一种灭活型胍盐病毒保存液

技术领域

本发明涉及病毒保存技术领域，具体是指一种灭活型胍盐病毒保存液。

背景技术

病毒(Virus)是一种具有比较原始的生命形态和生命特征的非细胞生物，通常由基因组和外壳蛋白构成，通常病毒具有如下特点：形体微小，缺乏细胞结构；只含有一种核酸，DNA或者RNA；依靠自身核酸进行复制；缺乏完整的酶和能量系统；严格的细胞内寄生。从遗传物质分类，病毒可以分为DNA病毒、RNA病毒、蛋白质病毒(如：朊病毒)；从病毒结构上来看，病毒可以分为真病毒(Euvirus，简称病毒)和亚病毒(Subvirus，包括类病毒、拟病毒、朊病毒)；从寄主类型上看，病毒可以分为噬菌体(细菌病毒)、植物病毒(如烟草花叶病毒)、动物病毒(如禽流感病毒、天花病毒、HIV等)；从病毒性质来分，病毒可以分为温和病毒(例如HIV)、烈性病毒(例如狂犬病毒)；从病毒形态上来分，病毒可以分为球状病毒、杆状病毒、砖形病毒、冠状病毒、丝状病毒、轮状病毒、有包膜的球状病毒、具有球状头部的病毒、封于包含体内的昆虫病毒等。

目前，国际病毒分类委员会正式批准的病毒分类系统有3个目，62个科，为了研究病毒的分类地位、致病机理等，需要从宿主生物中分离保存病毒；科研人员经过不懈努力开发出了病毒保存液，用来保存病毒，病毒保存液使用与新型冠状病毒、流感病毒、手足口病毒等常见病毒样本采集保存运输工作，是采样管内浸没采样拭子病毒样本一种保护病毒的被检测物质的液体，可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本，并且保护采样人员避免发生二次感染，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验，因此，提出一种灭活型胍盐病毒保存液。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服以上技术问题，提供一种灭活型胍盐病毒保存液，能够保持核酸的稳定性并且有效灭活病毒。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种灭活型胍盐病毒保存液，包括以下组分成分：1.5％～3.5％异硫氰酸胍，0.05％～0.1％防腐剂K300，1％～2％吐温-20，10％～20％曲拉通100，0.01％～1％酚红，10mM～15mM三羟甲基氨基甲烷，10Mm～15MmEDTA螯合剂。

作为改进，所述病毒保存液的PH值为7.0～8.0。

作为改进，包括以下组分成分：2％异硫氰酸胍，0.07％防腐剂K300，1.5％吐温-20，15％曲拉通100，0.05％酚红，13mM三羟甲基氨基甲烷，13MmEDTA螯合剂。

采用以上配方后，本发明具有如下优点：本发明能够保持核酸的稳定性并且有效灭活病毒，方便野外采集生物样本，且不会影响后续的研究及临床检测，使用本发明保存的病毒，室温条件下保存30分钟，病毒灭活率达到99.9％，37℃保存14天，核酸无明显降解情况，配制方式简单，可批量生产。

具体实施方式

在下文中，仅简单地描述了某些示例性实施例。正如本领域技术人员可认识到的那样，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，可通过各种不同方式修改所描述的实施例。因此，描述被认为本质上是示例性的而非限制性的。

一种灭活型胍盐病毒保存液，包括以下组分成分：1.5％～3.5％异硫氰酸胍，0.05％～0.1％防腐剂K300，1％～2％吐温-20，10％～20％曲拉通100，0.01％～1％酚红，10mM～15mM三羟甲基氨基甲烷，10Mm～15MmEDTA螯合剂，所述病毒保存液的PH值为7.0～8.0。

实施例一：

一种灭活型胍盐病毒保存液，包括以下组分成分：2％异硫氰酸胍，0.07％防腐剂K300，1.5％吐温-20，15％曲拉通100，0.05％酚红，13mM三羟甲基氨基甲烷，13MmEDTA螯合剂，所述病毒保存液的PH值为7.5。

实施例二：

一种灭活型胍盐病毒保存液，包括以下组分成分：1.5％异硫氰酸胍，0.05％防腐剂K300，1％吐温-20，10％曲拉通100，0.01％酚红，10mM三羟甲基氨基甲烷，10MmEDTA螯合剂，所述病毒保存液的PH值为7.0。

实施例三：

一种灭活型胍盐病毒保存液，包括以下组分成分：3.5％异硫氰酸胍，0.1％防腐剂K300，2％吐温-20，20％曲拉通100，1％酚红，15mM三羟甲基氨基甲烷，15MmEDTA螯合剂，所述病毒保存液的PH值为8.0。

病毒灭活能力验证

核酸保存能力验证

S1：取1ml病毒保存液，加入1μg的RNA(细胞中提取纯化得到的RNA)，在37℃条件下保存4h/24h/48h/7d/14d，每种病毒保存液保存3个样本重复，取3ml病毒保存液，加入一支人口腔拭子，在37℃条件下保存4h/24h/48h/7d/14d，每种病毒保存液保存3个样本重复；

S2：分别在4h/24h/48h/7d/14d时吸取200μl样本，用病毒基因组DNA提取试剂盒进行核酸提取；

S3：提取纯化好的核酸用荧光定量进行扩增，观察CT值，并做实验分析；

(1)RNA：提取纯化好的RNA用一步法RT-qPCR(探针法)进行扩增(引物1)

反应体系

反应程序

(2)口腔拭子，提取纯化好的DNA用荧光定量(染料法)进行扩增，扩增片段：495bp反应体系

反应程序

实验结果

RNA样本

口腔拭子

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到其各种变化或替换，这些都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。