一种蛭长菌及其制备方法和使用方法

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，涉及一种用于水蛭养殖的蛭长菌及其制备方法和使用方法。

背景技术

水蛭是中国传统的特种药用水生动物，其干制品泡制后中医入药。随着现代生物技术的应用和提高，水蛭素的提取加工和医学临床应用，以及中成药的开发、研制和推广，对水蛭的需求量逐年增多。同时，日本、韩国、东南亚各国也从我国大量进口水蛭，造成国内水蛭市场紧缺，价格上涨。巨大的市场需求，为人工养殖水蛭营造了广阔的市场前景。发展水蛭养殖具有良好的市场前景和经济收益。

水蛭养殖对水质的要求高，一旦水源被污染，即有可能“全军覆没”。现有的水蛭养殖过程中，由于水蛭粪便对水质的污染，水蛭对饵料的消化吸收能力较差，导致水蛭生长慢，水蛭的产出率下降。

发明内容

本发明的目的在于，克服现有技术的不足，提供一种能有效促进水蛭生长，增强水蛭对饵料的消化吸收能力，减少水蛭粪便对水质污染的蛭长菌及其制备方法和使用方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明一种蛭长菌，是由50-70％的促长菌与30-50％的青素菌复配制成的；所述青素菌，包括2.6-2.8％乳化虾青素、1.9-2.9％卵磷脂、1.3-2.3％DHA、2.5-3.5％深海鱼油、2.6-3.6％破壁红发夫酵母、1.8-2.8％免疫促长素、6-8％复合有益菌、2-3％多种维生素、1-2％生物活性物质、1.5-4％粗蛋白、53.5-73.7％水。

进一步地，所述免疫促长素包括20％泛酸、20％肌醇、20％烟酸、20％叶酸、20％氨基酸。

进一步地，所述复合有益菌包括20％EM菌、25％酵母菌、15％乳酸菌、20％蛭弧菌、20％硝化细菌。

进一步地，所述多种维生素包括10％维生素A、10％维生素D、12％维生素E、10％维生素K、12％维生素B1、12％维生素B2、13％维生素B3、11％维生素B5、10％维生素B6。

进一步地，所述生物活性物质包括15％牛磺酸、15％EPA、15％PHA、15％谷胱甘肽、15％鹅肌肽、12％鲎素类抗菌肽、13％甲壳质。

进一步地，所述蛭长菌，是由60％的促长菌与40％的青素菌复配制成的。

本发明中所述的百分比均为质量百分比。

本发明中所述的促长菌是将光合细菌、乳酸菌、酵母菌、放线菌、真菌五大类微生物菌群中的五种有效菌株，通过分别驯化、复壮和培养，利用微生物菌群在各自生长过程中产生的有益物质可以互为生长基质并形成共生增殖关系的特点，选配合适的菌群结构，并以含有天然促长因子的猪胎盘蛋白为培养基质对菌群发酵扩培，最后形成一个菌群复杂、功能齐全、结构稳定的复合型益生促长微生菌产品，使各菌种协同作用，使有益菌的作用充分体现，天然促长因子的作用有效发挥，平衡了动物肠道内微生物群、促进了动物机体的生长、优化了养殖生态环境，是一种安全、稳定、无公害、无污染的高效绿色环保型饲料添加剂。

进一步地，所述促长菌是按以下制备方法制成的：

①取适量猪胎盘，速冻后，切成小肉丁，绞成均匀肉浆，得到猪胎盘肉浆备用。

②每1升蒸馏水中加入氯化氨(NH4Cl)0.5-1克，碳酸氢钠(NaHCO3)0.75-1.25克，磷酸氢二钾(K2HPO4)0.25-0.75克，醋酸钠(CH3COONa)1.5-2克，氯化镁(MgCl2)0.3-0.5克，氯化钠(NaCl)1.5-2.5克，葡萄糖(C6H12O6)8-12克，制成培养液备用。

③取光合细菌(沼泽红假单胞菌Phodopseudomonas palustris)菌种含量为30×10

③取步骤③制得的菌种与步骤②制成的培养液，按体积1:3-5的比例倒入发酵罐中，密封，保持pH4.0-5.0，温度23-28℃，厌氧发酵培养4-10天，待料发出略带酸甜的浓郁酒曲香味，表明发酵成功，制得菌液备用。

⑤将步骤①得到的猪胎盘肉浆与步骤④制得的菌液，按重量1:2-4的比例混合均匀，倒入发酵罐中，密封，保持pH4.0-5.0，温度23-28℃，厌氧发酵培养4-10天，即制得一种促长菌。

本发明的蛭长菌的制备方法，包括下述步骤：

(一)制备青素菌，步骤如下：

S1:先制备乳化虾青素；乳化虾青素的制备方法如下：

(1)将乳化剂、抗氧化剂溶于去离子水，充分混合得到水相；

(2)将鱼油、虾青素混合均匀，得到油相；

(3)将步骤(1)得到的水相、步骤(2)得到的油相分别倒入双通道微射流装置的两个进料口进行均质；

(4)循环均质1次后的乳液经微滤、避光、密封处理，即得到乳化虾青素。

S2：再按配方量将S1制成的乳化虾青素与卵磷脂、DHA、深海鱼油、破壁红发夫酵母、免疫促长素、复合有益菌、多种维生素、生物活性物质、粗蛋白、水混合搅拌均匀，即制成一种青素菌。

(二)按配方量将促长菌与青素菌混合搅拌均匀，即得到一种蛭长菌。

本发明的蛭长菌的使用方法如下：在水蛭养殖的各个阶段，稀释后喷入饵料中配合饵料使用，或者，用养殖水稀释后全池泼洒；用量为：

1)、配合饵料投喂：用2千克井水(或纯净水)将所述蛭长菌150-250毫升稀释后，直接喷入100千克饵料螺类投喂；

2)、开胃诱食：用1千克井水(或纯净水)将所述蛭长菌150-250毫升稀释后，直接喷入50千克饵料螺类投喂；

3)、蛭长菌水体泼洒：每亩池塘(1米水深)用所述蛭长菌50-100毫升用养殖水稀释50-100倍后直接泼洒，每隔5-8天泼洒一次。

本发明的有益效果：

本发明的蛭长菌是将从健康的水产动物肠道内、雨生红球藻及高产养殖水体中分离出的光合细菌、乳酸菌、破壁红发夫酵母菌、放线菌、丝状菌等五大类微生物菌群中的十余种有效菌株，通过分别驯化、复壮和培养，利用微生物菌群在各自生长过程中产生的有益物质可以互为生长基质并形成共生增殖关系的特点，选配合适的菌群结构，并以含有天然促长因子的动物原胚蛋白及抗氧化剂为培养基质对菌群发酵扩培，同时复配水蛭生长所必需的微量元素、维生素及纳米促长物质，最后形成一个菌群复杂、功能齐全、结构稳定的复合型益生促长微生菌产品。

本发明的蛭长菌能有效促进水蛭生长，增强水蛭对饵料的消化吸收能力，降低饵料系数，减少水蛭粪便对水质的污染，还具有很好的诱食作用。

本发明的蛭长菌是根据动物营养学理论，利用天然动植物抗氧化剂和纳米促长因子研发的新一代微生态制剂产品，其不含化学激素，是生产无抗绿色水蛭的必备用品。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

本实施例一种蛭长菌，它是由60％的促长菌与40％的青素菌复配制成的；

所述青素菌，即泓宝青素菌，包括2.7％乳化虾青素、2.4％卵磷脂、1.8％DHA、3％深海鱼油、3.1％破壁红发夫酵母、2.3％免疫促长素、7％复合有益菌、2.5％多种维生素、1.5％生物活性物质、2.75粗蛋白、70.95％水。

所述免疫促长素包括20％泛酸、20％肌醇、20％烟酸、20％叶酸、20％氨基酸。

所述复合有益菌包括20％EM菌、25％酵母菌、15％乳酸菌、20％蛭弧菌、20％硝化细菌。

所述多种维生素包括10％维生素A、10％维生素D、12％维生素E、10％维生素K、12％维生素B1、12％维生素B2、13％维生素B3、11％维生素B5、10％维生素B6。

所述生物活性物质包括15％牛磺酸、15％EPA、15％PHA、15％谷胱甘肽、15％鹅肌肽、12％鲎素类抗菌肽、13％甲壳质。

所述促长菌是泓宝促长菌，是按以下制备方法制成的：

①取猪胎盘500g，在-20℃下速冻，切成1.5cm×1.5cm的小肉丁，放入绞肉机中匀浆，得到猪胎盘肉浆备用。

②取氯化氨(NH4Cl)0.75克，碳酸氢钠(NaHCO3)1克，磷酸氢二钾(K2HPO4)0.5克，醋酸钠(CH3COONa)1.75克，氯化镁(MgCl2)0.4克，氯化钠(NaCl)2克，葡萄糖(C6H12O6)10克，加入蒸馏水，加至1000毫升，制成培养液备用。

③取光合细菌(沼泽红假单胞菌Phodopseudomonas palustris)菌种含量为30×10

④取步骤③制得的菌种与步骤②制成的培养液，按体积1:4的比例倒入发酵罐中，密封，保持pH4.0-5.0，温度23-28℃，厌氧发酵培养4-10天，待料发出略带酸甜的浓郁酒曲香味，表明发酵成功，制得菌液备用。

④将步骤①得到的猪胎盘肉浆与步骤④制得的菌液，按重量1:3的比例混合均匀，倒入发酵罐中，密封，保持pH4.0-5.0，温度23-28℃，厌氧发酵培养4-10天，即制得一种促长菌。

本实施例的蛭长菌的制备方法，包括下述步骤：

(一)制备青素菌，步骤如下：

S1:先制备乳化虾青素；乳化虾青素的制备方法如下：

(1)将乳化剂、抗氧化剂溶于去离子水，充分混合得到水相；

(2)将鱼油、虾青素混合均匀，得到油相；

(3)将步骤(1)得到的水相、步骤(2)得到的油相分别倒入双通道微射流装置的两个进料口进行均质；

(4)循环均质1次后的乳液经微滤、避光、密封处理，即得到乳化虾青素。

S2：再按配方量将S1制成的乳化虾青素与卵磷脂、DHA、深海鱼油、破壁红发夫酵母、免疫促长素、复合有益菌、多种维生素、生物活性物质、粗蛋白、水混合搅拌均匀，即制成一种青素菌。

(二)按配方量将促长菌与青素菌混合搅拌均匀，即得到一种蛭长菌。

本实施例的蛭长菌的使用方法如下：稀释后喷入饵料中配合饵料使用或用养殖水稀释后全池泼洒。

【使用范围】适用于水蛭养殖的各个阶段。

【用量】1、配合饵料投喂：将本品200毫升用2千克井水(或纯净水)稀释后，直接喷入100千克饵料螺类投喂；

2、开胃诱食：将本品200毫升用1千克井水(或纯净水)稀释后，直接喷入50千克饵料螺类投喂；

3、水体泼洒：每亩池塘(1米水深)用本品100毫升用养殖水稀释50倍后直接泼洒，每隔7天泼洒一次。

实施例2

本实施例一种蛭长菌，它是由50％的促长菌与50％的青素菌复配制成的；

所述青素菌，即泓宝青素菌，包括2.6％乳化虾青素、2.9％卵磷脂、2.3％DHA、2.5％深海鱼油、2.6％破壁红发夫酵母、2.8％免疫促长素、8％复合有益菌、3％多种维生素、1％生物活性物质、4％粗蛋白、68.3％水。

所述免疫促长素包括20％泛酸、20％肌醇、20％烟酸、20％叶酸、20％氨基酸。

所述复合有益菌包括20％EM菌、25％酵母菌、15％乳酸菌、20％蛭弧菌、20％硝化细菌。

所述多种维生素包括10％维生素A、10％维生素D、12％维生素E、10％维生素K、12％维生素B1、12％维生素B2、13％维生素B3、11％维生素B5、10％维生素B6。

所述生物活性物质包括15％牛磺酸、15％EPA、15％PHA、15％谷胱甘肽、15％鹅肌肽、12％鲎素类抗菌肽、13％甲壳质。

所述促长菌是泓宝促长菌，是按以下制备方法制成的：

⑤取猪胎盘500g，在-20℃下速冻，切成1.5cm×1.5cm的小肉丁，放入绞肉机中匀浆，得到猪胎盘肉浆备用。

⑥取氯化氨(NH4Cl)0.5克，碳酸氢钠(NaHCO3)0.75克，磷酸氢二钾(K2HPO4)0.25克，醋酸钠(CH3COONa)1.5克，氯化镁(MgCl2)0.3克，氯化钠(NaCl)1.5克，葡萄糖(C6H12O6)8克，加入蒸馏水，加至1000毫升，制成培养液备用。

⑦取光合细菌(沼泽红假单胞菌Phodopseudomonas palustris)菌种含量为30×10

④取步骤③制得的菌种与步骤②制成的培养液，按体积1:5的比例倒入发酵罐中，密封，保持pH4.0，温度28℃，厌氧发酵培养4天，待料发出略带酸甜的浓郁酒曲香味，表明发酵成功，制得菌液备用。

⑧将步骤①得到的猪胎盘肉浆与步骤④制得的菌液，按重量1:4的比例混合均匀，倒入发酵罐中，密封，保持pH4.0，温度28℃，厌氧发酵培养4天，即制得一种促长菌。

本实施例的蛭长菌的制备方法，包括下述步骤：

(一)制备青素菌，步骤如下：

S1:先制备乳化虾青素；乳化虾青素的制备方法如下：

(1)将乳化剂、抗氧化剂溶于去离子水，充分混合得到水相；

(2)将鱼油、虾青素混合均匀，得到油相；

(3)将步骤(1)得到的水相、步骤(2)得到的油相分别倒入双通道微射流装置的两个进料口进行均质；

(4)循环均质1次后的乳液经微滤、避光、密封处理，即得到乳化虾青素。

S2：再按配方量将S1制成的乳化虾青素与卵磷脂、DHA、深海鱼油、破壁红发夫酵母、免疫促长素、复合有益菌、多种维生素、生物活性物质、粗蛋白、水混合搅拌均匀，即制成一种青素菌。

(二)按配方量将促长菌与青素菌混合搅拌均匀，即得到一种蛭长菌。

本实施例的蛭长菌的使用方法如下：稀释后喷入饵料中配合饵料使用或用养殖水稀释后全池泼洒。

【使用范围】适用于水蛭养殖的各个阶段。

【用量】1、配合饵料投喂：将本品150毫升用2千克井水(或纯净水)稀释后，直接喷入100千克饵料螺类投喂；

2、开胃诱食：将本品150毫升用1千克井水(或纯净水)稀释后，直接喷入50千克饵料螺类投喂；

3、水体泼洒：每亩池塘(1米水深)用本品50毫升用养殖水稀释100倍后直接泼洒，每隔5天泼洒一次。

实施例3

本实施例一种蛭长菌，它是由70％的促长菌与30％的青素菌复配制成的；

所述青素菌，即泓宝青素菌，包括2.8％乳化虾青素、1.9％卵磷脂、1.3％DHA、3.5％深海鱼油、23.6％破壁红发夫酵母、1.8％免疫促长素、6％复合有益菌、2％多种维生素、2％生物活性物质、1.5％粗蛋白、53.6％水。

所述免疫促长素包括20％泛酸、20％肌醇、20％烟酸、20％叶酸、20％氨基酸。

所述复合有益菌包括20％EM菌、25％酵母菌、15％乳酸菌、20％蛭弧菌、20％硝化细菌。

所述多种维生素包括10％维生素A、10％维生素D、12％维生素E、10％维生素K、12％维生素B1、12％维生素B2、13％维生素B3、11％维生素B5、10％维生素B6。

所述生物活性物质包括15％牛磺酸、15％EPA、15％PHA、15％谷胱甘肽、15％鹅肌肽、12％鲎素类抗菌肽、13％甲壳质。

所述促长菌是泓宝促长菌，是按以下制备方法制成的：

⑨取猪胎盘500g，在-20℃下速冻，切成1.5cm×1.5cm的小肉丁，放入绞肉机中匀浆，得到猪胎盘肉浆备用。

⑩取氯化氨(NH4Cl)1克，碳酸氢钠(NaHCO3)1.25克，磷酸氢二钾(K2HPO4)0.75克，醋酸钠(CH3COONa)2克，氯化镁(MgCl2)0.5克，氯化钠(NaCl)2.5克，葡萄糖(C6H12O6)12克，加入蒸馏水，加至1000毫升，制成培养液备用。

④取步骤③制得的菌种与步骤②制成的培养液，按体积1:3的比例倒入发酵罐中，密封，保持pH5.0，温度23℃，厌氧发酵培养10天，待料发出略带酸甜的浓郁酒曲香味，表明发酵成功，制得菌液备用。

本实施例的蛭长菌的制备方法，包括下述步骤：

(一)制备青素菌，步骤如下：

S1:先制备乳化虾青素；乳化虾青素的制备方法如下：

(1)将乳化剂、抗氧化剂溶于去离子水，充分混合得到水相；

(2)将鱼油、虾青素混合均匀，得到油相；

(3)将步骤(1)得到的水相、步骤(2)得到的油相分别倒入双通道微射流装置的两个进料口进行均质；

(4)循环均质1次后的乳液经微滤、避光、密封处理，即得到乳化虾青素。

S2：再按配方量将S1制成的乳化虾青素与卵磷脂、DHA、深海鱼油、破壁红发夫酵母、免疫促长素、复合有益菌、多种维生素、生物活性物质、粗蛋白、水混合搅拌均匀，即制成一种青素菌。

(二)按所述促长菌的制备方法制成促长菌。

(三)按配方量将青素菌与促长菌混合搅拌均匀，即制成一种蛭长菌。

本实施例的蛭长菌的使用方法如下：稀释后喷入饵料中配合饵料使用或用养殖水稀释后全池泼洒。

【使用范围】适用于水蛭养殖的各个阶段。

【用量】1、配合饵料投喂：将本品250毫升用2千克井水(或纯净水)稀释后，直接喷入100千克饵料螺类投喂；

2、开胃诱食：将本品250毫升用1千克井水(或纯净水)稀释后，直接喷入50千克饵料螺类投喂；

3、水体泼洒：每亩池塘(1米水深)用本品75毫升用养殖水稀释75倍后直接泼洒，每隔8天泼洒一次。

上述实施例1-3制得的蛭长菌产品的功效、主要成分、使用注意事项等说明如下：

【功效】

1、含有氨基酸、多肽、多种维生素、天然促长因子和纳米促长因子，促进水蛭快速生长，提高增重率；

2、含有微量元素、虾青素，维持饵料营养平衡，促进水蛭健康发育，并具有超强的自然增色效果，能提高水蛭的自然体色，提高其商品价值；

3、含有机酸可提高水蛭对饵料的消化利用率，降低养殖成本；

4、富含益生菌，维持水蛭肠道菌群平衡，降低肠道疾病的发生率，并减少水蛭粪便有机物对水质的污染；

5、含有天然虾青素的蛭长菌能提高水蛭的抗应变能力，修复破损细胞和组织，天气突变前使用，可有效提高水蛭的抗变能力；

6、有发酵香味，具有很好的诱食效果。

【理化性状】棕红色粘稠乳液。

【主要成分】光合细菌、乳酸菌、破壁红发夫酵母菌、放线菌、丝状菌、微量元素、氨基酸、多种维生素、虾青素、天然促长因子、纳米促长因子、糖肽类等。

【有效成分含量】每克益生菌含量20×108个。

【注意】1、如水蛭已发生肠道疾病或正在投喂抗生素时不能使用本品；

2、本品不耐高温，用于稀释本品的水，水温应低于40℃；

3、使用本品不受水温和光照影响，经常使用可确保水质良好；

4、本品配合“泓宝生力菌”、“泓宝EM菌”使用效果更佳。

【包装】200毫升/瓶30瓶/箱。

【贮藏】阴凉、干燥、避光、通风处保存，冰箱冷藏室(5～10℃)保存效果最佳。

【保质期】12个月

应用实施例

蛭长菌在水蛭养殖过程中的使用案例

处理水体：取相邻山东济宁市鱼台县李阁镇太公庙村水蛭养殖基地两个相邻的1亩水面的水蛭养殖池塘做对比性试验，水深均为1米左右，池塘均南北走向，长方形，排灌水方便。水蛭种苗投放时间为2020年7月20日，放养规格为体长1厘米，5万条/千克，活力强，体表光滑，颜色鲜艳无伤痕，无病状的水蛭苗种，投放密度：15万条/亩，分为实验组和对照组，处理周期为3个月。

问题分析：在实验期间，全池泼洒和配合螺类饵料拌喂蛭长菌后对水蛭的成活率、增重率、体色及商品收购价的对比影响。

处理方案：

实验组：每亩水面(水深1米)用实施例1的蛭长菌100毫升与适量养殖水(稀释50倍)调匀后均匀泼洒，每隔7天泼洒一次。

对照组：不使用蛭长菌。

对照组和实验组均一周投喂饵料一次，其他饲养条件及投喂量均相同。

处理后跟踪结果，每次取样数量为100条水蛭苗而得出的平均重量。

观察日期①7月20日-8月19日②8月20日-9月19日③9月20日-10月19日

对照组：①巡塘发现死亡水蛭共6千克左右，取样活水蛭称重平均0.4克/条，死亡水蛭数15000条。②巡塘发现死亡水蛭共30千克左右，取样活水蛭称重平均1.5克/条，死亡水蛭数20000条。③巡塘发现死亡水蛭共212.5千克左右，取样活水蛭称重平均8.5克/条，死亡水蛭数25000条。备注：死亡水蛭总数60000条，成活率60％。

商品品相及干燥体收购描述：部分水蛭呈现外观色泽发乌，失去水蛭的自然黑色光泽。干体水蛭折断时干脆，口尝之则先涩后麻而有杀舌感，收购市场反馈销售一般，最高收购价为1000元/千克。

实验组：①巡塘发现死亡水蛭共6千克左右，取样活水蛭称重平均0.5克/条，死亡水蛭数12000条。②巡塘发现死亡水蛭共25千克左右，取样活水蛭称重平均2.5克/条，死亡水蛭数10000条。③巡塘发现死亡水蛭共50千克左右，取样活水蛭称重平均10克/条，死亡水蛭数5000条。备注：死亡水蛭总数27000条，成活率82％。

商品品相及干燥体收购描述：水蛭均呈现外观背部有自然的黑色光泽，折断时有韧性感，断面有胶质样光泽，味淡而有鱼腥气，手摸肉质有弹性；深受收购市场的喜欢，水蛭干燥体最高收购价格可达1400元/千克。

其中，成活率＝(投苗总数-死亡水蛭总数)/投苗总数。

案例分析：

通过对整个实验过程观察，可以得出如下结论：

(一)、水蛭生长速度明显加快

实验期间，实验组水蛭生长速度同期相比对照组，生长速度明显加快，实验组水蛭最终平均比对照组平均增重15％。

(二)、水蛭存活率明显提高

实验期间，实验组投放蛭长菌后水蛭存活率较对照组相比存活率提高了22％。

(三)、有自然增色效果，并可提高商品价值

蛭长菌对水蛭具有超强的自然增色效果，能提高水蛭的自然体色，提高水蛭的商品价值。