新化合物、α突触核蛋白凝集体结合剂及其利用

技术领域

本发明涉及新化合物、α突触核蛋白凝集体结合剂及其利用，详细地说，涉及新化合物、含有该新化合物的α突触核蛋白凝集体结合剂、α突触核蛋白凝集体的光学成像用组合物、α突触核蛋白凝集体的放射成像用组合物、脑内α突触核蛋白凝集体的光学成像方法、脑内α突触核蛋白凝集体的放射成像方法以及用于合成新化合物的中间体。

背景技术

人们认为α突触核蛋白凝集体形成帕金森氏病、路易体痴呆(DLB)、多系统萎缩症(MSA)的核心病理，与神经变性有密切的因果关系。这种疾病的确诊是在尸检脑的病理分析中以α突触核蛋白凝集体(本说明书中，也称“α突触核蛋白病变”)的存在作为指标进行的，因此，不能在生前确诊。然而，如果能够在生物体脑中将α突触核蛋白凝集体可视化，从早期就能够获得与这些疾病的诊断相关的确定的信息(确诊)相近的信息。另外，如果能够在疾病模型动物的生物体脑中将α突触核蛋白凝集体可视化，通过随时间的成像等，也能够有助于以α突触核蛋白凝集体作为目标的治疗或预防药物的候选物质的药效评价。

以往，作为显示出在生物体脑中与α突触核蛋白结合的PET(正电子断层撮影法)探针，存在[

需要说明的是，发明人等开发了用于对在脑内蓄积的Tau蛋白进行成像(图像化)的化合物(参照专利文献1)。由于专利文献1中记载的化合物能够对在脑内蓄积的Tau蛋白进行成像，因此，专利文献1的技术有助于因Tau蛋白的蓄积产生的疾病例如阿尔茨海默病(AD)的治疗以及预防等。但是，专利文献1中没有记载与α突触核蛋白凝集体的结合。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2014/097474号小册子。

非专利文献

非专利文献1：Kikuchi,A.et al.,Brain,133:1772-1778(2010)。

非专利文献2：Verdurand,M.et al.,Contrast Media Mol.Imaging,2018:9165458(2018)。

发明内容

发明要解决的课题

本发明是鉴于上述情况而完成的，其目的在于，提供与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的α突触核蛋白凝集体结合剂、使用该α突触核蛋白凝集体结合体的成像方法以及能够用于α突触核蛋白凝集体结合剂的新化合物。

用于解决课题的手段

本发明人等发现了具有特定的结构的化合物与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高，进一步进行研究，从而完成了本发明。更具体而言，本发明提供以下方案。

本发明的一方面是由下述式(I)或(II)表示的化合物、该化合物作为药物可接受的盐或该化合物的溶剂化物。

化学式1

发明的效果

根据本发明，能够提供与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的α突触核蛋白凝集体结合剂。

附图说明

图1是表示DLB患者脑和AD患者脑的荧光显微镜测定结果的图。

图2是表示病变区域和未形成病变区域的荧光亮度的定量结果的图。

图3是表示接种α突触核蛋白纤维的小鼠的荧光显微镜测定结果的图。

图4是表示α突触核蛋白纤维接种6周以后的模型小鼠的双光子激光扫描荧光显微镜检查结果的图。

图5是表示接种α突触核蛋白纤维的小鼠的PET成像结果的图。

图6是表示接种α突触核蛋白纤维的小鼠的PET成像结果的图。

图7是表示接种α突触核蛋白纤维的小鼠的PET成像结果的图。

图8是表示小鼠脑的离体(ex vivo)成像结果的图。

图9是表示接种α突触核蛋白纤维的狨猴的PET成像结果的图。

图10是表示DLB患者脑和AD患者脑的体外(in vitro)结合试验结果的图。

图11是表示DLB患者脑和MSA患者脑的自动射线照相结果的图。

图12是表示DLB患者脑和MSA患者脑的体外荧光显微镜测定的结果的图。

具体实施方式

下面，对本发明的一实施方式进行说明。需要说明的是，在本说明书中，“A和/或B”是指A以及B中的至少一个。

[定义]

用语“作为药物可接受的盐”是指哺乳动物、特别是对人没有害的盐。作为药物可接受的盐能够使用包括无机酸或无机碱、或有机酸或有机碱的无毒性的酸或碱形成。举出作为药物可接受的盐的例子，存在由铝、钙、锂、镁、钾、钠以及锌等形成的金属盐或由赖氨酸、N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)以及普鲁卡因等形成的有机盐等。另外，作为药物可接受的盐包括酸加成盐以及碱加成盐。

用语“作为药物可接受的载体”是指生理盐水溶液、液体或固体的填充剂、稀释剂、溶剂、或封装材料等作为药物可接受的材料、组合物或载体。举出作为药物可接受的载体的例子，存在水、食盐水、生理盐水或磷酸缓冲食盐水(PBS)、氯化钠注射液、林格氏注射液、等渗性葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖以及乳酸林格氏注射液等。

用语“有效量”是指能够获得目标效果的化合物或组合物的量。例如，在一部分实施方式中，有效量是指能够进行α突触核蛋白凝集体等在脑内蓄积的物质的光学成像或放射成像的化合物或组合物的量。

用语“溶剂化物”是指通过一个或多个溶剂分子对于化合物的缔合而形成的含溶剂化合物。溶剂化物例如包括一溶剂化物、二溶剂化物、三溶剂化物以及四溶剂化物。另外，溶剂化物包括水合物。

用语“水合物”是指还包含受非共价键性分子间力拘束的化学计量或非化学计量的量的水的化合物或其盐。水合物例如包括一水合物、二水合物、三水合物以及四水合物等。

用语“治疗”是指降低或缓解疾病或状态的进行、重症度和/或持续期间。

用语“预防”是指降低获得规定的疾病或状态或者使规定的疾病或状态进展的危险、或者降低或抑制规定的疾病或条件中的一个或多个症状的复发、开始或进展。

用语“结合性”是指化合物对于某一特定的蛋白质凝集体的结合强度。

用语“结合选择性”是指将化合物对于某一特定的蛋白质凝集体的结合性与对于其他蛋白质凝集体的结合性进行比较时，它们的结合性存在差异(对于某一特定的蛋白质凝集体的结合性与对于其他蛋白质凝集体的结合性相比更高或更低)。“结合选择性高”是指上述结合性的差异较大。例如，某一化合物“与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高”是指该化合物与α突触核蛋白凝集体的结合性和与其他蛋白质凝集体的结合性存在较大差异，表明了因α突触核蛋白凝集体而具有高结合性。

[化合物]

在一实施方式中，本发明提供由下述结构式(I)表示的(E)-1-氟-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙烷-2-醇或由下述结构式(II)表示的(E)-1-氟-3-((2-(4-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑6-基)氧基)丙烷-2-醇、作为药物可接受的盐或其溶剂化物。

化学式2

在本说明书中，也将由式(I)和(II)表示的化合物分别称为“化合物(I)”和“化合物(II)”。

在一实施方式中，化合物(I)和化合物(II)是一个或更多的原子为该原子的放射性同位素的化合物、其盐或其溶剂化物。放射性同位素从由

优选与嘧啶环或吡嗪环结合的甲基氨基以及与苯并噻唑环结合的3-氟-2-羟基丙氧基(-O-CH

在一实施方式中，包含放射性同位素的化合物(I)优选为[

在一实施方式中，包含放射性同位素的化合物(II)优选为[

[中间体]

如下述的化合物的制造方法所示，由下述式(III)表示的化合物为化合物(I)和化合物(II)的制造中间体化合物(在本说明书中，也简称为“中间体”)。

化学式3

式(III)中，X和Y中的一个为氮原子，另一个为未被取代的碳原子。在本说明书中，“未被取代的碳原子”表示CH。即，在式(III)中，当X为氮原子(N)时，Y为未被取代的碳原子(CH)，当X为未被取代的碳原子(CH)时，Y为氮原子(N)。

R

化学式4

其中，Ts表示对甲苯磺酰基，THP表示四氢-2H-吡喃-2-基，*表示与苯并噻唑环的结合位置。

R

这些中间体化合物适合用于化合物(I)和化合物(II)的合成以及放射性同位素标记的化合物(I)和化合物(II)的合成。另外，这些中间体化合物也可以为盐。

在化合物(I)或化合物(II)分别含有立体异构体(包括光学异构体以及旋转异构体)、互变异构体或极性体等各种异构体的情况下，这些异构体也包括在化合物(I)或化合物(II)中。这些异构体能够通过公知的合成方法、分离方法分别作为单体得到。化合物(III)也可以包括各种异构体。

化合物(I)、化合物(II)或化合物(III)还可以为通过公知的结晶化法制造的结晶。

[化合物(I)和化合物(II)以及中间体的制造方法]

化合物(I)和化合物(II)以及作为中间体的化合物(III)能够按照根据以下所示的制造法的方法制造。另外，根据需要，能够通过将脱保护反应、酰胺化反应、脲化反应、烷基化反应、光延反应、氧化反应、还原反应、卤化反应、偶联反应、使用碳负离子的亲核加成反应、格氏反应、脱水反应等分别单独或其两种以上组合来进行从而制造化合物(I)、化合物(II)以及化合物(III)。另外，各反应中的溶剂、试剂以及温度等反应条件只要基于本领域技术人员的技术常识适当设定即可。官能团的保护以及脱保护反应按照公知的反应方法、参考例或实施例记载的方法进行，作为保护基，使用惯用的保护基。

在下述的制造法中，除非另有指定，否则使用的各符号的含义与前述相同。

(制造法A)

化合物(I)、化合物(II)以及R

(制造方案1)

化学式5

化合物(2)能够通过化合物(1)与亚磷酸三酯的反应来制造。在化合物(1)中，TBS为叔丁基二甲基甲硅烷基。

化合物(III-i)能够通过化合物(2)与后述的化合物(3)的霍纳尔-沃兹沃思-埃蒙斯反应(HWE反应)以及反应中进行的脱保护反应来制造。在化合物(3)中，X和Y中的一个为氮原子，另一个为未被取代的碳原子(CH)。

化合物(5)能够通过化合物(III-i)与后述的化合物(4)的光延反应等烷基化反应来制造。

化合物(I)和化合物(II)能够通过化合物(5)的脱保护反应来制造。

制造法A中使用的化合物(3)能够通过制造方案2中所示的以下的方法由化合物(6)制造。

(制造方案2)

化学式6

在化合物(6)中，Hal表示卤素原子(例如，氯原子、溴原子、碘原子)。化合物(7)能够通过化合物(6)与2-丙炔-1-醇的偶联反应等来制造。

化合物(3)能够通过化合物(7)的氧化反应来制造。

制造法A中使用的化合物(4)能够通过制造方案3中所示的以下的方法由化合物(8)制造。

(制造方案3)

化学式7

化合物(9)能够通过化合物(8)的保护反应来制造。

化合物(4)能够通过化合物(9)的脱苄基反应来制造。

制造法A中使用的化合物(5)也能够通过制造方案4中所示的以下的方法由化合物(2)制造。

(制造方案4)

化学式8

化合物(10)能够通过化合物(2)的脱保护反应来制造。

化合物(11)能够通过化合物(10)与化合物(4)的光延反应等烷基化反应来制造。

化合物(5)也能够通过化合物(11)与化合物(3)的HWE反应来制造。

(制造法B)

化合物(I)和化合物(II)也能够通过制造方案5中所示的以下的方法来制造。

(制造方案5)

化学式9

化合物(13)能够通过基于化合物(12)的环氧乙烷开环反应的对化合物(III-i)的烷基化反应来制造。

化合物(I)和化合物(II)能够通过化合物(13)的脱保护反应来制造。

(制造法C)

如下述制造方案6中所示那样，R

(制造方案6)

化学式10

(制造法D)

R

(制造方案7)

化学式11

化合物(15)能够通过化合物(III-i)与后述的化合物(14)的光延反应等烷基化反应来制造。

化合物(16)能够通过化合物(15)的脱保护反应来制造。

化合物(III-iii)能够通过化合物(16)的保护反应来制造。

制造法D中使用的化合物(14)能够通过制造方案8中所示的以下的方法来制造。

(制造方案8)

化学式12

化合物(18)能够通过化合物(17)的保护反应来制造。

化合物(14)能够通过化合物(18)的脱苄基反应来制造。

[α突触核蛋白凝集体结合剂]

在一实施方式中，本发明提供α突触核蛋白凝集体结合剂。本实施方式的α突触核蛋白凝集体结合剂(以下，也记作结合剂或α突触核蛋白凝集体结合剂)包括化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物。

与Tau蛋白和淀粉样蛋白β凝集体相比，化合物(I)和化合物(II)与α突触核蛋白凝集体的结合选择性更高。另外，同样地，与Tau蛋白和淀粉样蛋白β凝集体相比，化合物(I)和化合物(II)的作为药物可接受的盐以及化合物(I)和化合物(II)的溶剂化物与α突触核蛋白凝集体的结合选择性也更高。另外，化合物(I)和化合物(II)发出荧光。另外，如上所述，在化合物(I)和化合物(II)中，能够将一个或更多的原子设为该原子的放射性同位素。因此，本实施方式的结合剂能够作为用于在脑内蓄积的α突触核蛋白凝集体的光学成像或放射成像的分子探针使用。

需要说明的是，α突触核蛋白是在正常的脑中也局部存在于神经元的突触等的蛋白质，α突触核蛋白凝集而成的凝集体为α突触核蛋白凝集体。

α突触核蛋白凝集体结合剂能够包括作为药物可接受的载体。举出该作为药物可接受的载体的例子，有水、食盐水、生理盐水或磷酸缓冲食盐水(PBS)、氯化钠注射液、林格氏注射液、等渗性葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖以及乳酸林格氏注射液等。

α突触核蛋白凝集体结合剂包括的化合物(I)或化合物(II)、作为其药物可接受的盐或其溶剂化物以及作为药物可接受的载体的含量没有特别限制。这些含量根据使用的化合物的种类；给药的哺乳动物的年龄、体重、健康状态、性别以及膳食内容；给药的次数以及给药途径；治疗期间；同时使用的其他药剂等各种主要原因而确定。作为药物可接受的载体的含量能够设为α突触核蛋白凝集体结合剂的1～99重量％的量。α突触核蛋白凝集体结合剂例如能够按对象的每单位体重(kg)的化合物量为5ng/kg～5mg/kg的量给药化合物(I)或化合物(II)的方式来制备。该化合物量的下限优选为5ng/kg以上、0.01mg/kg以上、0.05mg/kg以上或0.1mg/kg以上。另外，该化合物量的上限为5mg/kg以下，3mg/kg以下，1mg/kg以下或20μg/kg以下的量。

[α突触核蛋白凝集体的光学成像用组合物]

在一实施方式中，本发明提供α突触核蛋白凝集体的光学成像用组合物。本实施方式的α突触核蛋白凝集体的光学成像用组合物(以下，也记作光学成像用组合物)包括上述本实施方式的结合剂。该光学成像包括体外、离体以及体内成像。

作为光学成像，例如，可举出荧光显微镜测定法、多光子成像法、双光子成像法以及近红外荧光成像法。

光学成像用组合物能够包括作为药物可接受的载体。举出该作为药物可接受的载体的例子，有水、食盐水、生理盐水或磷酸缓冲食盐水(PBS)、氯化钠注射液、林格氏注射液、等渗性葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖以及乳酸林格氏注射液等。

光学成像用组合物包括的化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物以及作为药物可接受的载体的含量没有特别限制。这些含量根据使用的化合物的种类；给药的哺乳动物的年龄、体重、健康状态、性别以及膳食内容；给药的次数以及给药途径；治疗期间；同时使用的其他药剂等各种主要原因而确定。作为药物可接受的载体的含量能够设为光学成像用组合物的1～99重量％的量。光学成像用组合物例如能够按对象的每单位体重(kg)的化合物量(mg)为0.01mg/kg～5mg/kg、优选为0.05mg/kg～3mg/kg、进一步优选为0.1mg/kg～1mg/kg的量给药化合物(I)或化合物(II)的方式来制备。

[α突触核蛋白凝集体的放射成像用组合物]

在一实施方式中，本发明提供α突触核蛋白凝集体的放射成像用组合物。本实施方式的α突触核蛋白凝集体的照射成像用组合物(以下，也记作放射成像用组合物)包括上述本实施方式的结合剂。该放射成像包括体外、离体以及体内成像。

作为放射成像，例如，可举出正电子断层撮影法(Positron EmissionTomography，PET)、单光子放射断层撮影法(Single photon emission computedtomography，SPECT)以及自动射线照相法。

放射成像用组合物能够包括作为药物可接受的载体。举出该作为药物可接受的载体的例子，有水、食盐水、生理盐水或磷酸缓冲食盐水(PBS)、氯化钠注射液、林格氏注射液、等渗性葡萄糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖以及乳酸林格氏注射液等。

放射成像用组合物中包含的化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物以及作为药物可接受的载体的含量没有特别限制。这些含量根据使用的化合物的种类；给药的哺乳动物的年龄、体重、健康状态、性别以及膳食内容；给药的次数以及给药途径；治疗期间；同时使用的其他药剂等各种主要原因而确定。作为药物可接受的载体的含量能够设为放射成像用组合物的1～99重量％的量。放射成像用组合物例如能够按对象的每单位体重(kg)的化合物量为5ng/kg～5mg/kg、优选为5ng/kg～20μg/kg的量给药化合物(I)或化合物(II)的方式来制备。

[α突触核蛋白凝集体相关疾病的诊断药或者用于治疗或预防该疾病的伴侣诊断药]

在一实施方式中，本发明提供α突触核蛋白凝集体相关疾病的诊断药或者用于治疗或预防该疾病的伴侣诊断药。本实施方式的α突触核蛋白凝集体相关疾病的诊断药或者用于治疗或预防该疾病的伴侣诊断药(以下，也称伴侣诊断药)包括上述本实施方式的结合剂。用于治疗的伴侣诊断药是指在明确疾病的情况下用于判断是否有望治疗的诊断药。另外，用于预防的伴侣诊断药是指在明确了疾病的前驱状态的情况下用于预测今后的发病或者用于判断是否有望抑制发病的预防的诊断药。

通过使用本实施方式的诊断药将从对象获得的脑内α突触核蛋白凝集体的量和/或分布量相关的数据与预先获取的疾病和α突触核蛋白凝集体的量和/或分布量的相关性匹配，能够进行目标疾病相关的诊断(具体而言，是否患有疾病、严重性以及发作可能性等)。

另外，通过使用伴侣诊断药并将从对象获得的脑内α突触核蛋白凝集体的量和/或分布量相关的数据与预先获取的疾病和脑内α突触核蛋白凝集体的量和/或分布量的相关性匹配，能够掌握目标疾病状态。因此，基于此能够制定疾病的预防/治疗计划(给药的预防药物或治疗药的种类、组合、用量以及用途等)。

本发明的一实施方式还涉及用于治疗或预防α突触核蛋白凝集体相关疾病的药物，该药物为按照基于通过伴侣诊断得到的脑内α突触核蛋白凝集体的量和/或分布相关的数据的给药计划给药的药物。

[在脑内蓄积的物质相关疾病的诊断试剂盒]

本发明的在脑内蓄积的物质相关疾病的诊断试剂盒(以下，也称诊断试剂盒)包括上述本实施方式的结合剂。

作为在脑内蓄积的物质，至少包括α突触核蛋白凝集体，此外，可举出Tau蛋白或淀粉样蛋白β凝集体。

作为在脑内蓄积的物质相关疾病，至少包括α突触核蛋白凝集体相关疾病，作为该疾病，可举出帕金森氏病、路易体痴呆(DLB)以及多系统萎缩症(MSA)。作为在脑内蓄积的物质相关疾病，除此之外，还可举出作为Tau蛋白或淀粉样蛋白β凝集体相关疾病的阿尔茨海默病(AD)和额颞叶变性。

与Tau蛋白和淀粉样蛋白β凝集体相比，本实施方式的结合剂与α突触核蛋白凝集体的结合选择性更高。另一方面，例如，根据本发明人等的研究的结果明确了与α突触核蛋白凝集体相比，专利文献1记载的化合物与Tau蛋白凝集体的结合性更高。

本实施方式的在一实施方式中，诊断试剂盒能够包含与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的化合物(I)或化合物(II)或其作为药物可接受的盐或其溶剂化物以及与Tau蛋白凝集体的结合选择性高的其他化合物(例如，专利文献1记载的化合物)两者。在这种诊断试剂盒中，通过将前者的检测结果(检测的光或放射线的量和/或分布)与后者的检测结果进行比较，能够特定在成像的各区域存在的物质为哪个物质。具体而言，能够将α突触核蛋白凝集体和Tau蛋白凝集体分类，进一步也能够将各存在量进行定量。因此，能够高精度地诊断α突触核蛋白凝集体相关疾病和/或Tau蛋白相关疾病。例如，分别针对本实施方式的结合剂和与Tau蛋白凝集体的结合选择性高的物质(例如，专利文献1记载的化合物)，预先特定与α突触核蛋白凝集体的结合性和与Tau蛋白凝集体的结合性的比。在此基础上，只要测定被检测体中的前者和后者给药后的脑内各区域内的光或放射线的量比，根据预先特定的比与测定的量比的关系，将在该区域存在α突触核蛋白凝集体、Tau蛋白凝集体中的哪一个进行分类，能够进行各量的定量。

另外，也能够将本实施方式的上述诊断试剂盒设为进一步与淀粉样蛋白β的成像剂组合的诊断试剂盒。将本实施方式的诊断试剂盒与淀粉样蛋白β的成像剂组合而成的诊断试剂盒能够特定在成像的各区域存在的物质为哪个物质。具体而言，能够将α突触核蛋白凝集体和Tau蛋白凝集体和淀粉样蛋白β凝集体分类，进一步也能够将各存在量进行定量。因此，能够高精度地诊断α突触核蛋白凝集体相关疾病、Tau蛋白相关疾病和/或淀粉样蛋白β相关疾病。

本发明的一实施方式还涉及用于治疗或预防α突触核蛋白凝集体相关疾病的药物，该药物为按照基于通过本实施方式的诊断试剂盒得到的包含α突触核蛋白凝集体的脑内蓄积物质的量和/或分布相关的数据的给药计划给药的药物。

[光学成像方法]

在一实施方式中，本发明提供光学成像方法。本实施方式的光学成像方法包括从脑外向给药上述本实施方式的结合剂的被检测体的生物体脑照射第一波长的光后，检测从该脑发出的与第一波长不同的第二波长的光的工序。

如果向被检测体给药有效量的结合剂，则转移到生物体脑的结合剂与在生物体脑内存在的α突触核蛋白凝集体结合。通过从脑外向给药结合剂的被检测体的生物体脑照射激发结合剂的第一波长的光，并检测从脑内的结合剂发出的第二波长的光(例如，荧光)，能够进行α突触核蛋白凝集体的光学成像(图像化)。

作为被检测体，可举出哺乳动物。哺乳动物例如包括人、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、仓鼠、猴、狗、雪貂或迷你猪等。

给药方法没有特别限制，例如，存在口服给药以及静脉内给药或腹腔内给药等非口服给药。优选为静脉内给药或腹腔内给药。最优选为静脉内给药。给药量优选为0.01mg/kg～5mg/kg、0.05mg/kg～3mg/kg或0.1mg/kg～1mg/kg，最优选为0.1mg/kg～1mg/kg。

[放射成像方法]

在一实施方式中，本发明提供放射成像方法。本实施方式的放射成像方法包括检测从给药包括一个或更多的原子为该原子的放射性同位素的化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物的本实施方式的结合剂的被检测体的生物体脑发出的放射线的工序。

如果向被检测体给药有效量的结合剂，则转移到生物体脑的结合剂与在生物体脑内存在的α突触核蛋白凝集体结合。通过检测从脑内的结合剂发出的放射线，能够进行α突触核蛋白凝集体的放射成像(图像化)。

作为被检测体，可举出哺乳动物。哺乳动物例如包括人、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、仓鼠、猴、狗、雪貂或迷你猪等。哺乳动物优选为人。

给药方法没有特别限制，例如，存在口服给药以及静脉内给药或腹腔内给药等非口服给药。优选为静脉内给药或腹腔内给药。最优选为静脉内给药。给药量优选为5ng/kg～5mg/kg，更优选为5ng～20μg/kg。给药放射能量优选为每个体37MBq～7.4GBq，更优选为370MBq～3700MBq。

[脑内α突触核蛋白凝集体相关疾病的治疗药或预防药物的筛选方法]

在一实施方式中，本发明提供脑内α突触核蛋白凝集体相关疾病的治疗或预防药物的筛选方法。本实施方式的脑内α突触核蛋白凝集体相关疾病的治疗或预防药物的筛选方法(以下，也称筛选方法)具有基于对被检测体给药候选物质前后的通过本实施方式的光学成像方法或放射成像方法检测的光或放射线的量和/或分布的差异来选择候选物质的工序。

脑内α突触核蛋白凝集体相关疾病与上述[在脑内蓄积的物质相关疾病的诊断试剂盒]记载的疾病相同。

另外，被检测体和给药方法与上述[光学成像方法]以及[放射成像方法]记载的方法相同。

例如，给药候选物质后，当结合剂的荧光等光或放射线的量(强度)与候选物质给药前相比减少时，候选物质作为该疾病或症状的治疗用化合物是能够有用的。

另外，当与其他正常的哺乳动物相比，在候选化合物给药后，与给药前相比，检测的被检测体的光或放射线的量和/或分布更接近正常的哺乳动物时，该候选化合物作为该疾病或症状的治疗用化合物是能够有用的。

例如，将从给药候选物质的对象获得的候选物质给药前后的结合剂的荧光等光或放射线的量(强度)和/或分布相关的数据与未给药预先获取的候选物质的哺乳动物中的脑内α突触核蛋白凝集体相关疾病发病前后的结合剂的荧光等光或放射线的增加量和/或分布的变化进行比较。而且，疾病发病后观察到的该荧光等光或放射线量的增加因给药候选物质而被抑制和/或该荧光等光或放射线量在候选物质给药后与给药前同样地表现出与正常的哺乳动物接近的值时，候选物质作为该疾病或症状的预防用化合物是能够有用的。同样地，在疾病发病后观察到的该荧光等光或放射线的分布的变化因给药候选物质而被抑制和/或该荧光等光或放射线的分布的变化在候选物质给药后与给药前同样地接近正常的哺乳动物中的分布的情况下，候选物质作为该疾病或症状的预防用化合物也是能够有用的。

[对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定的方法]

在一实施方式中，本发明提供对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定的方法。本实施方式的对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定的方法包括在从脑外向给药包括化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物的上述结合剂的被检测体的生物体脑照射第一波长的光后，检测从该脑发出的与第一波长不同的第二波长的光的工序，基于该检测的光的量和/或分布，对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定。该方法是通过光学成像对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定的方法。

被检测体以及给药方法与上述[光学成像方法]中的记载的相同。

通过求出检测的被检测体的光的量和/或分布与其他正常的哺乳动物的差，能够对脑内的α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量以及判定脑内的α突触核蛋白凝集体有无蓄积。

在本实施方式的对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定的方法的另一方式中，包括检测从给药包括一个或更多的原子为该原子的放射性同位素的化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物的本实施方式的结合剂的被检测体的生物体脑发出的放射线的工序，基于该检测的放射线的量和/或分布，对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定。该方法是通过放射成像对脑内α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量或判定的方法。

被检测体以及给药方法与上述[放射成像方法]中记载的相同。

通过求出检测的被检测体的光或放射线的量和/或分布与其他正常的哺乳动物的差，能够对脑内的α突触核蛋白凝集体的蓄积进行定量以及判定脑内的α突触核蛋白凝集体有无蓄积。

[判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积的方法]

在一实施方式中，本发明提供判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积的方法。本发明的判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积的方法包括：第一工序，从脑外向给药包括化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物的本实施方式的结合剂的被检测体的生物体脑照射第一波长的光后，检测从该脑发出的与第一波长不同的第二波长的光；以及第二工序，从脑外向在与第一工序不同的时期给药与Tau蛋白凝集体的结合选择性高的物质(例如，专利文献1记载的化合物)的该被检测体的生物体脑照射第三波长的光后，检测从该脑发出的与第三波长不同的第四波长的光，基于在第一工序中检测的光的量和/或分布数据和在第二工序中检测的光的量和/或分布数据，判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积。该方法是通过光学成像判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积的方法。

被检测体和给药方法与上述[光学成像方法]中记载的相同。

由于包括检测与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的结合剂的给药引起的从脑发出的光的第一工序以及检测相同的被检测体中的与Tau蛋白凝集体的结合选择性高的物质的给药引起的从脑发出的光的第二工序两者，因此，将第一工序的检测结果(检测的光的量和/或分布)和第二工序的检测结果进行比较，从而能够判定在脑内蓄积的物质是否为α突触核蛋白凝集体和/或Tau蛋白凝集体的分类以及蓄积。

在本实施方式的判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积的方法的另一方式中，包括：第一工序，检测从给药包括一个或更多的原子为该原子的放射性同位素的化合物(I)或化合物(II)、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物的本实施方式的结合剂的被检测体的生物体脑发出的放射线；以及第二工序，检测从在与第一工序不同的时期给药与Tau蛋白凝集体的结合选择性高的物质(例如，专利文献1记载的化合物)的该被检测体的脑发出的放射线，基于在第一工序中检测的放射线的量和/或分布数据和在第二工序中检测的光的量和/或分布数据，判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积。该方法是通过放射成像判定在脑内蓄积的物质的分类以及蓄积的方法。

被检测体以及给药方法与上述[放射成像方法]中记载的相同。

由于包括检测与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的结合剂的给药引起的从脑发出的放射线的第一工序以及检测相同的被检测体中的与Tau蛋白凝集体的结合选择性高的物质的给药引起的从脑发出的放射线的第二工序两者，因此，将第一工序的检测结果(检测的放射线的量和/或分布)与第二工序的检测结果进行比较，从而能够判定在脑内蓄积的物质是否为α突触核蛋白凝集体和/或Tau蛋白凝集体的分类以及蓄积。

(总结)

以下，对本发明的实施方式进行总结。

本发明的一方面是由下述式(I)或(II)表示的化合物、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物。

化学式13

本发明的一方面是含有所述化合物、其作为药物可接受的盐或其溶剂化物的α突触核蛋白凝集体结合剂。

本发明的一方面是包含所述结合剂的α突触核蛋白凝集体的光学成像用组合物。

本发明的一方面是包含所述结合剂的α突触核蛋白凝集体的放射成像用组合物。

本发明的一方面是包括从脑外向给药所述结合剂的被检测体的生物体脑照射第一波长的光后，检测从所述脑发出的与第一波长不同的第二波长的光的工序的脑内α突触核蛋白凝集体的光学成像方法。

本发明的一方面是包括检测从给药所述结合剂的被检测体的生物体脑发出的放射线的工序的脑内α突触核蛋白凝集体的放射成像方法。

本发明的一方面是由下述式(III)表示的用于合成所述化合物的中间体。

化学式14

(式(III)中，X和Y中的一个为氮原子(N)，另一个为未被取代的碳原子(CH)(即，当X为氮原子时，Y为未被取代的碳原子(CH)，当X为未被取代的碳原子(CH)时，Y为氮原子)。

R

化学式15

其中，Ts表示对甲苯磺酰基，THP表示四氢-2H-吡喃-2-基，*表示与苯并噻唑环的结合位置。

R

本发明的一方面是包含与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的所述化合物(I)或化合物(II)的诊断试剂盒。

本发明并不限于上述各实施方式，能够在权利要求所示的范围内进行各种改变，将不同的实施方式中分别公开的技术的手段适当组合而得到的实施方式也包括在本发明的技术范围内。

实施例

(制造例)

以下的制造例(参考例以及实施例)中的“室温”通常表示约10℃～约35℃。除非特别说明，％表示重量％。另外，关于各制造例的使用化合物的说明，“通过参考例(实施例)X制造的”也包括“与参考例(实施例)X同样地进行而制造的”的情况。

除非另有说明，制造例的柱色谱法中的溶出在使用TLC(Thin LayerChromatography，薄层色谱)的观察下进行。在TLC观察中，使用默克公司(Merck)制的60F254作为TLC板，作为展开溶剂，使用在柱色谱法中作为溶出溶剂使用的溶剂。另外，检测采用UV检测器。

1

在以下的实施例中使用下述的简化符号。

M：摩尔浓度。

DMSO-d

1

DIEA：N-乙基-N-异丙基丙烷-2-胺。

DMF：N，N-二甲基甲酰胺(本说明书中也记作“二甲基甲酰胺(dimethylformamide)”)。

THF：四氢呋喃。

MeOH：甲醇。

EtOH：乙醇。

DMSO：二甲基亚砜。

TEA：三乙胺。

TFA：三氟醋酸。

参考例1：二叔丁基(5-碘吡嗪-2-基)-2-酰亚胺二碳酸酯的制造

化学式16

在0℃条件下，在5-碘吡嗪-2-胺(CAS[886860-50-0])(10.5g)的THF(100mL)溶液中加入二碳酸二叔丁酯(25.9g)的THF(50mL)溶液和N，N-二甲基吡啶-4-胺(1.45g)。将该混合物以0℃至室温搅拌过夜后，用水和醋酸乙酯稀释，过滤分离出不溶物后，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，通过短的硅胶柱减压浓缩，得到作为棕色固体的标题化合物(18.8g)。

1

参考例2：叔丁基(5-碘吡嗪-2-基)氨基甲酸酯的制造

化学式17

在室温条件下，在参考例1中制造的二叔丁基(5-碘吡嗪-2-基)-2-酰亚胺二碳酸酯(18.8g)的MeOH(200mL)溶液中加入碳酸钾(7.40g)。将该混合物在室温条件下搅拌2小时后，在减压下浓缩至四分之一左右，冷却至0℃后，用5％柠檬酸水溶液中和后用水稀释。过滤收集析出的固体，用水洗涤后干燥，得到作为棕色固体的标题化合物(13.7g)。

1

参考例3：叔丁基(5-碘吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式18

在0℃条件下，在参考例2中制造的叔丁基(5-碘吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(13.7g)和碳酸铯(20.9g)的DMF(85mL)溶液中加入碘甲烷(3.45mL)。将该混合物以0℃至室温搅拌过夜后，冷却至0℃，用水稀释。过滤收集析出的固体，用水洗涤后干燥，得到作为米色固体的标题化合物(13.0g)。

1

参考例4：叔丁基(5-(3-羟基丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式19

在室温条件下，在氮环境下在参考例3中制造的叔丁基(5-碘吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(13.0g)、2-丙炔-1-醇(3.43mL)以及碘化铜(I)(739mg)的TEA(27mL)和THF(27mL)的混合溶液中加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(545mg)。将该混合物在室温条件下搅拌2小时后，用醋酸乙酯稀释后，进行硅藻土过滤。在减压下浓缩滤液，用醋酸乙酯稀释残渣后，用5％柠檬酸水溶液使其成为酸性，进行硅藻土过滤，用醋酸乙酯萃取滤液。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，通过硅胶垫在减压下浓缩，得到作为棕色固体的标题化合物(10.2g)。

1

参考例5：叔丁基(5-(3-羟基丙-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式20

使用叔丁基(5-碘嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(CAS[1578264-18-2])(250mg)通过与参考例4同样的方法，得到作为棕色固体的标题化合物(195mg)。

1

参考例6：叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯的制造

化学式21

在室温条件下，在参考例4中制造的叔丁基(5-(3-羟基丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(10.4g)的乙腈(200mL)溶液中加入1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氢-1，2-苯碘酰-3-(1H)-酮(20.1g)。将该混合物在室温条件下搅拌2小时后，冷却至0℃，加入饱和硫代硫酸钠水溶液和5％碳酸氢钠水溶液搅拌5分钟后，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，通过短的硅胶柱减压浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，得到作为黄色固体的标题化合物(6.20g)。

1

参考例7：叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸酯的制造

化学式22

使用参考例5中制造的叔丁基(5-(3-羟基丙-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(190mg)通过与参考例6同样的方法得到作为白色固体的标题化合物(149mg)。

1

参考例8：2-((1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃的制造

化学式23

在室温条件下，在1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-醇(CAS[112482-36-7])(6.37g)和3，4-二氢-2H-吡喃(3.75mL)的THF(67mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(132mg)。将该混合物在室温条件下搅拌过夜后，加入DIEA(0.242mL)在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，得到作为无色液体的标题化合物(8.37g)。

1

参考例9：2-(((R)-1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃的制造

化学式24

使用(R)-1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-醇(CAS[147332-34-1])(7.85g)通过与参考例8同样的方法得到作为无色液体的标题化合物(10.36g)。

1

参考例10：2-(((S)-1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃的制造

化学式25

使用(S)-1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-醇(CAS[1707146-21-1])(7.55g)通过与参考例8同样的方法得到作为无色液体的标题化合物(10.48g)。

1

参考例11：3-(苄氧基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式26

在0℃条件下，在3-(苄氧基)-2-羟丙基4-甲基苯磺酸酯(CAS[99881-48-8])(2.80g)和1H-咪唑(737mg)的DMF(30mL)溶液中加入叔丁基二甲基氯硅烷(1.51g)。将该混合物在室温条件下搅拌过夜，冷却至0℃后，用醋酸乙酯和水稀释，用5％柠檬酸水溶液调节至pH约5后，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，得到作为无色液体的标题化合物(3.37g)。

1

参考例12：3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇的制造

化学式27

在室温条件下，在常压的氢环境下将参考例8中制造的2-((1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃(8.30g)和10％钯-碳(50％含水，1.98g)以及EtOH(85mL)的混合物搅拌过夜。过滤除去催化剂，在减压下浓缩滤液，得到作为无色液体的标题化合物(5.45g)。

1

参考例13：(2R)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇的制造

化学式28

使用参考例9中制造的2-(((R)-1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃(10.35g)通过与参考例12同样的方法得到作为无色液体的标题化合物(6.85g)。

1

参考例14：(2S)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇的制造

化学式29

使用参考例10中制造的2-(((S)-1-(苄氧基)-3-氟丙烷-2-基)氧基)四氢-2H-吡喃(10.45g)通过与参考例12同样的方法得到作为无色液体的标题化合物(6.90g)。

1

参考例15：2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-羟丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式30

使用参考例11中制造的3-(苄氧基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(3.36g)通过与参考例12同样的方法得到作为无色液体的标题化合物(2.66g)。

1

参考例16：(2S)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇和(2S)-1-氟-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-2-醇的混合物的制造

化学式31

在室温条件下保管参考例14中制造的(2S)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇(6.90g)，得到作为无色液体的标题化合物(6.90g)。

1

参考例17：二乙基((6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯的制造

化学式32

在100℃条件下将2-(溴甲基)-6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯并[d]噻唑(CAS[1638685-65-0])(3.06g)和亚磷酸三乙酯(1.78mL)的混合物搅拌3小时后，冷却至室温并通过硅胶柱色谱法(醋酸乙酯/甲醇)纯化，得到作为黄色液体的标题化合物(2.39g)。

1

参考例18：二乙基((6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯的制造

化学式33

在室温条件下，在参考例17中制造的二乙基((6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯(4.87g)的THF(50mL)溶液中加入四正丁基氟化铵(1M THF溶液，12.9mL)。将该混合物在室温条件下搅拌1小时后，用水稀释，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将固体残渣悬浮于己烷/醋酸乙酯中后，过滤收集，用己烷/醋酸乙酯洗涤后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(2.85g)。

1

参考例19：二乙基((6-(3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯的制造

化学式34

在室温条件下，在参考例18中制造的二乙基((6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯(2.84g)、参考例12中制造的3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇(2.52g)和三苯基膦(4.20g)的THF(50mL)溶液中加入偶氮二羧酸二异丙酯(3.15mL)。将该混合物在室温条件下搅拌1天，在室温条件下加入参考例12中制造的3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇(0.504g)、三苯基膦(0.742g)和偶氮二羧酸二异丙酯(0.555mL)，在室温条件下搅拌过夜后，在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，得到作为黄色液体的标题化合物(3.78g)。

1

参考例20：叔丁基(E)-(5-(4-(6-(3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式35

在0℃条件下，在参考例19中制造的二乙基((6-(3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯(3.77g)和参考例6中制造的叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(2.56g)的THF(30mL)溶液中加入氢化钠(60％油性，392mg)。将该混合物在0℃条件下搅拌10分钟后，在0℃条件下加入DMF(30mL)，在0℃至室温条件下搅拌3小时。在室温条件下，在该混合物中加入参考例6中制造的叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(256mg)并在室温条件下搅拌1小时后，用醋酸乙酯和水稀释后，用5％柠檬酸水溶液中和，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，在减压下浓缩包含标题化合物的组分。将固体残渣悬浮于己烷中，用己烷洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(2.06g)。

1

实施例1：叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式36

在0℃条件下，在参考例17中制造的二乙基((6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯(2.39g)和参考例6中制造的叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(1.65g)的THF(25mL)溶液中加入氢化钠(60％油性，322mg)。将该混合物在0℃条件下搅拌5分钟后，在0℃条件下加入DMF(25mL)，在0℃条件下搅拌2小时。在0℃条件下，在该混合物中加入氢化钠(60％油性，138mg)和参考例6中制造的叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯(601mg)，在0℃至室温条件下搅拌2小时后，冷却至0℃，用5％柠檬酸水溶液调节至pH约为5，用水稀释后，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，通过短的硅胶柱色谱在减压下浓缩。将固体残渣悬浮于醋酸乙酯/己烷后，用醋酸乙酯/己烷洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(1.85g)。

1

实施例2：叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式37

使用参考例17中制造的二乙基((6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯并[d]噻唑-2-基)甲基)膦酸酯(254mg)和参考例7中制造的叔丁基甲基(5-(3-氧代丙-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)氨基甲酸酯(145mg)通过与实施例1同样的方法得到作为黄色固体的标题化合物(101mg)。

1

参考例21：叔丁基(5-((E)-4-(6-((2R)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式38

使用实施例1中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(100mg)、参考例13中制造的(2R)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇(114mg)和双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸(172mg)通过与参考例19同样的方法得到作为淡黄色固体的标题化合物(100mg)。

1

参考例22：叔丁基(5-((E)-4-(6-((2S)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式39

使用实施例1中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(100mg)和参考例16中制造的(2S)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-1-醇以及(2S)-1-氟-3-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙烷-2-醇的混合物(114mg)和双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸(172mg)通过与参考例19同样的方法得到作为淡黄色固体的标题化合物(22mg)。

1

参考例23：(E)-3-((2-(4-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式40

/>

使用实施例1中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(971mg)和参考例15中制造的2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-羟丙基4-甲基苯磺酸酯(1.11g)和双(2-甲氧基乙基)偶氮二羧酸(835mg)通过与参考例19同样的方法得到作为淡黄色固体的标题化合物(1.47g)。

1

参考例24：叔丁基(E)-(5-(4-(6-(3-氟-2-羟基丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯的制造

化学式41

在室温条件下，在实施例2中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(99mg)和碳酸钾(66mg)的DMF(3mL)溶液中加入2-(氟甲基)环氧乙烷(CAS[503-09-3])(0.060mL)。将该混合物在80℃条件下加热4小时，冷却至室温后，用醋酸乙酯和水稀释，用5％柠檬酸水溶液中和后，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，得到作为黄色固体的标题化合物(36mg)。

1

参考例25：(E)-3-((2-(4-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-羟丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式42

在0℃条件下，在参考例23中制造的(E)-3-((2-(4-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(100mg)和醋酸(0.023mL)的THF(10mL)溶液中加入四正丁基氟化铵(1M THF溶液，0.533mL)。将该混合物在0℃条件下搅拌0.5小时后，用水稀释，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，得到作为黄色固体的标题化合物(37mg)。

1

参考例26：(E)-2-羟基-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式43

在室温条件下，将参考例23中制造的(E)-3-((2-(4-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(750mg)的TFA(13.5mL)和水(1.5mL)的混合溶液搅拌0.5小时后，冷却至0℃，用醋酸乙酯稀释后，用饱和碳酸氢钠水溶液中和，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，过滤收集从萃取液析出的固体。用无水硫酸钠干燥滤液，在减压下浓缩。将固体残渣和过滤收集的固体合并后悬浮于己烷中。用己烷洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(550mg)。

1

实施例3：(E)-2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-醇的制造

化学式44

在室温条件下，将实施例1中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-羟基苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(230mg)的TFA(4mL)溶液搅拌1小时后，在减压下浓缩。在残渣中加入醋酸乙酯，冷却至0℃后，用饱和碳酸氢钠水溶液中和并用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将固体残渣悬浮于醋酸乙酯中，用醋酸乙酯洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(140mg)。

1

实施例4：(E)-1-氟-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙烷-2-醇(以下，称为“SPAL-T-06”)的制造

化学式45

在室温条件下，将参考例20中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-(3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(2.06g)的TFA(20mL)溶液搅拌0.5小时后，在减压下浓缩。在残渣中加入甲苯，将该混合物在减压下浓缩。在残渣中加入醋酸乙酯和水，用5％碳酸氢钠水溶液中和。过滤收集析出的固体，用水和醋酸乙酯洗涤并干燥。将滤液和洗涤液合并，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。将固体残渣悬浮于醋酸乙酯中，用醋酸乙酯洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥。将该固体和萃取前过滤收集的固体合并后悬浮于醋酸乙酯中，用醋酸乙酯洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(1.07g)。

1

实施例5：(R，E)-1-氟-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙烷-2-醇的制造

化学式46

使用参考例21中制造的叔丁基(5-((E)-4-(6-((2R)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(98mg)通过与实施例4同样的方法得到作为淡黄色固体的标题化合物(58mg)。

1

实施例6：(S，E)-1-氟-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙烷-2-醇的制造

化学式47

使用参考例22中制造的叔丁基(5-((E)-4-(6-((2S)-3-氟-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)吡嗪-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(20mg)通过与实施例4同样的方法得到作为淡黄色固体的标题化合物(12mg)。

1

实施例7：(E)-1-氟-3-((2-(4-(2-(甲基氨基)嘧啶-5-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙烷-2-醇(以下，称为“SPAL-T-05”)的制造

化学式48

使用参考例24中制造的叔丁基(E)-(5-(4-(6-(3-氟-2-羟基丙氧基)苯并[d]噻唑-2-基)丁-3-烯-1-炔-1-基)嘧啶-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(34mg)通过与实施例4同样的方法得到作为黄色固体的标题化合物(15mg)。

1

实施例8：(E)-3-((2-(4-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式49

在室温条件下，在参考例25中制造的(E)-3-((2-(4-(5-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-羟丙基4-甲基苯磺酸酯(35mg)和3，4-二氢-2H-吡喃(0.050mL)的THF(15mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(21mg)。将该混合物在室温条件下搅拌4小时后，在室温条件下加入3，4-二氢-2H-吡喃(0.249mL)和对甲苯磺酸一水合物(21mg)。将该混合物在室温条件下搅拌过夜后，用醋酸乙酯稀释后，用5％碳酸氢钠水溶液中和，用水稀释后用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，在减压下浓缩包含标题化合物的组分。将固体残渣悬浮于己烷中并用己烷洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(28mg)。

1

实施例9：(E)-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-2-((四氢-2H-吡喃-2-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯的制造

化学式50

在室温条件下，在参考例26中制造的(E)-2-羟基-3-((2-(4-(5-(甲基氨基)吡嗪-2-基)丁-1-烯-3-炔-1-基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)丙基4-甲基苯磺酸酯(35mg)和3，4-二氢-2H-吡喃(0.018mL)的THF(15mL)溶液中加入对甲苯磺酸一水合物(12mg)。将该混合物在室温条件下搅拌0.5小时，在室温条件下加入DMF(5mL)和3，4-二氢-2H-吡喃(0.159mL)和对甲苯磺酸一水合物(24mg)。将该混合物在室温条件下搅拌过夜后，用水稀释，用醋酸乙酯萃取。用水和食盐水洗涤萃取液后，用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过硅胶柱色谱法(己烷/醋酸乙酯)纯化残渣，在减压下浓缩包含标题化合物的组分。将固体残渣悬浮于己烷中，用己烷洗涤通过过滤收集得到的固体后干燥，得到作为黄色固体的标题化合物(21mg)。

1

实施例10：[

通过以下方案制造氟原子为

化学式51

[

实施例11：[

通过以下的方案制造[

化学式52

用包含K.222(Kryptofix(注册商标)222)(7.5mg)以及碳酸钾(2.77mg)的50％乙腈溶液(0.4mL)将[

[人脑的光学成像]

(解剖脑组织)

从对路易体痴呆(DLB)患者以及阿尔茨海默病(AD)患者进行的尸检中获得死后人脑。将冷冻DLB组织在低温恒温器(HM560，卡尔蔡司公司(Carl Zeiss))内切成20μm厚。另外，将AD脑组织固定在10％中性缓冲福尔马林中，埋入石蜡块，切成6μm厚。

(体外荧光显微镜测定)

使用DLB患者脑扁桃体组织的后固定新鲜冷冻切片以及脱石蜡的AD患者脑额中回组织的福尔马林固定石蜡包埋切片。在室温条件下，将30μM的试验化合物和脑切片在50％乙醇溶液中孵育30分钟。接着，用50％乙醇溶液将切片洗涤5分钟，用超纯水洗涤3分钟，洗涤2次。使用封固剂(VECTASHIELD H-1000，维百奥公司(Vector Laboratories))封入切片后，使用荧光显微镜(DM4000，徕卡公司(Leica)，激发波长391-437nm)获取切片上的病变蓄积区域的图像，将荧光图像示于图1。在图1中，三角表示与DLB患者脑的α突触核蛋白凝集体结合的化合物的荧光，箭头表示与AD患者脑的淀粉样蛋白β凝集体结合的化合物的荧光，星号表示与AD患者脑的Tau凝集体结合的化合物的荧光。使用分析软件(Image J)对病变区域和未形成病变区域(背景)的荧光亮度进行定量。将结果示于图2。此外，作为试验化合物，使用SPAL-T-05以及SPAL-T-06。另外，作为对照的化合物，使用从纳德研究所(nard)获得的BF-227(2-(2-[2-二甲氨基噻唑-5-基]乙烯基)-6-(2-[氟]乙氧基)苯并噁唑(目录号NP039-0))以及PBB3(2-((1E，3E)-4-(6-(甲基氨基)吡啶-3-基)丁-1，3-二烯基)苯并[d]噻唑-6-醇)(目录号NP039-0)。

如图1和图2所示，确认了SPAL-T-06和SPAL-T-05以比PBB3更强的强度与DLB的患者脑中形成的α突触核蛋白凝集体结合。另外，确认了SPAL-T-06和SPAL-T-05与α突触核蛋白凝集体的结合性比与AD患者脑中形成的Tau或淀粉样蛋白β凝集体的结合更强。即，表明了本发明的化合物与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高。此外，与上述DLB患者脑同样地对多系统萎缩症(MSA)患者脑也进行了体外荧光显微镜测定后，得到了相同的结果。

此外，确认了作为α突触核蛋白病变的PET探针报告的BF-227主要与AD的淀粉样蛋白β凝集体结合，与α突触核蛋白凝集体的结合与SPAL-T-06和SPAL-T-05相比更弱。即，表明了BF-227与α突触核蛋白凝集体的结合选择性低。

[小鼠脑的光学成像]

(接种α突触核蛋白纤维的小鼠模型的制备)

如果将小鼠α突触核蛋白作为重组蛋白质在大肠杆菌中表达并提取，并在试管内孵育，则形成不溶性的凝集体。如果将该α突触核蛋白凝集体接种于小鼠的纹状体，α突触核蛋白的凝集体以神经回路为途径向周围区域传播，几个月后在大脑新皮质中观察到α突触核蛋白病变(Masuda-Suzukake etal.Acta Neuropathol Commun 2,88,2014；Shimozawaet al.Acta Neuropathol Commun 5,12,2017)。如果取出该小鼠的脑，制备切片并通过荧光染色进行分析，则能够确认本发明的化合物是否与由磷酸化α突触核蛋白构成的病变结合。

(接种α突触核蛋白纤维的小鼠模型的制备)

首先，将小鼠α突触核蛋白作为重组蛋白质在大肠杆菌中表达并提取，并在试管内孵育，形成不溶性的α突触核蛋白凝集体。接着，将该α突触核蛋白凝集体接种于小鼠的纹状体后，α突触核蛋白的凝集体以神经回路为途径向周围区域传播，几个月后在大脑新皮质中观察到α突触核蛋白病变。此外，通过以下的方法将该α突触核蛋白凝集体接种于小鼠的纹状体。首先，除去用1.5％(v/v)异氟烷麻醉的9周龄的C57/BL/6雄性小鼠的头部的毛，用聚烯吡酮碘(Isodine)将头皮消毒后，涂布利多卡因(Xylocaine)，在头皮上形成切口从而使头盖露出。接着，在前囟0.05mm且侧面2mm的位置的头盖处用钻头开孔，使用玻璃移液管在2μm的深度位置处注入α突触核蛋白纤维溶液(小鼠α突触核蛋白纤维4mg/mL，在生理盐水中)3μL后，将头皮返回原处进行缝合。

(体外荧光显微镜测定)

取出该接种α突触核蛋白纤维的小鼠脑，制备切片并通过荧光染色进行分析。具体而言，在室温条件下，将接种α突触核蛋白纤维的小鼠脑切片和30μM的化合物在20％乙醇溶液中孵育30分钟。接着，将切片用20％乙醇溶液洗涤5分钟，用超纯水洗涤3分钟，洗涤2次。使用封固剂(VECTASHIELD H-1000)封入切片后，使用荧光显微镜(DM4000(激发波长391-437nm))获取切片上的α突触核蛋白凝集体蓄积区域的图像。使用磷酸缓冲液洗涤同一切片后，为了进行抗原性活化，用高压釜处理。通过抗磷酸化α突触核蛋白单克隆抗体(pS129，艾博抗公司(abcam)，ab59264)(1：1000)进行免疫组织化学染色，使用封固剂(VECTASHIELDH-1000)封入切片后，使用荧光显微镜(DM4000(激发波长460-500nm))获取与上述相同区域的图像。将结果示于图3。图3的(a)和(b)分别示出SPAL-T-05和SPAL-T-06的结果，在图3的(a)和(b)中，右侧为抗磷酸化α突触核蛋白抗体染色，左侧为SPAL-T-05和SPAL-T-06荧光染色。在图3中，三角表示由接种α突触核蛋白纤维的小鼠脑的磷酸化α突触核蛋白形成的病变以及与其结合的化合物的荧光。

根据图3的结果，表明了SPAL-T-05和SPAL-T-06与由磷酸化α突触核蛋白形成的病变结合。

[体内双光子激光扫描荧光显微镜检查]

用1.5％(v/v)异氟烷麻醉α突触核蛋白纤维溶液注入6周以后的模型小鼠，按照塞拉兹-托米塔(Seylaz-Tomita)法(Tomita et al.J Cereb Blood Flow Metab 25,858-67,2005)设置颅窗。用1.5％(v/v)异氟烷麻醉设置颅窗2周以后的小鼠，将包含0.1％的BF-227、PBB3、SPAL-T-05或SPAL-T-06的DMSO溶液50μL在腹腔内给药。给药30分钟后，在双光子激光荧光显微镜下固定小鼠，将包含5mM磺基罗丹明101的生理盐水100μL在腹腔内给药后，在激发波长900nm下进行生物体双光子荧光成像。将针对BF-227、PBB3、SPAL-T-05以及SPAL-T-06的检测波长设为500～550nm，将针对磺基罗丹明101的检测波长设为573～648nm。将结果示于图4。在图4中，三角表示血管，箭头表示与α突触核蛋白病变结合的化合物的荧光。

根据图4的结果，如果将SPAL-T-05和SPAL-T-06在腹腔内给药，则该化合物在生物体脑内进一步转移至神经元内，通过生物体双光子激光荧光显微镜观察与各α突触核蛋白病变结合的状态。因此，可以说该病变的密度或总数少，在通过PET难以检测的情况下，也能够通过使用本发明的化合物的生物体荧光成像检测病变。另一方面，将BF-227和PBB3在腹腔内给药进行观察也检测不到α突触核蛋白病变。

[小鼠脑的体内PET(正电子断层撮影法)成像]

PET扫描使用0.851mm厚(中心间)的95个切片、提供19.0cm体轴方向视野(FOV)以及7.6cm截面内FOV的micro PET Focus 220动物扫描仪(西门子医疗系统(SiemensMedical Solutions))进行。扫描前，用1.5％(v/v)异氟烷麻醉接种α突触核蛋白纤维的小鼠和注入生理盐水的小鼠(对照)。静脉注射[

图5左为静注[

用正电子释放核素标记SPAL-T-06，静注到α突触核蛋白纤维接种模型小鼠以及注入生理盐水的小鼠(对照)中实施PET扫描后，如图5～7所示，可知具有适当的脑迁移性或脑清除速度，作为PET中将α突触核蛋白凝集体图像化的探针表现出良好的特性。此外，在α突触核蛋白纤维接种模型小鼠中，观察到[

[小鼠脑的离体成像]

用1.5％(v/v)异氟烷麻醉注入生理盐水的小鼠，静脉注射[

根据图8的结果，确认了即使向注入生理盐水的小鼠静注[

[狨猴脑的PET(正电子断层撮影法)成像]

(接种α突触核蛋白纤维的狨猴模型的制备)

首先，以狨猴α突触核蛋白作为重组蛋白质而使其在大肠杆菌中表达并萃取，在试管内孵育，形成不溶性的α突触核蛋白凝集体。接着，将该α突触核蛋白凝集体接种于狨猴的尾状核和外壳后，α突触核蛋白的凝集体以神经回路为途径向周围的区域传播，几个月后在黑质观察到α突触核蛋白病变。通过以下的方法将该α突触核蛋白凝集体接种于狨猴的尾状核和外壳。首先，向通过氯胺酮(5～10mg/kg)和甲苯噻嗪(0.2～0.5mg/kg)固定化的狨猴插入器官内管后，用1～3％(v/v)异氟烷麻醉。除去狨猴的头部的毛，用聚烯吡酮碘将头皮消毒后，涂布利多卡因，在头皮上形成切口从而使头盖露出。在耳间的9.75mm的位置的头盖处用钻头开孔(直径～3mm)，使用汉密尔顿注射器在右脑的尾状核和外壳中分别注入α突触核蛋白纤维溶液(狨猴α突触核蛋白纤维4mg/mL在生理盐水中)50μL。进一步，通过相同的方法在左脑的尾状核和外壳中分别注入生理盐水50μL后，将头皮返回原处进行缝合。

(狨猴脑的体内PET(正电子断层撮影法)成像)

PET扫描使用0.851mm厚的(中心间)95个切片、提供19.0cm体轴方向视野(FOV)以及7.6cm截面内FOV的micro PET Focus 220动物扫描仪(西门子医疗系统)进行。扫描前，用1～3％(v/v)异氟烷麻醉接种α突触核蛋白纤维的狨猴。透射扫描使用PET校正用射线源Ge-68实施约20分钟。在静脉注射[

(体外荧光显微镜测定)

取出该接种α突触核蛋白纤维的狨猴的脑，制备切片并通过免疫组织化学染色分析。具体而言，使用磷酸缓冲液洗涤接种α突触核蛋白纤维的狨猴脑切片后，通过高压釜进行处理以进行抗原性活化。通过抗磷酸化α突触核蛋白单克隆抗体(pS129，艾博抗公司(abcam)，ab59264)(1：1000)进行免疫组织化学染色，使用封固剂(VECTASHIELD H-1000)封入切片后，使用荧光显微镜(BZ-X710，基恩士公司(KEYENCE)(激发波长450-490nm)以及DM4000(激发波长460-500nm))获取图像。将结果示于图9。图9(b)是接种α突触核蛋白纤维的狨猴的包括尾状核的脑的冠状切片的抗磷酸化α突触核蛋白抗体染色图像。图9(b)中的2是接种α突触核蛋白纤维的右脑的尾状核的抗磷酸化α突触核蛋白抗体染色的放大图像，图9(b)中的1是注入生理盐水的左脑的尾状核的抗磷酸化α突触核蛋白抗体染色的放大图像。

用正电子释放核素标记SPAL-T-06，静注到α突触核蛋白纤维接种模型狨猴中并实施PET扫描后，观察到[

[人脑的体外结合试验]

使用DLB患者脑扁桃体的新鲜冷冻组织以及AD患者脑前额皮质的新鲜冷冻组织。在新鲜冷冻脑组织中加入组织的湿重量的10倍量的缓冲液和氧化锆珠(ZB-20，多美公司(TOMY))，用微粉碎机(MS-100R，多美公司(TOMY))粉碎后，在－80℃条件下保存。在Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐)缓冲液(包含20％乙醇)中混合DLB患者脑匀浆或AD患者脑匀浆、[

用正电子释放核素标记SPAL-T-06，使用DLB患者脑和AD患者脑的匀浆实施结合试验后，确认了[

[人脑的体外自动射线照相]

(解剖脑组织)

从对DLB患者、多系统萎缩症(MSA)患者以及健康对象者进行的尸检中获取死后人脑。在低温恒温器(HM560，卡尔蔡司公司(Carl Zeiss))内将冷冻DLB组织和冷冻健康对象者组织切成20μm厚。另外，将MSA脑组织固定于10％中性缓冲福尔马林，埋入石蜡块，切成6μm厚。

(自动射线照相试验)

使用DLB患者脑扁桃体组织以及健康对象者脑前额皮质组织的后固定新鲜冷冻切片以及脱石蜡的MSA患者脑小脑组织的福尔马林固定石蜡包埋切片。在室温条件下，将[

(体外荧光显微镜的测定)

通过荧光染色对实施了自动射线照相的切片进行分析。具体而言，在室温条件下，将切片和30μM的SPAL-T-06在50％乙醇溶液中孵育30分钟。接着，用50％乙醇溶液将切片洗涤5分钟，用超纯水洗涤3分钟，洗涤2次。使用封固剂(VECTASHIELD H-1000)封入切片后，使用荧光显微镜(DM4000(激发波长391-437nm))获取切片上的α突触核蛋白凝集体蓄积区域的图像。另外，使用磷酸缓冲液将相邻的脑切片洗涤后，用高压釜进行处理以进行抗原性活化。通过抗磷酸化α突触核蛋白单克隆抗体(pS129，艾博抗公司(abcam)，ab59264)(1：1000)进行免疫组织化学染色，使用封固剂(VECTASHIELD H-1000)封入切片后，使用荧光显微镜(BZ-X710(激发波长450-490nm)以及DM4000(激发波长460-500nm))获取图像。将结果示于图12。图12(a)(用图中“1”表示)为DLB患者脑的抗磷酸化α突触核蛋白抗体染色以及SPAL-T-06荧光染色，图12(b)(用图中“2”表示)为MSA患者脑的抗磷酸化α突触核蛋白抗体染色以及SPAL-T-06荧光染色。

用正电子释放核素标记SPAL-T-06，使用DLB患者脑扁桃体切片、MSA患者脑小脑切片以及健康对象者脑前额皮质切片实施自动射线照相后，确认了[

工业实用性

根据本发明，能够提供与α突触核蛋白凝集体的结合选择性高的α突触核蛋白凝集体结合剂。而且，能够提供使用该α突触核蛋白凝集体结合剂的成像方法。另外，能够提供能用于α突触核蛋白凝集体结合剂或其他用途的新化合物。