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包含生物表面活性剂和来自Stachybotrys chlorohalonata的脂肪酶的组合物

文献发布时间:2024-02-23 22:56:42



技术领域

本发明的领域是组合物,其包含

A)至少一种选自Seq.-ID-No.1及其相应的至少60%、优选至少80%、更优选至少90%、尤其优选至少95%、98%或99%在氨基酸水平上的同源物的脂肪酶,

B)至少一种生物表面活性剂,和任选地

C)至少一种非生物表面活性剂,

以及它们的用途。

背景技术

EP2596089公开了包含有效量的表面活性剂体系和酶体系的清洁组合物,其特征在于所述表面活性剂体系包含至少1重量%(基于清洁组合物)的生物表面活性剂和至少一种细菌来源的脂肪酶,所述生物表面活性剂为糖脂类表面活性剂(glycolipidsurfactant),其包含至少20摩尔%的具有二糖部分和酸部分的糖脂(glycolipid)。

NCBI蛋白质库数据库的登录号KFA62895.1公开了Stachybotrys chlorohalonataIBT 40285的假定蛋白S40285_02264。

本发明的目的是提供具有在去污领域的突出性质的组合物。

发明内容

令人惊奇的是,已经发现下面描述的组合物能够解决本发明所解决的问题。

因此,本发明涉及组合物,其包含

A)至少一种选自Seq.-ID-No.1及其相应的至少60%、优选至少80%、更优选至少90%、尤其优选至少95%、98%或99%在氨基酸水平上的同源物的脂肪酶,

B)至少一种生物表面活性剂,和任选地

C)至少一种非生物表面活性剂。

本发明还提供本发明的组合物用于去除含脂肪和/或油的污渍的用途。

根据本发明的组合物的优点在于,其中存在的基于可再生原料的表面活性剂的比例优选大于50重量%,基于组合物中存在的表面活性剂的总量计。

根据本发明的组合物的另一个优点是糖或糖和甘油酯和/或脂肪酸可用作生物表面活性剂的原料。

根据本发明的组合物的另一个优点是它非常温和。

本发明的另一个优点是,在根据本发明的组合物中,所需的蛋白酶抑制剂的量可以减少,或者甚至可以完全省去蛋白酶抑制剂。

与现有技术相比的另一个优点是在洗涤过程中酶的稳定性增加,以及与之相关的清洁性能改善,例如在洗衣中。

本发明的另一个优点是,在根据本发明的组合物中,也可以使用迄今为止在洗涤剂配制品中稳定性不足的蛋白酶。

本发明的另一个优点是,不必使用或只需使用较少的配合剂(助洗剂)来确保在硬水中具有足够的洗涤性能。

具体实施方案

本发明包括一种组合物,其包含

A)至少一种选自Seq.-ID-No.1及其相应的至少60%、优选至少80%、更优选至少90%、尤其优选至少95%、98%或99%在氨基酸水平上的同源物的脂肪酶,

B)至少一种生物表面活性剂,和任选地

C)至少一种非生物表面活性剂。

在本发明的上下文中,“在氨基酸水平上的同源物”在此处和下文中应理解为是指“氨基酸同一性”,其可以借助于已知方法确定。通常,使用具有考虑了特定要求的算法的专用计算机程序。用于确定同一性的优选方法最初产生在待比较序列之间的最大比对。用于确定同一性的计算机程序包括但不限于GCG程序包,包括

-GAP(Deveroy,J.et al.,Nucleic Acid Research 12(1984),第387页,GeneticsComputer Group University of Wisconsin,Medicine(WI),和

-BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul,S.et al.,Journal of Molecular Biology215(1990),第403-410页)。BLAST程序可从国家生物技术信息中心(NCBI)和其它来源(BLAST Handbook,Altschul S.et al.,NCBI NLM NIH Bethesda ND 22894;AltschulS.et al.,上文)获得。

本领域技术人员知道各种计算机程序可用于计算两个核苷酸或氨基酸序列之间的相似性或同一性。例如,可以确定两个氨基酸序列之间的同一性百分比,例如,通过Needleman和Wunsch开发的算法(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970),该算法已整合到GCG软件包(可在http://www.gcg.com获得)中的GAP程序中),使用Blossom 62矩阵或PAM250矩阵,间隙权重为16、14、12、10、8、6或4,长度权重为1、2、3、4、5或6。本领域技术人员将认识到,使用不同的参数将导致略微不同的结果,但两个氨基酸序列之间的同一性百分比总体上不会显著不同。通常,使用采用默认设置的Blossom 62矩阵(间隙权重:12,长度权重:1)。

在本发明的上下文中,根据上述算法的60%的同一性意味着60%同源性。这同样适用于更高的同一性。

在本发明的上下文中引用的登录号对应于01.01.2020的NCBI蛋白质库数据库条目;通常,在此背景下,条目的版本号由“.数字”(例如“1”)标识。

与参考序列相比,在氨基酸水平上同源的脂肪酶优选具有至少50%,尤其是至少90%的以4-硝基苯基辛酸酯单位计的酶活力。一个4-硝基苯基辛酸酯单位定义为在25℃、在pH 8.5下每分钟从4-硝基苯基辛酸酯中裂解出1μmol的4-硝基苯酚所需的酶的量。

在本发明的上下文中,生物表面活性剂被理解为是指通过发酵产生的所有糖脂。

用于产生可以使用的生物表面活性剂的原料是碳水化合物,特别是糖类,例如葡萄糖,和/或亲脂性碳源,例如脂肪、油、偏甘油酯、脂肪酸、脂肪醇、长链饱和或不饱和烃。

当在下文中陈述平均值时,那么除非另有说明,否则这些是数均平均值。除非另有说明,否则百分比是以重量百分比计的数据。无论下文中何处陈述测量值,那么除非另有说明,否则这些测量值是在25℃的温度和1013毫巴的压力下测定的。

除非另有说明,否则关于本发明的“pH”定义为使用根据ISO 4316(1977)校准的pH电极在搅拌五分钟后在25℃下对相关组合物测量的值。

根据本发明的组合物优选包含作为组分B)至少一种生物表面活性剂的鼠李糖脂、槐糖脂、葡萄糖脂(glucolipids)、纤维素脂、甘露糖赤藓糖醇脂和/或海藻糖脂,优选鼠李糖脂、葡萄糖脂和/或槐糖脂,最优选槐糖脂。生物表面活性剂,特别是糖脂类表面活性剂,可以例如如在EP 0 499 434、US 7,985,722、WO 03/006146、JP 60 183032、DE 19648439、DE 19600743、JP 01 304034、CN 1337439、JP 2006274233、KR 2004033376、JP2006083238、JP 2006070231、WO 03/002700、FR 2740779、DE 2939519、US 7,556,654、FR2855752、EP 1445302、JP 2008 062179和JP 2007 181789或其中引用的文献中所述那样产生。合适的生物表面活性剂可从例如Soliance,France获得。

优选地,根据本发明的组合物具有作为生物表面活性剂的鼠李糖脂,特别是单-、二-或多鼠李糖脂、葡萄糖脂和/或槐糖脂,最优选槐糖脂。

在本发明的上下文中,术语“鼠李糖脂”优选理解为特别是指通式(I)的化合物及其盐,

其中

mRL=2、1或0,

nRL=1或0,

R

如果nRL=1,则两个鼠李糖单元之间的糖苷键优选呈α-构型。脂肪酸的光学活性碳原子优选以R-对映体形式存在(例如(R)-3-{(R)-3-[2-O-(α-L-吡喃鼠李糖基)-α-L-吡喃鼠李糖基]氧基癸酰基}氧基癸酸酯)。

在本发明的上下文中,术语“二鼠李糖脂”理解为是指通式(I)的化合物或其盐,其中nRL=1。

在本发明的上下文中,术语“单鼠李糖脂”理解为是指通式(I)的化合物或其盐,其中nRL=0。

根据以下命名法缩写不同的鼠李糖脂:

“diRL-CXCY”理解为是指通式(I)的二鼠李糖脂,其中残基R

“monoRL-CXCY”理解为是指通式(I)的单鼠李糖脂,其中残基R

因此,所用的命名法不区分“CXCY”和“CYCX”。

对于mRL=0的鼠李糖脂,相应地使用monoRL-CX或diRL-CX。

如果上述指数X和/或Y之一带有“:Z”,则这表示相应的残基R

制备相关的鼠李糖脂的方法公开于例如EP2786743和EP2787065中。

适用于本发明的上下文中的鼠李糖脂还可以通过假单胞菌,尤其是铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的发酵来产生,所述假单胞菌优选是非遗传修饰的细胞,这是已经在八十年代公开的技术,如例如在EP0282942和DE4127908文献中记载的。在已经通过遗传修饰改进以获得更高的鼠李糖脂效价的铜绿假单胞菌细胞中产生的鼠李糖脂也可以用于本发明的上下文中;这样的细胞例如已由Lei et al.公开在Biotechnol Lett.2020Jun;42(6):997-1002中。

由铜绿假单胞菌产生的鼠李糖脂可商购自Jeneil Biotech Inc.,例如以商品名Zonix;可商购自Logos Technologies(由Stepan获得的技术),例如以商品名NatSurFact;可商购自Biotensidon GmbH,例如以商品名Rhapynal;可商购自AGAE technologies,例如以名称R90、R95、R95Md、R95Dd;可商购自Locus Bio-Energy Solutions;以及可商购自Shanghai Yusheng Industry Co.Ltd.,例如以商品名Bio-201 Glycolipids。

本发明提供了组合物,优选包含作为生物表面活性剂的鼠李糖脂,其特征在于生物表面活性剂组分B)包含

51重量%至95重量%、优选55重量%至80重量%、特别优选60重量%至70重量%的diRL-C10C10,且

其中重量百分比相对于存在的所有鼠李糖脂的总和计。

根据本发明的优选组合物的特征在于所述组合物包含作为生物表面活性剂的如上所述的鼠李糖脂,其具有以下含量

0.5重量%至15重量%、优选3重量%至12重量%、特别优选5重量%至10重量%的diRL-C10C12∶1,

其中重量百分比相对于存在的所有鼠李糖脂的总和计。

根据本发明的进一步优选的组合物的特征在于所述组合物包含作为生物表面活性剂的如上所述的鼠李糖脂,其具有以下含量

0.5至25重量%、优选5重量%至15重量%、特别优选7重量%至12重量%的diRL-C10C12,

其中重量百分比相对于存在的所有鼠李糖脂的总和计。

根据本发明的进一步优选的组合物的特征在于所述组合物包含作为生物表面活性剂的如上所述的鼠李糖脂,其具有以下含量

0.1重量%至25重量%、优选2重量%至10重量%、特别优选4重量%至8重量%的diRL-C8C10,

其中重量百分比相对于存在的所有鼠李糖脂的总和计。

根据本发明的甚至进一步优选的组合物的特征在于所述组合物包含作为生物表面活性剂的如上所述的鼠李糖脂,其具有以下含量

0.1重量%至5重量%、优选0.5重量%至3重量%、特别优选0.5重量%至2重量%的monoRL-C8C10和/或,优选和

0.1重量%至5重量%、优选0.5重量%至3重量%、特别优选0.5重量%至2重量%的monoRL-C10C10,

其中重量百分比相对于存在的所有鼠李糖脂的总和计。

在本发明的上下文中,术语“槐糖脂”优选理解为是指通式(IIa)和(IIb)的化合物及其盐

其中

R

R

R

R

nSL=1或0。

根据本发明,槐糖脂可以其酸形式或其内酯形式使用。

根据本发明的优选组合物包含槐糖脂,其中内酯形式与酸形式的重量比在20

为了测定配制品中酸或内酯形式的槐糖脂的含量,参见EP1411111B1,第8页,第[0053]段。

在根据本发明的组合物中优选包含的槐糖脂是通式(IIa)和(IIb)的化合物

其中

R

R

R

R

n=0或1,

特别是通式(IIa)和(IIb)的那些化合物

其中

R

R

R

R

nSL=0或1,

并且非常特别优选通式(IIa)和(IIb)的化合物

其中

R

R

R

R

nSL=1。

关于本发明,术语“葡萄糖脂”优选理解为是指通式(III)的化合物及其盐,

其中

mGL=1或0,

R

根据以下命名法缩写不同的葡萄糖脂:

“GL-CXCY”理解为是指通式(HI)的葡萄糖脂,其中基团R

因此,所用的命名法不区分“CXCY”和“CYCX”。

如果上述指数X和/或Y之一带有“:Z”,则这表示相应的基团R

用于产生葡萄糖脂的方法可以如WO2019154970中所述那样进行。

根据本发明的组合物可以含有高浓度的组分,以便有利地用于例如最终消费者配制品的生产。

在此背景下,在本发明中优选的是,根据本发明的组合物的特征在于,其以基于总组合物计0.1重量%至15.0重量%、优选1.0重量%至10.0重量%、特别优选2.0重量%至7.0重量%的量包含组分A)。

在本发明中优选的是,根据本发明的组合物的特征在于,其以基于总组合物计0.15个4-硝基苯基辛酸酯单位/g至2250个4-硝基苯基辛酸酯单位/g、优选1.5个4-硝基苯基辛酸酯单位/g至1500个4-硝基苯基辛酸酯单位/g、特别优选3个4-硝基苯基辛酸酯单位/g至1050个4-硝基苯基辛酸酯单位/g的量包含组分A)。

组分A)的以4-硝基苯基辛酸酯单位计的酶活力如Gil-Rodríguez et al.在MethodsX;第7卷,2020,100999中所述那样测定,由此4-硝基苯基辛酸酯单位/g定义为在25℃和pH 8.5下以微摩尔每分钟和每克配制品计的转化的底物对硝基苯酚辛酸酯。

在本发明中优选的是,根据本发明的组合物的特征在于,其以基于总组合物计5.0重量%至80重量%、优选10.0重量%至75重量%、特别优选25重量%至60重量%的量包含组分B)。

根据本发明的组合物优选包含至少一种非生物表面活性剂作为组分C)。

在本发明中优选的是,根据本发明的组合物的特征在于,其以基于总组合物计1.0重量%至50重量%、优选5.0重量%至30重量%、特别优选5.0重量%至20重量%的量包含组分C)。

优选地,包含在根据本发明的组合物中的非生物表面活性剂选自阴离子表面活性剂,优选选自包括阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂、半极性表面活性剂和两性离子表面活性剂的组,优选由其组成的组,更优选阴离子表面活性剂。

阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐,尤其是直链烷基苯磺酸盐(linear alkylbenzenesulfonates,LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(branchedalkylbenzenesulfonates,BABS)、苯基链烷磺酸盐(phenylalkanesulfonates)、α-烯烃磺酸盐(alpha-olefinsulfonates,AOS)、烯烃磺酸盐(olefin sulfonates)、链烯磺酸盐(alkene sulfonates)、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)(alkane-2,3-diylbis(sulfates))、羟基链烷磺酸盐和二磺酸盐(hydroxyalkanesulfonates and disulfonates)、烷基硫酸盐(alkyl sulfates,AS)如十二烷基硫酸钠(SDS)、脂肪醇硫酸盐(fatty alcohol sulfates,FAS)、伯醇硫酸盐(primary alcohol sulfates,PAS)、醇醚硫酸盐(alcoholethersulfates,AES或AEOS或FES,也称为醇乙氧基硫酸盐(alcohol ethoxysulfates)或脂肪醇醚硫酸盐(fatty alcohol ether sulfates))、仲链烷磺酸盐(secondaryalkanesulfonates,SAS)、石蜡烃磺酸盐(paraffin sulfonates,PS)、酯磺酸盐(estersulfonates)、磺化脂肪酸甘油酯(sulfonated fatty acid glycerol esters)、α-磺基脂肪酸甲酯(alpha-sulfo fatty acid methyl esters,α-SFMe或SES),包括甲酯磺酸盐(methyl ester sulfonate,MES)、烷基-或烯基琥珀酸、十二碳烯基/十四碳烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺基琥珀酸或皂的二酯和单酯,及其组合。

阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇胺季铵化合物(ADMEAQ)、鲸蜡基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂基氯化铵(DSDMAC)、和烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物,及其组合。

非离子表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化脂肪醇(PFA)、烷氧基化脂肪酸烷基酯,例如乙氧基化和/或丙氧基化脂肪酸烷基酯、烷基酚乙氧基化物(APE)、壬基酚乙氧基化物(NPE)、烷基多苷(APG)、烷氧基化胺、脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)、脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)、聚甘油酯、甘油酯、丙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))、以及以商品名SPAN和TWEEN可获得的产品,及其组合。

半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO),例如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油烷基)-N,N-二甲基氧化胺(N-(coco alkyl)-N,N-dimethylamine oxide)和N-(牛脂-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺(N-(tallow-alkyl)-N,N-bis(2-hydroxyethyl)amineoxide)、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化脂肪酸链烷醇酰胺,及其组合。

两性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱类(betaines)、烷基二甲基甜菜碱类(alkyldimethylbetaines)、磺基甜菜碱类(sulfobetaines),及其组合。

根据本发明的组合物优选特征在于所有表面活性剂的总和为5.0重量%至90重量%、优选10.0重量%至80重量%、优选20重量%至75重量%,其中重量百分比相对于总组合物计。

在本发明中优选的是,根据本发明的组合物的特征在于,总表面活性剂中的所有生物表面活性剂的总和为1重量%至90重量%、优选2重量%至80重量%、特别优选51重量%至60重量%,基于组合物中表面活性剂的总量计。

根据本发明的组合物优选包含

D)水。

根据本发明的组合物优选具有4.0至12.5、优选5.0至10.0、特别优选5.5至9.0的pH。

如果根据本发明的组合物用于例如洗衣洗涤剂中,则其优选具有7.0至12.5、优选7.5至12.0、特别优选8.0至12.0的pH。

如果根据本发明的组合物用于例如手洗餐具洗涤剂中,则其优选可替代地具有4至8、优选4.5至7.5、特别优选5至6.5的pH。

根据本发明的组合物可进一步包含一种或多种助剂,所述助剂选自漂白体系、水溶助长剂、聚合物(其可以是合成的)、生物聚合物、抗再沉积助剂、纤维保护剂、去污剂、染料转移抑制剂、织物调色剂、遮光剂、发蓝染料(blueing dyes)、酶稳定剂、溶剂、粘度调节剂、防腐剂、pH调节剂和盐,如NaCl和Na

合适的非水溶剂包括一元醇或多元醇、链烷醇胺或二醇醚,条件是它们在特定的浓度范围内与水混溶。

溶剂优选选自乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇、甘醇、丙二醇、丁二醇、丙三醇、二甘醇、丙基二甘醇、丁基二甘醇、己二醇、乙二醇甲醚、乙二醇乙醚、乙二醇丙醚、正丁二醇醚、乙二醇单甘醇醚(ethylene glycol mono-glycol ether)、二乙二醇乙醚、丙二醇甲醚、丙二醇乙醚、丙二醇丙醚、二丙二醇单甲醚、二丙二醇单乙醚、二异丙二醇单甲醚、二异丙二醇单乙醚、甲氧基三甘醇、乙氧基三甘醇、丁氧基三甘醇、1-丁氧基乙氧基-2-丙醇、正丁氧基乙氧基-2-丙醇、二-丁氧基乙氧基-2-丙醇、3-丁基-3-甲氧基醚溶剂、和这些溶剂的混合物、丁氧基乙氧基-2-丙醇、3-丁基-3-丁醚、丙二醇、二辛醇醚、二-丁氧基-2-丙醇、3-丁基-3-丁醚、丙醇、丙二醇、二-丁氧基乙氧基-2-丙醇、二-丁氧基乙氧基-2-丙醇、3-丁氧基-3-甲氧基醚溶剂、二异丙二醇单甲醚、二异丙二醇单甲醚、和这些溶剂的混合物。

然而,优选的是表面活性剂制剂包含多元醇作为非水溶剂。多元醇可以包括甘油、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、乙二醇、二乙二醇和/或二丙二醇。

可以使用本领域中已知的用于洗涤剂的任何防腐剂。示例性防腐剂包括苯氧基乙醇、乙酰丙酸钠、苯甲酸钠、对甲氧基苯甲酸、山梨酸钾、苯甲酸、辛酸甘油酯、辛二醇、戊二醇、甲基丙二醇、溴硝丙二醇、异噻唑啉酮(甲基异噻唑啉酮、氯甲基异噻唑啉酮)及其组合。

优选地,根据本发明的组合物包含一种或多种包封物,所述包封物包含有益剂,优选感觉有益剂(sensorial benefit agent)。在此背景下,优选的包封物包括剪切/压敏作用包封物,由此感觉有益剂响应于包封物上的机械力(例如,摩擦、压力、剪切应力)而释放。包封物壳优选由包括但不限于聚氨酯、聚酰胺、聚烯烃、多糖、蛋白质、硅氧烷(silicone)、脂质、改性纤维素、树胶(gums)、聚丙烯酸酯、聚磷酸酯(polyphosphate)、聚苯乙烯、聚酯或这些材料的组合的材料构成。

优选地,感觉有益剂包括皮肤有益剂或嗅觉有益剂和/或可为挥发性有益剂。感觉有益剂也可对毛发和/或硬表面和/或织物具有益处。感觉有益剂可具有消泡性质,因此对于发泡目的有利的是将其包封以便在通过摩擦释放之前不干扰泡沫。合适的挥发性有益剂包括但不限于香料、驱虫剂、精油、感觉剂(sensates)如薄荷醇和芳香疗法活性物质,优选香料。可以使用挥发性有益剂的混合物。有益剂的总量优选为0.01至10重量%、更优选0.05至5重量%、甚至更优选0.1至4.0重量%、最优选0.15至4.0重量%,基于组合物的总重量计。优选的有益剂是香料。本发明的组合物也可包含未受限制的(也称为非包封的)挥发性有益剂。当挥发性有益剂是香料时,下文描述的香料适合用作包封的挥发性有益剂,并且也适合用作未受限制的香料组分。

根据本发明的组合物可用于不同的应用领域,例如用于各种清洁应用。

在此背景下,根据本发明的优选组合物是配制品,优选洗衣配制品和餐具洗涤配制品。

在本发明中优选的是,根据本发明的配制品的特征在于,其以基于总组合物计0.001重量%至4.0重量%、优选0.01重量%至3.0重量%、特别优选0.1重量%至1.0重量%的量包含组分A)。

在本发明中优选的是,根据本发明的配制品的特征在于,其以基于总组合物计0.0015个4-硝基苯基辛酸酯单位/g至60个4-硝基苯基辛酸酯单位/g、优选0.015个4-硝基苯基辛酸酯单位/g至45个4-硝基苯基辛酸酯单位/g、特别优选0.15个4-硝基苯基辛酸酯单位/g至15个4-硝基苯基辛酸酯单位/g的量包含组分A)。

在本发明中优选的是,根据本发明的配制品的特征在于,其以基于总组合物计0.1重量%至25重量%、优选3.0重量%至20重量%、特别优选4.0重量%至15重量%的量包含组分B)。

根据本发明的组合物在其从表面上去除油性污垢的能力方面是突出的。

因此,本发明的另一方面是根据本发明的组合物从表面上去除含脂肪和/或油的污渍的用途,所述表面优选选自餐具表面或纺织品表面。

在根据本发明的用途的情况下,根据本发明的组合物的特别优选的实施方案及其优选的组分以优选的量使用。

下文列举的实施例通过示例的方式描述了本发明,但本发明的应用范围从说明书和权利要求书的整体中显现,而无任何意图将本发明限于实施例中指定的实施方案。

实施例:

实施例1:在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中由Stachybotryschlorohalonata产生脂肪酶。

将Pichia Expression Kit(原始试剂盒,目录号K171001,来自Thermo FisherScientific)用于Seq.-ID-No.1的重组表达。

所有步骤均如Pichia Expression Kit用户指南(2014年修订版A.0)中所述那样进行。

使用密码子优化工具(Codon Optimization Tool(ExpOptimizer)(www.novoprolabs.com/tools/codon-optimization))产生DNA序列,密码子经优化以在巴斯德毕赤酵母中表达Seq.-ID-No.1,比较Seq.-ID-No.2。

将Seq.-ID-No.2经由BamH I和Not I亚克隆到pPIC3.5中,包括Kozak-序列,如用户指南中所述,随后用Sac I-线性化的表达载体转化Pichia KM71,以获得和选择His

与模拟(空pPIC3.5)转染的KM71转化子比较,通过以百里酚酞作为指示剂的月桂酸丙酯检测(propyllaurate assay)中的细胞裂解物验证了根据用户指南重组脂肪酶的成功表达。

实施例2:

制备以下配制品,其中给出的数字为活性物质的重量百分比;脂肪酶以4-硝基苯基辛酸酯单位/克总配制品给出。

如EP3023431中所述那样制备鼠李糖脂。

所用的槐糖脂是来自Evonik的槐糖脂REWOFERM SL ONE,其内酯与酸的比率为40∶60。

根据WO2019154970的实施例2经由发酵产生葡萄糖脂。

为了评价上述配制品,按照A.I.S.E试验(简化),对于污渍去除进行2或3个循环并对8种脂肪污渍进行去污试验。试验在40℃下进行。

在此性能试验中,考虑对组合物进行两个循环(重复试验)。

所用的水具有14°deutsche Haerte的水硬度。

使用可编程Miele电子家用洗衣机。禁用模糊逻辑型控制。洗涤程序在下表中列出说明:

预先在60℃下用ECE2洗涤剂(无漂白剂)洗涤3kg的标准化棉负荷。

对于每个重复试验使用一组脂肪污渍。不同的污渍如下所示。

将8种脂肪污渍连同3kg的压载负荷(ballast load)和两个新单位的污垢SBL2004引入每个洗涤循环中。SBL2004是来自wfk的“标准”Soil Ballast;100%棉。使用大约8g污垢/样片来测试洗衣过程。

在洗涤过程中使用50g的各组合物。

经由分光光度计测量反射率来进行去污程度的评价。使用Y,x,y色坐标测量的Y-值,具有在420nm的UV截止滤光器的光源D65。用于真实污渍的孔为15mm(最小12mm)。展开测量污渍,每个污渍进行2次测量(在圆形区域的中心,或最接近的均匀区域)。在洗涤前(以验证污渍的质量)和洗涤后对每种污渍进行测量,评价标准偏差,并报告。

结果表示为两次重复试验之间的Y值的平均值,如下所示。Y值越大越好。

从结果可以看出,无论使用何种生物表面活性剂作为洗涤剂中的主要表面活性剂,实施例1的脂肪酶对所有脂肪污渍的性能优于所有可商购的脂肪酶。

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