AKR1C3抑制剂及医药用途

技术领域

本发明涉及AKR1C3抑制剂以及该抑制剂的医药用途。

背景技术

我公司开发的以高表达醛酮还原酶1C3(AKR1C3)为标靶的DNA烷化剂癌症治疗化合物前药(申请号PCT/US2016/021581,公开号WO2016/145092；申请号PCT/US2016/062114，公开号WO2017/087428)特异性的在体内AKR1C3的作用下发生代谢活化，以其中TH2870的S构型AST-3424为例：

作为前药形式的以高表达醛酮还原酶AKR1C3为标靶的DNA烷化剂在体内会和AKR1C3结合，然后发生代谢反应，最终产生具有细胞毒性的DNA烷化剂。

发明内容

研发过程中发现对该类化合物进行各个基团取代的场所时，发现当苯环上硝基对位上的苄基碳原子上连接的不是类似于申请号PCT/US2016/021581,公开号WO2016/145092；申请号PCT/US2016/062114，公开号WO2017/087428；申请号PCT/US2016/025665，公开号WO2016/161342的细胞毒性的烷化剂时，化合物表现出抑制AKR1C3酶活性的能力，为此研发团队设计并合成了一系列AKR1C3抑制剂。

为此本发明提供以下的技术方案。

式I化合物或者其药学上可接受的盐或溶剂合物，

或

在生物体内能被转化为上述I-3的前药

其中，

R

R

R

R

Y为O或者S；

Cx选自C

L选自-O-、-S-、-OCOO-、-NR

当L选自季铵根阳离子时，其结构为：

对应的其可对应的阴离子可以为有机酸根阴离子、无机含氧酸根离子等，优选为卤素阴离子、-OH；

Cy选自氢、氘、C

或

Cy选自

或Cy选自

并且以上H-L-Cy不形成磷酸酯烷化剂；

Z取代基为卤素原子、氰基或异氰基、羟基、巯基、胺基、肟基、腙基、OTs、OMs、C

Cz基团为含有C、P、S的基团且该基团能被水解酶水解而使得对应的C-N，P-N，S-N键断裂。

水解酶在EC编号中分类为EC3，并以它分解的键再细分为几个子类：

EC3.1：酯键(酯酶)

EC3.2：糖(糖基酶)

EC3.3：醚键

EC3.4：肽键(肽酶)

EC3.5：C-N键，但不包括肽键

EC3.6：酸酐

EC3.7：C-C键

EC3.8：卤键

EC3.9：P-N键

EC3.10：S-N键

EC3.11：S-P键

EC3.12：S-S键

EC3.13：C-S键

在人体生理环境中，存在着许多酶能够将上述前药中的-NH-Cz断裂，特别的例如水解酶能够将许多化学键水解而断开，特别是本发明公开化合物的含有C、P、S原子的基团，特别的这些化学键、水解酶包括EC3.4：肽键(肽酶)、EC3.9：P-N键、EC3.10：S-N键，其所对应的化合物包括酰胺类、磷酰胺类、硫代酰胺类。

杂环、杂芳基包括三元环、四元环、五元环、六元环、七元环。以下举例说明。

三元环：环氧乙烷、环氮乙烷、环硫乙烷；

四元环：吖丁啶、噁丁啶、噻丁啶、丁啶；

五元环：吡咯烷、吡咯啉、1-吡咯啉、3-吡咯啉、2-吡咯啉、吡咯、吡唑烷、2-吡唑啉、咪唑、吡唑、呋喃、四氢呋喃、二氢呋喃、四氢噻吩、噻吩、环丁砜、磷杂茂、噁唑、1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，3，4-噻二唑；

六元环：哌啶、四氢吡喃、四氢噻喃、吡啶、吡喃、噻喃、二氢吡啶、吗啉、哌嗪、哒嗪、吡嗪、1,3,5-三嗪、1,3,5-三噻烷；

七元环：吖庚烷(氮杂环庚烷)、噁庚烷、噻庚烷、氮杂

稠环定义为以上的杂环、杂芳基之间的骈合或者与环烷结构的骈合，骈合可以是通过单键的链接或者是共用一个、两个甚至三个原子的形式，以下给出一些常见的稠环结构：萘、喹啉、吲哚、异吲哚、异喹啉、噌啉、喹喔啉、联苯、香豆素、芴、二苯咔喃、咔唑、蒽、氮蒽、噻吩嗪、金刚烷、薁、菲、蒽醌、黄酮、异黄酮。

显然以上的化合物，其也包括同位素取代化合物，典型的取代方式为氢原子H被重氢原子氘D取代。

特别的，被氘取代的部位位于I式中Ph-C

进一步的，上述提供的化合物，

Cy选自

-L-Cy不包括这些胺基磷酸酯烷化剂：-P(Z

-L-Cy不为-OH和-SH。

进一步的，上述提供的化合物，

前药

选自

进一步的，上述提供的化合物，

R

Cx为-CONR

进一步的，上述提供的化合物，

选自以下的化合物

进一步的，上述提供的化合物，所述盐为碱式盐或酸式盐。

关于本文所述化合物，所述化合物还包括式I-1至I-5结构盐的形式使用，即本发明提供所示化合物的药学上可接受的盐，所述盐可以为碱式盐，包括所述化合物与无机碱(例如碱金属氢氧化物、碱土金属氢氧化物等)或与有机碱(例如单乙醇胺、二乙醇胺或三乙醇胺等)形成的盐。或者，所述盐可以为酸式盐，包括所述化合物与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、高氯酸、硫酸或磷酸等)或与有机酸(例如甲磺酸、三氟甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、富马酸、草酸、马来酸、柠檬酸等)形成的盐。选择和制备化合物的可接受的盐和溶剂化物等是本领域公知技术。

进一步的，上述提供的化合物，其中，所述溶剂合物为水合物或醇合物。

在药物设计和有机化学这一技术领域，化合物特别是具有较活泼基团的化合物，比如磷酰胺、酰胺、胺、盐或是酯等基团，由于对溶剂，比如水、乙醇等醇类溶剂具有较好的亲和性，经常会出现溶剂和化合物的结合物(典型如水合硫酸铜这类无机盐)，特别是当化合物为通过结晶或是沉淀、浓缩等方式自溶剂中得到之固体时，会不可避免的与溶剂因为结合、包裹而得到与溶剂发生结合的溶剂化物。本发明提供的化合物具有磷酰胺、酰胺、羟基等活性基团就，自然也可以通过上述之理由和实际情况而生成对应的溶剂化物。

关于本文所述化合物还可以溶剂合物的形式使用，即本发明提供所示I合物的药学上可接受的溶剂合物，所述溶剂合物为水合物、醇合物等，醇合物包括乙醇合物。

通过实验已经证实上述化合物I中：

具有AKR1C3酶抑制活性。

文献调研可知，该类化合物在AKR1C3酶作用下发生以下的代谢反应：

上述的I式中的硝基化合物在AKR1C3酶的两次还原过程中会得到

这三种结构的中间体(Roger M.Phillips，Targeting the hypoxic fraction oftumours using hypoxia-activated prodrugs[J].Cancer Chemother Pharmacol(2016)77:441-457.DOI 10.1007/s00280-015-2920-7；Baran N,Konopleva M.MolecularPathways:Hypoxia-activated prodrugs in cancer therapy[J].Clinical CancerResearch,2017:clincanres.0895.2016.DOI：10.1158/1078-0432.CCR-16-0895；CindyCazares-

由于前药

能通过体内的各种酶(酰胺水解酶、磷酰胺水解酶)来水解得到对应的胺形式即I-3，所以前药I-5和I-3类似也能在体内发挥AKR1C3抑制剂的作用。

文献调研，根据中国台湾地区专利文献TW201742868A(公开日2017-12-16，该文献内容也在WO2017202817A1、AU2017269871A1、US20180319807A2、US20170342082A1等文件中公开)公开内容可知：

醛基酮基还原酶族1成员C3(AKR1C3，亦被称作5型17-β-羟基类固醇去氢酶(17-β-HSD5))为酶类之醛/酮基还原酶(AKR)超家族的成员，其将类固醇激素中之醛/酮基还原成对应醇，且因此在雄激素、孕酮及雌激素的代谢/活化/去活化中起重要作用。

AKR1C3具有3α-HSD(羟基类固醇去氢酶活性)、17β-HSD、20α-HSD及前列腺素(PG)F合成酶活性。其催化雌酮(弱雌激素活性)至雌二醇(强雌激素活性)之转化、孕酮(强抗雌激素活性)至20-α-羟基孕酮(弱抗雌激素活性)之转化及雄烯二酮至睾固酮之转化(LabrieF，Luu-The V，Labrie C，et al.DHEA and Its Transformation into Androgens andEstrogens in Peripheral Target Tissues:Intracrinology[J].Frontiers inNeuroendocrinology,2001,22(3):185-212.DOI：10.1006/frne.2001.0216)。此外，AKR1C3催化PGH2至PGF2α及PGD2至11β-PGF2之转化，已知两者刺激发炎及增生。

此外，亦已展示AKR1C3使广泛范围之羰基化合物及异生物质(包括临床上投与之蒽环类霉素anthracycline)代谢(Bains O S,Grigliatti T A，Reid R E，etal.Naturally occurring variants of human aldo-keto reductases with reduced invitro metabolism of daunorubicin and doxorubicin.[J].Journal of Pharmacology&Experimental Therapeutics,2010,335(3):533-545.DOI：10.1124/jpet.110.173179；Novotna R,Wsol V,Xiong G,et al.Inactivation of the anticancer drugsdoxorubicin and oracin by aldo–keto reductase(AKR)1C3[J].Toxicology Letters,2008,181(1):1-6.DOI:10.1016/j.toxlet.2008.06.858；Hofman J,Malcekova B,SkarkaA,et al.Anthracycline resistance mediated by reductive metabolism in cancercells：The role of aldo-keto reductase 1C3[J].Toxicology and AppliedPharmacology,2014,278(3):238-248.DOI：10.1016/j.taap.2014.04.027)。

AKR1C3与子宫内膜异位密切相关。AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病包括子宫内膜异位。

子宫内膜异位为主要雌激素相依之慢性发炎疾病，其表征为子宫腔外存在子宫内膜组织。子宫内膜异位之主要症状为慢性骨盆疼痛及低生育力。雌激素(E2)缺乏为用于药理治疗子宫内膜异位之临床上经证实之概念及基础主要作用机制。除全身雌激素含量以外，局部衍生的雌激素促进子宫内膜异位病变之发展的迹象愈来愈多。最近已描述子宫内膜异位病变之高组织内雌激素浓度，其表明在子宫内膜异位中的高局部雌激素合成(Huhtinen K,Desai R,Stahlee M，et al.Endometrial and EndometrioticConcentrations of Estrone and Estradiol Are Determined by Local MetabolismRather than Circulating Levels[J].The Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,2012,97(11):4228-4235.DOI：10.1210/jc.2012-1154)。因此，在子宫内膜异位病变中抑制局部E2之产生被视为用于治疗子宫内膜异位之极具吸引力的作用机制。AKR1C3很大程度上在子宫内膜异位病变中表现，且仅可在卵巢中略微可侦测到(Tina

AKR1C3亦为PGF2α合成酶，且除AKR1C3之调升之外，已展示PGF2α之含量在来自患有腹膜子宫内膜异位之女性之正位及异位子宫内膜两者中相比在来自患有卵巢子宫内膜瘤之女性之类似组织中明显更高(

AKR1C3与多囊性卵巢症候群(PCOS)密切相关。AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病包括多囊性卵巢症候群(PCOS)。

PCOS为常见内分泌病症，其影响高达10％的生殖年龄女性。其临床上与无卵性不孕症、功能不良性出血、雄激素过量、高胰岛素血症及抗胰岛素症、肥胖症及代谢症候群相关联(Fang Y.Insulin resistance and the polycystic ovary syndrome:Mechanismand implications for pathogenesis[J].Endocrine Reviews,1998,18(6):774-800.DOI：10.1210/edrv.18.6.0318)。PCOS之四个主要特征已由雄激素过量学会(AndrogenExcess Society)确认：排卵及月经功能异常、生物化学高雄激素血症、临床雄激素过多症(例如，痤疮、多毛症)及多囊性卵巢症(Azziz R,Carmina E,Dewailly D,Diamanti-Kandarakis E,Escobar-Morreale HF,Futterweit W,et al.Position statement:criteria for defining polycystic ovary syndrome as a predominantlyhyperandrogenic syndrome:an Androgen Excess Society.[J].Clin Endocrinol Metab2006；91:4237-45.DOI：10.1055/s-2003-43304)。患有PCOS的绝大部分女性会呈现雄激素过多症之临床症状，例如痤疮、多毛症或主要藉由低生育力或月经过少显现之无排卵(LegroRichard S，Brzyski Robert G，Diamond Michae P，et.al,Letrozole versusClomiphene for Infertility in the Polycystic Ovary Syndrome[J].New EnglandJournal of Medicine,2014,371(2):119-129.DOI：10.1056/nejmoa1313517)。患有PCOS的女性易患葡萄糖不耐及代谢症候群(Taponen S,Martikainen H,Jarvelin M R.MetabolicCardiovascular Disease Risk Factors in Women With Self-Reported Symptoms ofOligomenorrhea and/or Hirsutism:Northern Finland Birth Cohort 1966 Study[J].Journal of Clinical Endocrinology&Metabolism,2004,89(5):2114-8.DOI:10.1210/jc.2003-031720)，具有心血管疾病相关联之风险因素及很可能增加的未来心血管事件之风险(Mani H,Levy MJ,Davies MJ,et al.Diabetes and cardiovascular events inwomen with polycystic ovary syndrome；a 20-year retrospective cohort study[J].Clin Endocrinol,2013,78(6):926-934.DOI：10.1111/cen.12068)。雄激素过多症、多毛症及/或高雄激素血症为该症候群之关键组成部分，且必选用于诊断PCOS(Azziz R,Carmina E,Dewailly D,Diamanti-Kandarakis E,Escobar-Morreale HF,Futterweit W,et al.Position statement:criteria for defining polycystic ovary syndrome as apredominantly hyperandrogenic syndrome:an Androgen Excess Society.[J].ClinEndocrinol Metab 2006；91:4237-45.DOI：10.1055/s-2003-43304)。虽然血清睪固酮为高雄激素血症之生物化学评估之关键因素，但最近建议将雄烯二酮作为PCOS相关雄激素过量之更可靠标记物，此系因为雄烯二酮在PCOS女性体内高浓度循环(O’Reilly,Michael W,Taylor A E,Crabtree N J,et al.Hyperandrogenemia predicts metabolic phenotypein polycystic ovary syndrome:the utility of serum androstenedione[J].TheJournal of Clinical Endocrinology&Metabolism,2014:jc.2013-3399.DOI：10.1210/jc.2013-3399)。PCOS在传统上已被视为卵巢病症(Franks S,Gharani N,Gilling-SmithC.Polycystic ovary syndrome:evidence for a primary disorder of ovariansteroidogenesis[J].Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology,1999,69:269-272.DOI：10.1016/s0960-0760(99)00044-8)。然而，对PCOS之卵巢外及肾上腺外雄激素形成增加的关注已突显周围组织的作用，诸如脂肪雄激素形成(Quinkler M,Sinha B,Tomlinson JW,Bujalska IJ,Stewart PM,Arlt W(2004)Androgen generationin adipose tissue in women with simple obesity a site-specific role for 17{beta}-hydroxysteroid dehydrogenase type 5.[J].J Endocrinol,2004,183:331-342.DOI:10.1677/joe.1.05762)。AKR1C3为雄激素活化酶，已知其主要系将雄烯二酮转化成睪固酮。已描述PCOS患者之脂肪组织中之AKR1C3的调升，其指示脂肪中之ARK1C3表现明显促进PCOS患者之雄烯二酮的雄激素形成。已另外展示脂肪细胞中之AKR1C3表现藉由胰岛素明显增加，其指示在PCOS中较高的胰岛素能够藉由增加女性皮下脂肪组织中之AKR1C3活性来推进脂肪雄激素形成(O"Reilly M,Gathercole L,Capper F,et al.Effect ofinsulin on AKR1C3 expression in female adipose tissue:in-vivo and in-vitrostudy of adipose androgen generation in polycystic ovary syndrome[J].TheLancet,2015,385:S16.DOI：10.1016/S0140-6736(15)60331-2)。AKR1C3亦为PGF2α合成酶，且在用于过氧化体增生物活化受体γ(PPARgamma)之内源性配位体的形成中起抑止作用，该过氧化体增生物活化受体γ为胰岛素敏化药物之标靶(Spiegelman et.al，Diabetes1998,47:507-514.DOI:10.2337/diabetes.47.4.507)。选择性AKR1C3抑制可提供新颖治疗标靶以减小雄激素负担及改良PCOS中之代谢表现型(O"Reilly M,Gathercole L,CapperF,et al.Effect of insulin on AKR1C3 expression in female adipose tissue:in-vivo and in-vitro study of adipose androgen generation in polycystic ovarysyndrome[J].The Lancet,2015,385:S16.DOI：10.1016/S0140-6736(15)60331-2；Duet.al，J Clin Endocrinol Metab.2009,94(7):2594-2601.DOI:10.1210/jc.2009-0139)。

AKR1C3与癌症密切相关。AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病包括癌症。

AKR1C3在大量癌症中过度表现，该等癌症包括诸如以下之彼等前列腺癌、乳癌、子宫癌、血癌、肺癌、脑癌及肾癌：子宫内膜癌(Rizner TL,Smuc T,Rupreht R,Sinkovec J,Penning TM AKR1C1 and AKR1C3 may determine progesterone and estrogen ratiosin endometrial cancer.[J].Molecular&Cellular Endocrinology,2005,248(1-2):126-135.DOI：10.1016/j.mce.2005.10.009)、肺癌(Lan Q,Mumford JL,Shen M,Demarini DM,Bonner MR,He X,Yeager M,Welch R,Chanock S,Tian L,Chapman RS,Zheng T,KeohavongP,Caporaso N,Rothman N.Oxidative damage-related genes AKR1C3 and OGG1modulate risks for lung cancer due to exposure to PAH-rich coal combustionemissions.Carcinogenesis.2004,25(11):2177–2181.DOI:10.1093/carcin/bgh240)、非霍奇金淋巴瘤(Lan Q,Zheng T,Shen M,et al.Genetic polymorphisms in theoxidative stress pathway and susceptibility to non-Hodgkin lymphoma.HumGenet.2007；121:161–168.DOI:10.1007/s00439-006-0288-9)、膀胱癌(Figueroa J D,Núria Malats,Montserrat García-Closas,et al.Bladder cancer risk and geneticvariation in AKR1C3 and other metabolizing genes[J].Carcinogenesis,2008,29(10):1955-62..DOI：10.1093/carcin/bgn163)、慢性骨髓白血病(Birtwistle J,Hayden RE,Khanim F L,et al.The aldo-keto reductase AKR1C3 contributes to 7,12-dimethylbenz(a)anthracene-3,4-dihydrodiol mediated oxidative DNA damage inmyeloid cells:Implications for leukemogenesis[J].Mutation Research,2009,662(1-2):67-74.DOI:10.1016/j.mrfmmm.2008.12.010)、肾细胞癌(Azzarello J T,Lin H K,Gherezghiher A,et al.Expression of AKR1C3 in renal cell carcinoma,papillaryurothelial carcinoma,and Wilms'tumor[J].International Journal of Clinical&Experimental Pathology,2010,3(2):147.PMID:20126582)、乳癌(Byrns M C,Duan L,LeeS H,et al.Aldo-keto reductase 1C3 expression in MCF-7cells reveals roles insteroid hormone and prostaglandin metabolism that may explain its over-expression in breast cancer[J].J Steroid Biochem Mol Biol,2010,118(3):0-187.DOI:10.1016/j.jsbmb.2009.12.009)，然而其调升与肿瘤侵袭性及攻击性通常相关(Azzarello J T,Lin H K,Gherezghiher A,et al.Expression of AKR1C3 in renalcell carcinoma,papillary urothelial carcinoma,and Wilms'tumor[J].International Journal of Clinical&Experimental Pathology,2010,3(2):147.PMID:20126582；Birtwistle J,Hayden R E,Khanim F L,et al.The aldo-keto reductaseAKR1C3 contributes to 7,12-dimethylbenz(a)anthracene-3,4-dihydrodiol mediatedoxidative DNA damage in myeloid cells:Implications for leukemogenesis[J].Mutation Research,2009,662(1-2):67-74.DOI:10.1016/j.mrfmmm.2008.12.010；Miller et.al，Aldo-keto reductase family 1member C3(AKR1C3)is expressed inadenocarcinoma and squamous cell carcinoma but not small cell carcinoma.[J].Int.J.Clin.Exp.Path.2012,5:278-289.PMID:22670171)。AKR1C3能够直接将雌酮及孕酮分别还原成17β-雌二醇及20α-羟孕酮，藉此增强此促增生性信号(Smuc,Rizner,Expression of 17β-hydroxysteroid dehydrogenases and other estrogen-metabolizing enzymes in different cancer cell lines[J].Chem BiolInteract.2009,178:228-33.DOI:10.1016/j.cbi.2008.10.038)。

另外，AKR1C3之前列腺素F合成酶活性催化PGH2至PGF2α及PGD2至11β-PGF2之转化，已知两者刺激发炎及增生。在缺乏AKR1C3活性之情况下，PGD2(替代转化成PGF2)自发地脱水及重排以形成抗增生性及抗发炎性PGJ2异构体，包括15d-PGJ2。

概言之，AKR1C3增加增生性PGF2异构体并减少抗增生性PGJ2产物，且因此AKR1C3具有影响激素依赖性及激素非依赖性癌症两者之可能性。在乳癌中，假定AKR1C3之作用可产生其活化导致癌细胞存活之前列腺素F2α(PTGFR)配体(Yoda T et.al，11β-Prostaglandin F2α,a bioactive metabolite catalyzedby AKR1C3,stimulatesprostaglandin F receptor and induces slug expression in breast cancer[J].MolCell Endocrinol.15；413:236-247.DOI:10.1016/j.mce.2015.07.008)。

AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病特别的包括前列腺癌。AKR1C3之高度表现已与前列腺癌恶化及攻击性相关联(Stanbrough M et.al，Increased expression of genes converting in androgen-independent prostatecancer[J].Cancer Res 2006,66:2815-25.DOI:10.1158/0008-5472.can-05-4000；WakoK,Kawasaki T,Yamana K.et al.Expression of androgen receptor through androgen-converting enzymes is associated with biological aggressiveness in prostatecancer.J Clin Pathol.2008 Apr；61(4):448–54.DOI:10.1136/jcp.2007.050906)。在激素依赖性前列腺癌中，AKR1C3将雄烯二酮转化成睪固酮，其转而过度活化雄激素受体且促进肿瘤生长(Penning T M,Steckelbroeck S,Bauman D R,et al.Aldo-keto reductase(AKR)1C3:role in prostate disease and the development of specific inhibitors.[J].Molecular&Cellular Endocrinology,2006,248(1):182-191.DOI:10.1016/j.mce.2005.12.009)。在抗去势性前列腺癌(CRPC)中，瘤内雄激素生物合成中涉及AKR1C3，其分别促进弱雄激素雄烯二酮(A'二酮)至更具活性的雄激素睪固酮及5α-雄固烷二酮(5α-二酮)至DHT之转化(Liu C,Lou W,Zhu Y,et al.Intracrine Androgens and AKR1C3Activation Confer Resistance to Enzalutamide in Prostate Cancer[J].CancerResearch,2015,75(7):1413-1422.DOI:10.1158/0008-5472.can-14-3080；Fung,K-M.Increased expression of type 2 3-hydroxysteroid dehydrogenase/type 5 17-hydroxysteroid dehydrogenase(AKR1C3)and its relationship with androgenreceptor in prostate carcinoma[J].Endocrine Related Cancer,2006,13(1):169-180.DOI:10.1677/erc.1.01048)。重要的是，相较于在患有原发性前列腺癌之患者体内，AKR1C3表达在患有CRPC之患者体内展示增加(Stanbrough et.al，Cancer Res 2006,66:2815-2825.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-05-4000；Hamid AR,Pfeiffer MJ,Verhaegh GW,Schaafsma E,Brandt A,Sweep FC,Sedelaar JP,Schalken JA.Aldo-keto reductasefamily 1member C3(AKR1C3)is a biomarker and therapeutic target forcastration-resistant prostate cancer.Mol.Med.2012；18:1449–1455.DOI:10.2119/molmed.2012.00296；Pfeiffer MJ,Smit FP,Sedelaar JP et al(2011)Steroidogenicenzymes and stem cell markers are upregulated during androgen deprivation inprostate cancer.Mol Med 17:657–664.DOI:10.2119/molmed.2010.00143)。遗传多态性在AKR1C3之AKR1C3基因写码中亦展示为前列腺癌之非依赖性预测子(Yu et.al，PLoS One2013,8(1):e54627.DOI:10.1371/journal.pone.0054627)。此外，表明了AKR1C3依赖性雄激素重新合成是对诸如阿比特龙(abiraterone)之CYP17A1抑制剂之潜在抗药机制(Mostaghel et.al，Clin Cancer Res 2011,17:5913-5925.DOI:10.1158/1078-0432.CCR-11-0728；Cai et.al，Cancer Res 2011,71:6503-6513.DOI:10.1158/0008-5472.CAN-11-0532)。因此，AKR1C3可为患有CRPC的患者提前具有前景的治疗标靶(Adeniji et.al，JSteroid Biochem Mol Biol 2013,137:136-149.DOI:10.1021/jm3017656)。在多中心阶段I/II研究中，对患有转移性抗去势性前列腺癌之患者测试AKR1C3抑制剂。然而，新颖雄激素生物合成抑制剂并未展示对临床活性之相关迹象(Loriot et.al，Invest New Drugs2014,32:995-1004.DOI:10.1007/s10637-014-0101-x)。最新资料指示CRPC中之AKR1C3活化为与抗雄激素(恩杂鲁胺enzalutamide)抗药性相关联之重要抗药机制。相较于在亲代细胞中，雄激素前驱体(诸如，胆固醇、DHEA及孕酮)以及雄激素在抗恩杂鲁胺前列腺癌细胞中可展示高度调升。资料表明AKR1C3抑制路径可充当恩杂鲁胺敏化治疗且对患有抗恩杂鲁胺CRPC之患者有恢复功效(Liu C,Lou W,Zhu Y,et al.Intracrine Androgens and AKR1C3Activation Confer Resistance to Enzalutamide in Prostate Cancer[J].CancerResearch,2015,75(7):1413-1422.DOI:10.1158/0008-5472.can-14-3080)。假定使用AKR1C3抑制剂共同治疗将解决恩杂鲁胺抗性且提高晚期前列腺癌患者之存活期(Thomaet.al，Nature Reviews Urology 2015,12:124.DOI:10.1038/nrurol.2015.23)。

AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病特别的包括抗蒽环类霉素癌。蒽环类霉素(或蒽环类抗生素)为用于癌症化学疗法之一类药物，且衍生自链霉菌细菌波塞链霉菌青灰变种(Fujiwara et.al,Streptomyces bacterium Streptomycespeucetius var.Caesius，Critical Reviews in Biotechnology,1985,3(2):133.DOI：10.3109/07388558509150782)。此等化合物用于治疗许多癌症，包括白血病、淋巴瘤、乳癌、胃癌、子宫癌、卵巢癌、膀胱癌及肺癌。蒽环类霉素为曾经所研发之抗癌治疗当中最有效的。然而，用于癌症治疗的蒽环类霉素之临床成果被抗药性弱化。已越来越普遍认可蒽环类霉素至其较弱C13-羟基次级代谢物的较高酶还原构成了引起肿瘤之蒽环类霉素抗性的机制中之一者(Gavelova et.al，2008 Chem.Biol.Interact 176，9-18.DOI:10.1016/j.cbi.2008.07.011；Heibein et.al，2012 BMC Cancer 12,381.DOI:10.1186/1471-2407-12-381)。阿霉素(尤其)之酶代谢是造成在阿霉素化学疗法后观测到的心肌病的原因。展示诸如阿霉素及道诺霉素(daunorubicin)之临床上投与的蒽环类霉素之代谢中涉及AKR1C3(Novotna et.al，Toxicol.Letter 2008,181:1-6.DOI:10.1016/j.toxlet.2008.06.858)。在2012年，亚洲乳癌患者已展示阿霉素药效学与AKR1C3遗传变异体之相关性：一种遗传变异体与较长无进展存活期及在基于阿霉素之疗法之后的整体存活期相关联，从而表明与阿霉素代谢之潜在交互作用(Voon et.al，British J of Clin Pharmacology 2012,75:1497-1505.DOI:10.1111/bcp.12021)。最近，可证实AKR1C3促进癌细胞对蒽环类霉素治疗之抗性，且因此具有蒽环类霉素的特定AKR1C3抑制剂之伴随投与可为用于成功预防及治疗抗蒽环类霉素抵肿瘤之有效策略(Hofman et.al，Toxicology and AppliedPharmacology2014,278:238-248.DOI:10.1016/j.taap.2014.04.027)。

研究还表明，AKR1C3在食管癌，前列腺癌和非小细胞肺癌的放射治疗抵抗性中起关键作用(Sun et al Overexpression of AKR1C3 significantly enhances humanprostate cancer cells resistance to radiation.

研究表明联合使用AKR1C3特异性抑制剂和daunorubicin或cytarabine等化疗药物可大幅度增加血癌细胞的杀伤能力(Verma et al，Potent andHighly Selective Aldo-Keto Reductase 1C3(AKR1C3)Inhibitors Act as Chemotherapeutic Potentiators inAcute MyeloidLeukemia and T-Cell Acute LymphoblasticLeukemia.J.Med.Chem.2019,62，7：3590-3616，DOI：10.1021/acs.jmedchem.9b00090)。

AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病特别的包括异位性皮肤炎。抗原对异位性个体的攻击造成PGD2及组织胺之释放，其展示PGD2几乎不促进人类皮肤之实时过敏反应且PGD2为异位性皮肤炎(AD)中促使皮肤发炎的脂质介体(Barret.al，Br J Pharmacol.1988,94:773-80.PMID:2460180；Satoh et.al，J Immunol.2006,177:2621-9.DOI:10.4049/jimmunol.177.4.2621；Shimura et.al，Am J Pathol.2010,176:227-37.DOI:10.2353/ajpath.2010.090111)。PGD2为相对不稳定的促炎性介体，其自发地转化成强抗炎性介体15d-PGJ2。彼转化藉由PGD2藉AKR1C3至促炎性9α,11β-PGF2之代谢来转移(Mantel et.al，Exp Dermatol.2016,25(1):38-43.DOI:10.1111/exd.12854)。经证实，AKR1C3在人类AD样本中调升，且已假定AKR1C3在皮肤病理学(尤其是异位性皮肤炎)及瘢痕瘤中调节发炎之作用(Mantel et.al，J Invest Dermatol 2012,132(4):1103-1110.DOI:10.1038/jid.2011.412；Mantel et.al，Exp Dermatol.2016,25(1):38-43.DOI:10.1111/exd.12854)。AKR1C3抑制可为用于治疗AD及瘢痕瘤之新颖选项。

AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病特别的包括发炎。前列腺素生物合成中涉及AKR1C3，其催化PGH2至PGF2α及PGD2至11β-PGF2之转化。已假定AKR1C3之表现及调升藉由直接引起9α,11β-PGF2合成速率提高以及转移强抗炎性介体15d-PGJ2之自发性产生来支援发炎(Mantel et.al，J Invest Dermatol 2012,132(4):1103-1110.DOI:10.1038/jid.2011.412)。亦已在HL-60细胞中(Desmond et.al，Cancer Res2003,63:505-512.PubMed:12543809)及MCF-7细胞中(Byrns et.al，J Steroid BiochemMol Biol 2010,118:177-187.DOI:10.1016/j.jsbmb.2009.12.009)涉及AKR1C3之此功能。假定对AKR1C3之抑制增加15d-PGJ2(抗炎性脂质)，其主要经由过氧化体增殖剂活化受体γ(PPAR-γ)之活化及/或对在免疫细胞中传信之NF-κB之抑制直接调节其作用(Maggiet.al，Diabetes 2000,49:346-355.DOI:10.2337/diabetes.49.3.346；Scher et.al，Clinical Immunology 2005,114:100-109.DOI:10.1016/j.clim.2004.09.008)。先前资料已展示PPAR-γ活化减轻小鼠之皮肤及肺脏中之过敏原诱发性发炎(Ward et.al，Carcinogenesis.2006,27(5):1074-80.DOI:10.1093/carcin/bgi329；Dahten et.al，JInvest Dermatol.2008,128(9):2211-8.DOI:10.1038/jid.2008.84)。此表明AKR1C3抑制在抑制发炎方面之作用。

AKR1C3对若干病理性病状/疾病起作用，这些病理性病状/疾病包括其他疾病。此外，AKR1C3抑制剂具有用于治疗以下之潜能：前列腺增生(Roberts et.al，Prostate 2006,66(4),392-404.DOI:10.1002/pros.20362)、脱发(L.Colombe et.al，Exp Dermatol 2007,16(9),762-769.DOI:10.1111/j.1600-0625.2007.00639.x)、肥胖症(P.A.Svenssonet.al，Cell Mol Biol Lett 2008,13(4),599-613.DOI:10.2478/s11658-008-0025-6)、过早性成熟(C.He，Hum Genet 2010,128(5),515-527.DOI:10.1007/s00439-010-0878-4.)及慢性阻塞性肺病(S.Pierrou，Am J Respir Crit Care 2007,175(6),577-586.DOI:10.1164/rccm.200607-931OC)。

现已发现本发明之化合物具有抑制AKR1C3活性的效果，因此可用于治疗或预防AKR1C3相关病症，诸如妇科病症(特定言之，子宫内膜异位相关及多囊性卵巢症候群相关妇科病症)、病状及疾病，代谢病症，过度增生性病症、病状及疾病，及发炎病症以及其他相关疾病活病症。

进一步，本发明还提供上述的化合物I-1至I-5在制备药品中的应用。

进一步，本发明还提供上述述的化合物I在制备预防或治疗与AKR1C3抑制剂相关的疾病的药品中的应用。

进一步，本发明还提供含有上述的化合物I-1至I-5的药品。

进一步，本发明还提供含有化合物I-1至I-5的预防或治疗与AKR1C3抑制剂相关的疾病的药品。

进一步，本发明还提供上述的化合物I在制备预防或治疗与AKR1C3抑制剂相关的疾病的药品中的应用，所述疾病为子宫内膜异位症、子宫平滑肌瘤、子宫出血性病症、痛经、前列腺增生、痤疮、皮脂溢、脱发、过早性成熟、多囊卵巢综合征、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、炎性疼痛或癌症或炎症或癌性疼痛。

优选的，这些癌症包括前列腺癌、原发性前列腺癌、晚期前列腺癌、转移性前列腺癌、激素原初前列腺癌，难治性前列腺癌或去势抗性前列腺癌(CRPC)和乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、肾细胞癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤以及急性髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、白血病。

含有上述的化合物I的预防或治疗与AKR1C3抑制剂相关的疾病的药品，所述疾病为子宫内膜异位症、子宫平滑肌瘤、子宫出血性病症、痛经、前列腺增生、痤疮、皮脂溢、脱发、过早性成熟、多囊卵巢综合征、慢性阻塞性肺病(COPD)、肥胖、炎性疼痛或炎症或癌性疼痛。

优选的，这些癌症包括前列腺癌、原发性前列腺癌、晚期前列腺癌、转移性前列腺癌、激素原初前列腺癌，难治性前列腺癌或去势抗性前列腺癌(CRPC)和乳腺癌、肺癌、子宫内膜癌、肾细胞癌、膀胱癌、非霍奇金淋巴瘤以及急性髓性白血病(AML)、T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)、白血病。

进一步，本发明还提供一种用于增强癌症或肿瘤放射疗法敏感性的药品，其用于在癌症或肿瘤患者对放射疗法具有抗性时提高放射疗法的疗效，该药品含有上述I-1至I-5的化合物。

进一步，本发明还提供一种治疗对放射疗法具有抗性的癌症或肿瘤的方法，其包含检测患者对放射治疗抵抗性的步骤以及使用含有上述化合物I-1至I-5化合物的药品的步骤。

显然，在使用上述含有上述化合物I-1至I-5化合物的药品(药剂或药物)时对患者进行放射疗法或使用上述含有上述化合物I-1至I-5化合物的药品(药剂或药物)后，患者对放射疗法的抗性会降低从而使得放射疗法的效果得到加强。

进一步，本发明还提供一种用于增强癌症或肿瘤化疗敏感性的药品，其用于在癌症或肿瘤患者对化疗(特别是柔红霉素daunorubicin和阿糖胞苷cytarabine)具有抗性时提高化疗的疗效，该药品含有上述I-1至I-5的化合物。

关于本文所述药品或制剂，所制得的药物包含特定剂量范围的所示化合物或其盐或溶剂合物，和/或，所制得的药物为特定剂型、特定给药方式施用。

关于本文所述用途，所制得的药物还可包含药学上可接受的辅料或赋形剂。所述药物可以为临床施用的任何剂型，例如片剂、栓剂、分散片、肠溶片、咀嚼片、口崩片、胶囊、糖衣剂、颗粒剂、干粉剂、口服溶液剂、注射用小针、注射用冻干粉针或大输液。根据具体剂型和施用方式，所述药物中的药学上可接受的辅料或赋形剂可以包括下述的一种或多种：稀释剂、增溶剂、崩解剂、悬浮剂、润滑剂、粘合剂、填充剂、矫味剂、甜味剂、抗氧化剂、表面活性剂、防腐剂、包裹剂和色素等。

优选地，所述患者是哺乳动物，更优选是人。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

“患者”及“个体”可互换使用，是指需要癌症治疗的哺乳动物。通常，患者是人类。通常，患者是诊断患有癌症的人类。在某些实施例中，“患者”或“个体”可指用于筛选、表征及评估药物及疗法的非人类哺乳动物，例如非人类灵长类动物、狗、猫、兔、猪、小鼠或大鼠。

“前药”是指投与或施用之后经新陈代谢或以其他方式转化为关于至少一种性质的生物学活性或活性更高的化合物(或药物)的化合物。相对于药物，前药以使其相对于药物活性较低或无活性的方式化学修饰，但化学修饰使得在前药投与之后通过代谢或其他生物过程产生相应药物。前药可相对于活性药物具有改变的代谢稳定性或输送特征、较少副作用或较低毒性或经改良的风味(参见(例如)参考文献Nogrady，1985，MedicinalChemistry A Biochemical Approach，0xford University Press，New York，第388页至392页，其以引用式并入本文中)。前药可使用除相应药物以外的反应物来合成。

“实体肿瘤”是指包括(但不限于)骨、脑、肝、肺、淋巴结、胰脏、前列腺、皮肤及软组织(肉瘤)中的转移肿瘤的实体肿瘤。

药物的“治疗有效量”是指当向患有癌症的患者投与或施用时，将具有预期的治疗效应(例如患者中一或多种癌症的临床表现的缓和、改善、缓解或消除)的药物的量。治疗效应不必通过投与或施用一个剂量而出现，且可仅在投与或施用一系列剂量后出现。因此，治疗有效量可以一或多次来投与或施用。

病况或患者的“治疗”是指采取步骤以获得有益或期望结果(包括临床结果)。出于本发明的目的，有益或期望临床结果包括(但不限于)一或多种癌症症状的缓和或改善；疾病程度的减弱；疾病进展的延迟或减缓；疾病状态的改善、缓解或稳定；或其他有益结果。在一些情形下，癌症的治疗可使得部分反应或稳定疾病。

“肿瘤细胞”是指任何适当物种(例如，哺乳动物，例如鼠类、犬、猫、马或人类)的肿瘤细胞。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。

以下是本发明的具体试验和实施例部分。

以下试验将揭示申请人研发的AKR1C3抑制剂的体外抑制活性，申请人在此声明，以下的实验数据的权利属于申请人。

申请人声明以下试验中公开的部分具体化合物在本发明已公开的化合物的具体合成方法以及合成路线的基础上，参考专利公开文献(比如申请号PCT/US2016/021581,公开号WO2016/145092；申请号PCT/US2016/062114，公开号WO2017/087428)或其他公开文献揭露的类似方法和操作(虽然底物不同，产率有高有低但本领域即药物化学、有机化学等掌握有机合成技能的技术人员依然能合成得到)能够合成得到，并且申请人已经过核磁、质谱确证结构，本申请限于时间未能及时整理提供，本次申请仅仅提供部分对应的化合物合成方法、核磁数据以及对AKR1C3酶的体外抑制活性。

化合物合成实验

合成方法概述

24号化合物的合成

将24-A1(100mg，0.32mmol)溶于DCM(3ml)中。降温0℃度，滴加氯化亚砜(57.12mg，4.8mmol，1.5eq)常温搅拌，1.5h反应完毕。降温0-5℃，滴加饱和碳酸氢钠溶液,调至弱碱性(pH＝7-8),DCM(10ml*2)萃取，干燥浓缩，得到24-A2(130mg,定量收率)，为黄色油状物,直接投于下步反应。

将24-A2(130mg，0.388mmol)，溶于DMF(3ml)中，加入3-羟基哒嗪(74.57mg，0.776mmol，2eq)，加入碳酸铯(316mg，0.96mmol，2.5eq)常温搅拌。40min反应完毕。加入EA(20V)，饱和碳酸钠洗(5ml*3)盐水洗，干燥浓缩制备得产物(26mg,17.0％)，为黄色油状物。

25号化合物的合成

将24-A1(50mg,0.16mmol)溶于DCM(3ml)中，加入29-B1(141.8mg，0.96mmol,6eq)降温0℃，滴TEA(95.9mmol,0.96mmol,6eq),加入DMAP(4.85mg，0.04mmol，0.25eq)升温40℃搅拌过夜，反应完毕后，除去溶剂，高效液相制备得产物14.1mg，为白色固体，收率为20.5％。

26号化合物的合成

将三光气(3g，10.1mmol)在0℃下溶于DCM(300ml)，然后将26-A1(1.52g，20.2mmol，2eq)溶于DCM(60ml)后滴加体系，20min滴毕。反应4h后将体系旋干，用MTBE(20ml)打浆，抽滤后母液旋干得26-A2粗品。(m＝1.2g，收率55％.)浅棕色液体。直接投于下步反应。

将26-A2(300mg，0.949mmol)与AST-A-089-A2(652.5mg，4.744mmol，5eq)溶于DCM(12ml)，降温至0℃后将TEA(480mg，4.744mmol，5eq)与DMAP(29.1mg，0.237mmol，0.25eq)加入至体系，将体系升温至35℃，大约12h反应完毕。HPLC与LCMS监测反应完毕后降至室温，加入饱和NaHCO3(15ml×2)洗涤，有机相水洗(10ml×2)，水相DCM萃取(20ml×1)，有机相旋干，高效液相制备得到AST-A-089(150mg，收率37.8％)，为黄色油状液体。

27号化合物的合成

氮气保护下，27-A1(120mg，0.358mmol)溶于DMF(5mL)中，加入2,4二氟苯硫酚(104mg，0.716mmol，2eq)加入Cs

28号化合物的合成

将24-A1(100mg，0.32mmol)与吡啶(55.7mg，0.70mmol，2.2eq)溶于DCM(3ml)，然后将降温0℃，滴加氯甲酸异丙酯(129.6mg，1.2mmol，3.6eq，安耐吉)加入至体系，20℃反应18h，降温至0℃-5℃,滴加1N盐酸(3ml)，DCM萃取(10mLx 2)，有机相用盐酸(1 N,10mL x 5)洗，水洗(5mL x 3),盐水洗(5mLx 2)，硫酸钠干燥干燥，浓缩有机相，中性制备得到产物(27mg,21.2％),为类白色固体。

29号化合物的合成

将29-A1(1g，5.84mmol)与3-羟基-N，N-二甲基苯甲酰胺(2.8g，17.53mmol，3eq)溶于MeCN(30ml)，然后将K

将29-A2(50mg，0.158mmol)与哌啶-1-甲酰氯(141.9mg，0.948mmol，6eq)溶于DCM(2ml)，然后将TEA(32.0mg，0.316mmol，2eq)与DMAP(4.9mg，0.04mmol，0.25eq)加入至体系，此时体系呈淡黄色，将体系升温至40℃，12h反应完毕。除去溶剂，高效液相色谱值帮，得到纯品(m＝16.5mg，收率24.3％.)。

93号化合物的合成

氮气保护，将30-A1(1.76g,7.72mmol)与3,3-二氟三甲叉亚胺盐酸盐(1.0g,7.72mmol,1eq)溶于DCM(20ml)，加入T

将体系降温至5℃，滴加DIEA，完毕后常温搅拌，HPLC监测2h反应完毕后向体系中加入水(5ml)，DCM萃取(15ml×3)，有机相水洗(10ml×2)，干燥旋干得产物粗品(m＝2.5g,收率100％)淡黄色固体。

氮气保护，将30-A2(2.5g,8.242mmol)溶于EtOH(37ml)，然后将Pd/C(630mg,25％A2)加入至体系体系，先将体系抽冲N

将30-A3(1.5g,7.04mmol)与3-氟-4-硝基苯甲酸甲酯(2.8g,14.06mmol,2eq)溶于ACN(15ml)，后将K

将30-A4(500mg,.27mmol)溶于THF(2ml)，降温至0℃后分批将NaBH

将30-A5(140mg,0.384mmol)与哌啶-1-碳酰氯(287.4mg,1.92mmol,5eq)溶于DCM(6ml)，降温至0℃后将TEA(194.3mg,1.92mmol,5eq)与DMAP(11.8mg,0.096mmol,0.25eq)加入至体系后将体系升温至35℃，大约12h反应完毕。HPLC与LCMS监测反应完毕后降至室温，加入饱和NaHCO3(10ml×2)洗涤，有机相水洗(10ml×2)，水相DCM萃取(10ml×1)，有机相旋干，高效液相色谱中性条件制备，得到纯品(22.5mg,收率12.3％)，为白色固体。

31号化合物的合成

将PSCl

将31-A2(1.8g,10.5mmol)加入至H

氮气保护下，将27-A1(100mg,0.299mmol)溶于DMF(2ml)，后将31-A3(91.5mg,0.597mmol,2eq)与TEA(90.7mg,0.896mmol,3eq)加入至体系，此时体系呈淡橘黄色，20℃反应过夜，反应完毕。加入饱和NaHCO

32号化合物的合成

将31(20mg,0.044mmol)溶于DMF(1ml)中，紧接着将K

33号化合物的合成

将PSCl

将33-A2(1g,5.86mmol)加入至H

氮气保护将33-A4(100mg,0.299mmol)溶于DMF(2ml)，后将33-A3(184.3mg,1.196mmol,4eq)与TEA(121.0mg,1.196mmol,4eq)加入至体系，室温过夜后HPLC监测反应完毕。加入饱和NaHCO

34号化合物的合成

降温至0℃，将PSCl

氮气保护将34-A4(50mg,0.149mmol)溶于DMF(1mL)，后将34-A3(418.6mg,1.194mmol,8eq)与TEA(120.8mg,1.194mmol,8eq)加入至体系，将体系升温至30℃，过夜。HPLC与LCMS监测反应完毕后降至室温，加入饱和NaHCO

35号化合物的合成

将PSCl

氮气保护下，将35-A4(100mg,0.299mmol)溶于DMF(2ml)，后将35-A3(182mg,1.196mmol,4eq)与TEA(121mg,1.196mmol,4eq)加入至体系，完毕后将体系升温至25℃，过夜后HPLC监测反应完毕。加入饱和NaHCO

体外实验

实验仪器：

WatersAcquity I Class UPLC超高效液相色谱仪配有Xevo G2-XS Q TofHRMS四极杆飞行时间高分辨率质谱仪。

缓冲液和物料：

1.PBS磷酸缓冲盐溶液，

2. 20mM NADPH的PBS磷酸缓冲盐溶液

3. 250μg/mL AKR1C3的PBS磷酸缓冲盐溶液

4. 250μM测试化合物的50％MeOH/H

5. 250μM黄体酮(progesterone)的50％MeOH/H

6. 1μg/mL普萘洛尔(propranolol)的100％乙腈溶液

实验操作流程

步骤1，将反应混合物按照下表一式二份(n＝2)制成Eppendorf管，轻轻混合。

步骤2，将以上一式两份混合物在37℃下预孵育30分钟。

步骤3，在每个Eppendorf管中加入另外10μL的20mM NADPH的PBS磷酸缓冲盐溶液和2μL的250μM黄体酮(progesterone)的50％MeOH/H

步骤4，立即将以上步骤中的50μL混合物转移到100μL的1μg/mL普萘洛尔(propranolol，内标IS)的100％乙腈溶液中。

步骤5，将剩余样品在37℃下孵育30分钟，并加入100μL1μg/mL普萘洛尔(propranolol，内标IS)的100％乙腈溶液。

步骤6，对于所有样品，加入100μL试剂水，以1100rpm涡旋混合5分钟，并在室温下以15000rpm离心10分钟。

步骤7，将所有样品加载到LC/MS上以测定还原的黄体酮即20α-二氢孕酮的含量。

LC-MS仪器的测试条件为

液相洗脱梯度

四极杆飞行时间质谱参数

步骤9，还原黄体酮(20α-二氢孕酮)的计算：通过LC/MS测定每种样品中还原黄体酮即20α-二氢孕酮和普萘洛尔峰面积。计算还原黄体酮与普萘洛尔的峰面积比，并将时间为0时的比率设定为0％。

AKR1C3活性(％)＝[(样品标准化后的还原黄体酮量)

根据以上计算得到下表的5μM/L化合物浓度的AKR1C3相对活性％活性结果。

备注：

ND，表示未检测；

以上化合物的活性数据是四次测试得到的：2019/5/29、2019/5/31、2019/6/13、2019/6/14，对此对应的对照化合物AST-3424、吲哚美辛其值也有四个，上表中使用的是这四次的算术平均值，具体测试结果、时间如下：

吲哚美辛是典型的AKR1C3的抑制剂，而且临床上被用来进行包括癌症疼痛在内的缓解和治疗。本发明公开的化合物其在5μM/L的浓度下抑制AKR1C3酶的能力较吲哚美辛高，显示本发明公开的化合物是一种较为高效的AKR1C3的抑制剂。