一种自体脂肪制作高密度脂肪的方法及其存储方法

技术领域

本发明涉及细胞工程领域，特别涉及人体脂肪细胞快速提取制作方法，具体涉及一种自体脂肪制作高密度脂肪的方法及其存储方法。

背景技术

脂肪细胞是目前广泛应用于细胞工程领域的一种细胞。面部凹陷常常由先天头颅形状发育(含重度斜颈)、产后消瘦、年龄的增长衰老导致面部脂肪及真皮内的胶原物质的流失导致。求美者对自已的外形极度不满。当前使用的方法常为人工材料手术填充及自体脂肪源填充。脂肪组织来源充足、取材方便、获取过程损伤轻微、无伦理学争议。归纳总结了自2002年～2022年关于自体脂肪移植填充面部的方式，并不断改进，2002年～2020主要应用沉淀法、离心法的脂肪，2020年-2022年发现腹部自体成分脂肪经过发明的技术处理后移植于面部的成活率更高，塑形效果更好。求美者对于自己面部的移植效果表示满意。以往脂肪只做离心，虽然离心出大部分水分，但是它的缺点是有效成分少，含水含油较多，吸收率高。

利用自体脂肪移植来矫正面部软组织萎缩或小乳症，是目前临床广泛应用的手术方法。但第一次注射后多余的脂肪往往被丢弃，这对于因为存活率不足而需要再次注射的患者是一种浪费。此外，脂肪移植因为有不同程度的吸收率，使首次注射后往往达不到预期效果。解决这种问题的方法主要是过量注射和重复注射，而过量注射存在后期填充过度的可能会影响手术效果，而重复注射需要重复获取脂肪，其操作会增加手术花费和手术风险，增加了整形医师的工作量，同时给患者增加更多痛苦和不适，给术区带来重复伤害。

所以找到一种简单微创的方法解决这个问题就变得很有必要，我们通过临床应用实践认为适宜的冷冻脂肪可以补充被重吸收的部分而无须重复获取脂肪操作。避免了重复抽取脂肪，降低手术风险和工作量，减轻患者的痛苦和不适，符合医学的微创和无创技术原理，是一种安全有效的方法。

2012年Bwli通过吸脂获得脂肪后分别保存在不同低温条件下，2周和4周后取出注射于裸鼠，3个月后统计均有明显成活率。Shoshani和Pu等将保存在-80度的脂肪颗粒注射于裸鼠，结果表明，脂肪可以通过冷冻保存，且效果与直接注射新鲜脂肪相近。陈静和刘冠兰医生通过实验认为，新鲜脂肪细胞与冷冻一个月后的脂肪细胞形态一致；冷冻2-3月后的脂肪细胞形态虽然有轻微改变，但是无明显差异，移植后局部反应正常，再吸收率无明显差别。Wlmurillo报道了1例以1260ml冻存脂肪注射于臀部进行丰臀的患者，经过6-48个月的随诊，临床评估和MRI显示，脂肪的成活率达到80％，并认为适宜的冰冻脂肪可以补充被吸收的部分而无须重复获取脂肪操作。

发明内容

针对现有技术的不足和难题，本发明旨在提供一种自体脂肪制作高密度脂肪的方法及其存储方法。

本发明通过以下技术方案予以实现：

为克服现有常规的离心脂肪使用后效果不佳存在的缺陷，本发明提供一种自体脂肪制作高密度脂肪的方法，该提取方法具有纯度高，红细胞及破碎油分大幅减少，而且一次使用效果优于从前等优点。

具体包括如下步骤：

(1)大多数选取腹部脂肪作为供区，少数选取大腿部的脂肪为供区，负压抽取脂肪后用生理盐水漂洗一至两遍；

(2)将漂洗后的脂肪；放置于800-1200r/min的低速离心机中进行低速离心处理3-5min；

(3)离心处理后排除下层水分，装入80～120目筛网(优选100目)内再放入压缩器，在0.8～1.2MPA(优选1.0MPA)的压力下，缓慢地压缩脂肪以及吸附水分和油脂后得到的脂肪，最后得到小颗粒高密度脂肪。

本发明还提供上述高密度脂肪的存储方法，第一次获取脂肪时比实际需要的额外多抽取50％脂肪量，制备成高密度脂肪，将首次注射后“多余的高密度脂肪”收集装在20-50ml注射器内，套上注射器针头，外面用橡胶手套密封，最后用医用塑封机密封，并写上姓名、日期及脂肪总量，储存在-30℃～-40℃(优选-40℃)低温冰箱内。

与现有技术相比，本发明有益效果包括：

(1)现有技术中静置分层后得到100毫升脂肪，经过离心后得到50-60毫升脂肪，经过发明的方法同样的100毫升脂肪只得到20-30毫升高密度脂肪，相同的数量细胞颗粒更小，成活率提高，术后肿胀更少。

(2)本发明制作的高密度脂肪经此冷冻存储处理后脂肪细胞形态虽然有轻微改变，无明显差异，移植后局部反应正常，再吸收率无明显差别。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步地说明。

实施例1高密度脂肪的获取、处理方法

第一步，选择供区：大多数选取腹部脂肪作为供区，少数选取大腿部的脂肪为供区。

第二步，局部麻醉：肿胀麻醉液含氯化钠注射液、0.04％利多卡因，1∶50万肾上腺素。

第三步，抽取脂肪：局部肿胀麻醉后，多在肚脐隐蔽处作5～6mm小切口，20ml注射器接上3-4mm外径的抽吸针，预留10-15ml空气形成负压，徒手抽取脂肪。

第四步，漂洗脂肪：生理盐水漂洗一至两遍脂肪；

第五步，离心处理：放置于低速离心机(转速800-1200r/min，3-5min)离心，

第六步，压缩脂肪：排除下层水分，装入100目筛网内再放入压缩器(外形尺寸：直径160mm，全孔)，给予上压板1.0MPA的压力，缓慢地压缩脂肪及吸附水分及油脂后得到的脂肪。

根据统计抽吸后静置分层的100毫升脂肪，经如此处理后仅得到20-30毫升小颗粒高密度脂肪(细胞直径约0.06毫米)。

对比例1

将预处理的脂肪只做离心处理，即实施例1的第一至第五步。

从志愿者身体抽脂，分别按照以前的提取方法制作脂肪(对比例1)和用实施例1提取高密度脂肪细胞。结果为：脂肪经此方法处理后可以获得更高的纯度，有效成分成倍增加，一次效果抵以前二次。采用显微镜及Invitrogen公司的全自动细胞计数仪Countess进行细胞计数。具体结果如下表1：

表1对比例1和实施例1制作的脂肪对比

实施例2自体制作的高密度脂肪冷冻储存

实施例1制备高密度脂肪时，第一次获取脂肪时额外多抽取50％脂肪量，将高密度脂肪首次注射后“多余的脂肪”收集装在20-50ml注射器内，套上注射器针头，外面用橡胶手套密封，最后用医用塑封机密封，并写上姓名、日期及脂肪总量，储存在-25度低温冰箱内。

Narins对冷冻储存1-2年后的脂肪组织进行细菌培养，结果均为阴性，表明长期冷冻的脂肪可安全地用于注射，不必担心额外的感染。提前2-3小时取出冷冻脂肪常温解冻，观察低温条件下的脂肪颗粒未见脂滴液化和细胞破碎后的纤维组织，与新鲜脂肪颗粒相比，除表面略暗缺少光泽外，并无其他差别。

将冷冻存储的高密度脂肪用含2ml∶80mg的庆大霉素注射液加入100-200ml生理盐水中清洗2遍，放置于低速离心机(转速800-1200/min，3-5min)离心，排除下层水分，装入100目筛网内再放入压缩器(外形尺寸：直径160mm，全孔，给予上压板压力为1.0MPA)缓慢的压缩脂肪及吸附水分及油脂后得到脂肪，将其与实施例1进行对比，高密度脂肪经此方法处理后脂肪细胞形态虽然有轻微改变，但是无明显差异，移植后局部反应正常，再吸收率无明显差别。采用显微镜及Invitrogen公司的全自动细胞计数仪Countess进行细胞计数及送检艾迪康公司病理检验，具体结果如下表2：

表2实施例1制作与实施例2保存的脂肪对比

以上所述仅表达了本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形、改进及替代，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。