一种测定哌啶残留的方法

技术领域

本发明涉及分析技术领域，具体涉及一种测定哌啶残留的方法。

背景技术

哌啶又称六氢吡啶，英文名Piperidine，分子式:C

哌啶的主要用途是用作溶剂、有机合成中间体、环氧树脂交联剂、缩合催化剂等，在医药领域也有着较广泛应用，是双嘧达莫，西那卡塞，3-氟甲基月桂酸等产品的重要原料。因此，对产品中的哌啶残留量进行有效控制，实现分离检测极为必要。

发明内容

本发明的目的是筛选出合适的溶剂，摸索出合适的前处理方法，建立一种测定哌啶残留的方法，以更好地对控制产品中的哌啶残留。

本发明的测定哌啶残留的方法，其技术方案包含如下步骤：

空白溶剂：1%乙二胺DMSO溶液；

供试品溶液：精密称定待测样品约1.0g，置10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

对照品溶液：精密称取哌啶适量，分别置于相应量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液溶解并稀释制成每1ml含哌啶0.02mg溶液，作为对照品溶液；

色谱柱为：CP-Volamine毛细管柱（30m×0.32mm×5μm）

色谱条件为：起始温度为80℃，维持15分钟，以每分钟30℃的速率升温至240℃，维持10分钟；进样口温度：220℃，检测器FID温度：250℃，柱流速：2.0ml/min，分流比3:1；

分别取上述空白溶剂、溶液供试品、溶液对照品溶液进样1μl；

计算对照品溶液浓度的值与相应峰面积值的线性回归方程，相关系数应不小于0.99，对照品溶液峰形对称。

根据待测样品的pH值不同，乙胺DMSO溶液的浓度可以在1%~5%之间调整，pH偏小时以采取较高浓度，pH值偏高时可以采取较低浓度，以取得更好效果。

本发明应用气相色谱法测定产品中残留的哌啶分离效率高、回收率高，分析速度快、检测灵敏度高，可更好地对控制产品中的哌啶残留。

附图说明

图1实施例1色谱柱的筛选色谱图

图2实施例2色谱柱的筛选色谱图

图3实施例3色谱柱的筛选色谱图

图4实施例4色谱柱与溶剂的筛选

图5实施例5溶剂的筛选色谱图

图6实施例6溶剂的筛选色谱图

图7实施例7溶剂的筛选色谱图

图8实施例8溶剂的筛选色谱图

图9实施例9溶剂的筛选色谱图

图10实施例10溶剂的筛选色谱图

图11实施例11溶剂的筛选色谱图

图12实施例12溶剂的筛选色谱图

图13实施例13溶剂的优化色谱图

图14实施例14溶剂的优化色谱图

图15分离度试验溶液色谱图

图16异丙醇线性回归图

图17二氯甲烷线性回归图

图18哌啶线性回归图

图19流速变化测试结果对比图

图20柱温变化测试结果对比图

图21检测器温度变化测试结果对比图

图22进样器温度变化测试结果对比图。

具体实施例

以下通过实施例形式再对本发明的内容做进一步详细说明，但不应就此理解为本发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明内。

实施例1色谱柱的筛选

仪器与试剂

仪器：水浴锅、天平、气相色谱仪

试剂：乙醇、吡啶、甲苯、哌啶

色谱柱：TG-5MS，液体进样，乙醇为溶剂。

柱温：初始为80℃，保持15分钟，以每分钟升温30℃的速率升至240℃保持10min。

进样口温度：220℃，检测器FID温度：250℃，柱流速：2.0ml/min。

结果：甲苯、吡啶峰形良好，哌啶峰拖尾严重且与甲苯出峰试剂部分重合，无法分离，方法不适用。见图1。

实施例2色谱柱的筛选

色谱柱为CD-BASEWAX，其它操作同实施例1。

结果：哌啶峰形较差、响应很低，方法不适用。见图2。

实施例3色谱柱的筛选

色谱柱HP-5，其它操作同实施例1。

结果：甲苯、吡啶、哌啶峰形良好，但是哌啶与甲苯出峰时间部分重合，方法不适用。见图3。

实施例4色谱柱与溶剂的筛选

色谱柱为CP-Volamine毛细管柱，其它操作同实施例1。

结果：对照溶液峰形好，分离度达到要求，但将双嘧达莫，西那卡塞，3-氟甲基月桂酸样品，加入乙醇+3%氨水为溶剂含有吡啶、甲苯、哌啶的标样溶液后，哌啶的回收率测定为0，方法不适用。见图4。

实施例5溶剂的筛选

试剂为乙醇+0.2%氨水、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例4。

结果：回收率溶液，哌啶未检出，回收率达不到要求，方法不适用。见图5

实施例6溶剂的筛选

试剂为乙醇+3%氨水、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例5。

结果：回收率溶液，哌啶可检出，但回收率达不到要求，方法不适用。见图6。

实施例7溶剂的筛选

试剂为乙醇+1%二乙胺、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例5。

结果：回收率溶液，哌啶未检出，回收率达不到要求，方法不适用。见图7。

实施例8溶剂的筛选

试剂为乙醇+10%二乙胺、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例5。

结果：回收率溶液，检测杂峰较多，哌啶回收率60%左右，回收率达不到要求，方法不适用。见图8。

实施例9溶剂的筛选

试剂为DMSO、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例5。

结果：回收率溶液，哌啶回收率70%左右，回收率达不到要求，方法不适用。见图9。

实施例10溶剂的筛选

试剂为DMSO、磷酸钠、氢氧化钠、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例5。

结果：用饱和磷酸钠调节DMSO pH，磷酸钠在DMSO中析出，哌啶与甲苯分离度变差，空白有干扰，方法不适用；以0.1M氢氧化钠为溶剂，顶空进样，双嘧达莫，西那卡塞，3-氟甲基月桂酸样品不溶，方法不适用；以0.5M氢氧化钠为溶剂，75℃30min顶空进样，哌啶回收率为0，达不到要求，方法不适用。 见图10。

实施例11溶剂的筛选

试剂为乙二胺、吡啶、甲苯、哌啶，其它操作同实施例5。

结果：对照品峰形好，将双嘧达莫，西那卡塞，3-氟甲基月桂酸样品以乙二胺为溶剂，加入哌啶，检测回收率95%以上，达到要求，但是乙二胺腐蚀性大，对色谱柱和检测设备损害较大方法需优化。见图11。

实施例12溶剂的筛选

试剂为10%乙二胺DMSO溶液溶液、吡啶、甲苯、哌啶，分别筛选10%、5%、1%乙二胺DMSO溶液做溶剂时哌啶的回收率，其它操作同实施例11。

结果：对照品峰形好，将双嘧达莫，西那卡塞，3-氟甲基月桂酸样品以10%乙二胺DMSO溶液为溶剂，加入哌啶，检测回收率95%以上，达到要求。见图12。

实施例13溶剂的优化

试剂为5%乙二胺DMSO溶液、哌啶，其它操作同实施例12。

结果：哌啶回收率95%以上，回收率达到要求。见图13。

实施例14溶剂的优化

试剂为1%乙二胺DMSO溶液、哌啶，其它操作同实施例13。

结果：对照品峰形好，将盐酸西那卡塞，样品以1%乙二胺DMSO溶液为溶剂，加入哌啶，检测回收率95%以上，回收率达到要求。

结论：采用不同比例乙二胺和DMSO做溶剂样品都能溶解，且哌啶回收率均符合要求，为了降低乙二胺对色谱柱损害，用1%乙二胺DMSO溶液做溶剂更优。见图14。

实施例15检测方法的确立和系统适应性试验

空白溶剂：DMSO；

供试品溶液：精密称定西那卡塞约1.0g，置10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液溶液超声溶解并定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液；

对照品溶液：用1%乙二胺DMSO溶液溶液稀释至1ml约含异丙醇2.0mg、二氯甲烷2.0mg和哌啶0.02mg混合溶液，作为对照品溶液；

加样分离度试验溶液：精密称定西那卡塞约1.0g，置10ml量瓶中，精密加对照溶液储备液1ml，加1%乙二胺DMSO溶液溶液超声溶解并定容至刻度，摇匀，作为加样分离度试验溶液；

定位试验溶液：精密量取异丙醇、二氯甲烷对照品贮备溶液1ml，置于100ml量瓶中，精密量取哌啶对照品贮备溶液1ml，置于25ml量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液溶液稀释至刻度，作为各溶剂定位溶液；

色谱柱为：CP-Volamine毛细管柱（30m×0.32mm×5μm）

色谱条件为：起始温度为80℃，维持15分钟，以每分钟30℃的速率升温至240℃，维持10分钟；进样口温度：220℃，检测器FID温度：250℃，柱流速：2.0ml/min，分流比3:1。

分别取上述各溶液，进样1μl，记录色谱图，分离度试验溶液见图15。供试品加对照品溶液试验结果见表1，专属性试验结果见表2。

表1精密度试验结果

表2专属性试验结果

结果：空白溶剂无干扰；各溶剂之间分离度均大于1.5；异丙醇连续进样5针，峰面积RSD为4.26%，主峰保留时间RSD为0.25%；二氯甲烷连续进样5针，峰面积RSD为2.90%，主峰保留时间RSD为0.18%；哌啶连续进样5针，峰面积RSD为2.99%，主峰保留时间RSD为0.15%；结果表明该方法系统适用性与专属性良好。

实施例16线性与范围试验测试

取异丙醇、二氯甲烷与哌啶各适量，精密称定，加1%乙二胺DMSO溶液溶液溶解并稀释制成每1ml中含异丙醇100mg、二氯甲烷100mg和哌啶1.0mg的各对照品储备液，精密量取各对照品储备液5ml，置于25ml量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液稀释至每1ml约含异丙醇20mg、二氯甲烷20mg和哌啶0.2mg的对照溶液储备液。量取对照溶液储备液1.0ml、1.0ml、2.0ml、1.0ml、3.0ml、2.0ml，分别置50ml、25ml、25ml、10ml、25ml、10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液稀释至刻度，摇匀，即得。分别进样1μl，记录色谱图，以进样浓度（μg/ml）为横坐标（x轴），峰面积为纵坐标（y轴），测得线性与范围试验结果见表3、4、5和图16、17、18。

表3异丙醇线性与范围试验结果

表4二氯甲烷线性与范围试验结果

表5哌啶线性与范围试验结果

结果表明，异丙醇线性方程为y=0.0333x+0.8072，在39.38138μg/ml～3938.13800μg/ml范围内峰面积与浓度呈良好的线性关系，R

实施例17检测限与定量限试验

取对照品溶液进行逐级稀释，以信噪比S/N不小于3计算各溶剂的检测限，以信噪比S/N不小于10计算各溶剂的定量限，结果见表6、7。

表6各待测溶剂检测限与定量限测定结果

表7定量限精密度试验结果

结果表明：异丙醇定量限浓度相当于供试品浓度的0.039%，连续5针进样峰面积RSD为8.83%；二氯甲烷定量限浓度相当于供试品浓度的0.042%，连续5针进样峰面积RSD为8.53%；哌啶定量限浓度相当于供试品浓度的0.004%，连续5针进样峰面积RSD为9.89%；此色谱条件下的定量限符合要求。

实施例18重复性试验

取本品1.0g，精密称定，平行6份，分别置10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解并定容至刻度，作为供试品溶液。进样1μl，结果见表1.3.2-8。样品中异丙醇含量均为0.601%，二氯甲烷含量均为0.353%，哌啶均未检出；取本品1.0g，精密称定，平行6份，分别置10ml量瓶中，精密加对照溶液储备液1ml，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解并定容至刻度，摇匀，作加样重复性试验溶液。进样1μl，结果见表8、9。加样重复性试验溶液中含量的绝对偏差均小于质量标准限度的20%。

表8重复性试验结果

表9加样重复性试验结果

结论：同一实验员对同一批样品重复测定6次，测定结果在定量限以上溶剂峰个数一致，6份供试液中异丙醇检出含量均为0.601%、二氯甲烷检出含量均为0.353%、哌啶均未检出；同一实验员对加入对照溶液浓度的同一批样品重复测定6次，测定结果在定量限以上溶剂峰个数一致，6份供试液中含量的绝对偏差均小于质量标准限度的20%，总溶剂含量的RSD（n=6）为2.70%，符合要求，说明该方法重复性良好。

实施例19中间精密度试验

考察随机变动的因素对精密度的影响，由不同的分析人员，使用不同的仪器在不同日期进行，对重复性试验项下相同批次的进行分析来评估。取本品1.0g，精密称定，平行6份，分别置10ml量瓶中，精密加对照溶液储备液1ml，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解并定容至刻度，摇匀，作中间精密度试验溶液，进样1μl，结果见表10。

表10精密度试验结果

绝对偏差均小于质量标准限度的20%，总溶剂含量的RSD（n=12）为3.82%，符合要求，说明该方法精密度良好。

实施例20回收率试验

对照品储备溶液：精密称取异丙醇、二氯甲烷、哌啶各适量，分别置相应量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液溶解并稀释制成每1ml约含异丙醇100mg、二氯甲烷100mg和哌啶1mg的溶液，作为各溶剂的对照品储备溶液。分别精密量取各溶剂的对照品储备溶液5ml至25ml容量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液稀释至刻度，作为回收率储备溶液。精密量取回收率储备溶液1ml，置于10ml量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液稀释至每1ml约含异丙醇2mg、二氯甲烷2mg和哌啶0.02mg的混合溶液，作为对照品溶液。

定量限回收率储备液：取异丙醇、二氯甲烷的对照品储备溶液1ml，分别置于10ml量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，摇匀后，取稀释后异丙醇1ml，二氯甲烷1ml，置于10ml量瓶中用1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，摇匀，分别作为异丙醇和二氯甲烷定量限回收率储备液。

加样回收80%、100%、120%浓度的溶液：精密称取本品2.5g、1.0g、2.5g分别置于25ml、10ml、25ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解后分别精密量取上述回收率储备溶液2ml、1ml、3ml置于25ml、10ml、25ml量瓶中，用1%乙二胺DMSO溶液稀释至刻度，摇匀，作为加样回收80%、100%、120%浓度的溶液。

异丙醇、二氯甲烷加样定量限浓度的溶液：精密称取本品2.5g，置25ml的量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解，加入适量异丙醇、二氯甲烷定量限回收率储备液后，用1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，摇匀，作为异丙醇、二氯甲烷加样定量限浓度的溶液。

哌啶加样定量限浓度的溶液：精密称取本品1.0g，置10ml的量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液超声溶解，加入适量哌啶对照品浓度溶液，用1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，摇匀，作为哌啶加样定量限浓度的溶液。

每个浓度水平同法配制3份，照实施例15下确定的色谱条件测定，按外标法以峰面积计，计算回收率，结果见表11、12、13；

表11异丙醇回收率试验结果

表12二氯甲烷回收率试验结果

表13哌啶回收率试验结果

结论：异丙醇定量限、低、中、高四个浓度水平的平均回收率分别为100.37%、95.96%、96.47%、94.61%，4个水平回收率RSD为7.47%小于10.0%；二氯甲烷定量限、低、中、高4个浓度水平的平均回收率分别为88.10%、100.71%、100.86%、99.26%，4个水平回收率RSD为6.12%小于10.0%，哌啶定量限、低、中、高4个浓度水平的平均回收率分别为88.14%、100.20%、95.86%、94.38%，4个水平回收率RSD为5.11%小于10.0%，结果表明该方法准确度良好。

实施例21耐用性试验

取对照品溶液，100%限度供试品溶液，分别按下述色谱条件进行分析，试验结果见图19、20、21、22表14、15。

表14耐用性试验结果

表15耐用性试验

结果与讨论：进样口温度在215℃～225℃范围内变化，流速在1.8ml/min～2.2ml/min范围内变化，检测器温度在245℃～255℃范围内变化，初始柱温在75℃～85℃范围内变化，对照溶液中各溶剂分离度均大于1.5（检测器温度在255℃时异丙醇与相邻杂质峰分离度略差但不影响定量），100%限度供试品溶液中各溶剂的相对偏差都不超过质量标准的20%，表明该方法耐用性良好。

实施例22西那卡塞样品测定

取西那卡塞样3批，约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，振摇使溶解，即得。照残留溶剂测定法，取供试品溶液与对照品溶液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各待测溶剂残留量，结果见表16。

表16各待测溶剂测定结果

实施例23 3-氟甲基月桂酸样品测定

取3-氟甲基月桂酸3批，约1.0g，3-氟甲基月桂酸结构式见图16，精密称定，置10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，振摇使溶解，即得。实施例15定法，取供试品溶液与对照品溶液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各待测溶剂残留量，结果见表17。

表17各待测溶剂测定结果

实施例24双嘧达莫样品测定

取双嘧达莫3批，约1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加1%乙二胺DMSO溶液定容至刻度，振摇使溶解，即得。照残留溶剂测定法，取供试品溶液与对照品溶液进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算各待测溶剂残留量，结果见表18。

表18各待测溶剂测定结果