甲基纤维素及羟丙基甲基纤维素(metolose)的混合物。在优选的实施方案中,包衣层包含选自以下的成膜聚合物:羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、淀粉、羟丙基淀粉及羟丙基纤维素(HPC)。在最优选的实施方案中,包衣层包含羟丙基甲基纤维素作为成膜聚合物。
包衣层可任选包含一或多种额外成份,诸如增塑剂(例如,聚乙二醇、三乙酸甘油酯或柠檬酸三乙酯)、防粘剂(例如,滑石或硬脂酸镁)或着色剂(例如,二氧化钛、氧化铁、核黄素或姜黄)。
在一些实施方案中,所述制剂包含结晶形式的奥德昔巴特。在一些实施方案中,所述制剂包含奥德昔巴特的结晶水合物。在一些实施方案中,所述制剂包含奥德昔巴特的晶体修饰物1。此稳定的晶体修饰物可从奥德昔巴特在水与有机溶剂(例如乙醇)的混合物中的浆液获得。在这些条件下,最初形成每摩尔奥德昔巴特含有约2摩尔水及约1至约3摩尔,诸如约2至约3摩尔乙醇的混合溶剂合物(例如,二水合物-二乙醇合物或二水合物-三乙醇合物)。在本文,此混合溶剂合物称为晶体修饰物2。当晶体修饰物2干燥时(例如在真空下(例低于5mbar)或在氮气流下),其失去其有机溶剂分子且变成晶体修饰物1。在一些实施方案中,晶体修饰物2到晶体修饰物1的转化是通过结晶中间体进行的。据信此结晶中间体是脱水形式,其自空气快速吸收水。虽然不希望受理论束缚,但据信可在无需使所述晶体溶解及重结晶的情况下移除溶剂分子。
奥德昔巴特的晶体修饰物1不仅可从上述水和乙醇的混合物中获得,还可从奥德昔巴特于水及有机溶剂中的浆液获得,所述有机溶剂选自甲醇、2-丙醇、丙酮、乙腈、1,4-二噁烷、DMF及DMSO。在将在这些条件下获得的不同混合溶剂合物(晶体修饰物2)进行干燥后,可获得相同的奥德昔巴特的结晶水合物,即晶体修饰物1。
晶体修饰物1含有空隙体积(void volume),所述空隙体积视相对湿度而定能够每摩尔奥德昔巴特含有至多约2摩尔与晶体缔合的水。此形式因此形式上为通道水合物(channel hydrate)。然而,在约30%相对湿度下,晶体修饰物1中每摩尔有机化合物含有基本上化学计量量的约1.5摩尔的水,并因此为倍半水合物。基本上化学计量量的水被认为具有优势,因为即使在约30%至约70%RH的正常相对湿度范围内发生湿度变化的情况下,晶体的含水量仍基本上保持恒定。实际上,在例如约30%至约70%RH之间的正常湿度下,晶体修饰物1显现出相对低的吸湿性。
在一个实施方案中,所述制剂包含奥德昔巴特的晶体修饰物1,该奥德昔巴特的晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的X射线粉末衍射(XRPD)图,其至少在以下2θ位置具有特定峰:°5.6±0.2、6.7±0.2和/或12.1±0.2。
在特定实施方案中,所述制剂包含晶体修饰物1,该晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特定峰:5.6±0.2、6.7±0.2及12.1±0.2及在以下位置具有一或多个特征峰:4.1±0.2、4.6±0.2、9.3±0.2、9.4±0.2及10.7±0.2。
在更具体的实施方案中,所述制剂包含晶体修饰物1,该晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特定峰:4.6±0.2、5.6±0.2、6.7±0.2、9.3±0.2、9.4±0.2及12.1±0.2。
在又一更具体的实施方案中,所述制剂包含晶体修饰物1,该晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特征峰:4.1±0.2、4.6±0.2、5.6±0.2、6.7±0.2、9.3±0.2、9.4±0.2、10.7±0.2及12.1±0.2处,以及在以下一个或多个位置处具有特征峰:8.1±0.2、8.6±0.2、13.4±0.2、13.8±0.2、13.9±0.2、16.6±0.2、17.3±0.2、17.7±0.2、18.3±0.2、18.9±0.2、19.4±0.2、19.7±0.2、20.5±0.2、20.8±0.2、21.6±0.2、23.2±0.2、24.3±0.2、29.8±0.2及30.6±0.2。
在甚至更具体的实施方案中,所述制剂包含晶体修饰物1,该晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特征峰:4.1±0.2、4.6±0.2、5.6±0.2、6.7±0.2、8.1±0.2、8.6±0.2、9.3±0.2、9.4±0.2、10.7±0.2、12.1±0.2、13.4±0.2、13.8±0.2、13.9±0.2、16.6±0.2、17.3±0.2、17.7±0.2、18.3±0.2、18.9±0.2、19.4±0.2、19.7±0.2、20.5±0.2、20.8±0.2、21.6±0.2、23.2±0.2、24.3±0.2、29.8±0.2及30.6±0.2。
在另一个实施方案中,所述制剂包含晶体修饰物1,该晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其基本上如图1所示。
尽管晶体修饰物1为在约30%相对湿度下含有约3.5%(w/w)的水(基于晶体总重量)的倍半水合物,但已观测到,当湿度增加高至95%RH时晶体可吸收额外1.5%(w/w)的水。此额外水的吸收及解吸为完全可逆的。额外的水可被吸收至表面上或可进一步填充结构的通道。在一些实施方案中,术语“过度水合”是指晶体修饰物1中每摩尔奥德昔巴特含有约1.5至约4摩尔的水,诸如每摩尔奥德昔巴特约1.5至约3.5,或诸如约1.5至3,或诸如约1.5至约2.5,或诸如约1.5至约2摩尔的水。在一些实施方案中,术语“过度水合”是指晶体修饰物1中每摩尔奥德昔巴特含有约2至约4摩尔的水,诸如每摩尔奥德昔巴特约2至约3.5,或诸如约2至约3,或诸如约2至2.5摩尔的水。
已观测到,过度水合的晶体修饰物1的XRPD图当例如在真空中在50℃下干燥后略有变化。如图3及图4中分别显示,在5-13°及18-25°2θ范围内非常清楚地观察到峰的小位移。将干燥修饰物暴露于升高的相对湿度,诸如高达95%RH,使得过度水合修饰物的XRPD图再次出现。峰位移为单元晶胞体积变化的结果,其由于水分子进入及离开晶体结构而出现。
因此,在另一实施方案中,所述制剂包含过度水合的晶体修饰物1,该过度水合晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的X射线粉末衍射(XRPD)图,其至少在以下°2θ位置具有特定峰:5.7±0.2、6.7±0.2和/或12.0±0.2。
在具体实施方案中,所述制剂包含过度水合的晶体修饰物1,该过度水合的晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其具有在以下°2θ位置的特定峰:5.7±0.2、6.7±0.2及12.0±0.2,以及一个或多个在以下位置的特征峰:4.0±0.2、9.4±0.2、9.6±0.2及10.8±0.2。
在更具体的实施方案中,所述制剂包含过度水合的晶体修饰物1,该过度水合的晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特定峰:4.0±0.2、5.7±0.2、6.7±0.2、9.4±0.2、9.6±0.2、10.8±0.2及12.1±0.2。
在一更具体的实施方案中,所述制剂包含过度水合的晶体修饰物1,该过度水合的晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特征峰:4.0±0.2、5.7±0.2、6.7±0.2、9.4±0.2、9.6±0.2、10.8±0.2及12.1±0.2,以及在以下一个或多个位置具有特征峰4.7±0.2、8.0±0.2、8.6±0.2、13.3±0.2、14.1±0.2、15.3±0.2、16.5±0.2、17.3±0.2、19.3±0.2、19.7±0.2、19.9±0.2、20.1±0.2、20.8±0.2、21.7±0.2、23.6±0.2、26.2±0.2、26.5±0.2、28.3±0.2及30.9±0.2。
在甚至更具体的实施方案中,所述制剂包含过度水合的晶体修饰物1,该过度水合的晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其在以下°2θ位置具有特征峰:4.0±0.2、4.7±0.2、5.7±0.2、6.7±0.2、8.0±0.2、8.6±0.2、9.4±0.2、9.6±0.2、10.8±0.2、12.1±0.2、13.3±0.2、14.1±0.2、15.3±0.2、16.5±0.2、17.3±0.2、19.3±0.2、19.7±0.2、19.9±0.2、20.1±0.2、20.8±0.2、21.7±0.2、23.6±0.2、26.2±0.2、26.5±0.2、28.3±0.2及30.9±0.2。
在又一实施方案中,所述制剂包含奥德昔巴特的过度水合的晶体修饰物1,该过度水合的晶体修饰物1具有用CuKα1-辐射获得的XRPD图,其基本上如图2所示。
期望的是在制备所述制剂中避免使用有机溶剂。在一些实施方案中,水用作制备所述制剂的溶剂。奥德昔巴特在水中的溶解性非常差,且其在pH 7和37℃下的溶解度经确定低至约30μg/mL。由于在水中的低溶解度,奥德昔巴特的水性悬浮液可以含有更大的奥德昔巴特团聚物,其可以导致活性药物成分在核上的不均分布(即,核可以包含不同量的奥德昔巴特,这随之影响剂量的均匀度)。因此,在一些实施方案中,奥德昔巴特的水性悬浮液是均匀的。在一些实施方案中,将奥德昔巴特的均匀水性悬浮液喷洒至核上。
奥德昔巴特呈现出高效力,并且其应以低剂量给药,尤其在治疗体重约5至约20kg的儿科患者时。为了实现本文所述多颗粒制剂的高剂量均匀度,所述制剂的各颗粒基本上包含相同量的奥德昔巴特是十分重要的,即,制剂的颗粒中奥德昔巴特含量的偏差应该尽可能小。
如本文所用,术语“均匀”是指不含有大于约200μm的奥德昔巴特团聚体的悬浮液,和优选地不含有大于约100μm的团聚体,更优选地不含有大于约50μm的团聚体。在包衣悬浮液中的奥德昔巴特团聚体的尺寸可通过光学显微镜、使用基于European Pharmacopoeia9.0,monograph 2.9.37的方法和本文实验部分所述来确定。可替代地,在包衣悬浮液中的奥德昔巴特团聚体的尺寸可以通过光散射技术确定,例如低角度激光散射(LALLS)。在一些实施方案中,包衣悬浮液的粒径分布的d
在一些实施方案中,制备奥德昔巴特的均匀悬浮液可以通过湿磨法将该化合物分散于水中得到。湿磨法是这样一种方法,其通过剪切、压碎和研磨将固体物质分散在液体中。湿磨装置的实例包括胶体磨机、圆锥磨机、球磨机、盘磨机和高剪切分散机。用于本发明的湿磨装置的一个具体实例是胶体磨机。
在一些实施方案中,奥德昔巴特的结晶度在湿磨期间增加。
优选地,使用匀浆机在少量水中将奥德昔巴特先行湿润,然后使用胶体磨机将其分散于水中。将均匀化的分散液喷洒在核上以使得活性药物成分均匀分布。
期望的是,制剂不含有对于该制剂不是绝对必要的任何成分,例如表面活性剂。因此,在一个优选的实施方案中,包衣悬浮液不包含表面活性剂。类似地,在一些实施方案中,制剂的包衣层不包含表面活性剂。
在一个实施方案中,颗粒包含在药包(sachet)中。在另一个实施方案中,颗粒包含在胶囊中。此类胶囊可以由明胶、由基于纤维素的聚合物(例如,羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素))、或由基于多糖的聚合物(例如普鲁兰多糖)制造。胶囊可以被完整吞服,或可以设计为能打开以使得例如可将内容物(即,颗粒)洒在食物载体上用于给药。在后一种情况中,一个胶囊中的颗粒的数量应该优选适合放在一餐匙食物上。在一些实施方案中,胶囊包含约20至约100mg的颗粒,例如约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg或约90mg。
对于更年幼的儿科患者,例如婴儿、学步幼儿和年龄至多约6岁的儿童,优选地将颗粒洒在易于吞服并无需咀嚼的食物上,所述食物例如酸奶、苹果酱、果泥或燕麦粥。对于大一些的儿科患者,例如年龄大于约6岁的儿童、青少年、刚成年的年轻人,包含颗粒的胶囊可以完整吞服,例如无需打开胶囊。对于还未断奶或不能进食半固体食物的最多6月大的新生儿患者,可以通过将颗粒分散在适合的液体载体中来给药制剂,所述溶媒为例如母乳、婴儿配方奶或水。当颗粒已经分散在液体溶媒中时,可以在分散后30分钟内将其给药至患者,而不会出现活性成分丢失或降解迹象。在一些实施方案中,用于给药奥德昔巴特颗粒的液体载体的体积(包括清洗)可以低于约20mL,例如低于约15mL、例如低于约10mL、例如低于约5mL。在一些实施方案中,使用口服注射器将已分散的颗粒直接施用到口中。
本文公开的制剂可用在治疗或预防肝病,例如胆汁酸依赖性肝病。在一些实施方案中,肝病涉及血清和/或肝脏中升高的胆汁酸水平。本文公开的制剂尤其可用在治疗或预防胆汁淤积性肝病,包括罕见的儿科胆汁淤积性肝病,例如胆道闭锁;卡塞后胆道闭锁(post-Kasai biliary atresia);肝移植后胆道闭锁;进行性家族性肝内胆汁淤积(PFIC),包括包括PFIC-1、PFIC-2、PFIC-3及非特异性PFIC、胆汁分流术后PFIC及肝移植后PFIC;阿拉杰里综合征(ALGS);和原发性胆汁性肝硬化(PBC);以及小儿胆汁淤积瘙痒症。因此,在一个方面,本发明涉及本文公开的制剂用于治疗或预防胆汁淤积性肝病。在另一方面,本发明涉及在受试者中治疗或预防胆汁淤积性肝病的方法,所述受试者例如人类,所述方法包括向有此类治疗或预防需要的受试者给药治疗有效量的本文公开的制剂。
胆道闭锁是罕见的新生儿肝病,其涉及大胆管的部分或完全阻塞(或甚至无胆管)。该阻塞或无胆管造成引发胆汁酸积累的胆汁淤积,所述积累会破坏肝脏。在一些实施方案中,胆汁酸的积累发生在肝外胆道系统中。在一些实施方案中,胆汁酸的积累发生在肝内胆道系统中。当前的护理标准是卡塞手术(Kasai procedure),其是移除阻塞的胆管并再直接将小肠的一部分与肝脏连接的外科手术。当前没有批准的针对该病症的药物疗法。
本申请提供用于在有需要的受试者中治疗胆道闭锁的方法,该方法包括给药治疗有效量的本文所述的制剂。在一些实施方案中,在给予本文所述制剂之前,受试者已经进行了卡塞手术。在一些实施方案中,在进行卡塞手术之前,向受试者给药本文公开的制剂。在一些实施方案中,胆道闭锁的治疗降低了受试者中的血清胆汁酸的水平。在一些实施方案中,血清胆汁酸的水平经由例如ELISA酶分析或如Danese等人,PLoS One.2017,vol.12(6):e0179200中所述的用于测量总胆汁的分析测定来确定,将该文献通过全文引用的方式并入本文。在一些实施方案中,相对于在给药本文公开的制剂之前的血清胆汁酸水平,血清胆汁酸水平降低了例如10%至40%、20%至50%、30%至60%、40%至70%、50%至80%或超过90%。在一些实施方案中,对胆道闭锁的治疗包括搔痒病的治疗。
PFIC为一种罕见的遗传性病症,据估计,全世界每50,000至100,000名出生的儿童中就有一名患病,且引起渐进性的危及生命的肝病。
PFIC的一种表现为搔痒,其常常导致生活质量严重降低。在一些情况下,PFIC导致肝硬化及肝脏衰竭。当前疗法包括部分胆汁外分流术(Partial External BiliaryDiversion,PEBD)及肝脏移植,然而,这些选择可带来手术后并发症的重大风险,以及心理及社会问题。
已鉴别出三种替代性基因缺陷,其与三种独立的PFIC亚型相关,称为1、2及3型。
·PFIC 1型,其有时称为“拜勒病(Byler disease)”,由于ATP8B1基因中的突变所致的胆汁分泌受损引起,该基因编码的蛋白质有助于维持胆管细胞膜中称为磷脂的脂肪的适当平衡。这些磷脂中的失衡与肝脏中的胆汁淤积及升高的胆汁酸相关。患有PFIC 1型的受试者通常在生命的第一个月内发生胆汁淤积,且在无手术治疗的情况下,在生命的第一个十年结束之前发展成肝硬化及晚期肝病。
·PFIC 2型,其有时称为“拜勒综合征(Byler syndrome)”,由于ABCB11基因中的突变所致的胆汁盐分泌受损引起,该基因编码的蛋白质(称为胆汁盐输出泵)将胆汁酸移出肝脏。患有PFIC 2型的受试者通常在生命的前几年内发生肝脏衰竭且发展成一种被称为肝细胞癌的肝癌的风险增加。
·PFIC 3型,其通常在儿童期早期伴随渐进性胆汁淤积,这是由ABCB4基因中的突变引起的,该基因编码的转运子使磷脂移动穿过细胞膜。
另外,有人已提出TJP2基因、NR1H4基因或Myo5b基因突变为PFIC的原因。另外,一些患有PFIC的受试者在ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b基因的任一者中不具有突变。在这些情况下,病症的起因未知。
示例性的ATP8B1基因突变或产生的蛋白质列于表1及2中,其中编号基于人类野生型ATP8B1蛋白质(例如SEQ ID NO:1)或基因(例如SEQ ID NO:2)。示例性的ABCB11基因突变或所得蛋白质列于表4及5中,其中编号基于人类野生型ABCB11蛋白质(例如SEQ ID NO:3)或基因(例如SEQ ID NO:4)。
如本领域技术人员所理解,对应于SEQ ID NO:1或3中的特定氨基酸位置的参考蛋白质序列中的氨基酸位置可经由将参考蛋白质序列与SEQ ID NO:1或3比对(例如使用软件程序,诸如ClustalW2)来确定。这些残基的变化(在本文中称为“突变”)可包括单个或多个氨基酸取代、插入序列内或插入序列侧翼,以及序列内缺失或序列侧翼处的缺失。如本领域技术人员所理解,对应于SEQ ID NO:2或4中的特定核苷酸位置的参考基因序列中的核苷酸位置可经由将参考基因序列与SEQ ID NO:2或4比对(例如使用软件程序,诸如ClustalW2)来确定。这些残基的变化(在本文中称为“突变”)可包括单个或多个核苷酸取代、插入序列内或插入序列侧翼,以及序列内或序列侧翼序的缺失。亦参见Kooistra,等人,“KLIFS:Astructural kinase-ligand interaction database,”Nucleic Acids Res.2016,第44卷,第D1期,第D365-D371页,将其以全文引用的方式并入本文中。
表1.示例性的ATP8B1突变
表2.与PFIC-1相关的所选ATP8B1突变
表1及2的参考文献
在一些实施方案中,ATP8B1中的突变选自L127P、G308V、T456M、D554N、F529缺失、I661T、E665X、R930X、R952X、R1014X及G1040R。
表3.示例性ABCB11突变
表4.与PFIC-2相关的所选ABCB11突变
表3及4的参考文献
在一些实施方案中,ABCB11中的突变选自A167T、G238V、V284L、E297G、R470Q、R470X、D482G、R487H、A570T、N591S、A865V、G982R、R1153C及R1268Q。
本申请提供治疗受试者的PFIC(例如,PFIC-1及PFIC-2)的方法,所述方法包括对获自受试者的样品进行分析,以确定受试者是否具有与PFIC相关的突变(例如,ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b突变),以及向确定具有与PFIC相关突变的受试者给予(例如,特异性地或选择性地给予)治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中,突变为ATP8B1或ABCB11突变。举例而言,如表1至4的任一者中所提供的突变。在一些实施方案中,ATP8B1中的突变选自L127P、G308V、T456M、D554N、F529del、I661T、E665X、R930X、R952X、R1014X及G1040R。在一些实施方案中,ABCB11中的突变选自A167T、G238V、V284L、E297G、R470Q、R470X、D482G、R487H、A570T、N591S、A865V、G982R、R1153C及R1268Q。
本申请亦提供用于治疗有需要受试者的PFIC(例如,PFIC-1及PFIC-2)的方法,该方法包括:(a)检测受试者体内与PFIC相关的突变(例如ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b突变);及(b)向受试者给药治疗有效量的本文公开的制剂。在一些实施方案中,用于治疗PFIC的方法可包括向具有与PFIC相关突变(例如ATP8B1、ABCB11、ABCB4、TJP2、NR1H4或Myo5b突变)的受试者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中,突变为ATP8B1或ABCB11突变。举例而言,如表1至4的任一者中所提供的突变。在一些实施方案中,ATP8B1中的突变选自L127P、G308V、T456M、D554N、F529del、I661T、E665X、R930X、R952X、R1014X及G1040R。在一些实施方案中,ABCB11中的突变选自A167T、G238V、V284L、E297G、R470Q、R470X、D482G、R487H、A570T、N591S、A865V、G982R、R1153C及R1268Q。
在一些实施方案中,经由使用任何本领域公认的测试,包括下一代测序(nextgeneration sequencing,NGS),在受试者体内或来自受试者的活检样品中测定受试者是否具有与PFIC相关的突变。在一些实施方案中,使用管理机构认证(例如FDA认证)的用于鉴别受试者内或来自受试者的活检样品中是否具有与PFIC相关突变的测试或分析,或经由进行本文所述分析的非限制性实施例中的任一者,测定受试者是否具有与PFIC相关的突变。诊断PFIC的其他方法描述于Gunaydin,M.等人,Hepat Med.2018,第10卷,第95-104页,其以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中,PFIC(例如,PFIC-1或PFIC-2)的治疗降低受试者中血清胆汁酸的水平。在一些实施方案中,血清胆汁酸的水平经由例如ELISA酶分析或如Danese等人,PLoS One.2017,第12(6)卷:e0179200中所述的用于测量总胆汁酸的分析测定,将其以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中,相比于给药本文公开的制剂之前的血清胆汁酸的水平,本申请中血清胆汁酸的水平降低了例如10%至40%、20%至50%、30%至60%、40%至70%、50%至80%或超过90%。在一些实施方案中,PFIC的治疗包括搔痒病的治疗。
在另一个方面,本发明涉及制备本文公开的药物制剂的方法,其包括制备奥德昔巴特的均匀水性悬浮液的步骤。在一个优选的实施方案中,制备包衣悬浮液是通过湿磨法将奥德昔巴特分散于水中进行的。
在更具体的实施方案中,该方法包括以下步骤:
a)使用匀浆机在水中将奥德昔巴特润湿;和
b)通过湿磨法将已湿润的奥德昔巴特分散于水中,由此获得奥德昔巴特的均匀水性悬浮液。
在一些实施方案中,在步骤a)的润湿之前,将奥德昔巴特过筛。
在一些实施方案中,所述方法进一步包括添加成膜聚合物至悬浮液中的步骤。成膜聚合物可以促进奥德昔巴特均匀分散在悬浮液中。成膜聚合物可以在湿磨法步骤之前或之后添加。在一些实施方案中,湿磨法在缺少成膜聚合物时更有效。因此,在更优选的实施方案中,将成膜聚合物添加至步骤b)中获得的奥德昔巴特的均匀水性悬浮液中。
包衣悬浮液的均匀度可以在添加成膜聚合物之前或之后检查。当奥德昔巴特团聚体的尺寸可以通过光学显微镜确定时,例如在实验部分中所述,包衣悬浮液不应该包含大于200μm的团聚体。悬浮液优选不包含大于100μm的团聚体,并且更优选地不包含大于50μm的团聚体。当团聚体的尺寸通过光散射技术例如LALLS确定时,包衣悬浮液的粒径分布的d
在另一优选的实施方案中,包衣悬浮液不包含表面活性剂。
在另一个方面,本发明涉及通过本文公开的任一方案获得的制剂。
定义
如本文所用,术语“治疗”、“处理”及“医治”是指逆转、缓解、延迟如本文所述的疾病或病症或其一或多种症状的发作,或抑制该疾病或病症或其一或多种症状的进展。在一些实施方案中,治疗可在已出现一或多种症状之后给药。在其他实施方案中,治疗可在无症状存在的情况下给药。举例而言,治疗可在症状发作之前向易感个体给药(例如根据症状病史和/或根据遗传性或其他易感性因素)。也可在症状已消退之后继续治疗,例如以预防或延迟其复发。
如本文所用,术语“药学上可接受的”是指适用于人类药物用途且通常安全、无毒且在生物学上或其他方面没有不合需要的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
如本文所使用,术语“约”是指包括(及描述)针对本文的值或参数本身的实施方案的值或参数。举例而言,涉及“约20”的描述包括“20”的描述。数值范围包括定义该范围的数值本身。一般而言,术语“约”是指变量的指定值及在指定值的实验误差内(例如,在平均值的95%置信区间内)或在指定值的10%内的变量的所有值,以较大值为准。
术语“晶体修饰物”是指有机化合物的结晶固相。晶体修饰物可以是溶剂合物或非溶剂合物。
术语“溶剂合物”是指有机化合物的结晶固相,其具有引入其结晶结构中的溶剂(例如,溶剂分子)。“水合物”是溶剂为水的溶剂合物。
术语“倍半水合物”是指每摩尔有机化合物含有约1.5摩尔与晶体缀合的水的水合物(即,1.5水合物)。如本文所用,倍半水合物包括约1.2至约1.8,更优选地约1.3至约1.7,更优选地约1.4至约1.6,且甚至更优选地约1.45至约1.55摩尔与晶体中的每摩尔奥德昔巴特相缔合的水。本文所计算的水量不包括吸附至晶体表面的水。
术语“混合溶剂合物”是指晶体结构中引入两种或更多种不同溶剂分子的有机化合物的结晶固相。至少两种溶剂分子中的一者可为水。
术语“浆液”是指向其中加入过量固体的饱和溶液,由此形成固体与饱和溶液的混合物。
如本文所用,术语“空隙体积”是指结晶结构中的通道、层或其他或多或少隔离的空隙。
测量奥德昔巴特的结晶样品的结晶度,举例来讲,可经由X射线粉末衍射(XRPD)方法或经由差示扫描热测量定(DSC)方法,诸如实验部分中所公开的方法来进行。当在本文中提及结晶化合物时,优选地,经由DSC方法所测量的结晶度大于约70%,诸如大于约80%,具体地大于约90%,更具体地大于约95%。在一些实施方案中,经由DSC方法所测量的结晶度大于约98%。在一些实施方案中,经由DSC方法所测量的结晶度大于约99%。%结晶是指结晶的总样品物质的重量百分比。
现将经由以下实施例描述本发明,所述实施例在任何方面不限制本发明。本文中所提及的所有所引的文件及参考文献均以全文引用的方式并入。
缩写
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EtOH 乙醇
MeOH 甲醇
RH 相对湿度
2-PrOH 2-丙醇
实验方法
X射线粉末衍射(XRPD)分析
在22℃下在装备有Cu长细焦X射线管与PIXcel检测器的PANalytical X′Pert Pro衍射仪上进行分析。自动发散及防散射狭缝与0.02弧度索勒狭缝及Ni-过滤器一起使用。将干燥样品涂至切割的石英(silicon)零背景夹持器(Zero Background Holders,ZBH)上,且在2-40°2θ之间分析,分析时间为17分钟。所有浆液样品在回火多孔氧化铝过滤器基板上滴落且在干燥时分析两次,首先用一分钟16秒扫描(2-30°2θ)且随后用7分钟扫描(2-30°2θ)。当样品已干燥数小时后,进行最终17分钟扫描。
在分析期间旋转样品以便增加样品的随机性。使用以下实验设定:
管张力及电流:40kV,50mA
波长α1(CuKα1):
波长α2(CuKα2):
波长α1及α2平均值(CuKα):
本领域中已知,可获得视测量条件(诸如设备、样品制备或所用机器)而定具有一或多个测量误差的X射线粉末衍射图。具体地,一般已知XRPD图中的强度可视测量条件及样品制备而变动。举例而言,熟悉XRPD的技术人员将意识到峰值的相对强度可根据受测样品的取向及所用仪器的类型及设定而变化。同时,本领域技术人员将认识到,反射位置可受样品位于衍射仪中的精确高度及衍射仪的零校准影响。样品的表面平面性也可具有少许影响。因此,本领域技术人员应了解,不应将本文中呈现的衍射图理解为绝对的,具有与本文中所公开的衍射图基本上相同的粉末衍射图的任何结晶形式都在本发明的范畴内(进一步的信息参见R.Jenkins及R.L.Snyder,“Introduction to X-ray powderdiffractometry”,John Wiley&Sons,1996)。
差示扫描热测量定(DSC)
使用TA Instruments Q2000差示扫描式热量计进行实验。所使用的DCS坩埚为具有针孔(直径≥0.2mm)的带盖TZero铝盘。整个测量过程在DSC池中以50mL/min的恒定流动速率维持干燥氮气吹扫。
实施例
实施例1
制备制剂(小试)
如下表5所示,将微晶纤维素球用两种不同的奥德昔巴特包衣悬浮液中的一种涂覆,以获得含有0.5%w/w或1.5%w/w奥德昔巴特的颗粒。
表5
使用结晶奥德昔巴特。该结晶物质的粒径分布的典型数值是d
包衣悬浮液
通过以下三个步骤制备包含奥德昔巴特原料药的包衣悬浮液:
a)奥德昔巴特悬浮液:将奥德昔巴特原料药用0.5mm筛网过筛,接着使用匀浆机(Ultra Turrax T25;在约6600–7000rpm进行15分钟)将其在少量水中润湿。随后,通过胶体磨机(IKA Magic Lab MKO或MK模块,14600rpm进行20分钟,间隙尺寸为1.5次旋转)将所得到的已润湿的奥德昔巴特原料药分散在水中,直到团聚体的水平符合过程中的控制验收极限。
b)羟丙甲纤维素分散液:在搅拌下将羟丙甲纤维素(3mPa.s)分散在热水中,再将所得到的分散液冷却至室温。
c)奥德昔巴特包衣悬浮液:将所述羟丙甲纤维素分散液添加至胶体磨机中的奥德昔巴特悬浮液中,并将悬浮液在10000rpm搅拌4分钟。使用磁力搅拌子继续以低速运行最终混合。在用于包衣方法之前,将奥德昔巴特包衣悬浮液通过0.5mm筛网过滤。
使用基于欧洲药典9.0,专论2.9.37的方法,通过光学显微镜监测在包衣悬浮液中的奥德昔巴特分散体,调整所述方法以适用于奥德昔巴特包衣悬浮液。使用装备有LeicaDMC 2900数码相机的Leica DMLB显微镜和10x放大倍数的物镜。
通过如下方式制备样品:将一小滴包衣悬浮液放置(使用巴斯德移液管)于4x4测试域的格栅计数室上方的空白物镜玻璃上。将盖玻片(约18×18mm,与格栅同一尺寸)置于液滴上并轻压其中心以得到薄的平整样品。样品的直径与盖玻片的尺寸相当。
将物镜设定为x10的放大倍数并将标尺调整为100μm。重复扫描5次。对于每次重复,通过如下方式检测任一团聚体的尺寸:将其与四块预定测试域中的标尺相比较。按5次重复×4块测试域来计算团聚体的总数量,即总计20块测试域。如果20块测试域不包含超过5个≥50μm的团聚体,并没有≥200μm的团聚体,则包衣悬浮液通过验收。
包衣方法
微晶纤维素(MCC)球在具有Wurster插件的流化床包衣机中使用奥德昔巴特包衣悬浮液进行包衣。MCC球上的包衣悬浮液的量通过称重来确定。为移除细小颗粒和孪生颗粒(twin),将已包衣的颗粒分别用0.5mm和1.25mm筛网过筛。然后将颗粒转移到大容器中,并且将其作为药物产品中间体加以处理。
胶囊填充
使用自动胶囊填充机将每一单位剂量需要的经计算量的颗粒填充进硬质羟丙基甲基纤维素(HPMC)胶囊(尺寸0或尺寸3)中,以提供四种不同的规格含量(strength):2000μg、4000μg、6000μg和1200μg。
2000μg和600μg规格含量是尺寸0白色胶囊,其各自含有具有0.5%w/w和1.5%w/w奥德昔巴特浓度的40mg颗粒。这些规格含量用于三期临床研究中的低-(40μg/kg)和高-(120μg/kg)剂量组中的体重范围为5.0kg至<19.5kg的患者。将尺寸0胶囊设计成可被打开以使得为了给药,可将内容物洒在食物载体上。它们预期不是被完整吞服的。
400μg和1200μg规格含量是尺寸3白色胶囊,其各自含有具有0.5%w/w和1.5%w/w奥德昔巴特浓度的80mg颗粒。这些规格含量用于三期临床研究中的低-(40μg/kg)和高-(120μg/kg)剂量组中的体重范围为19.5kg至>55.5kg的患者。尺寸3胶囊预期被完整吞服。
填充重量、奥德昔巴特的量和其他成分以及用于不同胶囊规格含量的胶囊尺寸如下表6所示。
表6
实施例2
制备制剂(较大规模)
如下表7所示,将微晶纤维素球用两种不同的奥德昔巴特包衣悬浮液中的一种涂覆,以获得包含0.5%w/w或1.5%w/w奥德昔巴特的颗粒。
表7
使用结晶的奥德昔巴特。该结晶物质的粒径分布的典型值是d
包衣悬浮液
分三步制备包含奥德昔巴特原料药的包衣悬浮液:
a)奥德昔巴特悬浮液:使用匀浆机(Ultra Turrax T25;以约6600–7000rpm进行15分钟)将奥德昔巴特原料药在少量水中润湿。随后,通过胶体磨机(IKA Magic Lab MKO或MK模块,14600rpm进行20分钟,间隙尺寸为1.5次旋转)将所得到的已润湿的奥德昔巴特原料药分散在水中,直到团聚体的水平符合过程中的控制验收极限,即d
b)羟丙甲纤维素分散液:在搅拌下将羟丙甲纤维素(3mPa.s)分散在热水中,再将所得到的分散液冷却至室温。
c)奥德昔巴特包衣悬浮液:将所述羟丙甲纤维素分散液添加至奥德昔巴特悬浮液中,并搅拌所述悬浮液。使用搅拌器以低速继续进行最终混合。在用于包衣方法之前,将奥德昔巴特包衣悬浮液用0.5mm筛网过滤。
包衣方法
根据实施例1中所述的涂覆方法,用获得的奥德昔巴特包衣悬浮液涂覆微晶纤维素(MCC)球。
胶囊填充
根据实施例1制备胶囊。用于不同胶囊规格含量的填充重量、奥德昔巴特和其他成分的量以及胶囊尺寸如上表5所示。
实施例3
制备晶体修饰物1
在氮气气氛中在搅拌下,将无水酒精(100.42kg)和粗制的奥德昔巴特(18.16kg)装入250-L GLR中。加入纯净水(12.71kg),并将反应物料于氮气氛下在25±5℃搅拌15分钟。在25±5℃继续搅拌3至60分钟,直到形成澄清溶液。将该溶液先通过5.0μSS过滤筒过滤,再通过0.2μPP过滤筒过滤,然后转移到干净的反应器中。在25±5℃经过2至3个小时,缓慢添加纯净水(63.56kg),然后将该溶液用奥德昔巴特的晶体修饰物1种晶。将该溶液在25±5℃搅拌12小时。在此期间,溶液变得浑浊。通过离心过滤沉淀的固体,并将物质旋转干燥30分钟。然后将该物质在Nutsche过滤器中真空干燥12小时。然后在在真空托盘干燥器中在真空(550mm Hg)25±5℃将所述物质干燥10小时,然后在真空(550mm Hg)于30±5℃将所述物质干燥16小时。分离出所述物质,其为灰白色结晶固体。将分离出的结晶物质研磨,并将其存储在LDPE袋中。
使用XRPD分析过度水合样品,并且其衍射图如图2所示。另一样品在真空中于50℃干燥,而后使用XRPD分析。干燥样品的衍射图如图1所示。
样品干燥的衍射图分别如图3和图4中所示,分别对应于2θ范围5–13°和18–25°(过度水合样品在底部,干燥样品在顶部)。
实施例4
从乙醇和水中制备晶体修饰物2
称取105.9mg的奥德昔巴特,装入1mLChromacol容器中。加入磁力搅拌子和1.0mL的乙醇:水70∶30%v/v混合物,并用带螺纹的盖将该容器封闭。然后将得到的浆液在25℃搅拌1周。
使用XRPD分析润湿的样品,并且其衍射图如图5所示。样品干燥后就转化成了晶体修饰物1。
实施例5
通过差示扫描量热法确定结晶分数
该方法对部分结晶样品中的奥德昔巴特原料药的结晶分数进行了定量。该定量基于以下假设:部分结晶的样品是奥德昔巴特的结晶水合物和其无定型相的二元混合物。基于无水形式的熔融焓对结晶分数进行定量。该无水形式是通过在升高的温度下干燥水合物而自发且可重复形成的脱水水合物。
准确称量5–6mg的奥德昔巴特的结晶样品或部分结晶样品,装入DSC坩埚中,然后用带孔盖施加合适的压力将其封闭。标注DSC坩埚的总重量(盘+盖+样品),并在DSC测试后重新确定坩埚的总重量。DSC测试期间的重量损失不得超过5%。
DSC测试由三个周期组成:
周期1:以5℃/min的扫描速率将温度从20℃升高到120℃;
周期2:以10℃/min的扫描速率将温度从120℃降低到80℃;
周期3:以10℃/min的扫描速率将温度从80℃升高到200℃;
第一个扫描周期将样品干燥,从而将其水合物形式转化为脱水水合物(无水形式)。在第二个扫描周期中,将样品冷却下来以获得在后续加热用于信号积分中的稳定基线。在第三个扫描周期中确定熔融焓,在该周期中,通过其无水形式的熔融来加热样品。
由于熔融引起的吸热事件出现在140–165℃的温度范围内。必须使用TAUniversal Analysis软件的Sig Tangent积分功能在S形正切基线上对峰进行积分。该积分应在130℃至140℃的温度开始,并在165℃至175℃的温度结束,取决于实际的基线。无定型部分的玻璃化转变可出现在120-130℃的温度范围内,取决于实际的无定型部分(实例参见图6)。如果不规则基线无法进行积分,则应评估样品的干燥是否是不完全的。
评估熔融焓是通过使用样品的干重进行的,该干重是通过从DSC测试之前的DSC坩埚的总重量(盘+盖+样品)中减去测试后的DSC坩埚的总重量而获得的。DSC扫描过程中的重量损失百分比(初始重量与干重之差除以初始重量)不得超过5%;否则无法计算出样品的结晶含量。
以重量百分比表达的结晶分数是基于以下公式从熔融焓(ΔH
实施例6
通过LALLS监测的均匀度
使用低角度激光散射(LALLS)研究奥德昔巴特包衣悬浮液的均匀度。通过如下方式生产三种预期用于包含0.5%w/w奥德昔巴特的颗粒的奥德昔巴特包衣悬浮液:使用Ultra Turrax匀浆机将奥德昔巴特原料药(16g)分散在水(200g)中,持续7分钟。当所述原料药分散后,使该匀浆机再额外运行8分钟。然后,用水(216g)冲洗所述匀浆机,并将该水加到悬浮液中。
然后使用湿磨机(IKA Magic Lab和MK模块)将该奥德昔巴特悬浮液分散,所述湿磨机使用表8所述的设定。将Methocel E3分散在热水(85-90℃)中,同时使用顶置搅拌器搅拌,然后冷却至室温。通过添加水将浓度调节至17.4%w/w。
将368g的Methocel凝胶加入奥德昔巴特悬浮液中,并使用湿磨机以10000rpm再搅拌4分钟。在该过程中检查悬浮液的温度。再循环0、5、10、15和20分钟的时间后,用LALLS监测奥德昔巴特悬浮液的均匀度。数据列于表9。
表8
表9
实施例7
内容物均匀度
如实施例1中所述制备两种不同规格含量(0.5%w/w和1.5%w/w)的团粒。对于30颗胶囊,使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)确定一颗胶囊中的奥德昔巴特的量。流动相:40:60乙腈:乙酸盐缓冲液(pH 5.5);流速1.5mL/min;柱:Zorbax SB-CN(50x4.6mm,3.5μm)。奥德昔巴特的测定量和内容物均匀度呈现于表10中。
表10
实施例8
低pH下的稳定性测试
评估包衣有奥德昔巴特的颗粒与酸奶、苹果酱或果泥之间的兼容性,其是通过将约40mg包含0.5%w/w奥德昔巴特的包衣颗粒(对应于一颗200μg胶囊的内容物)洒在1餐匙食物上,并且确定120分钟后内奥德昔巴特的回收率。使用反相高效液相色谱(RP-HPLC)方法确定奥德昔巴特的回收率。流动相:40:60乙腈:乙酸盐缓冲液(pH5.5);流速1.5mL/min;色谱柱:Zorbax SB-CN(50 x 4.6mm,3.5μm)。
所有食物样品的回收率范围在95%至101%之间,并且不会随时间变化。目测得出的结论是,对于所有样品,颗粒都可以保持长达6个小时的完整。没有观察到颜色差异和溶解的颗粒。结果证实,将颗粒洒在食物上的患者获得预期的剂量。所测试食物的汇总呈现于表11中,回收率测试的结果呈现于表12(苹果酱)、表13(酸奶奶昔)和表14(果泥)中。
表11
表12
表13
表14
当与具体的食品载体混合给药时,预期的奥德昔巴特颗粒的主要降解途径是二肽部分的酸性水解。为了评估奥德昔巴特颗粒的化学稳定性,将1mL磷酸盐缓冲液pH3.0加入至约200mg的包含0.5%w/w奥德昔巴特的颗粒中(即五颗200μg胶囊的内容物)并在室温下放置2小时。没有观察到降解。
实施例9
长期稳定性测试
将依据实施例1制备的尺寸0和尺寸3的奥德昔巴特胶囊储存在带有HDPE瓶帽的HDPE瓶中,并将其保持在25℃和60%相对湿度下作为长期贮藏条件,和保持在40℃和75%相对湿度下作为加速条件。对于储存在25℃/60%RH的样品,在1、3、6、9和12个月之后对奥德昔巴特、相关物质和水的量进行确定,对储存在40℃/75%RH的样品,在1、3和6个月之后对奥德昔巴特、相关物质和水的量进行确定。规格含量为200μg的胶囊(尺寸0)的结果呈现在表15中;规格含量为600μg的胶囊(尺寸0)的结果呈现在表16中;规格含量为400μg的胶囊(尺寸3)的结果呈现在表17中;和规格含量为1200μg的胶囊(尺寸3)的结果呈现在表18中。
表15.规格含量200μg的胶囊的稳定性数据
表16.规格含量600μg的胶囊的稳定性数据
表17.规格含量400μg的胶囊的稳定性数据
表18.规格含量1200μg的胶囊的稳定性数据
实施例10
团粒的共混均匀度
如实施例2所述制备两种不同规格含量的颗粒(0.5%w/w和1.5%w/w)。将筛过的团粒收集在55L的桶中,所述桶采用PE袋作为内衬。使用0.25mL的采样头(sampling thieftip)从桶中的10处不同位置提取团粒样品。各位置的平均样品是80mg,对应于两颗200μg或600μg尺寸0胶囊的内容物,或对应于一颗400μg或1200μg尺寸3胶囊的内容物。奥德昔巴特的内容物的确定是通过RP-UPLC:流动相A:80:20乙酸铵缓冲液pH5.7/乙腈;流动相B:20:80乙酸铵缓冲液pH5.7/乙腈;流速0.40mL/min;色谱柱:Waters Acquity BEHC8 100 x2.1mm,1.7mm;梯度:0min:60%A:40%B,12min:20%A:80%B,13.5min:20%A:80%B,13.6min:60%A:40%B,15min:60%A:40%B。奥德昔巴特的测定量和内容物均匀度呈现在表19中。
表19
序列表
<110> 阿尔比里奥公司
<120> 奥德昔巴特的药物制剂
<130> NP0386WO
<150> SE 1850761-6
<151> 2018-06-20
<150> SE 1850762-4
<151> 2018-06-20
<160> 4
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1251
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ser Thr Glu Arg Asp Ser Glu Thr Thr Phe Asp Glu Asp Ser Gln
1 5 10 15
Pro Asn Asp Glu Val Val Pro Tyr Ser Asp Asp Glu Thr Glu Asp Glu
20 25 30
Leu Asp Asp Gln Gly Ser Ala Val Glu Pro Glu Gln Asn Arg Val Asn
35 40 45
Arg Glu Ala Glu Glu Asn Arg Glu Pro Phe Arg Lys Glu Cys Thr Trp
50 55 60
Gln Val Lys Ala Asn Asp Arg Lys Tyr His Glu Gln Pro His Phe Met
65 70 75 80
Asn Thr Lys Phe Leu Cys Ile Lys Glu Ser Lys Tyr Ala Asn Asn Ala
85 90 95
Ile Lys Thr Tyr Lys Tyr Asn Ala Phe Thr Phe Ile Pro Met Asn Leu
100 105 110
Phe Glu Gln Phe Lys Arg Ala Ala Asn Leu Tyr Phe Leu Ala Leu Leu
115 120 125
Ile Leu Gln Ala Val Pro Gln Ile Ser Thr Leu Ala Trp Tyr Thr Thr
130 135 140
Leu Val Pro Leu Leu Val Val Leu Gly Val Thr Ala Ile Lys Asp Leu
145 150 155 160
Val Asp Asp Val Ala Arg His Lys Met Asp Lys Glu Ile Asn Asn Arg
165 170 175
Thr Cys Glu Val Ile Lys Asp Gly Arg Phe Lys Val Ala Lys Trp Lys
180 185 190
Glu Ile Gln Val Gly Asp Val Ile Arg Leu Lys Lys Asn Asp Phe Val
195 200 205
Pro Ala Asp Ile Leu Leu Leu Ser Ser Ser Glu Pro Asn Ser Leu Cys
210 215 220
Tyr Val Glu Thr Ala Glu Leu Asp Gly Glu Thr Asn Leu Lys Phe Lys
225 230 235 240
Met Ser Leu Glu Ile Thr Asp Gln Tyr Leu Gln Arg Glu Asp Thr Leu
245 250 255
Ala Thr Phe Asp Gly Phe Ile Glu Cys Glu Glu Pro Asn Asn Arg Leu
260 265 270
Asp Lys Phe Thr Gly Thr Leu Phe Trp Arg Asn Thr Ser Phe Pro Leu
275 280 285
Asp Ala Asp Lys Ile Leu Leu Arg Gly Cys Val Ile Arg Asn Thr Asp
290 295 300
Phe Cys His Gly Leu Val Ile Phe Ala Gly Ala Asp Thr Lys Ile Met
305 310 315 320
Lys Asn Ser Gly Lys Thr Arg Phe Lys Arg Thr Lys Ile Asp Tyr Leu
325 330 335
Met Asn Tyr Met Val Tyr Thr Ile Phe Val Val Leu Ile Leu Leu Ser
340 345 350
Ala Gly Leu Ala Ile Gly His Ala Tyr Trp Glu Ala Gln Val Gly Asn
355 360 365
Ser Ser Trp Tyr Leu Tyr Asp Gly Glu Asp Asp Thr Pro Ser Tyr Arg
370 375 380
Gly Phe Leu Ile Phe Trp Gly Tyr Ile Ile Val Leu Asn Thr Met Val
385 390 395 400
Pro Ile Ser Leu Tyr Val Ser Val Glu Val Ile Arg Leu Gly Gln Ser
405 410 415
His Phe Ile Asn Trp Asp Leu Gln Met Tyr Tyr Ala Glu Lys Asp Thr
420 425 430
Pro Ala Lys Ala Arg Thr Thr Thr Leu Asn Glu Gln Leu Gly Gln Ile
435 440 445
His Tyr Ile Phe Ser Asp Lys Thr Gly Thr Leu Thr Gln Asn Ile Met
450 455 460
Thr Phe Lys Lys Cys Cys Ile Asn Gly Gln Ile Tyr Gly Asp His Arg
465 470 475 480
Asp Ala Ser Gln His Asn His Asn Lys Ile Glu Gln Val Asp Phe Ser
485 490 495
Trp Asn Thr Tyr Ala Asp Gly Lys Leu Ala Phe Tyr Asp His Tyr Leu
500 505 510
Ile Glu Gln Ile Gln Ser Gly Lys Glu Pro Glu Val Arg Gln Phe Phe
515 520 525
Phe Leu Leu Ala Val Cys His Thr Val Met Val Asp Arg Thr Asp Gly
530 535 540
Gln Leu Asn Tyr Gln Ala Ala Ser Pro Asp Glu Gly Ala Leu Val Asn
545 550 555 560
Ala Ala Arg Asn Phe Gly Phe Ala Phe Leu Ala Arg Thr Gln Asn Thr
565 570 575
Ile Thr Ile Ser Glu Leu Gly Thr Glu Arg Thr Tyr Asn Val Leu Ala
580 585 590
Ile Leu Asp Phe Asn Ser Asp Arg Lys Arg Met Ser Ile Ile Val Arg
595 600 605
Thr Pro Glu Gly Asn Ile Lys Leu Tyr Cys Lys Gly Ala Asp Thr Val
610 615 620
Ile Tyr Glu Arg Leu His Arg Met Asn Pro Thr Lys Gln Glu Thr Gln
625 630 635 640
Asp Ala Leu Asp Ile Phe Ala Asn Glu Thr Leu Arg Thr Leu Cys Leu
645 650 655
Cys Tyr Lys Glu Ile Glu Glu Lys Glu Phe Thr Glu Trp Asn Lys Lys
660 665 670
Phe Met Ala Ala Ser Val Ala Ser Thr Asn Arg Asp Glu Ala Leu Asp
675 680 685
Lys Val Tyr Glu Glu Ile Glu Lys Asp Leu Ile Leu Leu Gly Ala Thr
690 695 700
Ala Ile Glu Asp Lys Leu Gln Asp Gly Val Pro Glu Thr Ile Ser Lys
705 710 715 720
Leu Ala Lys Ala Asp Ile Lys Ile Trp Val Leu Thr Gly Asp Lys Lys
725 730 735
Glu Thr Ala Glu Asn Ile Gly Phe Ala Cys Glu Leu Leu Thr Glu Asp
740 745 750
Thr Thr Ile Cys Tyr Gly Glu Asp Ile Asn Ser Leu Leu His Ala Arg
755 760 765
Met Glu Asn Gln Arg Asn Arg Gly Gly Val Tyr Ala Lys Phe Ala Pro
770 775 780
Pro Val Gln Glu Ser Phe Phe Pro Pro Gly Gly Asn Arg Ala Leu Ile
785 790 795 800
Ile Thr Gly Ser Trp Leu Asn Glu Ile Leu Leu Glu Lys Lys Thr Lys
805 810 815
Arg Asn Lys Ile Leu Lys Leu Lys Phe Pro Arg Thr Glu Glu Glu Arg
820 825 830
Arg Met Arg Thr Gln Ser Lys Arg Arg Leu Glu Ala Lys Lys Glu Gln
835 840 845
Arg Gln Lys Asn Phe Val Asp Leu Ala Cys Glu Cys Ser Ala Val Ile
850 855 860
Cys Cys Arg Val Thr Pro Lys Gln Lys Ala Met Val Val Asp Leu Val
865 870 875 880
Lys Arg Tyr Lys Lys Ala Ile Thr Leu Ala Ile Gly Asp Gly Ala Asn
885 890 895
Asp Val Asn Met Ile Lys Thr Ala His Ile Gly Val Gly Ile Ser Gly
900 905 910
Gln Glu Gly Met Gln Ala Val Met Ser Ser Asp Tyr Ser Phe Ala Gln
915 920 925
Phe Arg Tyr Leu Gln Arg Leu Leu Leu Val His Gly Arg Trp Ser Tyr
930 935 940
Ile Arg Met Cys Lys Phe Leu Arg Tyr Phe Phe Tyr Lys Asn Phe Ala
945 950 955 960
Phe Thr Leu Val His Phe Trp Tyr Ser Phe Phe Asn Gly Tyr Ser Ala
965 970 975
Gln Thr Ala Tyr Glu Asp Trp Phe Ile Thr Leu Tyr Asn Val Leu Tyr
980 985 990
Thr Ser Leu Pro Val Leu Leu Met Gly Leu Leu Asp Gln Asp Val Ser
995 1000 1005
Asp Lys Leu Ser Leu Arg Phe Pro Gly Leu Tyr Ile Val Gly Gln
1010 1015 1020
Arg Asp Leu Leu Phe Asn Tyr Lys Arg Phe Phe Val Ser Leu Leu
1025 1030 1035
His Gly Val Leu Thr Ser Met Ile Leu Phe Phe Ile Pro Leu Gly
1040 1045 1050
Ala Tyr Leu Gln Thr Val Gly Gln Asp Gly Glu Ala Pro Ser Asp
1055 1060 1065
Tyr Gln Ser Phe Ala Val Thr Ile Ala Ser Ala Leu Val Ile Thr
1070 1075 1080
Val Asn Phe Gln Ile Gly Leu Asp Thr Ser Tyr Trp Thr Phe Val
1085 1090 1095
Asn Ala Phe Ser Ile Phe Gly Ser Ile Ala Leu Tyr Phe Gly Ile
1100 1105 1110
Met Phe Asp Phe His Ser Ala Gly Ile His Val Leu Phe Pro Ser
1115 1120 1125
Ala Phe Gln Phe Thr Gly Thr Ala Ser Asn Ala Leu Arg Gln Pro
1130 1135 1140
Tyr Ile Trp Leu Thr Ile Ile Leu Ala Val Ala Val Cys Leu Leu
1145 1150 1155
Pro Val Val Ala Ile Arg Phe Leu Ser Met Thr Ile Trp Pro Ser
1160 1165 1170
Glu Ser Asp Lys Ile Gln Lys His Arg Lys Arg Leu Lys Ala Glu
1175 1180 1185
Glu Gln Trp Gln Arg Arg Gln Gln Val Phe Arg Arg Gly Val Ser
1190 1195 1200
Thr Arg Arg Ser Ala Tyr Ala Phe Ser His Gln Arg Gly Tyr Ala
1205 1210 1215
Asp Leu Ile Ser Ser Gly Arg Ser Ile Arg Lys Lys Arg Ser Pro
1220 1225 1230
Leu Asp Ala Ile Val Ala Asp Gly Thr Ala Glu Tyr Arg Arg Thr
1235 1240 1245
Gly Asp Ser
1250
<210> 2
<211> 3756
<212> DNA
<213> 智人
<400> 2
atgagtacag aaagagactc agaaacgaca tttgacgagg attctcagcc taatgacgaa 60
gtggttccct acagtgatga tgaaacagaa gatgaacttg atgaccaggg gtctgctgtt 120
gaaccagaac aaaaccgagt caacagggaa gcagaggaga accgggagcc attcagaaaa 180
gaatgtacat ggcaagtcaa agcaaacgat cgcaagtacc acgaacaacc tcactttatg 240
aacacaaaat tcttgtgtat taaggagagt aaatatgcga ataatgcaat taaaacatac 300
aagtacaacg catttacctt tataccaatg aatctgtttg agcagtttaa gagagcagcc 360
aatttatatt tcctggctct tcttatctta caggcagttc ctcaaatctc taccctggct 420
tggtacacca cactagtgcc cctgcttgtg gtgctgggcg tcactgcaat caaagacctg 480
gtggacgatg tggctcgcca taaaatggat aaggaaatca acaataggac gtgtgaagtc 540
attaaggatg gcaggttcaa agttgctaag tggaaagaaa ttcaagttgg agacgtcatt 600
cgtctgaaaa aaaatgattt tgttccagct gacattctcc tgctgtctag ctctgagcct 660
aacagcctct gctatgtgga aacagcagaa ctggatggag aaaccaattt aaaatttaag 720
atgtcacttg aaatcacaga ccagtacctc caaagagaag atacattggc tacatttgat 780
ggttttattg aatgtgaaga acccaataac agactagata agtttacagg aacactattt 840
tggagaaaca caagttttcc tttggatgct gataaaattt tgttacgtgg ctgtgtaatt 900
aggaacaccg atttctgcca cggcttagtc atttttgcag gtgctgacac taaaataatg 960
aagaatagtg ggaaaaccag atttaaaaga actaaaattg attacttgat gaactacatg 1020
gtttacacga tctttgttgt tcttattctg ctttctgctg gtcttgccat cggccatgct 1080
tattgggaag cacaggtggg caattcctct tggtacctct atgatggaga agacgataca 1140
ccctcctacc gtggattcct cattttctgg ggctatatca ttgttctcaa caccatggta 1200
cccatctctc tctatgtcag cgtggaagtg attcgtcttg gacagagtca cttcatcaac 1260
tgggacctgc aaatgtacta tgctgagaag gacacacccg caaaagctag aaccaccaca 1320
ctcaatgaac agctcgggca gatccattat atcttctctg ataagacggg gacactcaca 1380
caaaatatca tgacctttaa aaagtgctgt atcaacgggc agatatatgg ggaccatcgg 1440
gatgcctctc aacacaacca caacaaaata gagcaagttg attttagctg gaatacatat 1500
gctgatggga agcttgcatt ttatgaccac tatcttattg agcaaatcca gtcagggaaa 1560
gagccagaag tacgacagtt cttcttcttg ctcgcagttt gccacacagt catggtggat 1620
aggactgatg gtcagctcaa ctaccaggca gcctctcccg atgaaggtgc cctggtaaac 1680
gctgccagga actttggctt tgccttcctc gccaggaccc agaacaccat caccatcagt 1740
gaactgggca ctgaaaggac ttacaatgtt cttgccattt tggacttcaa cagtgaccgg 1800
aagcgaatgt ctatcattgt aagaacccca gaaggcaata tcaagcttta ctgtaaaggt 1860
gctgacactg ttatttatga acggttacat cgaatgaatc ctactaagca agaaacacag 1920
gatgccctgg atatctttgc aaatgaaact cttagaaccc tatgcctttg ctacaaggaa 1980
attgaagaaa aagaatttac agaatggaat aaaaagttta tggctgccag tgtggcctcc 2040
accaaccggg acgaagctct ggataaagta tatgaggaga ttgaaaaaga cttaattctc 2100
ctgggagcta cagctattga agacaagcta caggatggag ttccagaaac catttcaaaa 2160
cttgcaaaag ctgacattaa gatctgggtg cttactggag acaaaaagga aactgctgaa 2220
aatataggat ttgcttgtga acttctgact gaagacacca ccatctgcta tggggaggat 2280
attaattctc ttcttcatgc aaggatggaa aaccagagga atagaggtgg cgtctacgca 2340
aagtttgcac ctcctgtgca ggaatctttt tttccacccg gtggaaaccg tgccttaatc 2400
atcactggtt cttggttgaa tgaaattctt ctcgagaaaa agaccaagag aaataagatt 2460
ctgaagctga agttcccaag aacagaagaa gaaagacgga tgcggaccca aagtaaaagg 2520
aggctagaag ctaagaaaga gcagcggcag aaaaactttg tggacctggc ctgcgagtgc 2580
agcgcagtca tctgctgccg cgtcaccccc aagcagaagg ccatggtggt ggacctggtg 2640
aagaggtaca agaaagccat cacgctggcc atcggagatg gggccaatga cgtgaacatg 2700
atcaaaactg cccacattgg cgttggaata agtggacaag aaggaatgca agctgtcatg 2760
tcgagtgact attcctttgc tcagttccga tatctgcaga ggctactgct ggtgcatggc 2820
cgatggtctt acataaggat gtgcaagttc ctacgatact tcttttacaa aaactttgcc 2880
tttactttgg ttcatttctg gtactccttc ttcaatggct actctgcgca gactgcatac 2940
gaggattggt tcatcaccct ctacaacgtg ctgtacacca gcctgcccgt gctcctcatg 3000
gggctgctcg accaggatgt gagtgacaaa ctgagcctcc gattccctgg gttatacata 3060
gtgggacaaa gagacttact attcaactat aagagattct ttgtaagctt gttgcatggg 3120
gtcctaacat cgatgatcct cttcttcata cctcttggag cttatctgca aaccgtaggg 3180
caggatggag aggcaccttc cgactaccag tcttttgccg tcaccattgc ctctgctctt 3240
gtaataacag tcaatttcca gattggcttg gatacttctt attggacttt tgtgaatgct 3300
ttttcaattt ttggaagcat tgcactttat tttggcatca tgtttgactt tcatagtgct 3360
ggaatacatg ttctctttcc atctgcattt caatttacag gcacagcttc aaacgctctg 3420
agacagccat acatttggtt aactatcatc ctggctgttg ctgtgtgctt actacccgtc 3480
gttgccattc gattcctgtc aatgaccatc tggccatcag aaagtgataa gatccagaag 3540
catcgcaagc ggttgaaggc ggaggagcag tggcagcgac ggcagcaggt gttccgccgg 3600
ggcgtgtcaa cgcggcgctc ggcctacgcc ttctcgcacc agcggggcta cgcggacctc 3660
atctcctccg ggcgcagcat ccgcaagaag cgctcgccgc ttgatgccat cgtggcggat 3720
ggcaccgcgg agtacaggcg caccggggac agctga 3756
<210> 3
<211> 1321
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Met Ser Asp Ser Val Ile Leu Arg Ser Ile Lys Lys Phe Gly Glu Glu
1 5 10 15
Asn Asp Gly Phe Glu Ser Asp Lys Ser Tyr Asn Asn Asp Lys Lys Ser
20 25 30
Arg Leu Gln Asp Glu Lys Lys Gly Asp Gly Val Arg Val Gly Phe Phe
35 40 45
Gln Leu Phe Arg Phe Ser Ser Ser Thr Asp Ile Trp Leu Met Phe Val
50 55 60
Gly Ser Leu Cys Ala Phe Leu His Gly Ile Ala Gln Pro Gly Val Leu
65 70 75 80
Leu Ile Phe Gly Thr Met Thr Asp Val Phe Ile Asp Tyr Asp Val Glu
85 90 95
Leu Gln Glu Leu Gln Ile Pro Gly Lys Ala Cys Val Asn Asn Thr Ile
100 105 110
Val Trp Thr Asn Ser Ser Leu Asn Gln Asn Met Thr Asn Gly Thr Arg
115 120 125
Cys Gly Leu Leu Asn Ile Glu Ser Glu Met Ile Lys Phe Ala Ser Tyr
130 135 140
Tyr Ala Gly Ile Ala Val Ala Val Leu Ile Thr Gly Tyr Ile Gln Ile
145 150 155 160
Cys Phe Trp Val Ile Ala Ala Ala Arg Gln Ile Gln Lys Met Arg Lys
165 170 175
Phe Tyr Phe Arg Arg Ile Met Arg Met Glu Ile Gly Trp Phe Asp Cys
180 185 190
Asn Ser Val Gly Glu Leu Asn Thr Arg Phe Ser Asp Asp Ile Asn Lys
195 200 205
Ile Asn Asp Ala Ile Ala Asp Gln Met Ala Leu Phe Ile Gln Arg Met
210 215 220
Thr Ser Thr Ile Cys Gly Phe Leu Leu Gly Phe Phe Arg Gly Trp Lys
225 230 235 240
Leu Thr Leu Val Ile Ile Ser Val Ser Pro Leu Ile Gly Ile Gly Ala
245 250 255
Ala Thr Ile Gly Leu Ser Val Ser Lys Phe Thr Asp Tyr Glu Leu Lys
260 265 270
Ala Tyr Ala Lys Ala Gly Val Val Ala Asp Glu Val Ile Ser Ser Met
275 280 285
Arg Thr Val Ala Ala Phe Gly Gly Glu Lys Arg Glu Val Glu Arg Tyr
290 295 300
Glu Lys Asn Leu Val Phe Ala Gln Arg Trp Gly Ile Arg Lys Gly Ile
305 310 315 320
Val Met Gly Phe Phe Thr Gly Phe Val Trp Cys Leu Ile Phe Leu Cys
325 330 335
Tyr Ala Leu Ala Phe Trp Tyr Gly Ser Thr Leu Val Leu Asp Glu Gly
340 345 350
Glu Tyr Thr Pro Gly Thr Leu Val Gln Ile Phe Leu Ser Val Ile Val
355 360 365
Gly Ala Leu Asn Leu Gly Asn Ala Ser Pro Cys Leu Glu Ala Phe Ala
370 375 380
Thr Gly Arg Ala Ala Ala Thr Ser Ile Phe Glu Thr Ile Asp Arg Lys
385 390 395 400
Pro Ile Ile Asp Cys Met Ser Glu Asp Gly Tyr Lys Leu Asp Arg Ile
405 410 415
Lys Gly Glu Ile Glu Phe His Asn Val Thr Phe His Tyr Pro Ser Arg
420 425 430
Pro Glu Val Lys Ile Leu Asn Asp Leu Asn Met Val Ile Lys Pro Gly
435 440 445
Glu Met Thr Ala Leu Val Gly Pro Ser Gly Ala Gly Lys Ser Thr Ala
450 455 460
Leu Gln Leu Ile Gln Arg Phe Tyr Asp Pro Cys Glu Gly Met Val Thr
465 470 475 480
Val Asp Gly His Asp Ile Arg Ser Leu Asn Ile Gln Trp Leu Arg Asp
485 490 495
Gln Ile Gly Ile Val Glu Gln Glu Pro Val Leu Phe Ser Thr Thr Ile
500 505 510
Ala Glu Asn Ile Arg Tyr Gly Arg Glu Asp Ala Thr Met Glu Asp Ile
515 520 525
Val Gln Ala Ala Lys Glu Ala Asn Ala Tyr Asn Phe Ile Met Asp Leu
530 535 540
Pro Gln Gln Phe Asp Thr Leu Val Gly Glu Gly Gly Gly Gln Met Ser
545 550 555 560
Gly Gly Gln Lys Gln Arg Val Ala Ile Ala Arg Ala Leu Ile Arg Asn
565 570 575
Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Met Ala Thr Ser Ala Leu Asp Asn Glu
580 585 590
Ser Glu Ala Met Val Gln Glu Val Leu Ser Lys Ile Gln His Gly His
595 600 605
Thr Ile Ile Ser Val Ala His Arg Leu Ser Thr Val Arg Ala Ala Asp
610 615 620
Thr Ile Ile Gly Phe Glu His Gly Thr Ala Val Glu Arg Gly Thr His
625 630 635 640
Glu Glu Leu Leu Glu Arg Lys Gly Val Tyr Phe Thr Leu Val Thr Leu
645 650 655
Gln Ser Gln Gly Asn Gln Ala Leu Asn Glu Glu Asp Ile Lys Asp Ala
660 665 670
Thr Glu Asp Asp Met Leu Ala Arg Thr Phe Ser Arg Gly Ser Tyr Gln
675 680 685
Asp Ser Leu Arg Ala Ser Ile Arg Gln Arg Ser Lys Ser Gln Leu Ser
690 695 700
Tyr Leu Val His Glu Pro Pro Leu Ala Val Val Asp His Lys Ser Thr
705 710 715 720
Tyr Glu Glu Asp Arg Lys Asp Lys Asp Ile Pro Val Gln Glu Glu Val
725 730 735
Glu Pro Ala Pro Val Arg Arg Ile Leu Lys Phe Ser Ala Pro Glu Trp
740 745 750
Pro Tyr Met Leu Val Gly Ser Val Gly Ala Ala Val Asn Gly Thr Val
755 760 765
Thr Pro Leu Tyr Ala Phe Leu Phe Ser Gln Ile Leu Gly Thr Phe Ser
770 775 780
Ile Pro Asp Lys Glu Glu Gln Arg Ser Gln Ile Asn Gly Val Cys Leu
785 790 795 800
Leu Phe Val Ala Met Gly Cys Val Ser Leu Phe Thr Gln Phe Leu Gln
805 810 815
Gly Tyr Ala Phe Ala Lys Ser Gly Glu Leu Leu Thr Lys Arg Leu Arg
820 825 830
Lys Phe Gly Phe Arg Ala Met Leu Gly Gln Asp Ile Ala Trp Phe Asp
835 840 845
Asp Leu Arg Asn Ser Pro Gly Ala Leu Thr Thr Arg Leu Ala Thr Asp
850 855 860
Ala Ser Gln Val Gln Gly Ala Ala Gly Ser Gln Ile Gly Met Ile Val
865 870 875 880
Asn Ser Phe Thr Asn Val Thr Val Ala Met Ile Ile Ala Phe Ser Phe
885 890 895
Ser Trp Lys Leu Ser Leu Val Ile Leu Cys Phe Phe Pro Phe Leu Ala
900 905 910
Leu Ser Gly Ala Thr Gln Thr Arg Met Leu Thr Gly Phe Ala Ser Arg
915 920 925
Asp Lys Gln Ala Leu Glu Met Val Gly Gln Ile Thr Asn Glu Ala Leu
930 935 940
Ser Asn Ile Arg Thr Val Ala Gly Ile Gly Lys Glu Arg Arg Phe Ile
945 950 955 960
Glu Ala Leu Glu Thr Glu Leu Glu Lys Pro Phe Lys Thr Ala Ile Gln
965 970 975
Lys Ala Asn Ile Tyr Gly Phe Cys Phe Ala Phe Ala Gln Cys Ile Met
980 985 990
Phe Ile Ala Asn Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Gly Gly Tyr Leu Ile Ser
995 1000 1005
Asn Glu Gly Leu His Phe Ser Tyr Val Phe Arg Val Ile Ser Ala
1010 1015 1020
Val Val Leu Ser Ala Thr Ala Leu Gly Arg Ala Phe Ser Tyr Thr
1025 1030 1035
Pro Ser Tyr Ala Lys Ala Lys Ile Ser Ala Ala Arg Phe Phe Gln
1040 1045 1050
Leu Leu Asp Arg Gln Pro Pro Ile Ser Val Tyr Asn Thr Ala Gly
1055 1060 1065
Glu Lys Trp Asp Asn Phe Gln Gly Lys Ile Asp Phe Val Asp Cys
1070 1075 1080
Lys Phe Thr Tyr Pro Ser Arg Pro Asp Ser Gln Val Leu Asn Gly
1085 1090 1095
Leu Ser Val Ser Ile Ser Pro Gly Gln Thr Leu Ala Phe Val Gly
1100 1105 1110
Ser Ser Gly Cys Gly Lys Ser Thr Ser Ile Gln Leu Leu Glu Arg
1115 1120 1125
Phe Tyr Asp Pro Asp Gln Gly Lys Val Met Ile Asp Gly His Asp
1130 1135 1140
Ser Lys Lys Val Asn Val Gln Phe Leu Arg Ser Asn Ile Gly Ile
1145 1150 1155
Val Ser Gln Glu Pro Val Leu Phe Ala Cys Ser Ile Met Asp Asn
1160 1165 1170
Ile Lys Tyr Gly Asp Asn Thr Lys Glu Ile Pro Met Glu Arg Val
1175 1180 1185
Ile Ala Ala Ala Lys Gln Ala Gln Leu His Asp Phe Val Met Ser
1190 1195 1200
Leu Pro Glu Lys Tyr Glu Thr Asn Val Gly Ser Gln Gly Ser Gln
1205 1210 1215
Leu Ser Arg Gly Glu Lys Gln Arg Ile Ala Ile Ala Arg Ala Ile
1220 1225 1230
Val Arg Asp Pro Lys Ile Leu Leu Leu Asp Glu Ala Thr Ser Ala
1235 1240 1245
Leu Asp Thr Glu Ser Glu Lys Thr Val Gln Val Ala Leu Asp Lys
1250 1255 1260
Ala Arg Glu Gly Arg Thr Cys Ile Val Ile Ala His Arg Leu Ser
1265 1270 1275
Thr Ile Gln Asn Ala Asp Ile Ile Ala Val Met Ala Gln Gly Val
1280 1285 1290
Val Ile Glu Lys Gly Thr His Glu Glu Leu Met Ala Gln Lys Gly
1295 1300 1305
Ala Tyr Tyr Lys Leu Val Thr Thr Gly Ser Pro Ile Ser
1310 1315 1320
<210> 4
<211> 3966
<212> DNA
<213> 智人
<400> 4
atgtctgact cagtaattct tcgaagtata aagaaatttg gagaggagaa tgatggtttt 60
gagtcagata aatcatataa taatgataag aaatcaaggt tacaagatga gaagaaaggt 120
gatggcgtta gagttggctt ctttcaattg tttcggtttt cttcatcaac tgacatttgg 180
ctgatgtttg tgggaagttt gtgtgcattt ctccatggaa tagcccagcc aggcgtgcta 240
ctcatttttg gcacaatgac agatgttttt attgactacg acgttgagtt acaagaactc 300
cagattccag gaaaagcatg tgtgaataac accattgtat ggactaacag ttccctcaac 360
cagaacatga caaatggaac acgttgtggg ttgctgaaca tcgagagcga aatgatcaaa 420
tttgccagtt actatgctgg aattgctgtc gcagtactta tcacaggata tattcaaata 480
tgcttttggg tcattgccgc agctcgtcag atacagaaaa tgagaaaatt ttactttagg 540
agaataatga gaatggaaat agggtggttt gactgcaatt cagtggggga gctgaataca 600
agattctctg atgatattaa taaaatcaat gatgccatag ctgaccaaat ggcccttttc 660
attcagcgca tgacctcgac catctgtggt ttcctgttgg gatttttcag gggttggaaa 720
ctgaccttgg ttattatttc tgtcagccct ctcattggga ttggagcagc caccattggt 780
ctgagtgtgt ccaagtttac ggactatgag ctgaaggcct atgccaaagc aggggtggtg 840
gctgatgaag tcatttcatc aatgagaaca gtggctgctt ttggtggtga gaaaagagag 900
gttgaaaggt atgagaaaaa tcttgtgttc gcccagcgtt ggggaattag aaaaggaata 960
gtgatgggat tctttactgg attcgtgtgg tgtctcatct ttttgtgtta tgcactggcc 1020
ttctggtacg gctccacact tgtcctggat gaaggagaat atacaccagg aacccttgtc 1080
cagattttcc tcagtgtcat agtaggagct ttaaatcttg gcaatgcctc tccttgtttg 1140
gaagcctttg caactggacg tgcagcagcc accagcattt ttgagacaat agacaggaaa 1200
cccatcattg actgcatgtc agaagatggt tacaagttgg atcgaatcaa gggtgaaatt 1260
gaattccata atgtgacctt ccattatcct tccagaccag aggtgaagat tctaaatgac 1320
ctcaacatgg tcattaaacc aggggaaatg acagctctgg taggacccag tggagctgga 1380
aaaagtacag cactgcaact cattcagcga ttctatgacc cctgtgaagg aatggtgacc 1440
gtggatggcc atgacattcg ctctcttaac attcagtggc ttagagatca gattgggata 1500
gtggagcaag agccagttct gttctctacc accattgcag aaaatattcg ctatggcaga 1560
gaagatgcaa caatggaaga catagtccaa gctgccaagg aggccaatgc ctacaacttc 1620
atcatggacc tgccacagca atttgacacc cttgttggag aaggaggagg ccagatgagt 1680
ggtggccaga aacaaagggt agctatcgcc agagccctca tccgaaatcc caagattctg 1740
cttttggaca tggccacctc agctctggac aatgagagtg aagccatggt gcaagaagtg 1800
ctgagtaaga ttcagcatgg gcacacaatc atttcagttg ctcatcgctt gtctacggtc 1860
agagctgcag ataccatcat tggttttgaa catggcactg cagtggaaag agggacccat 1920
gaagaattac tggaaaggaa aggtgtttac ttcactctag tgactttgca aagccaggga 1980
aatcaagctc ttaatgaaga ggacataaag gatgcaactg aagatgacat gcttgcgagg 2040
acctttagca gagggagcta ccaggatagt ttaagggctt ccatccggca acgctccaag 2100
tctcagcttt cttacctggt gcacgaacct ccattagctg ttgtagatca taagtctacc 2160
tatgaagaag atagaaagga caaggacatt cctgtgcagg aagaagttga acctgcccca 2220
gttaggagga ttctgaaatt cagtgctcca gaatggccct acatgctggt agggtctgtg 2280
ggtgcagctg tgaacgggac agtcacaccc ttgtatgcct ttttattcag ccagattctt 2340
gggacttttt caattcctga taaagaggaa caaaggtcac agatcaatgg tgtgtgccta 2400
ctttttgtag caatgggctg tgtatctctt ttcacccaat ttctacaggg atatgccttt 2460
gctaaatctg gggagctcct aacaaaaagg ctacgtaaat ttggtttcag ggcaatgctg 2520
gggcaagata ttgcctggtt tgatgacctc agaaatagcc ctggagcatt gacaacaaga 2580
cttgctacag atgcttccca agttcaaggg gctgccggct ctcagatcgg gatgatagtc 2640
aattccttca ctaacgtcac tgtggccatg atcattgcct tctcctttag ctggaagctg 2700
agcctggtca tcttgtgctt cttccccttc ttggctttat caggagccac acagaccagg 2760
atgttgacag gatttgcctc tcgagataag caggccctgg agatggtggg acagattaca 2820
aatgaagccc tcagtaacat ccgcactgtt gctggaattg gaaaggagag gcggttcatt 2880
gaagcacttg agactgagct ggagaagccc ttcaagacag ccattcagaa agccaatatt 2940
tacggattct gctttgcctt tgcccagtgc atcatgttta ttgcgaattc tgcttcctac 3000
agatatggag gttacttaat ctccaatgag gggctccatt tcagctatgt gttcagggtg 3060
atctctgcag ttgtactgag tgcaacagct cttggaagag ccttctctta caccccaagt 3120
tatgcaaaag ctaaaatatc agctgcacgc ttttttcaac tgctggaccg acaaccccca 3180
atcagtgtat acaatactgc aggtgaaaaa tgggacaact tccaggggaa gattgatttt 3240
gttgattgta aatttacata tccttctcga cctgactcgc aagttctgaa tggtctctca 3300
gtgtcgatta gtccagggca gacactggcg tttgttggga gcagtggatg tggcaaaagc 3360
actagcattc agctgttgga acgtttctat gatcctgatc aagggaaggt gatgatagat 3420
ggtcatgaca gcaaaaaagt aaatgtccag ttcctccgct caaacattgg aattgtttcc 3480
caggaaccag tgttgtttgc ctgtagcata atggacaata tcaagtatgg agacaacacc 3540
aaagaaattc ccatggaaag agtcatagca gctgcaaaac aggctcagct gcatgatttt 3600
gtcatgtcac tcccagagaa atatgaaact aacgttgggt cccaggggtc tcaactctct 3660
agaggggaga aacaacgcat tgctattgct cgggccattg tacgagatcc taaaatcttg 3720
ctactagatg aagccacttc tgccttagac acagaaagtg aaaagacggt gcaggttgct 3780
ctagacaaag ccagagaggg tcggacctgc attgtcattg cccatcgctt gtccaccatc 3840
cagaacgcgg atatcattgc tgtcatggca cagggggtgg tgattgaaaa ggggacccat 3900
gaagaactga tggcccaaaa aggagcctac tacaaactag tcaccactgg atcccccatc 3960
agttga 3966
- 奥德昔巴特的药物制剂
- 奥德昔巴特的结晶修饰物