包含喹啉衍生物的药物偶联物

技术领域

本发明涉及新型天然产物衍生的基于康普瑞汀(combretastatin)的化合物，其特别是在药物偶联物中用作有效负载物(payload)(也称为毒素)。本发明还涉及康普瑞喹啉(combretaquinolines)的新组合物，包括可用作有效负载物、有效负载物连接子和药物偶联物的组合物，以及使用这些有效负载物、有效负载物连接子和药物偶联物来治疗诸如癌症、炎性或传染性疾病之类的病理的方法。

背景技术

对于许多类型的癌症，常规化学疗法仍然是唯一有效的治疗形式。化学疗法基本上是在细胞毒性作用的基础上起作用的：毒素杀死癌细胞，从而阻止了肿瘤的生长。化学治疗剂主要以高水平的细胞分裂活性来损伤并且破坏细胞。然而，这些治疗方法需要改进，以便更好地靶向并且破坏恶性细胞，同时最大程度地减少对正常组织的意外附带毒性。实际上，即使在目前，由于这些药物产品也损害健康细胞，因此患者遭受严重的不良事件或影响。许多具有高细胞毒性的药物产品在临床上的应用受到限制，因为它们对正常细胞具有与对恶性肿瘤细胞同等的攻击性。健康组织可能会受到细胞毒性剂的显著影响。由于这些药物产品没有明确地区分正常细胞和肿瘤细胞，从而导致不良反应，因此通常以最小剂量给予药物，这往往会降低其功效。这就是为什么找到一种专门靶向细胞肿瘤的方法很重要。

改善药物和其他药物向靶细胞、组织和肿瘤的递送以实现最大功效和最小毒性一直是许多年以来大量研究的重点。现在，现代抗癌疗法使用大分子(例如抗体)更精确地靶向癌症。抗体是免疫系统中重要的、天然存在的部分，是能够特异性结合“入侵者”(例如病毒)的细胞表面并以此方式消除它的大分子。然而，抗体(通常不能治愈)需要与化学治疗剂联合使用。

尽管已进行了许多尝试来开发有效的方法，以在体内和体外将生物活性分子导入细胞，但仍没有一种方法被证明是完全令人满意的。优化药物与其细胞内靶标的结合并同时最小化药物例如向相邻细胞的细胞间再分布通常是困难的、低效的或无效的。

抗体偶联物和药物(“抗体药物偶联物”也称为ADC)的概念试图克服这些限制。它们由3个关键元件组成：抗体(设计用于选择性靶向目标肿瘤)、毒性有效负载物(会杀死肿瘤的细胞毒性化合物，在本领域中称为“有效负载物”)和连接子(用于将毒性有效负载物与抗体偶联)。这种构造的主要优点在于：治疗窗口的显著增强：毒性有效负载物的半衰期和特异性增加，降低了脱靶毒性和效应。在过去的三十年中，ADC的使用已成为广泛深入研究的主题(Moolten等人(1972),J Natl Cancer Inst.49(4):1057-62,Chari等人(2014)Angewandte Chemie Int.Ed.53:3796-3827；Jackson,(2016)Org.Process Res.Dev.2016,20:852-866)。许多ADC已经被批准并上市(来自Roche的Kadcyla和来自Seattle Genetics的Adcetris)。

ADC中使用的有效负载物(或毒素)包括：细菌毒素，如白喉毒素(Levy等人(1975)Cancer Res.35(5):1 182-6)；植物毒素，如蓖麻毒素；小分子毒素，如美登木素生物碱(EP1391213；Liu等人(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:8618-8623)、加利车霉素(Lode等人(1998)Cancer Res.58:2925-2928；Upeslacis等人(1993)Cancer Res.53,3336-3342)、瑞奥西汀(Sanderson等人(2005)Clin.Cancer Res.11:843-52)、SN-38或伊立替康类似物(Govidan等人(2013)Mol.Cancer.Ther.12:968-78,US 2014/0227180A1,Goldenberg等人(2007),Clin.Cancer Res.13,5556s-5563s)、吡咯并苯并二氮杂卓(US 2011/0256157A1,Kung Sutherland等人Blood(2013)122:1455-1463,Chari等人(2009)Mol.Cancer Ther.8,B126.)或隐藻素(WO 2011/001052A1,Verma等人(2015)Bioorg.Med.Chem.Lett.25:864-8,US 2012/0225089)。目前，正在临床评估过程中的所有ADC中的大于60％携带与一甲基奥利斯他汀E和F有关的毒素(微管蛋白抑制剂MMAE，MMAF)。MMAE会被本领域技术人员认为是可以与之进行比较的参考标准有效负载物。

直接或通过连接剂(连接子)将药物与抗体偶联需要考虑多种因素，包括：与药物偶联的化学基团的同一性(identity)和位置、药物释放的机理、提供药物释放的结构元件以及对释放的游离药物的结构修饰。另外，如果要在抗体内化后释放药物，则药物的释放机制必须与偶联物的细胞内运输相辅相成。因此，尽管已经尝试了一定数量的不同药物类别作为有效负载物，但是由于其有限的有效性、选择性和/或稳定性，已证明只有少数药物类别有效作为抗体药物偶联物(Tolcher等人(2000)J Clin.Oncol.18:4000,Laguzza等人(1989)J.Med.Chem.32:548-555,Uadia P,(1984).Cancer Res.44:4263-4266)。事实证明，为了有效地成为合格的偶联物，化合物应表现出低于纳摩尔IC50水平的细胞毒性水平(Casi和Neri,(2012)J.Control Release.20；161(2):422-8；Wu和Senter(2005)Nat.Biotechnol.23(9):1 137-46)。理想的有效负载物应从多药耐药性机制(MDR)中逸出。对于受到MDR感染的MMAE，某些肿瘤能够形成耐药机制(Chen等人，2015)。可获得的少量有效负载物对多种癌症适应症均无效。由于这些限制，临床上需要具有不同作用方式、改进的选择性和毒性特征且不受MDR影响的新型有效负载物。由于这些原因，康普瑞汀被认为是潜在的有毒有效负载物。

实际上，康普瑞汀于1980年代从非洲天然树南非矮生柳树(Combretum caffrum)等中分离得到，并被证实具有微管蛋白聚合抑制活性(Pettit GR(1987),J Nat Prod 50:119-131)。康普瑞汀A-4(或CA-4)及其类似物具有细胞毒性并且选择性破坏肿瘤血管或阻止其新生(Dark等人(1997)Cancer Res 57,1829-1834,Grosios K,et al(1999)Br J Cancer81:1318-1327)。这种结构上非常简单的二苯乙烯CA-4具有若干缺点，如低水溶性和Z构型双键的化学不稳定性，其在存储、给药和新陈代谢期间会异构化。CA-4的另一个缺点是其细胞毒性不足。通过使用如喹唑啉(见图1B)和喹啉(见图1C和D)之类的含氮杂环开发新型衍生物已克服了这些问题(Soussi MA等人(2015)Chem.Med Chem.10(8):1392-402；I.Khelifi等人(2017),European Journal of Medicinal Chemistry 127:1025-1034)。使用这些衍生物，已消除了引起神经毒性或心脏毒性的3,4,5-三甲氧基苯基基团。然而，这些化合物都不能用作有效负载物。

在某些专利中，康普瑞汀被引用潜在地作为有效负载物，但没有示例性或支持性数据：(EP 1 912 677B1“PSMA抗体-药物偶联物”)；WO 2014/164534(“通过糖工程改造的位点特异性抗体-药物偶联物”)；US 8,535,678B2(“抗CD70抗体-药物偶联物及其在治疗癌症和免疫疾病中的用途”)。另一方面，在一些研究的背景下，康普瑞汀已被评估为潜在的有效负载物，但由于研究作者自认的其有限的效力、稳定性问题和不利的代谢特征而没有临床应用(Toki等人(2002)J.Org.Chem.67,1866-1872,Bolu等人(2016)Mol.Pharmaceutics,13,1482-1490,R.Nani等人(2015)Angew.Chem.Int.Ed.Engl.9；54(46):13635-13638)。使用康普瑞汀衍生物作为有效负载物的唯一例子来自描述新的isoNH2CombretaQuinolines(异氨基康普瑞喹啉)的专利申请(PCT/EP2018/058168)。然而，所得的ADC曲妥珠单抗-VC-PAB-ICQO-1对细胞系SKBR3的IC50值为27μg/mL。这种细胞毒性水平比ADC预期的ng/mL低3个对数，这不足以用于治疗用途。换句话说，尽管这些衍生物已经显示出作为自主衍生物的有前途的属性，但是它们在偶联时似乎失去了细胞毒性。另外，已证明这些衍生物的偶联过程是困难的，并且可能是创新改进的主题。

总之，到目前为止，即使使用新的异氨基康普瑞喹啉衍生物，但大多数偶联尝试也都失败。

因此，本发明寻求解决上述一个或多个技术问题。

发明内容

特别地，本发明的目的是提供一种化合物，该化合物可用作有效负载物(毒性有效负载物或毒素)，其表现出毒性、稳定性和代谢特性，其适合作为有效负载物，特别是可用于药物偶联物的有效负载物。

本发明的目的是提供一种新的有效负载物，其具有不同的作用模式、改进的选择性和毒性特征，并且不受多药耐药现象的影响。

经过长时间的研究并且以令人惊讶的方式，本发明人发现了具有能够应用于抗体-药物偶联物的结构的新型化合物。

因此，根据第一方面，本发明涉及一种具有式(I)的化合物：

其中：

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

所述具有式(I)的化合物以碱或酸或酸盐或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

发明人发现这些化合物呈现出改善的抗癌功效，特别是抗耐药肿瘤细胞的功效。另外，它们具有高水平的化学稳定性并且不经历任何异构化，因此不具有失活的趋势。

根据第二方面，本发明涉及具有式(II)的化合物：

其中：

-Y

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-L代表连接剂(连接子)；

-RM

该具有式(II)的化合物以碱或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

根据第三方面，本发明涉及一种具有式(II)的抗体-药物偶联物：

其中：

-Y

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-L代表连接剂(连接子)；

-AC代表靶向剂部分，特别是抗体部分或其功能片段；以及

其中，DAR(药物与抗体[即，靶向剂]之比)为1至8，并且优选为2至4。

如实验部分所示并且以出乎意料的方式，发明人已经表明：此类化合物与已知的有效负载物相比非常有效，并且对多种癌细胞具有非常好的抑制活性。

特别地，具有式(I)的化合物是在体内，优选在靶标部位处从具有式(III)的化合物中释放出的。

具体实施方式

通过阅读下面的详细描述，本发明的其他特征、方面和优点将变得显而易见。

在本发明的上下文中，使用以下定义：

-“C

-烷基表示直链或支链的一价饱和脂族基团，其可以例如包含1至25个碳原子，优选1至5个碳原子。举例来说，可以提及的有甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基等。

-亚烷基表示直链或支链的二价饱和烷基，其可以例如包含1至25个碳原子。

-亚烯基是指包含一个碳-碳双键的直链或支链的脂肪族烃基，而其他键可以是单键或其他双键，并且例如可以包含1至25个碳原子，并优选2至6个碳原子。举例来说，可以提及的有亚乙烯基(-CH＝CH-)、1-亚丙烯基、2-亚丙烯基、1-亚丁烯基、2-亚丁烯基、3-亚丁烯基等。

-亚炔基表示包含直链或支链的碳-碳三键的脂肪族烃基，其他键可以是单键、双键或其他三键，并且例如可以包含1至25个碳原子，优选2至6个碳原子。举例来说，可提及的有亚乙炔基、1-亚丙炔基、2-亚丙炔基等。

--CF

-亚环烷基表示可以包含3至12个碳原子的单环或多环的二价非芳族环。举例来说，可以提及的有亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基、亚环庚基等。

-亚环烯基表示单环或多环的二价非芳族环，其可以包含3至12个碳原子，并且包含一个或多个不饱和基。举例来说，可以提及的有亚环戊烯基和亚环己烯基。

-杂环亚烷基表示单环或多环的二价非芳族环，其可包含3至12个碳原子和至少一个选自O、N或S的杂原子。

-杂环亚烯基表示单环或多环的二价非芳族环，其可以包含3至12个碳原子和选自O、N或S的至少一个杂原子，并且包含一个或多个不饱和键(unsaturation)。

-亚芳基表示全部或部分芳族的二价环，其可以包含3至20个碳原子，例如亚苯基。

-杂亚芳基表示全部或部分芳族的二价环，其可包含3至20个碳原子，和至少一个选自O、N或S的杂原子。

-根据本发明，术语“取代的”应理解为表示一个或多个氢被一个或多个基团取代的事实，该基团例如选自以下基团：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基、酰基、芳酰基、杂芳酰基、羧基、烷氧基、芳氧基、酰氧基、芳酰氧基、杂芳酰氧基、烷氧羰基、卤素、(硫)酯、氰基、磷酰基、氨基、亚氨基、(硫)酰氨基、巯基、烷基硫基、酰硫基、磺酰基、硫酸根、磺酸根、氨磺酰基、亚磺酰氨基、硝基、叠氮基、卤代烷基，特别是全氟烷基(如三氟甲基)、卤代烷氧基、烷基硫烷基、烷基亚磺酰基、烷基磺酰基、烷基磺酰氨基、芳基磺酰氨基、磷酸根、膦酸根、亚磷酸根、烷基羧基、烷基酰胺氧代、羟基、巯基、氨基(可选地例如被烷基、芳基或杂芳基单取代或二取代)、脒基、氨基磺酰基、酰氨基、芳酰氨基、(硫)脲基、(芳硫)脲基、烷基(硫)脲基、环烷基(硫)脲基、芳氧基、芳烷氧基，或-O(CH

-术语“反应性官能团”应理解为是指能够与另一种化合物形成共价键的官能团。

-部分(moiety)表示化合物的一部分。

-术语“功能性片段”应理解为是指包含可能被保护的反应性官能团的化合物的一部分。

-术语“保护基”应理解为是指从化学官能团引入分子以掩盖其全部或部分反应性的官能团。例如，它可以是酰亚胺、酰胺、氨基甲酸酯、亚胺、烯胺、磺酰化衍生物、N-亚磺酰化的衍生物、N-烷基化的衍生物或N-甲硅烷基化的衍生物、二醇、羰基化衍生物、乙缩醛、醚、苄基醚、甲硅烷基醚、酯等。

-术语“药学上可接受的”应理解为是指可以用于制备药物组合物的物质，其通常是安全的、无毒的并且在生物学上或其他方面都是期望的，并且对于人药和/或兽药是可接受的使用。

-术语“酸或碱的盐(酸盐或碱盐)”应理解为指成盐化的酸或碱，例如酸加成盐可能由无机酸(如盐酸、硫酸或磷酸)或有机酸(如乙酸或苯甲酸)形成。碱盐可以由无机碱(如氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠)或有机碱(如二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺或三甲胺)形成。

-术语“水合物或溶剂化物”应理解为是指与一种或多种水分子或与溶剂的缔合或结合的形式。

如上所述，本发明的目的涉及具有式(I)的化合物：

其中：

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

所述具有式(I)的化合物以碱或酸或酸盐或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

优选地，R

优选地，R

根据一种优选的实施方式，具有式(I)的化合物的确具有式(Ia)：

其中：

-R

-R

-R

-R

该化合物以碱或酸或酸盐或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

优选地，R

优选地，R

根据甚至更优选的实施方式，该化合物选自：

根据一种优选的实施方式，具有式(I)的化合物的确具有式(Ib)：

其中：

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

该化合物以碱或酸或酸盐或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

优选地，R

根据一种优选的实施方式，具有式(I)的化合物的确具有式(Ic)：

其中：

-W代表-CH＝CH-或-C≡C-；

-n为0、1、2、3或4，并且优选n为0或2；

-R

-R

-R

-R

-R

该化合物以碱或酸或酸盐或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

根据一种甚至更优选的实施方式，该化合物选自：

本发明涉及一种用于制备根据本发明的具有式(I)的化合物的方法，其中，R

-使具有式(A)的化合物经历胺化反应以形成具有式(B)的化合物：

其中，R

其中，R

-使具有式(C)的化合物经历氰化反应以形成具有式(D)的化合物：

其中，R

其中，R

-使具有式(B)的化合物与具有式(D)的化合物接触，以通过芳族亲核取代反应形成具有式(E)的化合物：

其中，R

-使具有式(E)的化合物经历甲基化反应，然后经历还原或脱保护反应，以形成具有式(I)的化合物：

其中，R

本发明还涉及一种用于制备根据本发明的具有式(I)的化合物的方法，其中，R

-使具有式(F)的化合物经历硝化反应以形成具有式(G)的化合物：

其中，R

其中，R

-使具有式(H)的化合物经历氰化反应以形成具有式(D)的化合物：

其中，R

其中，R

-使具有式(G)的化合物与具有式(J)的化合物接触，以通过在钯存在下的偶联反应形成具有式(K)的化合物：

其中，R

-使具有式(K)的化合物经历甲基化反应，然后经历还原反应，以形成具有式(L)的化合物：

其中，R

本发明还涉及一种用于制备根据本发明的化合物的方法，其中，R

-使具有式(M)的化合物经历氰化反应以形成具有式(N)的化合物：

其中，R

其中，R

-使具有式(N)的化合物与具有式(O)的化合物接触，以通过芳族亲核取代反应，然后通过甲基化反应形成具有式(P)的化合物：

其中，R

其中，R

-使具有式(P)的化合物经历与以下基团的有机金属偶联反应：-C

其中，R

根据一种优选的实施方式，本发明涉及一种用于制备根据本发明的化合物的方法，其中，R

-使具有式(B)的化合物与具有式(D)的化合物接触，以通过芳族亲核取代反应或者在催化剂存在下，特别是基于钯的催化剂存在下，通过偶联反应形成具有式(E)的化合物：

其中，R

其中，R

其中，R

-使具有式(E)的化合物经历甲基化反应，然后经历还原或脱保护反应，以形成具有式(I)的化合物：

其中，R

根据一种优选的实施方式，本发明涉及一种用于制备化合物(Ic)的方法，其特征在于，

-使具有式(N)的化合物与具有式(O)的化合物接触，以通过芳族亲核取代反应，然后通过甲基化反应，形成具有式(P)的化合物：

其中，R

其中，R

其中，R

-使具有式(P)的化合物经历与以下基团的有机金属偶联反应：-(C

其中，

优选地，由芳族亲核取代引起的偶联在酸性介质中，特别是在盐酸的存在下进行。

特别地，它们在极性非质子溶剂中，更特别地在二噁烷中进行。

有利地，在120℃至160℃，特别是130℃至150℃，特别是在溶剂回流时的温度下进行偶联。

有利地，偶联步骤进行10小时至14小时，特别是11小时至13小时，优选12小时的时间。

特别地，偶联反应可以在偶联剂的存在下进行，如二异丙基碳二亚胺(DIC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)、羰基二咪唑(CDI)、2-(1H-苯并三唑-l-基)-2,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)、2-(1H-苯并三氮唑-l-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)、O-(7-氮杂＝苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、(苯并三唑-l-基氧基)三吡咯烷基

烷基化(优选甲基化)的步骤，特别是胺的烷基化的步骤，是具有执行该反应所需的所有知识的本领域技术人员所熟知的反应。例如，它们可以通过在碱(特别是是碳酸盐)的存在下使胺与-(C

胺化、氰化、还原或脱保护或甚至硝化的反应是具有执行该反应所需的所有知识的本领域技术人员所熟知的反应。

特别地，胺化步骤可以在60℃～100℃(特别是70℃～90℃)的温度下，特别是在固体铁和盐酸的存在下进行。

根据本发明的制备方法还可以可选地包括特别是在药学上可接受的酸或碱的存在下所形成的化合物的盐化步骤，以便提供药学上可接受的盐。

本发明还涉及中间体化合物，选自：

本发明还涉及这种中间体化合物在制备具有上述式(I)的化合物中的用途。

根据另一方面，本发明涉及一种具有式(II)的化合物：

其中：

-Y

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-L代表连接剂(连接子)；

-RM

所述具有式(II)的化合物以碱或碱盐的形式，或以水合物或溶剂化物的形式存在。

根据第一优选的实施方式，L-RM

根据另一种优选的实施方式，该化合物选自：

根据本发明的连接剂或“连接子”是连接两种组成成分的化合物，每种组成成分被连接至连接剂的一端。

在连接剂是共价键的情况下，毒性化合物(“有效负载物”)与靶向剂(如抗体)的直接结合会降低有效负载物与细胞内靶向分子相互作用的能力。

根据优选的实施方式，连接子增加了两种成分之间的距离，特别是有效负载物与靶向剂之间的距离，并因此减弱了它们之间的空间干扰。

特别地，连接子具有在其主链中包含1至30个原子的连续链，连接子的长度被定义为有效负载物与靶向剂之间的最低原子数或键数。

根据一种特定的实施方式，连接子选自以下基团；可选被取代的C

根据一种特定的实施方式，连接子可以包含二硫键。

应当理解，连接子必须在一个单独步骤中或在多个步骤中，例如两个连续步骤中，被附接至有效负载物和靶向剂。为此，连接子具有两个基团，特别是在近端和远端，这两个基团可以(i)与待连接的成分之一中存在的基团，特别是在有效负载物和靶向剂上被活化的基团形成共价键，或者(ii)被活化或可以被活化以在一组有效负载物上形成共价键。

因此，根据一种优选的实施方式，由于偶联反应，存在于连接子的末端的化学基团选自酯、醚、氨基甲酸酯、肽键等。

根据一种特定的实施方式，连接子L是包含1至20个原子，特别是包含2至18个原子，更特别地是5至16个原子，优选为6至15个原子的直链，该原子彼此独立地选自C、O、N和S。

根据一种特定的实施方式，直链的原子的至少60％是碳原子。特别地，直链的原子通过单键连接。

根据一种特定的实施方式，连接子L是选自以下的基团：亚烷基、杂亚烷基、亚烯基、杂亚烯基、亚炔基、杂亚炔基、亚环烷基、杂亚环烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基或杂亚烷芳基，其包含1至4个选自N、O和S的杂原子，所述连接子可选地被取代。

根据一种特定的实施方式，连接子L包括以下基团中的至少一种：二硫化物(-SS-)、醚(-O-)、硫醚(-S-)、胺(-NH-)、酯(-O-C(＝O)-或-C(＝O)-O-))、酰胺(-NH-C(＝O)-或C(＝O)-NH-)、氨基甲酸酯(-NH-C(＝O)-O-或-O-C(＝O)-NH-)或脲部分(-NH-C(＝O)-NH-)。

根据本发明的一种特定的实施方式，连接子L包含：m个以下基团，所述基团选自亚烷基、亚烯基、亚炔基、环亚烷基、杂亚烷基、杂亚烯基、杂亚炔基、杂环亚烷基、亚芳基、杂亚芳基、亚芳烷基和杂亚芳烷基，这些基团中的每一个可能被取代；n个以下基团，所述基团彼此独立地选自至少一种以下基团：二硫化物(-SS-)、醚(-O-)、硫醚(-S-)、胺(-NH-)、酯(-O-C(＝O)-或-C(＝O)-O-)、酰胺(-NH-C(＝O)-或C(＝O)-NH-)、氨基甲酸酯(-NH-C(＝O)-O-或-O-C(＝O)-NH-)或脲部分(-NH-C(＝O)-NH-)，m等于n+l。特别是，m为2且n为1，或m为3且n为2。更特别地，连接子包含2或3个未取代的亚烷基，以及1或2个分别与未取代的亚烷基连接的二硫化物、醚、硫醚、胺、酯、酰胺、氨基甲酸酯或脲部分。

根据一种特定的实施方式，直链中的碳原子独立地形成可选取代的亚甲基(-CH

特别地，连接子L是稳定的连接剂，也就是说，它(i)在酶的存在下和(ii)在细胞内还原性环境中是稳定的。

根据一种特定的实施方式，稳定的连接子不包含(i)可切割的酶亚结构和/或(ii)二硫基。特别地，连接子具有至多12个原子的长度，特别是2至10个原子的长度，更特别地4至9，甚至更特别地6至8个原子的长度。

根据另一种特定的实施方式，连接子是可切割的连接剂，也就是说，(i)它可以通过化学切割来切割，或者(ii)它是可还原的连接剂。

根据一种实施方式，连接剂可通过还原切割，也就是说，其可在细胞内还原环境中切割。特别地，它可能是含有二硫基团的连接子，导致在胞内还原环境内化后与靶向剂偶联的有效负载物在胞内释放(Shen等人(1985),J Biol.Chem.260:10905-10908)。

根据一种特定的实施方式，连接剂包含二硫键，特是-CMe

根据其他实施方式，连接子可通过化学切割，特别是通过水解或蛋白水解来切割。特别地，化学切割被酶催化，也就是说，连接子可以被酶，特别是溶酶体肽酶(如组织蛋白酶B)切割，导致与靶向剂偶联的有效负载物在内化之后在细胞内释放(Dubowchik等人(2002)Bioconjug Chem.13:855-69)。根据一种特定的实施方式，可切割的连接子包含二肽，该二肽选自苯丙氨酰赖氨酸(Phe-Lys)、缬氨酰赖氨酸(Val-Lys)、苯丙氨酰丙氨酸(Phe-Ala)、缬氨酰丙氨酸(Val-Ala)、苯丙氨酰瓜氨酸(Phe-Cit)和缬氨酸瓜氨酸(Val-Cit)。特别地，可切割的连接子另外在二肽与有效负载物之间包含对氨基苄基(PAB)间隔子。

根据一种实施方式，连接子包含腙基团。在这种特定的实施方式中，切割通过在溶酶体中的水解而发生。

根据一种实施方式，连接子是自消灭性的连接剂，也就是说，其包含可切割的键。特别地，在切割后，发生片段化，该片段化除去了在所述切割后仍保持附着于有效负载物的一部分连接子。特别地，连接子可以包括以下基团：-(可切割键)-X-苯基-CH

根据一种优选的实施方式，连接剂选自以下化合物：

作为适用于本发明的连接子，还可以提及Jun Lu等人(“Linker shaving acrucial role in antibody-drug conjugates”,Int.J.Mol.Sci.2016,17,561)、JessicaR.McCombs和Shawn C.Owen(“Antibody drug conjugates:Design and selection oflinker,payload and conjugation chemistry”,The AAPS Journal,vol.17,No.2,March2015,339)、Laurent Ducry和Bernhard Stmmp(“Antibody-drug conjugates:linkingcytotoxic payloads to monoclonal antibodies”,Bioconjugate Chem.2010,21,5-13)和Nareshkumar Jain等人("Current ADS linker chemistry,Pharm.Res.2015,32:3526-3540)描述的连接子。

本发明还涉及包含上述化合物的抗体-药物偶联物。

根据其再另一个方面，本发明涉及一种具有式(II)的抗体-药物偶联物：

其中：

-Y

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-R

-L’代表连接剂(连接子)；

-AC代表靶向剂部分，特别是抗体部分或其功能片段；以及

其中，DAR(药物与抗体[靶向剂]之比)为1至8，并且优选为2至4。

术语“靶向剂”应理解为是指对生物学靶具有亲和力的分子。靶向剂具有将细胞毒性化合物引导至生物靶标的功能。

术语“生物靶标”应理解为是指一种抗原或一组抗原，优选地位于癌细胞表面上。这些抗原例如可以是生长因子受体、突变的“肿瘤抑制剂”癌基因产物或基因、血管生成相关分子或粘附分子。

特别地，靶向剂选自配体、蛋白质、抗体(例如单克隆抗体)、蛋白质或抗体片段、肽、寡核苷酸或寡糖。

优选地，它是抗体(或免疫球蛋白)或抗体片段。

作为适合于本发明的抗体，可以特别提及的有免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。

抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、嵌合抗体、人源化抗体或优化的抗体，例如具有修饰的糖基化的抗体或具有与一个或多个Fc受体表现出优化的结合亲和力的变体Fc区的抗体。特别地，抗体是单克隆抗体。

更特别地，抗体可以选自：

-抗核抗体，包括抗SSA/Ro(抗

-抗糖蛋白210抗体；

-抗转谷氨酰胺酶抗体，包括抗tTG(抗组织转谷氨酰胺酶)抗体和抗eTG(抗表皮转谷氨酰胺酶)抗体；

-抗神经节苷脂抗体；

-抗肌动蛋白抗体；

-抗CCP(抗环瓜氨酸肽)抗体，肝肾1型微粒体抗体；

-抗凝血酶抗体；

-抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)，包括抗髓过氧化物酶(MPO)、抗蛋白酶3(PR3)、抗乳铁蛋白、抗弹性蛋白酶、细菌诱导蛋白(BPI)、抗组织蛋白酶G；

-抗肾小球基底膜(IV型胶原的α-3链)、抗磷脂酶A2受体(PLA2R)；

-抗类风湿因子抗体；

-抗平滑肌抗体，包括抗肌动蛋白抗体、抗肌钙蛋白抗体和抗原肌球蛋白抗体；

-抗线粒体抗体，包括抗心磷脂抗体、抗亚硫酸盐氧化酶抗体、抗肌氨酸脱氢酶抗体和抗糖原磷酸化酶抗体；

-抗SRP(信号识别颗粒)抗体；

-抗VGCC(电压门控钙通道)抗体；

-抗VGKC抗体(电压门控钾通道)；

-抗合成酶抗体，包含抗PL7，-PL12，-JO1，-EJ和-JO抗体；

-和抗末端补体抗体，包括抗H因子自身抗体、抗C1抑制剂、抗C1q、抗C3、抗因子B、抗C3bBb(来自替代补体途径的C3转化酶)、抗C4b2a(来自经典补体途径的C3转化酶)。

作为同种抗体，可以提及的有人血小板抗原抗体(HPA)和抗IgA抗体。

作为人类治疗性抗体，可以提及选自以下的那些抗体：帕尼单抗、阿克托人单抗、阿达木单抗、阿迪妥木单抗、阿利苏单抗、阿尼鲁单抗、阿替努单抗、阿托利木单抗、贝利木单抗(Belimumab)、柏替木单抗、贝洛托舒单抗、比玛卢单抗、布雷奴单抗(Briakinumab)、布洛鲁单抗、卡那吉努单抗、卡鲁单抗、西舒妥木单抗、西他土珠(Conatumumab)、达雷妥木单抗、地诺单抗、卓齐妥单抗、度利戈妥单抗、度匹鲁单抗、度司妥单抗、依芬古单抗、埃迪鲁单抗、依诺苏单抗、依沃苏单抗、埃比韦卢单抗、法司努单抗、菲扎吉努单抗、菲吉妥木单抗、夫兰妥单抗、弗雷鲁单抗、夫瑞韦如(Foravirumab)、夫瑞利木单抗、伏雷努单抗、加尼妥单抗、冈特奈卢单抗(Gantenerumab)、维汀-格仑妥木单抗(Glembatumumab vedotin)、戈利木单抗、谷瑟库单抗、艾卢苏单抗、英拉苏单抗、英特妥木单抗、艾匹利木单抗、艾雷妥木单抗、乐地单抗(Lerdelimumab)、来沙木单抗、利比韦卢单抗、利瑞鲁单抗、鲁卡妥木单抗、马帕木单抗(Mapatumumab)、玛弗利木单抗、美替木单抗(Metelimumab)、莫洛利木单抗、那米鲁单抗、那呐妥单抗、奈巴库单抗、奈西妥木单抗、奈伐苏单抗、尼沃鲁单抗、奥法木单抗(Ofatumumab)、奥拉妥单抗、奥替苏单抗、奥塞鲁单抗、帕尼单抗(Panitumumab)、帕诺巴库单抗、帕萨妥珠单抗、帕曲妥单抗、普拉鲁单抗、普托木单抗、雷曲妥单抗、瑞非韦鲁、雷姆赛卢单抗、瑞西巴库、瑞加韦单抗(Regavirumab)、瑞洛妥木单抗、洛巴妥木单抗、洛来度单抗、萨瑞鲁单抗、瑟库吉努单抗、瑟库吉努单抗、司韦单抗(Sevirumab)、司卢库单抗、司他莫鲁、他巴鲁单抗、特普妥木单抗、Ticilimumab(＝曲美木单抗(tremelimumab))、托维妥单抗、曲洛吉努单抗、曲美木单抗、妥韦卢单抗、乌瑞鲁单抗、优特克诺、万替妥单抗、维森苏单抗、伏妥莫单抗(Votumumab)、扎鲁木单抗(Zalutumumab)、扎诺利木单抗、齐拉木单抗(Ziralimumab)。

作为鼠类治疗性抗体，可以提及的有选自下列的那些抗体：阿巴伏单抗、阿非莫单抗、马安莫单抗、马安莫单抗、博纳吐单抗、地莫单抗、阿度莫单抗、埃巴单抗、依决洛单抗、伊斯利莫、培化恩莫单抗、西依匹莫单抗、法拉莫单抗、加维莫单抗、替伊莫单抗、英西单抗、伊诺莫单抗、来马索单抗、马司莫单抗、明瑞莫单抗、米妥莫单抗、帕舒托-莫塞妥莫单抗、莫罗单抗-CD3、他那可单抗、埃托-那普妥莫单抗、奈瑞莫单抗、奥度莫单抗、奥戈伏单抗、帕尼单抗、雷妥莫单抗、索利托单抗、帕他普莫单抗、阿替莫单抗、替妥莫单抗、托西莫单抗、维帕莫单抗和阿佐莫单抗。

作为嵌合治疗性抗体，可以提及的有选自下列的那些抗体：阿昔单抗、阿玛妥昔单抗、巴司利昔单抗、巴维昔单抗、维汀-布仑妥昔单抗、西妥昔单抗、依美昔单抗、恩妥昔单抗、伏妥昔单抗、加利昔单抗、吉妥昔单抗、戈利昔单抗、雷星-英达妥昔单抗、英利昔单抗、凯利昔单抗、鲁昔单抗、帕昔单抗、普立昔单抗、瑞托萨昔单抗、利妥昔单抗、司托昔单抗、瑟托萨昔单抗、塞妥昔单抗、替奈昔单抗、乌利妥昔单抗、伐利昔单抗、伏洛昔单抗和扎妥昔单抗。

作为人源化的治疗性抗体，可以提及的有选自下列的那些抗体：阿夫土珠、培戈-阿拉赛珠单抗、阿仑单抗、安芦组单抗、阿泊珠单抗、阿塞珠单抗、托珠单抗(＝托西珠单抗)、巴匹组单抗、本雷利珠单抗、贝伐珠单抗、莫星-贝伐珠单抗、布索组单抗、莫星-坎妥珠单抗、雷星-坎妥珠单抗、卡普赛珠单抗、西利珠单抗、培戈-瑟托利珠单抗、柏托-西他妥珠单抗、克拉吉珠单抗、泰坦-克利妥珠单抗、康赛珠单抗、克瑞奈珠单抗、达塞妥珠单抗、达利珠单抗、达洛妥珠单抗、登赛珠单抗、依库珠单抗、依法利珠单抗、依洛妥珠单抗、依那妥珠单抗、依诺吉珠单抗、依普妥珠单抗、厄利珠单抗、伊瑞西珠、依卓利珠单抗、法乐妥珠单抗、非维珠单抗、菲拉妥珠单抗、芳托利珠单抗、奥-吉妥珠单抗、格沃吉珠单抗、艾巴利珠单抗、英加妥珠单抗、奥-英妥珠单抗、艾托利珠单抗、艾塞吉珠单抗、拉贝珠单抗、兰洛利珠单抗、兰帕利珠单抗、来瑞组单抗、利格利珠单抗、林妥珠单抗、洛迪赛珠单抗、莫星-洛沃妥珠单抗、玛格妥昔单抗、马妥珠单抗、泊珠单抗、米拉组单抗、莫格利组单抗、莫维组单抗、那他利珠单抗、尼莫妥珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥瑞利珠单抗、奥洛吉珠单抗、奥马珠单抗、奥那妥组单抗、蒙托-奥珀妥珠单抗、奥扎奈珠单抗、奥佐利珠单抗、帕利韦珠单抗、帕考利珠单抗、帕特利珠单抗、珀雷吉珠单抗、帕妥珠单抗、培克珠单抗、匹地利珠单抗、维汀-匹那妥珠单抗、维汀-珀拉妥珠单抗、泊奈组单抗、奎利珠单抗、雷珠单抗、瑞司利珠单抗、洛莫索珠单抗、隆他利珠单抗、罗维珠单抗、卢利珠单抗、萨玛利珠单抗、司洛妥珠单抗、司法利木单抗、辛妥珠单抗、西利珠单抗、苏兰组单抗、索能珠单抗(sonepcizumab)、索土珠单抗、苏韦珠单抗、泰坦-他卡妥珠单抗、他多赛珠单抗、他利珠单抗、他尼珠单抗、替非组单抗、特普利珠单抗、替曲吉珠单抗、替加妥珠单抗、托西利珠单抗(＝atlizumab)、托西利珠单抗、托拉利珠单抗(toralizumab)、曲妥珠单抗、曲加利珠单抗、塞莫白介素-妥考妥珠单抗、厄托萨珠单抗、伐特利珠单抗、维多利珠单抗、维妥珠单抗和玛汀-沃瑟妥珠单抗。

优选地，它是人源化的治疗性抗体，更优选曲妥珠单抗。

偶联物通常包含平均1到8个，优选2到4个与靶向剂连接的细胞毒性化合物(有效负载物)(这是接枝度或“药物与抗体[即靶向剂]之比((或“DAR”))。

该数目可以显著地变化，这取决于靶向剂的性质、有效负载物或在偶联过程中使用的条件。

在靶向剂是抗体的情况下，DAR可以例如通过紫外(UV)光谱法或通过偶联物的高分辨率质谱法HRMS光谱的去卷积来确定。

通过UV光谱法评估的DAR称为DAR(UV)，如Antony S.Dimitrov提出的方法所示((ed),LLC,2009,“Therapeutic Antibodies and Protocols”,vol.525,445,SpringerScience)。该方法在于在分离步骤之后在两个波长WL1和WL2下测量偶联物溶液的吸光度。使用从裸露抗体和偶联前的有效负载物所获得的摩尔消光系数。可以在尺寸排阻色谱法(SEC)光谱的相应UV峰上或使用标准UV分光光度计测量WL1和WL2(A

A

A

其中，

·c

·e

·e

术语“裸抗体”应理解为是指没有有效负载物附着的抗体，即，在偶联之前的抗体。

解出这两个方程式将得出以下结果：

c

c

然后，DAR(UV)对应于c

供选择地，可以通过对偶联物的HRMS谱进行去卷积来计算DAR，然后将其称为DAR(HRMS)。

本发明还涉及一种用于制备如上所述的具有式(II)的化合物的方法，其特征在于，所述方法包括使如上所述的具有式(I)的化合物与具有式X-L”-RM

-X代表能够与如上定义的R

-L”代表连接剂(连接子)；

-RM

其中，具有式(I)的化合物的-R

根据一种优选的实施方式，其中，RM

优选地，该方法包括使具有如上定义的式(II)的化合物与靶向剂部分反应的反应步骤。

与靶向剂部分的偶联可以通过将具有式(I)-L-RM的化合物构造物与靶向剂部分中存在的游离氨基偶联来实现。根据这样的实施方式，RM基团可以选自活化的羧酸衍生物，如N-羟基琥珀酰亚胺酯；或活化的碳酸衍生物，如异硫氰酸酯。

与靶向剂部分的偶联还可以通过将具有式(I)-L-RM的化合物构造物与靶向剂部分中存在的游离巯基偶联来实现。根据这样的实施方式，RM基团可以选自卤代乙酰基、包含受体取代的烯烃(迈克尔系统)的RM基团，特别是马来酰亚胺基团或丙烯酰基(Badescu等人，2014,Bioconjugate Chem.,25:460-469)，马来酰亚胺基团在3位被离去基团X取代或在3和4位被离去基团X双取代，离去基团X特别是选自Cl、Br和芳基-S-、特别是苯基-S-。

根据一种特定的实施方式，巯基是存在于野生型靶向剂部分中的单个未偶联的半胱氨酸残基的一部分。根据另一种特定的实施方式，巯基是已经从野生型靶向剂部分产生的单个未偶联的半胱氨酸残基的一部分，特别是通过重组基因工程，例如通过插入到野生型序列中，通过去除与野生型靶向剂部分中的第一半胱氨酸残基形成二硫键的第二半胱氨酸，或通过取代非半胱氨酸残基。根据另一种实施方式，通过还原野生型靶向剂部分中存在的两个半胱氨酸之间的二硫键来产生巯基。

与靶向剂部分的偶联也可以通过将具有式(I)-L-RM的化合物构造物偶联至存在于靶向剂部分中的两个游离巯基来实现。根据这样的实施方式，RM基团可以选自在3和4位被离去基团X双取代的马来酰亚胺基团，离去基团X特别是选自Cl、Br和芳基-S-，特别是苯基-S-。

根据一种实施方式，两个巯基各自形成野生型靶向剂部分中存在的单个未偶联的半胱氨酸残基的一部分。根据另一种特定的实施方式，巯基形成了已经从野生型靶向剂部分产生的两个单个未偶联的半胱氨酸残基的一部分，特别是通过重组基因工程，例如通过插入到野生型序列中，通过去除与野生型靶向剂部分中的第一半胱氨酸残基形成二硫键的第二半胱氨酸，或通过取代非半胱氨酸残基。根据另一种实施方式，通过还原野生型靶向剂部分中存在的两个半胱氨酸之间的二硫键来产生两个巯基。通过使这两个巯基与二取代的马来酰亚胺反应，巯基被桥接，从而模仿了最初存在的二硫键。

根据一种特定的实施方式，可以通过使靶向剂部分中存在的游离氨基硫醇化来产生游离巯基，特别是通过使这些游离氨基与2-亚氨基硫烷(Still等人1984,Can.J.Org.Chem.62:586)和酰基硫代乙酸的衍生物(X-C(＝O)-CH

可以通过与遗传工程引入的非天然氨基酸偶联来实现与靶向剂部分的偶联，例如通过引入对乙酰基苯丙氨酸和随后的肟连接(Kazane等人,(2012)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,109:3731-3736)。

与靶向剂部分的偶联可以通过将环状重氮二甲酰胺与靶向剂部分中的酪氨酸残基的苯环偶联来实现(Ban等人,(2010)J Am.Chem.Soc.13:1523-5)。

可以通过1,3-偶极环加成(“点击化学”)实现与靶向剂部分的偶联。

根据一种实施方式，靶向剂部分包含双键或三键，并且具有式(I)-L-RM的化合物构造包含1,3-偶极，特别是叠氮基。特别地，首先使靶向剂部分与二苯并环辛炔-N-羟基琥珀酰亚胺酯或氮杂二苯并环辛炔-N-羟基琥珀酰亚胺酯反应(Zhou等人(2013)J Am ChemSoc.135:12994-7)。

根据另一种实施方式，靶向剂部分包含1,3-偶极，特别是叠氮基，并且具有式(I)-L-RM的化合物构造物包含双键或三键。特别地，靶向剂部分是糖基化抗体，其首先通过酶催化反应与包含叠氮化物的分子反应(SiteClick；Zeglis等人(2013)Bioconjug Chem.24:1057-67)。根据另一种实施方式，叠氮基团通过非天然氨基酸对叠氮基-苯丙胺结合(Kazane等人(2012)Proc.Natl.Acad.Sci.USA,109:3731-3736)。

本发明还涉及药物组合物，其包含如上定义的抗体-药物偶联物以及药学上可接受的载体。

特别地，根据本发明的药物组合物可以包含至少一种药学上可接受的赋形剂。

药物组合物可以包含一种或多种药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂、吸收剂和/或防腐剂。

本发明还涉及根据本发明的药物组合物，其用作药物产品，特别是用于治疗癌症的药物产品的用途。

本发明还涉及如上定义的抗体-药物偶联物或如上定义的药物组合物，其用作药物产品的用途。

本发明还涉及如上定义的抗体-药物偶联物或如上定义的药物组合物，其用于杀死或抑制细胞生长的用途。

本发明还涉及如上定义的抗体-药物偶联物或如上定义的药物组合物，其用于治疗癌症。

在癌症中，可以没有限制地提及的有各种白血病，例如慢性髓细胞性白血病、淋巴瘤、肉瘤、黑素瘤、肝癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、食道癌、肾癌、胸膜癌、甲状腺癌、皮肤癌、宫颈癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、睾丸癌、前列腺癌、膀胱癌、脑癌、直肠癌或骨癌。

特别地，可以提及的有结直肠癌，肺癌，特别是非小细胞癌、胃癌、胰腺癌、慢性髓细胞性白血病、乳腺癌和卵巢癌，更特别是乳腺癌。

特别地，需要治疗的患者是哺乳动物，尤其是人。

本发明还描述了用于治疗癌症的治疗方法，该方法包括将有效量的至少一种根据本发明的抗体-药物偶联物给药，特别是给药于有需要的患者。

根据一种特定的实施方式，本发明的药物组合物以全身给药的药物形式使用。

因此，根据本发明的药物组合物可以用于肠胃外途径给药。术语肠胃外旨在包括注射剂和输注剂。

可将注射剂配制成安瓿形式或即用型可注射剂，例如即用型注射器或一次性使用型注射器，或者甚至在可穿刺的小瓶中多次配制。注射剂可以皮下(s.c.)、肌内(i.m.)、静脉内(i.v.)或皮内(i.c.)施用形式进行。特别地，可以以晶体、溶液、纳米颗粒或胶体分散体系(例如水溶胶)的悬浮液的形式制备合适的可注射制剂。

可注射组合物可以另外以浓缩物的形式生产，其可以用等渗水性稀释剂溶解或分散。输注剂也可以等渗溶液、脂肪乳剂、脂质体制剂和微乳剂的形式制备。与可注射剂相似，输注剂也可以浓缩形式制备用于稀释。可注射剂也可以在医院住院和非卧床治疗的情况下以永久输注的形式施用，例如通过微型泵。

可以向肠胃外药物组合物中添加例如白蛋白、血浆、稀释剂、表面活性剂、有机稀释剂、影响pH的物质、复合物质或聚合物质，特别是作为影响根据本发明的偶联物对蛋白质或聚合物的吸附的物质；或者，也可以添加它们以减少本发明的偶联物对如(例如塑料或玻璃)注射器械或包装材料等材料的吸附。

包含靶向剂部分的根据本发明的化合物可以结合至微载体或肠胃外纳米颗粒，例如结合至基于聚(甲基)丙烯酸酯、聚乳酸酯、聚乙醇酸酯、聚氨基酸或聚醚氨基甲酸酯的细分散的颗粒。如果本发明的偶联物分别以细分散的方式或以悬浮液的形式引入，则肠胃外组合物也可以例如基于“多次单位原理”而修饰为贮库制剂；或者，如果将本发明的偶联物包封在制剂中，例如包封在随后植入的片剂或棒中，则以药物中晶体悬浮液的形式引入或基于“单次单位原理”。这些单次单位和多次单位制剂中的植入物或药物贮库通常由所谓的可生物降解的聚合物组成，例如乳酸和乙醇酸的聚酯、聚醚氨基甲酸酯、聚氨基酸、聚(甲基)丙烯酸酯或多糖。

在制备配制为肠胃外产品的根据本发明的药物组合物的过程中添加的佐剂和载体尤其选自：无菌水(aqua sterilisata)；pH值影响物质，如有机或无机酸或有机或无机碱或其盐；用于调节pH值的缓冲物质；用于等渗的物质，如氯化钠、碳酸氢钠、葡萄糖和果糖；表面活性剂和乳化剂，如聚氧乙烯脱水山梨糖醇的脂肪酸偏酯(例如

根据一种优选的实施方式，在配制根据本发明的药物组合物期间，该方法包括添加增稠剂以防止本发明的偶联物或表面活性剂和聚电解质的凝固，从而确保沉淀物和/或复合物形成剂(如EDTA)的可重悬浮性。还可能获得活性成分与各种聚合物的复合物。这种聚合物的实例是聚乙二醇、聚苯乙烯、羧甲基纤维素，

对于肠胃外给药，该组合物可以是水性悬浮液或溶液的形式，其可以包含悬浮剂和/或润湿剂。该组合物有利地是无菌的。它可以是等渗溶液的形式(特别是与血液有关)。

根据本发明的化合物可以以每天0.01mg至1000mg的剂量用于药物组合物中，每天一次单次给药或一天中多次给药。

每天施用的剂量有利地为5mg至500mg，并且更有利地为10mg至200mg。

然而，可能有必要使用本领域技术人员所能够理解的这些范围之外的剂量。

根据本发明的一种特定实施方式，根据本发明的化合物的用途是与另一种活性成分(无论其是否具有细胞毒性)，特别是抗癌化合物联合施用。因此，根据本发明的药物组合物还可包含另一种活性成分。

因此，根据本发明的药物组合物包含至少一种如上定义的抗体-药物偶联物和至少一种其他活性成分，其通过同时或分开使用或分散使用一段时间的组合产品，尤其可以用于治疗癌症。

除非另外指明，否则在包括权利要求书的整个说明书中，术语“包含”应理解为与“包含至少一种”同义。除非另有说明，否则表述“在……与……之间”和“从……至……的范围”应理解为包括极限值。

在说明书和实施例中，除非另外指明，否则温度以摄氏度表示，并且除非另外指明，否则压力为大气压。

通过下面在此给出的非限制性实施例来更详细地说明本发明。

1.1总体示意图

在密封管中，将氯化杂环化合物和芳族胺衍生物依次加入2ml的二噁烷中。

然后向混合物中加入一滴HCl，并在搅拌下将反应介质加热至140℃，持续12小时。

冷却混合物，然后用NaOH水溶液(5N)中和，并且混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。

合并的有机相经Na

将粗反应混合物浓缩，并通过硅胶柱色谱法纯化。

以固体形式获得4-((4-甲氧基-3-硝基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈，收率为56％。

测得的熔化温度为219.9～220.5℃。

表征

表征

表征HRMS C

表征IR(纯净)ν

在25mL的Bicol中，将硝基化合物添加到乙醇/水混合物[8/2]中。将反应介质加热至80℃，然后将固态铁(10当量)和3滴HCl添加到反应介质中。在搅拌下将整个混合物加热至80℃，直到硝基化合物完全还原。

将粗反应混合物冷却至环境温度，并在滤纸上过滤。浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱法纯化，从而得到还原产物。

以固体形式获得4-((3-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈，收率为62％。

测得的熔化温度为84.9～92.6℃。

表征

表征

表征HRMS C

表征IR(纯净)ν

表征(液相色谱/质谱法)LC-MS:t.r.15.36。

纯度:95.47％。

在密封管中混合以下物质：4-氯喹啉-2-甲腈(376mg，2.00mmol，1当量)和3-碘-4-甲氧基苯胺(500mg，2.00mmol)、二噁烷(10mL)和浓HCl(5滴)。

将混合物在140℃下加热过夜。

反应介质冷却后，将混合物中和至pH为中性，并用乙酸乙酯萃取。有机相用MgSO

粗残余物通过硅胶色谱法纯化(环己烷：乙酸乙酯0→30％)

以黄色固体形式分离出4-(3-碘-4-甲氧基苯基)氨基)喹啉-2-腈，收率为51％。

表征

表征电喷雾电离-高分辨率质谱法(ESI

将NaH(70.0mg，2.17mmol)添加到0℃的4-((3-碘-4-甲氧基苯基)氨基)喹啉-2-腈(219mg，0.54mmol)在二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)中的溶液中。然后逐滴加入CH

使混合物达到环境温度，用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取，用MgSO

粗残余物通过硅胶色谱法纯化(环己烷：乙酸乙酯0→40％)

以黄色固体形式分离出化合物4-((3-碘-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈，收率为71％。

表征

表征

表征(ESI

表征IR(纯净):1571,1562,1482,1430,1279,1109,808,766,713,603cm

熔点＝175～180℃。

将一当量的羧酸与一当量的NHTHP在二氯甲烷(DCM)中混合。随后加入一当量的(二环己基碳二亚胺)DCC。将混合物在环境温度下搅拌过夜，然后用饱和碳酸氢盐溶液和水洗涤。残余物通过硅胶色谱法纯化(环己烷:乙酸乙酯为1:1)。

获得白色固体形式的N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊-4-烯酰胺，收率为86％。

表征

在用氩气吹扫的密封管中，添加以下物质：如以上实施例2中制备的4-((3-碘-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈(30.0mg，0.072mmol)、N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊-4-烯酰胺(42.0mg，0.20mmol)、三(邻甲苯基)膦(7.20mg，0.023mmol)、Pd(OAC)

使反应介质达到环境温度，用DCM稀释，然后通过硅藻土过滤，然后将滤液蒸发。通过液相色谱/质谱法(LC/MS)确认中间体化合物的形成(参见以上示意图)，该化合物无需纯化即可用于后续步骤。

将4N HCl在二噁烷中的溶液(0.5mL)添加到中间体化合物(参见以上示意图)在无水二噁烷(1mL)中的溶液。将混合物在环境温度下搅拌30分钟，然后在环境温度下蒸发，然后通过高效液相色谱法(HPLC)使用乙腈在水中的梯度进行纯化。冻干后，获得黄色固体形式的化合物(E)-5-(5-((2-氰基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)-N-羟基戊-4-烯酰胺，收率为30％。

表征(ESI

表征IR(纯净):2947,1641,1569,1491,1235,1031,970,758cm

纯度(HPLC):100％。

表征

表征

熔点＝177～182℃.

将一当量的羧酸与一当量的NHTHP在DCM中混合。随后加入一当量的(二环己基碳二亚胺)DCC。将混合物在环境温度下搅拌过夜，然后用饱和碳酸氢盐溶液和水洗涤。残余物通过硅胶色谱法纯化(环己烷:乙酸乙酯为1:1)。

获得白色固体形式的N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊-4-炔酰胺，收率为76％。

表征

在用氩气吹扫的密封管中，添加以下物质：如以上实施例2中制备的4-((3-碘-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈(30.0mg，0.072mmol)、N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)戊-4-炔酰胺(28.0mg，0.144mmol)、PdCl

将混合物脱气并在环境温度下搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释，然后通过硅藻土过滤，然后将滤液蒸发。通过液相色谱/质谱法(LC/MS)确认中间体化合物的形成(参见以上示意图)，该化合物无需纯化即可用于后续步骤。

将4N HCl在二噁烷中的溶液(0.5mL)添加到中间体化合物(参见以上示意图)(29.0mg，0.06mmol)在无水二噁烷(1mL)中的溶液。将混合物在环境温度下搅拌30分钟，然后在环境温度下蒸发，然后通过高效液相色谱法(HPLC)使用乙腈在水中的梯度进行纯化。

冻干后，获得黄色固体形式的化合物5-(5-((2-氰基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)-N-羟基戊-4-炔酰胺，收率为15％。

表征

表征

表征(ESI

表征IR(纯净):2987,1644,1496,1066,766cm

纯度(HPLC):100％。

熔点＝170～175℃。

将一当量的羧酸与一当量的NHTHP在DCM中混合。随后加入一当量的(二环己基碳二亚胺)DCC。将混合物在环境温度下搅拌过夜，然后用饱和碳酸氢盐溶液和水洗涤。残余物通过硅胶色谱法纯化(环己烷:乙酸乙酯为1:1)。

获得白色固体形式的N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烯酰胺，收率为61％。

表征

在用氩气吹扫的密封管中，添加以下物质：如以上实施例2中制备的4-((3-碘-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈(30.0mg，0.072mmol)、N-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烯酰胺(34.0mg，0.20mmol)、三(邻甲苯基)膦(7.20mg，0.023mmol)、Pd(OAC)

使反应介质达到环境温度，用DCM稀释，然后通过硅藻土过滤，然后将滤液蒸发。通过液相色谱/质谱法(LC/MS)确认中间体化合物的形成(参见以上示意图)，该化合物无需纯化即可用于后续步骤。

将4N HCl在二噁烷中的溶液(0.5mL)添加到中间体化合物(参见以上示意图)在无水二噁烷(1mL)中的溶液。将混合物在环境温度下搅拌30分钟，然后在环境温度下蒸发，然后通过高效液相色谱法(HPLC)使用乙腈在水中的梯度进行纯化。

冻干后，获得黄色固体形式的化合物(E)-3-(5-((2-氰基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)-N-羟基丙烯酰胺，收率为55％。

表征

表征

表征(ESI

表征IR(纯净):3213,1567,1492,1427,1241,1105,977,762cm

纯度(HPLC):100％。

熔点＝215～210℃。

根据本发明的化合物4-((3-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈(ICQN-1)、5-(5-((2-氰基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)-N-羟基戊-4-炔酰胺(ICQN-2)和(E))-3-(5-((2-氰基喹啉-4-基)(甲基)氨基)-2-甲氧基苯基)-N-羟基丙烯酰胺(ICQN-3)的IC

对各种不同的癌细胞系HCT116(结直肠肿瘤)、A549(非小细胞肺癌)、NCI-N87(胃肿瘤)、Mia-Paca-2(胰腺肿瘤)、K562R(慢性髓样白血病)、SKOV3(卵巢肿瘤)、SKBr3(乳腺肿瘤、Her2过表达)、MCF7(乳腺肿瘤)和MDA-MB231(乳腺肿瘤)测量IC

癌细胞系获得自美国典型培养物保藏中心(ATCC，罗克维尔，马里兰州)或德国莱比尼兹研究所的微生物和细胞培养物保藏中心(DSMZ，不伦瑞克，德国)或欧洲细胞培养物保藏中心(ECACC，英国)。根据供应商的说明培养癌细胞系。

在补充有10％胎牛血清(FCS)和1％谷氨酰胺的Gibco McCoy's 5A培养基中培养HCT-116人结肠直肠癌、SK-BR3乳腺癌和SK-OV-3卵巢癌细胞。

在补充有10％胎牛血清(FCS)和1％谷氨酰胺的Gibco Roswell Park MemorialInstitute(RPMI)1640培养基中培养A549肺癌细胞、K562R髓样白血病细胞和NCI-N87胃癌细胞。在补充有10％胎牛血清(FCS)和1％谷氨酰胺的Gibco’杜氏改良Eagle培养基(DMEM)中培养Mia-Paca2癌细胞。

在补充有10％胎牛血清(FCS)和1％谷氨酰胺的Gibco RPMI 1640培养基中培养乳腺腺癌细胞MDA-MB231和MCF7。

使用Vi-cell XR(Beckman Coulter)对细胞进行计数，并通过使用0.25％台盼蓝染料排阻测定法评估细胞活力。根据制造商的说明，在使用支原体PCR检测试剂盒(加拿大应用生物材料公司)进行实验之前，测试细胞中是否存在支原体，并且仅将无支原体的细胞用于研究。将细胞系保持在37℃下的含有5％CO

为了测定IC

在处理72小时后，使用CellTiter Glo测定法(Promega)进行测量，该测定法可以使用PolarStar Omega酶标仪(BMG-Labtech)通过生物发光(三磷酸腺苷的定量-ATP)来测定活细胞的数量。

使用Graph Prism软件应用程序绘制剂量响应曲线，并使用Graph Prism软件基于多项式曲线(四个或五个参数逻辑方程)计算IC

结果示于以下表1。

如这些结果所示，根据本发明的化合物对许多癌细胞系表现出非常好的抑制活性。

HCT116、A549、NCI-N87、Mia-Paca-2、K562R、MCF7和MDA-MB231细胞系的IC

在本发明的化合物(ICQN-1)和MMAE之间建立了IC

表2

因此，根据本发明的化合物表现出优于MMAE的非常显著的优点。例如，在NCI-N87(胃癌)细胞系中，ICQN1的功效是MMAE的22倍。

在如上引用的Chen等人发表的工作的上下文中，在所提及的分子中，化合物13b具有以下结构：

该化合物13b示出了在MDA-MB-231细胞系中的IC

以下表3列出了本发明化合物(ICQN-1(4-((3-氨基-4-甲氧基苯基)(甲基)氨基)喹啉-2-腈))和L.Chen等人描述的化合物13b(Eur.J.Med.Chem.2017,138,1114)在7种细胞系中的总体比较数据。

非常令人惊讶的是，本发明的化合物具有的总体细胞毒性活性远大于化合物13b的总体细胞毒性活性。在喹啉的2位Me基团被CN取代后获得的活性是出乎意料的，并且本领域技术人员无法预料到。实际上，根据L.Chen等人以及本领域技术人员，为了保持抑制活性，认为喹啉的2位的甲基是必需的。此外，根据L.Chen等人的观点，在ADC策略的上下文中没有提及任何偶联或应用。

根据Alami等人Eur.J.Med.Chem.2019,168,176-188，通过比较分子1a和1b(下面的结构)，本领域技术人员注意到在喹啉2位上Me被CN取代导致细胞毒性活性急剧下降(在HCT116细胞系中提高了170倍)。

然而，如以上实施例8所支持的，在喹啉的2位Me被CN取代引起细胞毒性的出人意料的改善(提高了10倍)。对于根据本发明的化合物，本领域技术人员没有想到并且不能预见到这种活性。

还应该注意的是，根据Alami等人的化合物1a由于它没有用于结合到连接子的锚点，因此在ADC策略的背景下不能被视为有效负载物。

根据Alami等人J.Med.Chem.2019,62,1902-1916，通过一次比较两个带有双键而不是N-Me基团的分子4f/4j和4g/4k，本领域技术人员会发现用CN代替在喹啉的2位上的Me没有提供能够预见HCT116细胞系的细胞毒活性IC5

表4

在现有技术中鉴定的所有化合物中，ICQO-1是根据本领域技术人员表现出有效负载物特性的唯一化合物。ICQO是国际专利申请PCT/EP2018/058168中公开的具有以下结构的化合物：

在本发明化合物(ICQN-1)和现有技术ICQO-1化合物之间建立了IC

表5

该比表明：本发明的化合物(ICQN)相对于ICQO-1类型的化合物显示出非常显著的优点。例如，在HCT-116(结肠直肠癌)细胞系中，ICQN-1的功效是有效负载化合物ICQO-1的44倍。对于本领域技术人员而言，这种显著差异是特别不可预见且出乎意料的。

VB118是喹啉化合物(专利申请US 2006/074187，实施例2)，其已被合成和描述以与本发明化合物进行比较。

表6

与VB118类型的现有技术的化合物相比，在根据本发明的化合物(ICQN)上的喹啉的2位上的腈官能团和胺官能团-NH

K562R(慢性髓样白血病)细胞具有MDR谱，可使其对几种化疗化合物(包括参考化合物MMAE)产生抗性。

表7

在有效负载物和偶联药物产品领域中的本领域技术人员将注意到，IC

如下表8所示，获得了可酶切割的(通过组织蛋白酶B酶)和不可切割的各种不同的“毒性连接子”化合物(基于缬氨酸-瓜氨酸)。

表8

化合物VB179、VB185、VB199和VB279是通过用对硝基苯基氯甲酸酯活化根据本发明的具有式(I)的化合物(ICQN-1)的NH2官能团而获得的。然后形成的中间体与连接子MC-Val-Cit-PABA的苄醇官能团反应。

通过活化三氟甲磺酸盐形式的连接子MC-Val-Cit-PABA的苄醇官能团，然后使其在碱性介质中与化合物NI313反应，来制备化合物VB277。

化合物VB284和VB289是通过ICQN-1与酸官能团之间的肽偶联而制备的。

VB179:

VB 199:

VB277

HRMS(ESI):C

VB284

VB289

偶联的抗体是根据国际专利申请PCT/EP2018/058168的实施例9(在本文中引入作为参考(特别是第158段))中所述的方案而获得的，如果需要，其适于阅读本发明和参考本领域技术人员的一般常识。

将根据本发明的化合物(ICQN-1)与不同的连接子偶联，然后将毒性连接子与抗体曲妥珠单抗偶联，以期获得不同的ADC。在所制备的ADC中，在ADC之后，DAR为4的曲妥珠单抗-Mal-PEG4-Val-Cit-PABC-ICQN-1对胃癌细胞系NCI-N87(IC