一种优化液态发酵产黑豆肽的方法

技术领域

本发明属于黑豆肽开发领域，主要涉及一种利用优化液态发酵产黑豆肽的方法。

背景技术

蛋白质经降解后，抗氧化活性较强的疏水性氨基酸侧链基团暴露出来，得到的多肽和小肽的抗氧化能力要优于蛋白质和氨基酸。一般抗氧化活性较强的蛋白质降解产物由3～6个氨基酸组成，相对分子质量小于600～2000。与普通大豆相比，黑豆蛋白的蛋白质和疏水性氨基酸含量均有明显的提高，更有利于开发成具有生物活性肽类产品。微生物发酵可产生复合酶系，能够有效降解蛋白质，且反应温和，通过微生物调节酶系，生产效率更高。

黑豆质硬、难于消化，且口感不佳，除少量药用或加工成豆豉等食品外，开发程度一直较低。黑豆蛋白含量高，营养好，是一类重要的植物蛋白资源，经微生物发酵产生黑豆肽可以提高蛋白质利用率并使得产物具有抗氧化性能、降低胆固醇、缓解疲劳、辅助降血脂等特殊活性。

本发明通过利用黑豆肽这一食品级成分，优化了发酵条件，提高了发酵产物的抗氧化性能，为高效利用黑豆蛋白提供了参考。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种利用优化液态发酵产黑豆肽的方法，达到黑豆肽的转化，为进一步分离抗氧化肽并对其结构进行鉴定建立了基础。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制NA培养基，分装于试管后121℃湿热灭菌20min，趁热摆斜面。在无菌环境下，将实验室已有菌株B-5菌株接种于NA培养基斜面上，37℃培养24h。将培养后的B-5菌株接种于NB培养基中，装液量为75ml/250ml三角瓶，180r/min摇床培养14h，得到种子液。将种子液以2％-10％的接种量接种到三角瓶中；(2)将种子液接入75ml/250ml三角瓶发酵培养基中，25℃-37℃培养；(3)在培养基中180r/min振荡培养24h-120h。将发酵液在5000r/min条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液进行冷冻干燥，分别进行肽转化率的测定。

根据权利要求1所述的一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于:接种量为6％时，黑豆肽转化率最高。

根据权利要求1所述的一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于:黑豆肽转化最佳发酵温度为35℃。

根据权利要求1所述的一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于:黑豆肽转化最佳发酵时间为72h。

具体实施方式

实施例1：

一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制NA培养基，分装于试管后121℃湿热灭菌20min，趁热摆斜面。在无菌环境下，将实验室已有菌株B-5菌株接种于NA培养基斜面上，37℃培养24h。将培养后的B-5菌株接种于NB培养基中，装液量为75ml/250ml三角瓶，180r/min摇床培养14h，得到种子液。将种子液以2％的接种量接种到三角瓶中；(2)将种子液接入75ml/250ml三角瓶发酵培养基中，25℃培养；(3)在培养基中180r/min振荡培养24h。将发酵液在5000r/min条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液进行冷冻干燥，分别进行肽转化率的测定。该黑豆肽转化率低，状态不稳定，不利于储藏。

实施例2：

一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制NA培养基，分装于试管后121℃湿热灭菌20min，趁热摆斜面。在无菌环境下，将实验室已有菌株B-5菌株接种于NA培养基斜面上，37℃培养24h。将培养后的B-5菌株接种于NB培养基中，装液量为75ml/250ml三角瓶，180r/min摇床培养14h，得到种子液。将种子液以4％的接种量接种到三角瓶中；(2)将种子液接入75ml/250ml三角瓶发酵培养基中，30℃培养；(3)在培养基中180r/min振荡培养48h。将发酵液在5000r/min条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液进行冷冻干燥，分别进行肽转化率的测定。该黑豆肽转化率较低，发酵产物清除率低。

实施例3：

一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制NA培养基，分装于试管后121℃湿热灭菌20min，趁热摆斜面。在无菌环境下，将实验室已有菌株B-5菌株接种于NA培养基斜面上，37℃培养24h。将培养后的B-5菌株接种于NB培养基中，装液量为75ml/250ml三角瓶，180r/min摇床培养14h，得到种子液。将种子液以6％的接种量接种到三角瓶中；(2)将种子液接入75ml/250ml三角瓶发酵培养基中，25℃培养；(3)在培养基中180r/min振荡培养72h。将发酵液在5000r/min条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液进行冷冻干燥，分别进行肽转化率的测定。该黑豆肽转化率高，发酵产物清除率高。

实施例4：

一种优化液态发酵产黑豆肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制NA培养基，分装于试管后121℃湿热灭菌20min，趁热摆斜面。在无菌环境下，将实验室已有菌株B-5菌株接种于NA培养基斜面上，37℃培养24h。将培养后的B-5菌株接种于NB培养基中，装液量为75ml/250ml三角瓶，180r/min摇床培养14h，得到种子液。将种子液以10％的接种量接种到三角瓶中；(2)将种子液接入75ml/250ml三角瓶发酵培养基中，37℃培养；(3)在培养基中180r/min振荡培养120h。将发酵液在5000r/min条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液进行冷冻干燥，分别进行肽转化率的测定。该黑豆肽转化率高，但培养温度过高，培养时间长，浪费资源。