生物碱二聚体及应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及一种生物碱二聚体及应用。

背景技术

在生物体内，一氧化氮(NO)作为一种细胞因子，在低浓度时，可作为神经传导信号及舒张血管作用，但在高浓度时却是一种细胞毒素(E.D.Garcin等,Nature ChemicalBiology,2008,4,700-707)。生物体内的NO可由存在于内皮细胞、巨噬细胞、神经吞噬细胞及神经细胞中的一氧化氮合酶(NOS)催化精氨酸产生(D.A.Geller,T.R.Billiar.Cancerand Metastasis Reviews,1998,17,7–23)。一氧化氮合酶包括神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及在损伤后诱导表达的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)三种。其中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在细胞因子或病原体诱导下表达，并诱导产生大量的NO。生物体内过量产生的NO被认为与炎症、疼痛、类风湿关节炎、炎症性肠病、免疫型糖尿病、中风、癌症、血栓形成及感染易感性等疾病有关(K.Bian,F.Murad.Frontiers inBioscience,2003,8,d264–d278)。因此开发抑制生物体产生NO可作为开发治疗上述相关疾病药物的有效策略之一。

天然产物的魅力在于其化学结构和生物学活性的多样性与新颖性，一直以来都是药物研究工作者灵感产生与先导物发现的不尽源泉。中药元胡，又名延胡索、玄胡索，为罂粟科(Papaveraceae)紫堇属Corydalis植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎，性温，味辛苦，入心、脾、肝、肺经，是活血化瘀、行气止痛之妙品，以止痛之功效著称于世。近年来对元胡的化学成分开展了大量研究，发现这些成分均为典型的原小檗碱类、阿朴啡类及苄基异喹啉类生物碱(唐逸丰.中医临床研究,2018(23):144-146)。而这些成分是否就是元胡发挥传统功效的药效成分还有待进一步研究。随着分离纯化和结构鉴定技术的提高，越来越多的天然二聚体分子被获取和鉴定，由于对称或不对称二聚体的形成，增加了氢键供体、受体和活性官能团，进而增强了其与各种药理学相关受体的结合能力，因此，它们往往显示出比单倍体更强的生物活性。生物碱作为天然产物的一大类成分，结构种类繁多，生物活性突出，通过对近20年来天然生物碱二聚体的文献调研，共有270余个天然生物碱二聚体已被报道，且多数生物碱二聚体表现出较强的抗肿瘤、抗疟原虫等生物活性。那么中药元胡中除了已经报道的典型生物碱类成分外，是否存在新型生物碱二聚体类成分有待研究，这些新型的生物碱二聚体类化合物生物活性如何尚不清楚，具有较高的研究意义及开发价值，可为进一步阐明延胡索药效物质基础及新型药物研发提供科学依据。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供生物碱二聚体。

本发明的第二个目的是提供上述生物碱二聚体或其可药用的盐在制备抗炎药中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

生物碱二聚体，如式I或式II所示：

上述生物碱二聚体或其可药用的盐在制备抗炎药中的应用。

本发明的优点：

本发明的生物碱二聚体，从常用中药延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang中分离获得。实验证明本发明的生物碱二聚体在5.0～20.0μM浓度下可显著抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放NO的功能，其中生物碱二聚体II的IC

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述,但本发明的实施方式不限于此。

生物碱二聚体的制备，包括如下步骤：

将中药延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的块茎50kg加入10L体积浓度6％的醋酸水溶液浸泡24小时后，取出，于40℃烘干；粉碎，用水浸泡30min，超声提取1小时，过滤，滤渣再浸泡30min，再超声提取，共3次，每次用水50L，合并提取液，减压浓缩，获得浸膏；浸膏经大孔吸附树脂(HPD-100)柱层析色谱，分别用20L水、150L体积浓度为50％乙醇水溶液和80L体积浓度为95％乙醇水溶液依次洗脱，依次收集洗脱液，减压浓缩，得到洗脱馏分I、II和III，将洗脱馏分III(250g)进行硅胶柱色谱分离，依次用各5L的体积比为200:1、180:1、160:1、140:1、120:1、100:1、50:1、10:1的二氯甲烷-甲醇混合液洗脱，依次收集洗脱液，减压浓缩，干燥，得组分A、B、C、D、E、F、G、H；

取组分H(6.9g)经Sephadex LH-20柱色谱，用600mL的体积比为5:5:1的石油醚、二氯甲烷和甲醇组成的混合溶剂洗脱，每200mL洗脱液收集为一个流分,减压浓缩干燥，得到组分H-1、H-2和H-3。H-3(2.2g)经反相ODS中压柱色谱，用2L的体积浓度为30％的甲醇水溶液洗脱，洗脱液减压浓缩干燥，得到组分H-3-1。组分H-3-1(260mg)经Sephadex LH-20柱色谱，用300mL的体积比为5:5:1的石油醚、二氯甲烷和甲醇组成的混合溶剂洗脱，每100mL洗脱液收集为一个流分,减压浓缩干燥，依次得到组分H-3-1-1、H-3-1-2、～H-3-1-3。H-3-1-3经制备液相色谱，用体积浓度35％乙腈水溶液洗脱，收集t

式I:红色无定型粉末；UV(MeOH)λ

式II:红色无定型粉末；UV(MeOH)λ

表1生物碱式I，式II

通过理化常数和现代波谱学手段(UV、IR、HRMS、NMR)，鉴定了式I和式II的结构，式I命名为延胡索双碱A(Yanhusuosine A)，式II命名为延胡索双碱B(Yanhusuosine B)如下式所示：

实施例2

药理实验

(1)式I和式II所示生物碱二聚体抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮(NO)活性测定

仪器：酶标仪

试剂：Griess法NO检测试剂盒(碧云天)

实验步骤：

采用Griess法考察分离获得的式I和式II所示生物碱二聚体抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7(商品)释放NO能力。

取生长状态良好且处于对数生长期，浓度为1×10

按上述方法步骤，对获得的式I和式II所示生物碱二聚体抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞一氧化氮(NO)生成的活性进行测试，结果见表2。

表2式I和式II所示生物碱二聚体抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7释放一氧化氮活性

本发明的生物碱二聚体及其可药用的盐，按照常规技术手段，与药学上可接受的载体、和/或赋形剂，制成适用于口服或注射等应用形式的制剂，如：片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂或针剂等。上述制剂具有抑制生物体产生过量NO的功能。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其中心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护。