作为用于治疗α-1-抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)的α-1-抗胰蛋白酶调节剂的1H-吡唑并4,3-g异喹啉和1H-吡唑并4,3-g喹啉衍生物

本申请要求2020年4月3日提交的美国临时申请号63/004,719的优先权益，所述申请的内容以引用方式整体并入本文。

本公开提供了能够调节α-1抗胰蛋白酶(AAT)活性的化合物和通过施用一种或多种此类化合物来治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)的方法。

AATD是特征在于AAT的低循环水平的遗传疾病。虽然存在AATD治疗方法，但目前还没有治愈方法。AAT主要在肝细胞中产生并分泌到血液中，但它也由其他细胞类型产生，包括肺上皮细胞和某些白细胞。AAT抑制炎症细胞分泌的若干种丝氨酸蛋白酶(最显著的是中性粒细胞弹性蛋白酶[NE]、蛋白酶3和组织蛋白酶G)，从而保护器官诸如肺免受蛋白酶诱导的损伤，特别是在炎症期间。

最常见的与AATD相关的突变包括编码AAT蛋白的SERPINA1基因中的谷氨酸被赖氨酸取代(E342K)。这种突变被称为Z突变或Z等位基因，导致翻译的蛋白质错误折叠，因此不会分泌到血液中，并且可以在生成细胞内聚合。因此，对于Z等位基因(PiZZ)纯合的个体中的循环AAT水平显著降低；仅大约15％的突变体Z-AAT蛋白正确折叠并由细胞分泌。Z突变的另一个后果是分泌的Z-AAT与野生型蛋白相比具有降低的活性，为正常抗蛋白酶活性的40％至80％(美国胸科协会/欧洲呼吸协会，Am J Respir Crit Care Med.2003；168(7):818-900；和Ogushi等人J Clin Invest.1987；80(5):1366-74)。

肝细胞内聚合的Z-AAT蛋白的积聚导致功能获得性细胞毒性，这可导致12％患者在以后的生活中发生肝硬化或肝癌以及新生儿肝病。这种积聚可能会自发消退，但对少数儿童来说是致命的。循环AAT的缺乏导致蛋白酶活性不受调节，随着时间的推移降解肺组织，从而导致一种慢性阻塞性肺病(COPD)的形式，即肺气肿。这种影响在PiZZ个体中是严重的，并且通常在中年表现出来，从而导致生活质量下降和寿命缩短(平均68岁)(Tanash等人Int J Chron Obstruct Pulm Dis.2016；11:1663-9)。所述影响在吸烟的PiZZ个体身上更明显，导致寿命进一步缩短(58岁)。(Piitulainen和Tanash,COPD 2015；12(1):36-41)。PiZZ个体占患有临床相关AATD肺病的患者的大多数。因此，需要用于AATD的额外有效治疗。

较温和形式的AATD与SZ基因型有关，其中Z等位基因与S等位基因结合。S等位基因与循环AAT水平的降低有关，但不会引起肝细胞的细胞毒性。结果是临床上显著的肺病，而不是肝病。(Fregonese和Stolk,Orphanet J Rare Dis.2008；33:16)。与ZZ基因型一样，SZ基因型受试者的循环AAT缺乏导致蛋白酶活性不受调节，随着时间的推移降解肺组织，并可导致肺气肿，特别是在吸烟者中。

对于患有或表现出发展明显肺部或肝脏疾病的迹象的AAT缺陷个体，目前的护理标准是强化疗法或蛋白质替代疗法。强化疗法包括施用从汇集的供体血浆中纯化的人AAT蛋白浓缩物，以增强缺失的AAT。尽管已显示输注血浆蛋白能提高存活率或减慢肺气肿进展速度，但在具有挑战性的状况下，例如在活动性肺部感染期间，强化疗法通常是不够的。类似地，尽管蛋白质替代疗法在减慢疾病进展方面显示出前景，但强化疗法并不能恢复患者AAT的正常生理调节，并且其疗效难以证明。此外，强化疗法需要每周进行治疗随访，并且强化疗法不能解决由Z等位基因的毒性功能获得性驱动的肝脏疾病。因此，持续需要新的且更有效的AATD治疗。

本公开的一个方面提供了式I的化合物：

或其互变异构体、所述化合物或互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐，其中：

Z

V

W

当W

当W

当W

当W

(h)为双键，不同之处在于当W

R

环A为C

R

R

R

X

R

T不存在或为键，或选自-O-、-OCH

Y选自C

R

或替代地，当R

R

p和q各自独立地为选自1和2的整数；

环B为C

R

R

R

-OC

R

R

其中R

其中R

其中R

其中R

其中R

k和m各自独立地为选自0、1、2、3、4和5的整数；并且

n是选自0、1和2的整数。

本公开的其他方面提供了本文所公开的式II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f、VIIIa-c的化合物和化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物和药学上可接受的盐。

式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物是AAT活性的调节剂。在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物、互变异构体或氘化衍生物的药学上可接受的盐当在AAT功能测定中测试时，具有2.0μM或更小的EC

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物、互变异构体或氘化衍生物的药学上可接受的盐当在Z-AAT弹性蛋白酶活性测定中测试时，具有5.0μM或更小的IC

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物、互变异构体或氘化衍生物的药学上可接受的盐当在AAT功能测定中测试时具有2.0μM或更小的EC

在一些实施方案中，提供了式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物、互变异构体或氘化衍生物的药学上可接受的盐以用于治疗AATD。

在本公开的一个方面，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f、VIIIa-c的化合物和化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐可用于治疗AATD。

在一些实施方案中，公开提供了药物组合物，其包含至少一种选自以下的化合物：式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。在具体实施方案中，所述药物组合物可以包含选自以下的化合物：化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。这些组合物可还包含至少一种额外活性药物成分和/或至少一种载体。

本公开的另一方面提供了治疗AATD的方法，其包括向有需要的受试者施用至少一种选自以下的化合物：式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐，或者包含所述至少一种化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐的药物组合物。在具体实施方案中，所述方法包括施用选自以下的化合物：化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述治疗方法包括将至少一种额外活性剂与至少一种选自式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物以同一药物组合物的形式，或者以单独组合物的形式向有需要的受试者施用。在具体实施方案中，所述方法包括将选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物与至少一种额外活性剂以同一药物组合物或者单独组合物的形式施用。在一些实施方案中，需要治疗的受试者携带ZZ突变。在一些实施方案中，需要治疗的受试者携带SZ突变。

还提供了调节AAT的方法，其包括向有需要的受试者施用至少一种选自以下的化合物：式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐，或者包含所述至少一种化合物、互变异构体、氘化衍生物或盐的药物组合物。在具体实施方案中，所述调节AAT的方法包括施用至少一种选自以下的化合物：化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐，或者包含所述至少一种化合物、互变异构体、氘化衍生物或盐的药物组合物。

还提供了用于疗法的式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物的氘化衍生物和互变异构体以及前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，提供了用于疗法的选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物。

还提供了用于疗法的药物组合物，其包含式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物的氘化衍生物和互变异构体或前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，提供了用于疗法的药物组合物，其包含选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物。

如本文所用，术语“AAT”意指α-1抗胰蛋白酶或其突变，包括但不限于AAT基因突变，诸如Z突变。如本文所用，“Z-AAT”意指具有Z突变的AAT突变体。

如本文所用，“突变”可以是指SERPINA1基因(编码AAT的基因)中的突变或基因序列改变对AAT蛋白的影响。“SERPINA1基因突变”是指SERPINA1基因的突变，并且“AAT蛋白突变”是指产生AAT蛋白的氨基酸序列的变化的突变。基因缺陷或突变或基因中的核苷酸的变化通常产生从此基因翻译的AAT蛋白的突变。

如本文所用，对于特定基因突变为“纯合”的患者在每个等位基因上具有相同的突变。

如本文所用，具有PiZZ基因型的患者是AAT蛋白中对于Z突变为纯合的患者。

如本文所用，术语“AATD”意指α-1抗胰蛋白酶缺乏症，这是特征在于低AAT循环水平的遗传病症。

术语“化合物”，当指本公开的化合物时，是指具有相同化学结构的分子的集合，除非另外指明为立体异构体的集合(例如，外消旋体的集合、顺式/反式立体异构体的集合或(E)和(Z)立体异构体的集合)，除了在分子的组成原子之间可能存在同位素差异。因此，本领域技术人员应清楚，由含有指示的氘原子的特定化学结构表示的化合物还将含有较少量的在该结构中的一个或多个指定氘位置处具有氢原子的同位素体。本公开的化合物中此类同位素体的相对量将取决于许多因素，包括用于制备化合物的试剂的同位素纯度和用于制备化合物的各种合成步骤中同位素的并入效率。然而，如上文所阐述，全部此类同位素体的相对量将小于化合物的49.9％。在其他实施方案中，此类同位素体全部的相对量将为化合物的小于47.5％、小于40％、小于32.5％、小于25％、小于17.5％、小于10％、小于5％、小于3％、小于1％或小于0.5％。

本公开的化合物可以任选地被一个或多个取代基取代。应当理解，短语“任选被取代”与短语“取代或未取代的”可互换使用一般来讲，术语“取代的”，无论前面是否有术语“任选地”，都是指用特定取代基的基团置换给定结构中的氢基团。除非另外指示，否则“任选地被取代”的基团可在该基团的每个可取代位置处具有取代基，并且当任何给定结构中的多于一个位置可以被选自指定基团的多于一个取代基取代时，在每个位置处的取代基可以相同或不同。本公开所设想的取代基的组合是导致形成稳定或化学上可行的化合物的取代基的组合。

术语“同位素体”是指化学结构仅在其同位素组成上不同于本公开的特定化合物的物质。另外，除非另有说明，否则本文描绘的结构还意指包括仅在存在一个或多个同位素富集的原子的情况下不同的化合物。例如，除了用氘或氚替换氢或用

除非另有说明，否则本文绘示的结构还意在包括结构的所有异构形式，例如外消旋混合物、顺式/反式异构体、几何(或构象)异构体，如(Z)和(E)双键异构体，以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的几何和构象混合物在本公开的范围内。除非另有说明，否则本公开的化合物的所有互变异构形式都在本公开的范围内。

如本文所用，术语“互变异构体”是指一种化合物的两种或多种异构体中的一种，它们一起以平衡状态存在，并且容易通过原子或基团在分子内迁移而互换。

“立体异构体”指对映异构体和非对映异构体两者。

如本文所使用，“氘化衍生物”是指具有与参考化合物相同的化学结构但一个或多个氢原子被氘原子(“D”)置换的化合物。将认识到，根据合成中使用的化学材料的来源，在合成的化合物中存在天然同位素丰度的一些变化。尽管有这种变化，但天然丰富的稳定氢同位素的浓度与本文所述的氘化衍生物的稳定同位素取代度相比是很小的且无关紧要的。因此，除非另有说明，否则当提及本公开的化合物的“氘化衍生物”时，至少一个氢被远高于其天然同位素丰度(通常为约0.015％)的氘取代。在一些实施方案中，本公开的氘化衍生物对于每个氘原子具有至少3500(在每个指定氘处52.5％氘掺入)、至少4500(67.5％氘掺入)、至少5000(75％氘掺入)、至少5500(82.5％氘掺入)、至少6000(90％氘掺入)、至少6333.3(95％氘掺入、至少6466.7(97％氘掺入或至少6600(99％氘掺入)的同位素富集因子。

如本文所使用，术语“同位素富集因子”意指指定同位素之同位素丰度与天然丰度之间的比率。

如本文所用，术语“烷基”意指直链(即直链或无支链)或支链、取代或未取代的烃链，其是完全饱和的或可含有一个或多个饱和单元，但不是完全芳族的。除非另有说明，否则烷基含有1-12个烷基碳原子。在一些实施方案中，烷基含有1-10个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，烷基含有1-8个脂肪族碳原子。在其他实施方案中，烷基含有1-6个烷基碳原子，在其他实施方案中，烷基含有1-4个烷基碳原子，并且在其他实施方案中，烷基含有1-3个烷基碳原子。

如本文所用，术语"杂烷基"是指其中一个或两个碳原子独立地被氧、硫、氮、磷或硅中的一个或多个取代的脂族基团。杂烷基可以是取代的或未取代的、支链的或无支链的。

如本文所用，术语“烯基”意指含有一个或多个碳碳双键的直链(即直链或无支链)、支链、取代或未取代的烃链。

术语“环烷基”、“碳环”和“环状烷基”是指稠合、螺环、单环或桥接的单环C

本文所用的术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基”或“杂环(heterocyclic)”是指非芳族的单环、双环或三环、螺环、桥接或稠合的环系统，其中一个或多个环成员是杂原子。在一些实施方案中"杂环(heterocycle)"、“杂环基”或“杂环(heterocyclic)”基团具有3至14个环成员，其中一个或多个环成员是独立地选自氧、硫、氮、磷和硅的杂原子，并且系统中的每个环含有3至9个环成员。在一些实施方案中，杂环基含有3至12个环成员原子。在一些实施方案中，杂环基含有3至8个环成员原子。在一些实施方案中，杂环基含有3至6个环成员原子。

术语"杂原子"意指氧、硫、氮、磷或硅中的一或多者(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化形式；任何碱性氮的季铵化形式；或杂环的可取代氮，例如N(如3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如吡咯烷基中)或NR

如本文所用，术语“烷氧基”是指如前定义的烷基，其中烷基的一个碳分别被氧(“烷氧基”)原子置换，条件是氧原子连接在两个碳原子之间。“环状烷氧基”是指含有至少一个烷氧基但不是芳族的单环、稠合、螺环、双环、桥接双环、三环或桥接三环烃。环状烷氧基的非限制性实例包括四氢吡喃基、四氢呋喃基、氧杂环丁烷基、8-氧杂双环[3.2.1]辛烷基和氧杂环庚烷基。

术语“卤代烷基”和“卤代烷氧基”是指视情况而定被一个或多个卤素原子取代的烷基或烷氧基。术语"卤素"或意指F、Cl、Br或I。在一些实施方案中，卤素选自F、Cl和Br。卤代烷基的实例包括-CHF

如本文所用，“＝O”是指氧代基团。

如本文所用，“氰基”或“腈”基团是指-C≡N。

如本文所用，“羟基”是指-OH。

如本文所用，“芳香基团”或“芳香环”是指含有共轭平面环系统的化学基团，所述系统具有由[4n+2]p轨道电子组成的离域π电子轨道，其中n是0至6的整数。芳基的非限制性实例包括芳基和杂芳基。

术语“芳基”是指具有总共5至14个环成员的单环、双环和三环系统，其中所述系统中至少一个环是芳族的，并且其中所述系统中每个环含有3至7个环成员。在一些实施方案中，芳基含有6或10个碳原子。芳基的非限制性实例是苯环。

术语“杂芳基”是指具有总共5至14个环成员的单环、双环和三环系统，其中所述系统中至少一个环是芳族的，所述系统中至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中所述系统中每个环含有3至7个环成员。在一些实施方案中，杂芳基含有6或10个环原子。

含氮基团如胺基的有用保护基的实例包括例如氨基甲酸叔丁酯(Boc)、苄基(Bn)、四氢吡喃基(THP)、氨基甲酸9-芴基甲酯(Fmoc)、氨基甲酸苄酯(Cbz)、乙酰胺、三氟乙酰胺、三苯基甲胺、亚苄基胺和对甲苯磺酰胺。添加(通常称为“保护”的过程)和除去(通常称为“去保护”的过程)此类胺保护基团的方法为本领域熟知的，并且可以在例如P.J.Kocienski,Protecting Groups,Thieme,1994中获得，其以引用的方式整体并入本文，并且在Greene和Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版(John Wiley&Sons,New York,1999)中获得。

可用于本公开的合适溶剂的实例包括但不限于水、甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、二氯甲烷或“甲叉二氯”(CH

可用于本公开的合适碱的实例包括但不限于1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、叔丁醇钾(KOtBu)、碳酸钾(K

本公开包括所公开的化合物的药学上可接受的盐。化合物的盐在酸与化合物的碱性基团如氨基官能团，或碱与化合物的酸性基团如羧基官能团之间形成。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合与人类和其他哺乳动物的组织接触，而没有过度的毒性、刺激、过敏反应等，并且与合理的益处/风险比相称的组分。“药学上可接受的盐”意指在施用于接受者时能够直接或间接提供本公开的化合物的任何无毒盐。合适的药学上可接受的盐是例如S.M.Berge等人J.PharmaceuticalSciences,1977,66,1-19中所公开的那些盐。

通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸，例如二硫化氢、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸，以及有机酸，例如对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、二酒石酸、抗坏血酸、马来酸、苯磺酸、富马酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、甲酸、谷氨酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、乳酸、草酸、对溴苯磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸和乙酸，以及相关无机酸和有机酸。因此，此类药学上可接受的盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、癸酸盐、庚酸盐、丙酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1,4-二酸盐、己炔-1,6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、对苯二酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、β-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙烷磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐和其他盐。在一些实施方案中，药学上可接受的酸加成盐包括与无机酸诸如盐酸和氢溴酸形成的那些盐，以及与有机酸诸如马来酸形成的那些盐。

衍生自适宜的碱的药学上可接受的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N

术语“患者”和“受试者”可互换使用并且指包括人的动物。

术语“有效剂量”和“有效量”在本文中可互换使用并且是指产生施用化合物所期望的效果(例如，改善AATD或AATD症状、减轻AATD或AATD症状的严重性和/或降低AATD或AATD症状的发作率或发病率)的化合物的量。有效剂量的确切量将取决于治疗目的，并且将由本领域技术人员使用已知技术确定(参见例如Lloyd(1999)The Art,Science andTechnology of Pharmaceutical Compounding)。

如本文所用，术语“治疗”及其同源词是指改善受试者的AATD或其症状、延迟受试者的AATD或其症状的发作、或减轻受试者的AATD或其症状的严重性。如本文所用，“治疗”及其同源词包括但不限于：改善肝脏和/或脾脏功能、减轻黄疸、改善肺功能、减轻肺部疾病和/或肺部恶化(例如肺气肿)、减轻皮肤疾病(例如坏死性脂膜炎)、增加儿童生长、改善食欲和减轻疲劳。可以根据本领域已知或随后开发的方法和技术容易地评估这些症状中任一者的改善或其严重程度的减轻。

当与组合物或剂型的成分的剂量、量或重量百分比结合使用时，术语“约”和“大约”包括本领域的普通技术人员认为可提供与自指定剂量、量或重量百分比所获得的药理学作用等效的药理学作用的指定剂量、量或重量百分比的值、或该剂量、量或重量百分比的范围。通常，术语“约”是指给定值的高达10％、高达5％或高达2％的变化。

式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐中的任一种或多种可以每日一次、每日两次或每日三次地施用，以用于治疗AATD。在具体实施方案中，任何一种或多种化合物选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，至少一种选自式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天施用一次。在具体实施方案中，选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天施用一次。在一些实施方案中，至少一种选自式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天施用两次。在具体实施方案中，选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天施用两次。在一些实施方案中，至少一种选自式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天施用三次。在具体实施方案中，选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天施用三次。

式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐中的任一种或多种可以与AAT强化疗法或AAT替代疗法组合施用用于治疗AATD。在具体实施方案中，任何一种或多种化合物选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

如本文所用，“AAT强化疗法”是指使用来自健康人供体血浆的α-1抗胰蛋白酶蛋白(AAT)来增强(增加)在血液中循环的α-1抗胰蛋白酶水平。“AAT替代疗法”是指施用重组AAT。

应当理解，本文提及的使用一种或多种化合物(例如式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物)，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物的药学上可接受的盐)的治疗方法(例如治疗AATD的方法)也应解释为对以下的提及：

-一种或多种化合物(例如，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物)，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物的药学上可接受的盐)，用于治疗例如AATD的方法中；和/或

-一种或多种化合物(例如，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物)，以及这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及这些化合物的药学上可接受的盐)在制备用于治疗例如AATD的药物中的用途。

示例实施方案：

本公开的一些非限制性实施方案包括：

1.一种由式I表示的化合物

或其互变异构体、所述化合物或互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐，其中：

Z

V

W

当W

当W

当W

当W

(h)为双键，不同之处在于当W

R

环A为C

R

-C(＝O)OR

R

-OR

R

X

R

T不存在或为键，或选自-O-、-OCH

Y选自C

R

或替代地，当R

R

p和q各自独立地为选自1和2的整数；

环B为C

R

R

R

-OC

R

R

其中R

其中R

其中R

其中R

其中R

k和m各自独立地为选自0、1、2、3、4和5的整数；并且

n是选自0、1和2的整数。

2.根据实施方案1所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中Z

3.根据实施方案1或实施方案2所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式II表示

其中：

R

R

R

n是选自0和1的整数；

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

4.根据实施方案1至3中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式IIIa、IIIb、IIIc或IIId表示

其中：

环A任选地被R

R

R

R

X

R

R

R

n是选自0和1的整数；

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

5.根据实施方案1至4中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式IVa、IVb或IVc表示

其中X

6.根据实施方案1至5中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式Va、Vb或Vc表示：

其中：

R

R

R

T不存在，或者选自-O-、-OCH

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

7.根据实施方案1至6中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A任选地被R

8.根据实施方案1至7中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A任选地被R

9.根据实施方案1至8中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A任选地被R

10.根据实施方案1至9中任一项的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中当R

11.根据实施方案1至10中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中

R

环B任选地被R

12.根据实施方案1至11中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中

R

环B任选地被R

13.根据实施方案1至12中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

R

R

R

R

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

14.根据实施方案1至13中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

R

R

R

R

-CH

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

15.根据实施方案1至14中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

-COOH、-C(＝O)CH(OH)CH

16.根据实施方案1至15中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中至少一次出现的R

17.根据实施方案1至16中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式VIa、VIb或VIc表示

其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

18.根据实施方案1至17中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

R

R

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

19.根据实施方案1至18中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

20.根据实施方案1至19中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式VIIa、VIIb、VIIc、VIId、VIIe或VIIf表示

其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

21.根据实施方案1至5中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其由式VIIIa、VIIIb或VIIIc表示

其中：

环A任选地被R

T不存在，或者选自-O-、-NH-和-CH

Z为C

R

-CH

R

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如实施方案1至5中的任一项所定义。

22.根据实施方案1至5和21中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中

-CH

-OCH(CH

23.根据实施方案1至5、21和22中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A任选地被R

24.根据实施方案1至5和21至23中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A任选地被R

25.根据实施方案1至5和21至23中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A选自

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如实施方案1至5和21至23中的任一项所定义。

26.根据实施方案1至5和21至23中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中环A选自

27.根据实施方案1至5和21至26中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

R

R

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如实施方案1至5和21至26中的任一项所定义。

28.根据实施方案1至5和21至26中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

R

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如实施方案1至5和21至26中的任一项所定义。

29.根据实施方案1至5和21至26中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

30.根据实施方案1至5和21至26中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

31.根据实施方案1至5和21至26中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

32.根据实施方案1至5和21至31中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

33.根据实施方案1至5和21-31中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中R

34.根据实施方案1至32中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中：

X

R

k是选自0、1和2的整数。

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如前述实施方案中的任一项所定义。

35.根据实施方案1至34中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自表I的化合物。

36.一种药物组合物，其包含根据实施方案1至35中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。

37.一种调节受试者中α-1抗胰蛋白酶(AAT)活性的方法，其包括施用根据实施方案1至35中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，或根据实施方案36所述的药物组合物。

38.根据实施方案1至35中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐在制备用于调节AAT活性的药物中的用途。

39.根据实施方案36所述的药物组合物，其用于调节AAT活性。

40.一种治疗受试者的α-1抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)的方法，其包括施用根据实施方案1至35中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐，或根据实施方案36所述的药物组合物。

41.根据实施方案1至35中任一项所述的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐在制备用于治疗AATD的药物中的用途。

42.根据实施方案36所述的药物组合物，其用于治疗AATD。

在一些实施方案中，10mg至1,500mg、100mg至1,800mg、100mg至500mg、200mg至600mg、200mg至800mg、400mg至2,000mg、400mg至2,500mg或400mg至600mg的式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐每天一次、每天两次或每天三次地施用。在具体实施方案中，10mg至1,500mg、100mg至1,800mg、100mg至500mg、200mg至600mg、200mg至800mg、400mg至2,000mg或400mg至600mg的选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物每天一次、每天两次或每天三次地施用。

本领域普通技术人员将认识到，当公开化合物的量时，化合物的药学上可接受的盐形式的相关量是等效于所述化合物的游离碱浓度的量。注意，本文公开的化合物、互变异构体、氘化衍生物和药学上可接受的盐的公开量是基于参考化合物的游离碱形式。例如，“10mg至少一种选自式(I)化合物及其药学上可接受的盐的化合物”包括10mg式(I)化合物和相当于10mg式(I)化合物的式(I)化合物的药学上可接受的盐的浓度。

II.

本公开的一些实施方案提供了由式I表示的化合物:

其互变异构体、所述化合物或互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐，其中：

Z

V

W

当W

当W

当W

当W

(h)为双键，不同之处在于当W

R

环A为C

R

R

R

X

R

T不存在或为键，或选自-O-、-OCH

Y选自C

R

或替代地，当R

R

p和q各自独立地为选自1和2的整数；

环B为C

R

R

R

-OC

R

R

其中R

其中R

其中R

其中R

其中R

k和m各自独立地为选自0、1、2、3、4和5的整数；并且

n是选自0、1和2的整数。

在一些实施方案中，在式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，Z

在一些实施方案中，在式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，R

在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式II的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中：

R

R

R

n是选自0和1的整数；

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如针对式I所定义。

在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式IIIa、式IIIb、式IIIc或式IIId(“式IIIa-d”)的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中：

环A任选地被R

R

R

R

X

R

R

R

n是选自0和1的整数；

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如针对式I或式II所定义。

在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式IVa、式IVb或式IVc(“式IVa-c”)的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中X

在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式Va、式Vb或式Vc(“式Va c”)的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中：

R

R

R

T不存在，或者选自-O-、-OCH

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如针对式I、式II、式IIIa-d或式IVa-c所定义。

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，环A任选地被R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，环A任选地被R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，环A任选地被R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，R

环B任选地被R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，R

环B任选地被R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，R

环B任选地被R

在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c的一些实施方案中，对于在所述化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中每次出现时，R

R

R

R

R

在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c的一些实施方案中，对于在所述化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中每次出现时，R

R

R

R

R

-CH

在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c的一些实施方案中，对于在所述化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中每次出现时，R

在式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c的一些实施方案中，对于在所述化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中每次出现时，R

在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式VIa、式VIb或式VIc(“式VIa-c”)的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中本文未具体定义的所有其他变量如式I、II、IIIa-d、IVa-c和Va-c中的任一者所定义。

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c和VIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中的R

R

R

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c和VIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中的R

在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式VIIa、式VIIb、式VIIc、式VIId、式VIIe或式VIIf(“式VIIa-f”)的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中本文未具体定义的所有其他变量如式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c和VIa-c中的任一者所定义。

:在一些实施方案中，式I的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐是式VIIIa、式VIIIb或式VIIIc(“式VIIIa-c”)的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐：

其中：

环A任选地被R

T不存在，或者选自-O-、-NH-和-CH

Z为C

R

-CH

R

并且其中本文未具体定义的所有其他变量如式I、II、IIIa-d和IVa-c中的任一者所定义。

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c或VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中的

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c或VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，环A是任选地被R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c或VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，环A是

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c或VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中的R

R

R

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c或VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中的R

R

在一些实施方案中，在式I、II、IIIa-d、IVa-c或VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐中，R

在式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐的一些实施方案中：

X

R

k是选自0、1和2的整数。

在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、互变异构体、氘化衍生物或药学上可接受的盐选自如下表I所述的化合物1-262。

表I.化合物1-262

公开的一些实施方案包括化合物1-262或式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物的衍生物。在一些实施方案中，衍生物是硅衍生物，其中选自化合物1-262或式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物中的至少一个碳原子已被硅取代。在一些实施方案中，衍生物是硼衍生物，其中选自化合物1-262或式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物中的至少一个碳原子已被硼取代。在其他实施方案中，衍生物是磷酸酯衍生物，其中选自化合物1-262或式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物中的至少一个碳原子已被磷取代。由于硅、硼和磷的一般特性与碳的一般性特性相似，因此用硅、硼或磷置换碳可产生具有与含碳的原始化合物相似的生物活性的化合物。

在一些实施方案中，衍生物是硅衍生物，其中选自化合物1-262或式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物中的一个碳原子已被硅取代。在其他实施方案中，两个碳原子被硅置换。被硅置换的碳可以是非芳香族碳。在一些实施方案中，叔丁基部分的季碳原子可以被硅置换。在某些实施例中，本公开的硅衍生物可以包括一个或多个被氘取代的氢原子。例如，叔丁基部分的一个或多个氢(其中碳已被硅置换)可以被氘置换。在其他实施方案中，选自化合物1-262或式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物的硅衍生物可以具有并入到杂环中的硅。

本公开的另一方面提供了药物组合物，其包含根据选自式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c中的任一者的化合物和化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，将至少一种选自式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物和化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐向有需要的患者施用。

药物组合物可以还包含至少一种药学上可接受的载体。在一些实施方案中，至少一种药学上可接受的载体选自药学上可接受的媒介物和药学上可接受的佐剂。在一些实施方案中，至少一种药学上可接受的选自药学上可接受的填充剂、崩解剂、表面活性剂、粘合剂、润滑剂。

还应理解，本公开的药物组合物可在联合疗法中采用；即，本文描述的药物组合物还可包含另一活性治疗剂。或者，包含至少一种式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c\其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的药物组合物可以作为单独的组合物在包含至少一种另一活性剂的组合物同时、之前或之后施用。在具体实施方案中，包含至少一种选自化合物化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物的药物组合物可以作为单独的组合物在包含至少一种另一活性剂的组合物同时、之前或之后施用。

在一些实施方案中，将式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐与至少一种额外活性剂组合，以同时、分别或依次用于治疗AATD。在一些实施方案中，当同时使用时，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐以及至少一种额外活性剂处于单独的药物组合物中。在一些实施方案中，当同时使用时，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐以及至少一种额外活性剂一起处于同一药物组合物中。在一些实施方案中，所述化合物是选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物。

在一些实施方案中，提供了式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐，用于治疗AATD的方法中，其中所述方法包括共同施用所述化合物和额外活性剂。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂在同一药物组合物中共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂在单独的药物组合物中共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂同时共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂依次共同施用。在一些实施方案中，化合物选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供了式、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐与额外活性剂的组合，用于治疗AATD的方法中。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂在同一药物组合物中共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂在单独的药物组合物中共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂同时共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂依次共同施用。在一些实施方案中，化合物选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供了用于治疗AATD的方法中的额外活性剂，其中所述方法包括共同施用额外活性剂和式(I)、(IIa)-(IIc)、(III)、(IV)、(Va)-(Vc)、(VIa)-(VIc)或(VIIa)-(VIIe)的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂在同一药物组合物中共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂在单独的药物组合物中共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂同时共同施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂依次共同施用。在一些实施方案中，化合物选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供了式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐，用于治疗AATD的方法中，其中所述化合物被制备用于与额外活性剂组合施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于在同一药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于在单独的药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于同时施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于连续共同施用。在一些实施方案中，化合物选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供了式、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐与额外活性剂的组合，用于治疗AATD的方法中。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于在同一药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于在单独的药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于同时施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于连续共同施用。在一些实施方案中，化合物选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，提供了额外活性剂用于治疗AATD的方法中，其中所述额外活性剂被制备用于与I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f或VIIIa-c的化合物、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物或前述任一者的药学上可接受的盐组合施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于在同一药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于在单独的药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于同时施用。在一些实施方案中，化合物和额外活性剂被制备用于连续共同施用。在一些实施方案中，化合物选自化合物1-262、这些化合物的互变异构体、这些化合物和互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，所述额外活性剂选自由来自健康人供体的血浆的α-1抗胰蛋白酶蛋白(AAT)和重组AAT组成的组。在一些实施方案中，额外活性剂是来自健康人供体血浆的α-1抗胰蛋白酶蛋白(AAT)。在一些实施方案中，额外活性剂是来自健康人供体血浆的α-1抗胰蛋白酶蛋白(AAT)。

如上所述，本文公开的药物组合物可以任选地还包含至少一种药学上可接受的载体。至少一种药学上可接受的载体可选自佐剂和媒介物。如本文所使用，至少一种药学上可接受的载体包括适合于所需的特定剂型的任何和所有溶剂、稀释剂、其它液体媒介物、分散助剂、悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、防腐剂、固体粘合剂和润滑剂。Remington:The Science and Practice of Pharmacy,第21版,2005,D.B.Troy编辑,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia和Encyclopedia of PharmaceuticalTechnology,J.Swarbrick和J.C.Boylan编辑,1988-1999,Marcel Dekker,New York公开用于配制药物组合物的各种载体和用于制备其的已知技术。除非任何常规载体与本公开的化合物不相容，诸如通过产生任何不合需要的生物作用或另外以有害方式与药物组合物的任何其他组分相互作用，否则预期其使用在本公开的范围内。合适的药学上可接受的载体的非限制性实例包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(例如人血清白蛋白)、缓冲物质(例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸和山梨酸钾)、饱和植物脂肪酸偏甘油酯混合物、水盐和电解质(诸如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠和锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯，、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、羊毛脂、糖(诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖)、淀粉(诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉)、纤维素和其衍生物(诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素)、粉状黄蓍胶、麦芽、明胶、滑石、赋形剂(诸如可可脂和栓剂蜡)、油类(诸如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)、二醇类(诸如丙二醇和聚乙二醇)、酯类(诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯)、琼脂、缓冲剂(诸如氢氧化镁和氢氧化铝)、海藻酸、无热原质水、等渗盐水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)、乙醇、磷酸盐缓冲液、无毒相容润滑剂(诸如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁)、着色剂、脱模剂、包覆剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂和抗氧化剂。

在本公开的另一方面，本文所述的化合物和药物组合物用于治疗AATD。在一些实施方案中，需要用本公开的化合物和组合物治疗的受试者携带ZZ突变。在一些实施方案中，需要用本公开的化合物和组合物治疗的受试者携带SZ突变。

在一些实施方案中，本公开的方法包括向有需要的患者施用选自以下的化合物：式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c中的任一种化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c中的任一者的化合物选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述有需要的患者在α-1抗胰蛋白酶基因中具有Z突变。在一些实施方案中，所述有需要的患者对于在α-1抗胰蛋白酶基因中的Z突变是纯合的。

本公开的另一方面提供了调节α-1抗胰蛋白酶活性的方法，其包括将所述α-1-抗胰蛋白酶与至少一种式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐接触的步骤。在具体实施方案中，调节α-1抗胰蛋白酶活性的方法包括将所述α-1抗胰蛋白酶与至少一种选自化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的化合物接触的步骤。

在一些实施方案中，调节α-1抗胰蛋白酶活性的方法在体内进行。在一些实施方案中，调节α-1抗胰蛋白酶活性的方法离体进行，并且所述α-1-抗胰蛋白酶来自从人类受试者获得的生物样品。在一些实施方案中，调节AAT的方法在体外进行，并且所述α-1-抗胰蛋白酶来自从人类受试者获得的生物样品。在一些实施方案中，生物样品是血液样品。在一些实施方案中，生物样品是取自肝活检物的样品。

III.

本文公开的所有属、亚属和特定化合物式都被认为是本公开的一部分。

A.式I化合物

本公开的化合物可以根据标准化学实践或如本文所述来制备。在下面的合成方案中以及在制备式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIIa-c的化合物和化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐的描述中，使用了下面的缩写：

缩写

BrettPhos Pd G1＝氯[2-(二环己基膦基)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯][2-(2-氨基乙基)苯基]钯(II)或(BrettPhos)钯(II)苯乙胺氯化物

BrettPhos Pd G4＝二环己基-[3,6-二甲氧基-2-[2,4,6-三(丙-2-基)苯基]苯基]磷烷；甲磺酸；N-甲基-2-苯基苯胺；钯

CBzCl＝氯甲酸苄酯

Cphos＝2-二环己基膦基-2',6'-双(N,N-二甲基氨基)联苯

DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺或N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺

DMAP＝二甲基氨基吡啶

DMF＝二甲基甲酰胺

DMSO＝二甲基亚砜

EtOAc＝乙酸乙酯

HATU＝[二甲基氨基(三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)亚甲基]-二甲基-铵(六氟化磷离子)

IPA＝异丙醇

MeOH＝甲醇

MP-TMT清除剂树脂＝大孔聚苯乙烯结合的三巯基三嗪，树脂结合的2,4,6-三巯基三嗪(TMT)等效物。

MTBE＝甲基叔丁基醚

Pd(dppf)

PdCl

PTSA＝对-甲苯磺酸一水合物

SFC＝超临界流体色谱法

TBAF＝四丁基氟化铵

tBuXPhos Pd G1＝氯[2-(二叔丁基膦基)-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯][2-(2-氨基乙基)苯基)]钯(II)或t-BuXPhos钯(II)苯乙胺氯化物

tBuXPhos Pd G3＝[(2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)-2-(2'-氨基-1,1'-联苯)]甲磺酸钯(II)

TFA＝三氟乙酸

THF＝四氢呋喃

THP＝四氢吡喃

XPhos Pd G1＝(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2-氨乙基)苯基)]氯化钯(II)或(XPhos)钯(II)苯乙胺氯化物

在一些实施方案中，制备式I的化合物、互变异构体、这些化合物或互变异构体的药学上可接受的盐、或前述任一者的氘化衍生物的方法包括使式I、II、IIIa-d、IVa-c、Va-c、VIa-c、VIIa-f和VIIa-c的化合物和化合物1-262、其互变异构体、这些化合物或互变异构体的氘化衍生物以及前述任一者的药学上可接受的盐反应：

方案1涉及式IIIa’化合物的制备。

定义：PG

式IIIa’的化合物可以使用任何合适的方法从式1-1的化合物中除去氮保护基团来制备。在一些实施方案中，当PG

方案1

方案2涉及制备式1-1化合物的方法。

定义：Y

可以使用合适的方法将保护基团加成到氮原子上来从2-1制备式2-2的化合物。例如，当PG

方案2

方案3提供了制备式2-10化合物的方法。

定义：Y

用式3-1的芳基卤化物对式3-2的化合物进行芳基化，得到式3-3的化合物。在一些实施方案中，使用钯催化的偶联条件，例如Pd(dppf)Cl

方案3

方案4描述了由式2-10化合物制备式4-1化合物的方法。在一些实施方案中，在存在TFAA的情况下使用诸如DABCO的试剂。可使用溶剂如二氯甲烷。

方案4

方案5示出了制备式5-3化合物的一种可能的方法。式5-2的化合物可以从式2-11的芳基氯和式5-1的醇制备。在一些实施方案中，可以使用诸如NaH、Cs

定义：R

式5-3的化合物可以使用任何合适的除去氮保护基团条件来从5-2制备。例如，可以使用三氟乙酸。

方案5

方案6描绘了用于制备化合物6-3的方法。定义：R

方案6

制备式7-4化合物的方法如方案7所示。

定义：R

可以使用合适的用于将胺偶联到吡啶N-氧化物化合物上的试剂来从式2-10的化合物和式7-1的胺制备式7-2的化合物。例如，在一些实施方案中，可以使用PyBrop和DIPEA。使用任何合适的酯水解方法，可以从7-2制备式7-3的化合物。例如，可以使用碱如在溶剂如MeOH中的NaOH。可以使用任何合适的方法从氮原子上除去保护基团(例如THP)来制备式7-4的化合物。

方案7

使用合适的碱(例如NaH)，可以由中间体4-1和式8-1的醇制备式8-2的化合物。可以使用溶剂如DMSO。式8-3的化合物可以通过任何合适的酯水解方法由8-2制备。式8-4的化合物可以由8-3通过用合适的试剂处理除去氮保护基团来制备。

定义：R

方案8

方案9描述了由式9-1的化合物制备式IIIb’的化合物，其中PG

方案9

方案10提供了由式10-1化合物制备式IIIb’和式9-1化合物的方法。

定义：Y

可以通过本领域技术人员已知的用于将芳基卤化物10-1与式R

方案10

方案11涉及由式11-1化合物制备式10-1化合物的方法。可以使用任何合适的将酯还原成醇的方法，将式11-1的化合物转化成式11-2的化合物。在一些实施方案中，这可以在试剂如氯甲酸乙酯的存在下用NaBH

定义：R

方案11

方案12描绘了由式11-5以及式12-1和12-4的胺制备式12-3和12-6的化合物的方法。可用使用任何合适的将胺加成到N-氧化物上的方法来制备化合物12-2和12-5。在一些实施方案中，可以使用在溶剂如二氯甲烷中的PyBrop和DIPEA。式12-3的化合物可以通过任何合适的酯水解方法由12-2制备。在一些实施方案中，可以使用诸如NaOH或LiOH的碱。可以使用诸如THF或MeOH的溶剂。化合物12-6可以使用任何适于烷基酯水解的方法由12-5制备。

定义：R

方案12

方案13涉及由式13-1化合物制备式13-10化合物的方法。式13-3的化合物可以使用任何合适的形成酰胺的方法由13-1制备。在一些实施方案中，可以使用式13-2的酰基卤在碱如DIPEA存在下的反应。式13-5的化合物可以由13-3通过与式13-4的化合物反应来制备。可以使用诸如硫酸氢硫铵和Pd(TFA)

定义：Y

方案13

方案14示出了用于制备式14-5的化合物的方法。

定义：Y

PG

方案14

方案15示出了用于制备式15-8的化合物的方法。

定义：Y

R

方案15

方案16描述了制备式16-4和16-7化合物的方法。定义：L

通过用碱如NaOH在溶剂如EtOH中在回流温度下处理15-5,可以制备式16-1的化合物。式16-3或16-6的化合物可由16-1通过在有机碱(如DIPEA)存在下使用酰胺偶联剂如HATU偶联合适的胺如16-2或16-5来制备。可以使用诸如DMF的溶剂。式16-4化合物可由16-3分两步制备，其中先用试剂除去氮原子保护基团，然后用合适的试剂进行酯水解。例如，在一些实施方案中，在高温(例如65℃)下用对甲苯磺酸处理16-3,然后用碱如NaOH水解，得到式16-4的化合物。通过用酸如对甲苯磺酸或HCl处理，可以从式16-6的化合物制备式16-7的化合物。

方案16

下面描述了用于合成化合物1-262的中间体的合成路线。

制备S1

5-碘-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S1)

步骤1.合成5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(C2)

在5L三颈烧瓶中，在室温下向5-溴-1H-吲唑-6-甲酸甲酯(200g,784.1mmol)在二氯甲烷(2.4L)的溶液/悬浮液中添加DHP(92mL,1.008mol)，然后添加4-甲基苯磺酸一水合物(1.8g,9.463mmol)。大约20分钟后，悬浮液被消耗，得到澄清的溶液。将混合物在室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO

步骤2.合成(5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-基)甲醇(C3)

在-78℃下，在15分钟内通过注射器将DIBALH(50mL的1M,50.00mmol)添加到5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(6.5g,19.16mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液中一小时后，通过添加乙酸乙酯(10mL)和饱和罗谢尔盐(100mL)淬灭混合物，将混合物温热至室温并剧烈搅拌，直至各层变得澄清(约2小时)。分离各层，将水层用二氯甲烷再次萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到(5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-基)甲醇(5.81g,97％)，为灰白色固体。

步骤3.合成5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲醛(C4)

在配备有温度探头和机械搅拌器的12L三颈烧瓶中，在3℃(冰水浴)下，向(5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-基)甲醇(100g,321.4mmol)在二氯甲烷(2.75L)的溶液中添加水(750mL)，然后添加NaHCO

步骤4.合成1-四氢吡喃-2-基-5-(2-四氢吡喃-4-基乙炔基)吲唑-6-甲醛(C5)

将5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲醛(5g,16.17mmol)和三甲基(2-四氢吡喃-4-基乙炔基)硅烷(3.1mL,16.83mmol)在三乙胺(70mL)、1,4-二噁烷(8mL)和水(580μL,32.19mmol)中的溶液用氮气在50℃下喷扫15分钟。添加Pd(PPh

步骤5.合成(6E)-1-四氢吡喃-2-基-5-(2-四氢吡喃-4-基乙炔基)吲唑-6-甲醛肟(C6)

在室温下，将羟胺(盐酸盐)(1.4g,20.15mmol)在吡啶(10mL,123.6mmol)中的溶液在两分钟内添加到1-四氢吡喃-2-基-5-(2-四氢吡喃-4-基乙炔基)吲唑-6-甲醛(2.23g,6.590mmol)在乙腈(30mL)的溶液中。在室温下搅拌1小时后，将混合物真空浓缩以除去乙腈，将残余物在EtOAc和水之间分配。将有机层用水(3x)、1M HCl(1x)和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到产物。(6E)-1-四氢吡喃-2-基-5-(2-四氢吡喃-4-基乙炔基)吲唑-6-甲醛肟(2.32g,100％)，为棕褐色固体，其无需进一步纯化即可使用。LCMS m/z 354.0[M+H]

步骤6.合成5-碘-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S1)

在室温下，历经30分钟将(6E)-1-四氢吡喃-2-基-5-(2-四氢吡喃-4-基乙炔基)吲唑-6-甲醛肟(790mg,2.235mmol)(作为在15mL二氯甲烷中的溶液)添加到分子碘(1.56g，6.146mmol)和K

制备S2和S3

5-(2-甲基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S2)和8-氯-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S3)

步骤1.合成5-(2-甲基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S2)

在室温下，将碳酸钠(6mL的2M,12.00mmol)添加到5-碘-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(3g,6.259mmol)和(2-甲基-4-吡啶基)硼酸(1.3g,9.493mmol)在DMSO(60mL)的溶液中。将混合物用氮气鼓泡5分钟，然后添加Pd(dppf)Cl

步骤2.合成8-氯-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S3)

在-78℃下，将5-(2-甲基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(660mg,1.485mmol)、DIPEA(950μL,5.454mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液用草酰氯溶液(1mL的2M，2.000mmol)处理10分钟。将反应在-78℃下搅拌1小时，然后用5mL MeOH淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(梯度：0-8％MeOH/二氯甲烷)纯化。8-氯-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(520mg,76％)。

制备S4

8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S4)

步骤1.合成5-(3,4-二氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C7)

在氮气下，向5-碘-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(460mg,0.9348mmol)、(3,4-二氟苯基)硼酸(295mg,1.868mmol)和Pd(PPh

步骤2.合成8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S4)

在0℃下，向5-(3,4-二氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(200mg,0.4297mmol)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(250mg,2.229mmol)在CH

制备S5和S6

8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S5)和8-氯-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S6)

步骤1.合成8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S5)

在室温下，将5-(3,4-二氟苯基)-7-氧桥-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(盐酸盐)(254mg,0.5268mmol)、1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(300mg,2.674mmol)在二氯甲烷(2mL)的溶液添加TFAA(300μL,2.158mmol)。将混合物搅拌1小时。将混合物浓缩并溶解在DMSO中。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：10-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸(2))(321mg,85％)。LCMS m/z 476.38[M+H]

步骤2.合成8-氯-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S6)

在-78℃下，将5-(3,4-二氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(1.9g,4.082mmol)、DIPEA(2.85mL,16.36mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液用草酰氯的滴加溶液(4.2mL,2M，8.400mmol)处理1分钟。将反应在-78℃下搅拌1小时，然后在0℃下搅拌1小时。将混合物用MeOH(5mL)淬灭并浓缩。用MeOH(5mL)处理残余物，超声处理1分钟，得到悬浮液，然后过滤。用MeOH(3×1mL)洗涤收集的固体，然后在抽吸下干燥30分钟。将固体转移到250mL烧瓶中，然后在旋转蒸发器(65℃，3毫巴)上干燥1小时。向粗残余物中添加10mL冷MeOH，过滤溶液。将所得棕色固体用冰冷的MeOH洗涤，真空干燥，得到8-氯-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(1.2g,61％)。

制备S7和S8

5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S7)和8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S8)

使用针对制备S4所述的方法从S1制备化合物S7和S8。

5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S7)

8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S8)LCMS m/z 542.0[M+H]

制备S9

8-氯-5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S9)

步骤1.合成8-氯-5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S9)

在-78℃下，将5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(500mg,1.117mmol)、DIPEA(600μL,3.445mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液用草酰氯(1.15mL的2M,2.300mmol)的滴加溶液处理10分钟。将反应在-78℃下搅拌1小时。将反应用MeOH(5mL)淬灭并浓缩。通过硅胶色谱法(梯度：0-10％EtOAc/二氯甲烷)纯化，得到产物。8-氯-5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(390mg,75％)。

制备S10和S11

5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S10)和8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S11)

步骤1.合成5-(3-甲基丁-1-炔基)-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲醛(C9)

在3L四颈烧瓶(配备有机械搅拌器、温度探头、加热夹套)中，将5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲醛(113g,365.5mmol)在DMF(1.1L)中的溶液用氮气鼓泡15分钟，然后添加二异丙胺(103mL,734.9mmol)。氮气鼓泡持续15分钟，然后添加3-甲基丁-1-炔(54mL,554.9mmol)，接着添加Pd(PPh

步骤2.合成(6E)-5-(3-甲基丁-1-炔基)-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲醛肟(C10)

在配备有机械搅拌、温度探头和加热夹套的5L三颈烧瓶中，在室温下向羟胺(盐酸盐)(70.0g,1.007mol)在MeCN(1.0L)的悬浮液中添加吡啶(550mL,6.800mol)。将混合物加热至50℃，然后添加5-(3-甲基丁-1-炔基)-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲醛(100g,337.4mmol)在二氯甲烷(750mL)中的溶液。将混合物在50℃搅拌1小时，然后浓缩。将残余物溶解在EtOAc(2L)中，依次用水(2x)洗涤，然后用盐水(各1.5L)洗涤，干燥(MgSO

步骤3.合成5-碘-6-异丙基-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C11)

如针对制备S1所述，通过碘化从C10制备化合物C11。

5-碘-6-异丙基-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(1.2g,84％)，为黄色泡沫状物。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.82(s,1H),8.60(s,1H),8.34(d,J＝1.0Hz,1H),7.77(q,J＝0.9Hz,1H),5.85(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),4.22(s,1H),4.12-4.00(m,1H),3.90-3.78(m,1H),2.62(qd,J＝9.5,5.2Hz,1H),2.29-2.11(m,2H),1.93-1.69(m,3H),1.62(d,J＝6.9Hz,6H)。LCMS m/z 438.03[M+1]

步骤4.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S10)

如化合物S2的制备中所述，通过与4-氟苯基硼酸进行Suzuki偶联，由C11制备化合物S10。Pd(PPh

步骤5.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C12)

在室温下用氯化氢(30mL的4M,120.0mmol)处理5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(1050mg,2.590mmol)。将反应混合物搅拌18小时。除去溶剂，得到5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(830mg,100％)。LCMS m/z 322.37[M+H]

步骤6.合成8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S11)

在0℃下，向5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(830mg,2.583mmol)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(2.6g,23.18mmol)在CH

制备S12和S13

8-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S12)和8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S13)

制备8-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S12)

使用针对制备S10所述的方法从S10制备化合物S12,得到产物。8-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(5.3g,82％)。LCMS m/z 424.14[M+H]

制备8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S13)

使用针对制备S8所述的方法从S13制备化合物S10。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸)(374mg,100％)。LCMS m/z 500.9[M+H]

制备S14和S15

6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S14)和8-氯-6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S15)

合成6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S14)

使用针对制备S2所述的方法，通过与2-甲基-4-吡啶基硼酸的铃木偶联，由C11制备化合物S14。6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(900mg,65％)，为棕褐色固体。LCMS m/z 403.0[M+H]

合成8-氯-6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S15)

使用针对制备化合物S3所述的方法从S14制备化合物S15。8-氯-6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(280mg,77％)。LCMS m/z 421.0[M+H]

制备S16

8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-异丙基-5-(2-甲氧基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S16)

步骤1.合成6-异丙基-5-(2-甲氧基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C13)

使用针对制备S2所述的方法，通过与C11和2-甲氧基-4-吡啶基硼酸的铃木偶联制备化合物C13。通过硅胶色谱法(梯度：0-5％的MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物，为浅红色固体。6-异丙基-5-(2-甲氧基-4-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(168.5mg,92％)。

步骤2.合成8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-异丙基-5-(2-甲氧基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S16)

使用针对制备化合物S4所述的方法从C13制备化合物S16。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-50％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-异丙基-5-(2-甲氧基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸盐)(182mg,74％)。LCMS m/z 513.43[M]

制备S17

8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1-苄氧基环丙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S17)

步骤1.合成6-(1-苄氧基环丙基)-5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C17)

部分A.向20mL小瓶中添加5-溴-6-(1,3-二氧戊环-2-基)-1-四氢吡喃-2-基-吲唑(1.15g,3.256mmol)、Cs

部分B.将羟胺(盐酸盐)(1.13g,16.26mmol)的EtOH(14.5mL)/H

步骤2.合成8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1-苄氧基环丙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S17)

在室温下，历经1分钟向6-(1-苄氧基环丙基)-5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(盐酸盐)(600mg,1.299mmol)和DABCO(1.29g,11.50mmol)在二氯甲烷(12mL)的溶液中滴加TFAA(1.24mL,8.921mmol)。将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物真空浓缩，得到深棕色固体。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％TFA)纯化，得到产物。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1-苄氧基环丙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸(2))(620mg,63％)LCMS m/z 520.3[M+H]

制备S188-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1-苄氧基环丙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S18)

使用针对化合物S17所述的方法，从C14和1-(1-苄氧基环丙基)-2-(3,4-二氟苯基)乙酮制备化合物S18。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％TFA)纯化，得到产物。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1-苄氧基环丙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸(2))(122mg,51％)LCMS m/z 538.55[M+H]

制备S198-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-[1-(三氟甲基)环丙基]-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S19)

使用制备S17所述的方法由C14和C18制备化合物S19。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-[1-(三氟甲基)环丙基]-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸盐)(91mg,52％)LCMS m/z 500.49[M+H]

制备S20

6-(1,1-二氟乙基)-5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S20)

如针对制备C20所述，从C14和3,3-二氟-1-(4-氟苯基)丁-2-酮(160mg,0.7914mmol)制备S20。将反应浓缩，并将产物通过ISCO(40g二氧化硅，100％EtOAc/庚烷)纯化，得到6-(1,1-二氟乙基)-5-(4-氟苯基)-7-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(100mg,50％)。LCMS m/z 344.18[M+H]

制备S21

5-(3,4-二氟苯基)-6-(1-甲氧基环丁基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(S21)

如针对制备化合物S17所述，从2-(3,4-二氟苯基)-1-(1-甲氧基环丁基)乙酮和C14制备化合物S21。THP保护基团在环化步骤中保留。

制备S22

8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-甲氧基-2-甲基-丙基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(S22)

如针对制备S22所述，从1-(3,4-二氟苯基)-4-甲氧基-4-甲基-戊-2-酮和C14制备化合物S22。8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-甲氧基-2-甲基-丙基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸(3))(160mg,56％)LCMSm/z 563.09[M+1]

制备S23

[6-(2-苄氧基-1,1-二甲基-乙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]三氟甲磺酸酯(S23)

步骤1.合成6-(2-苄氧基-1,1-二甲基-乙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-7H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-酮(C23)

部分A.向20mL小瓶中添加5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(1.23g,3.626mmol)、Cs

部分B.在10-20mL微波小瓶中，向来自A部分的产物中添加NH

步骤2.合成[6-(2-苄氧基-1,1-二甲基-乙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]三氟甲磺酸酯(S23)

在0℃下，向6-(2-苄氧基-1,1-二甲基-乙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-7H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-酮(200mg,0.3652mmol)和吡啶(100μL,1.236mmol)在二氯甲烷(2.8mL)的溶液中添加三氟甲基磺酰基三氟甲磺酸酯(90μL,0.5349mmol)。将反应在0℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1小时。将反应用NaHCO

为了可以更充分地理解本文描述的公开内容，阐述了以下实施例。应理解，这些实施例仅出于示意的目的而不应解释为以任何方式限制本公开。

所有具体和一般的化合物和公开用于制备那些化合物的中间体都被认为是本文公开的公开内容的一部分。

化合物1

3-[[5-(4-氯苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(1)

步骤1.合成5-(4-氯苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C24)

在微波小瓶中，将5-碘-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(500mg,0.9994mmol),(4-氯苯基)硼酸(310mg,1.982mmol)和Pd(PPh

步骤2.合成8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氯苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(C25)

将5-(4-氯苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(281mg,0.6057mmol)和1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷(340mg,3.031mmol)悬浮在CH

步骤3.合成3-[5-(4-氯苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(C26)

在小瓶中，将8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氯苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸盐)(250mg,0.3714mmol)和3-羟基环丁烷羧酸(130mg,1.120mmol)溶解在DMSO(3.7mL)中。然后，在室温和氮气下，添加NaH(90mg的60％重量/重量，2.250mmol)。将反应搅拌2小时。通过反相快速色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。将含有产物的级分合并，并真空蒸发乙腈。用CHCl

步骤4.合成3-[[5-(4-氯苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(1)

在小瓶中，将3-[5-(4-氯苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(160mg,0.2847mmol)溶解在二氯甲烷(1.5mL)中。然后，添加辛烷-1-硫醇(108μL,0.6223mmol)。在单独的小瓶中，将AlCl

化合物2

3-[[5-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(2)

如针对化合物1所述，从S1和(4-氟-3-甲氧基-苯基)硼酸制备化合物2。将HCl用于最后的THP脱保护步骤。3-[[5-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(80.7mg)。

化合物3

3-[[5-(3-氯-4-氟-苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(3)

如针对化合物1所述，化合物3由S1和4-氟,3-氯苯基硼酸制备。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：5-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。获得浅黄色固体3-[[5-(3-氯-4-氟-苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(75.3mg,48％)。

化合物4

3-[[5-(4-氯-3-氟-苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(4)

如针对化合物1所述，化合物4从S1和4-氯,3-氟苯基硼酸制备。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-50％MeCN/水，含有0.2％甲酸)纯化，得到产物。获得浅黄色固体,3-[[5-(4-氯-3-氟-苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(33.3mg,24％)。

化合物5

1-[5-(5-氟-3-吡啶基)-8-[1-[(2S)-2-羟基丙酰基]氮杂环丁烷-3-基]氧基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-1-基]-2-羟基-丙-1-酮(5)

步骤1.合成5-(5-氟-3-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(C25)

将5-碘-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(1g,1.997mmol)、(5-氟-3-吡啶基)硼酸(360mg,2.555mmol)和Pd(dppf)Cl

步骤2.合成8-氯-5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(C26)

在0℃下，在5-(5-氟-3-吡啶基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(850mg,1.895mmol)在二氯甲烷(20mL)的溶液中添加DIPEA(1mL,5.741mmol)和草酰氯(2mL的2M,4.0mmol)。将混合物搅拌1小时，然后浓缩。通过硅胶色谱法(梯度：0-10％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。8-氯-5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(500mg,57％)。LCMS m/z 467.0[M+H]

步骤3.合成8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(C27)

部分A.向3-羟基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(90mg,0.4343mmol)的DMSO(1mL)溶液中添加KOtBu(48mg,0.4278mmol)并搅拌10分钟。向混合物中添加8-氯-5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(100mg,0.2142mmol)并在50℃下搅拌30分钟。然后将反应用EtOAc稀释，用H

通过硅胶色谱法(梯度：0-10％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。苄基-3-[5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸酯(130mg,95％)。LCMS m/z 638.0[M+H]

部分B.向3-[5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(130mg,95％)在甲醇(5mL)的溶液中添加Pd/C(70mg的10％w/w,0.06578mmol)并在H

步骤4.合成(2S)-1-[3-[[5-(5-氟-3-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]-2-羟基-丙-1-酮(5)

部分A.向8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(90mg,0.1787mmol)、(2S)-2-羟基丙酸(25mg,0.2775mmol)在DMF(1mL)的混合物中添加HATU(100mg,0.2630mmol)和DIPEA(75μL,0.4306mmol)。将混合物搅拌30分钟。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.2％甲酸)纯化，得到产物，其用于部分B中。(2S)-1-[3-[5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基氮杂环丁烷-1-基]-2-羟基-丙-1-酮(65mg,63％)。LCMS m/z 576.0[M+H]

部分B.向(2S)-1-[3-[5-(5-氟-3-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基氮杂环丁烷-1-基]-2-羟基-丙-1-酮(65mg)在二氯甲烷(5mL)的溶液中添加TFA(200μL,2.596mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：10-100％MeCN/水，含0.1％甲酸)，然后通过硅胶色谱法(梯度：0-15％MeOH/二氯甲烷)纯化。(2S)-1-[3-[[5-(5-氟-3-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]-2-羟基-丙-1-酮(14.1mg,16％)。

化合物6

3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(6)

步骤1.合成3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(C28)

向3-氟-4-羟基-苯甲酸甲酯(30mg,0.1763mmol)、CCl

步骤2.合成3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸甲酯(C29)

向3-氟-4-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-苯甲酸甲酯(32mg,48％)在二氯甲烷(3mL)的溶液中添加TFA(800μL,10.38mmol)并搅拌1小时。将混合物浓缩，得到产物。3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸甲酯(25mg,43％)。LCMS m/z 513.0[M+H]

步骤3.合成3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(6)

向3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸甲酯(25mg,43％)在MeOH(5mL)的溶液中添加NaOH(300μL的6M,1.800mmol)并在40℃下搅拌1小时。通过添加1M HCl将混合物的pH调节至pH＝3,然后浓缩。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：10-100％MeCN/水，含0.1％甲酸)纯化，得到产物。3-氟-4-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(18.8mg,32％)。

化合物7-24

根据针对制备化合物6所述的方法，从S2和适当的芳基醇制备化合物7-24(表1)。适当地省略酯水解步骤。在表脚注中注明了对该程序的修改。

表1.化合物7-24的制备方法、结构和物理化学数据

*在室温下，通过在二氯甲烷中用TMSBr处理来水解膦酸酯。

化合物25-29

通过使用DMSO中的KOtBu添加适当的醇试剂，由芳基氯S3制备化合物25-29。THP基团在二氯甲烷中用TFA脱保护。在表脚注中注明了对该程序的修改。

表2.化合物25-29的制备方法、结构和物理化学数据

*丙酮化合物脱保护发生在用TFA进行THP脱保护的过程中。在丙酮化合物脱保护中也观察到产物25和29的三氟乙酸酯。这些酯通过用NaOH水解转化成产物25和29。

**在用TFA进行THP脱保护的过程中，Boc基团被除去。

***甲酯水解通过在THP脱保护步骤之前用NaOH处理来进行。

化合物30N-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]-3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷甲酰胺(30)

化合物30由C30分两步制备。

部分A.向3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(15mg,0.02764mmol)、(2S)-2-氨基丙-1-醇(3mg,0.03994mmol)在DMF(0.5mL)的混合物中添加HATU(15mg,0.03945mmol)和DIPEA(20μL,0.1148mmol)。将混合物搅拌1小时。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含有0.1％甲酸)纯化，得到产物。N-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]-3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-环丁烷甲酰胺(8mg,48％),LCMS m/z 600.0[M+H]

部分B.向N-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]-3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-环丁烷甲酰胺(8mg)在二氯甲烷(2mL)的溶液中添加TFA(200μL,2.596mmol)。将混合物搅拌1小时。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：10-100％MeCN/水，含0.1％甲酸)纯化，得到产物。N-[(1S)-2-羟基-1-甲基-乙基]-3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷甲酰胺(3.0mg,20％),

化合物31

N-(2-羟基-1-甲基-乙基)-N-甲基-3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷甲酰胺(31)

根据针对制备化合物30所述的方法，从C30和2-(甲氨基)丙-1-醇制备化合物31。N-(2-羟基-1-甲基-乙基)-N-甲基-3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷甲酰胺(2.7mg,17％)。

化合物32

(2S)-2-羟基-N-甲基-N-[3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁基]丙酰胺(32)

根据针对化合物30描述的方法，从C31和(2S)-2-羟基丙酸制备化合物32。(2S)-2-羟基-N-甲基-N-[3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁基]丙酰胺(11.4mg,40％)。

化合物33

2-羟基-N-[3-羟基-2-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]丙基]乙磺酰胺(33)

步骤1.合成3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯

向3-羟基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(150mg,0.7238mmol)在DMSO(2mL)的溶液中添加KOtBu(82mg,0.7308mmol)，并将混合物搅拌10分钟。将混合物添加到8-氯-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(170mg,0.3672mmol)的小瓶中。将混合物在50℃下搅拌1小时。将混合物用EtOAc稀释，用H

步骤2.合成8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(C32)

向3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(222mg,0.3503mmol)在MeOH(5mL)和EtOAc(5mL)的溶液中添加Pd/C(120mg的10％w/w,0.1128mmol)，并在氢气球下搅拌1小时。滤出Pd催化剂，浓缩滤液。通过硅胶色谱法(梯度：0-20％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(132mg,75％),LCMS m/z 500.0[M+H]

步骤3.合成2-羟基-N-[3-羟基-2-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]丙基]乙磺酰胺(33)

部分A.向8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(20mg,0.04003mmol)在DMF(0.5mL)的溶液中添加DIPEA(15μL,0.08612mmol)和2-羟基乙磺酰氯(10mg,0.06917mmol)。将混合物搅拌30分钟，然后浓缩。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.2％甲酸)纯化，得到产物。2-[3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基氮杂环丁烷-1-基]磺酰乙醇(21mg,86％)。LCMS m/z 608.0[M+H]

部分B和部分C.向2-[3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基氮杂环丁烷-1-基]磺酰乙醇(21mg,86％)在二氯甲烷(2mL)的溶液中添加TFA(100μL,1.298mmol)。将混合物搅拌过夜。将混合物浓缩，然后用MeOH(2mL)稀释，添加NaOH(400μL 1m，0.4000mmol)并搅拌130分钟。通过反相色谱法(柱：C18，梯度：10％-100％MeCN/水，含0.2％甲酸)纯化，得到产物。2-羟基-N-[3-羟基-2-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]丙基]乙磺酰胺(8.8mg,39％),

化合物34

3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(34)

向8-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(10mg,0.02002mmol)在二氯甲烷(1mL)的溶液中添加DIPEA(20μL,0.1148mmol)和异氰酸根合(三甲基)硅烷(10μL,0.07387mmol)。将混合物搅拌1小时，然后真空浓缩。通过硅胶色谱法(梯度：0-10％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(7mg,64％)。LCMS m/z 543.0[M+H]

向3-[5-(2-甲基-4-吡啶基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(7mg,64％)在二氯甲烷(2mL)的溶液中添加TFA(200μL,2.596mmol)并搅拌1小时，然后置于真空下。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：10-100％MeCN/水，含0.2％甲酸)纯化，得到产物。3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]羟基氮杂环丁烷-1-甲酰胺(4.2mg,43％)。

化合物35

3-羟基-2-甲基-1-[3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]丙-1-酮(35)

如针对化合物32所述，从C32制备化合物35。3-羟基-2-甲基-1-[3-[[5-(2-甲基-4-吡啶基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]丙-1-酮(2.0mg,13％)。

化合物36-41

使用针对制备化合物32所述的方法从C32制备化合物36-41(表3)。

表3.化合物36-41的制备方法、结构和物理化学数据

化合物42

4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(42)

如针对制备化合物1所述，用4-羟基-苯甲酸和氢化钠处理，然后用HCl进行THP脱保护，从S4制备化合物42。

化合物43和44

4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-3-氟-2-甲氧基-苯甲酸(43)和4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-3-氟-2-羟基-苯甲酸甲酯(44)

步骤1.合成4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-3-氟-2-羟基-苯甲酸(C33)、4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-3-氟-2-甲氧基-苯甲酸(C34-A)和4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-3-氟-2-羟基-苯甲酸甲酯(C34-B)

在室温和氮气下，向8-氯-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(99mg,0.2046mmol)和3-氟-4-羟基-2-甲氧基-苯甲酸甲酯(140mg,0.6994mmol)在无水DMF(4mL)的混合物中添加Cs

化合物C33作为单一化合物被分离。4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-3-氟-2-羟基-苯甲酸C33(10mg,8％)。LCMS m/z 620.16[M+H]

步骤2.合成4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-3-氟-2-甲氧基-苯甲酸(43)和4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-3-氟-2-羟基-苯甲酸甲酯(44)

将含有少量C34-B杂质的4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-3-氟-2-甲氧基-苯甲酸C34-A(60mg,0.09469mmol)的混合物溶解在二氯甲烷(4mL)中。将混合物用TFA(2mL,25.96mmol)处理90分钟。除去过量的溶剂，通过反相HPLC纯化混合物。(方法:C18 Waters Sunfire色谱法柱(30x 150mm,5微米)。梯度：MeCN/H

产物A:4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-3-氟-2-甲氧基-苯甲酸(盐酸盐)(44)(15mg,26％)。

产物B:4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-3-氟-2-羟基-苯甲酸甲酯(3mg,5％)(43).

化合物45-64

如针对制备化合物42所述，用NaH和合适的醇试剂处理S5，制备化合物45-62。化合物62-64是由S4通过用NaH和适当的醇试剂处理，然后用HCl处理除去THP保护基而制备的。

表4.化合物45-64的制备方法、结构和物理化学数据

*化合物62由S4和4-(羟甲基)吡咯烷-2-酮制备，得到中间体4-[[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基甲基]吡咯烷-2-酮.用2-溴乙酸苄酯将该中间体烷基化，得到2-[4-[[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基甲基]-2-氧代-吡咯烷-1-基]乙酸苄酯。用HCl进行THP脱保护，随后氢化，得到化合物62。

化合物65

4-[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-3-氟-苯甲酸(65)

步骤1.合成4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-3-氟-苯甲酸(C35)

在氮气下，向8-氯-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉S6(95mg,0.1786mmol)、4-二羟硼基-3-氟-苯甲酸(50mg,0.2718mmol)和Pd(PPh

步骤2.合成4-[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-3-氟-苯甲酸(65)

将4-[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-3-氟-苯甲酸(100mg,0.1702mmol)用HCl(4.5mL的4M,18.00mmol)的1,4-二噁烷溶液处理。将反应混合物在80℃下用微波处理50分钟。除去过量的溶剂，通过反相HPLC纯化混合物。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：通过MeCN/H

化合物66和67

3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸甲酯(66)和3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸(67)

步骤1.合成3-[[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸甲酯(C36)

向5-(3,4-二氟苯基)-7-氧桥-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-鎓(150mg,0.1642mmol)、3-amino环丁烷羧酸甲酯(盐酸盐)(100mg,0.6038mmol)和DIPEA(750μL,4.306mmol)在二氯甲烷(2mL)的溶液中添加PyBroP(560mg,1.201mmol)并将反应在80℃下搅拌过夜。添加额外的PyBrop(560mg,1.201mmol)并将反应在80℃搅拌过夜。将混合物真空浓缩，然后通过反相HPLC(方法C18 Waters Sunfire柱(30x150mm,5微米)梯度：MeCN/H

合成3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸甲酯(66)

将3-[[5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸甲酯(70mg,0.09635mmol)在氯化氢(5mL的4M,20.00mmol)于1,4-二噁烷(5mL)的溶液中搅拌50分钟。添加Et

合成3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸(67)

将NaOH(2000μL的2M,4.000mmol)添加到3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氨基]环丁烷羧酸甲酯(三氟乙酸盐)(45mg,0.06932mmol)在MeOH(6mL)的溶液中，将混合物搅拌30分钟。添加TFA(250μL,3.245mmol)，并将混合物蒸发至干。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物68-74

根据针对制备化合物6所述的方法，从S7制备化合物68-74(表5)。在表脚注中注明了对该程序的修改。

表5.化合物68-74的制备方法、结构和物理化学数据

*通过在室温下在二氯甲烷中用TMSBr处理来水解膦酸酯。

化合物75-88

使用针对制备化合物42所述的方法，从S8制备化合物75-88(表6)。通过用TFA、HCl或TFA处理除去THP保护基。在表脚注中注明了任何修改。

表6.化合物75-88的制备方法、结构和物理化学数据

*化合物87通过将6-羟基-3-氮杂双环[3.2.0]庚烷-3-甲酸叔丁酯加成到S8上来制备。用TFA处理所得Boc保护的产物，得到8-(3-氮杂双环[3.2.0]庚-6-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸盐)。通过在DMF中用2-溴丙酸叔丁酯和K

化合物89

[3-[[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]-(1-羟基环丙基)甲酮(89)

根据针对制备化合物35所述的方法，从S9制备化合物89。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物90

(2R)-3-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-2-甲基-丙酸(盐酸盐)(90)

步骤1.合成(2R)-3-[5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-2-甲基-丙酸甲酯(C37)

在氮气下，向8-氯-5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(107mg,0.2296mmol)和Pd(PPh

步骤2.合成(2R)-3-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-2-甲基-丙酸甲酯(C37)

将(2R)-3-[5-(4-氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-2-甲基-丙酸甲酯(110mg,0.2069mmol)用HCl(5mL的4M,20.00mmol)的1,4-二噁烷溶液处理。将反应混合物在室温下搅拌1小时添加MeOH(1mL,24.69mmol)，将所得澄清的反应混合物在室温下搅拌3小时。除去过量的溶剂，将残余物与CH

步骤3.合成(2R)-3-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-2-甲基-丙酸(90)

将(2R)-3-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]-2-甲基-丙酸甲酯(55mg,0.1229mmol)和LiOH.H

化合物91

3-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]丙酸(91)

如针对化合物90所述，从S9制备化合物91。叔丁酯和THP去保护通过用HCl处理C38进行。3-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]丙酸(盐酸盐)(25mg,29％)

化合物92

4-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]苯甲酸(92)

由S9通过与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸叔丁酯进行铃木偶联，然后用HCl处理，制备化合物92。4-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]苯甲酸(盐酸盐)(49mg,89％)。

化合物93-103

化合物93-103(表7)由S11通过在DMSO中的NaH存在下添加适当的醇来制备。在表脚注中注明了任何修改。

表7.化合物93-103的制备方法、结构和物理化学数据

*叔丁酯在反应条件下被除去。

**乙酯在反应条件下被除去。

化合物102和化合物103

2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[异构体-1](102)和2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[异构体-2](103)

步骤1和2.

使用针对制备化合物C32所述的方法，从S11和C39分两步制备化合物C41和C42的混合物。化合物C43由C41和C42的混合物通过用2-氧代乙酸乙酯还原胺化来制备。

步骤3.合成2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸乙酯(C43)

向8-(6-氮杂螺[3.4]辛-2-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(67mg,0.1302mmol)、8-(6-氮杂螺[3.4]辛-2-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉(50mg,0.1161mmol)、2-氧代乙酸乙酯(155mg的50％w/w,0.7591mmol)和乙酸(8μL,0.1407mmol)在二氯甲烷(10mL)的溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(275mg,1.298mmol)。将混合物搅拌18小时，然后用二氯甲烷稀释，用MeOH和NaHCO

步骤4.制备2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[异构体-1](102)和2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[异构体-2](103)

将2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸乙酯C43(30mg,0.05807mmol)和LiOH(25mg,0.5957mmol)在水(1mL)和THF(1mL)中的混合物在室温下搅拌3小时。用1M HCl处理反应混合物，直到pH＝7。除去过量的溶剂。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物102.

化合物103.

化合物1042-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]丙酸(104)

如针对化合物93-103所述，从S11和2-(2-羟基-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基)丙酸钠制备化合物104。LCMS m/z 517.28[M+H]

化合物105-128

使用针对制备化合物43所述的方法，从S12制备化合物105-107和120-121(Table8)。化合物108-119通过铃木或Negishi偶联到S12上并适当地酯去保护来制备。在表脚注中注明了任何修改。

表8.化合物105-128的制备方法、结构和物理化学数据

*化合物117通过如针对化合物90所述的Negishi偶联制备。在微波条件下，在110℃的EtOH中用NaOH水解，将腈基转化为羧酸。

**化合物122在化合物112的制备中作为副产物获得。

化合物123和化合物124

2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸(盐酸盐)(123)和

2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸(盐酸盐)(124)

步骤1.合成2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯(C44)

向8-(6-氮杂螺[3.4]辛-2-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(200mg,0.3886mmol)、2-溴乙酸叔丁酯(86mg,0.4409mmol)在二氯甲烷(4mL)的溶液中添加N,N-二乙醇胺(62μL,0.4448mmol)。向反应混合物中添加DMSO(2mL),将所得混合物在室温下搅拌18小时。除去过量的溶剂。硅胶色谱法(梯度：0-20％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯(138mg,56％)。LCMS m/z 629.4[M+H]

步骤2.合成2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯(C45)

向2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯C44(138mg,0.2195mmol)和2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯(C47)(132mg,0.2197mmol)在THF(10mL)的混合物中添加NaHCO

还获得2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯C45(36mg,26％)LCMS m/z643.55[M+H]

步骤3.制备2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸(123)和-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸(124)

将2-[2-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸叔丁酯C45(36mg,0.05601mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液用TFA(1mL,12.98mmol)处理1小时。除去过量的溶剂。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物123 2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸(盐酸盐)(123)(4mg,25％)。

化合物124 2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸(盐酸盐)(124)(3mg,19％)。

化合物125和化合物126

2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[ENANT-1](125)和2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[ENANT-2](126)

使用制备C43和化合物123和124中描述的方法，从C41制备化合物125和126。

化合物125:2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[ENANT-1](125).

化合物126:2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]-5-氧代-6-氮杂螺[3.4]辛-6-基]乙酸[ENANT-2](126).1H NMR(300MHz,氯仿-d+甲醇-d

化合物127

3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(127)

步骤1.合成3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(C49)

在小瓶中，8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉(三氟乙酸盐)(350mg,0.5694mmol)和3-羟基环丁烷羧酸(200mg,1.722mmol)溶解在DMSO(6mL)。然后，在室温和氮气下，添加NaH(140mg的60％重量/重量，3.500mmol)。将反应搅拌1小时。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。将含有产物的级分合并，并真空蒸发乙腈。用CHCl

步骤2.合成3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(127)

在配备有机械搅拌器和温度探头的3L四颈烧瓶中，在室温下向3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(二环己胺)(28.2g,41.17mmol)在二氯甲烷(560mL)的溶液/悬浮液中添加Et

化合物128

3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸膦酰氧基甲酯(128)

步骤1.合成3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸二叔丁氧基磷酰氧基甲酯(C50)

在室温下，向3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(735mg,1.460mmol)在DMF(12mL)的溶液中添加NaI(68mg,0.4537mmol)、DIPEA(0.80mL,4.593mmol)和二叔丁基氯甲基磷酸酯(950mg,3.673mmol)。将混合物加热至75℃。2.5小时后，添加另外的DIPEA(1.0mL,5.741mmol)和二叔丁基氯甲基磷酸酯(800mg,3.093mmol)。将反应物在75℃下再搅拌2.5小时，然后冷却至室温。混合物在水和EtOAc(各80mL)之间分配。分离有机层，用5wt％柠檬酸水溶液、水、盐水(各80mL)洗涤，干燥(MgSO

步骤2.合成3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸膦酰氧基甲酯(128)

在室温下，向3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸二叔丁氧基磷酰氧基甲酯(596mg,0.8212mmol)在二氯甲烷(40mL)的溶液中添加TFA(26mL)。将混合物搅拌2小时，然后在旋转蒸发器上浓缩(60℃)。将残余物溶解在MeOH(5mL)中，并纯化。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)，然后冻干得到产物。将粉末在水(10mL)中制浆45分钟，然后过滤，用水(10mL)洗涤。在抽吸下干燥30分钟，然后在旋转蒸发器(2毫巴，60℃)上干燥1小时，得到3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸膦酰氧基甲酯(192mg,40％)，为黄色粉末。

化合物129

3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(2-膦酰氧基乙氧羰基)吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(129)

步骤1.合成3-[1-(2-二叔丁氧基磷酰氧基乙氧羰基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(C51)

在0℃和氮气下，向3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(188mg,0.4452mmol)在THF(10mL)的溶液中添加KOtBu(1.4mL的1M,1.400mmol)(在THF中的溶液)，得到黄色固体的悬浮液，搅拌受阻。添加2-二叔丁氧基磷酰氧乙基(2,5-二氧基吡咯烷-1-基)碳酸酯(540mg,1.366mmol)(为固体)，反应混合物颜色变淡红色，约5分钟后消耗掉黄色固体。总共8分钟后，用饱和NH

步骤2.合成3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(2-膦酰氧基乙氧羰基)-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(129)

在室温下，向3-[1-(2-二叔丁氧基磷酰氧基乙氧羰基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(240mg,0.3430mmol)在DCM(10mL)的溶液中添加TFA(3mL)。将反应混合物在室温下搅拌45分钟，然后浓缩。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(2-膦酰氧基乙氧羰基)吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基环丁烷羧酸(三氟乙酸(0.5))(70mg,31％)，为浅淡黄色固体。

化合物130

2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]乙氧基]乙酸(130)

根据制备化合物2所述的方法(使用NaH将2-(2-羟基乙氧基)乙酸叔丁酯添加到S13,然后串联THP脱保护和用HCl进行酯水解)，从S13分两步制备化合物130。2-[2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]乙氧基]乙酸(8.4mg,37％)。

化合物131

(2S,4R)-1-乙酰基-4-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]吡咯烷-2-甲酸(131)

根据针对制备化合物2(2S,4R)-1-乙酰基-4-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]吡咯烷-2-甲酸(20.3mg,55％)所述的方法，从S13分两步制备化合物131。

化合物132

2-[[3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羰基]氨基]丙酸(132)

使用针对制备化合物30所述的方法，通过两步HATU偶联，从化合物127制备化合物132。在第二步中，通过用NaOH水解除去乙酯基团。2-[[3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羰基]氨基]丙酸(43mg,54％)，为无色固体。

化合物133

3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(133)

使用针对制备化合物1所述的方法从C11制备化合物133。通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含有0.2％甲酸)纯化，得到产物。获得浅黄色固体。3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(22.7mg,35％)。

化合物134

3-[[6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(134)

如针对制备化合物27所述，从S15和3-羟基环丁烷羧酸甲酯制备化合物134。将KOtBu用作置换反应中的碱。使用NaOH水解甲酯，然后对THP基团进行TFA脱保护，得到产物。

化合物135

4-[[6-异丙基-5-(2-甲基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(135)

使用针对化合物6所述的方法，从S14和羟基苯甲酸酯制备化合物135。

化合物136

3-[[6-异丙基-5-(2-甲氧基-4-吡啶基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(136)

通过使用DMSO中的NaH将3-羟基环丁烷羧酸酯添加到S16中来制备化合物136。

化合物137

3-[[5-(4-氟苯基)-6-(1-羟基环丙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(137)

通过使用DMSO中的NaH将3-羟基环丁烷羧酸酯添加到S17中来制备化合物137。使用Pd(OH)

化合物138

4-[[5-(4-氟苯基)-6-(1-羟基环丙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(138)

通过使用DMSO中的NaH将3-羟基环丁烷羧酸酯添加到S17中来制备化合物138。使用Pd(OH)

化合物139

3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-(1-羟基环丙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(139)

通过使用DMSO中的NaH将3-羟基环丁烷羧酸酯添加到S18中来制备化合物139。使用Pd(OH)

化合物140

3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-[1-(三氟甲基)环丙基]-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(140)

通过使用NaH在DMSO中将3-羟基环丁烷羧酸酯添加到S19中来制备化合物140。

化合物141

3-[[6-(1,1-二氟乙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(141)

从S20开始分两步制备化合物141。通过用DABCO和TFAA处理，将化合物S20转化为8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1,1-二氟乙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉。使用DMSO中的NaH将3-羟基环丁烷羧酸添加到8-(4-氮杂-1-氮鎓双环[2.2.2]辛-1-基)-6-(1,1-二氟乙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉中，得到产物。3-[[6-(1,1-二氟乙基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸。

化合物142

3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-(1-甲氧基环丁基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(142)

如针对制备化合物127所述，从S21和3-羟基环丁烷羧酸制备化合物142。在THP脱保护步骤中使用HCl。

化合物143

3-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-甲氧基-2-甲基-丙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]环丁烷羧酸(143)

如针对制备化合物127所述，从S22和3-羟基环丁烷羧酸制备化合物143。在THP脱保护步骤中使用HCl。

化合物144

4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(144)

步骤1.合成4-[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基苯甲酸乙酯(C42)

向小瓶中添加4-羟基苯甲酸乙酯(73.8mg,0.4441mmol)、[6-(2-苄氧基-1,1-二甲基-乙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]三氟甲磺酸酯(100mg,0.1480mmol)、Pd(OAc)

步骤2.合成4-[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基苯甲酸乙酯(C43)

4-[6-(2-苄氧基-1,1-二甲基-乙基)-5-(3,4-二氟苯基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基苯甲酸乙酯溶解在MeOH(5mL)中。The solution wastransferred into a vial containing Pd(7.87mg,0.007395mmol)。用H

步骤3.合成4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸(144)

向小瓶中添加4-[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基苯甲酸乙酯(15mg,0.02191mmol)，然后添加HCl(1000μL的4M,4.000mmol)的1,4-二噁烷(500μL)溶液。将反应物在室温下搅拌2小时。将反应混合物倒入水中，用NaHCO

向4-[[5-(3,4-二氟苯基)-6-(2-羟基-1,1-二甲基-乙基)-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-8-基]氧基]苯甲酸乙酯在THF(1.2mL)/MeOH(0.4mL)/H

制备T1和T2

5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-8-鎓(T1)和7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T2)

步骤1.合成4-[(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二氧杂环己烷-5-亚基)甲氨基]-2-氟-苯甲酸甲酯

将2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮(25.562g,177.36mmol)、三甲氧基甲烷(18.821g,177.36mmol)和4-氨基-2-氟-苯甲酸甲酯(25g,147.80mmol)在乙醇(50mL)中的悬浮液回流3小时，然后在室温下再搅拌2小时。将所得固体沉淀滤出，用乙醇洗涤，得到产物。4-[(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-亚基)甲基氨基]-2-氟-苯甲酸甲酯(45g,92％)。

步骤2.合成5-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯7-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯

在220

步骤3.合成3-溴-7-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯和3-溴-5-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯(D5)

将7-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯(29g,115.38mmol)D3和5-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯D4(29.000g,115.38mmol)在DMF(200mL)中的区域异构体混合物冷却至0℃，并分批添加将1-溴吡咯烷-2,5-二酮(20.536g,115.38mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。在搅拌条件下，用冰冷水淬灭反应。过滤出固体并用冷水洗涤。将化合物真空干燥，得到3-溴-7-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯D5(32g,49％)LCMS m/z 300.0[M+H]

步骤4.合成3-溴-4-氯-7-氟-喹啉-6-甲酸甲酯和3-溴-4-氯-5-氟-喹啉-6-甲酸甲酯(D6)

将3-溴-7-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯(30g,89.976mmol)和3-溴-5-氟-4-氧代-1H-喹啉-6-甲酸甲酯(30.000g,89.976mmol)的区域异构体混合物冷却至0℃，滴加亚硫酰氯(107.05g,65.635mL,899.76mmol)，然后添加DMF(6.58g,6.97mL,89.976mmol)。将混合物回流4小时真空浓缩混合物，用饱和NaHCO

用4％EtOAc/己烷洗脱，得到第二区域异构体，3-溴-4-氯-5-氟-喹啉-6-甲酸甲酯(17g,59％)。

步骤5.合成4-氯-7-氟-3-异丙烯基-喹啉-6-甲酸甲酯(D7)

将3-溴-4-氯-7-氟-喹啉-6-甲酸甲酯D6(8.45g,26.528mmol)、K

步骤6.合成7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙烯基-喹啉-6-甲酸(D8)

将4-氯-7-氟-3-异丙烯基-喹啉-6-甲酸甲酯(7g,25.0mmol)和(4-氟苯基)硼酸(6.3g,45.05mmol)溶解在1,4-二噁烷(70mL)中，并向其中添加K

步骤7：合成[7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙烯基-6-喹啉基]甲醇(D9)

向7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙烯基-喹啉-6-甲酸(1g,3.0740mmol)在THF(15mL)中的溶液添加Et

步骤7.合成[7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙烯基-6-喹啉基]甲醇(D9)

向LiAlH

步骤8.合成[7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-喹啉基]甲醇(D10)

将[7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙烯基-6-喹啉基]甲醇(1g,3.2121mmol)在乙醇(10mL)中的搅拌溶液脱气，并添加Pd/C(500mg,4.6984mmol)。将混合物在室温下在氢气中在气球压力下搅拌12小时。过滤反应，用EtOAc(30mL)洗涤，浓缩。通过硅胶色谱法(梯度：0-30％EtOAc/庚烷)纯化，得到产物。[7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-喹啉基]甲醇(975mg,93％)。

步骤9.合成7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉-6-甲醛(D11)

15分钟后，在-78 0C下，向草酰氯(785.85mg,0.5401mL,6.1914mmol)在二氯甲烷(10mL)的搅拌溶液中添加DMSO(967.54mg,0.8788mL,12.383mmol)，添加[7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-喹啉基]甲醇(970mg,3.0957mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液。然后将反应混合物在-78℃下搅拌2小时。添加三乙胺(1.5662g，2.1573mL,15.478mmol)，并将反应在-78℃下搅拌30分钟。然后将反应混合物在水(10mL)和二氯甲烷(20mL×2)之间分配，用盐水洗涤合并的有机级分，干燥(Na

通过硅胶色谱法(梯度：0-10％EtOAc/庚烷)纯化，得到产物。7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉-6-甲醛(785mg,80％)。

步骤10.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D12)

将密封管中的7-氟-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉-6-甲醛(2.8g,8.9938mmol)、O-甲基羟胺盐酸盐(901.40mg,10.793mmol)和K

步骤11.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-8-鎓(T1)

在小瓶中，将5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(200mg,0.6550mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液在冰浴中冷却。将小瓶置于冰浴中，添加mCPBA(225mg,1.304mmol)。将反应物温热至室温并搅拌16小时。通过添加饱和NaHCO

步骤12.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T2)

在小瓶中，称取5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-8-鎓(790mg,2.458mmol)并悬浮于POCl

制备T3

7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉-6-甲醛(T3)

步骤1.合成N-(3-溴-4-甲基-苯基)-3-甲基-丁酰胺(D14)

将3-溴-4-甲基-苯胺(83g,446.1mmol)和DIPEA(165mL,947.3mmol)在二氯甲烷(500mL)中的溶液在冰浴上冷却。分批添加3-甲基丁酰氯(60mL,492.1mmol)。添加后，移开冷却浴，将混合物搅拌30分钟。2小时后，混合物用盐水、1N HCl(70mL)和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。用二氯甲烷(2×500ml)再萃取含水洗涤液。用Na

步骤2.合成N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]-3-甲基-丁酰胺(D16)

将N-(3-溴-4-甲基-苯基)-3-甲基-丁酰胺(35.1g,129.9mmol)、2-(4-氟苯基)-2-氧代-乙酸(24.3g,144.5mmol)和Pd(TFA)

步骤3.合成7-溴-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-甲基-1H-喹啉-2-酮(D17)

向N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]-3-甲基-丁酰胺(18.39g,46.88mmol)在DMF(320mL)的溶液中添加LiOMe(7.12g,187.5mmol)。将混合物在80℃(内部)加热19小时。将混合物在冰浴中冷却，倒入水(500mL)中，用6M HCl(30mL)酸化。用水将混合物稀释至2L，过滤。用水(2x)洗涤所得固体，然后用庚烷洗涤。丢弃含水滤液和庚烷洗涤物。将固体在50℃下真空干燥过夜，得到产物。7-溴-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-甲基-1H-喹啉-2-酮(13.8g,79％)

步骤4.合成7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-甲基-喹啉(D18)

将7-溴-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-甲基-1H-喹啉-2-酮(13.8g,36.87mmol)在磷酰氯(102.6mL,1.101mol)中的悬浮液在100℃(沙浴)下加热5小时。将混合物在真空下蒸馏，并与甲苯(100mL)共蒸馏至干。将残余物悬浮在冰水中。添加碳酸氢钠水溶液至pH～8，用二氯甲烷(3x)萃取。用Na

7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-甲基-喹啉(11.18g,77％)。

还分离出该反应的副产物是7-溴-2-氯-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-喹啉(D61)。7-溴-2-氯-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-喹啉(170mg,1％)。

步骤5.合成7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉-6-甲醛(T3)

将7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-甲基-喹啉(11.07g,28.19mmol)、1-溴吡咯烷-2,5-二酮(6.5g,36.52mmol)和AIBN(630mg,3.837mmol)在2-二氯乙烷(110mL)中的溶液在空气下加热回流3小时。将混合物浓缩。通过硅胶色谱法(梯度：0-100％二氯甲烷/庚烷)纯化，得到产物。7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉(12.4g,40％)。LCMS m/z 469.92[M+H]

7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-喹啉溶解在CH

制备T4

7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T4)

步骤1.合成7-甲基-1H-吲唑-6-胺(D20)

在烧瓶中，将碳/钯(750mg的10％w/w,0.7048mmol)悬浮在EtOH(10mL)中。然后，添加7-甲基-6-硝基-1H-吲唑(5000mg,28.22mmol)的EtOH(200mL)溶液。将烧瓶用氮气吹扫，然后用氢气吹扫。将反应在室温下搅拌18小时。将混合物通过玻璃纤维膜过滤，并真空蒸发挥发物以获得膏状固体。7-甲基-1H-吲唑-6-胺(4.120g,99％)。

步骤2.合成3-甲基-2-[(7-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]丁酸甲酯

3-甲基-2-[(7-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]丁酸(D22)

部分A：将HATU(13.1g,34.45mmol)添加到7-甲基-1H-吲唑-6-胺(4g,27.18mmol)、2-甲氧基羰基-3-甲基-丁酸(6.53g,40.77mmol)和DIPEA(12mL,68.89mmol)在DMF(30mL)的搅拌溶液中。将溶液在室温下搅拌24小时。将溶液倒入水(50mL)中，将水层用EtOAc(3×10mL)萃取。干燥合并的有机层，减压浓缩，得到黄色固体。将固体悬浮在乙醚(200ml)中并过滤。用另外的乙醚洗涤固体，并真空干燥，得到3-甲基-2-[(7-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]丁酸甲酯(7.5g,95％)。LCMS m/z 290.6[M+H]

部分B:LiOH(6.5g,271.4mmol)添加到3-甲基-2-[(7-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]丁酸甲酯(6g)在MeOH(70mL)、THF(20mL)和水(10mL)的搅拌溶液中。溶液在室温下搅拌3小时，减压除去溶剂。将粗产物溶解于水(50mL)并用6MHCl酸化。用EtOAc(3×100mL)萃取白色沉淀。干燥合并的有机层，减压浓缩，得到3-甲基-2-[(7-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]丁酸(7g,91％)，为黄色固体。

步骤3.合成6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-5,7-二醇(D23)

将3-甲基-2-[(7-甲基-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]丁酸(650mg,2.361mmol)悬浮在伊顿试剂(6mL,37.81mmol)中，并将混合物在150℃下加热3小时。将溶液倒入冰/水中，用6N NaOH缓慢碱化。形成棕色沉淀，并通过过滤收集。将棕色固体在60℃下干燥2小时，得到6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-5,7-二醇(590mg,93％)，为棕色粉末。

步骤4.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T4)

部分A.在烧瓶中，称取6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-5,7-二醇(1.00g,3.887mmol)并溶解在二氯甲烷(15mL)和DMF(5mL)的混合物中。然后，添加Et

部分B.将(7-羟基-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-5-基)三氟甲磺酸酯与(4-氟苯基)硼酸(1.010g,7.218mmol)、Pd(PPh

部分C.5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮悬浮在磷酰氯(24.0mL,257.5mmol)中。将悬浮液在100℃下加热20分钟。添加水和NaOH将pH值调节至～7。将混合物用二氯甲烷萃取三次。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。所得产物为绿黄色固体，其无需进一步纯化即可使用。7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(760mg,49％)。LCMS m/z 354.26[M+H]

制备T5和T6

5,7-二氯-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T5)和

1-[7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-吡唑并[4,3-g]喹啉-1-基]-2,2-二甲基-丙-1-酮(T6)

步骤1.合成5,7-二氯-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T5)

6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-5,7-二醇(2g,7.773mmol)悬浮在POCl

步骤2.合成5-氯-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-醇

将HCl(25mL的12M,300.0mmol)添加到5,7-二氯-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(3.5g,11.13mmol)在1,4-二噁烷(100mL)的搅拌的黄色悬浮液中。将溶液在100℃下加热2小时，然后倒入冰/水中形成白色沉淀。过滤沉淀并用乙醚洗涤。将固体冻干24小时，形成5-氯-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-醇(2.8g,86％)，为棕色固体。LCMS m/z 276.14[M+H]

步骤3.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-醇(D25)

将Pd(PPh

步骤4.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T4)

将5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-醇(220mg,0.6560mmol)在POCl

步骤5.合成1-[7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-吡唑并[4,3-g]喹啉-1-基]-2,2-二甲基-丙-1-酮(T6)

在烧瓶中，将7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(120mg,0.3392mmol)溶解在THF(3mL)中。添加DIPEA(180μL,1.033mmol)，并将混合物在室温下搅拌10分钟。然后，滴加2,2-二甲基丙酰氯(130μL,1.057mmol)。将反应在室温下搅拌20小时。通过真空蒸发挥发物来对反应进行后处理。添加水和二氯甲烷，并将混合物用二氯甲烷(x 3)萃取。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。通过硅胶色谱法(梯度：0-2％EtOAc/庚烷)纯化，得到产物。1-[7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-吡唑并[4,3-g]喹啉-1-基]-2,2-二甲基-丙-1-酮(143.7mg,97％)。LCMS m/z 438.35[M+H]

制备T7

9-氟-5-羟基-6-异丙基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(T7)

步骤1.合成6-叠氮基-7-氟-1H-吲唑(D27)

在微波小瓶中，将6-溴-7-氟-1H-吲唑(1000mg,4.651mmol)、NaN

步骤2.合成7-氟-1H-吲唑-6-胺(D28)

在烧瓶中，称取6-叠氮基-7-氟-1H-吲唑(120mg,0.6774mmol)并溶解在乙醇(7mL)中。然后，添加碳/钯(36mg,0.03383mmol)。将烧瓶用氮气吹扫三次，然后置于氢气气氛下。将反应在室温下搅拌16小时。通过短的

步骤3.合成2-[(7-氟-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸甲酯(D29)

在烧瓶中，7-氟-1H-吲唑-6-胺(90mg,0.5955mmol)悬浮在二氯甲烷(6mL)中。然后，添加2-甲氧羰基-3-甲基丁酸(160mg,0.8991mmol)，接着添加HATU(270mg,0.7101mmol)，最后添加DIPEA(300μL，1.722mmol)。将混合物在室温下搅拌30分钟。通过添加水和二氯甲烷对反应进行处理，然后用二氯甲烷(x 3)萃取。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。将粗品通过快速柱色谱法通过硅胶色谱法(梯度：0-7％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。2-[(7-氟-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸甲酯(224.2mg,90％,纯度70％)。LCMS m/z 282.05[M+H]

步骤4.合成2-[(7-氟-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸(D30)

在烧瓶中，添加2-[(7-氟-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸甲酯(1350mg,3.237mmol)和KOH(545mg,9.714mmol)并溶解在EtOH(27mL)和H

步骤5.合成9-氟-5-羟基-6-异丙基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(D31)

在小瓶中，称取2-[(7-氟-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸(135mg,0.4834mmol)并悬浮在伊顿试剂(2000μL，12.60mmol)中。将反应在80℃下加热96小时(当在更高温度下加热时，脱羧作用超过环化作用)。通过添加盐水，并用6M NaOH水溶液将pH调节至7，并用CHCl

步骤6.合成(9-氟-6-异丙基-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-5-基)三氟甲磺酸酯(D32)

在烧瓶中，称取9-氟-5-羟基-6-异丙基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(210mg,0.7835mmol)并溶解在DMF(6mL)中。然后，添加Et

步骤7.合成9-氟-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(D33)

在小瓶中，将(9-氟-6-异丙基-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-5-基)三氟甲磺酸酯(276mg,0.70mmol)、4-氟苯基硼酸(300mg,2.14mmol)、Na

步骤8.合成7-氯-9-氟-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T7)

部分A.在小瓶中，称取9-氟-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(78mg,0.2299mmol)并悬浮在磷酰氯(1.0mL,10.73mmol)中。将反应在100℃下加热5分钟。通过添加水和二氯甲烷对反应进行后处理。用二氯甲烷(x 3)萃取混合物。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。将粗品无需进一步纯化即可使用。LCMS m/z 358.22[M+H]

部分B.在烧瓶中，将来自部分A的粗品重悬于二氯甲烷(2.5mL)中。然后，添加3,4-二氢-2H-吡喃(105μL,1.15mmol)，接着添加4-甲基苯磺酸一水合物(2.5mg,0.01314mmol)。将反应在室温下搅拌30分钟。添加水和二氯甲烷。用二氯甲烷(x 3)萃取混合物。将有机相通过相分离器过滤，合并，将挥发物真空蒸发。通过硅胶柱色谱法(梯度：0-20％的EtOAc/庚烷)纯化，得到产物。7-氯-9-氟-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡唑并[4,3-g]喹啉(103.4mg,100％)LCMS m/z 442.35[M+H]

制备T8和T9

7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-四氢吡喃-4-基-喹啉(T8)和7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-喹啉(T9)

步骤1.N-(3-溴-4-甲基-苯基)-2-四氢吡喃-4-基-乙酰胺(D34)

在含有溶于DMF(21.6mL)中的3-溴-4-甲基苯胺(1.78g,9.376mmol)的烧瓶中，添加2-四氢吡喃-4-基乙酸(1.38g,9.381mmol)、HATU(4.26g,11.20mmol)和DIPEA(5.6mL,32.15mmol)。然后将溶液在室温下搅拌过夜，用大量水淬灭并用AcOEt稀释。分离各相，水相用AcOEt萃取两次。用Na

步骤2.N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]-2-四氢吡喃-4-基-乙酰胺(D35)

向小瓶中装入N-(3-溴-4-甲基-苯基)-2-四氢吡喃-4-基-乙酰胺(886mg,2.838mmol)、2-(4-氟苯基)-2-氧代-乙酸(716mg,4.259mmol)、双[(2,2,2-三氟乙酰基)氧基]钯(94mg,0.2827mmol)和硫酸氢铵(1.3g,5.697mmol)。将小瓶密封并用一个真空/N

步骤3.合成7-溴-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-四氢吡喃-4-基-1H-喹啉-2-酮(D36)

向N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]-2-四氢吡喃-4-基-乙酰胺(1.23g,2.832mmol)在DMF(9.4mL)的溶液中添加LiOMe(419mg,11.03mmol)。

将混合物在80℃下加热过夜。将混合物冷却至室温，倒入饱和NH

步骤4.合成7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-四氢吡喃-4-基-喹啉(D37)

将7-溴-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-四氢吡喃-4-基-1H-喹啉-2-酮(3.9g,9.163mmol)在磷酰氯(12.8mL,137.3mmol)中的悬浮液在100℃下加热3小时。将混合物蒸发至干，并与甲苯共蒸发两次。将残余物溶解在二氯甲烷中，并添加过量的饱和NaHCO

步骤5.合成7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-喹啉(D38)

将7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-四氢吡喃-4-基-喹啉(1g,2.169mmol)、CBr

步骤6.合成7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-喹啉-6-甲醛(T8)

向7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-喹啉(906mg,1.376mmol)在乙腈(13.8mL)的溶液中添加6种活化的分子筛和4-甲基吗啉N-氧化物(322mg,2.749mmol)。将反应在室温下搅拌2小时，然后过滤。蒸发滤液，通过硅胶色谱法(梯度：0-100％EtOAc/二氯甲烷)纯化，得到产物。7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-喹啉-6-甲醛(644mg,99％)。LCMS m/z 448.13[M+H]

步骤7.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-1-(对甲苯磺酰基)-6-四氢吡喃-4-基-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(T9)

向7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-喹啉-6-甲醛(215mg,0.4552mmol)在乙醇(2.3mL)的溶液中添加4-甲基苯磺酰肼(87mg,0.4531mmol)和乙酸(26μL,0.4572mmol)。

将反应在50℃下加热1小时。LCMS表明形成了所需的N-[(E)-[7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-四氢吡喃-4-基-6-喹啉基]亚甲基氨基]-4-甲基-苯磺酰胺(280mg,100％)。LCMSm/z 616.13[M+1]

将白色固体转移到装有铜氧基铜(33mg,0.2306mmol)的小瓶中。将小瓶密封并用一个真空/N

制备T10

7-氯-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸(T10)

步骤1.合成N-(1H-吲唑-6-基)乙酰胺(D40)

在配备有加料漏斗和温度探头的三颈烧瓶中，在室温下，历经2.25小时向1H-吲唑-6-胺(100.2g,752.53mmol)在无水THF(1L)中的悬浮液中滴加乙酸酐(78.986g,73mL,773.70mmol)。将混合物在室温下再搅拌20小时。然后在室温下，历经15分钟添加氢氧化钠(32.98g,824.56mmol)在水(500mL)中的溶液。将混合物剧烈搅拌30分钟。在减压下移出THF。添加更多的水(180mL)并将悬浮液在0℃下搅拌1小时。过滤固体，用水(2×100mL)洗涤并在真空下干燥，得到N-(1H-吲唑-6-基)乙酰胺(128.82g，98％)，为米色固体。

注意：历经2.25小时滴加乙酸酐。在此添加过程中，内部温度从18℃升高到29℃，在添加NaOH水溶液的过程中，内部温度达到33℃。

步骤2.合成N-[1-(苯磺酰基)吲唑-6-基]乙酰胺(D41)

在室温下，向N-(1H-吲唑-6-基)乙酰胺(31.8g,181.52mmol)在无水二氯乙烷(400mL)中的悬浮液中添加无水吡啶(29.340g,30mL,370.92mmol)和苯磺酰氯(33.216g,24mL,188.06mmol)。将混合物加热至25-27℃,并在此温度下保持72小时。添加更多的苯磺酰氯(6.2280g,4.5mL,35.3mmol)，在25-27℃下再过24小时后，减压除去溶剂。将固体在0℃下在水(1×250mL)中研磨20分钟，然后过滤，用水(3×75mL)洗涤，并在真空下干燥。将残余物在MTBE(1×125mL)中以及在MTBE和THF的混合物(125mL/10mL)中研磨，过滤并干燥，得到N-[1-(苯磺酰基)吲唑-6-基]乙酰胺(56.04g,96％)，为粉红色固体。

步骤3.合成N-[1-(苯磺酰基)-5-(4-氟苯甲酰基)吲唑-6-基]乙酰胺(D42)

在烧瓶中，添加N-[1-(苯磺酰基)吲唑-6-基]乙酰胺(8.3g,26.32mmol)、2-(4-氟苯基)-2-氧代-乙酸(5.300g,31.52mmol)、双[(2,2,2-三氟乙酰基)氧基]钯(1.750g,5.264mmol)和磺氧基硫酸氢氨(24.00g,105.2mmol)并悬浮在1-甲氧基-2-(2-甲氧基乙氧基)乙烷(110mL)。将反应在65℃下搅拌5小时。添加另外0.2当量的催化剂，并搅拌另外40小时的反应。

通过添加水和二氯甲烷对反应进行后处理。将混合物用二氯甲烷萃取三次。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。用冷水、冷甲醇和庚烷研磨粗品。获得棕色固体。N-[1-(苯磺酰基)-5-(4-氟苯甲酰基)吲唑-6-基]乙酰胺(12.59g,77％)。LCMSm/z 438.3[M+H]

步骤4.合成(6-氨基-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮(D43)

向N-[1-(苯磺酰基)-5-(4-氟苯甲酰基)吲唑-6-基]乙酰胺(2.45g,5.5335mmol)在水(20mL)的悬浮液中添加浓氯化氢(40mL的12M,480.00mmol)(12M的水溶液)。将混合物加热至85℃并保持17小时。冷却至室温后，添加更浓的氯化氢(15mL的12M，180.00mmol)(12M水溶液)。将混合物加热至95℃,并在此温度下保持7小时。将其冷却至室温并搅拌过夜。冷却至0-5℃后，滴加25％w/w的NaOH水溶液，然后滴加1N的NaOH水溶液，将pH调节至～pH 6-7。将沉淀的固体过滤，用水(3×15mL)洗涤，然后真空干燥，得到((6-氨基-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮(1.41g,100％)，为棕色固体。

步骤5.合成5-(4-氟苯基)-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸甲酯(D44)

部分A.在小瓶中，称取(6-氨基-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮(2000mg,7.555mmol)并悬浮在二氯甲烷(30mL)中。然后，添加吡啶(610μL,7.542mmol)并将混合物在室温下搅拌5分钟。此后，滴加3-氯-3-氧代-丙酸甲酯(1.550g,11.35mmol)。将反应搅拌1小时。添加额外当量的酰氯。将反应在室温下再搅拌1小时。通过添加水和CHCl

部分B.将来自部分A的粗产物重悬于DMF(30mL)中并添加K

步骤6.合成5-(4-氟苯基)-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸(D45)

在小瓶中，5-(4-氟苯基)-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸甲酯(650mg,1.912mmol)悬浮在EtOH(12.0mL)和水(4mL)的混合物中。然后，添加NaOH(385mg,9.626mmol)。将反应在70℃加热4小时。在此时间之后，LC-MS显示出产物的形成和起始物质的几乎完全消耗。将混合物真空浓缩以除去挥发物。将粗产物悬浮在水中，并通过添加1MHCl沉淀，直到pH为～pH 2。将沉淀过滤，用冷水研磨，得到产物，为膏状固体。5-(4-氟苯基)-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸(615.2mg,100％)

步骤7.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸(T10)

在小瓶中，称取5-(4-氟苯基)-7-氧代-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸(100mg,0.2898mmol)并悬浮在POCl

制备T11

7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-甲基磺酰基-喹啉(T11)

步骤1.合成N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]乙酰胺(D47)

将N-(3-溴-4-甲基-苯基)乙酰胺(62.73g,275.0mmol)、2-(4-氟苯基)-2-氧代-乙酸(63.37g,376.9mmol)和氨磺氧基硫酸氢盐(125g,547.8mmol)在二甘醇二甲醚(750mL)中的悬浮液用氮气鼓泡。添加Pd(TFA)

步骤2.合成(2-氨基-4-溴-5-甲基-苯基)-(4-氟苯基)甲酮(D48)

向N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]乙酰胺(1.92g，5.483mmol)在EtOH(15mL)中的悬浮液中添加HCl水溶液(10mL,6M，60.00mmol)，并将反应在70℃(内部温度)下加热5小时。将反应混合物冷却至室温过夜。过滤收集产生的沉淀，用水洗涤固体滤饼，在高真空下干燥，得到产物，为黄色固体。1.14g.(2-氨基-4-溴-5-甲基-苯基)-(4-氟苯基)甲酮(盐酸盐)(1.70g,90％)。LCMS m/z 308.08[M+H]

步骤3.合成7-溴-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-甲基磺酰基-1H-喹啉-2-酮(D49)

部分A.将(2-氨基-4-溴-5-甲基-苯基)-(4-氟苯基)甲酮(511mg,1.562mmol)和2-甲基磺酰基乙酸(250mg,1.810mmol)在DMF(5mL)中的溶液用HATU(804mg,2.115mmol)和DIPEA(750μL,4.306mmol)在室温下处理1小时，然后在60℃下处理1小时。将混合物分配在含水NH

部分B.向N-[5-溴-2-(4-氟苯甲酰基)-4-甲基-苯基]-2-甲基磺酰基-乙酰胺(1.02g,1.089mmol)在DMF(8mL)的溶液中添加LiOMe(86mg,2.265mmol)。将混合物在70℃(内部)加热15分钟。将混合物在高真空下蒸发至干。添加饱和NH

步骤4.合成7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-甲基磺酰基-喹啉(D50)

将7-溴-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-甲基磺酰基-1H-喹啉-2-酮(4.83g,11.77mmol)在磷酰氯(20mL,214.6mmol)中的悬浮液加热回流。大约1小时后，悬浮液变成溶液。3小时后，蒸发混合物，与甲苯共蒸发至干。将残余物悬浮在冰水中。添加碳酸氢钠水溶液，直到混合物的pH值为～8，然后用二氯甲烷(3x)萃取混合物。用Na

步骤5.合成7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-甲基磺酰基-喹啉-6-甲醛(T11)

部分A.将7-溴-2-氯-4-(4-氟苯基)-6-甲基-3-甲基磺酰基-喹啉(2.92g,6.811mmol)、1-溴吡咯烷-2,5-二酮(1.50g,8.428mmol)和AIBN(150mg,0.9135mmol)在1,2-二氯乙烷(60mL)中的溶液在空气下加热回流23小时。添加AIBN(100mg)和N-溴琥珀酰亚胺(500mg)。混合物在回流下搅拌24小时。将混合物浓缩至干燥。通过硅胶色谱法(梯度：0-50％EtOAc/庚烷)纯化，得到7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-甲基磺酰基-喹啉(2.91g,72％)。产物无需进一步纯化即用于部分B中。LCMS m/z 505.79[M+H]

部分B.将7-溴-6-(溴甲基)-2-氯-4-(4-氟苯基)-3-甲磺酰基-喹啉溶解在乙腈(50mL)中，添加

化合物145

4-[9-氟-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(145)

步骤1.合成(6-氨基-7-氟-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮(D52)

将Selectfluor(140mg,0.3952mmol)在乙酸(3mL)中的悬浮液滴加到6-氨基-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮(100mg,0.3918mmol)在乙酸(3mL)的溶液中。将反应在室温下搅拌18小时。浓缩反应物。添加水和二氯甲烷。将混合物用二氯甲烷(3x)萃取。将有机相通过相分离器，合并并真空浓缩。将粗品用于下一步骤。(6-氨基-7-氟-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮

步骤2.合成N-[7-氟-5-(4-氟苯甲酰基)-1-(2-四氢吡喃-4-基乙酰基)吲唑-6-基]-2-四氢吡喃-4-基-乙酰胺(D53)

将(6-氨基-7-氟-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮溶解在二氯甲烷(5mL)中，然后添加吡啶(40μL，0.4946mmol)，接着添加2-四氢吡喃-4-基乙酰氯(140μL，0.9746mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时。添加水和二氯甲烷。将混合物用二氯甲烷(3x)萃取。将有机相通过相分离器，合并并真空浓缩。粗产物无需进一步纯化即可进入下一步。N-[7-氟-5-(4-氟苯甲酰基)-1-(2-四氢吡喃-4-基乙酰基)吲唑-6-基]-2-四氢吡喃-4-基-乙酰胺LCMS m/z 526.12[M+H]

步骤3.合成9-氟-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(D55)

将(6-氨基-7-氟-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮溶解在DMF(4mL)中。然后，添加NaH(32mg,0.8001mmol)并将反应在70℃加热6小时。添加水和二氯甲烷。将混合物用二氯甲烷(3x)萃取。将有机相通过相分离器，合并并真空浓缩。将粗品通过快速柱色谱法(15.5gC18,0-50％的CH

标准程序A：用POCl

步骤4.合成7-氯-9-氟-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D56)

将9-氟-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(11.2mg,0.02937mmol)悬浮在反应瓶中的POCl

标准程序B：铃木偶联(Suzuki Coupling)

步骤5.合成4-[9-氟-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(145)

在小瓶中，将7-氯-9-氟-5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(7mg,0.01751mmol)、4-二羟硼基-3-甲氧基-苯甲酸(7mg,0.03572mmol)、Na

化合物146

4-[6-乙基磺酰基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(146)

步骤1.合成2-溴-N-[5-(4-氟苯甲酰基)-1H-吲唑-6-基]乙酰胺(D57)

向冷却至0℃的(6-氨基-1H-吲唑-5-基)-(4-氟苯基)甲酮(100mg,0.3863mmol)在无水二氯甲烷(2mL)中的悬浮液中添加溴乙酰溴(81.095mg,35μL，0.4018mmol)。将混合物在0℃下搅拌10分钟，然后在室温下搅拌5小时。在室温下添加另外的溴乙酰溴(23.170mg,10μL，0.1148mmol)，并将混合物搅拌18小时。减压除去溶剂，将残余物在真空下干燥，得到181mg 2-溴-N-[5-(4-氟苯甲酰基)-1H-吲唑-6-基]乙酰胺(氢溴酸)，为米色固体，其无需进一步纯化即可使用。LCMS m/z 376.0[M+H]

步骤2.合成6-乙基硫烷基-5-(4-氟苯基)-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(D58)

2-溴-N-[5-(4-氟苯甲酰基)-1H-吲唑-6-基]乙酰胺(262mg,0.5433mmol)溶解在DMF(4mL)中。然后，添加乙硫醇钠(90mg,1.070mmol)。将反应在70℃下搅拌3小时。添加水和二氯甲烷。将混合物用二氯甲烷萃取三次。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。将粗品重悬于水中，过滤并用冷水洗涤，得到膏状。固体6-乙基硫烷基-5-(4-氟苯基)-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(37.6mg,17％,纯度80％)。

步骤3.7-氯-6-乙基硫烷基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D59)

在小瓶中，将6-乙基硫烷基-5-(4-氟苯基)-1,8-二氢吡唑并[4,3-g]喹啉-7-酮(35mg,0.08422mmol)悬浮在POCl

步骤4.合成7-氯-6-乙基磺酰基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D60)在小瓶中，7-氯-6-乙基硫烷基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(30mg,0.08384mmol)溶解在CHCl

步骤5.合成4-[6-乙基磺酰基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(146)

将7-氯-6-乙基磺酰基-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(三氟乙酸盐)(18mg,0.03556mmol)、4-二羟硼基-3-甲氧基-苯甲酸(10mg,0.05103mmol)、Na

化合物147和化合物148

3-[[6-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]环丁烷羧酸(147)和3-[[6-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]环丁烷羧酸(148)

标准程序D：芳基甲基溴化和醛的形成

步骤1.合成7-溴-2-氯-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)喹啉-6-甲醛(D62)

将7-溴-2-氯-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-喹啉(157mg,0.3879mmol)、NBS(83mg,0.4663mmol)和四溴化碳(27mg,0.08142mmol)在CCl

标准程序E：将醇添加到氯吡啶

步骤2.合成6-异丙基-7-甲氧基-5-(4-甲氧基苯基)-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D62)

将将7-溴-2-氯-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)喹啉-6-甲醛(55mg,0.1314mmol)和3-羟基环丁烷羧酸甲酯(52mg,0.3996mmol)在THF(2mL)中的溶液用KOtBu(0.16mL的1M，0.1600mmol)在60℃下处理30分钟。将混合物冷却至室温，在EtOAc和饱和NH

标准程序F：甲苯磺酰基保护的吡唑形成

步骤3.合成3-[6-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基环丁烷羧酸甲酯(D63)

3-[[7-溴-6-甲酰基-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)-2-喹啉基]氧基]环丁烷羧酸甲酯溶解在EtOH(5mL)中，并在室温下用4-甲基苯磺酰肼(27mg,0.1450mmol)处理1小时。蒸发反应混合物。通过硅胶色谱法(梯度：0-30％EtOAc/庚烷)纯化，得到产物3-[[7-溴-3-异丙基-4-(4-甲氧基苯基)-6-[(E)-(对甲苯磺酰基亚肼基)甲基]-2-喹啉基]氧基]环丁烷羧酸甲酯(21mg,13％)LCMS m/z 680.51[M+H]

标准程序G：酯水解

步骤4.合成3-[[6-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]环丁烷羧酸[TRANS](147)和3-[[6-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]环丁烷羧酸[CIS](148)

将3-[6-异丙基-5-(4-甲氧基苯基)-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基环丁烷羧酸甲酯(15mg,0.008299mmol)在MeOH(3mL)、THF(1mL)、水(0.2mL)中的悬浮液用LiOH(50μL的5M,0.2500mmol)在50℃处理2小时。蒸发混合物，将残余物溶解在MeOH(1mL)中，用6N HCl(50μl)处理。通过反相HPLC纯化，方法:C18 Waters Sunfire柱(30x150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物149

(2S)-2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]丙酸(149)

标准程序H：PyBrop介导的胺向吡啶N-氧化物的加成

步骤1.合成(2S)-2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]丙酸苄酯(D65)

在密封管中，向5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-8-鎓(50mg,0.1556mmol)、(2S)-2-氨基丙酸苄酯；盐酸盐(100.68mg,0.4668mmol)在二氯甲烷(4mL)的搅拌溶液中添加DIPEA(100.55mg,0.1355mL,0.7780mmol)和PyBrop(217.61mg,0.4668mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷(5mL)、水(1mL)稀释，将有机相用Na

标准程序I:通过钯催化氢化除去苄基

步骤2.合成(2S)-2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]丙酸(149)

向(2S)-2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]丙酸苄酯(30mg,0.0622mmol)在乙醇(5mL)的搅拌溶液中用Ar吹扫脱气，并添加Pd/C(20mg,0.1879mmol)。将反应混合物在室温下在H

化合物150

(2R)-2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]丙酸(150)

使用针对化合物149所述的方法，从T1和(2R)-2-氨基丙酸苄酯盐酸盐制备化合物150。通过制备型HPLC纯化，得到产物化合物，为灰白色固体(2R)-2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]丙酸(34mg,31％)NMR(400MHz,DMSO-d

化合物151

1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]羟基氮杂环丁烷-3-甲酸(151)

标准程序H：胺向吡啶N-氧化物的PyBrop加成

步骤1.合成1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]羟基氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯(D66)

向5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧桥-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-8-鎓(183mg,0.5695mmol)、3-羟基氮杂环丁烷甲酸甲酯盐酸盐(1:1)(258.99mg,1.7085mmol)在二氯甲烷(7mL)和密封管中的溶液中添加DIPEA(368.02mg,0.4960mL,2.8475mmol)并在此时搅拌反应混合物，添加PyBrop(796.47mg,1.7085mmol)。将反应混合物在50℃下搅拌过夜。用二氯甲烷(10mL)稀释反应混合物，用水(5mL)洗涤，将有机级分用Na

步骤2.合成1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]羟基氮杂环丁烷-3-甲酸(151)

在0℃下，向1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]羟基氮杂环丁烷-3-甲酸甲酯(30mg,0.0717mmol)在THF(0.5mL)、甲醇(0.2mL)和水(0.1mL)的搅拌溶液中添加LiOH。将反应混合物在室温下搅拌4小时。将混合物浓缩，用水(2mL)稀释，然后用饱和柠檬酸溶液酸化。用乙酸乙酯(5ml×2)萃取化合物，经Na

化合物152

3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]环丁烷羧酸(152)

根据针对制备化合物151所述的方法，从T1和3-氨基环丁烷羧酸甲酯盐酸盐制备化合物152。通过制备型HPLC纯化得到产物，为灰白色固体3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氨基]环丁烷羧酸(7.5mg,31％)。

化合物153

(3S)-1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]吡咯烷-3-甲酸(153)

根据针对制备化合物151所述的方法，从T1和(3S)-吡咯烷-3-甲酸甲酯制备化合物153。通过制备型HPLC纯化得到产物，为灰白色固体(3S)-1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]吡咯烷-3-甲酸(10.5mg,42％)。

化合物154

(3R)-1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]吡咯烷-3-甲酸(154)

根据针对制备化合物151所述的方法，从T1和(3R)-吡咯烷-3-甲酸甲酯制备化合物154。通过制备型HPLC纯化得到产物，为灰白色固体。(3R)-1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]吡咯烷-3-甲酸(16mg,27％)。

化合物155

4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(155)

标准程序B：铃木偶联(Suzuki Coupling)

合成4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(155)

向7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(20mg,0.055mmol)、4-二羟硼基苯甲酸(25mg,0.1507mmol)和固体Na

化合物156

4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(156)

按照针对制备化合物155所述的标准程序B，从T2和4-二羟硼基-3-甲氧基-苯甲酸制备化合物156。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物157

3-氟-4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(157)

按照针对制备化合物155所述的标准方法B，从T2和4-二羟硼基-3-氟-苯甲酸制备化合物157。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物158

5-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-6-甲氧基-吡啶-2-甲酸(158)

根据标准程序B从T2制备化合物158。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 WatersSunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物159

4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酰胺(159)

根据标准程序B从T2制备化合物159。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 WatersSunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物160

4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-N-甲基-苯甲酰胺(160)

根据标准程序B从T2制备化合物160。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 WatersSunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物161

[4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯基]-吗啉代-甲酮(161)

根据标准程序B从T2制备化合物161。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 WatersSunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物162

5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-(6-甲基磺酰基-3-吡啶基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(162)

根据标准程序B从T2制备化合物162。通过反相HPLC纯化粗产物。方法：C18 WatersSunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物163和化合物164

3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸(163)和3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸(164)

步骤1.合成3-(5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)环丁烷-1-甲酸乙酯(D67)

在N

步骤2.合成3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸[ENANT-1](163)和3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸[ENANT-2](164)

将3-(5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)环丁烷-1-甲酸乙酯悬浮在EtOH(1.5mL)和水(0.5mL)的混合物中，并添加KOH(56mg,0.9981mmol)。将反应在50℃下加热2小时。将反应混合物真空浓缩以除去挥发物。将混合物重悬于1.0M HCl中，将混合物用二氯甲烷(x 3)萃取。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。将混合物溶解在二氯甲烷中，并通过硅胶短柱过滤。回收滤液并真空蒸发挥发物。SFC纯化(柱:Daicel Chiralpak AD-H。流动相:30％甲醇(含5mM氨)，70％二氧化碳)提供两种产物，顺式异构体和反式异构体。

峰A.3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸[ENANT-1](163)(15.2mg,29％)。

峰B.3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸(164)[ENANT-2](8.4mg,16％)。

化合物165

[3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁基]-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(165)

步骤1.合成[3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁基]-(3-羟基氮杂环丁烷-1-基)甲酮(165)

将3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]环丁烷羧酸(5.5mg,0.01334mmol)和HATU(6mg,0.01578mmol)溶解在DMF(200μL)中。然后，添加DIPEA(10μL，0.05741mmol)并将反应搅拌5分钟。添加氮杂环丁烷-3-醇盐酸盐(3mg,0.02738mmol)，并将反应搅拌10分钟。通过添加水和二氯甲烷对反应进行后处理。用二氯甲烷(x 3)萃取混合物。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物166

1-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]哌啶-4-甲酸(166)

在氮气下，将7-氯-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(41mg,0.08446mmol)、哌啶-4-甲酸(22mg,0.1703mmol)和NaOtBu(33mg,0.3434mmol)添加到小瓶中。使固体悬浮在叔丁醇(300μL)中，并且将氮气鼓泡通过混合物10分钟。然后，添加BrettPhos Palladacycle Gen.4(2.5mg,0.002716mmol)。将反应在120℃下搅拌20小时。

真空除去挥发物，并将反应重悬于二氯甲烷/HCl 1M(1:2)中。将混合物用二氯甲烷(x 3)萃取，有机相通过相分离器过滤，然后合并并真空蒸发。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物167

2-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]乙酸(167)

使用针对制备化合物3所述的标准程序E、F和G，从化合物T3和2-羟基乙酸甲酯分三步制备化合物167。

通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物168

4-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]-3-甲氧基-苯甲酸(168)

如针对制备化合物147所述的标准程序E、F和G，从T3和4-羟基-3-甲氧基-苯甲酸甲酯分三步制备化合物168。步骤1也可以在DMF溶剂中使用NaH作为碱来进行。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物169-173

如针对制备化合物168所述，从T3制备化合物169-173(表9)。在化合物173的制备中省略了酯水解步骤。

表9。化合物169-173的制备方法、结构和物理化学数据

化合物174

7-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(174)

步骤1.合成3-[[7-溴-4-(4-氟苯基)-6-甲酰基-3-异丙基-2-喹啉基]氧基]羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(D71)

将K

步骤2.合成3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸酯

将3-[[7-溴-4-(4-氟苯基)-6-甲酰基-3-异丙基-2-喹啉基]氧基]羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯悬浮在EtOH(30mL)中，用4-甲基苯磺酰肼(600mg,3.222mmol)在50℃处理1小时。将混合物蒸发，得到3-[[7-溴-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-[(E)-(对甲苯磺酰基亚肼基)甲基]-2-喹啉基]氧基]羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯，其无需进一步纯化即可使用。LCMS m/z 745.05[M+H]

将3-[[7-溴-4-(4-氟苯基)-3-异丙基-6-[(E)-(对甲苯磺酰基亚肼基)甲基]-2-喹啉基]氧基]羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯悬浮在3-甲基丁-1-醇(40mL)和Cu

3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(1.3g,55％)。

步骤3.合成7-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D72)

在室温下，将碘代(三甲基)硅烷(200μL,1.405mmol)添加到3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基羟基氮杂环丁烷-1-甲酸苄酯(320mg,0.4814mmol)在二氯甲烷(10mL)的溶液中。将混合物在室温下搅拌22小时。添加MeOH(0.5mL)。搅拌1小时后，蒸发混合物。通过硅胶色谱法(梯度：0-30％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到产物。7-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉(180mg,70％)LCMS m/z 531.21[M+H]

步骤4.合成1-[3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基氮杂环丁烷-1-基]乙酮(D73)

将7-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉(190mg,0.3581mmol)和NEt

步骤5.合成1-[3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]氮杂环丁烷-1-基]乙酮(174)

将NaOH(0.5mL的1M,0.5000mmol)添加到1-[3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基氮杂环丁烷-1-基]乙酮(54mg,0.08623mmol)在MeOH(5ml)/二氯甲烷(2ml)的溶液中。3小时后，添加1N HCl(0.45mL)。蒸发混合物，将残余物溶解在DMSO中。通过反相HPLC纯化。方法：C18Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物175

5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-(1-甲基磺酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(175)

步骤1.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-(1-甲基磺酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹诺酮(D74)

7-(氮杂环丁烷-3-基氧基)-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉(95mg)和三乙胺(75μL)在THF(1.5mL)中的溶液。添加甲磺酰氯(60μL,0.7752mmol)，并将混合物在50℃搅拌5小时。将混合物冷却至室温，在EtOAc和盐水之间分配，然后用EtOAc(2x)萃取。用Na

步骤2.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-(1-甲基磺酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1H-吡唑并[4,3-g]喹诺酮(175)

在室温下，经4小时将NaOH(0.5mL的1M,0.5000mmol)添加到5-(4-氟苯基)-6-异丙基-7-(1-甲基磺酰基氮杂环丁烷-3-基)氧基-1-(对甲苯磺酰基)吡唑并[4,3-g]喹啉(44mg,0.07034mmol)在MeOH(5mL)/二氯甲烷(2ml)的溶液中。将混合物用1M HCl(0.5mL)中和，蒸发。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物176和化合物177

3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]环丁烷羧酸(176)和3-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]环丁烷羧酸(177)

根据针对制备化合物146和147所述的方法，从T3制备化合物176和177。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物178

4-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]苯甲酸(178)

如针对化合物168所述，从T3和4-羟基苯甲酸甲酯制备。4-[[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]苯甲酸(8.7mg,31％)。

化合物179-192

如针对制备化合物163所述，根据标准程序B通过与合适的硼酸酯铃木偶联，或与烷基锌试剂Negishi偶联来从T4制备化合物179-192(表10)。在一些实施例中，根据标准程序G进行酯水解步骤。在表脚注释中注明了任何其他修改。化合物185通过向T4中添加适当的酚试剂来制备。

表10.化合物179-192的制备方法、结构和物理化学数据

*化合物185从T4的THP保护类似物制备。

化合物193

4-(5-氯-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)苯甲酸(193)

使用标准程序B，通过铃木偶联由T5和4-二羟硼基苯甲酸制备化合物193。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物194

4-[5-(3,4-二氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(194)

化合物194由D77分三步制备，使用与(3,4-二氟苯基)硼酸的铃木偶联(标准程序B)，将喹啉酮转化为吡啶基氯(标准程序A)，随后与4-二羟硼基苯甲酸的第二次铃木偶联反应(标准程序B)。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物195-201

通过使用标准程序B的铃木偶联，从T5和适当的硼酸或硼酸酯来制备化合物195-201(表11)。任何其他修改在表脚注释中注明。

表11.化合物195-201的制备方法、结构和物理化学数据

化合物202

2-氟-4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(202)

化合物202由T6分两步制备，通过铃木偶联(标准程序B)，然后酯水解(标准程序G，使用KOH作为碱)。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物203

3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(203)

根据标准程序B，通过与3-二羟硼基苯甲酸的铃木偶联，从T6制备化合物203。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物204

5-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-6-甲氧基-吡啶-2-甲酰胺(204)

步骤1和2。5-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-6-甲氧基-吡啶-2-甲酸(D81＝化合物189)

使用标准程序B和标准程序G(使用KOH代替LiOH)，通过铃木偶联，然后酯水解，从T6制备化合物204。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

步骤3.合成5-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-6-甲氧基-吡啶-2-甲酰胺(204)

5-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-6-甲氧基-吡啶-2-甲酸(5mg,0.01063mmol)溶解在DMF(200μL)中。然后，添加HATU(5mg,0.01315mmol)，接着添加DIPEA(6μL，0.03445mmol)。将反应搅拌5分钟，然后添加氨(2μL的30％w/w,0.03171mmol)。通过反相HPLC纯化。方法：C18Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物205

3-氟-4-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(205)

使用标准程序B和标准程序G，通过铃木偶联，然后酯水解，从T9制备化合物205。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物206

4-[5-(4-氟苯基)-6-四氢吡喃-4-基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(206)

使用标准程序B和标准程序G(NaOH用作碱)，通过铃木偶联，然后酯水解，从T9制备化合物206。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物207-210

如针对制备化合物168所述，使用标准程序E、F和G，从T8和适当的酚或醇试剂制备化合物207-210(表12)。

表12.化合物207-210的制备方法、结构和物理化学数据

化合物211

4-[9-氟-5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(211)

从化合物T7通过铃木偶联(标准程序B)制备，然后通过在室温下用溶于1,4-二噁烷中的4M HCl处理除去THP。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物212

2-氟-4-[[5-(4-氟苯基)-6-甲基磺酰基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]氧基]苯甲酸(212)

使用针对制备化合物168所述的方法，从T11分三步制备化合物212。LCMS m/z496.17[M+H]

化合物213-217

如针对制备化合物212所述，使用以下步骤1中的反应物由T11制备化合物213-217(表13)。

表13.化合物213-217的制备方法、结构和物理化学数据

化合物218

4-[5-(4-氟苯基)-6-甲氧基羰基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(218)

步骤1.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸甲酯(D85)

根据标准程序A从D84制备化合物D85，得到产物。

7-氯-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸甲酯(2376.9mg,71％)。

步骤2和3：4-[5-(4-氟苯基)-6-甲氧基羰基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(218)

如标准程序B中所述，通过与4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸叔丁酯的铃木偶联，随后用三氟乙酸在二氯甲烷中处理，从D85制备化合物218。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物219

4-[6-(二甲基氨基甲酰基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(219)

步骤1.合成7-氯-5-(4-氟苯基)-N,N-二甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酰胺(D87)

在小瓶中，7-氯-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酸(60mg,0.1756mmol)、HATU(70mg,0.1841mmol)和N-甲基甲胺(盐酸盐)(45mg,0.5518mmol)溶解在二氯甲烷(3mL)中。然后，添加DIPEA(90μL,0.5167mmol)。将反应物在室温下搅拌30分钟。添加水和二氯甲烷。将混合物用二氯甲烷萃取三次。将有机相通过相分离器过滤，合并，并将挥发物真空蒸发。将粗品通过快速柱色谱法(梯度：0-40％的EtOAc/二氯甲烷)纯化，得到产物。7-氯-5-(4-氟苯基)-N,N-二甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-6-甲酰胺(53.5mg,60％)。LCMS m/z 369.04[M+H]

步骤2.合成4-[6-(二甲基氨基甲酰基)-5-(4-氟苯基)-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]-3-甲氧基-苯甲酸(219)

通过铃木偶联使用标准程序B从化合物T10制备化合物219。通过反相HPLC纯化。方法：C18 Waters Sunfire柱(30x 150mm，5微米)。梯度：MeCN/H

化合物220

5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(220)

如针对对D12所述制备化合物220。

化合物221

5-(4-氟苯基)-6-异丙基-9-甲基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-醇(221)

如针对D24所示制备化合物221。

制备W1-W3

步骤1.合成5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯和5-溴-2-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(F2)

将5-溴-1H-吲唑-6-甲酸甲酯(1.05g,3.70mmol)溶解在无水THF(24mL)中。添加3,4-二氢-2H-吡喃(843.2mg,0.85mL,10.02mmol)和对甲苯磺酸(一水合物)(36.2mg,0.19mmol)，并将反应在60℃下搅拌18小时。让反应混合物冷却至室温，然后添加乙酸乙酯(125mL)。用5％NaHCO

步骤2.合成5-(3-甲基丁-1-炔基)-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯；5-(3-甲基丁-1-炔基)-2-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(F2)

在密封管中，氮气鼓泡通过三乙胺(84mL)and 5-溴-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯、5-溴-2-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(6.03g,17.7mmol)的混合物30分钟。添加CuI(255mg,1.33mmol)、Pd(PPh

步骤3.合成5-碘-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮；5-碘-6-异丙基-2-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮(W1)

在室温和氮气氛下，向5-(3-甲基丁-1-炔基)-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯和5-(3-甲基丁-1-炔基)-2-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸甲酯(1.91g,5.85mmol)在无水二氯甲烷(40mL)的溶液中添加碘(1.68g,0.34mL,6.62mmol)在无水二氯甲烷(60mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌1小时，用二氯甲烷(100mL)稀释，然后在0℃下用饱和NaHCO

将所得固体在乙腈(20mL)中研磨，过滤，用庚烷洗涤，并真空干燥，得到5-碘-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮和5-碘-6-异丙基-2-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮，为异构体的不可分离混合物(1g,37％)。LCMS m/z 439.1[M+H]

步骤4.合成5-(4-氟苯基)-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮(W2)和5-[(Z)-1-(4-氟苯基)-2-羟基-3-甲基-丁-1-烯基]-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸(W3)

在密封的试管中，添加水(1.75mL)和磷酸钾(1.40g,6.60mmol)。混合物在室温下搅拌10分钟，然后添加甲苯(24mL)。将氮气鼓泡通过混合物15分钟，然后添加5-碘-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮(1.5g,3.10mmol)、(4-氟苯基)硼酸(650mg,4.65mmol)和RuPhos Pd G4(260mg,0.3057mmol)。将管密封，然后转移到设定为70℃的预热油浴中，并在该温度下搅拌2小时。添加另外的RuPhos Pd G4(260mg,0.3057mmol)，并将反应混合物再搅拌两小时。将反应混合物冷却至室温，然后用乙酸乙酯(500mL)稀释。用5％NaHCO

制备W4

(Z)-5-(1-(3,4-二氟苯基)-2-羟基-3-甲基丁-1-烯-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-甲酸(W4)

使用针对制备W3所述的方法从W1制备W4。W4用于制备化合物232-239(表2)而无需进一步纯化。

化合物222

3-(6-异丙基-8-氧代-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-基)环丁烷羧酸(222)

步骤1.合成6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮(F4)

将5-碘-6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮(1.5g,3.423mmol)Pd(OAc)

步骤2.合成3-(6-异丙基-8-氧代-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-基)环丁烷羧酸(222)

用氮气吹扫5mL biotage微波小瓶中的6-异丙基-1-四氢吡喃-2-基-吡喃并[4,3-f]吲唑-8-酮(105mg,0.3361mmol)和3-氨基环丁烷羧酸甲酯(盐酸盐)(120mg,0.7246mmol)在吡啶(2mL)中的溶液。添加分子筛(200mg)(

通过用1M HCl，然后用10M KOH处理，将一小部分F5去保护，得到产物。3-(6-异丙基-8-氧代-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-基)环丁烷羧酸(2.9mg,3％)。LCMS m/z 326.33[M+H]

化合物223

3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧代-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-基]环丁烷羧酸(223)

制备3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧代-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-基]环丁烷羧酸(223)

标准方法J。

向5-[(Z)-1-(4-氟苯基)-2-羟基-3-甲基-丁-1-烯基]-1-四氢吡喃-2-基-吲唑-6-甲酸(200mg,0.47mmol)在DMF(3mL)中的溶液中添加3-氨基环丁烷羧酸甲酯(80mg,0.62mmol)和DIPEA(250μL,1.44mmol)。添加HATU(270mg,0.71mmol)，混合物在室温下搅拌过夜。用二氯甲烷稀释，并在相分离器上用水(x 2)和2M HCl(2x)洗涤。将残余物溶解在二氯甲烷(3mL)中，添加对甲苯磺酸(一水合物)(300mg,1.57mmol)。将混合物在微波中加热至65℃并保持30分钟。用水和柠檬酸盐缓冲溶液洗涤混合物，浓缩，添加DMF(3mL)和NaOH(500μL的10M,5.0mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，过滤并通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.1％三氟乙酸)纯化，得到产物。3-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基-8-氧代-1H-吡唑并[4,3-g]异喹啉-7-基]环丁烷羧酸(23.4mg,11％)。

化合物224-231

将标准方法J用于从W3和适当的胺试剂制备化合物224-231(表14)。

表14.化合物224-231的制备方法、结构和物理化学数据

标准方法K.(Z)-5-(1-(3,4-二氟苯基)-2-羟基-3-甲基丁-1-烯-1-基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-甲酸(W4)(50mg)在DMF(1.5ml)与适当的胺和DIPEA的溶液。添加HATU并在室温下搅拌过夜。混合物用二氯甲烷稀释，在相分离器上用水(x 2)和2M HCl(x2)洗涤。添加二氯甲烷(3mL)和对甲苯磺酸(一水合物)。将混合物在微波中加热至65℃并保持30分钟。用水和柠檬酸盐缓冲溶液洗涤混合物。添加DMF(1.5mL)和NaOH，将混合物在室温下搅拌过夜。将反应过滤并通过反相色谱法(柱：C18.梯度：0-100％MeCN/水，含0.2％三氟乙酸)纯化，得到产物。

化合物232-239

标准方法K用于从W4制备化合物232-239(表15)。

表15.化合物232-239的制备方法、结构和物理化学数据

化合物240

4-(6-(二甲氨基)-5-(4-氟苯基)-7,8-二氢-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)-3-甲氧基苯甲酸(240)

使用针对制备化合物145所述的方法，从D51制备化合物240，其中省略氟化步骤1。

化合物2414-(5-(4-氟苯基)-6-甲氧基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)苯甲酸(241)

使用针对制备化合物145所述的方法，从D51和2-甲氧基乙酰氯制备化合物241。

化合物242-244

使用针对制备化合物241所述的方法，从G6制备化合物242-244(表16)。

表16.化合物242-244的制备方法、结构和物理化学数据

化合物245

4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙基磺酰基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酰胺(245)

使用针对制备化合物146所述的方法，从D57和溴乙酰氯制备化合物G10。化合物245由G10通过氨与HATU和DIPEA的偶联来制备。

化合物246-248

化合物246-248(表17)由S6制备，通过在微波条件下，在150℃的DMF中，在Cs

表17.化合物246-248的制备方法、结构和物理化学数据

*通过用TFA脱保护由C33制备

化合物249

2-氟-4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(249)

如针对制备化合物145所述，从D51制备化合物249。

化合物250

3-氟-4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(250)

如针对制备化合物145所述，从D51经由G14制备化合物250。

化合物251

4-[5-(4-氟苯基)-6-异丙氧基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(251)

如针对制备化合物145所述，从D51经由G14制备化合物251。

化合物252

4-[5-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸乙酯

4-[5-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(252)

步骤1:7-溴-1H-吲唑-6-胺

历经30分钟，向冷却至-15℃(内部温度)的1H-吲唑-6-胺(5g,37.551mmol)在无水DMF(30mL)中的溶液中滴加NBS(6.74g,37.869mmol)在无水DMF(15mL+2mL漂洗液)中的溶液。将混合物在1小时内从-4.5℃搅拌至-2.7℃。添加水(150mL)和5％NaHCO

步骤2:2-[(7-溴-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸乙酯

向2-乙氧羰基-3-甲基丁酸(14.74g,67.695mmol)在无水DCE(120mL)中的溶液中，在0℃下在10分钟内分批添加CDI(10.95g,67.530mmol)，并将反应在0℃下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。添加7-溴-1H-吲唑-6-胺(10.2g,46.082mmol)，并将悬浮液加热至50℃保持18小时。浓缩混合物，将残余物在水(1×160mL)中研磨，过滤，依次用水(2×40mL)、庚烷(2×40mL)和庚烷与MTBE的混合物(1:4，1×50mL)洗涤，干燥，得到2-[(7-溴-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸乙酯(16.78g,96％)，为beige solid.1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.45(br s,1H),9.97(s,1H),8.19(d,J＝1.2Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,1H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),4.15(q,J＝7.1Hz,2H),3.37(d,J＝9.8Hz,1H),2.40-2.24(m,1H),1.22(t,J＝7.1Hz,3H),1.06-0.94(m,6H),ESI-MS m/z计算值367.0532,实测值368.1(M+1)+；保留时间:1.81分钟。

步骤3:2-[(7-溴-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸

向2-[(7-溴-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸乙酯(7.34g,18.937mmol)在EtOH(150mL)的悬浮液中添加水(35mL)，然后添加KOH(4.22g,75.215mmol)，反应在室温下搅拌19小时。浓缩混合物，添加水(50mL)。将混合物冷却至0℃，添加1.0M HCl水溶液，直到pH达到2。将固体过滤，用水(3×25mL)洗涤，将残余物在0℃下在水(1×50mL)中研磨15分钟，过滤并干燥，得到2-[(7-溴-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸(6.38g,97％)，为粉红色固体。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ13.42(br s,1H),12.69(br s,1H),9.90(s,1H),8.20(s,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,1H),7.23(d,J＝8.5Hz,1H),3.27(d,J＝9.5Hz,1H),2.36-2.19(m,1H),1.05-0.95(m,6H),ESI-MS m/z计算值339.0219,实测值340.0(M+1)+；保留时间:1.57分钟。

步骤4:9-溴-5,7-二氯-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉

将2-[(7-溴-1H-吲唑-6-基)氨基甲酰基]-3-甲基-丁酸(2.5g,7.3492mmol)和POCl

步骤5:5,7-二氯-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉

历经1.25小时将9-溴-5,7-二氯-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(7.58g,21.111mmol)在无水THF(60mL+20mL漂洗液)中的溶液滴加到甲基锂(14mL的1.6M,22.400mmol)(1.6M的乙醚溶液)在-78℃下冷却的无水THF(40mL)的溶液中。然后，在完成加入后15分钟，在10分钟内添加丁基锂溶液(8.5mL的2.5M，21.250mmol)(2.5M的己烷溶液)。将反应在-78℃下搅拌30分钟以上。5％的柠檬酸水溶液(50mL)，将混合物温热至室温。添加乙酸乙酯(500mL)、二氯甲烷(100mL)和2-甲基THF(250mL)。将有机相依次用5％NaHCO

步骤6:4-(5-氯-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)苯甲酸乙酯

向5,7-二氯-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉(1000mg,3.320mmol)、(4-乙氧羰基苯基)硼酸(700mg,3.608mmol)和四(三苯基磷烷)钯(0)(190mg,0.1644mmol)在二噁烷(5.0mL)和DMF(5mL)的混合物中的悬浮液中，添加Na

步骤7:4-[5-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸乙酯

4-[5-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基]苯甲酸(252)

将4-(5-氯-6-异丙基-1H-吡唑并[4,3-g]喹啉-7-基)苯甲酸乙酯(30mg,0.05061mmol)、(4-氟-3-甲氧基-苯基)硼酸(15mg,0.08826mmol)、K2CO3(15mg,0.1085mmol)和Pd(dppf)Cl

化合物253-262

化合物253-262(表18)分两步制备：根据针对化合物252所述的方法，从中间体G21和适当的硼酸开始，然后根据针对化合物252所述的方法进行脱甲基化和用BBr

表18.化合物253-261的制备方法、结构和物理化学数据

实施例1：AAT功能测定(MSD测定NL20-SI细胞系)

α-1抗胰蛋白酶(AAT)是通过与酶共价结合而使酶灭活的SERPIN(丝氨酸蛋白酶抑制剂)。通过测定AAT与人中性粒细胞弹性蛋白酶(hNE)形成不可逆复合物的能力，该测定测量了在公开的化合物1-262存在下样品中功能活性AAT的量。在实践中，将样品(细胞上清液、血液样品或其他)与过量的hNE一起孵育，以使得能够与样品中的所有功能性AAT形成AAT-弹性蛋白酶复合物。然后将该复合物捕获到涂覆有抗AAT抗体的微孔板上。用标记的抗弹性蛋白酶抗体检测捕获到板上的复合物，并使用跨越样品中存在的浓度范围的一组AAT标准品进行定量。使用Meso Scale Discovery(MSD)板阅读器、磺基标签标记和微孔板来提供高灵敏度和宽动态范围。

试剂/板 浓度

山羊抗人α-1-抗胰蛋白酶 在1mg/mL下的1mL

多克隆抗体

以磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的5μg/mL使用

人中性粒细胞弹性蛋白酶 100μg冻干

以3.4μM(0.1mg+1mL PBS)储存

以MSD测定缓冲液(1％牛血清白蛋白(BSA))中的1μg/mL

(34nm)起作用

小鼠抗人中性粒细胞弹性蛋白酶单克隆抗体 900μg/mL

使用MSD Gold磺基标记的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯在12:1

下进行磺基标记；以MSD测定缓冲液(1％BSA)中的0.45

μg/mL使用

M-AAT(α-1-抗胰蛋白酶) 5mg冻干

MSD封闭剂A(BSA) 250mL

用于封闭的PBS中的5％溶液

用于测定缓冲液的PBS中的1％溶液

具有表面活性剂的MSD读取缓冲液T(4X) 1L或250mL

MSD 384高粘合板

用于稀释384孔板的聚丙烯

组织培养处理的黑孔384孔板

Meso Sector S600

Bravo

洗涤器分配器

Multidrop Combi

第1天细胞培养

1.收获在含有Pen/Strep(P/S)的OptiMEM

2.在30μL中以16,000个细胞/孔接种(384孔板)

3.将板离心短暂加速(1200rpm)并置于37℃培养箱中过夜

第2天：化合物添加和用捕获抗体涂覆板

化合物添加：

1.在通风柜中使用multidrop Combi将40μL具有多西环素(1:1000原液＝0.1μM最终)的OptiMEM

2.从培养箱中取出细胞板，翻转/吸干并立即带到Bravo以转移化合物

3.将板放回培养箱中过夜

涂覆MSD板

1.将捕获抗体(多克隆山羊抗AAT)以PBS(无BSA)稀释至5μg/mL(1:200)。

2.使用装备有标准盒的Multidrop将25μL稀释的捕获抗体分配到MSD 384-孔高结合板的所有孔中。

3.在4℃下孵育过夜

制备封闭剂A(BSA)溶液

1.遵循制造商的说明来制备5％MSD封闭剂A(BSA)溶液。

2.根据需要，将PBS中的5％MSD封闭剂A进一步稀释至1％(封闭剂A)。

第3天：运行MSD测定

封闭板

1.用50μL洗涤缓冲液(PBS+0.5％Tween 20)洗涤平1x，并添加35μL 5％封闭剂A缓冲液以封闭在洗涤器分配器上的非特异性结合

2.在振动器上将板以600rpm旋转1小时

准备M-AAT标准品

1.把M-AAT原液以1％BSA封闭剂A(储存在-70℃下)稀释到1.6μg/mL；然后以1％封闭剂A制备12x 1:2系列稀释液

2.MSD板上的最高起始终浓度为320ng/mL。这些稀释度对应于320、160、80、40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.312、0.156ng/mL的浓度。

稀释板

1.使用Multidrop Combi将80μL的1％测定缓冲液添加到除了第1/24列(标准品)的所有孔

2.向第1列和第24列中添加稀释的标准品

3.将稀释板1200rpm短暂离心

细胞板

1.在通风柜中使用16针抽吸器从细胞板上抽吸含有标准品的列

制备人中性粒细胞弹性蛋白酶(hNE)

1.通过在1％封闭剂A中稀释来制备1μg/mL人中性粒细胞弹性蛋白酶。

a.小100μg管–添加1mL PBS(100μg/mL)

i.然后可以将此在1％测定缓冲液中1:100稀释至最终1μg/mL浓度

MSD-添加hNE(20μL/孔)

1.在将MSD板封闭至少1小时后，用50μL洗涤缓冲液(PBS+0.5％Tween20)洗涤板1x并且然后将20μL hNE添加到每个孔中

Bravo–细胞板–稀释板–MSD板

使用Bravo从细胞板抽吸10μL，将其转移到稀释板(9倍稀释)

1.混合25μL 3x，然后抽吸5μL，转移到MSD板(5倍稀释)

2.混合10μL 3x。总稀释度为45倍。

3.将板以600rpm振摇1.5小时

添加功能检测hNE抗体

1.用洗涤缓冲液洗涤板1X

2.使用洗涤器/分配器将在1％封闭剂A中稀释至0.45μg/mL(1:2000)的25μL磺基标记的抗弹性蛋白酶(单克隆小鼠抗弹性蛋白酶)添加到功能活性MSD板的所有孔中

注意：必须确定每批新的标记抗体的足够信号所需的稀释度。

3.在室温下孵育，在600rpm下振摇1小时。

最终洗涤和MSD成像仪读数

1.将板洗涤1次，并将25μL洗涤缓冲液添加到板中。

2.制备2x读取缓冲液

3.从MSD板上除去洗涤缓冲液

4.使用Bravo将35μL 2x读取缓冲液转移到MSD板中，并立即对MSD进行读取

MSD Discovery Workbench 4.0软件中的数据分析和EC

实施例2：生化测定(Z-AAT弹性蛋白酶活性测定)

该测定使用纯化的Z-AAT和纯化的人中性粒细胞弹性蛋白酶(hNE)测量了化合物1-262对Z-AAT SERPIN活性的调节。通常，当活性单体Z-AAT遇到蛋白酶诸如胰蛋白酶或弹性蛋白酶时，它形成1:1共价“自杀”复合物，其中AAT和蛋白酶都不可逆地被灭活。然而，化合物与Z-AAT结合可导致SERPIN活性降低。在此类情况下，当蛋白酶遇到化合物结合的Z-AAT时，所述蛋白酶切割并灭活Z-AAT，而其本身没有被灭活。

试剂

PBS缓冲液(培养基配制)+0.01％BRIJ35洗涤剂(Calbiochem目录号203728)

Opti-MEM培养基(Fisher 11058-021)

人中性粒细胞弹性蛋白酶(hNE，Athens Research#16-14-051200)

以50mM乙酸钠、pH 5.5、150mM NaCl制备的3.4μM原液(0.1mg/mL)，储存在-80℃下

弹性蛋白酶底物V(ES V，荧光肽底物MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC，Calbiochem目录号324740)

DMSO中的20mM原液，储存在-20℃下

从人血浆中纯化的Z-AAT蛋白；

来自患者#061-SSN的12.9μM(0.67mg/mL)Z-AAT Vertex Cambridge样品4942，储存在-80℃下

板

Corning 4511(384孔黑色低容量)

仪器

Z-AAT与化合物的预孵育

1.将7.5μL的Z-AAT(20nM)与化合物1-215在GCA板中在室温下孵育1小时

hNE的添加

1.将7.5ul HNE溶液(在PBS+0.01％BRIJ35中的3nM)添加到GCA板中

2.将板孵育30分钟以允许Z-AAT/HNE自杀复合物形成。

在PE Envision上添加底物并读取板

1.将7.5μL底物(在PBS+0.01％BRIJ35中的弹性蛋白酶底物(ES V)的300μM溶液)分配到GCA板的每个孔中

2.立即在Envision上读取。

化合物1-87、89-140、143-151、154、158、160、164-167、170、171、173-183、186、189-208和210-215具有大于10的IC

实施例3：化合物1-262的EC50和Z-AAT弹性蛋白酶活性数据

式(I)化合物可用作AAT活性的调节剂。下表19示出了使用实施例1中描述的程序得到的化合物1-262的EC

表19.化合物1-262的EC

该描述仅提供所公开主题的示例性实施方案。本领域技术人员将从本公开和从所附权利要求书中容易地认识到，在不脱离如以下权利要求书中限定的本公开的精神和范围的情况下，可在其中进行各种改变、修改和变化。