一株硒螺旋藻突变株及应用

技术领域

本发明涉及富硒螺旋藻的选育与筛选，尤其是一株硒螺旋藻突变株及应用。

背景技术

螺旋藻的最佳生长温度是35-37℃，具有较好的耐热性。最佳生长pH范围为8.3-11.0，当pH大于11.0时将不利于生长。在营养和温度正常的情况下，光照就成为影响螺旋藻生长的一个重要因素，在室外培养，光源主要是太阳，大池培养过程中的管理是稳产高产的重要保证，管理的主要内容是定时测定记录气温、水温、pH、OD值，清除杂物，定时开关搅拌器。藻种池和大池一般培养事注意控制pH在10左右，方法一般是增加NaHCO

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种耐盐能力强、有机硒含量高的硒螺旋藻突变株及应用。本发明通过紫外诱变的方法筛选到1株高富硒的螺旋藻，能高效的将无机硒转化成有机硒，耐Na

为达到本发明上述一个目的，本发明采用的技术方案如下：

一株硒螺旋藻突变株，分类号为：Spirulina maxima，保藏号：CCTCC NO:M20221180，菌株名称：FACHB-Se1500，保藏地点：中国典型培养物保藏中心湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。

而且，所述突变株的培养条件为：温度为20℃，pH＝9.5，光照强度为40μE·M

而且，所述硒螺旋藻突变株的高麦角硒因产量为22-33μg/g。

而且，硒螺旋藻突变株耐Na

本发明的有益效果如下：

麦角硒因(Selenoneine)是具有抗氧化功能的含硒小分子，本发明通过紫外诱变的条件下使螺旋藻发生突变，得到麦角硒因含量高的螺旋藻突变株，含量可提高64.8％。以此为材料，进一步筛选到耐硒能力高的螺旋藻突变株，其中耐受800mg/LNa

本发明通过耐盐筛选获得了耐盐比较高的菌株，申请人在比对过程中发现，耐盐和高Na

附图说明

图1为本发明实施例1螺旋藻的显微镜照片。

具体实施方式

下面结合实施案例和附图对本发明作进一步详细说明。本实施案例在以本发明技术为前提下进行实施，现给出详细的实施方式和具体的操作过程来说明本发明具有创造性，但本发明的保护范围不限于以下的实施案例。

实施例1

申请人通过对发酵螺旋藻产物分析，在产物中检测到麦角硒因。为了获得含高浓度麦角硒因的转化藻株，采用紫外诱变获得突变体的方法，获得突变螺旋藻藻株，具体方法如下：

原始菌株钝顶螺旋藻Spirulina maxima(FACHB-882，来自中科院淡水藻种库)，步骤如下。

1、诱变：利用超声破碎法将螺旋藻破碎成单细胞，将盛有藻液的培养皿放入紫外诱变仪中，紫外照射时间为40s，采用20W的紫外灯管。

2、筛选：紫外诱变后，将藻株置于黑暗环境中过夜恢复。转移至正常Zarrouk培养基生长一周，用微细吸管法分离192根螺旋藻“单种”，扩大培养。在含有100mg/L Na

3、共筛选到3株麦角硒因含量提高15％以上的螺旋藻藻株，分别为SEN-16#，SEN-73#，SEN-136#。

Zarrouk培养基配方(1L)*

*CaCl

A5培养基配方(1L)

为了获得含高硒含量的转化菌株，以SEN-136#藻株为亲本，采用紫外突变法进行筛选，获得高硒螺旋藻藻株，具体方法如下：

1、诱变：将获得螺旋藻破碎成单细胞，将盛有藻液的培养皿放入紫外诱变仪中，紫外照射时间为40s，采用20W的紫外灯管，置于黑暗条件下过夜恢复。

2、筛选：采用不同Na

培养条件：25-30℃，pH＝9.5，光照强度为40μE·M

将上述5轮筛选获得的藻株分别检测硒含量

根据现在螺旋藻养殖环境的改变，土地盐碱化越来越严重，藻株的耐盐性变得日益重要，申请人从耐盐性考虑，对上述菌株进行耐盐性选择，步骤如下：

将上述5轮筛选的菌株进行耐盐特性筛选，采用不同NaCl浓度梯度的Zarrouk培养基进行筛选，梯度范围分别为：400mmol/L、600mmol/L、800mmol/L、1000mmol/L、1200mmol/L。

培养条件：25-30℃，pH＝9.5，光照强度为40μE·M

基于耐盐性和富硒特点的综合考虑，本申请将上述FACHB-Se1500藻珠作为本发明后续生产用菌株，并将其进行保藏，保藏号：CCTCC NO:M 20221180，菌株名称：FACHB-Se1500，保藏地点：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。

应用实施例1

菌株培养条件：25-30℃，pH＝9.5，1000mmol/L的NaCl，800mg/L Na

蛋白纯化方法：称破壁后的藻粉溶于200mL的0.1M NaOH溶液中；80转/分，搅拌2h；6000rpm，15min，10℃离心，得到沉淀和上清；

取上清，加入醋酸调节pH至5，静至1h使蛋白充分沉淀；6000rpm，15min，10℃离心，得到蛋白沉淀和上清；蛋白沉淀即为硒蛋白。

通过检测，所提硒蛋白中部分硒化合物含量如下

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。