LRIG-1蛋白的特异性结合分子及其用途
文献发布时间：2023-06-19 11:14:36
技术领域
本发明涉及能够与存在于调节性T细胞(T regulatory cell，Treg细胞)表面的Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白特异性结合的结合分子及其用途。
技术背景
所有正常个人中最重要的特性之一是有能力识别和消除非自身抗原，而不会对构成自身的抗原物质产生有害的反应。因此，生物体对自身抗原的无应答被称为免疫无应答性(immunologic unresponsiveness)或耐受性(tolerance)。自身耐受性的产生是通过清除可能具有自身抗原特异性受体的淋巴细胞，或通过接触自身抗原后反应能力的自我失活。如果在诱导或维持自身耐受方面出现问题，发生对自身抗原的免疫应答，并且由此产生的疾病称为自身免疫疾病(autoimmune disease)。
为了治疗自身免疫性疾病，Gershon在20世纪70年代初首次提出了抑制T细胞的概念(R.K.Gershon和K.Kondo，Immunology，1970,18：723-37)，提示了存在能够控制和抑制传统T细胞(conventional T cells)效应功能(effector functio)的T细胞的可能性。从那时起，已经进行了研究以阐明在免疫学的许多领域中调节性T细胞的生物学性质和功能。
在这方面，据报道，调节性T细胞(Treg细胞)在天然防止过度炎症和免疫应答的发生中起重要作用；然而，在发生自身免疫疾病和慢性炎症疾病的情况下，调节性T细胞的功能和数量显着降低。因此，在患者患有免疫和炎症性疾病的情况下，调节性T细胞以正常水平产生是很重要的，这可以成为这些疾病的治疗方法之一。
到目前为止，已经进行了关于特异性存在于调节性T细胞中的基因和蛋白质的研究，并且已经提出了如CD25、CTLA4、CD62L、CD38、CD103、GITR和CD45RB等物质可能与标记物质相对应。然而，没有基因和蛋白质可以仅靶向调节性T细胞。
另一方面，存在三个称为互补决定区域(complementarity determining region，以下称为“CDR”)的高变区和四个框架区域(framework region)。CDR主要作用是与抗原上的表位(epitope)结合。每种链的CDR通常从N-末端开始依次称为CDR1、CDR2和CDR3，并且还由特定CDR所在的链来区分。
技术问题
本发明的一个目的是提供一种存在于调节性T细胞表面(Treg细胞)的Lrig-1蛋白的特异性结合分子。
本发明的另一个目的是提供一种编码本发明的结合分子的核酸分子。
本发明的又一个目的是提供一种插入有本发明的核酸分子的表达载体。
本发明的又一个目的是提供一种用本发明的表达载体转染的宿主细胞系。
本发明的又一个目的是提供一种根据本发明的抗体-药物缀合物。
本发明的又一个目的是提供一种用于预防或治疗免疫相关疾病的药物组合物，其包含本发明的结合分子。
本发明的又一个目的是提供一种用于预防或治疗免疫相关疾病的方法，包括将本发明提供的药物有效量的结合分子或抗体-药物缀合物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)给予个体的步骤。
然而，本发明要解决的技术问题不限于上述问题，并且从以下描述中本领域技术人员将清楚地理解其他未提到的问题。
技术问题的解决方案
本发明人已经发现了特异性地存在于调节性T细胞表面的Lrig-1蛋白，在所述蛋白上选择了表位，并产生了能够与Lrig-1蛋白质特异性结合的单克隆抗体，从而完成了本发明。
根据本发明的一个实施方式，提供了一种结合分子，其特异性结合Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白。
如本文所用，术语“结合分子”是指包含完整免疫球蛋白的可变结构域，其包括单克隆抗体(例如嵌合、人源化或人单克隆抗体)，或者与抗原结合的免疫球蛋白(例如与完整(intact)免疫球蛋白竞争结合A型流感病毒的单体HA或三聚体HA的免疫球蛋白片段)。无论结构如何，抗原结合片段与完整(intact)免疫球蛋白识别的相同抗原结合。抗原结合片段可包括肽或多肽，其含有结合分子的氨基酸序列中的两个或更多个连续残基的氨基酸序列、20个或更多个连续氨基酸残基、25个或更多个连续氨基酸残基、30个或更多个连续氨基酸残基、35个或更多个连续氨基酸残基、40个或更多个连续氨基酸残基、50个或更多个连续氨基酸残基、60个或更多个连续氨基酸残基、70个或更多个连续氨基酸残基、80个或更多个连续氨基酸残基、90个或更多个连续氨基酸残基、100个或更多个连续氨基酸残基、125个或更多个连续氨基酸残基、150个或更多个连续氨基酸残基、175个或更多个连续氨基酸残基、200个或更多个连续氨基酸残基、或250个或更多个连续氨基酸残基。术语“抗原结合片段”，特别是包括Fab、F(AB')、F(AB')2、Fv、dAb、FD、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价(bivalent)单链抗体、单链噬菌体抗体、单抗体(unibody)、双抗体(diabody)、三抗体、四抗体、含有至少一个足以使特定抗原结合多肽的免疫球蛋白片段的多肽，等。所述片段可以合成或通过酶促或化学消化完整的免疫球蛋白生产，或者可以通过使用重组DNA技术通过基因工程方法生产。生产方法在本领域中是众所周知的。
在本发明中，Lrig-1蛋白质是存在于调节性T细胞表面上由1091个氨基酸组成的跨膜蛋白，并且由细胞外或腔侧的富含亮氨酸的重复(leucine-rich repeat,LRR)和三个免疫球蛋白样结构域，细胞跨膜序列和细胞质尾部组成。LRIG基因家族包括LRIG1、LRIG2和LRIG3，其间的氨基酸高度保守。LRIG1基因在正常皮肤中高度表达，可在基底细胞和毛囊细胞中表达以调节上皮干细胞的增殖。因此，LRIG1基因在维持表皮的稳态中起重要作用，并且其缺失可能会产生牛皮癣或皮肤癌。据报道，当LRIG1所在的染色体3p14.3部分被切断时，有可能发展成癌细胞。事实上，发现LRIG1在肾细胞癌和皮肤鳞状细胞癌中的表达明显降低。最近发现，仅有约20％至30％的癌症表达Lrig-1。另一方面，为了本发明的目的，Lrig-1蛋白可以是但不限于存在于人或小鼠中的蛋白质。
在本发明中，Lrig-1蛋白可以是但不限于由SEQ ID NO：1所示的人衍生的多肽或由SEQ ID NO：3所示的小鼠衍生的多肽。
另外，在本发明中，由SEQ ID NO：1所示的Lrig-1蛋白可以由SEQ ID NO：2所示的多核苷酸编码，但不限于此。
另外，在本发明中，由SEQ ID NO：3所示的Lrig-1蛋白可以由SEQ ID NO：4所示的多核苷酸编码，但不限于此。
在本发明中，所述结合分子可以是包括下述的结合分子：
重链可变区，其包含由选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：5、13、21和29组成的重链CDR1；由选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO:6、14、22和30组成的重链CDR2；由选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：7、15、23和31组成的重链CDR3；和
轻链可变区，其包含由选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：8、16、24和32组成的轻链CDR1；由选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：9、17、25和33组成的轻链CDR2；由选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、18、26和34组成的轻链CDR3。
在本发明中，所述结合分子可以是包括下述的结合分子：
重链可变区，其选自包含以下(a)至(d)的组：
(a)含有由SEQ ID NO：5所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：6所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：7所示的重链CDR3的重链可变区；
(b)含有由SEQ ID NO：13所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：14所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：15所示的重链CDR3的重链可变区；
(c)含有由SEQ ID NO：21所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：22所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：23所示的重链CDR3的重链可变区；和
(d)含有由SEQ ID NO：29所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：30所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：31所示的重链CDR3的重链可变区；以及
轻链可变区，其选自包含以下(e)至(h)的组：
(e)包含由SEQ ID NO：8所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：9所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：10所示的轻链CDR3的轻链可变区；
(f)包含由SEQ ID NO：16所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：17所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：18所示的轻链CDR3的轻链可变区；
(g)包含由SEQ ID NO：24所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：25所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：26所示的轻链CDR3的轻链可变区；
(h)包含由SEQ ID NO：32所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：33所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：34所示的轻链CDR3的轻链可变区。
在本发明中，所述结合分子可以是选自以下(1)至(4)中的结合分子：
(1)包含含有由SEQ ID NO：5所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：6所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：7所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：8所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：9所示的轻链CDR2，由SEQ ID NO：10所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子；
(2)包含含有由SEQ ID NO：13所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：14所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：15所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：16所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：17所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：18所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子；
(3)包含含有由SEQ ID NO：21所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：22所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：23所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：24所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：25所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：26所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子；
(4)包含含有由SEQ ID NO：29所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：30所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：31所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：32所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：33所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：34所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子。
在本发明中，所述结合分子可以是包括下述的结合分子：
重链可变区,其由选自下组的任何一种氨基酸序列组成:SEQ ID NO:11、19、27和35；和
轻链可变区，其由选自下组的任何一种氨基酸序列组成：SEQ ID NO:12、20、28和36。
在本发明中，所述结合分子可以是选自下组的结合分子：
(i)包含由SEQ ID NO:11所示的重链可变区，和由SEQ ID NO:12所示的轻链可变区的结合分子；
(ii)包含由SEQ ID NO:19所示的重链可变区，和由SEQ ID NO:20所示的轻链可变区的结合分子；
(iii)包含由SEQ ID NO:27所示的重链可变区，和由SEQ ID NO:28所示的轻链可变区的结合分子；和
(iv)包含由SEQ ID NO:35所示的重链可变区，和由SEQ ID NO:36所示的轻链可变区的结合分子。
在本发明中，所述结合分子可进一步包含片段结晶(Fc)区或恒定区。这里，Fc区可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc区，或者可以由此衍生。或者，Fc区可以是杂化Fc(hybrid Fc)区。
在本发明中，所述Fc区可以是哺乳动物衍生的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc区，并且可以优选为人衍生的IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc区。但是，本发明不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：37所示的小鼠衍生的IgG2a恒定区，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：38所示的小鼠衍生的免疫球蛋白κ(Kappa)恒定区域，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：39或53所示的人衍生的IgG1恒定区，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：40所示的人衍生的免疫球蛋白κ(Kappa)恒定区，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：41所示的人衍生的IgG2恒定区，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：42所示的人衍生的IgG3恒定区，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述恒定区可以是由SEQ ID NO：43所示的人衍生的IgG4恒定区域，但不限于此。
作为本发明的一个示例，所述Fc区可以是人衍生的免疫球蛋白λ恒定区，但不限于此。
在本发明中，所述“杂化Fc”可以源自人IgG亚类的组合或人IgD和IgG的组合。在杂化Fc与生物活性分子、多肽或类似物结合的情况下，杂化Fc不仅具有增加生物活性分子的血清半衰期的效果，而且当编码Fc-多肽融合蛋白的核苷酸序列被表达时，还增加了多肽的表达水平。
作为本发明的一个示例，所述杂化Fc区可以是由SEQ ID NO：44所示的杂化Fc，但不限于此。
在本发明的结合分子中，Fc或恒定区可以通过接头(linker)连接到可变区。这里，所述接头可以与Fc或恒定区的C末端连接，并且本发明的结合分子的N-末端可以与接头连接。但是，本发明不限于此。
在本发明中，所述“接头(linker)”可以含有可被在有靶疾病的组织或细胞中过表达的酶切割的序列。在如上所述的过表达酶可以裂解接头的情况下，可能会有效地防止多肽的活性因Fc或恒定区而减少。在本发明中，所述接头的实例可以优选地是肽接头，其由位于在血液中存在最丰富的人白蛋白的第282位至第314位部分的33个氨基酸组成，更优选地所述肽接头由位于人白蛋白的第292位至第304位部分的13个氨基酸组成。这一部分大多以三维结构暴露于外部，因此在体内诱导免疫反应的可能性最小。但是，所述接头不限于此。
本发明的结合分子可以进一步包含重链恒定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：37、39、41、42、43、44和53。
本发明的结合分子可以进一步包含轻链恒定区，其包含选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：38或40。
本发明的结合分子可以进一步包括：
由SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列组成的重链恒定区；和
由SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列组成的轻链恒定区。
本发明的结合分子可以进一步包括：
由SEQ ID NO：39、41、42、43和53所示的氨基酸序列组成的重链恒定区；和
由SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列组成的轻链恒定区。
本发明的结合分子可以进一步包括：
由SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列组成的重链恒定区。
本发明的结合分子可以是选自下组的结合分子：
包含由SEQ ID NO：45所示的重链，和由SEQ ID NO：46所示的轻链的结合分子；
包含由SEQ ID NO：47所示的重链，和由SEQ ID NO：48所示的轻链的结合分子；
包含由SEQ ID NO：49所示的重链，由SEQ ID NO：50所示的轻链的结合分子；和
包含由SEQ ID NO：51所示的重链，和由SEQ ID NO：52所示的轻链的结合分子。本发明的结合分子的特征在于是抗体，但不限于此。所述抗体包括所有单克隆抗体、全长抗体或作为抗体一部分的抗体片段，具有结合Lrig-1蛋白的能力，并且可以与本发明的结合分子竞争结合Lrig-1上的表位。
如本文所用，术语“抗体”是指用作特异性识别抗原的受体的蛋白质分子，包括与特定抗原具有免疫反应性的免疫球蛋白分子。为了本发明的目的，抗原可以是存在于调节性T细胞表面上的Lrig-1蛋白质。优选地，抗体可以特异性地识别Lrig-1蛋白的富含亮氨酸的区域或免疫球蛋白样结构域，但不限于此。
在本发明中，所述“免疫球蛋白”具有重链和轻链，并且每个重链和轻链包括恒定区和可变区。每个轻链和重链的可变区包含三个高变区，称为互补决定区域(下文中称为“CDR”)和四个框架区。CDR主要作用是与抗原上的表位结合。每种链的CDR通常从N-末端开始依次称为CDR1、CDR2和CDR3，并且还由特定CDR所在的链来区分。
另外，如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本相同的抗体群体获得的单分子组分的抗体分子，并且对特定表位具有单一结合特异性和亲和力。
在本发明中，所述“全长抗体”的结构中具有两个全长轻链和两个全长重链，其中每个轻链通过二硫键连接到重链，包括IgA、IgD、IgE、IgM和IgG。IgG包括其亚型，IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
另外，如本文所用，术语“抗原片段”是指保留抗原结合功能的片段，并且包括Fab、Fab'、F(ab')
此外，在本发明中，抗体可以是但不限于嵌合抗体、人源化抗体、二价抗体、双特异性分子、微抗体、域抗体、双特异性抗体、抗体模拟物、单抗体、双抗体、三抗体、或四抗体，或其片段。
在本发明中，“嵌合抗体”是通过重组小鼠抗体的可变区和人抗体的恒定区而获得的抗体，并且与小鼠抗体相比具有大大改善的免疫应答。
另外，如本文所用，术语“人源化抗体”是指通过改变衍生自非人类物种的抗体的蛋白质序列，使得蛋白质序列类似于在人体中天然产生的抗体变体而获得的抗体。例如，人源化抗体可以如下制备。可以用人抗体衍生的FR和小鼠衍生的CDR重组以制备人源化的可变区，并且人源化可变区可以与优选的人抗体的恒定区重组以制备人源化抗体。
在本发明中，结合分子可以以双特异性抗体或双特异性抗原结合片段的形式提供，其能够与Lrig-1蛋白结合并与另一种蛋白质结合。
在本发明中，双特异性抗体和双特异性抗原结合片段可包含本发明的结合分子。作为本发明的一个示例，双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包含能够结合Lrig-1蛋白质的抗原结合结构域，其中能够与Lrig-1蛋白结合的抗原结合结构域可包含或由本发明的结合分子组成。
本发明提供的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段包括抗原结合域，该抗原结合域是能够结合本发明所述Lrig-1蛋白的结合分子，以及能够结合另一个靶蛋白的抗原结合域。这里，能够结合另一种靶蛋白的抗原结合结构域可以是能够与除Lrig-1蛋白之外的蛋白质(例如PD-1或细胞表面受体)结合的抗原结合结构域。但是，所述抗原结合结构域不限于此。
本发明的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段可以以任何合适的形式提供，例如，在Kontermann Mabs 2012,4(2)：182-197中所述，其通过引用整体并入本文。例如，双特异性抗体或双特异性抗原结合片段可以是双特异性抗体缀合物(例如IgG2、F(ab’)2或CovX-体(CovX-body))、双特异性IgG或IgG样分子(例如IgG、scFv4-Ig、IgG-scFv、scFv-IgG、DVD-Ig、IgG-sVD、sVD-IgG，或2(in)1-IgG、mAb2或Tandemab通用LC)，不对称双特异性IgG或IgG样分子(例如，kih IgG、kih IgG通用LC、CrossMab、IgG-scFab、mAb-Fv、电荷对或SEED-体(SEED-body))，小双特异性抗体分子(例如双体抗体(Db)、dsDb、DART、scDb、tandAb、串联scFv(taFv)、串联dAb/VHH、三体、三头、Fab-scFv或F(ab’)2-scFv2)，双特异性Fc和CH3融合蛋白(例如taFv-Fc、双-双体抗体、scDb-CH 3、scFv-Fc-scFv、HCAb-VHH、scFv-kih-Fc或scFv-kih-CH3)，或双特异性融合蛋白(例如scFv2-白蛋白、scDb-白蛋白、taFv毒素、DNL-Fab3、DNL-Fab4-IgG、DNL-Fab4-IgG-细胞因子2)。特别地，参见Kontermann MABS2012,4(2)：182-19中的图2。根据本发明的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段可以由本领域技术人员设计和制备。
在本发明中制备双特异性抗体的方法包括形成还原二硫化物或非还原硫醚键，以及如上所述的抗体或抗体片段的化学交联，例如，在Segal和Bast，2001，双特异性抗体的生产，《免疫学最新实验方法》，14：IV：2.13：2.13.1-2.13.16中所述，其全部内容通过引用并入本文。例如，N-琥珀酰亚胺基-3-(-2-吡啶二硫基)-丙酸酯(SPDP)可以被用于例如通过铰链区的SH-基团化学交联Fab片段，以产生二硫化物连接的双特异性F(AB)2异二聚体。
另外，用于在本发明中制备双特异性抗体的替代方法包括将产生抗体的杂交瘤与例如聚乙二醇融合，以产生能够分泌双特异性抗体的杂交瘤细胞，如D.M.和Bast，B.J.2001，双特异性抗体的生产，《免疫学最新实验方法》，14：IV：2.13：2.13.1–2.13.16中所述。
根据本发明的双特异性抗体和双特异性抗原结合片段也可以通过，例如编码抗原结合分子的多肽的核酸构建体表达来重组生产，如《抗体工程：方法和方案》，第二版(Humana出版社，2012)，第40章：生产双特异性抗体：二抗体和串联scFv(Hornig和Farber-Schwarz)，或French，如何制备双特异性抗体，分子医学方法，2000；40：333-339中所述，两者在此通过引用整体并入本文。
例如，可以通过分子克隆技术制备DNA构建物，其包含编码两个抗原结合域的轻链和重链可变域序列(即，能够结合PD-1或类似的抗原结合域的轻链和重链可变域，和能够结合另一靶蛋白的抗原结合片段的轻链和重链可变域)，并包含编码在抗原结合域之间的合适的接头或二聚结构域的序列。随后，重组双特异性抗体可以通过在合适的宿主细胞(例如，哺乳动物宿主细胞)中的构建体(例如，在体外)表达生产，然后表达的重组双特异性抗体可以被任选地纯化。
抗体可以通过亲和成熟过程生产，其中生产的修饰抗体与未修饰的亲本抗体相比，具有改善的抗原亲和力。亲和成熟的抗体可以通过本领域已知的方法产生，例如，在Marks等，Rio/Technology，10：779-783(1992)；和Barbas等，美国科学院学报91：3809-3813(1994)；Schier等，基因169：147-155(1995)；Yelton等人，免疫杂志，155：1994-2004(1995)；Jackson等，免疫杂志154(7)：3310-159(1995)；以及Hawkins等，分子生物学杂志226:889-896(1992)中所述。
另外，本发明中提供的结合分子可包括氨基酸序列的变体，只要该变体可以特异性结合Lrig-1蛋白质。例如，为了改善抗体的结合亲和力和/或其他生物学性质，可以对抗体的氨基酸序列进行修饰。这种修饰包括例如抗体的氨基酸序列残基的缺失、插入和/或替代。
这种氨基酸变化是基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如疏水性、亲水性、电荷和大小。根据对氨基酸侧链取代基的大小、形状和类型的分析，可以看出精氨酸、赖氨酸和组氨酸是带正电荷的残基；丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸具有相似的大小；以及苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸具有相似的形状。因此，基于这些考虑，可以说精氨酸、赖氨酸和组氨酸；丙氨酸、甘氨酸和丝氨酸；以及苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸是生物功能性的等同物。
在引入变化时，可以考虑氨基酸的亲水性指数(hydropathic index)。每种氨基酸根据其疏水性和电荷分配了亲水性指数：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；和精氨酸(-4.5)。亲水性氨基酸指数在赋予蛋白质相互作用的生物学功能方面具有重要意义。已知用具有相似亲水性指数的氨基酸的取代使得蛋白质保留类似的生物活性。在参考亲水性指数引入变化的情况下，取代在亲水性指数差异优选在±2内，更优选在±1内，甚至更优选在±0.5内的氨基酸之间进行。
同时，众所周知，具有相似亲水性值的氨基酸之间的取代会导致具有等效生物活性的蛋白质。如在美国专利No.4,554,101中所公开的，各氨基酸残基已被分配以下亲水性值：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。在参考亲水性指数引入变体的情况下，取代在亲水性指数差异优选在±2内，更优选在±1内，甚至更优选在±0.5内的氨基酸之间进行。
在本领域中已知，蛋白质中的氨基酸交换不完全改变分子活性(H.Neurath，R.L.Hill，蛋白质，学术出版社，纽约(1979))。最常见的交换是氨基酸残基Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Gln/Glu之间的交换。
鉴于上述具有生物等效活性的变化，其可以被解释为本发明的结合分子还包括与序列表中列出的序列具有实质性同一性的序列。
如本文所用，术语“实质性同一性”是指当本发明的序列与任何其他序列比对时，序列显示至少61％的同源性，更优选70％的同源性，再更优选80％的同源性，最优选90％的同源性，使得它们最大限度地彼此对应，并且通过使用本领域通常使用的算法来分析比对序列。用于比较序列的比对方法是本领域已知的。用于比对的各种方法和算法在Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.2：482(1981)；Needleman和Wunsch，J.Mol.Bio.48：443(1970)；Pearson和Lipman，Methods in Mol.Biol.24：307-31(1988年)；HIGGINS和SHARP，GENE73：237-44(1988)；Higgins和Sharp,CABIOS5:151-3(1989)；Corpet等人，Nuc.Acids Res.16：10881-90(1988)；Huang等人，Comp.Appl.BioSci.8：155-65(1992)；和Pearson等人，Meth.Mol.Biol.24,307-31(1994)中公开。NCBI基本局部比对搜索工具(BLAST)(Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-10(1990))可从国家生物信息中心(NBCI)等访问，并且可以与互联网上的blastp、blasm、blastx、tblastn和tblastx相结合使用。BLSAT可在http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/中访问。序列同源性比较方法可以使用此程序在线识别(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast_help.html)。
在本发明中，结合分子优选抗体，可以通过生产抗体的传统方法生产，并且可以通过亲和成熟生产。
如本文所用，术语“亲和力成熟”是指在免疫反应过程中活化的B细胞产生对抗原具有增强亲和力的抗体的过程。出于本发明的目的，亲和力成熟允许抗体或抗体片段由于亲和力成熟而产生，这一亲和力成熟基于发生在自然界相同过程的突变和选择原则。
在本发明中提供的结合分子，优选抗体，可以激活在免疫细胞中，特别是调节性T免疫细胞(Treg细胞)的功能；增加Treg细胞的数量；并调节免疫耐受，从而有效地预防、改善或治疗免疫相关疾病。
在本发明中，“免疫相关疾病”可能是各种免疫细胞和炎症细胞过度激活和表达而引起的疾病。所述免疫相关疾病可以是，例如，包括自身免疫性疾病；移植物抗宿主疾病；器官移植排斥；哮喘；特应症(atopy)；或急性或慢性炎症性疾病，但不限于此。
此外，在本发明中，“自身免疫性疾病”可以是但不限于选自下组中的一种或多种：类风湿性关节炎、系统性硬皮病、系统性狼疮红斑、特应性皮炎、牛皮癣、斑秃、哮喘、克罗恩病、Behcet病、Sjogren综合征、Guillain-Barré综合征、慢性甲状腺炎、多发性硬化症、多发性肌炎、强直性脊柱炎、纤维状病和结节性多动脉炎。
根据本发明的另一个实施方式，提供了编码本发明中提供的结合分子的核酸分子。
本发明的核酸分子包括将本发明提供的结合分子的氨基酸序列翻译为多核苷酸序列而获得的所有核酸分子，正如本领域技术人员所知的。因此，通过开放阅读框(ORF)可以制备各种多核苷酸序列，并且所有这些多核苷酸序列也包含在本发明的核酸分子中。
根据本发明的又一个实施方式，提供了一种表达载体，其中插入了本发明中提供的分离的核酸分子。
在本发明中，“载体”是一种核酸分子，能够运输与之相连的另一种核酸。一种类型的载体是“质粒”，指环状双链DNA，其内可以连接额外的DNA片段。另一种类型的载体是噬菌体载体。另一种类型的载体是病毒载体，可以将额外的DNA片段连接到病毒基因组中。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中进行自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。在引入宿主细胞时，可以将其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)整合到宿主细胞的基因组中，从而与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们可操作地连接的基因的表达。这些载体在本文中称为“重组表达载体”或简单的“表达载体”。通常，可用于重组DNA技术的表达载体通常是质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可以互换使用，因为质粒是载体的最常用形式。
本发明中表达载体的具体实例可以选自但不限于下组：商业上广泛使用的PCDNA载体、F、R1、RP1、Col、pBR322、ToL、Ti载体；粘粒；噬菌体，如λ、人字型(lambdoid)、M13、Mu、p1 P22、Qμμ、T-even、T2、T3、T7；植物病毒。本领域技术人员已知的任何表达载体可作为表达载体用于本发明，并且根据靶宿主细胞的性质选择表达载体。宿主细胞中载体的导入可以通过磷酸钙转染、病毒感染、DEAE-葡聚糖介导的转染，脂质体转染或电穿孔来进行。但是，本发明不限于此，并且本领域技术人员可以采用和使用适合于使用的表达载体和宿主细胞的导入方法。载体可以优选含有至少一个选择标记。但是，本发明不限于此，并且根据是否生产产品，可以使用不包含选择标记的载体进行选择。根据靶标宿主细胞来选择选择标记，其使用本领域技术人员已知的方法进行，因此本发明在其上没有限制。
在本发明中，为了促进核酸分子的纯化，可以将标签序列插入并融合到表达载体中。所述标签包括但不限于六组氨酸标签、血凝素标签、myc标签或flag标签，以及本领域技术人员已知的任何标签，其便于纯化并可用于本发明。
根据本发明的又一个实施方式，提供了用本发明中提供的表达载体转染的宿主细胞系。
在本发明中，所述“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可以是或已经是多肽插入物掺入载体的受体(recipient)。宿主细胞包括单个宿主细胞的子代，并且由于自然的、偶然的或有意的突变，子代不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态或基因组DNA补体上)。宿主细胞包括用本文的多核苷酸在体内转染的细胞。
在本发明中，宿主细胞可包括哺乳动物、植物、昆虫、真菌或细胞来源的细胞，并且可以是例如细菌细胞，如大肠杆菌、链霉菌、鼠伤寒沙门氏菌；真菌细胞如酵母细胞和毕赤酵母(Pichia pastoris)；昆虫细胞如果蝇和夜蛾Sf9细胞；动物细胞如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、SP2/0(小鼠骨髓瘤)、人淋巴细胞、COS、NSO(小鼠骨髓瘤)、293T、鲍氏黑色素瘤细胞、HT-1080、幼仓鼠肾(baby hamster kidney，BHK)细胞、人胚胎肾(HEK)细胞，或PERC.6(人视网膜细胞)；或植物细胞。但是，所述宿主细胞不限于此，并且可以使用本领域技术人员已知的任何细胞用作宿主细胞系。
在本发明中，转染方法可以是将所需载体注入宿主细胞中的任何方法，并且包括能够将载体注入宿主细胞中的任何已知方法。转染方法的实例可以包括但不限于，CaCl
根据本发明的又一个实施方式，提供了包含本发明中提供的抗体和药物的抗体-药物缀合物(ADC)。
如本文所用，术语“抗体-药物缀合物(ADC)”是指药物和抗体彼此化学连接，而不会降低抗体和药物的生物活性的形式。在本发明中，抗体-药物缀合物表示一种药物与抗体的重链和/或轻链的N-末端氨基酸残基结合的形式，具体地，一种药物与抗体的重链和/或轻链的N-末端的α-胺基结合的形式。
如本文所用，术语“药物”可以指具有对细胞有某种生物活性的任何物质，这一概念包括DNA、RNA或肽。所述药物可以具有包含能够与α-胺基反应并交联的反应基团的形式，还包括包含能够与α-胺基反应并交联的反应基团并与接头相连的形式。
在本发明中，能够与α-胺基进行反应和交联的反应性基团的实例的类型没有特别限制，只要反应性基团可以与抗体的重链或轻链N-末端的α-胺基反应和交联。反应性基团包括本领域已知的与胺基反应的所有类型。反应性基团可以是例如异硫氰酸酯、异氰酸酯、酰基叠氮化物、NHS酯、磺酰氯、醛、乙二醛、环氧化物、环氧乙烷、碳酸盐、芳基卤化物、亚胺酯、碳二酰亚胺、酸酐和氟苯基酯中的任何一个，但是不限于此。
在本发明中，所述药物包含任何药物，无论何种类型，只要所述药物可以治疗Lrig-1抗体靶向的疾病，并且可以优选包括用于免疫相关疾病(例如自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥、哮喘、特应症、急性或慢性炎症疾病等)的治疗剂。
根据本发明的又一个实施方式，提供了用于预防或治疗免疫相关疾病的药物组合物，其包含在本发明中提供的结合分子或抗体-药物缀合物(ADC)作为活性成分。
在本发明中提供的结合分子，优选抗体，可以激活免疫细胞中，特别是调节性T免疫细胞(Treg细胞)的功能；增加Treg细胞的数量；并调节免疫耐受，从而有效地预防、改善或治疗免疫相关疾病。
在本发明中，所述“免疫相关疾病”可以是各种免疫细胞和炎症细胞过度激活和表达而引起的疾病。免疫相关疾病可以是，例如，包括自身免疫性疾病；移植物抗宿主疾病；器官移植排斥；哮喘；特应症；或急性或慢性炎症性疾病，但不限于此。
此外，在本发明中，“自身免疫性疾病”可以是但不限于选自下组中的一种或多种：类风湿性关节炎、系统性硬皮病、系统性狼疮红斑、特应性皮炎、牛皮癣、斑秃、哮喘、克罗恩病、Behcet病、Sjogren综合征、Guillain-Barré综合征、慢性甲状腺炎、多发性硬化症、多发性肌炎、强直性脊柱炎、纤维状病和结节性多动脉炎。
另一方面，在本发明中，所述“预防”可以包括但不限于，任何使用本发明的药物组合物阻断疾病症状、或抑制或延缓疾病症状的行为。
另外，在本发明中，所述“治疗”可以包括但不限于，任何使用本发明的药物组合物改善或有利地改变疾病症状的行为。
在本发明中，所述药物组合物的特征可以为胶囊、片剂、颗粒剂、注射剂、软膏、粉末或饮料的形式，并且所述药物组合物的特征可以是靶向人体的。
在本发明中，所述药物组合物可以以口服制剂的形式配制，如粉末、颗粒剂、胶囊、片剂和水悬液，按照常规方法分别以外用制剂、栓剂和无菌注射溶液的形式制备并使用。但是，所述药物组合物不限于此。本发明的药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体。作为药学上可接受的载体，粘合剂、助溶剂、崩解剂、赋形剂、增溶剂、分散剂、稳定剂、悬浮剂、颜料、香料等可用于口服给药；缓冲液、保存剂、疼痛缓解剂、增溶剂、等渗剂、稳定剂等可用于注射混合物；以及碱、赋形剂、润滑剂、保存剂等可用于局部给药。通过与如上所述的药学上可接受的载体混合，可以以各种方式制备本发明的药物组合物的制剂。例如，对于口服给药，药物组合物可以以片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、晶片等形式配制。对于注射，药物组合物可以以单位剂量安瓿或多种剂型的形式配制。或者，可以将药物组合物配制成溶液、悬浮液、片剂、胶囊、缓释制剂等。
同时，作为适于制备制剂的载体、稀释剂或赋形剂的例子，乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶(gum acacia)、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡啶酮、水、羟苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁、矿物油等可以被使用。另外，还可以包括填料、抗凝血剂、润滑剂、润湿剂、香料、乳化剂、防腐剂等。
本发明的药物组合物的给药途径包括但不限于口服、静脉、肌肉内、动脉内、髓内、硬膜内、心内、经皮、皮下、腹腔内、鼻腔内、肠道、局部、舌下或直肠途径。口服或肠胃外给药是优选的。
在本发明中，所述“肠胃外”包括皮下、皮内、静脉、肌肉内、关节内、囊内、胸骨内、硬膜内、病灶内和颅内注射或输液技术。本发明的药物组合物也可以以栓剂的形式用于直肠给药。
本发明的药物组合物可以根据各种因素而变化，包括所使用的某种化合物的活性、患者年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合，以及待预防或治疗某种疾病的严重程度。药物组合物的剂量取决于患者的病症、体重、疾病严重程度、药物形式、给药途径和持续时间，并且可以由本领域技术人员适当地选择。药物组合物可以每天以0.0001至50mg/kg或0.001至50mg/kg施用。给药可以每天一次或每天几次。剂量不旨在任何情况下限制本发明的范围。本发明的药物组合物可以以药丸、糖衣片剂、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆料或悬浮液的形式配制。
根据本发明的又一个实施方式，提供了一种用于预防、改善或治疗免疫相关疾病的方法，其包含给药步骤，给予个体药学上有效量的本发明提供的结合分子或抗体-药物缀合物(ADC)。
在本发明中提供的结合分子，优选抗体，可以激活免疫细胞中，特别是调节性T免疫细胞(Treg细胞)的功能；增加Treg细胞的数量；并调节免疫耐受，从而有效地预防、改善或治疗免疫相关疾病。
在本发明中，所述“个体”是疑似患有免疫相关疾病的个体，并且所述疑似患有癌症或免疫相关疾病的个体是哺乳动物，例如人类、小鼠和家畜，其已经发展或可能发展为所讨论的疾病。但是，包括但不限于施用本发明中提供的结合分子或抗体-药物缀合物的任何个体。
本发明的方法可包括施用药学上有效量的本发明提供的结合分子或抗体-药物缀合物。合适的每日施用总量可以由参与的医师或兽医在适当的医疗判断范围内决定，并且可以分一次或几次进行给药。然而，出于本发明的目的，特定患者的特异性治疗有效量优选地根据各种因素不同地应用，所述因素包括要达到的类型和反应程度，包含上述特异性活性成分的组合物，包括是否视情况与其他药剂一起使用、患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药时间、给药途径、包含上述特异性活性成分的组合物的分泌率、治疗持续时间，以及同时使用的药物或与特定组合物联合使用，以及医学领域中众所周知的类似因素。
同时，用于预防或治疗免疫相关疾病的方法可以是但不限于联合疗法，包括进一步施用对一个或多个疾病具有治疗活性的化合物或物质。
在本发明中，“联合”应理解为表示同时、单独或顺序给药。在顺序或单独的方式给药的情况下，应间隔施用第二组分，使其不失去联合的有益效果。
在本发明中，所述结合分子或抗体-药物缀合物(ADC)的剂量可以是但不限于约0.0001μg至500mg每千克患者体重。
发明的有益效果
根据本发明特异性结合Lrig-1蛋白的结合分子，优选抗体，能激活特别是激活免疫细胞中的调节性T免疫细胞(Treg细胞)的功能；增加Treg细胞的数量；并调节免疫耐受，从而有效地预防、改善或治疗由于各种免疫细胞和炎性细胞过度活化和表达而诱导的疾病，例如免疫相关疾病如自身免疫疾病；移植物抗宿主疾病；器官移植排斥；哮喘；特应症；或急性或慢性炎症疾病。
另外，根据本发明的特异性结合Lrig-1蛋白结合分子，优选抗体，与过去商业上可购买的Lrig-1的抗体相比，具有更有效地靶向Lrig-1蛋白的优点，还具有非常好的与之结合的能力。
附图简要说明
图1示出了根据本发明实施例的Lrig-1蛋白的结构。
图2示出了根据本发明实施例的Lrig-1蛋白的结构。
图3示出了根据本发明实施例的Lrig-1蛋白表位的预测结果。
图4示出了根据本发明实施例的Lrig-1蛋白表位的预测结果。
图5示出了根据本发明实施例的Lrig-1mRNA的表达水平。
图6示出了根据本发明实施例的Lrig-1mRNA的表达水平。
图7示出了根据本发明实施例的Lrig-1mRNA的表达水平。
图8示出了根据本发明实施例的Lrig-1、Lrig-2和Lrig-3mRNA的表达水平。
图9示出了根据本发明实施例比较调节性T细胞和非调节性T细胞中Lrig-1蛋白的表达水平获得的结果。
图10示出了根据本发明实施例中的调节性T细胞表面上的Lrig-1蛋白的表达。
图11示出了根据本发明实施例，通过分析Lrig-1蛋白质特异性单克隆抗体(A7，C8，E7和G3)与Lrig-1蛋白的结合能力获得的结果。
图12示出了根据本发明的实施例，通过分析Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(A7、C8、E7和G3)在调节性T细胞中调节Lrig-1蛋白诱导的STAT3磷酸化的机制而获得的结果。
图13示出了根据本发明的实施例，通过分析Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(A7、C8、E7和G3)对自身免疫疾病的治疗效果获得的结果。
具体实施方式
根据本发明的一个实施方式，提供了选自以下(1)至(4)中的结合分子：
(1)包含含有由SEQ ID NO：5所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：6所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：7所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：8所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：9所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：10所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子；
(2)包含含有由SEQ ID NO：13所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：14所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：15所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：16所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：17所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：18所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子；
(3)包含含有由SEQ ID NO：21所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：22所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：23所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：24所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：25所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：26所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子；
4)包含含有由SEQ ID NO：29所示的重链CDR1，由SEQ ID NO：30所示的重链CDR2，和由SEQ ID NO：31所示的重链CDR3的重链可变区；以及含有由SEQ ID NO：32所示的轻链CDR1，由SEQ ID NO：33所示的轻链CDR2，和由SEQ ID NO：34所示的轻链CDR3的轻链可变区的结合分子。
在下文中，将通过实施例更详细地描述本发明。这些实施例仅用于更详细地描述本发明，对于本领域技术人员显而易见的是，根据本发明的主旨，本发明的范围不受这些实施例的限制。
实施例
为了鉴定Lrig-1蛋白是否仅在调节性T细胞(Treg)中表达，制备了T细胞的亚群，Th0、Th1、Th2、Th17和iTreg。iTreg是指在含有下列组合物的培养基中人工诱导分化的细胞，不像nTreg是自然分离出来的。
诱导T细胞的亚群分化成各种细胞，首先通过从小鼠脾脏分离初始
[表1]
预测Lrig-1蛋白的细胞外结构域的三维空间结构，以产生针对Lrig-1蛋白的抗体，一种调节性T细胞的表面蛋白。
首先，为了预测表位(epitope)的基础序列，Uniprot(http://www.uniprot.org)和RCSB蛋白质数据库(http://www.rcsb.org/pdb)的工具用于预测Lrig-1蛋白的细胞外结构域(ECD)的三维空间结构，使ECD的结构被鉴定出来。然后，结果如图1和图2所示。
如图1中所示，在Lrig-1蛋白的细胞外结构域中，有LRR1至LRR15的共15个亮氨酸富集区存在于Lrig-LRR结构域(41至494位的氨基酸序列)中。每个LRR结构域由23至27个氨基酸组成，存在3至5个亮氨酸。
另外，如图2所示，在Lrig-1蛋白的细胞外结构域中，三种免疫球蛋白样结构域存在于Lrig-1蛋白的氨基酸序列的494-781位处。
使用Ellipro服务器(http://tools.iedb.org/ellipro/)进行上述碱基序列的预测，这是基于Lrig-1蛋白的结构的表位预测软件。使用Ellipro搜索引擎，因为已知它对应于现存预测表位的算法中最可靠的搜索引擎。
将实施例1中分析的细胞外结构域输入到表位预测软件中，然后在图3和4中示出了预测表位的连续或不连续的氨基酸序列。
如图3和图4所示，预测了总共22个连续表位氨基酸序列，以及预测了总共8个不连续的表位氨基酸序列。
生产根据本发明的Lrig-1蛋白特异性抗体。本发明的抗体不是通过指定特定的表位产生，而是作为能够与Lrig-1蛋白质上的任何位点结合的抗体产生。
为了生产抗体，制备了表达Lrig-1蛋白的细胞。更具体地，对应于SEQ ID NO：2的DNA片段和pcDNA(hygro)用裂解酶切割，在37℃下孵育，并连接以产生插入Lrig-1蛋白的DNA序列的pcDNA。由此产生的插有SEQ ID NO：2的pcDNA通过转染导入L细胞，使Lrig-1蛋白质在L细胞的表面上表达。
从人scFV文库中选择能够结合细胞表面表达的Lrig-1的轻链和重链氨基酸序列，从而总共选择了八个重链和轻链。
将所选择的重链和轻链氨基酸序列与mlgG2a Fc区融合，以产生单克隆抗体。单克隆抗体的序列示于下表2中。
[表2]
验证Lrig-1蛋白是否可以作为调节性T细胞的生物标志物。
对于验证，使用磁体活化的细胞分选(MACS)通过CD4珠子从大鼠的脾脏分离CD4
进行实时聚合酶链反应(RT PCR)以定量鉴定cDNA中Lrig-1mRNA的表达水平。
使用下表3所示的引物，按照供应商提供的实验方案使用SYBR Green(分子探针)在40次循环(包括95℃下3分钟，61℃下15秒，72℃下30秒)条件下进行实时聚合酶链反应，通过ΔΔCT方法计算相对基因表达水平，并使用HPRT标准化。结果如图5到图8所示。
[表3]
如图5中所示，可以看出，调节性T(CD4
另外，如图6和图7所示，与其他类型的免疫细胞相比，Lrig-1mRNA的表达在调节T细胞中非常高，特别是与诱导的调节性T细胞(iTreg细胞)相比，在天然分离的调节性T细胞(nTreg)中非常高。
另外，如图8所示，Lrig-1的表达在对应于Lrig家族的Lrig-1、Lrig-2和Lrig-3中最高。
根据上述结果，可以看出，根据本发明的Lrig-1蛋白在调节性T细胞，特别是天然存在的调节性T细胞中特异性地表达。
鉴定了从Lrig-1mRNA表达的Lrig-1蛋白是否只在调节性T细胞中特异性表达。
使用FOXP3-RFP敲入小鼠，FOXP3-RFP是通过将红色荧光蛋白(RFP)偶联到FOXP3启动子(一种调节性T细胞特异性的转录因子)而获得，使用磁体活化细胞分选(MACS)，通过CD4珠子在小鼠的脾脏中分离CD4
如图9中所示，由虚线表示的非调节性T细胞显示出与阴性对照几乎相同的Lrig-1的表达水平，而在调节性T细胞中有大量Lrig-1高表达水平的细胞。
根据上述结果，可以看出，本发明的Lrig-1蛋白在调节性T细胞中特异性地表达。
从旨在成为细胞疗法靶标的观点来看，Lrig-1蛋白必须在调节性T细胞表面上表达，这反过来又允许更有效的靶向疗法，鉴定了Lrig-1蛋白是否在调节性T细胞的表面上表达。
制备实施例1的各分化的T细胞亚群用抗CD4-APC和抗Lrig-1-PE抗体染色，使用荧光激活的细胞分选仪(FACS)测量Lrig-1在各个细胞表面上的表达水平。结果如图10所示。
如图10中所示，在激活的T细胞、Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和初始T细胞中，Lrig-1的表达量为0.77-15.3，而Lrig-1在分化诱导的T细胞中的表达高达83.9(iTreg细胞)。
根据上述结果，可以看出，本发明的Lrig-1蛋白不仅在调节性T(Treg)细胞中特异性表达，而且特别地，在Treg细胞上也较高水平地表达。
为了鉴定在生产实施例1至8中制备的本发明的单克隆抗体是否能很好识别Lrig-1，将生产实施例1至8的每种抗体结合到稳定表达Lrig-1的L细胞。然后，加入与eFlour 670缀合并能识别小鼠抗体的二抗，然后用FACS分析单克隆抗体与Lrig-1蛋白的结合能力。结果如图11所示。
如图11中所示，发现根据本发明的所有Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(A7、C8、E7和G3)都能有效地识别并结合存在于L细胞表面上的Lrig-1蛋白。
为了分析在生产实施例1至8中制备的根据本发明的单克隆抗体如何通过Lrig-1蛋白影响Treg细胞中的信号转导通路，使用生产实施例1至8中的抗体处理Treg细胞来刺激存在于Treg细胞表面上的Lrig-1，然后通过磷酸酪氨酸免疫印迹分析刺激的Treg细胞中的Stat3蛋白的酪氨酸磷酸化水平。结果如图12所示。
如图12中所示，发现根据本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(A7、C8、E7和G3)增加Stat3的磷酸化水平与TH17细胞相同。
为了鉴定根据本发明的生产实施例1至4中制备的单克隆抗体(A7、C8、E7和G3)在自身免疫疾病中的治疗效果，用CD45RB(高)细胞过继转移处理RAG-1
如图13中所示，发现根据本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体(A7、C8、E7和G3)显著抑制炎性肠病诱导小鼠中的体重减轻作用。
由此，可以看出，根据本发明的Lrig-1蛋白特异性单克隆抗体能够有效地预防、改善或治疗由多种免疫细胞和炎症细胞过度激活和表达引起的免疫相关疾病，例如自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥反应、哮喘、特应症、或急性或慢性炎性疾病。
尽管以上已经详细描述了本发明，但是本发明的范围不限于此。对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离权利要求中描述的本发明的技术精神的情况下可以进行各种修改和改变。
工业实用性
本发明涉及能够与存在于调节性T细胞表面(Treg细胞)的Lrig-1(富含亮氨酸和免疫球蛋白样结构域1)蛋白特异性结合的结合分子及其用途，具体地，预防或治疗免疫相关疾病，例如自身免疫疾病、移植物抗宿主疾病、器官移植排斥、哮喘、特应症或急性或慢性炎症疾病。
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Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asp Cys Gly Gly Arg Gly Leu Ala Ala Leu Pro Gly Asp Leu Pro
20 25 30
Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Lys Leu Ser Glu Ile
35 40 45
Asp Pro Ala Gly Phe Glu Asp Leu Pro Asn Leu Gln Glu Val Tyr Leu
50 55 60
Asn Asn Asn Glu Leu Thr Ala Val Pro Ser Leu Gly Ala Ala Ser Ser
65 70 75 80
His Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Arg Ser Val Glu
85 90 95
Gly Ser Gln Leu Lys Ala Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp Leu Ser
100 105 110
Leu Asn Asn Ile Thr Glu Val Arg Asn Thr Cys Phe Pro His Gly Pro
115 120 125
Pro Ile Lys Glu Leu Asn Leu Ala Gly Asn Arg Ile Gly Thr Leu Glu
130 135 140
Leu Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu Arg Leu
145 150 155 160
Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Arg Ala Phe Lys Leu Pro
165 170 175
Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg Leu Ile Glu
180 185 190
Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asn Ser Leu Glu Val Leu Lys Leu Gln
195 200 205
Arg Asn Asn Ile Ser Lys Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly Leu Ser
210 215 220
Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu Val Asn
225 230 235 240
Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His Leu Ser
245 250 255
Asn Asn Ser Ile Ala Arg Ile His Arg Lys Gly Trp Ser Phe Cys Gln
260 265 270
Lys Leu His Glu Leu Val Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg Leu Asp
275 280 285
Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Val Leu Arg Leu Ser
290 295 300
His Asn Ser Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys Gly Leu Arg
305 310 315 320
Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser Gly Thr Ile
325 330 335
Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Ser Gly Leu Asp Ser Leu Ser Lys Leu
340 345 350
Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala Lys Arg Ala Phe Ser
355 360 365
Gly Leu Glu Gly Leu Glu His Leu Asn Leu Gly Gly Asn Ala Ile Arg
370 375 380
Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Val Lys Met Lys Asn Leu Lys Glu Leu
385 390 395 400
His Ile Ser Ser Asp Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu Lys Trp Leu
405 410 415
Pro Pro Trp Leu Ile Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val Thr Ala Thr
420 425 430
Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe Ser Val Pro
435 440 445
Pro Glu Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Leu Lys Pro Gln Ile Ile Thr
450 455 460
Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Met Val Gly Lys Asp Ile Arg Phe Thr
465 470 475 480
Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe Ala Trp Lys
485 490 495
Lys Asp Asn Glu Val Leu Thr Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe Val His
500 505 510
Val His Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr Ile Leu His
515 520 525
Leu Arg Gln Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln Cys Val Ile
530 535 540
Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg Leu Thr Val
545 550 555 560
Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Thr Pro His Asp Ile Thr Ile Arg
565 570 575
Thr Thr Thr Val Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly His Pro Asn
580 585 590
Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe Pro Ala Ala
595 600 605
Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe Phe Ile
610 615 620
Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Ala Gly Val Tyr Ser Cys Thr Ala Gln
625 630 635 640
Asn Ser Ala Gly Ser Ile Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr Val Leu Glu
645 650 655
Thr Pro Ser Leu Val Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Ser Val Gly
660 665 670
Glu Thr Val Ala Leu Gln Cys Lys Ala Thr Gly Asn Pro Pro Pro Arg
675 680 685
Ile Thr Trp Phe Lys Gly Asp Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu Arg His
690 695 700
His Leu Thr Pro Asp Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val Val Ala
705 710 715 720
Glu Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Thr Leu Gly Thr
725 730 735
Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Val Leu Pro Ala Ala Gly Cys Arg
740 745 750
Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly
755
<210> 2
<211> 2397
<212> DNA
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 2
ggcccgcggg cgccctgcgc ggccgcctgc acttgcgctg gggactcgct ggactgcggt 60
gggcgcgggc tggctgcgtt gcccggggac ctgccctcct ggacgcggag cctaaacctg 120
agttacaaca aactctctga gattgaccct gctggttttg aggacttgcc gaacctacag 180
gaagtgtacc tcaataataa tgagttgaca gcggtaccat ccctgggcgc tgcttcatca 240
catgtcgtct ctctctttct gcagcacaac aagattcgca gcgtggaggg gagccagctg 300
aaggcctacc tttccttaga agtgttagat ctgagtttga acaacatcac ggaagtgcgg 360
aacacctgct ttccacacgg accgcctata aaggagctca acctggcagg caatcggatt 420
ggcaccctgg agttgggagc atttgatggt ctgtcacggt cgctgctaac tcttcgcctg 480
agcaaaaaca ggatcaccca gcttcctgta agagcattca agctacccag gctgacacaa 540
ctggacctca atcggaacag gattcggctg atagagggcc tcaccttcca ggggctcaac 600
agcttggagg tgctgaagct tcagcgaaac aacatcagca aactgacaga tggggccttc 660
tggggactgt ccaagatgca tgtgctgcac ctggagtaca acagcctggt agaagtgaac 720
agcggctcgc tctacggcct cacggccctg catcagctcc acctcagcaa caattccatc 780
gctcgcattc accgcaaggg ctggagcttc tgccagaagc tgcatgagtt ggtcctgtcc 840
ttcaacaacc tgacacggct ggacgaggag agcctggccg agctgagcag cctgagtgtc 900
ctgcgtctca gccacaattc catcagccac attgcggagg gtgccttcaa gggactcagg 960
agcctgcgag tcttggatct ggaccataac gagatttcgg gcacaataga ggacacgagc 1020
ggcgccttct cagggctcga cagcctcagc aagctgactc tgtttggaaa caagatcaag 1080
tctgtggcta agagagcatt ctcggggctg gaaggcctgg agcacctgaa ccttggaggg 1140
aatgcgatca gatctgtcca gtttgatgcc tttgtgaaga tgaagaatct taaagagctc 1200
catatcagca gcgacagctt cctgtgtgac tgccagctga agtggctgcc cccgtggcta 1260
attggcagga tgctgcaggc ctttgtgaca gccacctgtg cccacccaga atcactgaag 1320
ggtcagagca ttttctctgt gccaccagag agtttcgtgt gcgatgactt cctgaagcca 1380
cagatcatca cccagccaga aaccaccatg gctatggtgg gcaaggacat ccggtttaca 1440
tgctcagcag ccagcagcag cagctccccc atgacctttg cctggaagaa agacaatgaa 1500
gtcctgacca atgcagacat ggagaacttt gtccacgtcc acgcgcagga cggggaagtg 1560
atggagtaca ccaccatcct gcacctccgt caggtcactt tcgggcacga gggccgctac 1620
caatgtgtca tcaccaacca ctttggctcc acctattcac ataaggccag gctcaccgtg 1680
aatgtgttgc catcattcac caaaacgccc cacgacataa ccatccggac caccaccgtg 1740
gcccgcctcg aatgtgctgc cacaggtcac ccaaaccctc agattgcctg gcagaaggat 1800
ggaggcacgg atttccccgc tgcccgtgag cgacgcatgc atgtcatgcc ggatgacgac 1860
gtgtttttca tcactgatgt gaaaatagat gacgcagggg tttacagctg tactgctcag 1920
aactcagccg gttctatttc agctaatgcc accctgactg tcctagagac cccatccttg 1980
gtggtcccct tggaagaccg tgtggtatct gtgggagaaa cagtggccct ccaatgcaaa 2040
gccacgggga accctccgcc ccgcatcacc tggttcaagg gggaccgccc gctgagcctc 2100
actgagcggc accacctgac ccctgacaac cagctcctgg tggttcagaa cgtggtggca 2160
gaggatgcgg gccgatatac ctgtgagatg tccaacaccc tgggcacgga gcgagctcac 2220
agccagctga gcgtcctgcc cgcagcaggc tgcaggaagg atgggaccac ggtaggcatc 2280
ttcaccattg ctgtcgtgag cagcatcgtc ctgacgtcac tggtctgggt gtgcatcatc 2340
taccagacca ggaagaagag tgaagagtac agtgtcacca acacagatga aaccgtc 2397
<210> 3
<211> 761
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 3
Gln Ala Gly Pro Arg Ala Pro Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Ala Gly
1 5 10 15
Asp Ser Leu Asp Cys Ser Gly Arg Gly Leu Ala Thr Leu Pro Arg Asp
20 25 30
Leu Pro Ser Trp Thr Arg Ser Leu Asn Leu Ser Tyr Asn Arg Leu Ser
35 40 45
Glu Ile Asp Ser Ala Ala Phe Glu Asp Leu Thr Asn Leu Gln Glu Val
50 55 60
Tyr Leu Asn Ser Asn Glu Leu Thr Ala Ile Pro Ser Leu Gly Ala Ala
65 70 75 80
Ser Ile Gly Val Val Ser Leu Phe Leu Gln His Asn Lys Ile Leu Ser
85 90 95
Val Asp Gly Ser Gln Leu Lys Ser Tyr Leu Ser Leu Glu Val Leu Asp
100 105 110
Leu Ser Ser Asn Asn Ile Thr Glu Ile Arg Ser Ser Cys Phe Pro Asn
115 120 125
Gly Leu Arg Ile Arg Glu Leu Asn Leu Ala Ser Asn Arg Ile Ser Ile
130 135 140
Leu Glu Ser Gly Ala Phe Asp Gly Leu Ser Arg Ser Leu Leu Thr Leu
145 150 155 160
Arg Leu Ser Lys Asn Arg Ile Thr Gln Leu Pro Val Lys Ala Phe Lys
165 170 175
Leu Pro Arg Leu Thr Gln Leu Asp Leu Asn Arg Asn Arg Ile Arg Leu
180 185 190
Ile Glu Gly Leu Thr Phe Gln Gly Leu Asp Ser Leu Glu Val Leu Arg
195 200 205
Leu Gln Arg Asn Asn Ile Ser Arg Leu Thr Asp Gly Ala Phe Trp Gly
210 215 220
Leu Ser Lys Met His Val Leu His Leu Glu Tyr Asn Ser Leu Val Glu
225 230 235 240
Val Asn Ser Gly Ser Leu Tyr Gly Leu Thr Ala Leu His Gln Leu His
245 250 255
Leu Ser Asn Asn Ser Ile Ser Arg Ile Gln Arg Asp Gly Trp Ser Phe
260 265 270
Cys Gln Lys Leu His Glu Leu Ile Leu Ser Phe Asn Asn Leu Thr Arg
275 280 285
Leu Asp Glu Glu Ser Leu Ala Glu Leu Ser Ser Leu Ser Ile Leu Arg
290 295 300
Leu Ser His Asn Ala Ile Ser His Ile Ala Glu Gly Ala Phe Lys Gly
305 310 315 320
Leu Lys Ser Leu Arg Val Leu Asp Leu Asp His Asn Glu Ile Ser Gly
325 330 335
Thr Ile Glu Asp Thr Ser Gly Ala Phe Thr Gly Leu Asp Asn Leu Ser
340 345 350
Lys Leu Thr Leu Phe Gly Asn Lys Ile Lys Ser Val Ala Lys Arg Ala
355 360 365
Phe Ser Gly Leu Glu Ser Leu Glu His Leu Asn Leu Gly Glu Asn Ala
370 375 380
Ile Arg Ser Val Gln Phe Asp Ala Phe Ala Lys Met Lys Asn Leu Lys
385 390 395 400
Glu Leu Tyr Ile Ser Ser Glu Ser Phe Leu Cys Asp Cys Gln Leu Lys
405 410 415
Trp Leu Pro Pro Trp Leu Met Gly Arg Met Leu Gln Ala Phe Val Thr
420 425 430
Ala Thr Cys Ala His Pro Glu Ser Leu Lys Gly Gln Ser Ile Phe Ser
435 440 445
Val Leu Pro Asp Ser Phe Val Cys Asp Asp Phe Pro Lys Pro Gln Ile
450 455 460
Ile Thr Gln Pro Glu Thr Thr Met Ala Val Val Gly Lys Asp Ile Arg
465 470 475 480
Phe Thr Cys Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Met Thr Phe Ala
485 490 495
Trp Lys Lys Asp Asn Glu Val Leu Ala Asn Ala Asp Met Glu Asn Phe
500 505 510
Ala His Val Arg Ala Gln Asp Gly Glu Val Met Glu Tyr Thr Thr Ile
515 520 525
Leu His Leu Arg His Val Thr Phe Gly His Glu Gly Arg Tyr Gln Cys
530 535 540
Ile Ile Thr Asn His Phe Gly Ser Thr Tyr Ser His Lys Ala Arg Leu
545 550 555 560
Thr Val Asn Val Leu Pro Ser Phe Thr Lys Ile Pro His Asp Ile Ala
565 570 575
Ile Arg Thr Gly Thr Thr Ala Arg Leu Glu Cys Ala Ala Thr Gly His
580 585 590
Pro Asn Pro Gln Ile Ala Trp Gln Lys Asp Gly Gly Thr Asp Phe Pro
595 600 605
Ala Ala Arg Glu Arg Arg Met His Val Met Pro Asp Asp Asp Val Phe
610 615 620
Phe Ile Thr Asp Val Lys Ile Asp Asp Met Gly Val Tyr Ser Cys Thr
625 630 635 640
Ala Gln Asn Ser Ala Gly Ser Val Ser Ala Asn Ala Thr Leu Thr Val
645 650 655
Leu Glu Thr Pro Ser Leu Ala Val Pro Leu Glu Asp Arg Val Val Thr
660 665 670
Val Gly Glu Thr Val Ala Phe Gln Cys Lys Ala Thr Gly Ser Pro Thr
675 680 685
Pro Arg Ile Thr Trp Leu Lys Gly Gly Arg Pro Leu Ser Leu Thr Glu
690 695 700
Arg His His Phe Thr Pro Gly Asn Gln Leu Leu Val Val Gln Asn Val
705 710 715 720
Met Ile Asp Asp Ala Gly Arg Tyr Thr Cys Glu Met Ser Asn Pro Leu
725 730 735
Gly Thr Glu Arg Ala His Ser Gln Leu Ser Ile Leu Pro Thr Pro Gly
740 745 750
Cys Arg Lys Asp Gly Thr Thr Val Gly
755 760
<210> 4
<211> 2283
<212> DNA
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 4
caggctggcc cgcgggcccc ctgcgcggcc gcctgcactt gcgccgggga ctcgctggac 60
tgcagtgggc gcgggctggc gacgctgccc cgggacctgc cctcctggac gcgcagccta 120
aacctgagtt ataacagact ctccgagatc gactctgctg cttttgagga cttgacgaat 180
ctgcaggaag tgtacctcaa cagcaatgag ctgacagcca taccatcact gggcgctgct 240
tccataggag ttgtctctct ctttttgcag cacaacaaga tccttagtgt ggatgggagc 300
cagctgaagt cgtacctgtc cttggaagtg ctggatctga gttccaacaa catcacggaa 360
attcggagct cctgtttccc gaacggcctg cgtataaggg aactcaactt ggcgagcaac 420
cgcatcagca tcctggagtc tggagcattt gatggtctgt cgcggtcact gctgactctc 480
cgtctgagca aaaacaggat cacccagctt cctgtgaaag cgttcaagct acccaggctg 540
acacaactag acctgaatcg gaatcggatt cggctgattg aaggcctcac gttccagggg 600
ctcgacagct tagaggtgct gaggcttcag aggaacaaca tcagcaggct gacggacggg 660
gccttctggg ggctgtctaa gatgcacgtg ctgcacctgg agtacaacag tctggtggaa 720
gtgaacagtg gctccctcta tggcctcaca gccctgcacc agctgcacct cagcaacaac 780
tccatctctc gaattcagcg tgatggctgg agcttctgcc aaaagctgca tgagttgatt 840
ctgtccttca acaacctcac gcggctggat gaggagagtc tagcggagtt gagcagcctc 900
agtatcctgc gcctcagtca caacgccatc agtcacattg ctgaaggcgc cttcaaggga 960
ctcaagagtc tgcgggtctt ggacctggac cataacgaga tctcgggtac aatcgaggat 1020
accagtggtg cctttacggg gcttgacaac ctcagcaagc tgactctgtt tggaaacaag 1080
atcaaatctg tggctaagag agccttctcg ggcctggaaa gcctggaaca cctgaacctt 1140
ggagagaatg caatcaggtc tgtccagttt gatgcctttg caaagatgaa gaaccttaaa 1200
gagctctaca tcagcagtga gagcttcctg tgtgactgcc agctcaagtg gctgccccca 1260
tggctaatgg gtaggatgct gcaggccttt gtgacagcca cctgtgccca tccagagtcg 1320
ctgaagggcc agagcatttt ctcagtgctg ccagacagct ttgtgtgtga tgactttcca 1380
aagccacaga tcatcaccca gcctgagacg accatggctg tggtgggcaa ggacatccgt 1440
ttcacatgct ccgcagccag cagcagcagc tcaccaatga ccttcgcctg gaagaaggac 1500
aatgaggtcc tggccaatgc agacatggag aactttgccc acgtccgtgc acaggacggc 1560
gaagtgatgg agtataccac tatcctgcac ctccgtcacg tcacctttgg gcacgagggc 1620
cgctaccagt gtatcatcac aaaccacttt ggctccacat actcccacaa agccaggctc 1680
actgtgaatg tgttgccatc attcactaaa ataccccatg acattgccat ccggactggc 1740
accacagccc gcctcgagtg tgctgccacg ggccacccta accctcagat tgcctggcag 1800
aaggatggag gcaccgattt cccggcagct cgtgagcgac gcatgcatgt tatgccagac 1860
gatgatgtgt tcttcatcac tgatgtgaaa atagacgaca tgggggtcta cagctgcact 1920
gcccagaact cggcaggctc ggtttcagcc aacgctaccc tcacagtctt agaaactcca 1980
tccttggcag tgcctctgga agaccgtgtg gtaactgtgg gagaaacagt ggccttccag 2040
tgcaaagcaa ccgggagccc cacaccacgc atcacctggc ttaagggagg tcgcccattg 2100
agcctcacag agcgccacca tttcactcca ggcaaccagc tgctggttgt tcagaatgtg 2160
atgatagacg atgcagggcg gtatacctgt gagatgtcta atcccctggg cactgagcga 2220
gcacatagcc agctgagcat tttacctacc cctggctgcc ggaaggatgg gaccaccgta 2280
ggc 2283
<210> 5
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 5
Gly Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 6
Leu Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Asn Lys
1 5
<210> 7
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 7
Arg Asp Ala Gly Leu Ser Trp Ala Gly Ala Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 8
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 8
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val
1 5 10
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 9
Ser Asp Ser His
1
<210> 10
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 10
Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu Ser Ala
1 5
<210> 11
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 11
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Gly Leu Ser Trp Ala Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 12
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 13
Asn Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 14
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 14
Gly Ile Ser Pro Gly Asp Ser Ser
1 5
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 15
Lys Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asn Glu Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 16
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 17
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 17
Asp Asp Ser Gln
1
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 18
Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu Asn Gly
1 5
<210> 19
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 19
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Gly Asp Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asn Glu Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 20
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 21
Ser Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 22
Gly Ile Ser Pro Asp Gly Ser Asn Ile
1 5
<210> 23
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 23
Lys Val Gly Leu Arg Cys Arg Tyr Glu Ala Cys Ser Tyr Ala Tyr Gly
1 5 10 15
Met Asp Val
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 24
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 25
Ser Asp Ser His
1
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 26
Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu Asn Gly
1 5
<210> 27
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 27
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Asp Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Leu Arg Cys Arg Tyr Glu Ala Cys Ser Tyr Ala Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 28
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 28
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 29
Asn Tyr Asp Met Ser
1 5
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 30
Ser Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile
1 5
<210> 31
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 31
Lys Asp Leu Asp Ala Phe Trp Arg Pro Ser Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 32
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 32
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Asn Val Asn
1 5 10
<210> 33
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 33
Ser Asp Ser His
1
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 34
Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala
1 5
<210> 35
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 35
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Asp Ala Phe Trp Arg Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 36
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 36
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Asn Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 37
<211> 328
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 37
Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr
1 5 10 15
Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro
20 25 30
Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val
35 40 45
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser
50 55 60
Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys
65 70 75 80
Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu
85 90 95
Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala
100 105 110
Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile
115 120 125
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val
130 135 140
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
145 150 155 160
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
165 170 175
Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln
180 185 190
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
195 200 205
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val
210 215 220
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr
225 230 235 240
Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu
245 250 255
Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr
260 265 270
Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr
275 280 285
Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr
290 295 300
Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
305 310 315 320
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
325
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠（Mus musculus）
<400> 38
Arg Thr Val Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 39
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 39
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 40
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 40
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 41
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 41
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 42
<211> 377
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 42
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro
100 105 110
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
115 120 125
Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys
130 135 140
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
145 150 155 160
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
165 170 175
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
180 185 190
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
195 200 205
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
210 215 220
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
225 230 235 240
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
245 250 255
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
370 375
<210> 43
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 43
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 44
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 44
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 45
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 45
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Gly Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Leu Ile Tyr Pro Asp Ser Gly Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ala Gly Leu Ser Trp Ala Gly Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser
245 250 255
Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp
260 265 270
Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val
290 295 300
Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr
370 375 380
Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys
405 410 415
Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 46
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 46
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Thr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn
145 150 155 160
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His
180 185 190
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile
195 200 205
Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 47
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 47
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Gly Asp Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Leu Tyr Ser Asn Pro Asn Glu Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser
245 250 255
Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp
260 265 270
Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val
290 295 300
Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr
370 375 380
Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys
405 410 415
Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 48
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 48
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Ser Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Tyr Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn
145 150 155 160
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His
180 185 190
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile
195 200 205
Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 49
<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 49
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Pro Asp Gly Ser Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Leu Arg Cys Arg Tyr Glu Ala Cys Ser Tyr Ala Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr
115 120 125
Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr
130 135 140
Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser
180 185 190
Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn
195 200 205
Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro
210 215 220
Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys
245 250 255
Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn
275 280 285
Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg
340 345 350
Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp
370 375 380
Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser
420 425 430
Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser
435 440 445
Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
450 455
<210> 50
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 50
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn
145 150 155 160
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His
180 185 190
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile
195 200 205
Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 51
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 51
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Pro Ser Ser Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu Asp Ala Phe Trp Arg Pro Ser Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser
180 185 190
Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser
195 200 205
Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser
245 250 255
Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp
260 265 270
Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr
275 280 285
Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val
290 295 300
Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu
305 310 315 320
Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val
340 345 350
Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr
355 360 365
Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr
370 375 380
Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys
405 410 415
Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu
420 425 430
Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 52
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<400> 52
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Asn Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asp Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn
145 150 155 160
Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His
180 185 190
Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile
195 200 205
Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 53
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 53
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
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