头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的色谱分析方法

技术领域

本发明涉及头孢唑肟钠的色谱分析技术领域，具体涉及头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的色谱分析方法。

背景技术

头孢唑肟钠，化学名为(6R，7R)-7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(甲氧亚氨基)乙酰氨基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-2-羧酸钠盐，主要用于治疗敏感菌所致的下呼吸道感染、尿路感染、腹腔感染、盆腔感染、败血症、皮肤软组织感染、骨和关节感染、肺炎链球菌或流感嗜血杆菌所致脑膜炎和单纯性淋病。根据头孢唑肟结构特点、原料药工艺和制剂工艺，结合各国药典等综合分析，头孢唑肟异构体以及头孢唑肟聚合物为本品重点关注杂质，本发明针对本品异构体及聚合物杂质的分析方法进行研究，以期更准确的检测出本品的异构体和聚合物杂质，从而更好控制产品质量。经分析头孢唑肟钠及其制剂可能存在的异构体及聚合物杂质信息如下：

发明内容

针对上述缺陷，本发明所要解决的技术问题在于提供头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的色谱分析方法，包括如下步骤：

S1：高效液相色谱条件为：色谱柱：选用十八烷基硅烷键合相色谱柱；

流动相A：pH 5.0缓冲溶液和乙腈混合组成，体积配比是pH 5.0缓冲溶液：乙腈＝90-95：10-5；

流动相B：pH 5.0缓冲溶液和乙腈混合组成，体积配比是pH 5.0缓冲溶液：乙腈＝40-30：60-70；

流速：0.8ml/min；

柱温：35-45℃；

紫外线检测波长：220nm-225nm；

进样体积：18-22μl；

S2：配置样品溶液：取头孢唑肟钠适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含1.5mg的溶液；

S3：对照品溶液制备：精密量取杂质对照品适量，用流动相A定量稀释制成每1ml中约含各杂质3约含的混合溶液；

S4：测定峰面积，采用外标法计算样品中各杂质含量。

优选的，所述流动相A为pH 5.0缓冲溶液和乙腈混合组成，体积配比是pH 5.0缓冲溶液：乙腈＝93：7。

优选的，所述流动相B为pH 5.0缓冲溶液和乙腈混合组成，体积配比是pH 5.0缓冲溶液：乙腈＝40：60。

优选的，所述S1中十八烷基硅烷键合相色谱柱选用的规格为4.6mm×250mm，5μm。

优选的，所述S1中十八烷基硅烷键合相色谱柱的柱温为40℃。

优选的，所述S1中紫外检测器的检测波长为220nm。

优选的，所述S1中进样体积为20μl。

根据权利要求1所述的头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的色谱分析方法在头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的研究中的应用。

由上述技术方案可知，本发明提供头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的色谱分析方法与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明根据头孢唑肟结构特点、原料药工艺和制剂工艺，结合各国药典等综合分析，头孢唑肟异构体以及头孢唑肟聚合物为本品重点关注杂质，本发明针对本品异构体及聚合物杂质的分析方法进行研究，以期更准确的检测出本品的异构体和聚合物杂质，从而更好控制产品质量。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对本发明实施例或现有技术描述中所需要使用的附图做出简单地介绍和说明。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的部分实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为《中国药典》2015年版头孢唑肟钠有关物质分析方法图谱；

图2为JP18头孢唑肟钠有关物质分析方法图谱；

图3为本发明头孢唑肟钠有关物质分析方法图谱；

图4为本发明头孢唑肟钠有关物质分析方法图谱；

图5为《中国药典》2020年版头孢唑肟钠有关物质分析方法图谱。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，以下所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。为了对本发明的技术方案和实现方式做出更清楚地解释和说明，以下介绍实现本发明技术方案的几个优选的具体实施例。

一、各国药典收载有关物质方法以及本次发明的头孢唑肟钠异构体杂质和聚合物杂质的分析方法如下：

目前各国药典收载的头孢唑肟钠有关物质分析方法中《中国药典》2015年版和JP18均采用等度洗脱，且有机相较少，低极性杂质无法有效洗脱，因此均只检测出主峰前1个开环杂质，无法有效检出本品的异构体杂质及聚合物杂质，《中国药典》2020版增加了梯度洗脱，检测出的杂质增多，但该方法流动相A为pH3.6纯缓冲盐溶液、流动相B为纯乙腈，仪器混合，梯度洗脱，且稀释剂(pH7.0)与流动相A(pH3.6)pH值相差较大，结果基线较差，本品异构体杂质以及聚合物杂质含量均偏低，对其检出具有一定影响。

本次发明不仅改变了JP18、和《中国药典》2015等度洗脱方式，提高有机相比例，并在《中国药典》2020版基础上选择头孢唑肟钠异构体杂质和聚合物杂质吸收强度更高的检测波长220nm，将流动相A和流动相B调整为缓冲溶液：乙腈93:7和40:60的混合溶液，确定流动相A为样品稀释剂，最后调整梯度洗脱程序，该发明方法增加了异构体杂质和聚合物杂质的检出个数，且增大了异构体杂质(6R,7S)-头孢唑肟(杂质C)于相邻杂质的分离度，提高了异构体杂质(6R,7S)-头孢唑肟(杂质C)检测的准确度。

二、各国药典及本发明头孢唑肟异构体杂质以及聚合物杂质分析方法效果比较：

(1)本发明方法与JP18、《中国药典》2015年版对比

本发明和《中国药典》2015年版、JP18不同，《中国药典》2015年版、JP18均采用等度洗脱，且有机相较少，《中国药典》2015年版仅能检出主峰前的1个杂质(头孢唑肟开环杂质)，本品的异构体杂质和聚合物杂质均无法有效检出，JP18方法基线不稳，对杂质检出影响更大，无法检出本品异构体杂质和聚合物杂质。本发明方法改用梯度洗脱的方式，流动相增加有机溶剂(乙腈)的比例，解决了《中国药典》2015年版、JP18方法基线不稳，不能洗脱出低极性杂质的问题，《中国药典》2015年版、JP18和本发明方法色谱图详见图1～图3。

(2)本发明方法与《中国药典》2020年版对比

本发明选择头孢唑肟异构体杂质和聚合物杂质吸收强度更高的检测波长220nm，相较中国药典2020年版的254nm，能多检出1个异构体杂质(杂质A：头孢唑肟E异构体)和1个聚合物杂质(杂质F：头孢唑肟二聚体)，且各异构体杂质以及聚合物杂质在220nm下的吸收较在254nm波长下的吸收强。

在中国药典2020年版基础上调整流动相A(由pH3.6缓冲液优化为pH5.0缓冲液：乙腈-93:7)和流动相B(由乙腈优化为pH5.0缓冲液：乙腈-40:60)，避免了《中国药典》2020年版分析方法缓冲盐相和纯乙腈相混合梯度洗脱导致的基线不稳定，故保证本发明能够稳定的检测出头孢唑肟钠中更多含量偏低的异构体杂质和聚合物杂质。《中国药典》2020年版分析方法中异构体杂质(杂质C：(6R,7S)-头孢唑肟)和相邻杂质峰分离不完全，分离度为0.41，而本发明方法将异构体杂质(杂质C：(6R,7S)-头孢唑肟)和峰前相邻杂质峰分离度增加至1.76，两个杂质峰基线已完全分离，增强了异构体杂质(杂质C：(6R,7S)-头孢唑肟)检测准确度。本发明方法及《中国药典》2020年版有关物质分析色谱图见图4和图5。

本发明方法对各异构体杂质及聚合物杂质的检出能力比国药典2020年版更强或相当，详细异构体杂质和聚合物杂质检出数据见表2。

表2本发明方法与《中国药典》2020年版已知杂质检出结果对比

采用《中国药典》2020年版头孢唑肟钠有关物质分析方法和本发明方法对不同批次头孢唑肟钠异构体杂质和聚合物杂质进行分析，结果《中国药典》2020年版方法未检出异构体杂质和聚合物杂质，本发明检测方法检出了头孢唑肟E异构体、头孢唑肟△异构体两个异构体杂质和头孢唑肟聚合物杂质1、头孢唑肟聚合物杂质2、头孢唑肟二聚体等三个聚合物杂质，且本发明方法检测出的其他单个的杂质数量更多，总杂检出量更大。

表3三批头孢唑肟钠《中国药典》2020年版方法有关物质检测数据

表4三批头孢唑肟钠本发明方法有关物质检测数据

本发明提供的头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的色谱分析方法应用于头孢唑肟钠及其制剂异构体和聚合物的研究。

最后，还需要说明的是，本说明书附图所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本申请可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本申请所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本申请所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。本发明并不局限于上述最佳实施方式，任何人应该得知在本发明的启示下做出的结构变化，凡是与本发明具有相同或相近的技术方案，均落入本发明的保护范围之内。