白术提取物在制备治疗胃肠黏膜损伤的药物中的用途

技术领域

本发明涉及一种已知提取物的制药用途，具体而言，本发明涉及白术提取物在制备治疗胃肠黏膜损伤的药物中的用途。

背景技术

胃溃疡是一种常见的上消化道疾病，全球发病率为10％。胃溃疡长期不愈，易引发消化道穿孔、消化道出血、幽门梗阻、甚至癌症等急重症并发症，对患者健康构成极大威胁。幽门螺杆菌感染、心理压力、非甾体抗炎药摄入和饮酒已被证明是胃溃疡的主要原因。幽门螺杆菌感染会增加胃溃疡的风险。它可以分泌脲酶和粘附素等物质，进一步介导中性粒细胞、浆细胞和巨噬细胞的炎症反应，产生一系列炎性细胞因子，最终导致胃肠上皮细胞病变。高浓度酒精可直接引起胃黏膜急性炎症，破坏黏膜屏障的防御能力，最终形成胃溃疡。研究表明，乙醇引起的胃损伤与胃组织的氧化应激和炎症有关。乙醇进入胃肠道后，胃黏液和碳酸氢盐的消化会侵蚀胃黏膜的保护层，造成不可逆的损伤。从而影响超氧化物歧化酶(SOD)等抗氧化酶活性，从而引起黏膜氧化应激，增加丙二醛(MDA)等过氧化物产物以及过多的炎症介质和细胞因子，不断诱发炎症反应。传统疗法，如质子泵抑制剂、抗生素、抗组胺药和抗酸剂，往往无法克服胃溃疡复发的问题，并伴有不同程度的不良反应，包括头痛、头晕、皮疹，甚至肝损伤。因此，使用副作用低、生物活性好的天然药物防治胃肠粘膜损伤显得尤为重要。

发明内容

因此，本发明的一个目的在于对胃肠道黏膜损伤，特别是由幽门螺杆菌引起的胃肠道黏膜损伤提供治疗方案。

根据本发明的一个实施方式，其提供了白术提取物，特别是白术挥发油，更特别是苍术酮在制备治疗胃肠黏膜损伤的药物中的用途。

有益效果

根据本发明的实验结果可以看出，白术提取物，特别是白术挥发油，更特别是苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠粘膜损伤斑马鱼的肠粘膜病理结构有明显的改善功效。

附图说明

图1为表现出苍术酮处理后的斑马鱼胃肠道面积的典型图。

图2为统计之后的、苍术酮处理后的斑马鱼胃肠道面积的柱状图。

图3为表现出苍术酮处理后斑马鱼胃肠道病理切片典型图。

图4为表现出苍术酮处理后斑马鱼胃肠道中性粒细胞典型图。

图5为统计之后的、苍术酮处理后斑马鱼胃肠道中性粒细胞数目的柱状图。

图6为表现出苍术酮处理后斑马鱼胃肠道幽门螺杆菌荧光典型图。

图7为统计之后的、苍术酮处理后斑马鱼胃肠道幽门螺杆菌荧光的柱状图。

图8为表现出苍术酮减轻了乙醇诱导的胃黏膜损伤的图，其中，(A)是大鼠胃组织形态的图片；(B)是胃组织的H&E染色组织切片；(C)是各组的胃溃疡面积的对比；(D)是各组的胃组织的组织病理学评分。

图9为表现出苍术酮减轻了乙醇诱导的氧化应激和炎症的柱状图，其中，(A)至(E)分别表示SOD、MDA、TNF-α、NO和IL-10在指定组的血清样本中的水平。

具体实施方式

以下具体实施方式本质上仅是例示性，且并不欲限制本发明及其用途。此外，本文并不受前述现有技术或发明内容或以下具体实施方式或实施例中所描述的任何理论的限制。

根据本发明的一个实施方式，其提供了白术提取物在制备治疗胃肠黏膜损伤的药物中的用途。

根据本发明的一个实施方式，其提供了苍术酮在制备治疗胃肠黏膜损伤的药物中的用途。

根据本发明的一个实施方式，其中，所述胃肠黏膜损伤是指幽门螺杆菌感染导致的胃肠黏膜损伤。

根据本发明的一个实施方式，其中，所述胃肠黏膜损伤是指幽门螺杆菌感染导致的溃疡性结肠炎或胃溃疡。

根据本发明的一个实施方式，其中，所述白术提取物是白术挥发油。

在以下的实施例中，如无特别说明，使用的各原料均可商业购买，或者根据本领域已知的方法制备。

实施例1苍术酮对幽门螺杆菌引起的斑马鱼胃肠道黏膜损伤的效果

1.MTC(最大检测浓度)测定

斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为450～550μS/cm；pH为6.5～8.5；硬度为50～100mg/L CaCO

随机选取3dpf野生型AB品系斑马鱼于6孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，水溶给予苍术酮(浓度见表1-1)，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3mL。除正常对照组外，其余各实验组先水溶给予TNBS，28℃处理48h后，移除TNBS，所有组别加5×10

结果，在本实验条件下，苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道粘膜损伤模型斑马鱼最大检测浓度(MTC)为7.81μM。详见表1-1。

表1-1.苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道粘膜损伤修复功效浓度摸索实验结果(n＝30)

2.幽门螺杆菌感染的胃肠道粘膜损伤修复功效的测定和评价

随机选取3dpf野生型AB品系斑马鱼于6孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，水溶给予苍术酮(浓度见表1-2)，阳性对照组克拉霉素167μM浓度，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3mL。除正常对照组外，其余各实验组先水溶给予TNBS，28℃处理48h后，移除TNBS，所有组别加5×10

在本实验条件下，苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道粘膜损伤有明显的修复功效。详见表1-2、图1-图2。

表1-2.苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道粘膜损伤修复功效评价实验结果(n＝10)

与模型对照组比较，***p<0.001

在图1中，虚线区域为斑马鱼胃肠道分析部位。

对图1的数据进行分析汇总得到图2，在图2中，与模型对照组比较，***p<0.001。

3.胃肠道组织病理学的测定和评价

随机选取3dpf野生型AB品系斑马鱼于6孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，水溶给予苍术酮7.81μM，阳性对照组克拉霉素167μM，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3mL。除正常对照组外，其余各实验组先水溶给予TNBS，28℃处理48h后，移除TNBS，所有组别加5×10

肠道病理切片结果(图3)显示，正常对照组斑马鱼肠道褶皱数量多且明显，肠上皮细胞与纤毛、粘膜紧密连接。模型对照组斑马鱼肠道褶皱数量减少，肠腔明显扩大且粘膜组织被破坏。苍术酮组斑马鱼肠腔扩张明显恢复，肠道组织细胞形态均与正常对照组相似。表明苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠粘膜损伤斑马鱼的胃肠粘膜病理结构均有明显的改善功效。详见图3。

在图3中，最上图的虚线框为斑马鱼肠道观察部位，单向箭头指示胃肠道褶皱；双向箭头指示肠腔直径。

实施例2苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道炎症消退效果

随机选取3dpf转基因中性粒细胞绿色荧光MPX品系斑马鱼于6孔板中，每孔(实验组)均处理30尾斑马鱼，水溶给予苍术酮7.81μM，阳性对照组克拉霉素167μM，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3mL。除正常对照组外，其余各实验组先水溶给予TNBS，28℃处理48h后，移除TNBS，所有组别加5×10

在本实验条件下，苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道炎症有明显的消退功效。详见表1-3、图4和图5。

表1-3.苍术酮对幽门螺杆菌感染的胃肠道炎症消退功效评价实验结果(n＝10)

与模型对照组比较，***p<0.001

在图4中，上半部分的虚线区域为斑马鱼肠道分析部位，下半部分的荧光颗粒为中性粒细胞。

对图4的数据进行分析汇总得到图5，在图5中，与模型对照组比较，***p<0.001。

实施例3苍术酮抑制胃肠道幽门螺杆菌效果

随机选取3dpf野生型AB品系斑马鱼于6孔板中，每孔均处理30尾斑马鱼。水溶给予苍术酮7.81μM，阳性对照组克拉霉素167μM浓度，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3mL。除正常对照组外，其余各实验组先水溶给予TNBS，28℃处理48h后，移除TNBS，所有组别加5×10

在本实验条件下，苍术酮有明显的抑制胃肠道幽门螺杆菌功效。详见表1-4、图6和图7。

表1-4.苍术酮抑制胃肠道幽门螺杆菌功效评价实验结果(n＝10)

与模型对照组比较，***p<0.001

在图6中，虚线框为斑马鱼肠道分析部位。

对图6的数据进行分析汇总得到图7，在图7中，与模型对照组比较，***p<0.001

实施例4苍术酮对乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤的效果

我们接下来评估了苍术酮在由乙醇诱导的大鼠胃溃疡中的功效。

SD大鼠购自上海西普尔－必凯实验动物有限公司。所有大鼠均在SPF条件下饲养，温度(22-24℃)，并在实验前一周饲养在标准大鼠笼中，可随意饮水和食物。所有动物处理和实验方案均在上海中医药大学实验动物福利伦理委员会监督下进行。

将大鼠随机分配到以下组(每组n＝8)：对照组(0.25％Na-CMC和0.5％Tween-80)，模型(EtOH)组(0.25％Na-CMC和0.5％Tween-80)，苍术酮(25mg/kg)治疗组，雷尼替丁(40mg/kg)治疗组。

苍术酮和雷尼替丁组给药7天。在第7天，除对照组以外的所有大鼠在给药30分钟后口服乙醇(5ml/kg)。乙醇处理后两小时，处死所有大鼠，收集胃组织和血液样本用于进一步研究。对大鼠的胃进行拍照，用Image-Pro Plus 6.0软件计算每只大鼠的胃溃疡面积和胃总面积，计算溃疡面积的比值。溃疡面积(％)＝溃疡面积/胃总面积×100；胃组织用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，切成5μm厚，HE染色。通过使用Olympus IX83显微镜(东京，日本)观察每个切片。通过前面描述的方法对每个胃组织的病理损伤进行评分。评估每个组织切片的1cm段的黏膜水肿(评分：0-3)、炎症细胞浸润(分数：0-4)、出血(评分：0-4)和粘膜损伤(评分：0-4)。

胃组织形态学结果显示，对照组胃黏膜正常、光滑、未受损，而模型(EtOH)组胃黏膜有许多明显的出血点和糜烂(图8中A部分)。与EtOH组相比，苍术酮组的胃黏膜损伤明显改善，这与溃疡面积比的结果一致(p<0.01，图8中C部分)。对H&E染色切片的检查表明，EtOH诱导的溃疡在胃粘膜结构中表现出明显的损伤，炎症细胞广泛浸润，伴有糜烂、出血、水肿、粘膜细胞耗竭(图8中B部分)。苍术酮给药组的大鼠胃粘膜微观结构与正常组接近(图8中B部分)。对组织病理学评分的进一步分析还表明，苍术酮对改善粘膜结构有相当大的作用(p<0.001，图8中D部分)。

在图8中，C部分的数据表示为平均值±SD(n＝8)，**p<0.01。D部分的数据表示为平均值±SD(n＝4)，*p<0.05，***p<0.001。

实施例5苍术酮对乙醇诱导的胃溃疡氧化应激和炎症的效果

根据制造商的方案，通过试剂盒评估血清中SOD和MDA的水平。SOD的结果以U/mL表示，MDA的结果以nM表示。使用ELISA试剂盒测定血清中的大鼠细胞因子TNF-α、IL-10和NO。所有程序均根据制造商进行。TNF-α和IL-10的结果以pg/mL表示，NO的结果以μM表示。

与对照组相比，乙醇刺激显著降低了SOD水平(p<0.001)并显著增加了血清中的MDA水平(p<0.001)，这表明氧化应激增强(图9中A，B部分)。苍术酮有效地增加了SOD水平(p<0.001，图9中A部分)。此外，与模型组相比，苍术酮显著降低了MDA水平(p<0.01，图9中B部分)。此外，乙醇刺激显著增加了血清中促炎细胞因子TNF-α和促炎介质NO的产生(p<0.001，图9中C，D部分)。苍术酮显著降低了两者的水平(p<0.001，图9中C，D部分)。最后，乙醇显著降低了血清中的抗炎细胞因子IL-10(p<0.001，图9中E部分)，苍术酮有效地恢复了IL-10含量(p<0.001，图9中E部分)。

在图9中，数据表示为平均值±SD(n＝8)。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

胃溃疡是一种由胃黏膜损伤引起的常见消化性溃疡病，具有易感染、难治愈、易复发的特点。胃黏膜是抵抗幽门螺杆菌感染、胃酸、酒精和各种有害物质的屏障。幽门螺杆菌感染会增加胃溃疡的风险，它可以分泌脲酶和粘附素等物质，进一步介导中性粒细胞、浆细胞和巨噬细胞的炎症反应，产生一系列炎性细胞因子，最终导致胃上皮细胞病变。

实施例1的研究表明，苍术酮可以能明显恢复斑马鱼胃肠道扩张、修复胃肠道黏膜损伤，抑制幽门螺杆菌诱导的斑马鱼胃肠道粘膜损伤。

实施例2结果表明，苍术酮可以减少中性粒细胞数量，对幽门螺杆菌感染的胃肠道炎症有明显的消退功效。

实施例3结果表明，苍术酮有明显的抑制胃肠道幽门螺杆菌功效。因此，这些发现表明苍术酮可以通过修复胃肠道粘膜损伤、增加抗炎作用和抑制幽门螺杆菌来缓解幽门螺杆菌诱导的胃肠道损伤，如溃疡性结肠炎或胃溃疡。

此外，酒精是胃溃疡的重要原因之一。高浓度酒精会直接破坏胃黏膜屏障和细胞间连接，导致胃黏膜上皮细胞受损。而酒精会导致大量炎症介质的释放，增加氧化应激，增强侵袭性因素的破坏能力。

实施例4采用大鼠模型评估了苍术酮对乙醇诱导的急性胃损伤的胃保护作用。乙醇在大鼠胃组织中引起严重的溃疡，给药苍术酮后，发现对溃疡有明显的抑制作用，对胃黏膜结构有保护作用。此外，过量饮酒后胃黏膜受到刺激，诱导活性氧(ROS)过度表达，导致生物大分子氧化损伤和过氧化，致使胃组织抗氧化防御系统紊乱。SOD作为与体内氧化应激水平相关的物质，是抵御氧化损伤的重要防线，MDA是体内脂质过氧化的产物，可以反映过氧化的程度。

实施例5的结果表明，苍术酮给药对胃溃疡大鼠具有有效的氧化应激抑制作用，其特征是SOD水平显著增加和MDA水平降低。除了苍术酮的抗氧化作用外，已知与ROS水平相关的炎症细胞因子如TNF-α和IL-10也受苍术酮的调节。TNF-α是一种由CD4+细胞和M1巨噬细胞产生的促炎细胞因子，已知会诱导氧化应激。IL-10作为一种抗炎细胞因子来抑制氧化应激和促炎介质NO的产生。在苍术酮存在下，TNF-α和NO水平显著降低，IL-10水平显著升高。因此，这些发现表明苍术酮可以通过增加抗炎作用和抑制氧化应激来缓解乙醇诱导的胃溃疡。