一种用于检测人乳头瘤病毒HPV39的探针及其试剂盒

本发明涉及一种探针及其试剂盒，具体涉及一种可用于人乳头瘤病毒HPV39基因捕获、测序的探针及试剂盒。

宫颈癌是指发生于子宫颈阴道和宫颈部的恶性肿瘤，是最常见的妇科恶性肿瘤之一，仅次于乳腺癌。宫颈癌在中国15~44岁女性各癌症发病率中居第二位，死亡率居第三位。大量研究证实，宫颈癌发生主要是由高危型人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus, HPV）持续感染所致，在99.7%的宫颈癌患者体内检测到高危型HPV DNA的存在。目前，HPV基因型已鉴定出200余种，约40种与生殖道感染相关。根据其导致宫颈癌风险的高低将HPV分为高危型和低危险、型，其中高危型包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68等13种基因型列为高危型，26、53、66、73、82等5种基因型列为中等风险型别。这18种型别的HPV主要与宫颈上皮内瘤变、CINⅡ、Ⅲ级和宫颈癌的发生相关。低危型一般与恶性病变无关，主要引起尖锐湿疣和低级别CIN（CINI）。因此，通过检测宫颈脱落细胞中是否有高危型HPV感染，并定期检测宫颈脱落细胞中HPV病毒是否持续性感染在宫颈癌的早期筛查、辅助诊断和愈后评估等环节中显得尤为重要。

通常情况下，HPV感染寄主细胞之后以游离状态存在，其DNA仍自由存在寄主细胞的细胞质中，随寄主细胞的分裂复制，HPV DNA就会插入人体基因组，这个过程也称为HPV整合。一旦HPV DNA偶然整合至宿主细胞染色体中，病毒蛋白将无秩序复制，宿主细胞遗传物质结构及相关基因表达发生变化，导致主体细胞不可控制地分裂，从而诱发癌变。尽管99.7%以上的宫颈癌中均检测出HPV DNA，但却不是每一个感染高危型HPV的患者均发生了宫颈癌。随着分子生物学和细胞遗传学的进展，HPV与宿主染色体的整合才是宫颈细胞永生化过程中的重要步骤，是导致宫颈上皮内瘤变向宫颈癌恶性进展的一个重要标志。在90%以上的宫颈癌组织中均发现HPV与宿主细胞染色体的整合体，HPV与宿主细胞基因组的整合是宫颈癌发展的最重要的危险因素。低危型HPV很少导致宫颈癌，与在宿主体内的病毒载量无关，是因为其很少发生病毒整合。高危型HPV分别在HSIL和鳞状细胞癌中的整合率分别为76.2%和88.2%，在LSIL中仅37%。HPV以非游离状态存在于侵入性宫颈癌中（约60.9%），较原位癌高出20%。HPV16阳性宫颈癌病例中近90%整合，纯游离形式存在的病例仅16%。说明病毒整合发生率与宫颈癌发病率成正相关，病毒整合状态与宫颈癌病情程度成正相关。HPV DNA与人基因组整合将作为宫颈病变程度的标志物，对宫颈癌的早期诊断具有非常重要的意义。

宫颈癌早期症状不明显，只有尽早地对宫颈癌做出早期筛选预警，才能有效降低由宫颈癌引起的死亡率。传统的病理学检测手段，如宫颈涂片检测，易受取材、染色及细胞病理医生的主观判断等因素的影响，因此应用细胞病理学检测HPV存在灵敏度低、特异性差、假阴性率和假阳性率高、不能对HPV进行分型等弊端。目前临床上常用的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法，该方法检测通量低，对于不同型别的HPV要分别检测，很难满足临床上同时进行多个型别的检测的需求，对于宫颈癌的大规模筛查不太适合。更重要的是，目前所用的这些方法只能对有无HPV感染及HPV感染型别做出判断，对于HPV DNA是否与人基因组发生整合没法做出判断，而HPV整合事件是宫颈癌发生的重要因素。高通量测序技术（next-generation sequencing technology）具有准确、灵敏度高、快速和低成本的优点，可同时对多个基因进行测序，该方法不只可以实现HPV分型检测，同时可以实现HPV整合检测。液相杂交基因捕获技术可以将目标区域相关基因片段富集，结合新一代基因测序技术，能够极大地降低人类基因测序、基因学研究及基因诊断的成本，提高测序深度，更精确地发现特定区域变异信息。而捕获探针的设计是液相杂交捕获技术的核心。综上所述，本发明提供一种用于检测HPV分型及整合的探针组及试剂盒，可一次性对18种高危型HPV进行精确分型并确定其在人基因组中的整合情况，具有一次性处理多个样本、灵敏度高和特异性高的优点，临床意义重大。

本发明的目的在于解决上述现有技术的不足，提供一种用于检测HPV的捕获探针组及其试剂盒；本发明根据上述18种HPV全基因组序列设计合成探针序列，对目的片段进行特异性捕获、扩增和测序，以达到检测样本的目的。所述探针组包含能特异性捕获全部18种HPV基因组的探针。可以全面、快速、准确的检测18种HPV分型及5种HPV整合情况，所述18种HPV分型分别为HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82；5种HPV整合分别为HPV16、18、33、52、58。

本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种用于检测人乳头瘤病毒HPV39分型和整合的探针，探针信息见表1

本发明还提供了一种用于检测人乳头瘤病毒HPV39分型和整合的试剂盒。所述试剂盒包括本发明所述的用于检测人乳头瘤病毒HPV39分型和整合的探针；较佳的，所述试剂盒还包括建库缓冲液1、建库缓冲液2、酶1、酶2、接头、PCR扩增引物1、PCR扩增引物2、PCR反应混合液、封闭序列1、封闭序列2、封闭试剂、杂交缓冲液、PCR扩增缓冲液、PCR扩增引物3、PCR扩增反应液、阳性对照、阴性对照、捕获缓冲液、清洗缓冲液1、清洗缓冲液2和捕获磁珠；优选所述封闭序列1为Cot-1 DNA，封闭序列2为双链寡核苷酸。

进一步的，所述试剂盒各组成成分如表2所示。

本发明还公开了一种使用所述用于检测人乳头瘤病毒HPV39分型和整合的探针及其试剂盒的方法，主要包括以下几个步骤：

(1)设计HPV39的捕获探针

(2)样本DNA提取、片段化及构建DNA文库

(3)文库目标区域靶向捕获及定量

(4)高通量测序

(5)基因序列的生物信息分析

本发明提供一种对HPV基因进行捕获的方法，具体捕获过程包括：提取宫颈脱落细胞全基因组DNA，将其随机打断成200-300bp大小的片段后，部分片段含有HPV基因的序列，构建DNA文库；用本发明涉及的HPV探针（携带生物素标记，能特异性和HPVDNA序列杂交结合）与构建的预文库杂交，含有HPV基因的序列通过探针上生物素与磁珠结合，可以被特异性杂交；将不含HPV的序列洗涤除去，从而富集HPV基因片段，这样该试剂盒就将HPV序列捕获了出来；通过测序仪Nextseq CN500高通量测序并分析测序结果中的HPV信息，可获得待测样本的HPV基因型别及是否与人基因组发生整合情况。

本发明具有以下有益效果：

（1）本发明设计了可进行快速准确地捕获HPV39基因组全序列的探针，可以有效的提高检测特异性。以往的荧光定量PCR等方法都是只针对HPV序列的某一段区域，我们的探针检测范围可以覆盖HPV基因组全长。

（2）本发明利用HPV探针对捕获出目标区域的文库标本利用高通量测序技术测序。由于先使用HPV探针对HPV序列进行了靶向富集捕获，然后再进行高通量测序，使得其检测灵敏度高。

（3）本发明可以一次处理多个样本，通过对多个不同的样本加入不同Barcode进行区分，然后混合上机测序，可以有效的提高检测通量。

图1为末端修复、3’端加“A”反应PCR 仪参数；

图2为Pre-PCR 程序参数。

以下通过实施例对本发明作进一步阐述。如无特殊说明，本发明所使用的本领域常用试剂均可通过商购途径获得。

实施例1：本发明探针组的设计和制备

根据碱基互补配对原则，针对HPV39的DNA序列设计与之互补配对的寡核苷酸探针。由于基因组序列结构复杂，存在不规则区域，例如高GC、高AT区域等，同时由于二代测序读长的限制，从而使得探针设计变得尤为关键，需要综合权衡覆盖率、均一性、捕获效率等多种因素。探针设计的具体原则如下：

（1）长度：可选区间80-150bp，一般选100bp。

（2）探针层数：即目标区域上平均被多少条探针所覆盖，一般建议3层，且需叠瓦式设计。

（3）特异性：即探针在基因组范围的唯一性，特异性越高，探针的捕获效率越高。应避免在低复杂度区域设计探针；但在特殊情况下，比如，某些热点恰好位于低复杂度区域，那么需要综合评估该区域以及相邻区域的序列情况，谨慎放置探针。

（4）结合能力：GC含量在50%左右的区域，其探针捕获能力最强。高GC区域探针结合能力强，但DNA片段自身结合能力更强（长度更长），探针竞争阻力较大；高AT区域的DNA片段自身结合能力弱，但同样探针与之结合的能力也弱，因此，在高GC和高AT区域需要适当增加探针数量来弥补竞争阻力和结合能力方面的劣势。

探针制备：先用光化学合成法，在芯片上大量合成设计的探针，再通过PCR或转录反应得到被生物素标记的探针。

实施例2：本发明试剂盒组成、制备及使用

本实施例所述的用于HPV检测的试剂盒试剂。

所述试剂盒组成成分包括：本发明所述的用于检测HPV的捕获探针、建库缓冲液1、建库缓冲液2、酶1、酶2、接头、PCR扩增引物1、PCR扩增引物2、PCR反应混合液、封闭序列1、封闭序列2、封闭试剂、杂交缓冲液、PCR扩增缓冲液、PCR扩增引物3、PCR扩增反应液、阳性对照、阴性对照、捕获缓冲液、清洗缓冲液1、清洗缓冲液2和捕获磁珠。具体组成成分信息如表2，

所述试剂盒的使用方法为：

1、样本文库制备

（1）片段化：将1000 ng DNA取出解冻后震荡混匀，加水补齐至100μL，利用BioruptorPico超声打断仪打断。具体参数设置如下：待冷循环仪温度降至4°C后，设置参数ON 30秒，OFF 30秒为1个循环，每10 个循环为一轮，共进行3 轮；取1 μL样品使用Qsep1进行片段检测，正常打断后样品检测主峰约在150 bp-200 bp。

（2）末端修复加A：将上一步获得的样品进行末端修复、3’端加“A”。具体反应体系如下：35 μL DNA片段，5 μL ERA缓冲液，10 μL末端修复酶。混好后，运行 PCR 程序，设置PCR 仪参数如图1（50 μL体系，热盖85°C）；

（3）加接头：将上一步获得的样本进行接头连接。具体反应体系如下：50 μL上一步反应结束的样品，5 μL接头，15 μL无酶水，20 μL链接缓冲液，10 μL连接酶；混好后，运行PCR仪程序（要求无热盖），设置PCR仪参数：热盖关，20°C 30 分钟，降至4℃结束

（4）磁珠纯化：程序结束后，立即用纯化磁珠纯化上一步反应产物。纯化体系如下：100μL上一步反应产物，100 μL纯化磁珠。

（5）Pre-PCR扩增反应：以上一步的纯化产物为模板，进行Pre-PCR反应。具体反应体系如下：20 μL上一步的纯化产物，25 μL PCR反应混合液，2.5 μL PCR扩增反应引物1(20 μM)，2.5 μL PCR扩增反应引物2(20 μM)。混好后，将样品置于PCR仪上，启动PCR程序，如图2所示（50 μL体系，热盖温度105°C）；

注：PCR扩增反应引物1中TPE1.0index号为1#~8#（表3）；PCR扩增反应引物2中TPE2.0index号为1#~12#；记录好所使用的index号（表4）。

（6）磁珠纯化：程序结束后，立即用50 μL纯化磁珠纯化上一步反应产物。

2、样本液相杂交

（1）静置解冻封闭序列1和封闭序列2，配制混合液1，具体为：750ng文库，5 μL封闭序列1，2 μL封闭序列2。

（2）取出试剂盒中的封闭试剂和探针，静置解冻后振荡混匀，按照5 μL封闭试剂与2 μL探针配制混合液2（冰上操作）。

（3）取出试剂盒中的杂交缓冲液置于室温化冻，化冻后取出20μL置于65°C恒温混匀仪孵育待用。

（4）将13μL杂交缓冲液添加到混合液2中，吹打混匀后短暂离心收集液体，室温放置待用。

（5）使用可控温真空干燥仪，设置干燥温度45-50℃，打开管盖，直至混合液1浓缩至体积小于10 μL，用无酶水补齐至10μL，轻轻吸打混匀，短暂离心后置于冰上待用。浓缩时间不宜过长，防止蒸干。

（6）将浓缩后的混合液2置于PCR仪中95°C孵育5min，65°C孵育2min（热盖温度为105°C），孵育完成后不需要取出。

（7）将添加了杂交缓冲液的混合液1置于PCR仪中65°C孵育2min（热盖温度为105°C）。

（8）吸取20μL的混合液1添加到混合液2中，充分混匀，65°C杂交16~24 h，保持杂交产物在PCR仪中，进入捕获步骤。

3、捕获

（1）提前取出试剂盒中的磁珠室温平衡30min，振荡混匀。

（2）取出50μL磁珠置于新的反应管中，离心管置于磁力架上静置1min至液体澄清，小心吸弃液体（注意不要吸到磁珠）。

（3）在磁珠中添加200µL捕获缓冲液，吹打混匀后，将离心管置于磁力架上静置1min至液体澄清，小心吸弃液体（注意不要吸到磁珠）。

（4）重复步骤（3）三次。

（5）在磁珠中重新添加200µL捕获缓冲液重悬磁珠，将重悬后的磁珠加入到杂交产物中，并将PCR管置于旋转混旋仪上室温结合30min。

（6）取出试剂盒中的清洗缓冲液1和清洗缓冲液2，清洗缓冲液1室温静置待用，清洗缓冲液2置65℃预热5min以上待用。

（7）将捕获产物置于磁力架上静置1分钟静置1min至液体澄清，小心吸弃液体（注意不要吸到磁珠）。

（8）从磁力架上取下离心管，加入200 μL的清洗缓冲液1，吹打混匀后，旋转混匀仪上15min，放在磁力架上静置1min至液体澄清，小心吸弃液体（注意不要吸到磁珠）。

（9）从磁力架上取下离心管，加入200 μL 65℃预热的清洗缓冲液2，吹打混匀后，置于恒温震荡仪（65℃，800rpm）上10分钟，置于磁力架上静置1min至液体澄清，小心吸弃液体（注意不要吸到磁珠）。

（10）重复步骤（9）三次。

（11）从磁力架上取下离心管，加入200 μL新鲜配制的80%乙醇，置于磁力架上静置30sec至液体澄清，小心吸弃液体（注意不要吸到磁珠）

（12）反应管留于上磁力架室温晾干3~5min使残留乙醇挥发，以磁珠表面无光泽为准（过分晾干将导致DNA得率下降）。

（13）从磁力架上取下离心管，加入30μL无酶水，重悬磁珠待用。

（14）配制混合液3，用0.2mL PCR管，具体反应体系如下：18μLPCR扩增缓冲液，1μLPCR扩增引物，1μLPCR扩增反应液。

（15）将20μL上述反应体系加入到洗涤产物中，充分混匀。

（16）置于PCR仪中按表5反应程序进行PCR扩增。

（17）扩增后纯化，使用商品化的核酸纯化磁珠进行扩增产物纯化，具体操作步骤请按照试剂盒说明书指引进行。吸取全部纯化产物置于冰上，重复2-3步骤，进入测序阶段或于-20±5℃保存。

4、捕获文库质控

（1）使用核酸定量试剂盒QubitdsDNA HS Assay Kit 及配套仪器测定文库的浓度，文库浓度应大于1ng/μL。否则文捕获文库不符合要求，应重新进行杂交捕获。

（2）取样本文库或对照品文库，使用Standard Cartridge Kit(S2)及配套仪器测定文库片段大小，文库片段大小应集中在250bp～500bp之间，无明显小片段和大片段杂峰。否则建库样品不符合要求，应重新进行杂交捕获。

5、文库qPCR定量

使用KAPA Library Quantification Kit试剂盒对待上机富集文库进行定量，以调整至合适上机浓度。

（1）试剂准备：1）准备适量的DNA稀释缓冲液：使用无酶水将1XIDTE缓冲液稀释至0.1X，每个文库约需1.2mL稀释缓冲液。使用前将缓冲液放至室温。2）冰上解冻试剂盒中各组分，使用前充分混匀，短暂离心，置于冰上备用。

（2）样本准备：1）准备适当的文库稀释液（使用无酶水）。取1μL富集文库进行1：100、1：10000、1：20000稀释。

（3）向PCR反应板需要进行反应的孔中各加入混有引物的8μL混合液，混合液具体组成为：5μLMaster Mix，1μL引物，1.8μL水，0.2μLLow Rox。

（4）向每个样本孔中加入对应的2μL已稀释的DNA文库（体积比为1:1000和1:20000）。

（5）向标准品孔中各加入2μL DNA标准品，按照从低浓度到高浓度顺序加入。

（6）向阴性对照孔中加入2μL稀释缓冲液。

（7）密封PCR 反应板，放入微孔板离心机中离心1min。

（8）将反应板装载到qPCR仪上并按照下表6参数运行qPCR仪。

（9）按照KAPA Library Quantification Kit试剂盒说明书进行待检文库的浓度计算。若最终文库总摩尔质量<0.02p 摩尔，需要重新进行文库杂交富集或重新进行建库，若再次不合格，终止检测。

6、上机测序

在基因测序仪Nextseq CN500上选用测序读长为300循环（Paired-End Reads，2×150cycles）的测序试剂进行测序，建议每个样品文库测序数据量800M。待测序样本文库数量不高于48个，推荐使用NextSeq 500 Mid Output v2 Reagent kit (300 cycles) 试剂检测；待测序样本文库数量高于48个且不高于96个，推荐使NextSeq 500 High Output v2Reagent kit (300 cycles) 试剂检测。

（1）提前取出Reagent Cartridge、HT1和Flow Cell，Flow Cell置于室温平衡30min，Reagent Cartridge置于室温水浴1h，HT1室温静置解冻后振荡混匀。

（2）将所有待测序样本文库按测序数据量需求进行混合，使用核酸定量试剂盒QubitdsDNA HS Assay Kit及配套仪器稀释各文库浓度至4 nM，取一个新的离心管等体积取各文库混合，混合后的总体积不低于5μL。

（3）配制新鲜的0.2N NaOH，由1μL 1N NaOH加入到4μL纯化水中混匀得到。

（4）取5μL 4 nM混合文库至新的1.5 mL离心管中，加入5μL新鲜配制的0.2N NaOH，吹打混匀室温静置5min进行4 nM混合文库变性，变性后加入混匀后的990μLHT1将混合文库稀释至20 pM。

（5）取一个新的1.5 mL离心管加入混匀后的1365μL HT1。

（6）取135μL稀释至20 pM的混合文库加入至1365μL HT1中，使最终上机混合文库总体积为1500μL。

（7）取出室温水浴解冻的Reagent Cartridge，用无尘纸檫干，翻转5次混匀其中试剂。

（8）使用干净的1 mL移液器吸头戳破Reagent Cartridge上带有Load Samples标签的10号孔封箔口，将1300μL混合有PhiX对照品的最终上机混合文库注入10号孔。

（9）根据测序仪运行设置提示进行试剂加载操作，测序仪自检完成后，点击“开始”按钮进行测序，测序时长26-29h。

7、HPV核酸分型与整合生物信息分析流程

（1）测序完成后，使用illumina公司的bcl2fastq v2.20.0.422软件将测序生成的BCL文件转化成样本对应的fastq文件。

（2）使用illuminate v0.6软件读取测序文件中InterOp目录的记录信息，对本次测序进行质量分析与评估。Fastp v0.20.0进行质控，要求Q30质量值大于80%。

（3）质量评估完成后，预处理数据，根据fastq文件碱基及质量，对原始数据进行质量控制（基于fastp v0.20.0软件）。

（4）序列比对：将fastq文件中的碱基序列比对至人类参考基因组hg38（GRCh38）和HPV基因组上生成bam文件（基于BWA v0.7.17、samtoolsv1.9和picard v2.20.6软件：比对）。

（5）HPV型別分析：使用分型检测模块（基于hpvHPVkitTyper v1.0软件），通过序列比对文件分析样本中各种HPV的reads数和比例。

（6）HPV整合分析：使用整合检测模块（基于hpvkitHPVFusionCallerv1软件），通过序列比对文件中比对上HPV和人基因组的序列进行位点比较，分析样本中HPV整合位点，并结合数据库进行注释。

（7）结果判定：分型分析，单个HPV型別Mean depth≥10则判定为该型别分型阳性；整合分析，单位数据量中HPV整合read数≥3则判定为该型别整合阳性。

实施例3：本发明试剂盒的使用效果验证

下面通过具体实施方式对本发明做进一步的详细说明。

1、20例参考品样本和16例临床样本HPV分型整合的高通量测序检测

样本编号为S1~S36,其中S1~S18为10^4拷贝 /mL的分型质粒参考品，分别为HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，S19和S20分别是浓度为0.25ng/μL的SiHa细胞（已知的HPV16整合样本）和HeLa细胞DNA（已知的HPV18整合样本），S21~S36为临床样本。检测结果：我们利用本发明的方法及试剂盒检测到了参考品样本对应的HPV型别及整合状态，说明本发明可对实际样本进行准确快速的检测，有实际可使用价值。本发明提供的用于HPV分型及整合检测的探针组及试剂盒具有操作简便、高通量、特异性好、灵敏度高等特点。结果如下：表7为36例样本高通量测序质控结果，表8为36例样本高通量测序分型结果，表9为18例样本高通量测序整合结果。

SEQUENCE LISTING

<110> 武汉凯德维斯生物技术有限公司

<120> 一种用于检测人乳头瘤病毒HPV39的探针及其试剂盒

<130> 0

<160> 14

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 28053

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 探针型别HPV39

<400> 1

cttataacat tttataagta tcttgtttaa aaaaagggag taaccgaaaa cggtcaggac 60

cgaaatcggt ggatataaaa cgcagtcaca gtttctgtcc gggagtaacc gaaaacggtc 120

aggaccgaaa tcggtggata taaaacgcag tcacagtttc tgtccatacc gatggcgcga 180

tttcacaatc ctgcagaacg cggtggatat aaaacgcagt cacagtttct gtccataccg 240

atggcgcgat ttcacaatcc tgcagaacgg ccatacaaat tgccagacct gtgcacaacg 300

ataccgatgg cgcgatttca caatcctgca gaacggccat acaaattgcc agacctgtgc 360

acaacgctgg acaccacctt gcaggacatt acaatagcct aacggccata caaattgcca 420

gacctgtgca caacgctgga caccaccttg caggacatta caatagcctg tgtctattgc 480

agacgaccac tacagcaaac cgctggacac caccttgcag gacattacaa tagcctgtgt 540

ctattgcaga cgaccactac agcaaaccga ggtatatgaa tttgcattta gtgatttata 600

cctgtgtcta ttgcagacga ccactacagc aaaccgaggt atatgaattt gcatttagtg 660

atttatatgt agtatatagg gacggggaac cactagctgc ccgaggtata tgaatttgca 720

tttagtgatt tatatgtagt atatagggac ggggaaccac tagctgccgt acaatcatgt 780

ataaaatttt cgtataaaat ggtatatgaa tttgcattta gtgatttata tgtagtatat 840

agggacgggg aaccactagc tgccgtacaa tcatgtataa aattttcgta taaaatacgg 900

gtagtatata gggacgggga accactagct gccgtacaat catgtataaa attttcgtat 960

aaaatacggg agctacgata ttactcggac tcggtgtatg cgtacaatca tgtataaaat 1020

tttcgtataa aatacgggag ctacgatatt actcggactc ggtgtcgtaa actacattag 1080

aaaatataac taatacaaag gccaatcatg tataaaattt tcgtataaaa tacgggagct 1140

acgatattac tcggactcgg tgtcgtaaac tacattagaa aatataacta atacaaagtt 1200

cgggagctac gatattactc ggactcggtg tcgtaaacta cattagaaaa tataactaat 1260

acaaagttat ataatttatt aataaggtgc atgtgttgtc cgggagctac gatattactc 1320

ggactcggtg tcgtaaacta cattagaaaa tataactaat acaaagttat ataatttatt 1380

aataaggtgc atgtgttgtc gcaactacat tagaaaatat aactaataca aagttatata 1440

atttattaat aaggtgcatg tgttgtctga aaccgctgtg tccagcagaa aaattaagac 1500

gcaactacat tagaaaatat aactaataca aagttatata atttattaat aaggtgcatg 1560

tgttgtctga aaccgctgtg tccagcagaa aaattaagac gttatataat ttattaataa 1620

ggtgcatgtg ttgtctgaaa ccgctgtgtc cagcagaaaa attaagacac ctaaatagca 1680

aacgaagatt tcataaaata tatataattt attaataagg tgcatgtgtt gtctgaaacc 1740

gctgtgtcca gcagaaaaat taagacacct aaatagcaaa cgaagatttc ataaaatagc 1800

tctgaaaccg ctgtgtccag cagaaaaatt aagacaccta aatagcaaac gaagatttca 1860

taaaatagca ggaagctata caggacagtg tcgacggtgc gaaaccgctg tgtccagcag 1920

aaaaattaag acacctaaat agcaaacgaa gatttcataa aatagcagga agctatacag 1980

gacagtgtcg gacacctaaa tagcaaacga agatttcata aaatagcagg aagctataca 2040

ggacagtgtc gacggtgctg gaccacaaaa cgggaggacc gcagactaac agcaggaagc 2100

tatacaggac agtgtcgacg gtgctggacc acaaaacggg aggaccgcag actaacacga 2160

agagaaaccc aagtataaca tcagatcgta gctggaccac aaaacgggag gaccgcagac 2220

taacacgaag agaaacccaa gtataacatc agatcgtagt ggaccaaagc ccaccttgca 2280

ggaaattgta acgaagagaa acccaagtat aacatcagat cgtagtggac caaagcccac 2340

cttgcaggaa attgtattag atttatgtcc ttacaatgaa atacagccgg gcgtggacca 2400

aagcccacct tgcaggaaat tgtattagat ttatgtcctt acaatgaaat acagccggtt 2460

gaccttgtat gtcacgagca attaggagag ggaccaaagc ccaccttgca ggaaattgta 2520

ttagatttat gtccttacaa tgaaatacag ccggttgacc ttgtatgtca cgagcaatta 2580

ggagagtcag tatgtcctta caatgaaata cagccggttg accttgtatg tcacgagcaa 2640

ttaggagagt cagaggatga aatagatgaa cccgacccgt aagttagttg accttgtatg 2700

tcacgagcaa ttaggagagt cagaggatga aatagatgaa cccgacccgt aagttaatca 2760

ccaacatcaa ctactagcca gacggggacc ttgtatgtca cgagcaatta ggagagtcag 2820

aggatgaaat agatgaaccc gacccgtaag ttaatcacca acatcaacta ctagccagac 2880

gggcagagga tgaaatagat gaacccgacc cgtaagttaa tcaccaacat caactactag 2940

ccagacggga tgaaccacag cgtcacacaa tacagtgttc gtggttaatc accaacatca 3000

actactagcc agacgggatg aaccacagcg tcacacaata cagtgttcgt gttgtaagtg 3060

taacaacaca ctgcagctgg tagcaccaac atcaactact agccagacgg gatgaaccac 3120

agcgtcacac aatacagtgt tcgtgttgta agtgtaacaa cacactgcag ctggtagtag 3180

gatgaaccac agcgtcacac aatacagtgt tcgtgttgta agtgtaacaa cacactgcag 3240

ctggtagtag aagcctcacg ggatactctg cgacaactac gtgttgtaag tgtaacaaca 3300

cactgcagct ggtagtagaa gcctcacggg atactctgcg acaactacag cagctgttta 3360

tggactcact aggatttgtg gtagaagcct cacgggatac tctgcgacaa ctacagcagc 3420

tgtttatgga ctcactagga tttgtgtgtc cgtggtgtgc aactgcaaac cagtaacctg 3480

acagcagctg tttatggact cactaggatt tgtgtgtccg tggtgtgcaa ctgcaaacca 3540

gtaacctgct atggccaatc gtgaaggtac agacggggat tgtccgtggt gtgcaactgc 3600

aaaccagtaa cctgctatgg ccaatcgtga aggtacagac ggggatgggt cgggatgtaa 3660

cggatggttt ctagtacagg accagtaacc tgctatggcc aatcgtgaag gtacagacgg 3720

ggatgggtcg ggatgtaacg gatggtttct agtacaggca atagtagata aacaaacagg 3780

gctatggcca atcgtgaagg tacagacggg gatgggtcgg gatgtaacgg atggtttcta 3840

gtacaggcaa tagtagataa acaaacaggc gacacagtgt gggtcgggat gtaacggatg 3900

gtttctagta caggcaatag tagataaaca aacaggcgac acagtgtcgg aggatgagga 3960

tgaaacgtaa acagatacag ggcaatagta gataaacaaa caggcgacac agtgtcggag 4020

gatgaggatg aaacgtaaac agatacaggt tcagacctgg cagactttat tgatgattcc 4080

caatagtaga taaacaaaca ggcgacacag tgtcggagga tgaggatgaa acgtaaacag 4140

atacaggttc agacctggca gactttattg atgattccac cggaggatga ggatgaaacg 4200

taaacagata caggttcaga cctggcagac tttattgatg attccacaga tatttgtgta 4260

caggcagagc gtgagacagc cggaggatga ggatgaaacg taaacagata caggttcaga 4320

cctggcagac tttattgatg attccacaga tatttgtgta caggcagagc gtgagacagc 4380

ggttcagacc tggcagactt tattgatgat tccacagata tttgtgtaca ggcagagcgt 4440

gagacagcac aggtactttt acatcgtaaa gaggcccaaa gttcagacct ggcagacttt 4500

attgatgatt ccacagatat ttgtgtacag gcagagcgtg agacagcaca ggtactttta 4560

catcgtaaag aggcccaaag ccacagatat ttgtgtacag gcagagcgtg agacagcaca 4620

ggtactttta catcgtaaag aggcccaaag ggcgtaacaa gcagtgcgtg ccttaaaacg 4680

cagatatttg tgtacaggca gagcgtgaga cagcacaggt acttttacat cgtaaagagg 4740

cccaaagggc gtaacaagca gtgcgtgcct taaaacgaaa gcacaggtac ttttacatcg 4800

taaagaggcc caaagggcgt aacaagcagt gcgtgcctta aaacgaaagt atacagacag 4860

cagtggcgac actagaccgt gggcgtaaca agcagtgcgt gccttaaaac gaaagtatac 4920

agacagcagt ggcgacacta gaccgtatgg aaaaaaagta ggcaggaata ccaggggaac 4980

gtatacagac agcagtggcg acactagacc gtatggaaaa aaagtaggca ggaataccag 5040

gggaacacta caggaaattt cattaaatgt aagcagtacg tatggaaaaa aagtaggcag 5100

gaataccagg ggaacactac aggaaatttc attaaatgta agcagtacgc aggcaacaca 5160

aacggtgtat tccgtgccag cactacagga aatttcatta aatgtaagca gtacgcaggc 5220

aacacaaacg gtgtattccg tgccagacag cggatatggc aatatggaag tggaaacagc 5280

cgcaggcaac acaaacggtg tattccgtgc cagacagcgg atatggcaat atggaagtgg 5340

aaacagctga agtggaggag gtaactgtag caactaatac gacagcggat atggcaatat 5400

ggaagtggaa acagctgaag tggaggaggt aactgtagca actaatacaa atggggcgta 5460

tgaaggggaa catggcggca agctgaagtg gaggaggtaa ctgtagcaac taatacaaat 5520

ggggcgtatg aaggggaaca tggcggcagt gtacgggagg agtgcagtag tgtggatagt 5580

acaaatgggg cgtatgaagg ggaacatggc ggcagtgtac gggaggagtg cagtagtgtg 5640

gatagtgcta tagatagtga aaaccaggat cccaaatctc cagtgtacgg gaggagtgca 5700

gtagtgtgga tagtgctata gatagtgaaa accaggatcc caaatctcca actgcacaaa 5760

ttaaattatt gttacaatcc gtgtggatag tgctatagat agtgaaaacc aggatcccaa 5820

atctccaact gcacaaatta aattattgtt acaatccaat aacaaaaagg ctgcacgtat 5880

gctatagata gtgaaaacca ggatcccaaa tctccaactg cacaaattaa attattgtta 5940

caatccaata acaaaaaggc tgcacgtata acacaattta ccaactgcac aaattaaatt 6000

attgttacaa tccaataaca aaaaggctgc acgtataaca caatttaaag aaacatatgg 6060

actatccttt actgacctgg ccaataacaa aaaggctgca cgtataacac aatttaaaga 6120

aacatatgga ctatccttta ctgacctggt acgtacgttt aaaagtgata aaacaacatg 6180

taacacaatt taaagaaaca tatggactat cctttactga cctggtacgt acgtttaaaa 6240

gtgataaaac aacatgtaca gactgggtgg cagccatatt aagaaacata tggactatcc 6300

tttactgacc tggtacgtac gtttaaaagt gataaaacaa catgtacaga ctgggtggca 6360

gccatatttg gagtacatcc ttactgacct ggtacgtacg tttaaaagtg ataaaacaac 6420

atgtacagac tgggtggcag ccatatttgg agtacatcca actattgcag aaggatttaa 6480

ggtacgtacg tttaaaagtg ataaaacaac atgtacagac tgggtggcag ccatatttgg 6540

agtacatcca actattgcag aaggatttaa aacattaatc acagactggg tggcagccat 6600

atttggagta catccaacta ttgcagaagg atttaaaaca ttaatcaaca aatcgtactt 6660

atatacacat atacaaagct ccaactattg cagaaggatt taaaacatta atcaacaaat 6720

cgtacttata tacacatata caaagcttag acacaaaaca aggagtacta attttacgta 6780

acaaatcgta cttatataca catatacaaa gcttagacac aaaacaagga gtactaattt 6840

tacgtataat aagatataca tgtggaaaaa atagggttac ttagacacaa aacaaggagt 6900

actaatttta cgtataataa gatatacatg tggaaaaaat agggttactg taggaaaggg 6960

attaagtaca ttgttacatg gctaataaga tatacatgtg gaaaaaatag ggttactgta 7020

ggaaagggat taagtacatt gttacatgtt ccagaaagtt gtcgtattct ggagcctcct 7080

actgtaggaa agggattaag tacattgtta catgttccag aaagttgtcg tattctggag 7140

cctcctaaac tgcgcagccc tgtagcagca ctatattggt gttccagaaa gttgtcgtat 7200

tctggagcct cctaaactgc gcagccctgt agcagcacta tattggtatc gcacaggtat 7260

atccaatatt agtgtggtaa aactgcgcag ccctgtagca gcactatatt ggtatcgcac 7320

aggtatatcc aatattagtg tggtaacagg ggatacgcca gaatggatac aacgattaac 7380

acaggggata cgccagaatg gatacaacga ttaactgtta tacaacatgg aatagatgat 7440

agtgtatttg acctatcgga catggtacaa tgggcatttg actgttatac aacatggaat 7500

agatgatagt gtatttgacc tatcggacat ggtacaatgg gcatttgaca atgaatatac 7560

tgatgaaagt gacatagcat tttgacctat cggacatggt acaatgggca tttgacaatg 7620

aatatactga tgaaagtgac atagcattta attcgtaaat gttagcagat tgtaacagta 7680

atgggcattt gacaatgaat atactgatga aagtgacata gcatttaatt cgtaaatgtt 7740

agcagattgt aacagtacgt atgcagcctt tttaaaaagg acaatgaata tactgatgaa 7800

agtgacatag catttaattc gtaaatgtta gcagattgta acagtacgta tgcagccttt 7860

ttaaaaagta actgccaggg tgacatagca tttaattcgt aaatgttagc agattgtaac 7920

agtacgtatg cagccttttt aaaaagtaac tgccaggcaa aatatgtaaa agattgtgct 7980

ttaattcgta aatgttagca gattgtaaca gtacgtatgc agccttttta aaaagtaact 8040

gccaggcaaa atatgtaaaa gattgtgcaa caatgtgtaa acagtacgta tgcagccttt 8100

ttaaaaagta actgccaggc aaaatatgta aaagattgtg caacaatgtg taaacattac 8160

aagcgagcac aaatgctgca gcctttttaa aaagtaactg ccaggcaaaa tatgtaaaag 8220

attgtgcaac aatgtgtaaa cattacaagc gagcacaaaa aaggcaaatg tccaaacatt 8280

acaagcgagc acaaaaaagg caaatgtcca tgtctcaatg gataaaattt aggtgtagta 8340

aatgtgatga aggcggggac tggagaccca taggtccatg tctcaatgga taaaatttag 8400

gtgtagtaaa tgtgatgaag gcggggactg gagacccata gtacaattct taagatatca 8460

aggaatagaa tttaaatgtg atgaaggcgg ggactggaga cccatagtac aattcttaag 8520

atatcaagga atagaattta tatccttttt atgtgcatta aaggaatttt taagtacaat 8580

tcttaagata tcaaggaata gaatttatat cctttttatg tgcattaaag gaatttttaa 8640

agggtactcc caaaaaaaac tgtatagtta tattatcctt tttatgtgca ttaaaggaat 8700

ttttaaaggg tactcccaaa aaaaactgta tagttatata tggacctgcg aatacaggaa 8760

agtcacattt ttgaagggta ctcccaaaaa aaactgtata gttatatatg gacctgcgaa 8820

tacaggaaag tcacattttt gtatgagcct tcgtaatttt ttacagggca cagggacctg 8880

cgaatacagg aaagtcacat ttttgtatga gccttcgtaa ttttttacag ggcacagtta 8940

tttcatatgt aaactccacc agccactttt ggcgttattt catatgtaaa ctccaccagc 9000

cacttttggc tagaaccact tgcagcgtaa aaactagcaa tgttagatgc gtaaaccggt 9060

acctgctggt catggctaga accacttgca gcgtaaaaac tagcaatgtt agatgcgtaa 9120

accggtacct gctggtcata tttcgataat tatatgagaa cgtaattaga tggtgttaga 9180

tgcgtaaacc ggtacctgct ggtcatattt cgataattat atgagaacgt aattagatgg 9240

gtcgtaaata agtttagata ggaaatataa aagtatttcg ataattatat gagaacgtaa 9300

ttagatgggt cgtaaataag tttagatagg aaatataaaa gtttactaca aatgaaatgt 9360

ccaccattat taacgtaatt agatgggtcg taaataagtt tagataggaa atataaaagt 9420

ttactacaaa tgaaatgtcc accattatta ataacctcca atacgggtcg taaataagtt 9480

tagataggaa atataaaagt ttactacaaa tgaaatgtcc accattatta ataacctcca 9540

ataccaatcc tgtggaagac gataagttta ctacaaatga aatgtccacc attattaata 9600

acctccaata ccaatcctgt ggaagacgat aggtggccat atttacgtag taggctaaca 9660

gtgttaataa cctccaatac caatcctgtg gaagacgata ggtggccata tttacgtagt 9720

aggctaacag tgtttaaatt tcctacgtaa tttccataac ctccaatacc aatcctgtgg 9780

aagacgatag gtggccatat ttacgtagta ggctaacagt gtttaaattt cctacgtaat 9840

ttccatttga ccaaagaaga cgataggtgg ccatatttac gtagtaggct aacagtgttt 9900

aaatttccta cgtaatttcc atttgaccaa aacaggaatc cagtgtacac aatcaggtgg 9960

ccatatttac gtagtaggct aacagtgttt aaatttccta cgtaatttcc atttgaccaa 10020

aacaggaatc cagtgtacac aatcaatgat aaaaggctaa cagtgtttaa atttcctacg 10080

taatttccat ttgaccaaaa caggaatcca gtgtacacaa tcaatgataa aaactggaaa 10140

tgtttttttg aaaaccattt gaccaaaaca ggaatccagt gtacacaatc aatgataaaa 10200

actggaaatg tttttttgaa aagacttggt gcagattaga cttgcagcag gacgtcaatg 10260

ataaaaactg gaaatgtttt tttgaaaaga cttggtgcag attagacttg cagcaggacg 10320

aggatgaagg agacaatgat gaaaacactt tcacagactt ggtgcagatt agacttgcag 10380

caggacgagg atgaaggaga caatgatgaa aacactttca caacgtttaa atgtgttaca 10440

ggacaaaata ctaggcagat tagacttgca gcaggacgag gatgaaggag acaatgatga 10500

aaacactttc acaacgttta aatgtgttac aggacaaaat actagaatac tatgaggatg 10560

aaggagacaa tgatgaaaac actttcacaa cgtttaaatg tgttacagga caaaatacta 10620

gaatactatg aacaagacag taaatgacaa tgatgaaaac actttcacaa cgtttaaatg 10680

tgttacagga caaaatacta gaatactatg aacaagacag taaatcaata tatgatcaaa 10740

ttaattgtgt tacaggacaa aatactagaa tactatgaac aagacagtaa atcaatatat 10800

gatcaaatta attattggaa atgtgtgcga atggaaacgt aaatatatga acaagacagt 10860

aaatcaatat atgatcaaat taattattgg aaatgtgtgc gaatggaaac gtaaatattt 10920

tcgtaagcac gagaacgtga caagacagta aatcaatata tgatcaaatt aattattgga 10980

aatgtgtgcg aatggaaacg taaatatttt cgtaagcacg agaacgtggc cgtaatacta 11040

ttaattattg gaaatgtgtg cgaatggaaa cgtaaatatt ttcgtaagca cgagaacgtg 11100

gccgtaatac tattgaccac caggtggtgc cttattggaa atgtgtgcga atggaaacgt 11160

aaatattttc gtaagcacga gaacgtggcc gtaatactat tgaccaccag gtggtgccaa 11220

ccataaacat tgaaacgtaa atattttcgt aagcacgaga acgtggccgt aatactattg 11280

accaccaggt ggtgccaacc ataaacattt caaaatgtaa agcatatcaa gttttcgtaa 11340

gcacgagaac gtggccgtaa tactattgac caccaggtgg tgccaaccat aaacatttca 11400

aaatgtaaag catatcaagc tattgaactg cggccgtaat actattgacc accaggtggt 11460

gccaaccata aacatttcaa aatgtaaagc atatcaagct attgaactgc agatggcact 11520

agactattga ccaccaggtg gtgccaacca taaacatttc aaaatgtaaa gcatatcaag 11580

ctattgaact gcagatggca ctagaaagtg ttgcacaaac tgacaggtgg tgccaaccat 11640

aaacatttca aaatgtaaag catatcaagc tattgaactg cagatggcac tagaaagtgt 11700

tgcacaaact gaatacaata aacatttcaa aatgtaaagc atatcaagct attgaactgc 11760

agatggcact agaaagtgtt gcacaaactg aatacaatac agaggagtgg acttcaaaat 11820

gtaaagcata tcaagctatt gaactgcaga tggcactaga aagtgttgca caaactgaat 11880

acaatacaga ggagtggaca ttaaaagaca ctgctattga actgcagatg gcactagaaa 11940

gtgttgcaca aactgaatac aatacagagg agtggacatt aaaagacact agtaatgaac 12000

tgtggcatac agcagatggc actagaaagt gttgcacaaa ctgaatacaa tacagaggag 12060

tggacattaa aagacactag taatgaactg tggcatacac agccaaaaca aatacaatac 12120

agaggagtgg acattaaaag acactagtaa tgaactgtgg catacacagc caaaacaatg 12180

ttttaaaaaa caaggaacta cagtggaggt gtagtaatga actgtggcat acacagccaa 12240

aacaatgttt taaaaaacaa ggaactacag tggaggtgtg gtatgatggg gacaaatgta 12300

cgtatatgaa catgttttaa aaaacaagga actacagtgg aggtgtggta tgatggggac 12360

aaatgtacgt atatgaacta tgtattatgg ggtgctatat attataaaaa tgtggtatga 12420

tggggacaaa tgtacgtata tgaactatgt attatggggt gctatatatt ataaaaataa 12480

tatagacata tggtgtaaaa cagaagggtg tctatgtatt atggggtgct atatattata 12540

aaaataatat agacatatgg tgtaaaacag aagggtgtgt ggactattgg ggtatatatt 12600

atatgaacga gaatatagac atatggtgta aaacagaagg gtgtgtggac tattggggta 12660

tatattatat gaacgagcac ctaaaagtat actatgaagt gtttattcaa ggtggactat 12720

tggggtatat attatatgaa cgagcaccta aaagtatact atgaagtgtt tattcaagcg 12780

taggaaaggt atgggactag tggcaaatgg ggcacctaaa agtatactat gaagtgttta 12840

ttcaagcgta ggaaaggtat gggactagtg gcaaatggga agtgcattat aatggcaaca 12900

taattcattg tgcgtaggaa aggtatggga ctagtggcaa atgggaagtg cattataatg 12960

gcaacataat tcattgtcct gactctatgt gcagtaccag tgacggatcg ggggaagtgc 13020

attataatgg caacataatt cattgtcctg actctatgtg cagtaccagt gacggatcgg 13080

tacccactac tgaacttact accgaattat caattcattg tcctgactct atgtgcagta 13140

ccagtgacgg atcggtaccc actactgaac ttactaccga attatcaaac accaccgcga 13200

cccattccac ctcctgactc tatgtgcagt accagtgacg gatcggtacc cactactgaa 13260

cttactaccg aattatcaaa caccaccgcg acccattcca ccgcaacaac cggtacccac 13320

tactgaactt actaccgaat tatcaaacac caccgcgacc cattccaccg caacaacccc 13380

cgtaacccaa aaaacaatcc cgccgccgtc taaacaccac cgcgacccat tccaccgcaa 13440

caacccccgt aacccaaaaa acaatcccgc cgccgtctcg aaagcgacct cgacagtgtg 13500

cagtcacaga gccccgtaac ccaaaaaaca atcccgccgc cgtctcgaaa gcgacctcga 13560

cagtgtgcag tcacagagcc cactgagccc gacggagtgt ccctggacca ttcgaaagcg 13620

acctcgacag tgtgcagtca cagagcccac tgagcccgac ggagtgtccc tggaccatct 13680

taacaaccca ctccacagta acagtacagg cagcccactg agcccgacgg agtgtccctg 13740

gaccatctta acaacccact ccacagtaac agtacaggcc acaacacaag acggtacctc 13800

agttgtggta atcttaacaa cccactccac agtaacagta caggccacaa cacaagacgg 13860

tacctcagtt gtggtaacac tacgcctata atacatttaa aaggtgacaa aggccacaac 13920

acaagacggt acctcagttg tggtaacact acgcctataa tacatttaaa aggtgacaaa 13980

aatggtttaa aatgtttaag atatagacta ccactacgcc tataatacat ttaaaaggtg 14040

acaaaaatgg tttaaaatgt ttaagatata gactacaaaa atatgacaca ttgtttgaaa 14100

atatttcatg taaatggttt aaaatgttta agatatagac tacaaaaata tgacacattg 14160

tttgaaaata tttcatgtac ctggcattgg atacggggta agggaaccaa aaaatatgac 14220

acattgtttg aaaatatttc atgtacctgg cattggatac ggggtaaggg aaccaaaaac 14280

gctggcatat taactgttac atcgtacaca ggtacctggc attggatacg gggtaaggga 14340

accaaaaacg ctggcatatt aactgttaca tcgtacacag agtcacaacg ccaaaaattt 14400

ttggacactg taaacgctgg catattaact gttacatcgt acacagagtc acaacgccaa 14460

aaatttttgg acactgttaa aataccttct agtgtacatg tttcattggg tagagtcaca 14520

acgccaaaaa tttttggaca ctgttaaaat accttctagt gtacatgttt cattgggtta 14580

catgacattg taaagtatac tatggatatt gtaaaatacc ttctagtgta catgtttcat 14640

tgggttacat gacattgtaa agtatactat ggatattgtg tatgtatatt gtatacatac 14700

tacatagatg agttacatga cattgtaaag tatactatgg atattgtgta tgtatattgt 14760

atacatacta catagatgat attattggta tttttggtgt ggtttggtgt ggtgtatgta 14820

tattgtatac atactacata gatgatatta ttggtatttt tggtgtggtt tggtgtgtgt 14880

atatatatat gttgcaatgt cccgcttttg cgatattatt ggtatttttg gtgtggtttg 14940

gtgtgtgtat atatatatgt tgcaatgtcc cgcttttgcc gtctgtgcat gtgtgtgcgt 15000

atgtgtggat agtatatata tatgttgcaa tgtcccgctt ttgccgtctg tgcatgtgtg 15060

tgcgtatgtg tggataattg tgtttgtgtt tattcttata cgtaccacac cgccgtctgt 15120

gcatgtgtgt gcgtatgtgt ggataattgt gtttgtgttt attcttatac gtaccacacc 15180

attggaggtg ttttttgtat atttactatt tttgtgtttg tgtttattct tatacgtacc 15240

acaccattgg aggtgttttt tgtatattta ctattttttg tattgcccat gtggttgttg 15300

catagactgg cccattggag gtgttttttg tatatttact attttttgta ttgcccatgt 15360

ggttgttgca tagactggca atggatatga tatagtactg tatatgtatg ttttgtattg 15420

cccatgtggt tgttgcatag actggcaatg gatatgatat agtactgtat atgtatgtgc 15480

attgtgcata actactgtac atagcttttt agcaatggat atgatatagt actgtatatg 15540

tatgtgcatt gtgcataact actgtacata gctttttata tttttttttg ttactaataa 15600

acatggtttc cgtgcattgt gcataactac tgtacatagc tttttatatt tttttttgtt 15660

actaataaac atggtttccc accgtgctgc caggcgtaag cgtgcatctg catatttttt 15720

tttgttacta ataaacatgg tttcccaccg tgctgccagg cgtaagcgtg catctgcaac 15780

tgacctatat agaacctgta aacaatcggg tccaccgtgc tgccaggcgt aagcgtgcat 15840

ctgcaactga cctatataga acctgtaaac aatcgggtac ctgtccacca gacgttgttg 15900

ataaagttga gggcgtaagc gtgcatctgc aactgaccta tatagaacct gtaaacaatc 15960

gggtacctgt ccaccagacg ttgttgataa agttgagggt actacacttg caactgacct 16020

atatagaacc tgtaaacaat cgggtacctg tccaccagac gttgttgata aagttgaggg 16080

tactacactt gctgacaaaa ttttacagtg gtacctgtcc accagacgtt gttgataaag 16140

ttgagggtac tacacttgct gacaaaattt tacagtggac tagtttaggt atatttttgg 16200

gtgggttagg cgggtactac acttgctgac aaaattttac agtggactag tttaggtata 16260

tttttgggtg ggttaggcat aggcacaggt actggtactg ggggacgcac agactagttt 16320

aggtatattt ttgggtgggt taggcatagg cacaggtact ggtactgggg gacgcacagg 16380

atatataccc ctggggggta ggcctaatac tcataggcac aggtactggt actgggggac 16440

gcacaggata tatacccctg gggggtaggc ctaatactgt tgtagatgtg tctcctgcac 16500

gtccacctgt acaggatata tacccctggg gggtaggcct aatactgttg tagatgtgtc 16560

tcctgcacgt ccacctgtag ttattgaacc tgttggtcct tctgagccat cctgttgtag 16620

atgtgtctcc tgcacgtcca cctgtagtta ttgaacctgt tggtccttct gagccatcta 16680

ttgtgcaatt ggtggaggac tcaagtgtta tagttattga acctgttggt ccttctgagc 16740

catctattgt gcaattggtg gaggactcaa gtgttataac ctctggaaca ccagtaccaa 16800

catttacagg cctattgtgc aattggtgga ggactcaagt gttataacct ctggaacacc 16860

agtaccaaca tttacaggca cctctggatt tgaaattact tcttcttcta caacctctgg 16920

aacaccagta ccaacattta caggcacctc tggatttgaa attacttctt cttctactac 16980

tacgcctgcg gtattggata ttacaccctc cggcacctct ggatttgaaa ttacttcttc 17040

ttctactact acgcctgcgg tattggatat tacaccctcc tctgggtctg tacaaataac 17100

ctctactagt tactacgcct gcggtattgg atattacacc ctcctctggg tctgtacaaa 17160

taacctctac tagttatact aaccctgcct ttacggatcc ttccttaatt gcctctgggt 17220

ctgtacaaat aacctctact agttatacta accctgcctt tacggatcct tccttaattg 17280

aggttcccca aacaggtgaa acctcgggta actaaccctg cctttacgga tccttcctta 17340

attgaggttc cccaaacagg tgaaacctcg ggtaatatat ttgtcagtac ccctacatca 17400

ggtacacatg gtgaggttcc ccaaacaggt gaaacctcgg gtaatatatt tgtcagtacc 17460

cctacatcag gtacacatgg ctatgaggaa atacctatgg aagtgtttgc ctatatttgt 17520

cagtacccct acatcaggta cacatggcta tgaggaaata cctatggaag tgtttgccac 17580

acatggcaca ggtaccgaac ctattagcag ctggctatga ggaaatacct atggaagtgt 17640

ttgccacaca tggcacaggt accgaaccta ttagcagcac acctacacct ggaatcagtc 17700

gtgtggcagg acacacatgg cacaggtacc gaacctatta gcagcacacc tacacctgga 17760

atcagtcgtg tggcaggacc acgtttatat agtagagcac atcagcaggt tggtaccgaa 17820

cctattagca gcacacctac acctggaatc agtcgtgtgg caggaccacg tttatatagt 17880

agagcacatc agcaggttcg tgttagtaat tgcacaccta cacctggaat cagtcgtgtg 17940

gcaggaccac gtttatatag tagagcacat cagcaggttc gtgttagtaa ttttgatttt 18000

gtaactcacc cagtcgtgtg gcaggaccac gtttatatag tagagcacat cagcaggttc 18060

gtgttagtaa ttttgatttt gtaactcacc cttcatcatt tgtaacggac cacgtttata 18120

tagtagagca catcagcagg ttcgtgttag taattttgat tttgtaactc acccttcatc 18180

atttgtaaca tttgataatc ctgcttgtag agcacatcag caggttcgtg ttagtaattt 18240

tgattttgta actcaccctt catcatttgt aacatttgat aatcctgctt ttgagcctgt 18300

tgatacgatt ttgtaactca cccttcatca tttgtaacat ttgataatcc tgcttttgag 18360

cctgttgata ctacattaac atatgaagct gctgacatag ctccagttca tcatttgtaa 18420

catttgataa tcctgctttt gagcctgttg atactacatt aacatatgaa gctgctgaca 18480

tagctccaga tccggatttt ctggaccatt tgataatcct gcttttgagc ctgttgatac 18540

tacattaaca tatgaagctg ctgacatagc tccagatccg gattttctgg acattgttcg 18600

tttacagagc ctgttgatac tacattaaca tatgaagctg ctgacatagc tccagatccg 18660

gattttctgg acattgttcg tttacatagg cctgccttaa cctcgcacat atgaagctgc 18720

tgacatagct ccagatccgg attttctgga cattgttcgt ttacataggc ctgccttaac 18780

ctcgcgtaaa ggaacagtaa gtgctgacat agctccagat ccggattttc tggacattgt 18840

tcgtttacat aggcctgcct taacctcgcg taaaggaaca gtaaggttta gtaggcttgg 18900

cgatccggat tttctggaca ttgttcgttt acataggcct gccttaacct cgcgtaaagg 18960

aacagtaagg tttagtaggc ttggcaaaaa ggctaccatg cattgttcgt ttacataggc 19020

ctgccttaac ctcgcgtaaa ggaacagtaa ggtttagtag gcttggcaaa aaggctacca 19080

tggttacccg gcgtggcaca gcgtaaagga acagtaaggt ttagtaggct tggcaaaaag 19140

gctaccatgg ttacccggcg tggcacacaa attggagcgc aagtacatta ttaccatgac 19200

ggcaaaaagg ctaccatggt tacccggcgt ggcacacaaa ttggagcgca agtacattat 19260

taccatgaca ttagtagtat tgctcctgct gaaagcattg caaattggag cgcaagtaca 19320

ttattaccat gacattagta gtattgctcc tgctgaaagc attgaattac agcccctagt 19380

tcacgctgag ccctctgatg cattagtagt attgctcctg ctgaaagcat tgaattacag 19440

cccctagttc acgctgagcc ctctgcgtat tcagcgtaat tatttgatat atcgtatgat 19500

attacagccc ctagttcacg ctgagccctc tgcgtattca gcgtaattat ttgatatatc 19560

gtatgatgtg gacaataaca catatttaga tactgcattt tgcttcagcg taattatttg 19620

atatatcgta tgatgtggac aataacacat atttagatac tgcatttaat aatacaaggg 19680

attcgggcac tacatataac tgtggacaat aacacatatt tagatactgc atttaataat 19740

acaagggatt cgggcactac atataacaca ggctcactac cttctgtggc ttcttcagca 19800

taataataca agggattcgg gcactacata taacacaggc tcactacctt ctgtggcttc 19860

ttcagcatct actaaatcgt acaatacaac tattcctttt cacaggctca ctaccttctg 19920

tggcttcttc agcatctact aaatcgtaca atacaactat tccttttagt acctcatgga 19980

atcgtactgt aaatactggt atctactaaa tcgtacaata caactattcc ttttagtacc 20040

tcatggaatc gtactgtaaa tactggtcct gatattgctt taccaagtac tactccacag 20100

tagtacctca tggaatcgta ctgtaaatac tggtcctgat attgctttac caagtactac 20160

tccacagttg ccattggtgc cttctggacc aatagacaca ggtcctgata ttgctttacc 20220

aagtactact ccacagttgc cattggtgcc ttctggacca atagacacaa catcgtaaat 20280

aaccattcag ggttccaatt gttgccattg gtgccttctg gaccaataga cacaacatcg 20340

taaataacca ttcagggttc caattattat ttgttgccat tattgtattt tttcctaaaa 20400

catcgtaaat aaccattcag ggttccaatt attatttgtt gccattattg tattttttcc 20460

taaaaaaacg taaacgtatt ccctattttt tttcagatgg ttatttgttg ccattattgt 20520

attttttcct aaaaaaacgt aaacgtattc cctatttttt ttcagatggc tatgtggcgg 20580

tctagtgaca gcatggtgta aaaaaacgta aacgtattcc ctattttttt tcagatggct 20640

atgtggcggt ctagtgacag catggtgtat ttgcctccac cttctgtggc aaaacgtaaa 20700

cgtattccct attttttttc agatggctat gtggcggtct agtgacagca tggtgtattt 20760

gcctccacct tctgtggcga aggttgtcaa tggctatgtg gcggtctagt gacagcatgg 20820

tgtatttgcc tccaccttct gtggcgaagg ttgtcaatac tgatgattat gttacacgca 20880

caggcatata gtgacagcat ggtgtatttg cctccacctt ctgtggcgaa ggttgtcaat 20940

actgatgatt atgttacacg cacaggcata tattattcgt atggatttgc ctccaccttc 21000

tgtggcgaag gttgtcaata ctgatgatta tgttacacgc acaggcatat attattcgta 21060

tggcagctct agattattaa cagtgtggcg aaggttgtca atactgatga ttatgttaca 21120

cgcacaggca tatattattc gtatggcagc tctagattat taacagtagg acatccatat 21180

tttacgaagg ttgtcaatac tgatgattat gttacacgca caggcatata ttattcgtat 21240

ggcagctcta gattattaac agtaggacat ccatatttta tactgatgat tatgttacac 21300

gcacaggcat atattattcg tatggcagct ctagattatt aacagtagga catccatatt 21360

ttaaagtggg tatgaatgga ttattcgtat ggcagctcta gattattaac agtaggacat 21420

ccatatttta aagtgggtat gaatggtggt cgcaagcagg acattccaaa ggtgtctgcc 21480

tagattatta acagtaggac atccatattt taaagtgggt atgaatggtg gtcgcaagca 21540

ggacattcca aaggtgtctg catatcaata ggacatccat attttaaagt gggtatgaat 21600

ggtggtcgca agcaggacat tccaaaggtg tctgcatatc aatatagggt atttcgcgtg 21660

acattgcccg gtggtcgcaa gcaggacatt ccaaaggtgt ctgcatatca atatagggta 21720

tttcgcgtga cattgcccga tcctaataaa ttcagtattc cagcgtaatc catatcaata 21780

tagggtattt cgcgtgacat tgcccgatcc taataaattc agtattccag cgtaatcctt 21840

atataatcca gaaacacaac gtttagtatg cccgatccta ataaattcag tattccagcg 21900

taatccttat ataatccaga aacacaacgt ttagtatggg cttgtgtagg ggtggaggtg 21960

ggcaggggcc ccttatataa tccagaaaca caacgtttag tatgggcttg tgtaggggtg 22020

gaggtgggca ggggccagcc attgggtgtt ggtattagtg gacacccatt ggcttgtgta 22080

ggggtggagg tgggcagggg ccagccattg ggtgttggta ttagtggaca cccattatat 22140

aatagacagg atgatactga aaactcacca cagccattgg gtgttggtat tagtggacac 22200

ccattatata atagacagga tgatactgaa aactcaccat tttcatcaac caccaataag 22260

gacagtaggg atataataga caggatgata ctgaaaactc accattttca tcaaccacca 22320

ataaggacag tagggataat gtgtctgtgg attataaaca gacacagttg ccattttcat 22380

caaccaccaa taaggacagt agggataatg tgtctgtgga ttataaacag acacagttgt 22440

gcattatagg ctgtgttccc gccattgggg ggataatgtg tctgtggatt ataaacagac 22500

acagttgtgc attataggct gtgttcccgc cattggggag cactggggta agggaaaggc 22560

cgtaaagccc tgtgcattat aggctgtgtt cccgccattg gggagcactg gggtaaggga 22620

aaggccgtaa agcccaataa tgtatctacg ggggactgtc ctcctttgga ggagcactgg 22680

ggtaagggaa aggccgtaaa gcccaataat gtatctacgg gggactgtcc tcctttggaa 22740

ctagtaaaca cccctattga ggatggtgat ataatgtatc tacgggggac tgtcctcctt 22800

tggaactagt aaacacccct attgaggatg gtgatatgat tgatactggc tatggagcta 22860

tggactttgg ggaactagta aacaccccta ttgaggatgg tgatatgatt gatactggct 22920

atggagctat ggactttggt gcattgcagg aaaccaaaag tgaggtgcct tgattgatac 22980

tggctatgga gctatggact ttggtgcatt gcaggaaacc aaaagtgagg tgcctttaga 23040

tatttgtcaa tccatttgta aatatcctga ggtgcattgc aggaaaccaa aagtgaggtg 23100

cctttagata tttgtcaatc catttgtaaa tatcctgatt atttgcaaat gtctgcagat 23160

gtgtatgggg agatatttgt caatccattt gtaaatatcc tgattatttg caaatgtctg 23220

cagatgtgta tggggacagt atgttcttct gtttacgtag ggaacaactg atcctgatta 23280

tttgcaaatg tctgcagatg tgtatgggga cagtatgttc ttctgtttac gtagggaaca 23340

actgtttgca agacattttt ggaattattt gcaaatgtct gcagatgtgt atggggacag 23400

tatgttcttc tgtttacgta gggaacaact gtttgcaaga catttttgga atcgtggtgg 23460

tatggtgttt gcaagacatt tttggaatcg tggtggtatg gtgggtgacg ccattcctgc 23520

ccaattgtat attaagggca cagatatacg tgcaaacccc ggtagtggtg ggtgacgcca 23580

ttcctgccca attgtatatt aagggcacag atatacgtgc aaaccccggt agttctgtat 23640

actgcccctc tcccagcggt tccatttaag ggcacagata tacgtgcaaa ccccggtagt 23700

tctgtatact gcccctctcc cagcggttcc atggtaacct ctgattccca gttatttaat 23760

aagccgttct gtatactgcc cctctcccag cggttccatg gtaacctctg attcccagtt 23820

atttaataag ccttattggc tacataaggc ccagggccac aacaatggta acctctgatt 23880

cccagttatt taataagcct tattggctac ataaggccca gggccacaac aatggtatat 23940

gttggcataa tcaattattt cttaccccag ttatttaata agccttattg gctacataag 24000

gcccagggcc acaacaatgg tatatgttgg cataatcaat tatttcttac tgttgtggat 24060

tatttaataa gccttattgg ctacataagg cccagggcca caacaatggt atatgttggc 24120

ataatcaatt atttcttact gttgtggaca ctacccgctt attggctaca taaggcccag 24180

ggccacaaca atggtatatg ttggcataat caattatttc ttactgttgt ggacactacc 24240

cgtagtacca actttacgcc cagggccaca acaatggtat atgttggcat aatcaattat 24300

ttcttactgt tgtggacact acccgtagta ccaactttac attatctacc tctaatggta 24360

tatgttggca taatcaatta tttcttactg ttgtggacac tacccgtagt accaacttta 24420

cattatctac ctctatagag tcttccatac cttcctgttg tggacactac ccgtagtacc 24480

aactttacat tatctacctc tatagagtct tccatacctt ctacatatga tccttctaag 24540

tttaaggaat ataccattat ctacctctat agagtcttcc ataccttcta catatgatcc 24600

ttctaagttt aaggaatata ccaggcacgt ggaggagtat gatttacaat ttatctacat 24660

atgatccttc taagtttaag gaatatacca ggcacgtgga ggagtatgat ttacaattta 24720

tatttcaact gtgtactgtc acattaacaa ctgaccaggc acgtggagga gtatgattta 24780

caatttatat ttcaactgtg tactgtcaca ttaacaactg atgttatgtc ttatattcac 24840

actatgaatt cctctatttc aactgtgtac tgtcacatta acaactgatg ttatgtctta 24900

tattcacact atgaattcct ctatattgga caattggaat tttgctgtag ctccatgtta 24960

tgtcttatat tcacactatg aattcctcta tattggacaa ttggaatttt gctgtagctc 25020

ctccaccatc tgccagtttg gtagacactt acagctatat tggacaattg gaattttgct 25080

gtagctcctc caccatctgc cagtttggta gacacttaca gatacctaca gtctgcagcc 25140

attacatgtc aaaacctcca ccatctgcca gtttggtaga cacttacaga tacctacagt 25200

ctgcagccat tacatgtcaa aaggcgtatc cagcacctga aaagaaagat ccatgatacc 25260

tacagtctgc agccattaca tgtcaaaagg cgtatccagc acctgaaaag aaagatccat 25320

atgacggtct aaagttttgg aatgttgact taagaggcgt atccagcacc tgaaaagaaa 25380

gatccatatg acggtctaaa gttttggaat gttgacttaa gggaaaagtt tagtttggaa 25440

cttgatcaat tcccgacggt ctaaagtttt ggaatgttga cttaagggaa aagtttagtt 25500

tggaacttga tcaattccct ttgggacgta aatttttgtt gcaggccagg gtccgggaaa 25560

agtttagttt ggaacttgat caattccctt tgggacgtaa atttttgttg caggccaggg 25620

tccgcaggcg ccctactata ggtccccgaa agcgtttggg acgtaaattt ttgttgcagg 25680

ccagggtccg caggcgccct actataggtc cccgaaagcg gcctgctgca tccacttcct 25740

cgtcctcagc tacttccgca ggcgccctac tataggtccc cgaaagcggc ctgctgcatc 25800

cacttcctcg tcctcagcta ctaaacacaa acgtaaacgt gtgtctaaat aatgggcctg 25860

ctgcatccac ttcctcgtcc tcagctacta aacacaaacg taaacgtgtg tctaaatacg 25920

taatgtgtcg tacttgttat gtgtgtgtat gttgctaaac acaaacgtaa acgtgtgtct 25980

aaatacgtaa tgtgtcgtac ttgttatgtg tgtgtatgtt gtttgtttcc ttatgtgttg 26040

agtgtatatg tgtagcatgt gtcgtacttg ttatgtgtgt gtatgttgtt tgtttcctta 26100

tgtgttgagt gtatatgtgt atgtttgtag gtatgtgtgt atatgttttt gttagtttgt 26160

ttccttatgt gttgagtgta tatgtgtatg tttgtaggta tgtgtgtata tgtttttgtt 26220

aataaagtat gtatgacagt ttcatgtgtg attgatgttt gtaggtatgt gtgtatatgt 26280

ttttgttaat aaagtatgta tgacagtttc atgtgtgatt gcacaccctg tgactaacag 26340

tgtatttgtt ttacaataaa gtatgtatga cagtttcatg tgtgattgca caccctgtga 26400

ctaacagtgt atttgtttta catataatag gtctgcaaca tttcatacat aatcgcacac 26460

cctgtgacta acagtgtatt tgttttacat ataataggtc tgcaacattt catacataat 26520

ctatcgtacc taccctaagg tgtgtttact acctcatata ataggtctgc aacatttcat 26580

acataatcta tcgtacctac cctaaggtgt gtttactacc taatatgtaa tttttacatt 26640

gttgtcgtag tttcctatcg tacctaccct aaggtgtgtt tactacctaa tatgtaattt 26700

ttacattgtt gtcgtagttt ctacatttta tacttcgcca ttttgtggcg accgtaatat 26760

gtaattttta cattgttgtc gtagtttcta cattttatac ttcgccattt tgtggcgacc 26820

gaagtcggtc gtgggttgag catttttttt aaacctacat tttatacttc gccattttgt 26880

ggcgaccgaa gtcggtcgtg ggttgagcat tttttttaaa ctagtggaaa ccacctttct 26940

cagcaaaaac atgtgaagtc ggtcgtgggt tgagcatttt ttttaaacta gtggaaacca 27000

cctttctcag caaaaacatg tctttacctt aggttcaccc tgcatagttg gcacctagtg 27060

gaaaccacct ttctcagcaa aaacatgtct ttaccttagg ttcaccctgc atagttggca 27120

ctggtaacag ttttactggc gcgccttatt actcgtcttt accttaggtt caccctgcat 27180

agttggcact ggtaacagtt ttactggcgc gccttattac tcatcatcct gtccaggtgc 27240

actgcaacaa tactctggta acagttttac tggcgcgcct tattactcat catcctgtcc 27300

aggtgcactg caacaatact ttggcaacat ccatatctcc accctatgta ataatactgg 27360

cgcgccttat tactcatcat cctgtccagg tgcactgcaa caatactttg gcaacatcca 27420

tatctccacc ctatgtaata aaactgcttt tagcatcatc ctgtccaggt gcactgcaac 27480

aatactttgg caacatccat atctccaccc tatgtaataa aactgctttt aggcatatat 27540

tttagctgtt tttccaggtg cactgcaaca atactttggc aacatccata tctccaccct 27600

atgtaataaa actgctttta ggcatatatt ttagctgttt ttacttgctt aatttggcaa 27660

catccatatc tccaccctat gtaataaaac tgcttttagg catatatttt agctgttttt 27720

acttgcttaa ttaaatagtt ggcctgtata actaaactgc ttttaggcat atattttagc 27780

tgtttttact tgcttaatta aatagttggc ctgtataact actttttgat tcaggaatgt 27840

gtcttacagt atatacttgc ttaattaaat agttggcctg tataactact ttttgattca 27900

ggaatgtgtc ttacagtata agttatacaa gtgactaatg tagcacacaa tagacttttt 27960

gattcaggaa tgtgtcttac agtataagtt atacaagtga ctaatgtagc acacaatagt 28020

ttcgtaaacc gaaataggtt gggcatacat acc 28053

<210> 2

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 2

caagcagaag acggcatacg agattgcatg acgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 3

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 3

caagcagaag acggcatacg agattgctat cggtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 4

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 4

caagcagaag acggcatacg agatcacaag cagtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 5

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 5

caagcagaag acggcatacg agattcgctg atgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 6

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 6

caagcagaag acggcatacg agatcgcttt gtgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 7

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 7

caagcagaag acggcatacg agatccgatg aagtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 8

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 8

caagcagaag acggcatacg agattgacca cagtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 9

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 9

caagcagaag acggcatacg agatgaagcc atgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 10

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 10

caagcagaag acggcatacg agatttctgg tggtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 11

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 11

caagcagaag acggcatacg agatccgaaa acgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 12

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 12

caagcagaag acggcatacg agatcgaaaa gggtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 13

<211> 53

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 引物

<400> 13

caagcagaag acggcatacg agataaccag ctgtgactgg agttcagacg tgt 53

<210> 14

<211> 60

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 接头

<400> 14

ctacaataat tcatgtataa aactaagggc tagtataaaa gcagacattt tcgtaaccaa 60