一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体的涉及一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法。

背景技术

间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。随着科技的进步，研究者们致力于研究间充质干细胞的发展，主要因为其在临床的应用较多，在一些人类现阶段面临的疑难杂症的攻克上有待发挥更大的作用。

间充质干细胞分化成脂的研究也是一个重要的研究方向。尤其是现阶段随着美容修复行业的发展，脂肪组织是重建和修复再生组织的种子细胞来源，可大大驱动新生组织的重建。如果可以开发一种高效的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，可降低此类工作的难度，为美容行业的发展提供便捷。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，包括以下步骤：

S01：细胞培养；

S02：细胞诱导分化；

S03：细胞分化程度判断。

作为一种优选的技术方案，S01步骤所述的细胞培养为人间充质干细胞培养。

作为一种优选的技术方案，S02步骤所述的细胞诱导分化通过加入诱导分化成脂试剂进行诱导。

作为一种优选的技术方案，S03步骤所述的细胞分化程度判断通过染色剂染色判断。

作为一种优选的技术方案，所述的染色剂选自脂溶性染色剂中的一种。

作为一种优选的技术方案，所述的脂溶性染色剂选自苏丹III、苏丹IV、甲基橙、苏丹红5B中的至少一种。

作为一种优选的技术方案，S01步骤所述的细胞培养采用的培养基为MM3培养基；所述的MM3培养基由血清替代物和间充质干细胞基础培养基组成。

作为一种优选的技术方案，所述的血清替代物和间充质干细胞基础培养基的体积比为1：18～21。

作为一种优选的技术方案，所述的血清替代物和间充质干细胞基础培养基的体积比为1：19。

本发明的第二方面提供了一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法的应用，用于脐带、脂肪、胎盘、羊膜的间充质干细胞诱导分化成脂。

有益效果：本发明提供的高效的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，具有以下优点：

1.经本发明开发的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法可以高效快速的进行分化，避免了细胞分化过程中出现减少的现象；

2.经本发明开发的方法可以保证在分化7天就有大面积脂滴出现，保证了细胞分化的顺利进行；

3.经本申请开发的方法提高了细胞培养分化的效率，减少了空气中二氧化碳等物质对培养基的影响进而对细胞培养过程造成的损害。

具体实施方式

结合以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可进一步地理解本发明的内容。除非另有说明，本文中使用的所有技术及科学术语均具有与本申请所属领域普通技术人员的通常理解相同的含义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。

在本文中使用的，除非上下文中明确地另有指示，否则没有限定单复数形式的特征也意在包括复数形式的特征。还应理解的是，如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义，“包括”、“包括有”、“具有”、“包含”和/或“包含有”，当在本说明书中使用时表示所陈述的组合物、步骤、方法、制品或装置，但不排除存在或添加一个或多个其它组合物、步骤、方法、制品或装置。此外，当描述本申请的实施方式时，使用“优选的”、“优选地”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。除此之外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。

为了解决上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，包括以下步骤：

S01：细胞培养；

S02：细胞诱导分化；

S03：细胞分化程度判断。

在一些优选的实施方式中，S01步骤所述的细胞培养为人间充质干细胞培养。

在一些优选的实施方式中，S01步骤所述的细胞培养时间为1～2天。

在一些优选的实施方式中，S02步骤所述的细胞诱导分化通过加入诱导分化成脂试剂进行诱导。

诱导分化成脂试剂，购于以色列Biological Industries(BioInd)公司。

在一些优选的实施方式中，S02步骤中加入的诱导分化试剂每隔24～48小时更换一次。

在一些优选的实施方式中，S02步骤所述的诱导分化时间为7～9天。

在一些优选的实施方式中，S03步骤所述的细胞分化程度判断通过染色剂染色判断。

在一些优选的实施方式中，S03步骤中出现脂滴后加入染色剂进行细胞分化程度判断。

在一些优选的实施方式中，所述的染色剂选自脂溶性染色剂中的一种。

在一些优选的实施方式中，所述的脂溶性染色剂选自苏丹III、苏丹IV、甲基橙、苏丹红5B中的至少一种。

在一些优选的实施方式中，所述的脂溶性染色剂选自苏丹红5B。

苏丹红5B，购于以色列Biological Industries(BioInd)公司。

在一些优选的实施方式中，S01步骤所述的细胞培养采用的培养基为MM3培养基；所述的MM3培养基由血清替代物和间充质干细胞基础培养基组成。

间充质干细胞基础培养基，型号05-200-1A，购于以色列Biological Industries(BioInd)公司；血清替代物，型号EPAGMP-500，购于EliteCell生物医药集团公司。

在一些优选的实施方式中，所述的血清替代物和间充质干细胞基础培养基的体积比为1：18～21。

在一些优选的实施方式中，所述的血清替代物和间充质干细胞基础培养基的体积比为1：19。

经过申请人大量创造性实验探究证明，在本申请中选择以色列BiologicalIndustries(BioInd)公司的间充质干细胞基础培养基和EliteCell生物医药集团的血清替代物可以保证间充质干细胞迅速分化成脂，在分化成脂实验进行7天后，就可以通过显微镜观察到大面积脂滴出现，证明了此方法促使人间充质干细胞分化成脂的高效性。并且在血清替代物和间充质干细胞基础培养基体积比例限定的条件下，对人间充质干细胞进行培养，也避免了在培养过程中因为培养时间过长带来的细胞减少的现象的发生；也避免了在培养过程中空气中二氧化碳等物质对间充质干细胞培养的影响，保证了间充质干细胞分化成脂的可行性。

本发明的第二方面提供了一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法的应用，用于脐带、脂肪、胎盘、羊膜的间充质干细胞诱导分化成脂。

下面通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明作进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的专业技术人员根据上述本发明的内容做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售得到的。

实施例

实施例1

一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，包括以下步骤：

S01：细胞培养：将人间充质干细胞加入MM3培养基中进行培养1天。

S02：细胞诱导分化：向培养基中加入诱导分化成脂试剂对间充质干细胞进行诱导分化，诱导分化成脂试剂每隔48小时更换一次；诱导分化7天；

S03：细胞分化程度判断：分化后的细胞出现脂滴后，加入苏丹红5B对细胞分化程度进行鉴定。

MM3培养基为由血清替代物和间充质干细胞基础培养基组成的培养基；血清替代物和间充质干细胞基础培养基的体积比为1：19。

苏丹红5B，购于以色列Biological Industries(BioInd)公司；间充质干细胞基础培养基，型号05-200-1A，购于以色列Biological Industries(BioInd)公司；血清替代物，型号EPAGMP-500，购于EliteCell生物医药集团公司；诱导分化成脂试剂，购于以色列Biological Industries(BioInd)公司。

实施例2

一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1不同的是血清替代物和间充质干细胞基础培养基的体积比为1：15。

实施例3

一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1不同的是S02步骤中诱导分化的时间为10天。

实施例4

一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1不同的是S02步骤中诱导分化的时间为15天。

实施例5

一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成脂的方法，其具体实施方式同实施例1，与实施例1不同的是S01步骤中培养时间为3天。

性能测试：

1.脂滴面积：将实施例1-5方法得到的间充质干细胞分化成脂后的脂滴进行判断，通过平面光密度法对各组脂滴情况进行分析，将实施例1脂滴的面积记为1，其他实施例的数据以相对于实施例1的数据统计，并将实验结果统计于下表。

2.染色颜色判断：将实施例1-5方法以染色剂染色后对颜色进行判断，细胞分化成脂良好的染色后的颜色为红色或者橘红色；细胞分化不好的，颜色为浅红色；细胞不分化的染色后为无色，并将染色后颜色统计于下表。

最后指出，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。